JP2024509274A - Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体 - Google Patents
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Abstract
新規のＧＰＣ３結合ドメイン、及びそのようなＧＰＣ３結合ドメインを含む抗体（例えば、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３）が、本明細書で提供される。ＧＰＣ３関連癌の治療のためにそのような抗体を使用する方法も本明細書で提供される。
Description
優先権主張
本出願は、２０２１年３月１０日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，０５８号及び２０２１年４月９日に出願された同第６３／１７３，１２７号の利益を主張し、これらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年３月１０日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，０５８号及び２０２１年４月９日に出願された同第６３／１７３，１２７号の利益を主張し、これらの全体は参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２２年２月２８日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは０６７４６１－５２８２－ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは８５３，４１７バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２２年２月２８日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーは０６７４６１－５２８２－ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは８５３，４１７バイトである。
新規のＧＰＣ３結合ドメイン、及びそのようなＧＰＣ３結合ドメインを含む抗体（例えば、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３）が、本明細書で提供される。ＧＰＣ３関連癌の治療のためにそのような抗体を使用する方法も本明細書で提供される。
第１の態様では、ＧＰＣ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む組成物が、本明細書で提供される。ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択される可変重鎖ドメイン（ＶＨ）／可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを含む。
いくつかの態様では、ＡＢＤは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を有する。
いくつかの実施形態では、ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される。例示的な実施形態では、組成物は、モノクローナル抗体である。
別の態様では、ａ）第１の単量体、ｂ）第２の単量体、及びｃ）軽鎖を含むヘテロ二量体抗体が、本明細書で提供される。第１の単量体は、ｉ）第１の可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー、及び第１の可変重鎖ドメインを含む抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、並びにｉｉ）第１のＦｃドメインを含み、ｓｃＦｖは、ドメインリンカーを使用して第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合している。第２の単量体は、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体を含み、ＶＨは第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインである。この実施形態では、第２の可変重鎖ドメイン及び第２の可変軽鎖ドメインは、ＧＰＣ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成する。
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを含む。
例示的な実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む。
例示的な実施形態では、ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む。
ヘテロ二量体抗体のいくつかの実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、荷電ｓｃＦｖリンカーである。
いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、バリアントＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、図１Ａ～図１Ｅに示されるものからなる群から選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む。いくつかの実施形態では、選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ、Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ、及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖからなる群から選択され、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第１及び第２の単量体は、１個以上の除去バリアントを更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、１個以上のｐＩバリアントを含む。いくつかの実施形態では、１個以上のｐＩバリアントは、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
ヘテロ二量体抗体の例示的な実施形態では、第１の単量体は、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第１及び第２の単量体はそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
別の態様では、ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ｓｃＦｖ－リンカーＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、ｓｃＦｖは抗ＣＤ３ ｓｃＦｖであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである、第１の単量体、ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインである、第２の単量体、及びｃ）ＶＬ－ＣＬを含む軽鎖を含むヘテロ二量体抗体が、本明細書で提供される。第１のバリアントＦｃドメインはアミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインはアミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれアミノ酸バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３はアミノ酸バリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＥＵ番号付け）を含む。更に、ＶＨ及びＶＬは、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９から選択されるＧＰＣ３結合ドメインの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインをそれぞれ含むＧＰＣ３結合ドメインを形成し、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１から選択されるＣＤ３結合ドメインの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、ここで、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
別の態様では、ａ）第１の単量体、ｂ）第２の単量体、及びｃ）共通軽鎖を含むヘテロ二量体抗体が、本明細書で提供される。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー１－ｓｃＦｖ－リンカー２－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ＶＨ１は第１の可変重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖは抗ＣＤ３ ｓｃＦＶであり、リンカー１及びリンカー２は、それぞれ第１のドメインリンカー及び第２のドメインリンカーであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである。第２の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ＶＨ２は第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインであり、ｃ）共通軽鎖は可変軽鎖ドメインを含む。第１の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは第１のＣＬＤＮ６ ＡＢＤを形成し、第２の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは第２のＣＬＤＮ６ ＡＢＤを形成する。
別の態様では、ａ）第１の単量体、ｂ）第２の単量体、及びｃ）共通軽鎖を含むヘテロ二量体抗体が、本明細書で提供される。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー１－ｓｃＦｖ－リンカー２－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ＶＨ１は第１の可変重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖは抗ＣＤ３ ｓｃＦＶであり、リンカー１及びリンカー２は、それぞれ第１のドメインリンカー及び第２のドメインリンカーであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである。第２の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ＶＨ２は第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインであり、ｃ）共通軽鎖は可変軽鎖ドメインを含む。第１の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは第１のＧＰＣ３ ＡＢＤを形成し、第２の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは第２のＧＰＣ３ ＡＢＤを形成する。
いくつかの実施形態では、第１及び第２のＧＰＣ３結合ドメインはそれぞれ、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを含む。
いくつかの実施形態では、第１及び第２のＧＰＣ３結合ドメインのそれぞれは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される。
いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを有する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、以下のＣＤ３結合ドメイン、すなわちＨ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１のいずれかの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、荷電ｓｃＦｖリンカーである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、アミノ酸配列（ＧＫＰＧＳ）４（配列番号：１）を有する荷電ｓｃＦｖリンカーである。
いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、バリアントＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、第１及び第２のＦｃドメインは、図１Ａ～図１Ｅに示されるものからなる群から選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む。いくつかの実施形態では、選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ、Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ、及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖからなる群から選択され、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第１及び第２の単量体は、１個以上の除去バリアントを更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の除去バリアントは、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
例示的な実施形態では、第１又は第２の単量体のうちの１つは、１個以上のｐＩバリアントを含む。いくつかの実施形態では、１個以上のｐＩバリアントは、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
ヘテロ二量体抗体の例示的な実施形態では、第１の単量体は、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
いくつかの実施形態では、第１及び第２の単量体はそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
４５．第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、４４に記載のヘテロ二量体抗体。
別の態様では、ａ）第１の単量体、ｂ）第２の単量体、及びｃ）共通軽鎖を含むヘテロ二量体抗体が、本明細書で提供される。第１の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー１－ｓｃＦｖ－リンカー２－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ｓｃＦｖは抗ＣＤ３ ｓｃＦｖであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである。第２の単量体は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含み、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインである。共通軽鎖は、ＶＬ－ＣＬを含む。第１のバリアントＦｃドメインはアミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、第２のバリアントＦｃドメインはアミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれアミノ酸バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第２の単量体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３はアミノ酸バリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ＥＵ番号付け）を含む。ＶＨ及びＶＬは、Ｈ１．９＿Ｌ１．１８７、Ｈ１．２４＿Ｌ１．１８７、Ｈ２．９１＿Ｌ１．１８７、及びＨ１．９＿Ｌ１．１８７から選択されるＧＰＣ３ ＡＢＤの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含み、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１から選択されるＣＤ３結合ドメインの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１及び第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含む。
本明細書に記載される抗体をコードする核酸を含む核酸組成物、そのような核酸を含む発現ベクター組成物、発現ベクター組成物を含む抗体を作製するための宿主細胞、及び抗体を作製する方法も本明細書で提供される。
抗体に基づいた治療法は、癌を含む様々な疾患の治療に成功裏に使用されてきた。探求されているますます普及している道は、２つの異なる抗原に同時連結する単一の免疫グロブリン分子のエンジニアリングである。２つの異なる抗原に連結するそのような代替抗体フォーマットは、しばしば二重特異性抗体と称される。抗体可変領域（Ｆｖ）のかなりの多様性により、事実上あらゆる分子を認識するＦｖを生成できるため、二重特異性抗体生成への典型的なアプローチは、抗体に新しい可変領域を導入することである。
二重特異性抗体の特に有用なアプローチは、ＣＤ３に連結する第１の結合ドメインと、癌細胞と会合するか、又は癌細胞でアップレギュレートされる抗原に連結する第２の結合ドメインを操作して、それにより、二重特異性抗体がＣＤ３＋Ｔ細胞をリダイレクトして癌細胞を破壊することである。ヘパラン硫酸プロテオグリカンファミリーメンバーであるグリピカン３（ＧＰＣ３）は、肝細胞癌（特に肝臓）において高度に発現し、健常組織において最小限に発現することが以前に報告されている。これを考慮して、抗ＧＰＣ３抗体は、例えば、抗腫瘍治療薬（例えば、化学療法剤及びＴ細胞）をそのようなＧＰＣ３発現腫瘍に局在化させるために有用であると考えられている。ＣＤ３二重特異性抗体及びＣＡＲ－Ｔ療法などのＧＰＣ３を標的とするこれまでの試みは、いくらかの成功を示しているが、前臨床又は臨床設定におけるサイトカイン放出症候群など有害事象を実証している。本明細書では、ＣＤ３＋エフェクターＴ細胞をＧＰＣ３発現腫瘍に局在化させ、治療プロファイルを改善させることができる新規の二重特異性抗体がＣＤ３及びＧＰＣ３に提供される。
本発明は、ヒトＣＤ３ε及びヒトＧＰＣ３に結合するヘテロ二量体二重特異性抗体を提供する。
Ａ．概要
ＣＤ３と腫瘍抗原標的とを同時連結させる抗二重特異性抗体は、標的腫瘍細胞を攻撃及び溶解するようにＴ細胞をリダイレクトするために使用される。例としては、ＣＤ３と腫瘍抗原とを一価的に連結するＢｉｔｅ（登録商標）及びＤＡＲＴフォーマットが挙げられる。ＣＤ３標的化アプローチはかなりの見込みを示しているが、そのような治療法の一般的な副作用は、関連するサイトカインの産生であり、しばしば毒性サイトカイン放出症候群を引き起こす。二重特異性抗体の抗ＣＤ３結合ドメインは全てのＴ細胞に連結するため、高サイトカイン産生ＣＤ４ Ｔ細胞サブセットが動員される。更に、ＣＤ４ Ｔ細胞サブセットには制御性Ｔ細胞が含まれており、その動員及び増殖は、免疫抑制をもたらし、長期的な腫瘍抑制に悪影響を与える可能性がある。更に、これらのフォーマットはＦｃドメインを含有せず、患者の血清半減期が非常に短いことを示している。
ＣＤ３と腫瘍抗原標的とを同時連結させる抗二重特異性抗体は、標的腫瘍細胞を攻撃及び溶解するようにＴ細胞をリダイレクトするために使用される。例としては、ＣＤ３と腫瘍抗原とを一価的に連結するＢｉｔｅ（登録商標）及びＤＡＲＴフォーマットが挙げられる。ＣＤ３標的化アプローチはかなりの見込みを示しているが、そのような治療法の一般的な副作用は、関連するサイトカインの産生であり、しばしば毒性サイトカイン放出症候群を引き起こす。二重特異性抗体の抗ＣＤ３結合ドメインは全てのＴ細胞に連結するため、高サイトカイン産生ＣＤ４ Ｔ細胞サブセットが動員される。更に、ＣＤ４ Ｔ細胞サブセットには制御性Ｔ細胞が含まれており、その動員及び増殖は、免疫抑制をもたらし、長期的な腫瘍抑制に悪影響を与える可能性がある。更に、これらのフォーマットはＦｃドメインを含有せず、患者の血清半減期が非常に短いことを示している。
新規の抗ＣＤ３×抗ＧＰＣ３（抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３、αＣＤ３×αＧＰＣ３、αＧＰＣ３×αＣＤ３とも称される、又は単にＧＰＣ３×ＣＤ３と称されることもある）ヘテロ二量体二重特異性抗体及び癌の治療のためのそのような抗体の使用方法が本明細書で提供される。特に、様々なフォーマットの抗ＣＤ３、抗ＧＰＣ３二重特異性抗体が本明細書で提供される。これらの二重特異性抗体は、癌、特に腎細胞癌などのＧＰＣ３発現が増加している癌の治療に有用である。そのような抗体は、ＣＤ３＋エフェクターＴ細胞をＧＰＣ３＋腫瘍に向けるために使用され、それによってＣＤ３＋エフェクターＴ細胞がＧＰＣ３＋腫瘍を攻撃及び溶解することを可能にする。
更に、いくつかの実施形態では、本開示は、抗ＣＤ３療法の潜在的な副作用を変更又は低減することができる、ヒトＣＤ３に対して異なる結合親和性を有する二重特異性抗体を提供する。すなわち、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３に対する「強い」又は「高い親和性」の結合剤であり（例えば、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７（任意選択的に、必要に応じて荷電リンカーを含む）として示される重鎖及び軽鎖可変ドメインである）、ＧＰＣ３にも結合する抗ＣＤ３抗原結合ドメインを含む抗体構築物を提供する。他の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３に対する「ライト」又は「低親和性」結合剤である抗ＣＤ３抗原結合ドメインを含む抗体構築物を提供する。追加の実施形態は、ＧＰＣ３にも結合するＣＤ３に対して中間又は「中」の親和性を有する抗ＣＤ３抗原結合ドメインを含む抗体構築物を提供する。非常に多数の抗ＣＤ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を使用できる一方で、特に有用な実施形態では、６つの異なる抗ＣＤ３ ＡＢＤを使用するが、本明細書で説明するように２つのｓｃＦｖ方向で使用することができる。親和性は一般に、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイを用いて測定される。
本明細書で提供される「高、中、低」抗ＣＤ３配列は、本明細書に記載されるように、様々なヘテロ二量体化フォーマットで使用できることを理解されたい。一般に、Ｔ細胞動員の潜在的な副作用のために、例示的な実施形態は、図１５Ａ及び図１５Ｂに示されるように、ＣＤ３に一価でのみ結合するフォーマットを用い、本明細書に示されるフォーマットでは、本明細書により完全に説明されるように、ｓｃＦｖであるのはＣＤ３ ＡＢＤである。対照的に、対象の二重特異性抗体は、一価（例えば図１５Ａ）又は二価（例えば図１５Ｂ）のいずれかでＧＰＣ３に結合することができる。
そのようなＧＰＣ３結合ドメインを有する抗体（例えば、ＧＰＣ３×ＣＤ３二重特異性抗体）を含む、ＧＰＣ３結合ドメインを含む組成物が本明細書で提供される。そのようなＧＰＣ３結合ドメインを含む対象抗体は、使用される特定のＧＰＣ３結合ドメインに応じて、様々な異なる免疫応答を有利に誘発する。例えば、対象の抗体は、異なるＧＰＣ３発現を有する細胞に対する選択性、ＧＰＣ３発現細胞に対する効力、サイトカイン放出を誘発する能力、及び可溶性ＧＰＣ３に対する感受性の違いを示す。そのようなＧＰＣ３結合ドメイン及び関連する抗体は、例えば、ＧＰＣ３関連癌の治療に使用される。
したがって、一態様では、２つの異なる抗原に結合するヘテロ二量体抗体が本明細書で提供され、例えば、抗体は、本明細書に記載の２つの異なる標的抗原、一般にＧＰＣ３及びＣＤ３に結合するという点で「二重特異性」である。これらのヘテロ二量体抗体は、これらの標的抗原に一価（例えば、可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインの対などの単一の抗原結合ドメインがある）又は二価（それぞれが独立して抗原に結合する２つの抗原結合ドメインがある）のいずれかに結合することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、１つのＣＤ３結合ドメイン及び１つのＧＰＣ３結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットのヘテロ二量体抗体）を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、１つのＣＤ３結合ドメイン及び２つのＧＰＣ３結合ドメイン（例えば、本明細書に記載の「２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットのヘテロ二量体抗体）を含む。本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、以下でより完全に概説されるように、ホモ二量体上でヘテロ二量体の形成を「ゆがめる」アミノ酸置換を含む異なる単量体の使用に基づいており、以下に同様に概説されるように、ホモ二量体から離れたヘテロ二量体の単純な精製を可能にする「ｐＩバリアント」と連結される。提供されるヘテロ二量体二重特異性抗体は、一般に、産生細胞で自己集合してヘテロ二量体タンパク質を産生することができる操作された又はバリアントのＦｃドメインの使用、及びそのようなヘテロ二量体タンパク質を生成し、精製する方法に依存する。
Ｂ．命名法
本明細書に提供される抗体は、いくつかの異なるフォーマットで列挙されている。場合によっては、特定の抗体の各単量体には、固有の「ＸＥＮＰ」番号が与えられるが、当該技術分野において理解されるように、より長い配列はより短いものを含み得る。例えば、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」単量体は第１のＸＥＮＰ番号を有し得るが、ｓｃＦｖドメイン自体は異なるＸＥＮＰ番号を有する。いくつかの分子には３つのポリペプチドがあるため、ＸＥＮＰ番号が構成要素と共に名称として使用される。したがって、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットである分子のＸＥＮＰ３３７４４は、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」単量体、２）「Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ重鎖」単量体、及び３）「軽鎖」単量体又は同等物の３つの配列（図１８を参照されたい）を含むが、当業者は、配列アラインメントを通じてこれらを容易に同定することができる。これらのＸＥＮＰ番号は、配列表並びに識別子にあり、図で使用される。加えて、３つの構成要素を含む１つの分子は、複数の配列識別子を生成する。例えば、Ｆａｂのリストは、完全な重鎖配列、可変重鎖ドメイン配列、及び可変重鎖ドメイン配列の３つのＣＤＲ、完全な軽鎖配列、可変軽鎖ドメイン配列、及び可変軽鎖ドメイン配列の３つのＣＤＲを含む。Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ単量体は、全長配列、可変重鎖ドメイン配列、３つの重鎖ＣＤＲ配列、及びｓｃＦｖ配列（ｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン配列、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン配列及びｓｃＦｖリンカーを含む）を含む。本明細書ではいくつかのｓｃＦｖドメインを有する分子の中は、単一の荷電ｓｃＦｖリンカー（＋Ｈ）を使用するが、他のものを使用できることに留意されたい。更に、特定の抗原結合ドメイン（例えば、ＧＰＣ３及びＣＤ３結合ドメイン）の命名法は、「Ｈｘ．ｘｘ＿Ｌｙ．ｙｙ」タイプのフォーマットを使用し、数字は特定の可変鎖配列に対する固有の識別子である。したがって、抗原結合ドメインのＦｖドメインは、「Ｈ１Ｌ１」であり、これは、可変重鎖ドメインＨ１が軽鎖ドメインＬ１と組み合わされたことを示す。これらの配列がｓｃＦｖとして使用される場合、名称「Ｈ１Ｌ１」は、可変重鎖ドメインＨ１が軽鎖ドメインＬ１と組み合わされ、ＮからＣ末端に向かってＶＨ－リンカー－ＶＬ方向にあることを示す。重可変ドメイン及び軽可変ドメインの同一の配列を有するが逆の順序（ＶＬ－リンカー－ＶＨ方向、Ｎ末端からＣ末端に向かって）であるこの分子は、「Ｌ１＿Ｈ１．１」と命名されるであろう。同様に、異なる構築物は、配列表及び図から明らかになるように、重鎖及び軽鎖を「混合し、適合させる」ことができる。
本明細書に提供される抗体は、いくつかの異なるフォーマットで列挙されている。場合によっては、特定の抗体の各単量体には、固有の「ＸＥＮＰ」番号が与えられるが、当該技術分野において理解されるように、より長い配列はより短いものを含み得る。例えば、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体の「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」単量体は第１のＸＥＮＰ番号を有し得るが、ｓｃＦｖドメイン自体は異なるＸＥＮＰ番号を有する。いくつかの分子には３つのポリペプチドがあるため、ＸＥＮＰ番号が構成要素と共に名称として使用される。したがって、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットである分子のＸＥＮＰ３３７４４は、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」単量体、２）「Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ重鎖」単量体、及び３）「軽鎖」単量体又は同等物の３つの配列（図１８を参照されたい）を含むが、当業者は、配列アラインメントを通じてこれらを容易に同定することができる。これらのＸＥＮＰ番号は、配列表並びに識別子にあり、図で使用される。加えて、３つの構成要素を含む１つの分子は、複数の配列識別子を生成する。例えば、Ｆａｂのリストは、完全な重鎖配列、可変重鎖ドメイン配列、及び可変重鎖ドメイン配列の３つのＣＤＲ、完全な軽鎖配列、可変軽鎖ドメイン配列、及び可変軽鎖ドメイン配列の３つのＣＤＲを含む。Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ単量体は、全長配列、可変重鎖ドメイン配列、３つの重鎖ＣＤＲ配列、及びｓｃＦｖ配列（ｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン配列、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン配列及びｓｃＦｖリンカーを含む）を含む。本明細書ではいくつかのｓｃＦｖドメインを有する分子の中は、単一の荷電ｓｃＦｖリンカー（＋Ｈ）を使用するが、他のものを使用できることに留意されたい。更に、特定の抗原結合ドメイン（例えば、ＧＰＣ３及びＣＤ３結合ドメイン）の命名法は、「Ｈｘ．ｘｘ＿Ｌｙ．ｙｙ」タイプのフォーマットを使用し、数字は特定の可変鎖配列に対する固有の識別子である。したがって、抗原結合ドメインのＦｖドメインは、「Ｈ１Ｌ１」であり、これは、可変重鎖ドメインＨ１が軽鎖ドメインＬ１と組み合わされたことを示す。これらの配列がｓｃＦｖとして使用される場合、名称「Ｈ１Ｌ１」は、可変重鎖ドメインＨ１が軽鎖ドメインＬ１と組み合わされ、ＮからＣ末端に向かってＶＨ－リンカー－ＶＬ方向にあることを示す。重可変ドメイン及び軽可変ドメインの同一の配列を有するが逆の順序（ＶＬ－リンカー－ＶＨ方向、Ｎ末端からＣ末端に向かって）であるこの分子は、「Ｌ１＿Ｈ１．１」と命名されるであろう。同様に、異なる構築物は、配列表及び図から明らかになるように、重鎖及び軽鎖を「混合し、適合させる」ことができる。
更に、本発明の二重特異性抗体は、本明細書において、「抗ＣＤ３×抗ＧＰＣ３」、「αＣＤ３×αＧＰＣ３」、「αＧＰＣ３×αＣＤ３」と称されるか、又は単に「ＧＰＣ３×ＣＤ３」と称されることがある。ｓｃＦｖとして用いるフォーマットの大部分は、ｓｃＦｖとして抗ＣＤ３ ＡＢＤを有するが、抗原の順序は、以下で考察されるように限定的ではない。
Ｃ．定義
本出願をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。
本出願をより完全に理解できるようにするため、いくつかの定義を以下に示す。そのような定義は、文法的同等物を包含することを意図する。
本明細書において「ＧＰＣ３」とは、クローディンファミリーに属するタンパク質を意味する。ＧＰＣ３配列は、例えば、図１１に示されている。本発明のＡＢＤは、ヒトＧＰＣ３に結合する。
本明細書において「除去」とは、活性の低下又は排除を意味する。したがって、例えば、「ＦｃγＲ結合を切除する」とは、特定のバリアントを含有しないＦｃ領域と比較して、Ｆｃ領域アミノ酸バリアントが、開始結合の５０％未満を有することを意味し、活性を７０～８０～９０～９５～９８％超えて喪失していることが好ましく、一般に、活性は、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＳＰＲ、又はＢＬＩアッセイにおいて、検出可能な結合レベルを下回る。ＦｃγＲ結合の除去において特に使用されるものは、図３に示すものであり、これらは一般に両方の単量体に付加される。
本明細書で使用される「ＡＤＣＣ」又は「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」とは、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を意味する。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合と相関し、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加はＡＤＣＣ活性の増加をもたらす。
本明細書で使用される「ＡＤＣＰ」又は抗体依存性細胞媒介性細胞食作用とは、ＦｃγＲを発現する非特異的食細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介反応を意味する。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語が一般的に使用される。本発明に記載の抗体は、従来の抗体並びに本明細書に記載のいくつかの二重特異性フォーマットを含む、抗体誘導体、フラグメント、及び模倣物を含む、本明細書に記載のいくつかのフォーマットをとることができる。
従来の免疫グロブリン（Ｉｇ）抗体は、「Ｙ」字型の四量体である。各四量体は、典型的には、２本の同一のポリペプチド鎖対からなり、各対は、１本の「軽鎖」単量体（典型的には、約２５ｋＤａの分子量を有する）と、１本の「重鎖」単量体（典型的には、約５０～７０ｋＤａの分子量を有する）とを有する。
他の有用な抗体フォーマットには、本明細書に記載され、図１５に示される、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット及び２＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体フォーマット、並びに以下で考察され、図４４に示される、「ｍＡｂ－Ｆｖ」、「ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」、「セントラルＦｖ」、「ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「ｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「デュアルｓｃＦｖ」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
抗体重鎖は、典型的には、ｖｈＣＤＲ１～３を含む可変重鎖（ＶＨ）ドメインと、ＣＨ２－ＣＨ３単量体を含むＦｃドメインとを含む。いくつかの実施形態では、抗体重鎖は、ヒンジ及びＣＨ１ドメインを含む。従来の抗体重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に向かって組織化された単量体：ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３である。ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、重鎖「定常ドメイン」又は「定常領域」と総称され、５つの異なるカテゴリー又は「アイソタイプ」（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＭ）が存在する。したがって、本明細書で使用されるとき、「アイソタイプ」とは、それらの定常領域の化学的及び抗原的特徴によって定義される免疫グロブリンの任意のサブクラスを意味する。治療用抗体は、アイソタイプ及び／又はサブクラスのハイブリッドも含み得ることを理解されたい。例えば、参照により組み込まれる米国特許出願公開第２００９／０１６３６９９号に示されるように、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ１／Ｇ２ハイブリッドの使用を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されないいくつかのサブクラスを有するＩｇＧアイソタイプ定常ドメインを含む。免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスには、重鎖においていくつかの免疫グロブリンドメインがある。本明細書における「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」は、明確に異なる三次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。定常重鎖ＣＨ）ドメイン及びヒンジドメインを含む重鎖ドメインが本明細書に記載の抗体における関心対象である。ＩｇＧ抗体の関連において、ＩｇＧアイソタイプは、それぞれ３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧの文脈における「ＣＨ」ドメインは、以下のとおりである：「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにおけるようにＥＵインデックスに従って１１８～２２０位を指す。「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔのようにＥＵインデックスに従って位置２３７～３４０を指し、「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔのようにＥＵインデックスに従って位置３４１～４４７を指す。本明細書に示され、以下に記載されるように、ｐＩバリアントは、以下に考察されるヒンジ領域と同様に１つ以上のＣＨ領域にあり得る。
ＩｇＧ１は、３５６（Ｄ又はＥ）及び３５８（Ｌ又はＭ）で多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明細書に図示される配列は３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプを使用するが、他のアロタイプが本明細書に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む任意の配列は、３５６Ｄ／３５８Ｍアロタイプの代わりに３５６Ｅ／３５８Ｌを有することができる。治療用抗体は、アイソタイプ及び／又はサブクラスのハイブリッドも含み得ることを理解されたい。例えば、参照により組み込まれる、米国特許出願公開第２００９／０１６３６９９号に示されるように、本抗体は、いくつかの実施形態ではＩｇＧ１／ＩｇＧ２ハイブリッドを含む。
本明細書で使用される「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」とは、抗体の定常領域を含む、いくつかの場合では、第１の定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１）の全て又はその一部を除外し、いくつかの場合では、任意にヒンジの全部又は一部を含む、ポリペプチドを意味する。ＩｇＧの場合、Ｆｃドメインは免疫グロブリンドメインＣＨ２及びＣＨ３（Ｃγ２及びＣγ３）、並びに任意選択的に、ＣＨ１（Ｃγ１）とＣＨ２（Ｃγ２）との間のヒンジ領域の全て又は一部を含む。したがって、いくつかの場合では、Ｆｃドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＨ２－ＣＨ３及びヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４からのものであり、ヒトＩｇＧ１ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３、及びＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、多くの実施形態において特定の用途が見出される。加えて、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインの場合では、頻繁にヒンジはＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。更に、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインの場合では、頻繁にヒンジはＳ２２８Ｐアミノ酸置換を含む。Ｆｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシル末端に残基Ｅ２１６、Ｃ２２６又はＡ２３１を含むと定義され、番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、以下により完全に記載されるように、例えば１つ以上のＦｃγＲ又はＦｃＲｎへの結合を変化させるために、Ｆｃ領域に対してアミノ酸修飾が行われる。
本明細書における「重鎖定常領域」とは、可変重鎖ドメインを除く、抗体（又はそのフラグメント）のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３部分を意味し、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けでは、これはアミノ酸１１８～４４７である。本明細書における「重鎖定常領域フラグメント」とは、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方からのアミノ酸がより少ないが、別の重鎖定常領域と二量体を形成する能力を依然として保持する重鎖定常領域を意味する。
重鎖のＩｇドメインの別の種類は、ヒンジ領域である。本明細書において「ヒンジ」又は「ヒンジ領域」又は「抗体ヒンジ領域」又は「ヒンジドメイン」とは、抗体の第１の定常ドメイン及び第２の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、ＩｇＧ ＣＨ１ドメインはＥＵの２１５位で終わり、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインは残基ＥＵの２３１位で始まる。したがって、ＩｇＧについては、抗体ヒンジは、本明細書において、２１６位（ＩｇＧ１中のＥ２１６）～２３０位（ＩｇＧ１中のｐ２３０）を含むように定義され、付番はＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う。いくつかの場合では、ヒンジドメインのＮ末端及びＣ末端のいずれか又は両方により少ないアミノ酸を含む「ヒンジフラグメント」が使用される。本明細書に記載されるように、ｐＩバリアントはヒンジ領域にも同様に作製することができる。本明細書の抗体の多くは、セリンで置き換えられたＥＵ番号付け（ヒンジ領域）による位置２２０に少なくとも１つのシステインを有する。一般に、この修飾は、本明細書に示される配列のほとんどについて「ｓｃＦｖ単量体」側にあるが、ジスルフィド形成を低減するために「Ｆａｂ単量体」側、又はその両方にあることもできる。本明細書中の配列内に具体的に含まれるのは、これらのシステインの一方又は両方が置き換えられたもの（Ｃ２２０Ｓ）である。
当業者には理解されるように、重鎖定常領域ドメインの正確な番号付け及び配置は、異なる番号付けシステム間で異なり得る。ＥＵ及びＫａｂａｔによる重鎖定常領域の番号付けの有用な比較は以下のとおりであり、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ６３：７８－８５、及びＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ（参照によりその全体が組み込まれる）を参照されたい。
抗体軽鎖は、一般に、２つのドメイン、すなわち、軽鎖ＣＤＲ ｖｌＣＤＲ１～３を含む可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）と、定常軽鎖領域（しばしば、ＣＬ又はＣκとして称される）と、を含む。抗体軽鎖は通常、Ｎ末端からＣ末端に向かって組織化されている：ＶＬ－ＣＬ。
本明細書において「抗原連結ドメイン」又は「ＡＢＤ」とは、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書で考察されるような標的抗原（例えば、ＧＰＣ３又はＣＤ３）に特異的に連結する６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを意味する。当技術分野で知られるように、これらのＣＤＲは、一般に、可変重鎖ＣＤＲの第１のセット（ｖｈＣＤＲ又はＶＨＣＤＲ）及び可変軽鎖ＣＤＲの第２のセット（ｖｌＣＤＲ又はＶＬＣＤＲ）として存在し、それぞれが３個のＣＤＲ、すなわち、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３可変重鎖ＣＤＲ、及びｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３ ｖｈＣＤＲ３可変軽鎖ＣＤＲを含む。ＣＤＲは、可変重鎖ドメイン（ｖｈＣＤＲ１～３）と可変軽鎖ドメイン（ｖｌＣＤＲ１～３）に存在する。可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインがＦｖ領域を形成する。
本明細書に記載の抗体は、多数の異なるＣＤＲセットを提供する。この場合、「完全ＣＤＲセット」は、３個の可変軽鎖ＣＤＲ及び３個の可変重鎖ＣＤＲ、例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、それぞれ、より大きな可変軽鎖又は可変重鎖ドメインの一部であってもよい。加えて、本明細書により完全に概説されているように、可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、重鎖及び軽鎖が使用されるとき（例えば、Ｆａｂが使用されるとき）には別々のポリペプチド鎖上に、又はｓｃＦｖ配列の場合には単一ポリペプチド鎖上にあり得る。
当業者には理解されるように、ＣＤＲの正確な番号付け及び配置は、異なる番号付けシステム間で異なり得る。しかしながら、可変重鎖配列及び／又は可変軽鎖配列の開示は、関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことが理解されるべきである。したがって、各可変重鎖領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各可変軽鎖領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）の開示である。ＣＤＲ番号付けの有用な比較は以下のとおりであり、Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７ （２００３）を参照されたい。
本明細書全体を通して、Ｋａｂａｔ番号付けシステムは概して、可変ドメイン内の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７及び重鎖可変領域の残基１～１１３）を参照するときに使用され、ＥＵ番号付けシステムは、Ｆｃ領域に対するものである（例えば、上述のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）を参照）。
ＣＤＲは、抗原結合の形成、又はより具体的には、抗原結合ドメイン及び抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の群分けであり、通常、特異的構造特性、並びに特異的電荷特性を有する。単一抗原が、２つ以上のエピトープを有してもよい。
エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性構成要素とも称される）及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的抗原結合ペプチドによって効果的に遮断されるアミノ酸残基、換言すると、特異的抗原結合ペプチドのフットプリント内にあるアミノ酸残基を含み得る。
エピトープは、立体配座又は直線状のいずれかであってもよい。立体配座エピトープは、直線状のポリペプチド鎖の異なるセグメントからのアミノ酸の空間的な並置によって生成される。直線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接アミノ酸残基によって生成されるものである。立体配座エピトープ及び非立体配座エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は失われるが、後者への結合は失われないという点で区別され得る。
エピトープは、典型的には、固有の空間立体構造内に、少なくとも３個、より通常には、少なくとも５個、又は８～１０個のアミノ酸を含む。同じエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力、例えば、「ビニング」を示す単純な免疫アッセイにおいて検証され得る。以下に概説するように、本開示は、列挙された抗原結合ドメイン及び本明細書の抗体を含むだけでなく、列挙された抗原結合ドメインによって結合されるエピトープとの結合について競合するものも含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインの６つのＣＤＲには、可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインが寄与する。「Ｆａｂ」フォーマットでは、６個のＣＤＲのセットには、２個の異なるポリペプチド配列、可変重鎖ドメイン（ｖｈ又はＶＨ； ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３を含む）、及び可変軽鎖ドメイン（ｖｌ又はＶＬ； ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３を含む）が寄与し、ｖｈドメインのＣ末端は重鎖のＣＨ１ドメインのＮ末端に結合しており、ｖｌドメインのＣ末端は定常軽鎖ドメインのＮ末端に結合している（したがって軽鎖を形成している）。ｓｃＦｖフォーマットでは、ｖｈ及びｖｌドメインは、一般に本明細書に概説されているように、リンカー（「ｓｃＦｖリンカー」）の使用によって、単一のポリペプチド配列に共有結合しており、それは（Ｎ末端から開始して）ｖｈ－リンカー－ｖｌ又はｖｌ－リンカー－ｖｈのいずれかであってよく、前者が一般的に好ましい（使用されるフォーマット（例えば、図４４からのもの）に応じて、両側の任意選択的なドメインリンカーを含む）。一般に、ｓｃＦｖドメインのＣ末端は、第２の単量体のヒンジのＮ末端に結合される。
本明細書で使用される「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、カッパ、ラムダ、及び重鎖免疫グロブリン遺伝子座をそれぞれ構成するＶκ、Ｖλ、及び／又はＶＨ遺伝子のいずれかによって実質的にコードされる１つ以上のＩｇドメインを含み、抗原特異性を付与するＣＤＲを含有する、免疫グロブリンの領域を意味する。したがって、「可変重鎖ドメイン」は「可変軽鎖ドメイン」と対になって抗原結合ドメイン（「ＡＢＤ」）を形成する。加えて、各可変ドメインは、３つの超可変領域（「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」）（可変重鎖ドメインではＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３、可変軽鎖ドメインではＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３）と４個のフレームワーク（ＦＲ）領域とを含み、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順序で配置される。超可変領域は、一般に、軽鎖可変領域中のおよそアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１； 「Ｌ」は軽鎖を示す）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）並びに重鎖可変領域中のおよそ３１～３５Ｂ（ＨＣＤＲ１； 「Ｈ」は重鎖を示す）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）； Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））並びに／又は超可変ループを形成する残基（例えば、軽鎖可変領域中の残基２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）、並びに重鎖可変領域中の２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５３～５５（ＨＣＤＲ２）、及び９６－１０１（ＨＣＤＲ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７を包含する。本発明の特定のＣＤＲを表２に記載する。
本明細書で使用される「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ領域」とは、概して２つの異なるポリペプチド鎖上の（例えば、一方の鎖上のＶＨ－ＣＨ１、他方の鎖上のＶＬ－ＣＬ）、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆａｂは、この領域単独、又は本明細書に記載の二重特異性抗体との関係においてこの領域を指し得る。Ｆａｂの関連で、Ｆａｂは、ＣＨ１ドメイン及びＣＬドメインに加えてＦｖ領域を含む。
本明細書で使用される「Ｆｖ」又は「Ｆｖフラグメント」又は「Ｆｖ領域」は、ＡＢＤのＶＬドメイン及びＶＨドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆｖ領域は、Ｆａｂ（上述のとおり、概して上記に概説されている定常領域も含む２つの異なるポリペプチド）とｓｃＦｖの両方としてフォーマットすることができ、ＶＬ及びＶＨドメインを（一般に、本明細書で考察されるリンカーで）組み合わせてｓｃＦｖを形成する。
本明細書における「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」とは概して、本明細書で論じられるｓｃＦｖリンカーを使用してｓｃＦｖ又はｓｃＦｖドメインを形成する、可変軽鎖ドメインに共有結合した可変重鎖ドメインを意味する。ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端（ＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ）まで、いずれの向きであってもよい。配列表及び図に示される配列では、ＶＨ及びＶＬドメインの順序が名前に示される。例えば、Ｈ．Ｘ＿Ｌ．Ｙは、Ｎ末端からＣ末端方向に、ＶＨ－リンカー－ＶＬであり、Ｌ．Ｙ＿Ｈ．Ｘは、ＶＬ－リンカー－ＶＨであることを意味する。しかしながら、任意の「Ｈ＿Ｌ」対の開示は、いずれかの順序でそれらを含むことを意味する。
本明細書に提供される対象抗体のいくつかの実施形態は、少なくとも１つのｓｃＦｖドメインを含み、ｓｃＦｖドメインは、天然に存在しないが、一般に、ｓｃＦｖリンカーによって共に連結された可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインを含む。本明細書に概説されるように、ｓｃＦｖドメインは、一般に、ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬとしてＮ末端からＣ末端に向けて配向されているが、これは、ｓｃＦｖドメイン（又は、Ｆａｂ由来のｖｈ及びｖｌ配列を使用して構築されたドメイン）のいずれに関しても、フォーマットに応じて一方又は両方の端部に任意選択的なリンカーを用いて、ＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨへと逆転させることができる。
本明細書における「修飾」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸の置換、挿入、及び／若しくは欠失、又はタンパク質に化学的に連結された部分への改変を意味する。例えば、修飾は、タンパク質に結合した、改変された炭水化物又はＰＥＧ構造であってもよい。本明細書における「アミノ酸修飾」とは、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失を意味する。明確にするために、別段の記載がない限り、アミノ酸修飾は、常に、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えば、ＤＮＡ及びＲＮＡにコドンを有する２０個のアミノ酸に対するものである。
本明細書における「アミノ酸置換」又は「置換」は、親ポリペプチド配列中の特定の位置のアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味する。特に、いくつかの実施形態では、置換は、特定の位置で天然に存在しない（生物内で天然に存在しないか、又はいずれの生物中にも存在しないかのいずれか）アミノ酸に対するものである。例えば、置換Ｅ２７２Ｙは、２７２位のグルタミン酸がチロシンで置換されているバリアントポリペプチド、この場合はＦｃバリアントを指す。明確にするために、核酸コード配列を変化させるが、開始アミノ酸を変化させないように操作されたタンパク質（例えば、宿主生物の発現レベルを増加させるためにＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（依然としてアルギニンをコードする）に交換する）は、「アミノ酸置換」ではない。すなわち、同じタンパク質をコードする新しい遺伝子の作製にもかかわらず、タンパク質が、その特定の開始位置に同じアミノ酸を有する場合、アミノ酸置換ではない。
本明細書で使用される「アミノ酸挿入」又は「挿入」とは、親ポリペプチド配列の特定の位置にアミノ酸配列を付加することを意味する。例えば、－２３３Ｅ又は２３３Ｅは、２３３位の後及び２３４位の前のグルタミン酸の挿入を示す。更に、－２３３ＡＤＥ又はＡ２３３ＡＤＥは、２３３位の後及び２３４位の前のＡｌａＡｓｐＧｌｕの挿入を示す。
本明細書で使用される「アミノ酸欠失」又は「欠失」とは、親ポリペプチド配列中の特定の位置でアミノ酸配列を除去することを意味する。例えば、Ｅ２３３－又はＥ２３３＃、Ｅ２３３（）又はＥ２３３ｄｅｌは、２３３位のグルタミン酸の欠失を示す。更に、ＥＤＡ２３３－又はＥＤＡ２３３＃は、２３３位で始まる配列ＧｌｕＡｓｐＡｌａの欠失を示す。
本明細書で使用される「バリアントタンパク質」又は「タンパク質バリアント」又は「バリアント」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾に基づいて親タンパク質のそれとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を有するが、バリアントタンパク質は、以下に記載されるようなアラインメントプログラムを使用して親タンパク質と整列しないほど多くはない。一般に、本明細書で概説されるバリアントタンパク質（バリアントＦｃドメインなどは、ＢＬＡＳＴなど、以下に記載されるアラインメントプログラムを使用して親タンパク質と、一般に少なくとも７５、８０、８５、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、又は９９％同一である。本明細書で使用される「バリアント」はまた、特定の機能を付与する特定のアミノ酸修飾（例えば、「ヘテロ二量体化バリアント」、「ｐＩバリアント」、「除去バリアント」など）を指す。
以下に記載されるように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばＦｃ親ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４由来の重鎖定常ドメイン又はＦｃ領域などのヒト野生型配列であるが、バリアントを有するヒト配列もまた、「親ポリペプチド」として機能することができ、例えば、米国特許出願公開第２００６／０１３４１０５号のＩｇＧ１／２ハイブリッドを含めることができる。本明細書に記載のタンパク質バリアントの配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性、より好ましくは少なくとも約９５－９８－９９％の同一性を有する。したがって、本明細書で使用される「抗体バリアント」又は「バリアント抗体」とは、少なくとも１個のアミノ酸修飾に基づいて親抗体とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「ＩｇＧバリアント」又は「バリアントＩｇＧ」とは、少なくとも１個のアミノ酸修飾に基づいて親ＩｇＧ（ここでも、多くの場合はヒトＩｇＧ配列に由来）とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「免疫グロブリンバリアント」又は「バリアント免疫グロブリン」とは、少なくとも１個のアミノ酸修飾に基づいて親免疫グロブリン配列のそれとは異なる免疫グロブリン配列を意味する。
本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」又は「バリアントＦｃ」とは、Ｆｃドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。修飾は、付加、欠失、又は置換であり得る。Ｆｃバリアントは、それらを構成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えば、Ｎ４３４Ｓ又は４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して４３４位に置換セリンを有するＦｃバリアントであり、番号付けはＥＵインデックスによるものである。同様に、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓは、親Ｆｃポリペプチドに対して置換Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを有するＦｃバリアントを定義する。ＷＴアミノ酸の同一性は特定されていなくてもよく、その場合、前述のバリアントは４２８Ｌ／４３４Ｓと称される。置換が提供される順序は任意であり、すなわち、例えば、４２８Ｌ／４３４Ｓは４３４Ｓ／４２８Ｌと同じＦｃバリアントであることなどが留意される。抗体又は誘導体及びそれらのフラグメント（例えば、Ｆｃドメイン）に関連する本発明において議論される全ての位置について、特に明記しない限り、アミノ酸位置の番号付けはＥＵインデックスによるものである。「ＥＵインデックス」又は「ＫａｂａｔのようなＥＵインデックス」若しくは「ＥＵ番号付け」スキームは、ＥＵ抗体の番号付けを指す（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ６３：７８－８５、これにより完全に参照により組み込まれる）。
一般に、バリアントＦｃドメインは、対応する親ヒトＩｇＧＦｃドメインに対して少なくとも約８０、８５、９０、９５、９７、９８又は９９パーセントの同一性を有する（以下に考察される同一性アルゴリズム（一実施形態では当技術分野で既知のＢＬＡＳＴアルゴリズム）をデフォルトパラメータを用いて使用する）。あるいは、バリアントＦｃドメインは、親Ｆｃドメインに対する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のアミノ酸修飾を有し得る。あるいは、バリアントＦｃドメインは、親Ｆｃドメインと比較して最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のアミノ酸修飾を有し得る。更に、本明細書で考察されるように、本明細書に記載のバリアントＦｃドメインは、非変性ゲル電気泳動などの本明細書に記載の既知の技術を使用して測定される別のＦｃドメインと共に二量体を形成する能力を依然として保持する。
本明細書における「タンパク質」は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、及びペプチドを含む、少なくとも２個の共有結合したアミノ酸を意味する。更に、本明細書に記載の抗体を作成するポリペプチドには、１つ以上の側鎖又は末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、円順列、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質又はタンパク質ドメインへの融合、及びペプチドタグ又は標識の付加が含まれ得る。
本明細書で使用される「残基」とは、タンパク質における位置及びその関連するアミノ酸同一性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７又はＮ２９７とも称される）は、ヒト抗体ＩｇＧ１中の２９７位の残基である。
本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」又は「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１個のアミノ酸を、異なる、整合したＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＥＵの２９６位においてＩｇＧ１はチロシンを含み、ＩｇＧ２はフェニルアラニンを含むので、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾であると考えられる。
本明細書で使用される「天然に存在しない修飾」は、アイソタイプ性ではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ヒトＩｇＧのうちのいずれも４３４位にセリンを含まないので、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４（又はそれらのハイブリッド）における置換４３４Ｓは、天然に生じない修飾であるとみなされる。
本明細書で使用される「アミノ酸」及び「アミノ酸同一性」とは、ＤＮＡ及びＲＮＡによってコードされている２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つを意味する。
本明細書で使用される「エフェクター機能」とは、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「ＩｇＧ Ｆｃリガンド」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。Ｆｃリガンドには、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ、Ｃ３、マンナン結合レクチン、マンノース受容体、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌプロテインＡ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌプロテインＧ、及びウイルスＦｃγＲが含まれるが、これらに限定されない。Ｆｃリガンドにはまた、ＦｃγＲと相同なＦｃ受容体のファミリーである、Ｆｃ受容体相同体（ＦｃＲＨ）が含まれる（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １９０：１２３－１３６（参照により全体が組み込まれる））。Ｆｃリガンドは、Ｆｃに結合する未発見の分子を含み得る。特定のＩｇＧ Ｆｃリガンドは、ＦｃＲｎ及びＦｃガンマ受容体である。本明細書で使用される「Ｆｃリガンド」とは、抗体のＦｃ領域と結合してＦｃ／Ｆｃリガンド複合体を形成する任意の生物由来の分子、好ましくはポリペプチドを意味する。
本明細書で使用される「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」、又は「ＦｃガンマＲ」は、ＩｇＧ抗体Ｆｃ領域に結合し、かつＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１及びＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１及びＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、及びＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、並びにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８及びＦ１５８を含む）、及びＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（参照により全体が組み込まれるＪｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７－６５）、同様に、任意の未発見のヒトＦｃγＲ又はＦｃγＲアイソフォーム若しくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。マウスＦｃγＲには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、及びＦｃγＲＩＩＩ－２（ＣＤ１６－２）、並びに任意の発見されていないマウスＦｃγＲ又はＦｃγＲアイソフォーム若しくはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「ＦｃＲｎ」又は「新生児Ｆｃ受容体」とは、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合し、少なくとも部分的にＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を意味する。ＦｃＲｎは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。当技術分野において既知のように、機能的ＦｃＲｎタンパク質は、しばしば重鎖及び軽鎖と称される２つのポリペプチドを含む。軽鎖はβ－２－ミクログロブリンであり、重鎖はＦｃＲｎ遺伝子によってコードされている。本明細書において別段の記載がない限り、ＦｃＲｎタンパク質又はＦｃＲｎタンパク質は、ＦｃＲｎ重鎖とβ－２－ミクログロブリンとの複合体を指す。ＦｃＲｎ受容体への結合を増加させるために、いくつかの場合には血清半減期を増加させるために様々なＦｃＲｎバリアントを使用できる。「ＦｃＲｎバリアント」とは、ＦｃＲｎへの結合を増加させるものであり、好適なＦｃＲｎバリアントを以下に示す。
本明細書で使用される「親ポリペプチド」は、バリアントを生成するように後に修飾される出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、又は天然に存在するポリペプチドのバリアント若しくは操作されたバージョンであってもよい。したがって、本明細書で使用される「親免疫グロブリン」とは、バリアントを産生するように修飾される非修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、本明細書で使用される「親抗体」とは、バリアント抗体を生成するように修飾される非修飾抗体を意味する。「親抗体」には、以下に概説されるように、既知の市販の組換えで産生した抗体が含まれることに留意されたい。このような関係では、「親Ｆｃドメイン」は、列挙されたバリアントに関連するものであり、したがって、「バリアントヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン」はヒトＩｇＧ１の親Ｆｃドメインと比較され、「バリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメイン」は親ＦｃドメインヒトＩｇＧ４と比較されるなどである。
本明細書で使用される「位置」とは、タンパク質の配列中の場所を意味する。位置は、順番に番号付けされるか、又は確立されたフォーマット、例えば、抗体番号付けのためのＥＵインデックスによって番号付けされてもよい。
「標的抗原」は、本明細書で使用されるとき、所与の抗体の可変領域を含む抗体結合ドメインによって特異的に結合される分子を意味する。
本明細書中の本明細書に記載のヘテロ二量体抗体の単量体に牽連して「撚り度（ｓｔｒａｎｄｅｄｎｅｓｓ）」は、「マッチ」する２本鎖ＤＮＡと同様に、「マッチ」してヘテロ二量体を形成する能力を保持するようにヘテロ二量体化バリアントを各単量体に組み込むことを意味する。例えば、いくつかのｐＩバリアントが単量体Ａへと操作される（例えば、ｐＩを高くする）場合、同様に利用され得る「電荷対」である立体バリアントはｐＩバリアントを妨害せず、例えば、ｐＩを高くした電荷バリアントが同一の「鎖」又は「単量体」に置かれ、両方の機能性を保持する。同様に、以下により詳細に概説されるように、対のセットになる「スキュー」バリアントについて、当業者は、対の１つのセットが、どちらの鎖又は単量体に入るかを決定する際に、ｐＩを考慮し、そのため、ｐＩ分離もまた、スキューのｐＩを使用して最大化される。
本明細書で使用される「標的細胞」とは、標的抗原を発現する細胞を意味する。
本明細書に記載の抗体による二重特異性抗体を製造する文脈における「宿主細胞」とは、二重特異性抗体の構成要素をコードする外因性核酸を含み、好適な条件下で二重特異性抗体を発現できる細胞を意味する。好適な宿主細胞について以下で説明する。
本明細書における「野生型又はＷＴ」とは、対立遺伝子変異を含む、天然に見出されるアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有する。
本明細書には、ヒト抗体ドメインと配列同一性を有するいくつかの抗原結合ドメインが提供される。２つの類似した配列（例えば、抗体可変ドメイン）間の配列同一性は、Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．（１９８１）”Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｏｆ Ｂｉｏｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，”Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２［ローカルホモロジーアルゴリズム］、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．＆Ｗｕｎｓｃｈ，ＣＤ．（１９７０）”Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｔｈｏｄ Ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ Ｔｏ Ｔｈｅ Ｓｅａｒｃｈ Ｆｏｒ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ Ｉｎ Ｔｈｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｏｆ Ｔｗｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３［ホモロジ－アラインメントアルゴリズム］、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｗ．Ｒ．＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（１９８８）”Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ Ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，”Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４［類似検索方法］、又はＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ，（１９９０）”Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０［「ＢＬＡＳＴ」アルゴリズム（ｈｔｔｐｓ： ／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉを参照）のアルゴリズムなどのアルゴリズムによって測定することができる。前述のアルゴリズムのいずれかを使用する場合、デフォルトパラメータ（ウィンドウの長さ、ギャップペナルティなど）が使用される。一実施形態では、配列同一性は、デフォルトパラメータを使用して、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して測定される。
本明細書に記載の抗体は一般に、単離されているか、又は組換え体である。本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用される「単離された」とは、それが発現した細胞又は細胞培養物から特定され、分離された、及び／又は回収されたポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製工程によって調製されるであろう。「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。「組換え体」は、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いて抗体が生成されることを意味し、それらも単離され得る。
特定の抗原又はエピトープへの「特異的結合」、あるいは、特定の抗原又はエピトープ「～に特異的に結合する」若しくは「～に対して特異的である」とは、測定し得るほどに非特異的相互作用とは異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、一般に、結合活性を持たない同様の構造の分子である対照分子の結合と比較した分子の結合を決定することによって、測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子との競合によって決定することができる。
特定の抗原又はエピトープに対する特異的結合は、例えば、抗原又はエピトープに対して少なくとも約１０－４Ｍ、少なくとも約１０－５Ｍ、少なくとも約１０－６Ｍ、少なくとも約１０－７Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、少なくとも約１０－９Ｍ、代替的に少なくとも約１０－１０Ｍ、少なくとも約１０－１１Ｍ、少なくとも約１０－１２Ｍ、又はそれ以上のＫＤを有する抗体によって示され得、ＫＤとは特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指す。典型的には、抗原に特異的に結合する抗体は、抗原又はエピトープと比べて、対照分子に対して２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、又はそれ以上の倍数のＫＤを有することになる。
また、特定の抗原又はエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原又はエピトープに対するＫＡ又はＫａが、対照と比べて、そのエピトープに対して少なくとも２０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍、５，０００倍、１０，０００倍、又はそれ以上の倍数の抗体によって示され得、ＫＡ又はＫａは、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指す。結合親和性は一般的に、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＳＰＲ又はＢＬＩアッセイを用いて測定される。
Ｄ．本発明の抗体
本発明は、ヒトＧＰＣ３に結合するモノクローナル抗体及び二重特異性抗体を含む抗体を提供する（前臨床試験を容易にするために、例示される抗体の大部分ではないにしてもその多くがカニクイザルＧＰＣ３にも結合するが、これは全ての実施形態において必須ではないことに留意されたい）。特に、ＣＤ３及びＧＰＣ３に結合し、以下により完全に記載されるような種々のフォーマットをとる二重特異性抗体が提供される。
本発明は、ヒトＧＰＣ３に結合するモノクローナル抗体及び二重特異性抗体を含む抗体を提供する（前臨床試験を容易にするために、例示される抗体の大部分ではないにしてもその多くがカニクイザルＧＰＣ３にも結合するが、これは全ての実施形態において必須ではないことに留意されたい）。特に、ＣＤ３及びＧＰＣ３に結合し、以下により完全に記載されるような種々のフォーマットをとる二重特異性抗体が提供される。
１．抗体
本明細書において提供される抗体は、以下により完全に記載されるように、異なる抗体ドメインを含む。本明細書に記載され、当該技術分野において既知であるように、本明細書に記載の抗体は、重鎖及び軽鎖内に異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－Ｆｃドメイン又はＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン、及びｓｃＦｖドメインを含むが、これらに限定されない。
本明細書において提供される抗体は、以下により完全に記載されるように、異なる抗体ドメインを含む。本明細書に記載され、当該技術分野において既知であるように、本明細書に記載の抗体は、重鎖及び軽鎖内に異なるドメインを含み、これもまた重複し得る。これらのドメインは、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－Ｆｃドメイン又はＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン、及びｓｃＦｖドメインを含むが、これらに限定されない。
特に、図１５Ａ及び１５Ｂに示すフォーマットは、通常「ヘテロ二量体抗体」と呼ばれる抗体であり、タンパク質が、ヘテロ二量体Ｆｃドメインに自己集合した少なくとも２つの関連Ｆｃ配列、及びＦａｂとして又はｓｃＦｖとしてであれ少なくとも２つのＦｖ領域を有することを意味する。
ａ．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域及び／又は特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」である又はそれ「に由来する」重鎖又は軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るか又はそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である（すなわち、最も高い同一性％）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって（本明細書に概説される方法を使用する）、そのようなものとして同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞変異又は部位特異的変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９５、９６、９７、９８、若しくは９９％、又は少なくとも９６％、９７％、９８％、若しくは９９％までも同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０～２０アミノ酸以下の相違しか示さない（本明細書に記載の任意のスキュー、ｐＩ、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本明細書に記載のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは５アミノ酸以下、又は更には４、３、２、若しくは１アミノ酸以下の相違しか示さない場合がある（同様に、本明細書に記載の任意のスキュー、ｐＩ、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本明細書に記載のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、特定の生殖細胞系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域及び／又は特定の生殖細胞系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖細胞系列配列「の産物」である又はそれ「に由来する」重鎖又は軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得るか又はそれからなり得る。ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖細胞系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較することと、ヒト抗体の配列に最も近い配列である（すなわち、最も高い同一性％）ヒト生殖細胞系列免疫グロブリンを選択することとによって（本明細書に概説される方法を使用する）、そのようなものとして同定され得る。特定のヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然に生じる体細胞変異又は部位特異的変異の意図的導入に起因して、生殖細胞系列配列と比較してアミノ酸の相違を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖細胞系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖細胞系列配列）と比較したときに、抗体をヒト配列に由来するものとして特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列において少なくとも９５、９６、９７、９８、若しくは９９％、又は少なくとも９６％、９７％、９８％、若しくは９９％までも同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０～２０アミノ酸以下の相違しか示さない（本明細書に記載の任意のスキュー、ｐＩ、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本明細書に記載のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。ある特定の場合には、ヒト化抗体は、生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とは５アミノ酸以下、又は更には４、３、２、若しくは１アミノ酸以下の相違しか示さない場合がある（同様に、本明細書に記載の任意のスキュー、ｐＩ、及び除去バリアントの導入前、すなわち、本明細書に記載のバリアントの導入前は、バリアントの数は一般に少ない）。
一実施形態では、親抗体は、当技術分野で既知のとおり、親和性成熟されたものである。構造に基づく方法が、例えば、米国特許出願第１１／００４，５９０号に記載されているように、ヒト化及び親和性成熟のために用いられ得る。選択ベースの方法が、抗体可変領域をヒト化及び／又は親和性成熟させるために用いられ得、これには、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１－１６２、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． ２７２（１６）：１０６７８－１０６８４、Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１－２２６１８、Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：８９１０－８９１５、Ｋｒａｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １６（１０）： ７５３－７５９に記載される方法が含まれるがこれらに限定されず、これらは全て参照により組み込まれる。他のヒト化方法は、ＣＤＲの部分のみをグラフティングすることを含み得、これには、参照により全ての内容が組み込まれる、米国特許出願第０９／８１０，５１０号、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－１１２５、Ｄｅ Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６－３０８４に記載される方法が含まれるがこれらに限定されない。
２．ヘテロ二量体抗体
例示的な実施形態では、本明細書で提供される二重特異性抗体は、２つのバリアントＦｃドメイン配列を含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。そのようなバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体抗体の自己組織化及び／又は精製を容易にするためのアミノ酸修飾を含む。
例示的な実施形態では、本明細書で提供される二重特異性抗体は、２つのバリアントＦｃドメイン配列を含むヘテロ二量体二重特異性抗体である。そのようなバリアントＦｃドメインは、ヘテロ二量体抗体の自己組織化及び／又は精製を容易にするためのアミノ酸修飾を含む。
抗体技術における継続的な問題は、２つの異なる抗原に同時に結合する「二重特異性」抗体であって、一般に、異なる抗原を近接させ、新しい機能と新しい治療法をもたらすことができる、「二重特異性」抗体に対する要望である。一般に、これらの抗体は、各重鎖及び軽鎖の遺伝子を宿主細胞に含めることによって作製される。これにより、一般に、２つのホモ二量体（Ａ－Ａ及びＢ－Ｂ（軽鎖ヘテロ二量体の問題は含まない））だけでなく、所望のヘテロ二量体（Ａ－Ｂ）が形成される。しかしながら、二重特異性抗体形成における主な障壁は、ホモ二量体形成を上回るように所望のヘテロ二量体形成に偏らせること及び／又はホモ二量体から離してヘテロ二量体抗体を精製することが困難であるということである。
対象のヘテロ二量体抗体を生成するために使用することができる多くの機構が存在する。加えて、当業者には理解されるように、これらの異なる機構を組み合わせて高いヘテロ二量体化を確実にすることができる。ヘテロ二量体の産生及び精製を容易にするアミノ酸修飾は、一般的に「ヘテロ二量体化バリアント」と総称される。以下で考察されるように、ヘテロ二量体化バリアントは、「スキュー」バリアント（例えば、下記の「ノブとホール」及び下記の「電荷対」バリアント）並びに「ｐＩバリアント」を含み、それによってホモ二量体から離れてヘテロ二量体の精製を可能にする。その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，６０５，０８４号に一般的に記載されるように、また、具体的には、ヘテロ二量体化バリアントの議論について以下のように、ヘテロ二量体化に有用な機構としては、同第９，６０５，０８４号に記載される「ノブとホール」（「ＫＩＨ」）、同第９，６０５，０８４号に記載される「静電ステアリング」又は「電荷対」、同第９，６０５，０８４号に記載されるｐＩバリアント、並びに同第９，６０５，０８４号及び以下に概説される一般的な更なるＦｃバリアントが挙げられる。
対象のヘテロ二量体抗体（例えば、二重特異性抗体）の形成及び精製に有用なヘテロ二量体化バリアントについて、以下で更に詳細に議論する。
ａ．スキューバリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、第１のＦｃドメイン（Ａ）及び／又は第２のＦｃドメイン（Ｂ）における１個以上のアミノ酸修飾であるスキューバリアントを含み、スキューバリアントは、Ｆｃホモ二量体（第１のＦｃドメインの２つ又は第２のＦｃドメインの２つを含むＦｃ二量体；Ａ－Ａ又はＢ－Ｂ）を上回って第１及び第２のＦｃドメインを含むＦｃ二量体；Ａ－Ｂ）の形成を促す。好適なスキューバリアントは、全体的に、特に、スキューバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／０３５５６０８号の図２９、並びに図１に含まれている。
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、第１のＦｃドメイン（Ａ）及び／又は第２のＦｃドメイン（Ｂ）における１個以上のアミノ酸修飾であるスキューバリアントを含み、スキューバリアントは、Ｆｃホモ二量体（第１のＦｃドメインの２つ又は第２のＦｃドメインの２つを含むＦｃ二量体；Ａ－Ａ又はＢ－Ｂ）を上回って第１及び第２のＦｃドメインを含むＦｃ二量体；Ａ－Ｂ）の形成を促す。好適なスキューバリアントは、全体的に、特に、スキューバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／０３５５６０８号の図２９、並びに図１に含まれている。
したがって、ヘテロ二量体のＦｃ領域の形成を可能にする好適なＦｃヘテロ二量体化バリアントの対を図１に示す。したがって、第１のＦｃドメインは第１のＦｃヘテロ二量体化バリアントを有し、第２のＦｃドメインは、図１の対から選択される第２のＦｃヘテロ二量体化バリアントを有する。
ある機構は、一般に、当技術分野において「ノブとホール」と称され、ヘテロ二量体の形成を促進し、ホモ二量体の形成を促進しない立体的影響をもたらすアミノ酸操作を指し、任意選択的に使用され得る。これは、米国特許出願第６１／５９６，８４６号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（７）：６１７（１９９６）、Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９７ ２７０：２６、米国特許第８，２１６，８０５号に記載されているように「ノブとホール」と称されることがあり、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これらの図は、「ノブとホール」に依存する多くの「単量体Ａ－単量体Ｂ」対を特定する。更に、Ｍｅｒｃｈａｎｔら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ。１６：６７７（１９９８）に記載されているように、これらの「ノブとホール」突然変異は、ヘテロ二量体化への形成を歪めるためにジスルフィド結合と組み合わせることができる。
ヘテロ二量体の生成に用途を見出す更なる機構は、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２５）：１９６３７（２０１０）に記載されているように「静電ステアリング」と称されることがあり、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。これは、本明細書において、「電荷対」と称されることもある。この実施形態では、静電学を使用して、ヘテロ二量体化に向けて形成をスキューさせる。当業者には理解されるように、これらは、ｐＩ、すなわち精製にも影響を及ぼす可能性があり、したがって場合によってはｐＩバリアントとみなすこともできる。しかしながら、これらはヘテロ二量体化を強制するために生成され、精製手段として使用されなかったので、それらは「立体バリアント」として分類される。これらには、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＤ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅ（例えば、これらは「単量体の対応セット」である）、及びＣ２２０Ｒ／Ｅ２２４Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対になったＣ２２０Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／３６８Ｅが含まれるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態では、スキューバリアントは、有利かつ同時に、「ノブとホール」機構及び「静電ステアリング」機構の両方に基づくヘテロ二量体化を促進する。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、そのようなヘテロ二量体化スキューバリアントの１つ以上のセットを含む。これらのバリアントは、「セット」の「対」になる。すなわち、一方のセットの対が第１の単量体に組み込まれ、他方のセットの対が第２の単量体に組み込まれる。これらのセットは、必ずしも「ノブとホール」バリアントとして挙動するわけではなく、一方の単量体の残基と他方の単量体の残基との間の一対一の対応を有することを留意すべきである。すなわち、セットのこれらの対は、その代わりに、ヘテロ二量体の形成を促進し、ホモ二量体の形成を促進しない２つの単量体間の界面を形成する可能性があり、生物学的条件下で自発的に形成するヘテロ二量体の割合は、予想される５０％（２５％ホモ二量体Ａ／Ａ：５０％ヘテロ二量体Ａ／Ｂ：２５％ホモ二量体Ｂ／Ｂ）ではなく、９０％を超える。例示的なヘテロ二量体化「スキュー」バリアントを図１に示す。例示的な実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、又はＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意選択的に架橋ジスルフィド、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃを含む）のセットとしてＦｃヘテロ二量体化バリアントを含み、これらは全て、Ｆｃヘテロ二量体化バリアントの「スキュー」バリアントアミノ酸置換セットである。例示的な実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」アミノ酸置換セットを含む。命名法に関して、対「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」とは、単量体の一方が、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ及びＥ３５７Ｑを含むＦｃドメインを含み、他方の単量体が、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｄ及びＫ３７０Ｓを含むＦｃドメインを含むことを意味する。上述のように、これらの対の「撚り度」は、開始時のｐＩに依存する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるスキューバリアントは、他のスキューバリアント（例えば、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号の図３７、特に、スキューバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれるものを参照されたい）、ｐＩバリアント、アイソタイプバリアント、ＦｃＲｎバリアント、除去バリアントなどを含むがこれらに限定されない、任意の他の修飾と共に、ヘテロ二量体抗体の第１及び第２のＦｃドメインの一方又は両方に任意選択的に、かつ独立して組み込まれる。更に、個々の修飾はまた、独立して、かつ任意選択的に、ヘテロ二量体抗体を対象に含めるか、又は対象から除外することができる。
更なる単量体Ａ及び単量体Ｂのバリアントは、本明細書に概説されるｐＩバリアント又は参照によりその図、説明文、及び配列番号が本明細書に明示的に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号の図３７に示される他の立体バリアントなどの他のバリアントと、任意の量で任意選択的に、かつ独立して組み合わせることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に概説される立体変異は、任意で独立していずれかのｐＩ変異（又はＦｃ変異、ＦｃＲｎ変異などの他の変異）を一方又は両方の単量体に組み込むことができ、独立して任意で本明細書に記載の抗体のタンパク質に含めるか又は除外することができる。
多くの実施形態において特に有用ないくつかの対を示す、好適なスキューバリアントのリストが図１に示されている。多くの実施形態において特に有用なセットの対としては、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、及び３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑが挙げられるが、これらに限定されない。命名法に関して、対「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」は、一方の単量体が二重バリアントセットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを有し、他方が二重バリアントセットＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有することを意味する。
ｂ．ヘテロ二量体のｐＩ（等電点）バリアント
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、ホモ二量体タンパク質からのヘテロ二量体抗体（例えば、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３二重特異性抗体）の分離を有利に可能にする精製バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、ホモ二量体タンパク質からのヘテロ二量体抗体（例えば、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３二重特異性抗体）の分離を有利に可能にする精製バリアントを含む。
ヘテロ二量体抗体の精製を容易にし得るいくつかの基本的な機構が存在する。例えば、各単量体が異なるｐＩを有するように抗体重鎖単量体Ａ及びＢの一方又は両方を修飾することにより、単量体Ａ－Ａ及びＢ－Ｂタンパク質からのヘテロ二量体Ａ－Ｂ抗体の等電点精製が可能になる。あるいは、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットや「２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットなどの一部の足場フォーマットでも、サイズに基づいて分離を可能にする。上記のように、スキューバリアントを使用してホモ二量体上にヘテロ二量体の形成を「スキュー」することもまた可能である。したがって、ヘテロ二量体化スキューバリアントとｐＩバリアントとの組み合わせは、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体において特定の用途を見出す。
更に、以下でより完全に概説されるように、ヘテロ二量体抗体のフォーマットに応じて、単量体の定常領域及び／若しくはＦｃドメイン内に含まれるｐＩバリアント、並びに／又はドメインリンカーを使用することができる。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、Ｆｃ、ＦｃＲｎ及びＫＯバリアントなどの、ｐＩ変化を作り出すこともできる代替機能のための追加の修飾を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される対象のヘテロ二量体抗体は、単量体のｐＩを変更する１つ以上の修飾を有する少なくとも１つの単量体（すなわち、「ｐＩバリアント」）を含む。一般に、当業者には理解されるように、ｐＩバリアントには２つの一般的なカテゴリー、すなわち、タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）とタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）がある。本明細書に記載されるように、これらのバリアントの全ての組み合わせがなされ得、一方の単量体は野生型、又は野生型と顕著に異なるｐＩを示さないバリアントであり得、他方がより塩基性又はより酸性のいずれかであり得る。代替的に、各単量体は、１つがより塩基性に、１つがより酸性へと変化する。
ヘテロ二量体抗体のフォーマットに応じて、ｐＩバリアントは単量体の定常ドメイン及び／又はＦｃドメイン内に含まれるか、又は荷電リンカー、ドメインリンカー若しくはｓｃＦｖリンカーのいずれかが使用され得る。すなわち、「１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」などのｓｃＦｖを利用する抗体フォーマットには、精製目的のために更にｐＩブーストを与える荷電ｓｃＦｖリンカー（正又は負のいずれか）を含むことができる。当業者には理解されるように、本明細書に記載の抗体は、単量体の一方又は両方にあるｐＩバリアント、及び／又は荷電ドメインリンカーも提供するが、いくつかの１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、荷電ｓｃＦｖリンカーのみで有用であり、追加のｐＩ調整はない。加えて、代替の機能性のための更なるアミノ酸操作もまた、Ｆｃ、ＦｃＲｎ、及びＫＯバリアントなどのｐＩ変化を付与し得る。
ヘテロ二量体タンパク質の精製を可能にする分離機構としてｐＩを利用する対象のヘテロ二量体抗体では、アミノ酸バリアントが単量体ポリペプチドの一方又は両方に導入される。すなわち、単量体の１つ（単純化のため本明細書では、「単量体Ａ」として称される）のｐＩは、単量体Ｂから離れるように操作させることができ、又は単量体ＡのｐＩを増加させ、単量体ＢのｐＩを減少させつつ、単量体ＡとＢの両方の変化を変化させることができる。下記により完全に概説されるように、いずれか又は両方の単量体のｐＩ変化は、荷電残基を除去又は付加することによって（例えば、中性アミノ酸を正又は負荷電アミノ酸残基で置換する、例えばグリシンからグルタミン酸）、正又は負から反対の電荷への荷電残基の変更によって（アスパラギン酸からリジンへ）、又は荷電残基の中性残基への変更によって（例えば、電荷の消失、リジンからセリンへ）、実施することができる。いくつかのこれらのバリアントを図１及び図２に示す。
したがって、いくつかの実施形態では、対象のヘテロ二量体抗体は、二量体タンパク質の単量体の両方ではないにしても少なくとも１つの等電点（ｐＩ）を、アミノ酸置換（「ｐＩバリアント」又は「ｐＩ置換」）を単量体の一方又は両方に組み込むことによって変更する、定常領域におけるアミノ酸修飾を含む。本明細書中に示されるように、２つのホモ二量体からのヘテロ二量体の分離は、２つの単量体のｐＩが０．１ｐＨ単位とわずかに異なる場合に達成でき、０．２、０．３、０．４、及び０．５以上異なるものが全て本明細書に記載の抗体において使用される。
当業者には理解されるように、良好な分離を得るために各単量体又は両方の単量体に含まれるべきｐＩ変異の数は、構成要素の出発ｐＩ、例えば、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ及び２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットにおいて、目的のｓｃＦｖ及びＦａｂの出発ｐＩに部分的に依存するであろう。すなわち、どの単量体を操作するか、又はどの「方向」（例えば、より正又はより負）かを決定するために、２つの標的抗原のＦｖ配列が計算され、そしてそこから決定がなされる。当該技術分野において知られているように、異なるＦｖは、本明細書に記載の抗体において利用される異なる出発ｐＩを有するであろう。一般に、本明細書に概説されるように、ｐＩは、少なくとも約０．１ｌｏｇの各単量体の総ｐＩ差をもたらすように操作され、本明細書に概説されるように０．２～０．５が好ましい。
重鎖の定常領域を使用することによって、ヘテロ二量体を達成するためにｐＩバリアントが使用される場合、抗体を含む二重特異性タンパク質を設計し、精製するためのよりモジュール方式のアプローチが提供される。したがって、いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化バリアント（スキュー及びｐＩヘテロ二量体化バリアントを含む）は可変領域に含まれず、そのため各個々の抗体を操作しなければならない。加えて、いくつかの実施形態では、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、顕著な免疫原性を導入することなくｐＩが変化するように、異なるＩｇＧアイソタイプからのｐＩバリアントを移入することによって顕著に低減する。したがって、解決されるべき更なる問題は、高ヒト配列含有量を有する低ｐＩ定常ドメインの解明、例えば、任意の特定位置における非ヒト残基の最小化又は回避である。アイソタイプ置換に代えて、又はこれに加え、ｐＩバリアントから生じる免疫原性の可能性は、等配電子置換（例えば、ＡｓｎからＡｓｐ及びＧｌｎからＧｌｕ）を利用することによって、大幅に減少する。
以下に議論するように、このｐＩ操作で起こり得る副次的な利益はまた、血清半減期の延長及びＦｃＲｎ連結の増加である。すなわち、米国特許出願公開第２０１２／００２８３０４号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、抗体定常ドメイン（抗体及びＦｃ融合体に見られるものを含む）のｐＩを低下させると、インビボでより長い血清保持をもたらし得る。血清半減期を延長するためのこれらのｐＩバリアントはまた、精製のためのｐＩ変化を促進する。
加えて、ｐＩバリアントは、ホモ二量体が存在するときを排除、最小化、及び区別する能力が顕著であるので、二重特異性抗体の分析及び品質管理プロセスに更なる利益を与える。同様に、ヘテロ二量体抗体産生の再現性を確実に試験する能力は重要である。
一般に、特に使用される実施形態は、スキューバリアントを含むバリアントのセットに依存し、これは、２つの単量体間でｐＩ差異を増加させるｐＩバリアントと組み合わせて、ホモ二量体化形成より優先してヘテロ二量体化形成を促し、ホモ二量体を除去してヘテロ二量体の精製を容易にする。
ｐＩバリアントの例示的な組み合わせは、図１及び図２、並びに米国特許出願公開第２０１６／０３５５６０８号の図３０に示されており、これらの全ては、全体的に、特に、ｐＩバリアントの開示について、参照により本明細書に組み込まれる。ｐＩバリアントの好ましい組み合わせを、図１及び図２に示す。本明細書に概説し、図に示すように、これらの変化はＩｇＧ１と比較して示されているが、全てのアイソタイプをこのように変更することができ、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがＩｇＧ２～４に由来する場合、Ｒ１３３Ｅ及びＲ１３３Ｑもまた使用され得る。
したがって、いくつかの実施形態では、一方の単量体は図２からの置換のセットを有し、他方の単量体は荷電リンカー（フォーマットに示されるように、その単量体がｓｃＦｖ又は荷電ドメインリンカーを含むため荷電ｓｃＦｖリンカーのフォーマットのいずれかで、図５及び図６に示されているものから選択できる）を有する。
いくつかの実施形態では、修飾は、ＥＵ番号付けに基づき、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９及び２３０位を含む、Ｆｃドメインのヒンジで生じる。したがって、ｐＩ変異、特に置換は、２１６～２３０位の１つ以上で行うことができ、用途を見出す１、２、３、４又は５個の変異を有する。同様に、全ての可能な組み合わせが、単独で、又は他のドメイン中の他のｐＩバリアントと共に企図されている。
ヒンジドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換は、２２１位の欠失、２２２位の非天然バリン又はトレオニン、２２３位の欠失、２２４位の非天然グルタミン酸、２２５位の欠失、２３５位の欠失、及び２３６位の欠失又は非天然アラニンを含むが、これらに限定されない。場合によっては、ヒンジドメインにおいてはｐＩ置換のみが行われ、他の例では、これらの置換は他のドメイン内の他のｐＩバリアントに任意の組み合わせで加えられる。
いくつかの実施形態では、ＥＵ番号付けに基づき、２３３、２３４、２３５、２３６、２７４、２９６、３００、３０９、３２０、３２２、３２６、３２７、３３４及び３３９位を含むＣＨ２領域内に変異を生じさせることができる。２３３～２３６における変化は、ＩｇＧ２骨格におけるエフェクター機能を（３２７Ａと共に）増加させるためになされ得ることに留意されたい。同様に、これら１４の位置の全ての可能な組み合わせを作ることができ、例えば、＝は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のＣＨ２のｐＩ置換を有するバリアントＦｃドメインを含み得る。
ＣＨ２ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換は、２７４位の非天然グルタミン又はグルタミン酸、２９６位の非天然フェニルアラニン、３００位の非天然フェニルアラニン、３０９位の非天然バリン、３２０位の非天然グルタミン酸、３２２位の非天然グルタミン酸、３２６位の非天然グルタミン酸、３２７位の非天然グリシン、３３４位の天然グルタミン酸、３３９位の非天然トレオニン、及びＣＨ２内及び他のドメインとの全ての可能な組み合わせを含むが、これらに限定されない。
この実施形態では、修飾は、ＣＨ３領域の３５５、３５９、３６２、３８４、３８９、３９２、３９７、４１８、４１９、４４４及び４４７位（ＥＵ番号付け）から独立して、かつ任意選択的に選択され得る。ＣＨ３ドメインのｐＩを低下させるのに使用される具体的な置換としては、３５５位の非天然グルタミン又はグルタミン酸、３８４位の非天然セリン、３９２位の非天然アスパラギン又はグルタミン酸、３９７位の非天然メチオニン、４１９位の非天然グルタミン酸、３５９位の非天然グルタミン酸、３６２位の非天然グルタミン酸、３８９位の非天然グルタミン酸、４１８位の非天然グルタミン酸、４４４位の非天然グルタミン酸、及び４４７位の欠失又は非天然アスパラギン酸が含まれるがこれらに限定されない。
一般に、当業者には理解されるように、ｐＩバリアントには２つの一般的なカテゴリー、すなわち、タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）とタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）がある。本明細書に記載されるように、これらのバリアントの全ての組み合わせがなされ得、一方の単量体は野生型、又は野生型と顕著に異なるｐＩを示さないバリアントであり得、他方がより塩基性又はより酸性のいずれかであり得る。代替的に、各単量体は、１つがより塩基性に、１つがより酸性へと変化する。
ｐＩバリアントの好ましい組み合わせを図２に示す。本明細書に概説し、図に示すように、これらの変化はＩｇＧ１と比較して示されているが、全てのアイソタイプをこのように変更することができ、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがＩｇＧ２～４に由来する場合、Ｒ１３３Ｅ及びＲ１３３Ｑもまた使用され得る。
一実施形態では、例えば図１５Ａ及び４４のフォーマットにおいて、ｐＩバリアントの好ましい組み合わせは、２０８Ｄ／２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄバリアント（ヒトＩｇＧ１に対しての場合、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む１つの単量体（負のＦａｂ側）と、（ＧＫＰＧＳ）４（配列番号：１５）を含む正荷電ｓｃＦｖリンカーを含む第２の単量体（正のｓｃＦｖ側）と、を有する。しかしながら、当業者によって理解されるように、第１の単量体は、位置２０８を含むＣＨ１ドメインを含む。したがって、ＣＨ１ドメインを含まない構築物（例えば、ドメインの１つにＣＨ１ドメインを利用しないヘテロ二量体抗体の場合、例えば、図４４Ｃ又は図４４Ｄに示されているようなデュアルｓｃＦｖフォーマット又は「ワンアーム」フォーマットの場合）において、好ましい負のｐＩバリアントＦｃセットは、２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄバリアント（ヒトＩｇＧ１に対しての場合、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含む。
したがって、いくつかの実施形態では、一方の単量体は図４からの置換のセットを有し、他方の単量体は荷電リンカー（フォーマットに示されるように、その単量体がｓｃＦｖ又は荷電ドメインリンカーを含むため荷電ｓｃＦｖリンカーのフォーマットのいずれかで、図５及び図６に示されているものから選択できる）を有する。
ｃ．アイソタイプバリアント
更に、本明細書に記載の抗体の多くの実施形態は、あるＩｇＧアイソタイプから別のＩｇＧアイソタイプへの特定の位置でのｐＩアミノ酸の「移入」に依存し、したがって、バリアントに望ましくない免疫原性が導入される可能性を低減又は排除する。これらのいくつかは、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図２１に示され、参照により本明細書に組み込まれる。すなわち、ＩｇＧ１は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、ＩｇＧ１の重定常領域は、ＩｇＧ２のそれよりも高いｐＩを有する（８．１０対７．３１）。特定の位置でＩｇＧ２残基をＩｇＧ１骨格に導入することによって、得られる単量体のｐＩは低下（又は上昇）し、更により長い血清半減期を示す。例えば、ＩｇＧ１は１３７位にグリシン（ｐＩ５．９７）を有し、ＩｇＧ２はグルタミン酸（ｐＩ３．２２）を有し、グルタミン酸を移入することは、得られるタンパク質のｐＩに影響を及ぼす。以下に記載されるように、いくつかのアミノ酸置換は一般に、バリアント抗体のｐＩに顕著な影響を与えるために必要とされる。しかしながら、以下に論じられるようにＩｇＧ２分子中の変化でさえも血清半減期の増加を可能にすることが留意されるべきである。
更に、本明細書に記載の抗体の多くの実施形態は、あるＩｇＧアイソタイプから別のＩｇＧアイソタイプへの特定の位置でのｐＩアミノ酸の「移入」に依存し、したがって、バリアントに望ましくない免疫原性が導入される可能性を低減又は排除する。これらのいくつかは、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図２１に示され、参照により本明細書に組み込まれる。すなわち、ＩｇＧ１は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、ＩｇＧ１の重定常領域は、ＩｇＧ２のそれよりも高いｐＩを有する（８．１０対７．３１）。特定の位置でＩｇＧ２残基をＩｇＧ１骨格に導入することによって、得られる単量体のｐＩは低下（又は上昇）し、更により長い血清半減期を示す。例えば、ＩｇＧ１は１３７位にグリシン（ｐＩ５．９７）を有し、ＩｇＧ２はグルタミン酸（ｐＩ３．２２）を有し、グルタミン酸を移入することは、得られるタンパク質のｐＩに影響を及ぼす。以下に記載されるように、いくつかのアミノ酸置換は一般に、バリアント抗体のｐＩに顕著な影響を与えるために必要とされる。しかしながら、以下に論じられるようにＩｇＧ２分子中の変化でさえも血清半減期の増加を可能にすることが留意されるべきである。
他の実施形態では、非アイソタイプのアミノ酸変化を行って、（例えば、高ｐＩのアミノ酸から低ｐＩのアミノ酸へと変化させることによって）得られるタンパク質の全体的な荷電状態を低減させるか、又は以下で更に詳細に説明する安定性などのための構造の調整を可能にする。
加えて、重鎖定常ドメイン及び軽鎖定常ドメインの両方をｐＩ操作することによって、ヘテロ二量体の各単量体における顕著な変化を見ることができる。本明細書で論じるように、２つの単量体のｐＩが少なくとも０．５だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィー若しくは等電点電気泳動、又は等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。
ｄ．ｐＩの計算
各単量体のｐＩは、バリアント重鎖定常ドメインのｐＩ及び全単量体のｐＩに依存し、バリアント重鎖定常ドメイン及び融合パートナーを含み得る。したがって、いくつかの実施形態において、ｐＩの変化は、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図１９のチャートを用いて、バリアント重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書で論じるように、どの単量体を操作するかは概して、Ｆｖ領域及び足場領域の固有のｐＩによって決定される。代替的に、各単量体のｐＩを比較することができる。
各単量体のｐＩは、バリアント重鎖定常ドメインのｐＩ及び全単量体のｐＩに依存し、バリアント重鎖定常ドメイン及び融合パートナーを含み得る。したがって、いくつかの実施形態において、ｐＩの変化は、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号の図１９のチャートを用いて、バリアント重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書で論じるように、どの単量体を操作するかは概して、Ｆｖ領域及び足場領域の固有のｐＩによって決定される。代替的に、各単量体のｐＩを比較することができる。
ｅ．より良好なＦｃＲｎインビボ結合も付与するｐＩバリアント
ｐＩバリアントが単量体のｐＩを減少させる場合、それらはインビボでの血清保持を改善するという更なる利点を有することができる。
ｐＩバリアントが単量体のｐＩを減少させる場合、それらはインビボでの血清保持を改善するという更なる利点を有することができる。
まだ検討中ではあるが、エンドソーム内のｐＨ６でＦｃＲｎに結合するとＦｃが隔離されるため、Ｆｃ領域はインビボでより長い半減期を有すると考えられている（Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，１９９７ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ．１８（１２）：５９２－５９８、全体が参照により組み込まれる）。次いでエンドソーム区画はＦｃを細胞表面にリサイクルする。区画が細胞外空間に開くと、約７．４のより高いｐＨが、血中へのＦｃの放出を誘導する。マウスでは、Ｄａｌｌ ’Ａｃｑｕａ等。ｐＨ６及びｐＨ７．４でＦｃＲｎ結合が増加したＦｃ変異体は実際に野生型Ｆｃと同じ血清濃度及び半減期を有することが示された（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、２００２年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ。１６９：５１７１－５１８０、参照によりその全体が組み込まれる）。ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対するＦｃの親和性の増加は、血中へのＦｃの放出を妨げると考えられる。したがって、インビボでのＦｃの半減期を増加させるＦｃ変異は、理想的には、より高いｐＨでのＦｃの放出をなお可能にしながら、より低いｐＨでのＦｃＲｎ結合を増加させる。アミノ酸ヒスチジンは、６．０～７．４のｐＨ範囲でその荷電状態を変化させる。したがって、Ｆｃ／ＦｃＲｎ複合体中の重要な位置にＨｉｓ残基を見出すことは驚くべきことではない。
最近、より低い等電点を有する可変領域を有する抗体は、より長い血清半減期も有する可能性があることが示唆されている（Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，２０１０ ＰＥＤＳ．２３（５）：３８５－３９２、参照によりその全体が組み込まれる）。しかし、この機構はまだよくわかっていない。更に、可変領域は抗体ごとに異なる。本明細書に記載されるように、ｐＩが低下し半減期が延長された定常領域バリアントは、抗体の薬物動態特性を改善するためのよりモジュール化されたアプローチを提供するであろう。
Ｆ．追加の機能性のための追加のＦｃバリアント
上記に概説されているヘテロ二量体化バリアントに加えて、限定されないが、以下に概説されているように、１個以上のＦｃγＲ受容体との結合を変化させること、ＦｃＲｎへの変化された結合を含む、様々な理由から行われ得るいくつかの有用なＦｃアミノ酸修飾がある。
上記に概説されているヘテロ二量体化バリアントに加えて、限定されないが、以下に概説されているように、１個以上のＦｃγＲ受容体との結合を変化させること、ＦｃＲｎへの変化された結合を含む、様々な理由から行われ得るいくつかの有用なＦｃアミノ酸修飾がある。
したがって、本明細書で提供される抗体（ヘテロ二量体、並びにホモ二量体）は、本明細書で概説されるヘテロ二量体化バリアント（例えば、ｐＩバリアント及び立体バリアント）を伴うか、又は伴わない、そのようなアミノ酸修飾を含み得る。バリアントの各セットは独立して、かつ任意選択的に特定のヘテロ二量体タンパク質を含み得るか又はそれから除外し得る。
（ｉ）ＦｃγＲバリアント
したがって、ＦｃγＲ受容体のうちの１つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なＦｃ置換が存在する。ある特定の実施形態では、対象の抗体は、１つ以上のＦｃγＲ受容体（すなわち、「ＦｃγＲバリアント」）への結合を変更する修飾を含む。結合の増加並びに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、一般に、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応）をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、ＦｃγＲＩＩｂ（阻害性受容体）との結合の減少も有益であり得る。本明細書に記載の抗体で使用されるアミノ酸置換には、米国特許第８，１８８，３２１号（特に図４１）及び同第８，０８４，５８２号、並びに米国特許出願公開第２００６０２３５２０８号及び同第２００７０１４８１７０号に列挙されるものが挙げられ、これらは全て、参照によりその全体が、特にそこに開示されているバリアントについて明示的に、本明細書に組み込まれている。使用される特定のバリアントには、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖ及び２９９Ｔが挙げられるが、これらに限定されない。
したがって、ＦｃγＲ受容体のうちの１つ以上への結合を改変するために実施され得るいくつかの有用なＦｃ置換が存在する。ある特定の実施形態では、対象の抗体は、１つ以上のＦｃγＲ受容体（すなわち、「ＦｃγＲバリアント」）への結合を変更する修飾を含む。結合の増加並びに結合の減少をもたらす置換が有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、一般に、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応）をもたらすことが知られている。同様に、いくつかの状況下では、ＦｃγＲＩＩｂ（阻害性受容体）との結合の減少も有益であり得る。本明細書に記載の抗体で使用されるアミノ酸置換には、米国特許第８，１８８，３２１号（特に図４１）及び同第８，０８４，５８２号、並びに米国特許出願公開第２００６０２３５２０８号及び同第２００７０１４８１７０号に列挙されるものが挙げられ、これらは全て、参照によりその全体が、特にそこに開示されているバリアントについて明示的に、本明細書に組み込まれている。使用される特定のバリアントには、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖ及び２９９Ｔが挙げられるが、これらに限定されない。
更に、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第１２／３４１，７６９に具体的に開示されているように、４３４Ｓ、４３４Ａ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、４２８Ｌ／４３４Ａ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６Ｉ又はＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ、及び２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌを含むがこれらに限定されない、ＦｃＲｎ受容体への結合の増加及び血清半減期の増加に使用される追加のＦｃ置換が存在する。そのような修飾は、対象抗体の一方又は両方のＦｃドメインに含まれ得る。
（ｉｉ）除去バリアント
同様に、機能的バリアントの別のカテゴリーは「ＦｃγＲ除去バリアント」又は「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯ又はＫＯ）」バリアントである。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、追加の作用機序を回避するために、１つ以上又は全てのＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）へのＦｃドメインの正常な結合を低減又は除去することが望ましい。すなわち、例えば、多くの実施形態では、特にＣＤ３に一価的に結合する二重特異性抗体の使用において、ＡＤＣＣ活性を排除又は顕著に低下させるためにＦｃγＲＩＩＩａ結合を除去することが概して望ましく、Ｆｃドメインのうちの１つは、１つ以上のＦｃγ受容体除去バリアントを含む。これらの除去バリアントは図１４に示され、それぞれは、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択される除去バリアントを用いる好ましい態様で、独立して、かつ任意選択的に含まれるか除外することができる。本明細書で言及される除去バリアントは、ＦｃγＲ結合を除去するが、一般的にはＦｃＲｎ結合を除去しないことに留意されたい。
同様に、機能的バリアントの別のカテゴリーは「ＦｃγＲ除去バリアント」又は「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯ又はＫＯ）」バリアントである。これらの実施形態では、いくつかの治療用途のために、追加の作用機序を回避するために、１つ以上又は全てのＦｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなど）へのＦｃドメインの正常な結合を低減又は除去することが望ましい。すなわち、例えば、多くの実施形態では、特にＣＤ３に一価的に結合する二重特異性抗体の使用において、ＡＤＣＣ活性を排除又は顕著に低下させるためにＦｃγＲＩＩＩａ結合を除去することが概して望ましく、Ｆｃドメインのうちの１つは、１つ以上のＦｃγ受容体除去バリアントを含む。これらの除去バリアントは図１４に示され、それぞれは、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌからなる群から選択される除去バリアントを用いる好ましい態様で、独立して、かつ任意選択的に含まれるか除外することができる。本明細書で言及される除去バリアントは、ＦｃγＲ結合を除去するが、一般的にはＦｃＲｎ結合を除去しないことに留意されたい。
当技術分野で知られているように、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインはＦｃγ受容体への結合が最も高く、したがってヘテロ二量体抗体の骨格の定常ドメイン（又はＦｃドメイン）がＩｇＧ１である場合、除去バリアントを使用できる。代替的に、又はＩｇＧ１バックグラウンドの除去バリアントに加えて、グリコシル化位置２９７での（一般にＡ又はＳへの）変異は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を有意に除去することができる。ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４は、Ｆｃγ受容体への結合が自然に低下しているため、これらの骨格は、除去バリアントの有無にかかわらず使用できる。
Ｅ．ヘテロ二量体とＦｃバリアントとの組み合わせ
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化バリアント（スキューバリアント及び／又はｐＩバリアントを含む）は全て、それらの「撚り度」又は「単量体分割」を保持する限り、任意選択的に、かつ独立して組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、図４に示されるように、ヘテロ二量体化スキューバリアント、等配電子ｐＩ置換、及びＦｃＫＯバリアントの組み合わせを含む。更に、これらのバリアントの全ては、ヘテロ二量体化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。
当業者には理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化バリアント（スキューバリアント及び／又はｐＩバリアントを含む）は全て、それらの「撚り度」又は「単量体分割」を保持する限り、任意選択的に、かつ独立して組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるヘテロ二量体抗体は、図４に示されるように、ヘテロ二量体化スキューバリアント、等配電子ｐＩ置換、及びＦｃＫＯバリアントの組み合わせを含む。更に、これらのバリアントの全ては、ヘテロ二量体化フォーマットのいずれにも組み合わせることができる。
ｐＩバリアントの場合、特定の用途が見出される実施形態が図に示されている一方、精製を促進するために２つの単量体間のｐＩの差異を変えるという基本的な規則に従って、他の組み合わせを生成できる。
加えて、ヘテロ二量体化バリアント、スキュー、及びｐＩのいずれも、本明細書で一般的に概説されるように、Ｆｃ除去バリアント、Ｆｃバリアント、ＦｃＲｎバリアントと、独立して、かつ任意選択的に組み合わせることができる。
ヘテロ二量体１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ及び２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体のいくつかの実施形態に含まれるバリアントの例示的な組み合わせが図４に含まれている。ある特定の実施形態では、抗体は、図１５Ａ及び１５Ｂに示されるように、ヘテロ二量体１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ又は２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体である。
Ｆ．抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３二重特異性抗体
別の態様では、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３（本明細書では「αＧＰＣ３×αＣＤ３」とも称され、単に「ＧＰＣ３×ＣＤ３」と称されることもある）二重特異性抗体が本明細書で提供される。そのような抗体は、少なくとも１つのＧＰＣ３結合ドメインと少なくとも１つのＣＤ３結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性αＧＰＣ３×αＣＤ３は、本明細書において、ＧＰＣ３を発現する腫瘍部位において選択的に免疫応答を提供した。
別の態様では、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３（本明細書では「αＧＰＣ３×αＣＤ３」とも称され、単に「ＧＰＣ３×ＣＤ３」と称されることもある）二重特異性抗体が本明細書で提供される。そのような抗体は、少なくとも１つのＧＰＣ３結合ドメインと少なくとも１つのＣＤ３結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性αＧＰＣ３×αＣＤ３は、本明細書において、ＧＰＣ３を発現する腫瘍部位において選択的に免疫応答を提供した。
本明細書で特定されない限り、名称における抗原リストの順序は構造を与えないことに留意されたい。すなわち、ＧＰＣ３×ＣＤ３ １＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体は、ｓｃＦｖをＧＰＣ３又はＣＤ３に結合させることができるが、場合によっては、順序は示されるように構造を指定する。
本明細書でより詳細に概説されるように、ＡＢＤのこれらの組み合わせは、以下に概説されるように、一般に一方のＡＢＤがＦａｂ形式であり、他方がｓｃＦｖ形式である組み合わせで、様々な形式であり得る。本明細書で提供される二重特異性抗体で使用される例示的なフォーマットには、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ及び２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｖフォーマットが挙げられる（例えば、図１５Ａ及び１５Ｂを参照されたい）。他の有用な抗体フォーマットには、図４４に示され、以下により完全に記載されるように、「ｍＡｂ－Ｆｖ」、「ｍＡｂ－ｓｃＦｖ」、「セントラルＦｖ」、「ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「ｓｃＦｖ－ｍＡｂ」、「デュアルｓｃＦｖ」、及び「トライデント」フォーマットの抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
更に、概して、ＡＢＤのうちの１つは、ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ又はＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨのＮ末端からＣ末端に向かう方向で、本明細書に概説されるようなｓｃＦｖを含む。フォーマットによれば、他のＡＢＤの一方又は両方は、概して、一方のタンパク質鎖上にＶＨドメインを（概して重鎖の構成要素として）及びもう別のタンパク質鎖上にＶＬ（概して軽鎖の構成要素として）を含むＦａｂである。
当業者には理解されるように、６個のＣＤＲ又はＶＨ及びＶＬドメインの任意のセットはｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットにすることができ、次いでこれを重鎖定常ドメイン及び軽鎖定常ドメインに付加し、重鎖定常ドメインは変異（ＣＨ１ドメイン及びＦｃドメイン内を含む）を含む。配列表に含まれるｓｃＦｖ配列は特定の荷電リンカーを利用するが、本明細書に概説されるように、図５及び図６に示されるものを含めて、非荷電又は他の荷電リンカーを使用できる。
加えて、上記のように、ＣＤＲの同定のために配列表において使用される番号付けはＫａｂａｔであるが、異なる番号付けを使用することができ、表２に示されるようにＣＤＲのアミノ酸配列を変化させるであろう。
本明細書に記載されている全ての可変重鎖及び軽鎖ドメインについて、更なるバリアントを作製することができる。本明細書で概説されるように、いくつかの実施形態では、６個のＣＤＲのセットは、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸修飾（特定の用途が見出されるアミノ酸置換による）を有し、並びに、可変重鎖及び軽鎖ドメインのフレームワーク領域であって、このフレームワーク（ＣＤＲを除く）が、米国特許第７，６５７，３８０号（その図及び説明文は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の図１に列挙されているものから選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも約８０、８５、又は９０％の同一性を保持している限りにおいてそのフレームワーク領域の変化を、有することができる。したがって、例えば、フレームワーク領域が米国特許第７，６５７，３８０号の図１に列挙されたものから選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも８０、８５、又は９０％の同一性を保持している限り、本明細書に記載の同一のＣＤＲをヒト生殖系列配列由来の異なるフレームワーク配列と組み合わせることができる。代替的に、ＣＤＲは、アミノ酸修飾を有してよく（例えば、ＣＤＲのセット中に、１、２、３、４又は５個のアミノ酸修飾を有し（すなわち、ＣＤＲは、６個のＣＤＲのセット中の総変化数が、６アミノ酸修飾未満である限り、修飾されてもよく、ＣＤＲの任意の組み合わせが変更され、例えば、ｖｌＣＤＲ１中に１つの変更が存在してよい、ｖｈＣＤＲ２中に２つの変更が存在してよい、ｖｈＣＤＲ３中に変更が存在しなくてよいなど））、並びに、フレームワーク領域が米国特許第７，６５７，３８０号の図１に列挙されるものから選択されるヒト生殖系列配列と少なくとも８０、８５、又は９０％の同一性を保持する限り、フレームワーク領域の変化を有してよい。
本明細書で論じられるように、対象のヘテロ二量体抗体は、それぞれがＧＰＣ３又はＣＤ３に結合する２つの抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む。本明細書で概説するように、これらのヘテロ二量体抗体は、二重特異性及び二価（各抗原は、例えば、図１５Ａに示される形式で単一のＡＢＤによって結合される）、又は二重特異性及び三価（例えば、図１５Ｂに示すように、１つの抗原は単一のＡＢＤによって結合され、他は２つのＡＢＤによって結合される）であり得る。
更に、概して、ＡＢＤのうちの１つは、ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ又はＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨのＮ末端からＣ末端に向かう方向で、本明細書に概説されるようなｓｃＦｖを含む。フォーマットによれば、他のＡＢＤの一方又は両方は、概して、一方のタンパク質鎖上にＶＨドメインを（概して重鎖の構成要素として）及びもう別のタンパク質鎖上にＶＬ（概して軽鎖の構成要素として）を含むＦａｂである。
本開示は、以下に概説されるようにいくつかのＡＢＤを提供する。当業者には理解されるように、６個のＣＤＲの任意のセット又はＶＨドメイン及びＶＬドメインはｓｃＦｖフォーマット又はＦａｂフォーマットにすることができ、次いでこれを重鎖定常ドメイン及び軽鎖定常ドメインに付加し、重鎖定常ドメインはバリアント（ＣＨ１ドメイン及びＦｃドメイン内を含む）を含む。配列表に含まれるｓｃＦｖ配列は特定の荷電リンカーを利用するが、本明細書に概説するように、図５に示されるものを含めて、非荷電又は他の荷電リンカーを使用できる。
加えて、上記のように、ＣＤＲの同定のために配列表において使用される番号付けはＫａｂａｔであるが、異なる番号付けを使用することができ、表２に示されるようにＣＤＲのアミノ酸配列を変化させるであろう。
本明細書に記載されている全ての可変重鎖及び軽鎖ドメインについて、更なるバリアントを作製することができる。本明細書で概説されるように、いくつかの実施形態では、６個のＣＤＲのセットは、０、１、２、３、４又は５個のアミノ酸修飾（特定の用途が見出されるアミノ酸置換による）を有し、並びに、可変重鎖及び軽鎖ドメインのフレームワーク領域であって、このフレームワーク（ＣＤＲを除く）が、米国特許第７，６５７，３８０号（その図及び説明文は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の図１に列挙されているものから選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも約８０、８５、又は９０％の同一性を保持している限りにおいてそのフレームワーク領域の変化を、有することができる。したがって、例えば、フレームワーク領域が米国特許第７，６５７，３８０号の図１に列挙されたものから選択されたヒト生殖系列配列と少なくとも８０、８５、又は９０％の同一性を保持している限り、本明細書に記載の同一のＣＤＲをヒト生殖系列配列由来の異なるフレームワーク配列と組み合わせることができる。代替的に、ＣＤＲは、アミノ酸修飾を有してよく（例えば、ＣＤＲのセット中に、１、２、３、４又は５個のアミノ酸修飾（すなわち、ＣＤＲは、６個のＣＤＲのセット中の総変化数が、６アミノ酸修飾未満である限り、修飾されてもよく、ＣＤＲの任意の組み合わせが変更され、例えば、ＶＬＣＤＲ１中に１つの変更、ＶＨＣＤＲ２中に２つの変更、ＶＨＣＤＲ３中に変更なし、など））、並びに、フレームワーク領域が米国特許第７，６５７，３８０号の図１に列挙されるものから選択されるヒト生殖系列配列と少なくとも８０、８５、又は９０％の同一性を保持する限り、フレームワーク領域の変化を有してよい。
１．ＧＰＣ３抗原連結ドメイン
本明細書では、ヒトＧＰＣ３に結合する抗原結合ドメインを含むモノクローナル抗体及び二重特異性抗体が提供される。６個のＣＤＲ並びに／又はＶＨ及びＶＬドメインの好適なセットが、図１２及び図１３に示されている。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ又は２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｖフォーマットの抗体であるが、以下に概説される任意のフォーマットを用いることができる。
本明細書では、ヒトＧＰＣ３に結合する抗原結合ドメインを含むモノクローナル抗体及び二重特異性抗体が提供される。６個のＣＤＲ並びに／又はＶＨ及びＶＬドメインの好適なセットが、図１２及び図１３に示されている。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体抗体は、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ又は２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｖフォーマットの抗体であるが、以下に概説される任意のフォーマットを用いることができる。
いくつかの実施形態では、抗ＧＰＣ３ ＡＢＤは、Ｈ１、Ｈ１、Ｈ１．１、Ｈ１．２、Ｈ１．３、及びＨ１．４からなる群から選択されるＶＨ由来のｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３配列から選択されるｖｈＣＤＲのセットを有し、これらの配列は図１２及び図１３に示されている。
いくつかの実施形態では、抗ＧＰＣ３ ＡＢＤのＶＨドメインは、Ｈ１、Ｈ１、Ｈ１．１、Ｈ１．２、Ｈ１．３及びＨ１．４からなる群から選択され、これらの配列は図１２及び図１３に示されている。
いくつかの実施形態では、抗ＧＰＣ３ ＡＢＤは、Ｌ１、Ｌ１．１、Ｌ１．２、Ｌ１．３、Ｌ１．４、Ｌ１．５、Ｌ１．６、Ｌ１．７、Ｌ１．８、Ｌ１．９、Ｌ１．１０、Ｌ１．１６、Ｌ１．２３、Ｌ１．２９、Ｌ１．３１．Ｌ１．６５、Ｌ１．６６、Ｌ１．６８、Ｌ１．６９、Ｌ１．７０、Ｌ１．７１、Ｌ１．７２及びＬ１．７３からなる群から選択されるＶＬ由来のｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖｌＣＤＲ３配列から選択されるｖｌＣＤＲのセットを有し、これらの配列は図１２及び図１３に示されている。
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤのＶＬは、Ｌ１、Ｌ１．１、Ｌ１．２、Ｌ１．３、Ｌ１．４、Ｌ１．５、Ｌ１．６、Ｌ１．７、Ｌ１．８、Ｌ１．９、Ｌ１．１０、Ｌ１．１６、Ｌ１．２３、Ｌ１．２９、Ｌ１．３１．Ｌ１．６５、Ｌ１．６６、Ｌ１．６８、Ｌ１．６９、Ｌ１．７０、Ｌ１．７１、Ｌ１．７２及びＬ１．７３からなる群から選択され、これらの配列は図１２及び図１３に示されている。
したがって、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを有するＧＰＣ３ ＡＢＤが本明細書に含まれる。
更に、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を有するＧＰＣ３ ＡＢＤが本明細書に含まれる。
特定の実施形態では、ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される。
特定の実施形態では、ＶＨ／ＶＬ対はＦａｂであり、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される。
当業者には理解されるように、好適なＧＰＣ３結合ドメインは、下線が付されているものとしてか、又は、本明細書に記載され、表２に示されるように異なる番号付けスキームが使用される場合、図１２及び図１３に示されるもののＶＨ及びＶＬの配列内の他のアラインメントを使用して同定されるＣＤＲとして、図に示されているような６個のＣＤＲのセットを含み得る。好適なＡＢＤはまた、ｓｃＦｖ又はＦａｂとして使用される、これらの配列及び図に示されるようなＶＨ及びＶＬの全体の配列をも含み得る。ＧＰＣ３に対するＦｖを含む本明細書中の実施形態の多くにおいて、ＧＰＣ３に連結するのはＦａｂ単量体である。
ＧＰＣ３に対するＡＢＤを形成する図及び配列表に開示される親ＣＤＲセットに加えて、本明細書に開示されるＧＰＣ３ ＡＢＤ ＣＤＲの少なくとも１つの修飾を含むＣＤＲを有するバリアントＧＰＣ３ ＡＢＤが本明細書で提供される（例えば、図１２及び図１３、並びに配列表）。一実施形態では、対象のヘテロ二量体抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、図及び配列表など本明細書に記載のＧＰＣ３結合ドメインのＶＨ／ＶＬ対の６個のＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸修飾を有する６個のＣＤＲのセットを含む。例示的な実施形態では、対象のヘテロ二量体抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、以下のＧＰＣ３結合ドメイン、すなわち［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９のうちの１つの６個のＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸修飾を有する６個のＣＤＲのセットを含む。ある特定の実施形態では、対象抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイ、及び／又はフローサイトメトリーの少なくとも１つによって測定される場合、ＧＰＣ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤは、ヒトＧＰＣ３に結合することができる（図１１を参照されたい）。いくつかの場合において、各バリアントＣＤＲは、１又は２個以下のアミノ酸変化を有し、ＣＤＲあたり１個以下が特に有用である。
いくつかの実施形態では、対象抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＧＰＣ３ ＡＢＤの６個のＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一である６個のＣＤＲを含む。例示的な実施形態では、対象抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、以下のＧＰＣ３結合ドメインのＶＨ／ＶＬ対、すなわち［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９のうちの１つの６個のＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一である６個のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、対象抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイ、及び／又はフローサイトメトリーの少なくとも１つによって測定される場合、ＧＰＣ３に結合することができる。特定の実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤは、ヒトＧＰＣ３抗原に結合することができる（図１１を参照されたい）。
別の例示的な実施形態では、対象抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、図及び配列表（例えば、図１２及び図１３）を含む、本明細書に記載のＧＰＣ３ ＡＢＤ結合ドメインのＶＨ／ＶＬ対のうちのいずれか１つの可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、対象抗体は、本明細書に開示されているＧＰＣ３ ＡＢＤのＶＨドメイン及びＶＬドメインのバリアントである可変重鎖ドメイン及び／又は可変軽鎖ドメインを含むＧＰＣ３ ＡＢＤを含む。一実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＧＰＣ３ ＡＢＤのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸変化を有する。例示的な実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、以下のＧＰＣ３結合ドメインのＶＨ／ＶＬ対、すなわち［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９のうちの１つからのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸変化を有する。いくつかの実施形態では、変化は、図１２及び図１３に示されるＶＨドメインにおけるものである。いくつかの実施形態では、変化は、図１２及び図１３に示されるＶＬドメインにおけるものである。いくつかの実施形態では、変化は、図１２及び図１３に示されるＶＨドメイン及びＶＬドメインにおけるものである。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸変化は、ＶＨフレームワーク領域及び／又はＶＬフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び／又はＦＲ４）中にある。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸変化は、１つ以上のＣＤＲ中にある。ある特定の実施形態では、対象抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイ、及び／又はフローサイメトリーの少なくとも１つによって測定される場合、ＧＰＣ３に結合することができる。特定の実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤは、ヒトＧＰＣ３抗原に結合することができる（図１１を参照されたい）。
一実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＧＰＣ３ ＡＢＤのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。例示的な実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、以下のＧＰＣ３結合ドメインのＶＨ／ＶＬ対、すなわちＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９のうちの１つのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一である。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤは、図１２及び図１３に示されるＶＨドメインと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一であるＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤは、図１２及び図１３に示されるＶＬドメインと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一であるＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤは、図１２及び図１３に示されるＶＨドメイン及びＶＬドメインと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。ある特定の実施形態では、対象抗体のＧＰＣ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイ、及び／又はフローサイメトリーの少なくとも１つによって測定される場合、ＧＰＣ３に結合することができる。特定の実施形態では、ＧＰＣ３ ＡＢＤは、ヒトＧＰＣ３抗原に結合することができる（図１１を参照されたい）。
２．ＣＤ３抗原連結ドメイン
本発明のヘテロ二量体二重特異性（例えば、抗ＧＰＣ ３×抗ＣＤ３抗体）はまた、ヒトイプシロンＣＤ３（ＣＤ３ε）に結合するＡＢＤを含む。
本発明のヘテロ二量体二重特異性（例えば、抗ＧＰＣ ３×抗ＣＤ３抗体）はまた、ヒトイプシロンＣＤ３（ＣＤ３ε）に結合するＡＢＤを含む。
好適な６個のＣＤＲのセット並びに／又はＶＨドメイン及びＶＬドメイン、並びにｓｃＦｖ配列は、図１０に示されている。特定の用途のものであるＣＤ３結合ドメイン配列としては、図１０に示されるように、抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１が挙げられるが、これらに限定されない。図１０に示されるように、抗ＣＤ３ ＡＢＤがｓｃＦｖドメインである場合、ＶＨ及びＶＬドメインはいずれの方向であってよい。
当業者には理解されるように、好適なＣＤ３結合ドメインは、下線が付されているものとしてか、又は、本明細書に記載され、表２に示されるような、異なる番号付けスキームが使用される場合、図１０Ａ～図１０Ｆで示されるもののＶＨ配列及びＶＬの配列内の他のアラインメントを使用して同定されるＣＤＲとして、図１０に示される６個のＣＤＲのセットを含み得る。好適なＡＢＤはまた、ｓｃＦｖ又はＦａｂとして使用される、これらの配列及び図に示されるようなＶＨ及びＶＬの全体の配列をも含み得る。ＣＤ３に対するＦｖを含む本明細書中の実施形態の多くにおいて、ＣＤ３に連結するのはｓｃＦｖ単量体である。
ＣＤ３に対するＡＢＤを形成する図及び配列表に開示される親ＣＤＲセットに加えて、本明細書に開示されるＣＤ３ ＡＢＤ ＣＤＲの少なくとも１つの修飾を含むＣＤＲを有するバリアントのＣＤ３ ＡＢＤが本明細書に提供される（例えば、（図１０及び配列表）。一実施形態では、対象のヘテロ二量体抗体のＣＤ３ ＡＢＤ（例えば、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３抗体）は、図及び配列表など本明細書に記載のＣＤ３ ＡＢＤの６個のＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸修飾を有する６個のＣＤＲのセットを含む。例示的な実施形態では、対象のヘテロ二量体抗体のＣＤ３ ＡＢＤは、以下のＣＤ３結合ドメイン、すなわち抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１（図１０）のうちの１つの６個のＣＤＲと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸改変を有する６個のＣＤＲのセットを含む。ある特定の実施形態では、対象抗体のＣＤ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー、及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ３抗原に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ３ＡＢＤは、ヒトＣＤ３に結合することができる。
いくつかの実施形態では、対象抗体のＣＤ３ ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＣＤ３ ＡＢＤの６個のＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一である６個のＣＤＲを含む。例示的な実施形態では、対象抗体のＣＤ３ ＡＢＤは、以下のＣＤ３結合ドメイン、すなわち抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１（図１０）のうちの１つの６個のＣＤＲと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一である６個のＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー、及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、ヒトＣＤ３抗原に結合することができる。
別の例示的な実施形態では、対象抗体のＣＤ３ ＡＢＤは、図及び配列表を含む、本明細書に記載のＣＤ３結合ドメインのいずれか１つの可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、対象抗体は、本明細書に開示されているＣＤ３ ＡＢＤのＶＨドメイン及びＶＬドメインのバリアントである可変重鎖ドメイン及び／又は可変軽鎖ドメインを含むＣＤ３ ＡＢＤを含む。一実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＣＤ３ ＡＢＤのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸変化を有する。例示的な実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、以下のＣＤ３結合ドメイン、すなわち抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１（図１０）のうちの１つのＶＨ及び／又はＶＬドメインからの１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸変化を有する。いくつかの実施形態では、変化は図１０に示されるＶＨドメインにおけるものである。いくつかの実施形態では、変化は図１０に示されるＶＬドメインにおけるものである。いくつかの実施形態において、変化は、図１０に示されるＶＨドメイン及びＶＬドメインにおけるものである。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸変化は、ＶＨフレームワーク領域及び／又はＶＬフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び／又はＦＲ４）中にある。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸変化は、１つ以上のＣＤＲ中にある。ある特定の実施形態では、対象抗体のＣＤ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー、及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合ＣＤ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、ヒトＣＤ３抗原に結合することができる。
一実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、図及び配列表を含む、本明細書に記載されるＣＤ３ ＡＢＤのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。例示的な実施形態では、バリアントのＶＨドメイン及び／又はＶＬドメインは、以下のＣＤ３結合ドメイン、すなわち抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１（図１０）のうちの１つのＶＨ及び／又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、図１０に示されるＶＨドメインと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一であるＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、図１０に示されるＶＬドメインと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一であるＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、図１０に示されるＶＨドメイン及びＶＬドメインと少なくとも９０、９５、９７、９８、又は９９％同一であるＶＨ及びＶＬを含む。ある特定の実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー、及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えば、オクテットアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される場合、ＣＤ３に結合することができ、後者は多くの実施形態で特定の用途を見出す。特定の実施形態では、ＣＤ３ ＡＢＤは、ヒトＣＤ３抗原に結合することができる。
図１０のαＣＤ３ ＡＢＤに加えて、本発明において有用な追加のＡＢＤとしては、国際公開第２０１４／１４５８０６号の図１４及び図１５に示されているものが挙げられ、その図及び説明文を含むその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。
３．リンカー
本明細書に示されるように、好適なリンカー（ドメインリンカー又はｓｃＦｖリンカーのいずれかとして使用）にはいくつかあり、列挙されたドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆｃドメインなど）に共有結合（組換え技術により生成される従来型ペプチド結合を含む）するために使用することができる。対象の抗体のドメインを互いに取り付けるための例示的なリンカーを図６に示す。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、主に、以下のアミノ酸残基、すなわちＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＴｈｒを含み得る。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座をとるような方法で２つの分子を結合させるのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカーは、約１～５０アミノ酸長、好ましくは約１～３０アミノ酸長である。一実施形態では、１～２０アミノ酸長のリンカーが使用され得、いくつかの実施形態では、約５～約１０アミノ酸が用途を見出されている。有用なリンカーには、例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号：３）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号：２）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号：４）（ｎは少なくとも１（及び一般に３～４）の整数である）を含むグリシン－セリンポリマー、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、並びに他の可動性リンカーが含まれ、それらの一部が、図５及び図６に示されている。代替的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして用途を見出され得る。
本明細書に示されるように、好適なリンカー（ドメインリンカー又はｓｃＦｖリンカーのいずれかとして使用）にはいくつかあり、列挙されたドメイン（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆｃドメインなど）に共有結合（組換え技術により生成される従来型ペプチド結合を含む）するために使用することができる。対象の抗体のドメインを互いに取り付けるための例示的なリンカーを図６に示す。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、主に、以下のアミノ酸残基、すなわちＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、又はＴｈｒを含み得る。リンカーペプチドは、それらが所望の活性を保持するように互いに対して正しい立体配座をとるような方法で２つの分子を結合させるのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカーは、約１～５０アミノ酸長、好ましくは約１～３０アミノ酸長である。一実施形態では、１～２０アミノ酸長のリンカーが使用され得、いくつかの実施形態では、約５～約１０アミノ酸が用途を見出されている。有用なリンカーには、例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号：３）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号：２）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号：４）（ｎは少なくとも１（及び一般に３～４）の整数である）を含むグリシン－セリンポリマー、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、並びに他の可動性リンカーが含まれ、それらの一部が、図５及び図６に示されている。代替的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含むがこれらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーが、リンカーとして用途を見出され得る。
他のリンカー配列は、任意の長さのＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の配列を含むが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの全ての残基を含まない場合があり、例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５～１２アミノ酸残基である。リンカーは、免疫グロブリン軽鎖、例えば、ＣＫ又はＣλに由来し得る。リンカーは、任意のアイソタイプの免疫グロブリン重鎖に由来し得、例えば、γ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃａ１、Ｃａ２、Ｃδ、Ｃε、及びＣμが挙げられる。リンカー配列はまた、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、ヒンジ領域由来配列、及び他のタンパク質由来の他の天然配列などの他のタンパク質に由来してもよい。
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説される任意の２つのドメインを共に連結するために使用される「ドメインリンカー」である。例えば、図１５Ｂにおいて、ＦａｂのＣＨ１ドメインのＣ末端をｓｃＦｖのＮ末端に結合するドメインリンカーがあってよく、別の任意のドメインリンカーはｓｃＦｖのＣ末端をＣＨ２ドメインに結合している（ただし、多くの実施形態では、このドメインリンカーとしてヒンジが使用される）。任意の好適なリンカーを使用することができるが、多くの実施形態は、例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号：３）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号：２）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号：４）（ｎは、少なくとも１（一般に３～４～５）の整数である）、を含むドメインリンカーとしてグリシン－セリンポリマー、並びに各ドメインがその生物学的機能を保持できるように十分な長さ及び柔軟性を有する２つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用する。場合によっては、以下に概説される「撚り度」に注意を払って、ｓｃＦｖリンカーのいくつかの実施形態において使用されるように、荷電ドメインリンカーを使用することができる。例示的な有用なドメインリンカーが、図６に示されている。
ｓｃＦｖドメインを「２＋１」フォーマットでＦｃドメインに接続するために使用されるドメインリンカーを特に参照すると、図６に示されるように、「フルヒンジＣ２２０Ｓバリアント」、「フレックスハーフヒンジ」、「荷電ハーフヒンジ１」、「荷電ハーフヒンジ２」を含む、特定の用途を見出すいくつかのドメインリンカーがある。
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書で考察されるＶＨ及びＶＬドメインを共有結合するために使用される「ｓｃＦｖリンカー」である。多くの場合では、ｓｃＦｖリンカーは、荷電ｓｃＦｖリンカーであり、そのいくつかは図５に示されている。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は更に、第１の単量体と第２の単量体との間のｐＩの分離を促進するための荷電ｓｃＦｖリンカーを提供する。すなわち、正又は負のいずれかの荷電ｓｃＦｖリンカー（又は異なる単量体上にｓｃＦｖを使用する足場の場合は両方）を組み込むことによって、これは、Ｆｃドメインを更に変化させることなく、荷電リンカーを含む単量体のｐＩを変えることを可能にする。これらの荷電リンカーは、標準的なリンカーを含む任意のｓｃＦｖ中に置換することができる。また、当業者には理解されるように、ｐＩの所望の変化に従って、荷電ｓｃＦｖリンカーが正しい「鎖」又は単量体上に使用される。例えば、本明細書中で論じられるように、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットヘテロ二量体抗体を作製するために、所望の抗原連結ドメインのそれぞれについてのＦｖ領域の元のｐＩが計算され、そしてｓｃＦｖを作製するために１つが選択され、ｐＩに応じて、正又は負のリンカーのいずれかが選択される。
荷電ドメインリンカーも同様に、本明細書に記載の抗体の単量体のｐＩ分離を増加させるために使用することができ、したがって、図５に含まれるものは、リンカーが利用される、本明細書の任意の実施形態で使用することができる。
Ｇ．本発明の有用なフォーマット
当業者には理解され、以下でより詳細に説明されるように、本明細書に提供される二重特異性ヘテロ二量体抗体は、概して図１５並びに図４４に示されるように、多種多様な構成をとることができる。いくつかの図は、「シングルエンド型」立体配置を示し、分子の一方の「アーム」には１つのタイプの特異性があり、他方の「アーム」には異なる特異性がある。他の図は、「デュアルエンド型」立体配置を示し、分子の「上部」に少なくとも１つのタイプの特異性があり、分子の「底部」に１つ以上の異なる特異性がある。したがって、いくつかの実施形態では、異なる第１及び第２の抗原と同時連結する新規な免疫グロブリン組成物を対象とする。
当業者には理解され、以下でより詳細に説明されるように、本明細書に提供される二重特異性ヘテロ二量体抗体は、概して図１５並びに図４４に示されるように、多種多様な構成をとることができる。いくつかの図は、「シングルエンド型」立体配置を示し、分子の一方の「アーム」には１つのタイプの特異性があり、他方の「アーム」には異なる特異性がある。他の図は、「デュアルエンド型」立体配置を示し、分子の「上部」に少なくとも１つのタイプの特異性があり、分子の「底部」に１つ以上の異なる特異性がある。したがって、いくつかの実施形態では、異なる第１及び第２の抗原と同時連結する新規な免疫グロブリン組成物を対象とする。
当業者には理解されるように、本発明のヘテロ二量体フォーマットは、異なる価数を有し得ると共に、二重特異性であり得る。すなわち、本明細書に記載の抗体のヘテロ二量体抗体は、二価及び二重特異性であり得、一方の標的腫瘍抗原（例えば、ＣＤ３）は１つの結合ドメインによって結合され、他方の標的腫瘍抗原（例えば、ＧＰＣ３）は第２の結合ドメインによって結合される。ヘテロ二量体抗体はまた、三価及び二重特異性であり得、第１の抗原は２つの結合ドメインによって結合され、第２の抗原は第２の結合ドメインによって結合される。本明細書に概説されるように、ＣＤ３が標的抗原の１つである場合、潜在的な副作用を低減するために、ＣＤ３は一価的のみに結合することが好ましい。
本明細書に記載の抗体は、抗ＣＤ３抗原結合ドメインを抗ＧＰＣ３結合ドメインと組み合わせて利用する。当業者によって理解されるように、図のいずれかに示されるような抗ＣＤ３ ＣＤＲ、抗ＣＤ３可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン、Ｆａｂ及びｓｃＦｖの任意のコレクションを使用することができる。同様に、抗ＧＰＣ３抗原結合ドメインのいずれかを使用することができ、図のいずれかに示されるように、ＣＤＲ、可変軽鎖ドメイン及び可変重鎖ドメイン、Ｆａｂ並びにｓｃＦｖのいずれかを、任意選択的に、かつ独立して任意の組み合わせで組み合わせて使用することができる。
１．１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、図１５Ａに示されるような「１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」又は「ボトルオープナー」フォーマットであり、ＣＤ３結合ドメイン及び腫瘍標的抗原（ＧＰＣ３）結合ドメインの例示的な組み合わせを伴う。この実施形態では、抗体の１つの重鎖単量体は、単鎖Ｆｖ（以下に定義される「ｓｃＦｖ」）及びＦｃドメインを含む。ｓｃＦｖは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ１）及び可変軽鎖ドメイン（ＶＬ１）を含み、ＶＨ１は、家電可能なｓｃＦｖリンカーを使用してＶＬ１に結合されている（例えば、図５を参照されたい）。ｓｃＦｖは、ドメインリンカーを使用して重鎖に結合される（例えば、図６を参照されたい）。他の重鎖単量体は「通常の」重鎖（ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃは、ＶＨ－ＣＨ１と相互作用してＦａｂを形成する軽鎖も含む。この構造は、ボトルオープナーと視覚的に大まかに似ているため、本明細書では「ボトルオープナー」（フォーマットと称されることがある。２つの重鎖単量体は、以下により詳細に記載されるように、ヘテロ二量体抗体の形成を促進する定常領域（例えば、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン及び／又はヒンジ領域）におけるアミノ酸バリアント（例えば、上述したヘテロ二量体化バリアント）の使用により一緒にされる。
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、図１５Ａに示されるような「１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」又は「ボトルオープナー」フォーマットであり、ＣＤ３結合ドメイン及び腫瘍標的抗原（ＧＰＣ３）結合ドメインの例示的な組み合わせを伴う。この実施形態では、抗体の１つの重鎖単量体は、単鎖Ｆｖ（以下に定義される「ｓｃＦｖ」）及びＦｃドメインを含む。ｓｃＦｖは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ１）及び可変軽鎖ドメイン（ＶＬ１）を含み、ＶＨ１は、家電可能なｓｃＦｖリンカーを使用してＶＬ１に結合されている（例えば、図５を参照されたい）。ｓｃＦｖは、ドメインリンカーを使用して重鎖に結合される（例えば、図６を参照されたい）。他の重鎖単量体は「通常の」重鎖（ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃは、ＶＨ－ＣＨ１と相互作用してＦａｂを形成する軽鎖も含む。この構造は、ボトルオープナーと視覚的に大まかに似ているため、本明細書では「ボトルオープナー」（フォーマットと称されることがある。２つの重鎖単量体は、以下により詳細に記載されるように、ヘテロ二量体抗体の形成を促進する定常領域（例えば、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン及び／又はヒンジ領域）におけるアミノ酸バリアント（例えば、上述したヘテロ二量体化バリアント）の使用により一緒にされる。
現在の「１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマットにはいくつかの明確な利点が存在する。当該技術分野で知られているように、２つのｓｃＦｖ構築物に依存する抗体類似体はしばしば安定性及び凝集の問題を有し、それは本明細書に記載の抗体において「通常の」重鎖及び軽鎖の対形成の付加により軽減できる。加えて、２つの重鎖及び２つの軽鎖に依存するフォーマットとは対照的に、重鎖と軽鎖との誤った対合（例えば、重鎖１と軽鎖２との対合など）の問題はない。
本明細書に概説した実施形態の多くは、一般に、ｓｃＦｖリンカー（多くは荷電されているが、全ての場合ではない）を用いて共有連結した可変重鎖及び可変軽鎖のドメインを含む、ｓｃＦｖを含む第１の単量体を含む１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ又は「ボトルオープナー」フォーマット抗体に依存しており、ｓｃＦｖは、第１のＦｃドメインに通常ドメインリンカーを介して共有結合している。ドメインリンカーは、荷電又は非荷電であってもよく、外来性又は内在性であってもよい（例えば、天然のヒンジドメインの全て又は部分）。任意の好適なリンカーを使用して、ｓｃＦｖを第１のＦｃドメインのＮ末端に取り付けることができる。いくつかの実施形態では、ドメインリンカーは、図６のドメインリンカーから選択される。１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ又は「ボトルオープナー」フォーマットの第２の単量体は重鎖であり、組成物は軽鎖を更に含む。
一般に、多くの好ましい実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ３に結合するドメインであり、Ｆａｂは、ＧＰＣ３結合ドメインを形成する。１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの例示的な抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３二重特異性抗体を図１５Ａに示す。１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの例示的な抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３二重特異性抗体を、図１６及び図１７に示す。
加えて、本明細書に記載の抗体のＦｃドメインは、一般に、スキューバリアント（例えば、図１に示されるアミノ酸置換のセットであって、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択される）、任意選択的に除去バリアント（図３に示されるものを含む）、任意選択的に荷電ｓｃＦｖリンカー（図５にされるものを含む）を含み、重鎖はｐＩバリアント（図２に示されるものを含む）を含む。
特定の実施形態では、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ足場フォーマットは、ｓｃＦｖドメインリンカー－ＣＨ２－ＣＨ３単量体を含む第１の単量体、第１の可変重鎖ドメイン－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体、及び第１の可変軽鎖ドメインを含む第３の単量体を含む。いくつかの実施形態では、第１の単量体のＣＨ２－ＣＨ３は、第１のバリアントＦｃドメインであり、第２の単量体のＣＨ２－ＣＨ３は、第２のバリアントＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ３結合部分を形成するｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン及びｓｃＦｖ可変軽鎖ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖ可変重鎖ドメイン及びｓｃＦｖ可変軽鎖ドメインは、ｓｃＦｖリンカー（全てではないが多くの場合、荷電している）を使用して共有結合している。例えば、図５を参照されたい。いくつかの実施形態では、第１の可変重鎖ドメイン及び第１可変軽鎖ドメインは、ＧＰＣ３結合ドメインを形成する。
いくつかの実施形態では、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）荷電ｓｃＦｖリンカー（いくつかの実施形態では図５の＋Ｈ配列が好ましい）、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び本明細書に概説されるようにＣＤ３に結合するｓｃＦｖを含む、第１の単量体（「ｓｃＦｖ単量体」）、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び可変重鎖ドメインを含む、第２の単量体（「Ｆａｂ単量体」）、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン軽鎖ドメイン（ＶＬ）及び定常軽鎖ドメイン（ＣＬ）を含む軽鎖を含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、ＧＰＣ３結合部分を構成する。
任意の好適なＣＤ３ ＡＢＤは、本明細書に提供されるものを含む１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。これらの実施形態において特定の用途が見出されるＣＤ３結合ドメイン配列としては、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１又はそのバリアント、並びに国際公開第２０１４／１４５８０６号の図１０に示されるもの、並びに図１４及び図１５に示されるものが挙げられるが、これらに限定されず、これらは、説明文を含めて参照により本明細書に組み込まれる。
任意の好適なＧＰＣ３ ＡＢＤは、本明細書に提供されるものを含む１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。これらの実施形態において特に有用であるＧＰＣ３ ＡＢＤとしては、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３、又はそのバリアントからなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対から選択されるＶＨドメイン及びＶＬドメインが挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９、又はそのバリアントからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント及びＦｃＲｎバリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）荷電ｓｃＦｖリンカー（いくつかの実施形態では図５の＋Ｈ配列が好ましい）、スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び本明細書に概説されるようにＣＤ３に結合するｓｃＦｖを含む、第１の単量体（「ｓｃＦｖ単量体」）、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び可変重鎖ドメインを含む、第２の単量体（「Ｆａｂ単量体」）、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）及び定常軽鎖ドメイン（ＣＬ）を含む軽鎖を含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、ＧＰＣ３結合ドメインを構成する。これらの実施形態において特定の用途を見出すＣＤ３結合ドメイン配列としては、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１、又はそのバリアント、並びに図１０に示されるものが挙げられるが、これらに限定されない。これらの実施形態において特に有用であるＧＰＣ３結合ドメイン配列としては、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択されるαＧＰＣ３ ＡＢＤのＶＨ／ＶＬ対が挙げられるが、これらに限定されない。
１＋１フォーマットの抗体で使用するのに特に有用なＧＰＣ３配列及びＣＤ３配列の組み合わせは、例えば、図１６及び図１７に開示されている。
図７Ａ～７Ｄは、１ ＋ １Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体で有用ないくつかの例示的なＦｃドメイン配列を示している。図７Ａ～図７Ｄに示される「単量体１」配列は、通常、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指し、「単量体２」配列は、「ｓｃＦｖ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指す。更に、図９は、このフォーマットで使用され得る、有用なＣＬ配列を示している。
いくつかの実施形態では、本明細書に示されるＶＨ及びＶＬ配列のいずれか（図及び配列表に示される全てのＶＨ及びＶＬ配列を含み、ＧＰＣ３に向けられたものを含む）は、図７Ａ～７Ｄのボトルオープナー骨格フォーマットに、図及び配列表に示されている抗ＣＤ３ｓｃＦｖ配列のいずれかを使用して、「Ｆａｂ側」として付加することができる。
図７Ａからのボトルオープナー骨格１（任意選択的に４２８Ｌ／４３４Ｓバリアントを含む）の場合、これらの実施形態で特定の用途を見出すＣＤ結合ドメイン配列としては、図７に示される骨格のｓｃＦｖ側として結合した、ＣＤ３結合ドメイン抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７及び抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７が挙げられるが、これらに限定されない。
２．ｍＡｂ－Ｆｖ
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマット（図４４Ｇ）である。この実施形態では、フォーマットは、「追加の」可変重鎖ドメインの１つの単量体へのＣ末端結合と、「追加の」可変軽鎖ドメインのもう一方の単量体へのＣ末端結合の使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分は、ＧＰＣ３に結合し、「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマット（図４４Ｇ）である。この実施形態では、フォーマットは、「追加の」可変重鎖ドメインの１つの単量体へのＣ末端結合と、「追加の」可変軽鎖ドメインのもう一方の単量体へのＣ末端結合の使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分は、ＧＰＣ３に結合し、「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。
この実施形態では、第１の単量体は、第１の可変重鎖ドメイン及び第１のＦｃドメインを含む第１の定常重鎖ドメインを含む第１の重鎖を含み、ドメインリンカーを使用して第１のＦｃドメインのＣ末端に共有結合されている第１の可変軽鎖ドメインを有する（ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－［任意のリンカー］－ＶＬ２）。第２の単量体は、第２のＦｃドメインを含む第２の定常重鎖ドメインの第２の可変重鎖ドメインと、ドメインリンカーを使用して第２のＦｃドメインのＣ末端に共有結合されている第３の可変重鎖ドメインを含む（ｖｈ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－［任意選択的なリンカー］－ＶＨ２。２つのＣ末端に結合した可変ドメインは、ＣＤ３に結合するＦｖを構成する（２価のＣＤ３結合を有することはあまり好ましくないため）。この実施形態は更に、可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を利用し、これらは重鎖と会合してＧＰＣ３に連結する２つの同一のＦａｂを形成する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３結合ドメイン配列が図１０に示されているとおりであるか、又はそのバリアントである、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマットを提供する。本明細書に記載の抗体は、ＧＰＣ３結合ドメイン配列が図１２及び図１３に示されているとおりであるか、又はそのバリアントである、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマットを提供する。
加えて、ｍＡｂ－ＦｖフォーマットのＦｃドメインは、スキューバリアント（例えば、図１に示されるアミノ酸置換のセットであって、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択される）、任意選択的に除去バリアント（図３に示されるものを含む）、任意選択的に荷電ｓｃＦｖリンカー（図５にされるものを含む）を含み、重鎖はｐＩバリアント（図２に示されるものを含む）を含む。
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び軽鎖の第１の可変軽鎖ドメインと共に、ＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する第１の可変重鎖ドメイン、及び第２の可変重鎖ドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び第１の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する第１の可変重鎖ドメイン、及び第２の可変重鎖ドメインと共に、ＣＤ３に結合するＦｖ（ＡＢＤ）を形成する第２の可変軽鎖を含む、第２の単量体、並びにｃ）第１の可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、及びＦｃＲｎバリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、ｍＡｂ－Ｆｖフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び軽鎖の第１の可変軽鎖ドメインと共に、ＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する第１の可変重鎖ドメイン、及び第２の可変重鎖ドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び第１の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する第１の可変重鎖ドメイン、及び第１の単量体の第２の可変重鎖ドメインと共に、ＣＤ３に結合するＦｖ（ＡＢＤ）を形成する第２の可変軽鎖を含む、第２の単量体、並びにｃ）第１の可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を含む。
３．ｍＡｂ－ｓｃＦｖ
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｈ）である。この実施形態では、フォーマットは、単量体のうちの１つへのｓｃＦｖのＣ末端結合の使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し及び「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。したがって、第１の単量体は、第１の重鎖（可変重鎖ドメインと定常ドメインを含む）を含み、いずれかの向きでｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー、及びｓｃＦｖ可変重鎖ドメインを含む、Ｃ末端で共有結合されたｓｃＦｖを有する（ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－［任意選択的なリンカー］－ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２又はＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－［任意のリンカー］－ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２）。この実施形態は更に、可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を利用し、これらは重鎖と会合してＧＰＣ３に結合する２つの同一のＦａｂを形成する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｈ）である。この実施形態では、フォーマットは、単量体のうちの１つへのｓｃＦｖのＣ末端結合の使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し及び「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。したがって、第１の単量体は、第１の重鎖（可変重鎖ドメインと定常ドメインを含む）を含み、いずれかの向きでｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー、及びｓｃＦｖ可変重鎖ドメインを含む、Ｃ末端で共有結合されたｓｃＦｖを有する（ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－［任意選択的なリンカー］－ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２又はＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３－［任意のリンカー］－ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２）。この実施形態は更に、可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を利用し、これらは重鎖と会合してＧＰＣ３に結合する２つの同一のＦａｂを形成する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ結合ドメイン配列が図１０Ａ～図１０Ｆに示されるとおりであるか、又はそのバリアントであり、ＧＰＣ３結合ドメイン配列が図１２及び図１３に示されるとおりであるか、又はそのバリアントである、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットを提供する。
加えて、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットのＦｃドメインは、スキューバリアント（例えば、図１に示されるアミノ酸置換のセットであって、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択される）、任意選択的に除去バリアント（図３に示されるものを含む）、任意選択的に荷電ｓｃＦｖリンカー（図５にされるものを含む）を含み、重鎖はｐＩバリアント（図２に示されるものを含む）を含む。
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメインを含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、及びＦｃＲｎバリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖の可変軽鎖と共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、を含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。
４．２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ＣＤ３結合ドメインと２つの腫瘍標的抗原（ＧＰＣ３）結合ドメインとの例示的な組み合わせで図１５Ｂに示される「２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマット（以前の関連するファイリングでは「セントラル－ｓｃＦｖフォーマット」とも呼ばれる）である。この実施形態では、フォーマットは、挿入されたｓｃＦｖドメインの使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し、「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。ｓｃＦｖドメインは、単量体のうちの１つのＦｃドメインとＣＨ１－Ｆｖ領域の間に挿入され、これにより第３の抗原結合ドメインを提供する。説明したように、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを有するＧＰＣ３×ＣＤ３二重特異性抗体は、低レベルのＧＰＣ３を発現する細胞環境でリダイレクトされたＴ細胞傷害性を誘導するのに強力である。更に、例に示されているように、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを有するＧＰＣ３×ＣＤ３二重特異性抗体は、そのような抗体が、使用されるＧＰＣ３及び／又はＣＤ３結合ドメインに応じて多種多様な異なる特性を示すので、免疫応答の「微調整」を可能にする。例えば、そのような抗体は、異なるＧＰＣ３発現を有する細胞に対する選択性、ＧＰＣ３発現細胞に対する効力、サイトカイン放出を誘発する能力、及び可溶性ＧＰＣ３に対する感受性の違いを示す。これらのＧＰＣ３抗体は、例えば、ＧＰＣ３関連癌の治療に使用される。
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ＣＤ３結合ドメインと２つの腫瘍標的抗原（ＧＰＣ３）結合ドメインとの例示的な組み合わせで図１５Ｂに示される「２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」フォーマット（以前の関連するファイリングでは「セントラル－ｓｃＦｖフォーマット」とも呼ばれる）である。この実施形態では、フォーマットは、挿入されたｓｃＦｖドメインの使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し、「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。ｓｃＦｖドメインは、単量体のうちの１つのＦｃドメインとＣＨ１－Ｆｖ領域の間に挿入され、これにより第３の抗原結合ドメインを提供する。説明したように、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを有するＧＰＣ３×ＣＤ３二重特異性抗体は、低レベルのＧＰＣ３を発現する細胞環境でリダイレクトされたＴ細胞傷害性を誘導するのに強力である。更に、例に示されているように、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを有するＧＰＣ３×ＣＤ３二重特異性抗体は、そのような抗体が、使用されるＧＰＣ３及び／又はＣＤ３結合ドメインに応じて多種多様な異なる特性を示すので、免疫応答の「微調整」を可能にする。例えば、そのような抗体は、異なるＧＰＣ３発現を有する細胞に対する選択性、ＧＰＣ３発現細胞に対する効力、サイトカイン放出を誘発する能力、及び可溶性ＧＰＣ３に対する感受性の違いを示す。これらのＧＰＣ３抗体は、例えば、ＧＰＣ３関連癌の治療に使用される。
この実施形態では、１つの単量体は、第１の可変重鎖ドメイン、ＣＨ１ドメイン（及び任意選択的なヒンジ）及びＦｃドメインを含む第１重鎖を含み、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー及びｓｃＦｖ可変重鎖ドメインを含むｓｃＦｖを有する。ｓｃＦｖは、任意選択的なドメインリンカーを使用して、重鎖定常ドメインのＣＨ１ドメインのＣ末端と第１のＦｃドメインのＮ末端の間に共有結合している（ＶＨ１－ＣＨ１－［任意のリンカー］－ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２－［ヒンジを含む任意のリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３、又はｓｃＦｖに対して反対方向の、ＶＨ１－ＣＨ１－［任意のリンカー］－ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２－［ヒンジを含む任意のリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３）。任意のリンカーは、例えば、図６に含まれるドメインリンカーなど任意の好適なペプチドリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、任意のリンカーはヒンジ又はその断片である。他の単量体は、標準的なＦａｂ側（例えば、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。この実施形態は更に、可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を利用し、これらは重鎖と会合してＧＰＣ３に結合する２つの同一のＦａｂを形成する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
一実施形態では、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの抗体は、図１０に示されるＣＤ３結合ドメイン配列のＶＨ及びＶＬを有するｓｃＦｖを含む。一実施形態では、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆフォーマットの抗体は、図１２及び図１３に示されるＧＰＣ３結合ドメインのＶＨ及びＶＬを有する２つのＦａｂを含む。
例示的な実施形態では、これらの実施形態において特定の用途が見出される２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ＧＰＣ３×ＣＤ３二重特異性抗体のＧＰＣ３結合ドメインとしては、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１、又はそのバリアント、並びに国際公開第２０１４／１４５８０６号の図１０に示されるもの、及び図１４及び図１５に示されるものが挙げられるが、これらに限定されず、これらは、説明文を含めて参照により本明細書に組み込まれる。
任意の好適なＧＰＣ３ ＡＢＤは、本明細書に提供されるものを含む２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体に含めることができる。これらの実施形態において特に有用であるＧＰＣ３ ＡＢＤとしては、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３、又はそのバリアントからなる群から選択されるＶＨドメイン及びＶＬドメインが挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９、又はそのバリアントからなる群から選択される。
加えて、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットのＦｃドメインは、スキューバリアント（例えば、図１に示されるアミノ酸置換のセットであって、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択される）、任意選択的に除去バリアント（図３に示されるものを含む）、任意選択的に荷電ｓｃＦｖリンカー（図５にされるものを含む）を含み、重鎖はｐＩバリアント（図２に示されるものを含む）を含む。
いくつかの実施形態では、２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体（Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ側）、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖ドメインの可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメインを含む、第２の単量体（Ｆａｂ－Ｆｃ側）、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、αＧＰＣ３のＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、１＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット抗体は、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント及びＦｃＲｎバリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体（Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ側）、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖ドメインの可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメインを含む、第２の単量体（Ｆａｂ－Ｆｃ側）、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含み、番号付けはＥＵ番号付けに従う。いくつかの実施形態では、αＧＰＣ３のＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される。これらの実施形態において特定の用途を見出すＣＤ３結合ドメイン配列としては、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１、又はそのバリアントが挙げられるが、これらに限定されない。
図８Ａ～８Ｃは、２＋１Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットで有用ないくつかの例示的なＦｃドメイン配列を示している。図８Ａ～図８Ｃに示される「単量体１」配列は、通常、「Ｆａｂ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指し、「単量体２」配列は、「Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ重鎖」のＦｃドメインを指す。更に、図９は、このフォーマットで使用され得る、有用なＣＬ配列を示している。
例示的な抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３ ２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの抗体は、図１８～図２１に示されている。
５．セントラル－Ｆｖ
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、セントラルＦｖフォーマット（図４４Ｉ）である。この実施形態では、フォーマットは、挿入されたＦｖドメイン（すなわち、セントラルＦｖドメイン）の使用に依存し、これにより「追加の」第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し、「追加の」セントラルＦｖドメインはＣＤ３に結合する。「追加の」セントラルＦｖドメインは、単量体のＦｃドメインとＣＨ１－Ｆｖ領域との間に挿入され、したがって第３の抗原結合ドメイン（すなわち、「追加の」セントラルＦｖドメイン）を提供し、ここで各単量体は「追加の」セントラルＦｖドメインの構成要素を含む（すなわち、一方の単量体は可変重鎖ドメインを含み、他方は「追加の」中央Ｆｖドメインの可変軽鎖ドメインを含む）。
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、セントラルＦｖフォーマット（図４４Ｉ）である。この実施形態では、フォーマットは、挿入されたＦｖドメイン（すなわち、セントラルＦｖドメイン）の使用に依存し、これにより「追加の」第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し、「追加の」セントラルＦｖドメインはＣＤ３に結合する。「追加の」セントラルＦｖドメインは、単量体のＦｃドメインとＣＨ１－Ｆｖ領域との間に挿入され、したがって第３の抗原結合ドメイン（すなわち、「追加の」セントラルＦｖドメイン）を提供し、ここで各単量体は「追加の」セントラルＦｖドメインの構成要素を含む（すなわち、一方の単量体は可変重鎖ドメインを含み、他方は「追加の」中央Ｆｖドメインの可変軽鎖ドメインを含む）。
この実施形態では、１つの単量体は、第１の可変重鎖ドメイン、ＣＨ１ドメイン、及びＦｃドメインを含む第１の重鎖並びに追加の可変軽鎖ドメインを含む。軽鎖ドメインは、ドメインリンカーを使用して、重鎖定常ドメインのＣＨ１ドメインのＣ末端と第１のＦｃドメインのＮ末端の間に共有結合している（ＶＨ１－ＣＨ１－［任意のリンカー］－ＶＬ２－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）。もう１つの単量体は、第１の可変重鎖ドメイン、ＣＨ１ドメイン及びＦｃドメインを含む第１の重鎖並びに追加の可変重鎖ドメインを含む（ＶＨ１－ＣＨ１－［任意のリンカー］－ＶＨ２－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）。軽鎖ドメインは、ドメインリンカーを使用して、重鎖定常ドメインのＣＨ１ドメインのＣ末端と第１のＦｃドメインのＮ末端との間に共有結合している。
この実施形態は、可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を利用し、これは重鎖と会合して各々がＧＰＣ３に結合する２つの同一のＦａｂを形成する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３結合ドメイン配列が図１０に示されるとおりであるか、又はそのバリアントであり、ＧＰＣ３結合ドメイン配列は図１２及び図１３に示されるとおりであるか、又はそのバリアントである、セントラルＦｖフォーマットを提供する。
６．ワンアームセントラルｓｃＦｖ
本明細書に記載の抗体において特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ワンアームセントラルｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｃ）である。この実施形態では、一方の単量体はＦｃドメインのみを含み、他方の単量体はＦａｂドメイン（第１の抗原連結ドメイン）、ｓｃＦｖドメイン（第２の抗原連結ドメイン）、及びＦｃドメインを含み、ここでｓｃＦｖドメインはＦｃドメインとＦｃドメインの間に挿入されている。このフォーマットでは、Ｆａｂ部分は１つの受容体標的に連結し、ｓｃＦｖは別のものに連結する。このフォーマットでは、Ｆａｂ部分がＧＰＣ３に結合し、ｓｃＦｖがＣＤ３に結合するか、又はその逆である。
本明細書に記載の抗体において特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ワンアームセントラルｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｃ）である。この実施形態では、一方の単量体はＦｃドメインのみを含み、他方の単量体はＦａｂドメイン（第１の抗原連結ドメイン）、ｓｃＦｖドメイン（第２の抗原連結ドメイン）、及びＦｃドメインを含み、ここでｓｃＦｖドメインはＦｃドメインとＦｃドメインの間に挿入されている。このフォーマットでは、Ｆａｂ部分は１つの受容体標的に連結し、ｓｃＦｖは別のものに連結する。このフォーマットでは、Ｆａｂ部分がＧＰＣ３に結合し、ｓｃＦｖがＣＤ３に結合するか、又はその逆である。
この実施形態では、１つの単量体は、第１の可変重鎖ドメイン、ＣＨ１ドメイン及びＦｃドメインを含む第１の重鎖を含み、ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー及びｓｃＦｖ可変重鎖ドメインを含む。ｓｃＦｖは、ＶＨ１－ＣＨ１－［任意のドメインリンカー］－ＶＨ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ２－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３、又は、ＶＨ１－ＣＨ１－［任意のドメインリンカー］－ＶＬ２－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ２－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３のいずれかの配向で、ドメインリンカーを使用して、重鎖定常ドメインのＣＨ１ドメインのＣ末端と第１のＦｃドメインのＮ末端との間に共有結合している。第２の単量体は、Ｆｃドメイン（ＣＨ２－ＣＨ３）を含む。この実施形態は更に重鎖と会合してＦａｂを形成する可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を利用する。
本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３結合ドメイン配列が図１０に示されるとおりであるか、又はそのバリアントであり、ＧＰＣ３結合ドメイン配列は図１２及び図１３に示されるとおりであるか、又はそのバリアントである、セントラルＦｖフォーマットを提供する。
加えて、ワンアームセントラルｓｃＦｖフォーマットのＦｃドメインは、スキューバリアント（例えば、図１に示されるアミノ酸置換のセットであって、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択される）、任意選択的に除去バリアント（図３に示されるものを含む）、任意選択的に荷電ｓｃＦｖリンカー（図５にされるものを含む）を含み、重鎖はｐＩバリアント（図２に示されるものを含む）を含む。
いくつかの実施形態では、ワンアームセントラルｓｃＦｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、ワンアームセントラルｓｃＦｖフォーマットのいくつかの実施形態は、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを有するＦｃドメインを含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ワンアームセントラルｓｃＦｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、及びＦｃＲｎバリアントを含む。したがって、ワンアームセントラルｓｃＦｖフォーマットのいくつかの実施形態は、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及びＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを有するＦｃドメインを含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を含む。
７．ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂ
本明細書に記載の抗体において特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマット（図４４Ｄ）である。この実施形態では、一方の単量体はＦｃドメインのみを含み、他方の単量体は、一般にリンカーの使用を通じて、重鎖のＮ末端に結合したｓｃＦｖドメインを使用する。ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ－ ［任意のドメインリンカー］－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３又は（反対方向）ＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３。このフォーマットでは、Ｆａｂ部分はそれぞれＧＰＣ３に結合し、ｓｃＦｖはＣＤ３に結合する。この実施形態は更に、重鎖と会合してＦａｂを形成する可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を利用する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体において特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマット（図４４Ｄ）である。この実施形態では、一方の単量体はＦｃドメインのみを含み、他方の単量体は、一般にリンカーの使用を通じて、重鎖のＮ末端に結合したｓｃＦｖドメインを使用する。ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ－ ［任意のドメインリンカー］－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３又は（反対方向）ＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３。このフォーマットでは、Ｆａｂ部分はそれぞれＧＰＣ３に結合し、ｓｃＦｖはＣＤ３に結合する。この実施形態は更に、重鎖と会合してＦａｂを形成する可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を利用する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３結合ドメイン配列が図１０に示されるとおりであるか、又はそのバリアントであり、ＧＰＣ３結合ドメイン配列が図１２及び図１３に示されるとおりであるか、又はそのバリアントである、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットを提供する。
加えて、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットのＦｃドメインは、スキューバリアント（例えば、図１に示されるアミノ酸置換のセットであって、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択される）、任意選択的に除去バリアント（図３に示されるものを含む）、任意選択的に荷電ｓｃＦｖリンカー（図５にされるものを含む）を含み、重鎖はｐＩバリアント（図２に示されるものを含む）を含む。
いくつかの実施形態では、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットのいくつかの実施形態は、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを有するＦｃドメインを含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアン、及びＦｃＲｎバリアントを含む。したがって、ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットのいくつかの実施形態は、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及びＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを有するＦｃドメインを含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む軽鎖を含む。
８．ｓｃＦｖ－ｍＡｂ
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｅ）である。この実施形態では、フォーマットは、単量体のうちの１つへのｓｃＦｖのＮ末端結合の使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し及び「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。
本明細書に記載の抗体で特定の用途が見出される１つのヘテロ二量体足場は、ｍＡｂ－ｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｅ）である。この実施形態では、フォーマットは、単量体のうちの１つへのｓｃＦｖのＮ末端結合の使用に依存し、これにより第３の抗原結合ドメインを形成し、２つの単量体のＦａｂ部分はＧＰＣ３に結合し及び「追加の」ｓｃＦｖドメインはＣＤ３に結合する。
この実施形態では、第１の単量体は、いずれかの配向で、ｓｃＦｖ可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー及びｓｃＦｖ可変重鎖ドメインを含むＮ末端共有連結ｓｃＦｖを有する第１の重鎖（可変重鎖ドメイン及び定常ドメインを含む）を含む（（ＶＨ１－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ１－［任意のドメインリンカー］－ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）又は（反対の配向のｓｃＦｖと共に）（（ＶＬ１－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ１－［任意のドメインリンカー］－ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３））。この実施形態は更に、可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を利用し、これらは重鎖と会合してＧＰＣ３に連結する２つの同一のＦａｂを形成する。本明細書に記載の実施形態の多くに関して、これらの構築物には、本明細書で所望され、説明されるように、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、追加のＦｃバリアントなどが含まれる。
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３結合ドメイン配列が図１０に示されるとおりであるか、又はそのバリアントであり、ＧＰＣ３結合ドメイン配列が図１２及び図１３に示されるとおりであるか、又はそのバリアントである、ｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットを提供する。
加えて、ｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットのＦｃドメインは、スキューバリアント（例えば、図１に示されるアミノ酸置換のセットであって、特に有用なスキューバリアントは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ、Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ、Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ、Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ、及びＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃからなる群から選択される）、任意選択的に除去バリアント（図３に示されるものを含む）、任意選択的に荷電ｓｃＦｖリンカー（図５にされるものを含む）を含み、重鎖はｐＩバリアント（図２に示されるものを含む）を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、ｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメインを含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、及びＦｃＲｎバリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、ｓｃＦｖ－ｍＡｂフォーマットを含み、このフォーマットは、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖の可変軽鎖ドメインと共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、及びＣＤ３に結合するｓｃＦｖドメインを含む、第１の単量体、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、及び共通軽鎖の可変軽鎖と共に、本明細書に概説されるようにＧＰＣ３に結合するＦｖを構成する可変重鎖ドメイン、を含む、第２の単量体、並びにｃ）可変軽鎖ドメイン及び定常軽鎖ドメインを含む共通軽鎖を含む。
９．デュアルｓｃＦｖフォーマット
本明細書に記載の抗体はまた、当技術分野で知られているように、デュアルｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｂ）を提供する。この実施形態では、ＧＰＣ３ ｘ ＣＤ３ヘテロ二量体二重特異性抗体は、２つのｓｃＦｖ－Ｆｃ単量体（両方とも（ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３）形式又は（ＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３）形式のいずれかで、あるいは一方の単量体を一方の方向に、もう一方を他方の方向にして構成される。
本明細書に記載の抗体はまた、当技術分野で知られているように、デュアルｓｃＦｖフォーマット（図４４Ｂ）を提供する。この実施形態では、ＧＰＣ３ ｘ ＣＤ３ヘテロ二量体二重特異性抗体は、２つのｓｃＦｖ－Ｆｃ単量体（両方とも（ＶＨ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＬ－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３）形式又は（ＶＬ－ｓｃＦｖリンカー－ＶＨ－［任意のドメインリンカー］－ＣＨ２－ＣＨ３）形式のいずれかで、あるいは一方の単量体を一方の方向に、もう一方を他方の方向にして構成される。
本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３結合ドメイン配列が図１０に示されるとおりであるか、又はそのバリアントであり、ＧＰＣ３結合ドメイン配列が図１２及び図１３に示されるとおりであるか、又はそのバリアントである、デュアルｓｃＦｖフォーマットを提供する。
いくつかの実施形態では、デュアルｓｃＦｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、デュアルｓｃＦｖフォーマットであって、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ ／ Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ ／ Ｌ２３４Ｖ ／ Ｌ２３５Ａ ／ Ｇ２３６ｄｅｌ ／ Ｓ２６７Ｋ、及びＣＤ３又はＧＰＣ３のいずれかに結合する第１のｓｃＦｖを含む、第１の単量体と、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ ／ Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ ／ Ｑ２９５Ｅ ／ Ｎ３８４Ｄ ／ Ｑ４１８Ｅ ／ Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントを含む、第２の単量体と、を含むデュアルｓｃＦｖフォーマットを含む。
Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、及びＣＤ３又はＧＰＣ３のいずれかに結合する第２のｓｃＦｖ。いくつか実施形態では、デュアルｓｃＦｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、除去バリアント、及びＦｃＲｎバリアントを含む。いくつかの実施形態では、デュアルｓｃＦｖフォーマットは、スキューバリアント、ｐＩバリアント、及び除去バリアントを含む。したがって、いくつかの実施形態は、デュアルｓｃＦｖフォーマットであって、ａ）スキューバリアントＳ３６４Ｋ ／ Ｅ３５７Ｑ、除去バリアントＥ２３３Ｐ ／ Ｌ２３４Ｖ ／ Ｌ２３５Ａ ／ Ｇ２３６ｄｅｌ ／ Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ ／ Ｎ４３４Ｓ、及びＣＤ３又はＧＰＣ３のいずれかに結合する第１のｓｃＦｖを含む、第１の単量体と、ｂ）スキューバリアントＬ３６８Ｄ ／ Ｋ３７０Ｓ、ｐＩバリアントＮ２０８Ｄ ／ Ｑ２９５Ｅ ／ Ｎ３８４Ｄ ／ Ｑ４１８Ｅ ／ Ｎ４２１Ｄ、除去バリアントＥ２３３Ｐ ／ Ｌ２３４Ｖ ／ Ｌ２３５Ａ ／ Ｇ２３６ｄｅｌ ／ Ｓ２６７Ｋ、ＦｃＲｎバリアントＭ４２８Ｌ ／ Ｎ４３４Ｓ、及びＣＤ３又はＧＰＣ３のいずれかに結合する第２のｓｃＦｖを含む第２の単量体と、を含むデュアルｓｃＦｖフォーマットを含む。
１０．非ヘテロ二量体二重特異性抗体
当業者によって理解されるように、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３抗体はまた、非ヘテロ二量体性二重特異性フォーマットに含まれ得る（図４４Ｊを参照されたい）。このフォーマットでは、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３は、１）ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体、２）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体、３）ＶＬ１－ＣＬを含む第１の軽鎖、及び４）ＶＬ２－ＣＬを含む第２の軽鎖を含む。そのような実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１が第１の抗原結合ドメインを形成し、ＶＨ２及びＶＬ２が第２の抗原結合ドメインを形成する。第１の抗原結合ドメイン又は第２の抗原結合ドメインの一方はＧＰＣ３に結合し、他方の抗原結合ドメインはＣＤ３に結合する。
当業者によって理解されるように、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３抗体はまた、非ヘテロ二量体性二重特異性フォーマットに含まれ得る（図４４Ｊを参照されたい）。このフォーマットでは、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３は、１）ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体、２）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体、３）ＶＬ１－ＣＬを含む第１の軽鎖、及び４）ＶＬ２－ＣＬを含む第２の軽鎖を含む。そのような実施形態では、ＶＨ１及びＶＬ１が第１の抗原結合ドメインを形成し、ＶＨ２及びＶＬ２が第２の抗原結合ドメインを形成する。第１の抗原結合ドメイン又は第２の抗原結合ドメインの一方はＧＰＣ３に結合し、他方の抗原結合ドメインはＣＤ３に結合する。
任意の好適なＧＰＣ３結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインは、本明細書に提供されるＧＰＣ３結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメイン並びに関連するＶＨ及びＶＬ又はそのバリアントのいずれかを含む、非ヘテロ二量体性二重特異性抗体フォーマットの抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３抗体に含まれ得る（例えば、図１０、図１２、及び図１３を参照されたい）。
１１．トライデントフォーマット
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、概してＷＯ２０１５／１８４２０３に記載されている「トライデント」フォーマットであり、その全ての内容、特に、図、図説、定義、並びに「Ｋ－コイル」及び「Ｅ－コイル」配列を含む「ヘテロ二量体促進ドメイン」又は「ＨＰＤ」の配列は、参照により本明細書に組み込まれる。トライデントは、構造の構成要素として、会合してヘテロ二量体構造を形成する２つの異なるＨＰＤの使用に依存する。この実施形態において、トライデントフォーマットは、「従来の」重鎖及び軽鎖（例えば、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及びＶＬ１－ＣＬ）、第１の「ディアボディ型連結ドメイン」又は「ＤＡＲＴ（登録商標）」を含む第３の鎖、ＶＨ２－（リンカー）－ＶＬ３－ＨＰＤ１、並びに第２のＤＡＲＴ（登録商標）を含む第４の鎖、ＶＨ３－（リンカー）－（リンカー）－ＶＬ２－ＨＰＤ２を含む。ＶＨ１及びＶＬ１は第１のＡＢＤを形成し、ＶＨ２及びＶＬ２は第２のＡＢＤを形成し、そしてＶＨ３及びＶＬ３は第３のＡＢＤを形成する。図１Ｋに示されているように、いくつかの場合では、第２及び第３のＡＢＤは同一の抗原、この例では一般的にＧＰＣ３に、例えば二価で連結し、第１のＡＢＤは、ＣＤ３に一価で連結する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、概してＷＯ２０１５／１８４２０３に記載されている「トライデント」フォーマットであり、その全ての内容、特に、図、図説、定義、並びに「Ｋ－コイル」及び「Ｅ－コイル」配列を含む「ヘテロ二量体促進ドメイン」又は「ＨＰＤ」の配列は、参照により本明細書に組み込まれる。トライデントは、構造の構成要素として、会合してヘテロ二量体構造を形成する２つの異なるＨＰＤの使用に依存する。この実施形態において、トライデントフォーマットは、「従来の」重鎖及び軽鎖（例えば、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及びＶＬ１－ＣＬ）、第１の「ディアボディ型連結ドメイン」又は「ＤＡＲＴ（登録商標）」を含む第３の鎖、ＶＨ２－（リンカー）－ＶＬ３－ＨＰＤ１、並びに第２のＤＡＲＴ（登録商標）を含む第４の鎖、ＶＨ３－（リンカー）－（リンカー）－ＶＬ２－ＨＰＤ２を含む。ＶＨ１及びＶＬ１は第１のＡＢＤを形成し、ＶＨ２及びＶＬ２は第２のＡＢＤを形成し、そしてＶＨ３及びＶＬ３は第３のＡＢＤを形成する。図１Ｋに示されているように、いくつかの場合では、第２及び第３のＡＢＤは同一の抗原、この例では一般的にＧＰＣ３に、例えば二価で連結し、第１のＡＢＤは、ＣＤ３に一価で連結する。
任意の好適なＧＰＣ３結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインは、本明細書に提供されるＧＰＣ３結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメイン並びに関連するＶＨ及びＶＬ又はそのバリアントのいずれかを含む、トライデント二重特異性抗体フォーマットの抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３抗体に含まれ得る（例えば、図１０、図１２、及び図１３を参照されたい）。
１２．単一特異性、モノクローナル抗体
当業者によって理解されるように、本明細書に概説される新規のＦｖ配列はまた、単一特異性抗体（例えば、「従来のモノクローナル抗体」）又は非ヘテロ二重特異性フォーマットの両方で使用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、一般にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の定常領域、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含むＩｇＧ４定常領域を含む）を有する、図からの６個のＣＤＲ並びに／又はｖｈ配列及びｖｌ配列を含むモノクローナル（単一特異性）抗体を提供し、いくつかの実施形態において特定の用途を見出す。すなわち、本明細書で「Ｈ＿Ｌ」の名称を有する任意の配列は、ヒトＩｇＧ１抗体の定常領域に連結することができる。
当業者によって理解されるように、本明細書に概説される新規のＦｖ配列はまた、単一特異性抗体（例えば、「従来のモノクローナル抗体」）又は非ヘテロ二重特異性フォーマットの両方で使用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、一般にＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の定常領域、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐのアミノ酸置換を含むＩｇＧ４定常領域を含む）を有する、図からの６個のＣＤＲ並びに／又はｖｈ配列及びｖｌ配列を含むモノクローナル（単一特異性）抗体を提供し、いくつかの実施形態において特定の用途を見出す。すなわち、本明細書で「Ｈ＿Ｌ」の名称を有する任意の配列は、ヒトＩｇＧ１抗体の定常領域に連結することができる。
いくつかの実施形態では、単一特異性抗体は、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３、又はそのバリアントからなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を有するＧＰＣ３単一特異性抗体である。
特定の実施形態では、ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９、又はそのバリアントからなる群から選択される。
Ｈ．本発明の特定の実施形態
本発明は具体的には、ＣＤ３及びＧＰＣ３に結合する１＋１フォーマット及び２＋１フォーマットを提供する。特定の実施形態は、ＸＥＮＰ３８０８６（ＸＥＮＰ３４９２０に対するＸｔｅｎｄ類似体、このＸｔｅｎｄ類似体が各Ｆｃドメイン上に４２８Ｌ／４３４Ｓを含むことを除いて同一の配列を有することを意味する）、ＸＥＮＰ３８０８７（ＸＥＮＰ３６９３５に対するＸｔｅｎｄ類似体、同上）、及びＸＥＮＰ３８２３２（ＸＥＮＰ３７６２５に対するＸｔｅｎｄ類似体、同上）を含む。
本発明は具体的には、ＣＤ３及びＧＰＣ３に結合する１＋１フォーマット及び２＋１フォーマットを提供する。特定の実施形態は、ＸＥＮＰ３８０８６（ＸＥＮＰ３４９２０に対するＸｔｅｎｄ類似体、このＸｔｅｎｄ類似体が各Ｆｃドメイン上に４２８Ｌ／４３４Ｓを含むことを除いて同一の配列を有することを意味する）、ＸＥＮＰ３８０８７（ＸＥＮＰ３６９３５に対するＸｔｅｎｄ類似体、同上）、及びＸＥＮＰ３８２３２（ＸＥＮＰ３７６２５に対するＸｔｅｎｄ類似体、同上）を含む。
１．１＋１フォーマット
特定の１＋１フォーマットの実施形態では、αＧＰＣ３ ＡＢＤはＦａｂであり、ＶＨ／ＶＬ対の［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６を有し、αＣＤ３ ＡＢＤは、抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるｓｃＦｖである。
特定の１＋１フォーマットの実施形態では、αＧＰＣ３ ＡＢＤはＦａｂであり、ＶＨ／ＶＬ対の［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６を有し、αＣＤ３ ＡＢＤは、抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるｓｃＦｖである。
特定の１＋１フォーマットの実施形態では、αＧＰＣ３ ＡＢＤはＦａｂであり、ＶＨ／ＶＬ対の［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９を有し、αＣＤ３ ＡＢＤは、抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるｓｃＦｖである。
いくつかの用途で用途が見出される特定の実施形態としては、図１６及び図１７に列挙されるものが挙げられ、ＸＥＮＰ２１９７１、ＸＥＮＰ３４３６４、ＸＥＮＰ３４３６５、ＸＥＮＰ３４３６７、ＸＥＮＰ３４３６８、ＸＥＮＰ３５８４３、ＸＥＮＰ３６１４０、ＸＥＮＰ３６９３１、ＸＥＮＰ３６９３２、ＸＥＮＰ３６９３３、ＸＥＮＰ３６９３４、ＸＥＮＰ３６９３５、ＸＥＮＰ３６９３６、ＸＥＮＰ３６９３７、ＸＥＮＰ３６９３８、ＸＥＮＰ３６９３９、ＸＥＮＰ３６９４１、及びＸＥＮＰ３８０８７が挙げられるが、これらに限定されない。
２．２＋１フォーマット
特定の２＋１フォーマットの実施形態では、αＧＰＣ３ ＡＢＤはＦａｂであり、ＶＨ／ＶＬ対の［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６を有し、αＣＤ３ ＡＢＤは、抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるｓｃＦｖである。
特定の２＋１フォーマットの実施形態では、αＧＰＣ３ ＡＢＤはＦａｂであり、ＶＨ／ＶＬ対の［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６を有し、αＣＤ３ ＡＢＤは、抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるｓｃＦｖである。
特定の２＋１フォーマットの実施形態では、αＧＰＣ３ ＡＢＤはＦａｂであり、ＶＨ／ＶＬ対の［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９を有し、αＣＤ３ ＡＢＤは、抗ＣＤ３ Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及び抗ＣＤ３ Ｌ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるｓｃＦｖである。
いくつかの用途で用途が見出される特定の実施形態としては、図１８、図１９、図２０、及び図２１に列挙されるものが挙げられ、ＸＥＮＰ３３７４４、ＸＥＮＰ３３７４５、ＸＥＮＰ２７２５９、ＸＥＮＰ３３７４６、ＸＥＮＰ３４９１９、ＸＥＮＰ３４９２０、ＸＥＮＰ３４９２１、ＸＥＮＰ３４９２２、ＸＥＮＰ３４９２３、ＸＥＮＰ３５８４０、ＸＥＮＰ３５８４０、ＸＥＮＰ３７２４６、ＸＥＮＰ３７２４７、ＸＥＮＰ３８０８６、ＸＥＮＰ３３７４７、ＸＥＮＰ３５８４１、ＸＥＮＰ３７６２４、ＸＥＮＰ３７６２５、ＸＥＮＰ３７６２６、ＸＥＮＰ３８２３２、ＸＥＮＰ３７４３０、ＸＥＮＰ３７４３３、及びＸＥＮＰ３３７４８が挙げられるが、これらに限定されない。
ＩＩ．本発明の核酸
本開示は更に、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＧＰＣ３単一特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない、本明細書で提供される抗ＧＰＣ３抗体をコードする核酸組成物を提供する。
本開示は更に、抗ＧＰＣ３×抗ＣＤ３二重特異性抗体及びＧＰＣ３単一特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない、本明細書で提供される抗ＧＰＣ３抗体をコードする核酸組成物を提供する。
当業者には理解されるように、核酸組成物はヘテロ二量体タンパク質のフォーマット及び足場に依存する。したがって、例えば、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆフォーマット（例えば、Ｆｃドメイン及びｓｃＦｖを含む第１のアミノ酸単量体、重鎖及び軽鎖を含む第２のアミノ酸単量体）など、３個のアミノ酸配列がフォーマットに必要な場合、発現のために、３個の核酸配列を１個以上の発現ベクターに組み込むことができる。同様に、いくつかのフォーマット（例えば、図４４に開示されるようなデュアルｓｃＦｖフォーマット）では、２個の核酸のみが必要とされ、この場合も、１個以上の発現ベクターに組み込むことができる。
当該技術分野において既知であるように、本明細書に記載の抗体の構成要素をコードする核酸は、当該技術分野において既知であるように、そして本明細書に記載のヘテロ二量体抗体を産生するために使用される宿主細胞に応じた発現ベクターに組み込まれ得る。一般に、核酸は任意の数の調節エレメント（プロモーター、複製起点、選択可能マーカー、リボソーム結合部位、インデューサーなど）に作動可能に連結されている。発現ベクターは、染色体外ベクター又は組み込みベクターであり得る。
次いで、本明細書に記載の核酸及び／又は発現ベクターを、哺乳動物細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞及び／又は真菌細胞を含む当該技術分野で周知の任意の数の異なる種類の宿主細胞に形質転換するが、多くの実施形態では哺乳動物細胞（例えばＣＨＯ細胞）が使用される。
いくつかの実施形態では、各単量体をコードする核酸及び、形式に応じて適用可能な、軽鎖をコードする任意の核酸は、一般に異なる又は同じプロモーター制御下で単一の発現ベクター内にそれぞれ含有される。本明細書に記載の抗体において特に使用される実施形態では、これら２つ又は３つの核酸のそれぞれは異なる発現ベクターに含まれる。本明細書及び参照により本明細書に組み込まれる６２／０２５，９３１に示されるように、ヘテロ二量体形成を推進するために異なるベクター比を使用することができる。すなわち、驚くべきことに、（ヘテロ二量体抗体を含む３個のポリペプチド有する本明細書の実施形態の多くの場合）タンパク質は、第１の単量体：第２の単量体：軽鎖を１：１：２の比率で含むが、これらは最高の結果が得られる比率ではない。
本明細書に記載のヘテロ二量体抗体は、当該技術分野において周知のように、発現ベクターを含む宿主細胞を培養することによって作製される。一旦製造されると、イオン交換クロマトグラフィー工程を含む従来の抗体精製工程が実施される。本明細書で論じるように、２個の単量体のｐＩが少なくとも０．５だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィー若しくは等電点電気泳動、又は等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。すなわち、各単量体の等電点（ｐＩ）が異なるｐＩを有し、かつヘテロ二量体も異なるｐＩを有するようになるように各単量体の等電点（ｐＩ）を変化させるｐＩ置換を含むことによって、「１＋１Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ」及び「２＋１」ヘテロ二量体の等電点精製（例えば、アニオン交換カラム、カチオン交換カラム）を促進する。これらの置換はまた、精製後、混入したデュアルｓｃＦｖ－Ｆｃ及びｍＡｂホモ二量体の決定及びモニタリングにも役立つ（例えば、ＩＥＦゲル、ｃＩＥＦ、及び分析用ＩＥＸカラム）。
ＩＩＩ．ヘテロ二量体二重特異性抗体の生物学的及び生化学的機能
一般に、本明細書に記載の二重特異性ＧＰＣ３×ＣＤ３抗体は、癌を有する患者に投与され、そして有効性は、本明細書中に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、癌量、腫瘍のサイズ、転移の存在又は程度の評価などの、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、インビトロアッセイ及びインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。
一般に、本明細書に記載の二重特異性ＧＰＣ３×ＣＤ３抗体は、癌を有する患者に投与され、そして有効性は、本明細書中に記載されるようないくつかの方法で評価される。このため、癌量、腫瘍のサイズ、転移の存在又は程度の評価などの、有効性の標準的なアッセイを実行し得るが、免疫腫瘍学的治療もまた免疫状態評価に基づいて評価され得る。これは、インビトロアッセイ及びインビボアッセイの両方を含むいくつかの方法で行うことができる。
ＩＶ．治療
作製されると、本明細書に記載の抗体の組成物は、肝臓癌などの癌を含むいくつかの用途で用途が見出され、したがって、本明細書に記載の抗体のヘテロ二量体組成物は、そのようなＧＰＣ３陽性癌の治療において用途が見出される。
作製されると、本明細書に記載の抗体の組成物は、肝臓癌などの癌を含むいくつかの用途で用途が見出され、したがって、本明細書に記載の抗体のヘテロ二量体組成物は、そのようなＧＰＣ３陽性癌の治療において用途が見出される。
Ｖ．インビボ投与のための抗体組成物
本明細書に記載の抗体に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される。
本明細書に記載の抗体に従って使用される抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される。
ＶＩ．投与モダリティ
本明細書に記載の抗体及び化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与又はある期間にわたる持続注入などの既知の方法に従って対象に投与される。
本明細書に記載の抗体及び化学療法剤は、ボーラスとしての静脈内投与又はある期間にわたる持続注入などの既知の方法に従って対象に投与される。
ＶＩＩ．治療モダリティ
本発明の方法において、治療は、疾患又は病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。「肯定的な治療応答」は、疾患若しくは病状の改善、及び／又は疾患若しくは病状に関連する症状の改善を意図する。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善、すなわち（１）腫瘍細胞の数の減少、（２）腫瘍細胞死の増加、（３）腫瘍細胞の生存の阻害、（５）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）、（６）患者生存率の増加、及び（７）疾患又は病状に関連する１つ以上の症状からのいくらかの解放のうちの１つ以上を指し得る。
本発明の方法において、治療は、疾患又は病状に関して肯定的な治療応答を提供するために使用される。「肯定的な治療応答」は、疾患若しくは病状の改善、及び／又は疾患若しくは病状に関連する症状の改善を意図する。例えば、肯定的な治療応答は、疾患における以下の改善、すなわち（１）腫瘍細胞の数の減少、（２）腫瘍細胞死の増加、（３）腫瘍細胞の生存の阻害、（５）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の減速、好ましくは停止）、（６）患者生存率の増加、及び（７）疾患又は病状に関連する１つ以上の症状からのいくらかの解放のうちの１つ以上を指し得る。
任意の所与の疾患又は病状における肯定的な治療応答は、その疾患又は病状に特有の標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍応答は、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン撮影、内視鏡検査、並びに骨髄穿刺（ＢＭＡ）及び循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技法を使用して、腫瘍形態（すなわち、全身腫瘍組織量、腫瘍サイズなど）の変化について評価され得る。
これらの肯定的な治療応答に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状の改善の有益な効果を経験し得る。
本開示に従う治療には、使用される医薬品の「治療有効量」が含まれる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために、必要な投薬量及び期間で有効な量を指す。
治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する薬剤の能力などの因子によって異なり得る。治療有効量はまた、抗体又は抗体部分のいずれの毒性又は有害な効果よりも治療上有益な効果が勝る量である。
腫瘍療法のための「治療有効量」は、疾患の進行を安定化する能力によっても測定することができる。癌を阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価してもよい。
代替的に、組成物のこの特性は、当業者に知られているインビトロアッセイによって、化合物が細胞増殖を阻害するか、又はアポトーシスを誘導する能力を検査することによって評価してもよい。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、さもなければ対象の症状を軽減し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、及び選択される特定の組成物又は投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができるであろう。
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単回のボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、又は治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例して増減させてもよい。非経口組成物は、投与の容易性及び投薬量の均一性のために、単位剤形で処方され得る。本明細書で使用される単位剤形は、治療対象のための単一投薬量として好適な物理的に別個の単位を指す。各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。
本開示の単位剤形形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴及び達成すべき特定の治療効果、並びに（ｂ）個体における感受性の治療に対してそのような活性化合物を調合する分野に付いて回る制限に影響され、またそれらに直接的に依存する。
本明細書に記載の二重特異性抗体の効率的な投薬量及び投薬レジメンは、治療される疾患又は病状に依存し、当業者によって決定され得る。
本明細書に記載の抗体で使用される二重特異性抗体の治療有効量の例示的かつ非限定的な範囲は、約０．１～１００ｍｇ／ｋｇである。
全ての引用文献は、本明細書にそれらの全体が参照により明示的に組み込まれる。
本開示の特定の実施形態を例示の目的で上述のように説明したが、添付の特許請求の範囲に記載の本発明から逸脱することなく詳細の多数の変形をなし得ることが当業者には理解されよう。
Ａ．実施例１：αＧＰＣ３×αＣＤ３二重特異性抗体の操作
αＧＰＣ３×αＣＤ３二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）のいくつかのフォーマットが考案され、その例示的なフォーマットは、以下及び図１５に概説されている。
αＧＰＣ３×αＣＤ３二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）のいくつかのフォーマットが考案され、その例示的なフォーマットは、以下及び図１５に概説されている。
そのようなフォーマットの１つは、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットであり、これは、第１のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合した単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、相補的な第２のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合した重鎖可変領域（ＶＨ）、及びＦａｂドメインが可変重鎖ドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされた軽鎖（ＬＣ）を含む。
別のフォーマットは、２＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットであり、これは、第１のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合したｓｃＦｖに共有結合したＣＨ１に共有結合したＶＨドメイン（ＶＨ－ＣＨ１－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）、相補的な第２のヘテロ二量体Ｆｃドメインに共有結合したＶＨドメイン、及びＦａｂドメインがＶＨドメインで形成されるように別々にトランスフェクトされたＬＣを含む。
αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂのＤＮＡコード鎖は、標準的な遺伝子合成とそれに続く等温クローニング（ギブソンアセンブリ）、又は融合パートナー（例えば、図６に示されるドメインリンカー及び／又は図７～図８に示される骨格）を含有するｐＴＴ５発現ベクターへのサブクローニングによって生成した。発現のためにＤＮＡをＨＥＫ２９３Ｅ細胞にトランスフェクトした。１＋ １ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット及び２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットにおける例示的なαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂの配列を、それぞれ図１６～図２１に示す。
Ｂ．実施例２：ＧＰＣ３結合ドメインの操作
２Ａ：マウスＧＰＣ３結合ドメインのヒト化
細胞膜の近くに位置する、ＧＰＣ３タンパク質のＧＰＣ３の当該Ｃ末端ペプチド（アミノ酸５２４～５６３）に結合するマウスクローンを、ストリング含有量最適化を使用してヒト化した（例えば、２０１０年２月２日発行の米国特許第７，６５７，３８０号を参照されたい）。ヒト化バリアントの配列はＧＰＣ３－Ａと称され、これらを図１２に示す。バリアントは、分解（例えば、アスパラギン酸異性化及び脱アミド化）傾向を低下させ、ＧＰＣ３結合親和性及び／又は高ＧＰＣ３発現細胞株に対する選択性を調節した。例示的なそのようなバリアントについての配列を、図１３に示す。
２Ａ：マウスＧＰＣ３結合ドメインのヒト化
細胞膜の近くに位置する、ＧＰＣ３タンパク質のＧＰＣ３の当該Ｃ末端ペプチド（アミノ酸５２４～５６３）に結合するマウスクローンを、ストリング含有量最適化を使用してヒト化した（例えば、２０１０年２月２日発行の米国特許第７，６５７，３８０号を参照されたい）。ヒト化バリアントの配列はＧＰＣ３－Ａと称され、これらを図１２に示す。バリアントは、分解（例えば、アスパラギン酸異性化及び脱アミド化）傾向を低下させ、ＧＰＣ３結合親和性及び／又は高ＧＰＣ３発現細胞株に対する選択性を調節した。例示的なそのようなバリアントについての配列を、図１３に示す。
２Ｂ：ＧＰＣ３結合親和性の調整
ヒト化後、ＧＰＣ３結合親和性のラダーを作製する目的で、ＧＰＣ３結合アームを可変軽鎖ドメインにおいて単一点変異で操作した。その例示的な配列を図１３に示す。７３個の可変軽鎖ドメインバリアントを操作し、ＧＰＣ３－Ａ Ｈ１．１と対合させた（ＧＰＣ３－Ａ Ｈ１．１バリアントの説明については実施例３Ｃを参照されたい）。ＧＰＣ３－Ａバリアントを１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ｂｓＡｂフォーマットで操作し、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）ベースの方法であるオクテットを使用してＧＰＣ３抗原の結合を測定した。オクテットの実験工程は、一般に、固定化（バイオセンサーへのリガンドの捕捉）、会合（分析物を含むウェルへのリガンコーティングしたバイオセンサーの浸漬）、及び解離（緩衝液を含むウェルにバイオセンサーを戻すこと）を含む。臨床開発（例えば、モデル動物における治療薬の調査による）を容易にするために、結合ドメインがカニクイザル抗原に対して交差反応性であることが有用であり、したがって、ヒトＧＰＣ３抗原及びカニクイザルＧＰＣ３抗原の両方への結合を調査した。Ｈｉｓタグの付いたヒトＧＰＣ３及びカニクイザルＧＰＣ３をＨＩＳ１Ｋセンサー上で捕捉し、次いで複数濃度の二重特異性抗体に浸漬した。得られた解離定数（ＫＤ）を図２３に示す。高親和性バリアントＨ１．１＿Ｌ１．６（４ｎＭ）から中親和性バリアントＨ１．１＿Ｌ１．１６及びＨ１．１＿Ｌ１．２９（それぞれ１００ｎＭ及び７０ｎＭ）、低親和性バリアントＨ１．１＿Ｌ１．３１（４００ｎＭ）まで、広範囲のＫＤ値を得た。
ヒト化後、ＧＰＣ３結合親和性のラダーを作製する目的で、ＧＰＣ３結合アームを可変軽鎖ドメインにおいて単一点変異で操作した。その例示的な配列を図１３に示す。７３個の可変軽鎖ドメインバリアントを操作し、ＧＰＣ３－Ａ Ｈ１．１と対合させた（ＧＰＣ３－Ａ Ｈ１．１バリアントの説明については実施例３Ｃを参照されたい）。ＧＰＣ３－Ａバリアントを１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ｂｓＡｂフォーマットで操作し、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）ベースの方法であるオクテットを使用してＧＰＣ３抗原の結合を測定した。オクテットの実験工程は、一般に、固定化（バイオセンサーへのリガンドの捕捉）、会合（分析物を含むウェルへのリガンコーティングしたバイオセンサーの浸漬）、及び解離（緩衝液を含むウェルにバイオセンサーを戻すこと）を含む。臨床開発（例えば、モデル動物における治療薬の調査による）を容易にするために、結合ドメインがカニクイザル抗原に対して交差反応性であることが有用であり、したがって、ヒトＧＰＣ３抗原及びカニクイザルＧＰＣ３抗原の両方への結合を調査した。Ｈｉｓタグの付いたヒトＧＰＣ３及びカニクイザルＧＰＣ３をＨＩＳ１Ｋセンサー上で捕捉し、次いで複数濃度の二重特異性抗体に浸漬した。得られた解離定数（ＫＤ）を図２３に示す。高親和性バリアントＨ１．１＿Ｌ１．６（４ｎＭ）から中親和性バリアントＨ１．１＿Ｌ１．１６及びＨ１．１＿Ｌ１．２９（それぞれ１００ｎＭ及び７０ｎＭ）、低親和性バリアントＨ１．１＿Ｌ１．３１（４００ｎＭ）まで、広範囲のＫＤ値を得た。
次に、細胞表面ＧＰＣ３へのバリアントの結合を調査した。例示的な親和性バリアントＨ１．１＿Ｌ１．２９、Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、及びＨ１．１＿Ｌ１．３１を、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットで操作した。ｂｓＡｂ ＸＥＮＰ３６９４１（Ｌ１．２９、７０ｎＭ ＧＰＣ３親和性）、ＸＥＮＰ３５８４３（Ｌ１．１６、１００ｎＭ ＧＰＣ３親和性）、及びＸＥＮＰ３６１４０（Ｌ１．３１、４００ｎＭ ＧＰＣ３親和性）を、示された濃度のＧＰＣ３ｈｉｇｈＨｅｐＧ２細胞と共に４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、二次抗体（典型的には抗ヒトＦｃ ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ６４７）を用いて４℃で１時間染色した。更に２回洗浄した後、細胞をフローサイトメトリーで分析した。図２４に示す得られた結合曲線は、細胞結合がＧＰＣ３親和性と相関することを示し、ＸＥＮＰ３６９４１（７０ｎＭ可変軽鎖ドメイン）は最も強い結合を示し、ＸＥＮＰ３６１４０（４００ｎＭ可変軽鎖ドメイン）は最も弱い結合を示した。
２Ｃ：分解傾向のある残基を除去するための操作
分解傾向のある残基についてヒト化ＧＰＣ３－Ａ抗体の配列を調査した。ＧＰＣ３－Ａ Ｈ１重鎖ＣＤＲ２は、アスパラギン酸異性化モチーフとしてＤ５２／Ｐ５２ａ（Ｋａｂａｔ番号付け）を含んでいた。更に、Ｌ１可変軽鎖ドメインは、脱アミド化モチーフとしてＮ２８／Ｇ２９（Ｋａｂａｔ番号付け）を含んでいた。したがって、ＧＰＣ３結合に影響を与えることなくその傾向を除去することができるかどうか調査するために、これらの残基における変異でライブラリーを作製した。その結合データを図２５に示す。可変重鎖バリアントＨ１．１におけるＤ５２Ｅ変異は、同様のＧＰＣ３結合を維持しつつ（Ｈ１と比較して）アスパラギン酸異性化傾向を除去した（Ｄ５２Ｎの結合は低下したが、Ｄ５２Ｑ及びＤ５２Ｓは許容可能であった）。可変軽鎖バリアントＬ１．６におけるＧ２９Ｔは、同様のＧＰＣ３結合を維持しつつ（Ｌ１と比較して）脱アミド化傾向を除去した（Ｎ２８Ｑ、Ｎ２８Ｙ、Ｎ２８Ｓ、及びＮ２８Ｈは結合を大幅に減少させたが、Ｇ２９Ａ及びＧ２９Ｋは許容可能であった）。親和性バリアントから脱アミド化傾向を除去するために異なる変異が必要とされ得ることに留意すべきである。例示的なバリアントについての結合データを図２６に示す。Ｇ２９Ａ変異をＬ１．６９バリアントで用いて、Ｌ１．２９バリアントから脱アミド化傾向を除去し（Ｎ２８Ｙ変異の結合は低下したが、Ｇ２９Ｋも許容可能であった）、Ｇ２９Ｋ変異をＬ１．７３バリアントで用いて、Ｌ１．３１バリアントから脱アミド化傾向を除去した（Ｎ２８Ｙ及びＧ２９Ａ変異は、低応答又は異常な応答をもたらした）。ここで説明したバリアントの配列を図１３に示す。
分解傾向のある残基についてヒト化ＧＰＣ３－Ａ抗体の配列を調査した。ＧＰＣ３－Ａ Ｈ１重鎖ＣＤＲ２は、アスパラギン酸異性化モチーフとしてＤ５２／Ｐ５２ａ（Ｋａｂａｔ番号付け）を含んでいた。更に、Ｌ１可変軽鎖ドメインは、脱アミド化モチーフとしてＮ２８／Ｇ２９（Ｋａｂａｔ番号付け）を含んでいた。したがって、ＧＰＣ３結合に影響を与えることなくその傾向を除去することができるかどうか調査するために、これらの残基における変異でライブラリーを作製した。その結合データを図２５に示す。可変重鎖バリアントＨ１．１におけるＤ５２Ｅ変異は、同様のＧＰＣ３結合を維持しつつ（Ｈ１と比較して）アスパラギン酸異性化傾向を除去した（Ｄ５２Ｎの結合は低下したが、Ｄ５２Ｑ及びＤ５２Ｓは許容可能であった）。可変軽鎖バリアントＬ１．６におけるＧ２９Ｔは、同様のＧＰＣ３結合を維持しつつ（Ｌ１と比較して）脱アミド化傾向を除去した（Ｎ２８Ｑ、Ｎ２８Ｙ、Ｎ２８Ｓ、及びＮ２８Ｈは結合を大幅に減少させたが、Ｇ２９Ａ及びＧ２９Ｋは許容可能であった）。親和性バリアントから脱アミド化傾向を除去するために異なる変異が必要とされ得ることに留意すべきである。例示的なバリアントについての結合データを図２６に示す。Ｇ２９Ａ変異をＬ１．６９バリアントで用いて、Ｌ１．２９バリアントから脱アミド化傾向を除去し（Ｎ２８Ｙ変異の結合は低下したが、Ｇ２９Ｋも許容可能であった）、Ｇ２９Ｋ変異をＬ１．７３バリアントで用いて、Ｌ１．３１バリアントから脱アミド化傾向を除去した（Ｎ２８Ｙ及びＧ２９Ａ変異は、低応答又は異常な応答をもたらした）。ここで説明したバリアントの配列を図１３に示す。
Ｃ．実施例３：αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂの調整及び最適化
αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを、親和性を調整した様々なＧＰＣ３結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを用いて、並びに異なるＧＰＣ３結合原子価を用いて操作し、実施例１に一般的に記載されるように生成して、リダイレクトされたＴ細胞の細胞傷害性（ＲＴＣＣ）、選択性、及び潜在的な治療指数を最適化した。
αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを、親和性を調整した様々なＧＰＣ３結合ドメイン及びＣＤ３結合ドメインを用いて、並びに異なるＧＰＣ３結合原子価を用いて操作し、実施例１に一般的に記載されるように生成して、リダイレクトされたＴ細胞の細胞傷害性（ＲＴＣＣ）、選択性、及び潜在的な治療指数を最適化した。
ＲＴＣＣアッセイを使用して、ＣＤ３＋エフェクターＴ細胞をリダイレクトしてＧＰＣ３発現細胞株を破壊するαＧＰＣ３×αＣＤ３二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）の可能性を調査した。ＲＴＣＣアッセイは、一般に、ＧＰＣ３ｈｉｇｈ標的細胞としてＨｅｐＧ２細胞（肝臓肝細胞癌株）、ＧＰＣ３ｍｅｄ標的細胞としてＨｕｈ７細胞（同じく肝臓肝細胞癌株）、及び／又はＧＰＣ３ｌｏｗ標的細胞としてＨＥＫ２９３細胞（腫瘍環境外の細胞の代用物）を使用して実施した。リダイレクトされたＴ細胞傷害性（ＲＴＣＣ）アッセイの２つの方法、すなわち、フローサイトメトリーベースの方法、及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）ベースの方法を使用した。フローサイトメトリーベースのＲＴＣＣアッセイのために、示されたエフェクター対標的細胞比で、標的細胞をヒトＰＢＭＣ及び被験物質と共に、３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、細胞をＡｑｕａ Ｚｏｍｂｉｅ染料で室温で１５分間染色した。次に、細胞を洗浄し、細胞表面マーカーの抗体で染色し、フローサイトメトリーで分析した。ＲＴＣＣの誘導を、ＣＳＦＥ ＋標的細胞のＺｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ染色を使用して決定し、Ｔ細胞の活性化と脱顆粒を、リンパ球でのＣＤ１０７ａ、ＣＤ２５、及びＣＤ６９の発現によって決定した。ＬＤＨベースのＲＴＣＣアッセイのために、細胞及び示された濃度の被験物質を、平底９６ウェルプレート中、２００μｌの総体積、３７℃で４８又は７２時間インキュベートする。次いで、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｙｔｏＴｏｘ－ｏｎｅキットをそのプロトコルに従って使用して、細胞を溶解し、基質と混合した。Ｗａｌｌａｃ装置を用いてプレートを読み取った。Ｖ－ＰＬＥＸ炎症性パネル１ヒトキットを使用してサイトカインを測定した。いくつかの工学的アプローチが同時に調査されたため、一部のデータセットは同じ実験からのものであることに注意する必要がある。
このセクションを通して、国際公開第２０１６／０４７７２２号に開示されているαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂ及び図２２に示されている配列に基づくコンパレータｂｓＡｂ ＸＥＮＰ３１３０８もまた、本発明の新規のｂｓＡｂをベンチマークするために用いた。ＸＥＮＰ３１３０８を、一般的に上述したようにＲＴＣＣアッセイにおいて特徴付けた。図２７に示すデータは、１０：１のエフェクター：標的比において、ＸＥＮＰ３１３０８が、高ＧＰＣ３発現細胞株及び低ＧＰＣ３発現細胞株の両方において強力なＲＴＣＣ及びサイトカイン分泌を誘導したことを示す。図２８に示す１：１のエフェクター：標的比のデータを用いる別の実験では、ＸＥＮＰ３１３０８は、低ＧＰＣ３発現細胞株ＨＥＫ２９３の存在下でＲＴＣＣをほとんど誘導しないが、サイトカイン分泌をなお強力に誘導する。ＧＰＣ３ｌｏｗ細胞株は健常組織の代用物であるので、低ＧＰＣ３発現細胞株の存在下でほとんど又は全く死滅せず、サイトカインを放出しないように維持することは、臨床設定における毒性及びサイトカインストームの低減につながり得るので重要である。ＧＰＣ３ｌｏｗ細胞株の強力な死滅は、望ましくない毒性を引き起こし得る、インビボでのオンターゲットオフ組織死滅の可能性を示す。
３Ａ：異なるＧＰＣ３エピトープに結合するＧＰＣ３結合ドメインの効果の調査
ＧＰＣ３は膜結合であり、αサブユニット及びβサブユニットからなる。αサブユニット（残基２５～３５８）は切断されて可溶性ＧＰＣ３として放出され得るが、βサブユニットは細胞膜に付着したままである。実施例２Ａに記載されるように、ＧＰＣ３結合ドメインＧＰＣ３－Ａは、βサブユニットの一部であるＧＰＣ３のＣ末端残基５２４～５６３に結合する。更なるＧＰＣ３結合ドメインは、βサブユニット又はαサブユニットのＮ末端残基３５９～５２４に結合することが記載されている。異なるＧＰＣ３エピトープへの結合の効果を調査するために、ＣＤ３ Ｈｉｇｈを有する１＋１フォーマット又はＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１ ｓｃＦｖを有する２＋１フォーマットのαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを、異なるＧＰＣ３エピトープに結合する異なるＧＰＣ３結合ドメインで操作した。ｂｓＡｂ及びＨｅｐＧ２細胞（１０：１のエフェクター：標的比）を用いてＲＴＣＣアッセイを行った。図２９のデータ（ＩＦＮγ放出の誘導によって示されるｂｓＡｂの活性を示す）は、追加のエピトープのそれぞれがＴ細胞活性の誘導においてＧＰＣ３－Ａよりも効力が低かったことを示す。差の一部は、結合親和性（クローン間）又は結合力（フォーマット間）の差による可能性があるが、ＧＰＣ３エピトープが効力の低下に寄与している可能性が高い。
ＧＰＣ３は膜結合であり、αサブユニット及びβサブユニットからなる。αサブユニット（残基２５～３５８）は切断されて可溶性ＧＰＣ３として放出され得るが、βサブユニットは細胞膜に付着したままである。実施例２Ａに記載されるように、ＧＰＣ３結合ドメインＧＰＣ３－Ａは、βサブユニットの一部であるＧＰＣ３のＣ末端残基５２４～５６３に結合する。更なるＧＰＣ３結合ドメインは、βサブユニット又はαサブユニットのＮ末端残基３５９～５２４に結合することが記載されている。異なるＧＰＣ３エピトープへの結合の効果を調査するために、ＣＤ３ Ｈｉｇｈを有する１＋１フォーマット又はＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１ ｓｃＦｖを有する２＋１フォーマットのαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを、異なるＧＰＣ３エピトープに結合する異なるＧＰＣ３結合ドメインで操作した。ｂｓＡｂ及びＨｅｐＧ２細胞（１０：１のエフェクター：標的比）を用いてＲＴＣＣアッセイを行った。図２９のデータ（ＩＦＮγ放出の誘導によって示されるｂｓＡｂの活性を示す）は、追加のエピトープのそれぞれがＴ細胞活性の誘導においてＧＰＣ３－Ａよりも効力が低かったことを示す。差の一部は、結合親和性（クローン間）又は結合力（フォーマット間）の差による可能性があるが、ＧＰＣ３エピトープが効力の低下に寄与している可能性が高い。
３Ｂ：ＧＰＣ３結合力の効果の調査
ＧＰＣ３に対する二価結合を有する２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットのｂｓＡｂは、２つの結合ドメイン由来の改善された結合力に起因して、より低い親和性の結合ドメインでより高い効力を達成するのに有用であり得るという仮説が立てられた。このフォーマットの結合力の利益は、より高い標的発現を有する細胞株に対する選択性を付与し、インビボでのオンターゲットオフ組織（例えば、低レベルのＧＰＣ３を発現する健常組織）効果の可能性を低減し得る。更に、高レベルの可溶性ＧＰＣ３がインビボで存在する可能性があり、ＧＰＣ３標的薬剤の抗原シンクとして作用する可能性がある。より低いＧＰＣ３結合親和性は、二価ＧＰＣ３結合と相まって、好ましくは可溶性抗原よりも高い抗原密度で細胞に結合することによって、シンクを克服するのに役立ち得る。したがって、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット、及び従来の単一特異性二価フォーマットのαＧＰＣ３×αＣＤ３二重特異性抗体の細胞結合を調査した。ＧＰＣ３－Ａ可変軽鎖ドメインＬ１．１６（１００ｎＭのＧＰＣ３結合親和性を有する）及びＬ１．３１（４００ｎＭのＧＰＣ３結合親和性を有する）を、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ（ＶＬ／ＶＨ）、及び二価単一特異性ＩｇＧ１フォーマットに操作した。被験物質を、示された濃度のＧＰＣ３ｈｉｇｈＨｅｐＧ２細胞と共にインキュベートし、洗浄し、二次抗体で染色し、再度洗浄し、上記のようにフローサイトメトリーによって分析した。図３０に見られるように、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ（ＶＬ／ＶＨ）フォーマットによって付与される結合力は、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットと比較して結合を改善させ、標準的な二価ＩｇＧのレベルと同様のレベルに達する。更に、より低い親和性のＬ１．３１クローンは、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃを超えるこの改善をより劇的に示し、より低い結合親和性は、結合力及び結合原子価へのより多くの依存性を生じることを示す。
ＧＰＣ３に対する二価結合を有する２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットのｂｓＡｂは、２つの結合ドメイン由来の改善された結合力に起因して、より低い親和性の結合ドメインでより高い効力を達成するのに有用であり得るという仮説が立てられた。このフォーマットの結合力の利益は、より高い標的発現を有する細胞株に対する選択性を付与し、インビボでのオンターゲットオフ組織（例えば、低レベルのＧＰＣ３を発現する健常組織）効果の可能性を低減し得る。更に、高レベルの可溶性ＧＰＣ３がインビボで存在する可能性があり、ＧＰＣ３標的薬剤の抗原シンクとして作用する可能性がある。より低いＧＰＣ３結合親和性は、二価ＧＰＣ３結合と相まって、好ましくは可溶性抗原よりも高い抗原密度で細胞に結合することによって、シンクを克服するのに役立ち得る。したがって、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット、及び従来の単一特異性二価フォーマットのαＧＰＣ３×αＣＤ３二重特異性抗体の細胞結合を調査した。ＧＰＣ３－Ａ可変軽鎖ドメインＬ１．１６（１００ｎＭのＧＰＣ３結合親和性を有する）及びＬ１．３１（４００ｎＭのＧＰＣ３結合親和性を有する）を、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマット、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ（ＶＬ／ＶＨ）、及び二価単一特異性ＩｇＧ１フォーマットに操作した。被験物質を、示された濃度のＧＰＣ３ｈｉｇｈＨｅｐＧ２細胞と共にインキュベートし、洗浄し、二次抗体で染色し、再度洗浄し、上記のようにフローサイトメトリーによって分析した。図３０に見られるように、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃ（ＶＬ／ＶＨ）フォーマットによって付与される結合力は、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットと比較して結合を改善させ、標準的な二価ＩｇＧのレベルと同様のレベルに達する。更に、より低い親和性のＬ１．３１クローンは、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃを超えるこの改善をより劇的に示し、より低い結合親和性は、結合力及び結合原子価へのより多くの依存性を生じることを示す。
３Ｃ：ＲＴＣＣに対するバリアントＣＤ３結合ドメインの効果の調査
ＣＤ３結合親和性の効果を調査するために、αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを、ＧＰＣ３に対する１００ｎＭ又は４００ｎＭの結合親和性を有するＣＤ３ Ｈｉｇｈ ｓｃＦｖ、ＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１ ｓｃＦｖ、ＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃２ ｓｃＦｖ、及びＣＤ３ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｓｃＦｖ、及びＧＰＣ３－Ａｖバリアントを有する１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ及び２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットで作製し、ＧＰＣ３ｈｉｇｈ ＨｅｐＧ２標的セルで１０：１のＥ：Ｅを用いて上記のように実施し、４８時間インキュベートした。図３１Ａ及び図３２Ａにプロットされたデータ（それぞれ、１＋１フォーマット及び２＋１フォーマットのｂｓＡｂについて）は、親和性を操作されたαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂが、ＧＰＣ３ｈｉｇｈＨｅｐＧ２細胞に対して、高（５ｎＭ ＣＤ３アーム及び２＋１フォーマットを有し、ＥＣ５０値が６２．６３ｐｇ／ｍＬであるＸＥＮＰ３３７４４）から低（１＋１フォーマットで３０ｎＭ ＣＤ３アームを有し、ＥＣ５０値が１９９２０ｐｇ／ｍＬであるＸＥＮＰ２７２５９）までの範囲の効力を示すことを示した。二重特異性抗体はまた、ＩＦＮγの放出（図３１Ｂ及び図３２Ｂに示される）及びＴ細胞活性化（ＣＤ６９及び１０７ａなどの活性化マーカーの発現によって示される、データは示さず）を、それらの効力と相関した様式で誘導した。注目すべきことに、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットにおけるＣＤ３結合親和性をＣＤ３ ＨｉｇｈからＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１に離調することは、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの場合と比較して、サイトカイン放出の誘導においてはるかに大きな効力低下をもたらした。しかしながら、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットでは、ＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃２及びＣＤ３ ＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅによるＣＤ３結合親和性の離調は、依然としてサイトカイン放出の誘導における効力低下をもたらした。
ＣＤ３結合親和性の効果を調査するために、αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを、ＧＰＣ３に対する１００ｎＭ又は４００ｎＭの結合親和性を有するＣＤ３ Ｈｉｇｈ ｓｃＦｖ、ＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１ ｓｃＦｖ、ＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃２ ｓｃＦｖ、及びＣＤ３ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｓｃＦｖ、及びＧＰＣ３－Ａｖバリアントを有する１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ及び２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットで作製し、ＧＰＣ３ｈｉｇｈ ＨｅｐＧ２標的セルで１０：１のＥ：Ｅを用いて上記のように実施し、４８時間インキュベートした。図３１Ａ及び図３２Ａにプロットされたデータ（それぞれ、１＋１フォーマット及び２＋１フォーマットのｂｓＡｂについて）は、親和性を操作されたαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂが、ＧＰＣ３ｈｉｇｈＨｅｐＧ２細胞に対して、高（５ｎＭ ＣＤ３アーム及び２＋１フォーマットを有し、ＥＣ５０値が６２．６３ｐｇ／ｍＬであるＸＥＮＰ３３７４４）から低（１＋１フォーマットで３０ｎＭ ＣＤ３アームを有し、ＥＣ５０値が１９９２０ｐｇ／ｍＬであるＸＥＮＰ２７２５９）までの範囲の効力を示すことを示した。二重特異性抗体はまた、ＩＦＮγの放出（図３１Ｂ及び図３２Ｂに示される）及びＴ細胞活性化（ＣＤ６９及び１０７ａなどの活性化マーカーの発現によって示される、データは示さず）を、それらの効力と相関した様式で誘導した。注目すべきことに、１＋１ Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットにおけるＣＤ３結合親和性をＣＤ３ ＨｉｇｈからＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１に離調することは、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットの場合と比較して、サイトカイン放出の誘導においてはるかに大きな効力低下をもたらした。しかしながら、２＋１ Ｆａｂ２－ｓｃＦｖ－Ｆｃフォーマットでは、ＣＤ３ Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃２及びＣＤ３ ＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅによるＣＤ３結合親和性の離調は、依然としてサイトカイン放出の誘導における効力低下をもたらした。
３Ｄ：ＲＴＣＣに対する親和性を離調したＧＰＣ３結合ドメインの効果の調査
別の実験において、実施例２に記載されるようにαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂのセットのＧＰＣ３結合ドメインにおける親和性低下を操作することの、ＣＤ３＋エフェクターＴ細胞をリダイレクトする能力に対する効果を調べた。標的細胞としてＧＰＣ３ｍｅｄＨｕｈ７を用いて、ＬＤＨベースのＲＴＣＣアッセイを上記のように行い、示された濃度の被験物質及びＰＢＭＣエフェクター細胞を１０：１のＥ：Ｔ比で混合し、４８時間インキュベートした。図３３は、ＸＥＮＰ３７６２５（可変軽鎖ドメインＬ１．６９を有する、７０ｎＭのＧＰＣ３親和性）、ＸＥＮＰ３７６２４（可変軽鎖ドメインＬ１．１６を有する、１００ｎｍのＧＰＣ３親和性）、及びＸＥＮＰ３７６２６（可変軽鎖ドメインＬ１．７３を有する、４００ｎＭのＧＰＣ３親和性）がそれぞれ、それらのそれぞれの親和性に概ね従って、死滅及びＩＦＮγ分泌の効力の低下を示したことを示す。
別の実験において、実施例２に記載されるようにαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂのセットのＧＰＣ３結合ドメインにおける親和性低下を操作することの、ＣＤ３＋エフェクターＴ細胞をリダイレクトする能力に対する効果を調べた。標的細胞としてＧＰＣ３ｍｅｄＨｕｈ７を用いて、ＬＤＨベースのＲＴＣＣアッセイを上記のように行い、示された濃度の被験物質及びＰＢＭＣエフェクター細胞を１０：１のＥ：Ｔ比で混合し、４８時間インキュベートした。図３３は、ＸＥＮＰ３７６２５（可変軽鎖ドメインＬ１．６９を有する、７０ｎＭのＧＰＣ３親和性）、ＸＥＮＰ３７６２４（可変軽鎖ドメインＬ１．１６を有する、１００ｎｍのＧＰＣ３親和性）、及びＸＥＮＰ３７６２６（可変軽鎖ドメインＬ１．７３を有する、４００ｎＭのＧＰＣ３親和性）がそれぞれ、それらのそれぞれの親和性に概ね従って、死滅及びＩＦＮγ分泌の効力の低下を示したことを示す。
３Ｅ：異なるＧＰＣ３発現レベルを有する細胞株でＲＴＣＣを誘導するαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂの能力の調査
オンターゲット、オフ腫瘍毒性及びサイトカイン放出症候群は、患者において重篤な副作用をもたらし得る。したがって、低レベルのＧＰＣ３を発現する健常組織の存在下での死滅及びサイトカイン放出の誘導を回避するために、本発明のｂｓＡｂを調整することが重要である。
オンターゲット、オフ腫瘍毒性及びサイトカイン放出症候群は、患者において重篤な副作用をもたらし得る。したがって、低レベルのＧＰＣ３を発現する健常組織の存在下での死滅及びサイトカイン放出の誘導を回避するために、本発明のｂｓＡｂを調整することが重要である。
したがって、上記の様々な観察に基づいて、更にαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを操作し、産生させ、調査して、毒性の可能性が最小限である最大の治療可能性を有するｂｓＡｂを同定した。これに対して、高発現及び低発現の細胞株について二重特異性抗体の選択性に対するＧＰＣ３結合親和性、ＧＰＣ３結合原子価、及びＣＤ３結合親和性の調節の効果を調査した。
ＨｅｐＧ２（ＧＰＣ３ｈｉｇｈ）細胞及びＨＥＫ２９３（ＧＰＣ３ｌｏｗ）細胞をそれぞれ、ヒトＰＢＭＣ（１：１のエフェクター対標的細胞比）及び示された濃度の被験物質と共に３７℃で７２時間インキュベートした。ＲＴＣＣ及びサイトカイン分泌の誘導を示すデータを図３４及び図３５に示す。上記と一致して、二重特異性抗体は、ＧＰＣ３ｈｉｇｈＨｅｐＧ２細胞の存在下でＲＴＣＣ及びサイトカイン放出を誘導する際にある範囲の効力を示した。特に、ＧＰＣ３ｌｏｗＨＥＫ２９３細胞の存在下では、二重特異性抗体のそれぞれは、ＲＴＣＣ及びサイトカイン放出の誘導をほとんど又は全く示さなかった。
３Ｆ：Ｉｎｃｕｃｙｔｅに対する２Ｄ ＲＴＣＣを使用したαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂの更なる特徴付け
異なるシステム（Ｉｎｃｕｃｙｔｅでの２Ｄ ＲＴＣＣ）を用いて、新規のαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂ及びコンパレータＸＥＮＰ３１３０８を調査した。示された濃度の示された被験物質を、１０：１又は１：１のエフェクター：標的比のＨｅｐＧ２又はＨｕｈ７細胞及びＴ細胞と共にインキュベートした。ＲＴＣＣを示すデータを図３６～図３８に示す。１０：１のエフェクター：標的（ＨｅｐＧ２）比では、ｂｓＡｂ ＸＥＮＰ３４９２０、ＸＥＮＰ３７４３０、ＸＥＮＰ３７６２５、及びＸＥＮＰ３７６２４は、コンパレータＸＥＮＰ３１３０８と同様の効力（１００ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０未満）を示した。他のｂｓＡｂであるＸＥＮＰ３５８４３、ＸＥＮＰ３６９３５、ＸＥＮＰ３７４３３、及びＸＥＮＰ３７６２６の効力ははるかに低かったが、より高い濃度で有効な死滅を達成することができ、ＸＥＮＰ３６９３９は、死滅を示さなかった。特に、より低密度のＨｕｈ７及びより低いエフェクター：標的比において、本発明のｂｓＡｂのいくつか（例えば、ＸＥＮＰ３４９２０、ＸＥＮＰ３６９３５、及びＸＥＮＰ３７６２５）は、ＸＥＮＰ３１３０８コンパレータと比較して、ＥＣ５０においてはるかに大きな差を示し、治療指数の増強の可能性を示す。更に、ＧＰＣ３ｈｉｇｈ ＨｅｐＧ２及びＧＰＣ３ｍｅｄ Ｈｕｈ７標的細胞を、１０μｇ／ｍＬの濃度の被験物質を用いて１０：１のＥ：Ｔ比で処理した場合、２４～１４４時間の範囲の異なる時点にわたって、同様の結果が見られた。図３９～図４０に示されるように、ＸＥＮＰ３４９２０、ＸＥＮＰ３７４３０、ＸＥＮＰ３６９３５、ＸＥＮＰ３７６２４、及びＸＥＮＰ３７６２５など親和性を離調したαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂは、ＨｅｐＧ２標的細胞及びＨｕｈ７標的細胞の両方において経時的に腫瘍増殖を阻害するのに有効であり、それらの有効性はＸＥＮＰ３１３０８の有効性と非常に類似していた。
異なるシステム（Ｉｎｃｕｃｙｔｅでの２Ｄ ＲＴＣＣ）を用いて、新規のαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂ及びコンパレータＸＥＮＰ３１３０８を調査した。示された濃度の示された被験物質を、１０：１又は１：１のエフェクター：標的比のＨｅｐＧ２又はＨｕｈ７細胞及びＴ細胞と共にインキュベートした。ＲＴＣＣを示すデータを図３６～図３８に示す。１０：１のエフェクター：標的（ＨｅｐＧ２）比では、ｂｓＡｂ ＸＥＮＰ３４９２０、ＸＥＮＰ３７４３０、ＸＥＮＰ３７６２５、及びＸＥＮＰ３７６２４は、コンパレータＸＥＮＰ３１３０８と同様の効力（１００ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０未満）を示した。他のｂｓＡｂであるＸＥＮＰ３５８４３、ＸＥＮＰ３６９３５、ＸＥＮＰ３７４３３、及びＸＥＮＰ３７６２６の効力ははるかに低かったが、より高い濃度で有効な死滅を達成することができ、ＸＥＮＰ３６９３９は、死滅を示さなかった。特に、より低密度のＨｕｈ７及びより低いエフェクター：標的比において、本発明のｂｓＡｂのいくつか（例えば、ＸＥＮＰ３４９２０、ＸＥＮＰ３６９３５、及びＸＥＮＰ３７６２５）は、ＸＥＮＰ３１３０８コンパレータと比較して、ＥＣ５０においてはるかに大きな差を示し、治療指数の増強の可能性を示す。更に、ＧＰＣ３ｈｉｇｈ ＨｅｐＧ２及びＧＰＣ３ｍｅｄ Ｈｕｈ７標的細胞を、１０μｇ／ｍＬの濃度の被験物質を用いて１０：１のＥ：Ｔ比で処理した場合、２４～１４４時間の範囲の異なる時点にわたって、同様の結果が見られた。図３９～図４０に示されるように、ＸＥＮＰ３４９２０、ＸＥＮＰ３７４３０、ＸＥＮＰ３６９３５、ＸＥＮＰ３７６２４、及びＸＥＮＰ３７６２５など親和性を離調したαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂは、ＨｅｐＧ２標的細胞及びＨｕｈ７標的細胞の両方において経時的に腫瘍増殖を阻害するのに有効であり、それらの有効性はＸＥＮＰ３１３０８の有効性と非常に類似していた。
３Ｇ：３ＤスフェロイドＲＴＣＣモデルを使用した、αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂの更なる特徴付け
更なるＲＴＣＣシステムを使用して、親和性を離調したαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを更に調査した。このシステムでは、標的腫瘍細胞は、３Ｄスフェロイドフォーマットで増殖し、これは、平面の単層で増殖する細胞と比較して、生理学的にインビボ腫瘍により類似している。この実験では、１，０００個のＨｅｐＧ２細胞（２４時間の倍加時間を有する）を播種し、７２～９６時間増殖させてから、１０ｕｇ／ｍＬの濃度の示されたｂｓＡｂと共に４０，０００個のＰＢＭＣを添加する（約３：１のＥ：Ｔ比となる）。各シグナル（腫瘍又は免疫細胞）の強度を、異なる時点にわたって各ウェルにわたって積分し、このデータを図４１～図４２に示す。図４３は更に、腫瘍細胞及びＰＢＭＣを撮影した写真画像を示す。ＰＢＳ処理のみでは、腫瘍スフェロイド及びそれらの周囲にクラスター化したＰＢＭＣは経時的に変化しないままであるが、αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂで処理した場合、ＰＢＭＣは（図４２に定量的に示すように）劇的に増殖し、腫瘍細胞は（図４１に定量的に示すように）破壊される。ＸＥＮＰ３６９３９を除く全てのαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂは、１４４時間後に１００％の有効性を示す。
更なるＲＴＣＣシステムを使用して、親和性を離調したαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂを更に調査した。このシステムでは、標的腫瘍細胞は、３Ｄスフェロイドフォーマットで増殖し、これは、平面の単層で増殖する細胞と比較して、生理学的にインビボ腫瘍により類似している。この実験では、１，０００個のＨｅｐＧ２細胞（２４時間の倍加時間を有する）を播種し、７２～９６時間増殖させてから、１０ｕｇ／ｍＬの濃度の示されたｂｓＡｂと共に４０，０００個のＰＢＭＣを添加する（約３：１のＥ：Ｔ比となる）。各シグナル（腫瘍又は免疫細胞）の強度を、異なる時点にわたって各ウェルにわたって積分し、このデータを図４１～図４２に示す。図４３は更に、腫瘍細胞及びＰＢＭＣを撮影した写真画像を示す。ＰＢＳ処理のみでは、腫瘍スフェロイド及びそれらの周囲にクラスター化したＰＢＭＣは経時的に変化しないままであるが、αＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂで処理した場合、ＰＢＭＣは（図４２に定量的に示すように）劇的に増殖し、腫瘍細胞は（図４１に定量的に示すように）破壊される。ＸＥＮＰ３６９３９を除く全てのαＧＰＣ３×αＣＤ３ ｂｓＡｂは、１４４時間後に１００％の有効性を示す。
３Ｄスフェロイドモデルはまた、低親和性Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃２ ＣＤ３結合ドメインを有する被験物質において予想外の結果をもたらした。一般に、２Ｄモデルの２＋１ ｂｓＡｂに関して、Ｈｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１結合ドメインとＨｉｇｈ－Ｉｎｔ＃２結合ドメインとの間のＣＤ３親和性の差は、図３８に見ることができるものなど、概ね１０倍の効力差をもたらす。しかしながら、この３Ｄモデルでは、ＸＥＮＰ３４９２０及びＸＥＮＰ３７６２４（両方とも同じ１００ｎＭのＧＰＣ３結合ドメインを有するが、ＸＥＮＰ３４９２０はＨｉｇｈ－Ｉｎｔ＃１ ＣＤ３結合ドメインを有し、ＸＥＮＰ３７６２４はＨｉｇｈ－Ｉｎｔ＃２結合ドメインを有する）は、非常に類似した効力曲線を示した。図４１に示されるように、インビボモデルをより厳密に模倣するはずであるこの３Ｄモデルの予期せぬ結果は、この文脈におけるより弱いＣＤ３結合剤の効力についての有用な洞察を提供する。
Ｄ．実施例４：最適な選択性及び治療指数を有するαＧＰＣ３ｘαＣＤ３ ｂｓＡｂの同定
上記のインビトロ実験に基づいて、インビボで更に分析するためにいくつかのｂｓＡｂを選択した。これらの抗体をＸｔＥｎｄ Ｆｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）で更に操作して血清半減期を高め、例示的な配列を図１７、図１９、及び図２０にＸＥＮＰ３８０８６（ＸＥＮＰ３４９２０に対するＸｔＥｎｄ類似体）、ＸＥＮＰ３８０８７（ＸＥＮＰ３６９３５に対するＸｔＥｎｄ類似体）、及びＸＥＮＰ３８２３２（ＸＥＮＰ３７６２５に対するＸｔＥｎｄ類似体）として示した。
上記のインビトロ実験に基づいて、インビボで更に分析するためにいくつかのｂｓＡｂを選択した。これらの抗体をＸｔＥｎｄ Ｆｃ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）で更に操作して血清半減期を高め、例示的な配列を図１７、図１９、及び図２０にＸＥＮＰ３８０８６（ＸＥＮＰ３４９２０に対するＸｔＥｎｄ類似体）、ＸＥＮＰ３８０８７（ＸＥＮＰ３６９３５に対するＸｔＥｎｄ類似体）、及びＸＥＮＰ３８２３２（ＸＥＮＰ３７６２５に対するＸｔＥｎｄ類似体）として示した。
１．４Ａ：カニクイザルにおける毒性についてのインビボ調査
カニクイザルの研究は、インビトロでの改善（すなわち、ＧＰＣｌｏｗ標的細胞を上回るＧＰＣｈｉｇｈに対する選択性、及びＧＰＣｌｏｗ細胞の存在下でのサイトカイン放出の低減）がインビボ設定における安全性の改善につながるかどうかを調査するために計画される。第１相用量漸増試験において、動物（ｎ＝１）に、１倍、３倍、１０倍、３０倍、及び６０倍用量のＸＥＮＰ３８０８６、ＸＥＮＰ３８０８７、又はＸＥＮＰ３８２３２を静脈内投与する。血液を採取して、サイトカイン放出症候群の指標としてＩＬ－６濃度を測定する。動物は、毒性の更なる徴候を調査するために屠殺され得る。
カニクイザルの研究は、インビトロでの改善（すなわち、ＧＰＣｌｏｗ標的細胞を上回るＧＰＣｈｉｇｈに対する選択性、及びＧＰＣｌｏｗ細胞の存在下でのサイトカイン放出の低減）がインビボ設定における安全性の改善につながるかどうかを調査するために計画される。第１相用量漸増試験において、動物（ｎ＝１）に、１倍、３倍、１０倍、３０倍、及び６０倍用量のＸＥＮＰ３８０８６、ＸＥＮＰ３８０８７、又はＸＥＮＰ３８２３２を静脈内投与する。血液を採取して、サイトカイン放出症候群の指標としてＩＬ－６濃度を測定する。動物は、毒性の更なる徴候を調査するために屠殺され得る。
Claims (52)
- ＧＰＣ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を含む組成物であって、前記ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択される可変重鎖ドメイン（ＶＨ）／可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを含む、組成物。
- 前記ＡＢＤは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を有する、請求項１に記載の組成物。
- 前記ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される、請求項２に記載の組成物。
- 前記組成物はモノクローナル抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
- 核酸組成物であって、
ａ）ＶＨドメインをコードする第１の核酸と、
ｂ）ＶＬドメインをコードする第２の核酸と、を含み、前記ＶＨ及び前記ＶＬは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択される対である、核酸組成物。 - 発現ベクター組成物であって、
ａ）請求項５に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）請求項５に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、をそれぞれ含む、発現ベクター組成物。 - 請求項５に記載の第１の核酸及び第２の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項６に記載の発現ベクター組成物又は請求項７に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
- 抗ＧＰＣ３ ＡＢＤを作製する方法であって、前記ＡＢＤが発現する条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養することと、前記ＡＢＤを回収することと、を含む、方法。
- ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）第１の単量体であって、
ｉ）第１の可変軽鎖ドメイン、ｓｃＦｖリンカー、及び第１の可変重鎖ドメインを含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖと、
ｉｉ）第１のＦｃドメインと、を含み、前記ｓｃＦｖは、ドメインリンカーを使用して前記第１のＦｃドメインのＮ末端に共有結合している、第１の単量体と、
ｂ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体を含む第２の単量体であって、ＶＨは第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）第２の可変軽鎖ドメインを含む軽鎖と、を含み、
前記第２の可変重鎖ドメイン及び前記第２の可変軽鎖ドメインは、ＧＰＣ３抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）を形成する、ヘテロ二量体抗体。 - 前記ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを含む、請求項１０に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む、請求項１０又は１１に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ＧＰＣ３結合ドメインは、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む、請求項１０又は１１に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるＶＨ及びＶＬ対を含む、請求項１０～１３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ｓｃＦｖリンカーは荷電ｓｃＦｖリンカーである、請求項１０～１５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１のＦｃドメイン及び前記第２のＦｃドメインはバリアントＦＣドメインである、請求項１０～１６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１の単量体及び前記第２の単量体は、図１Ａ～図１Ｅに示されるものからなる群から選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む、請求項１６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 選択される前記ヘテロ二量体化バリアントのセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ、Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ、及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖからなる群から選択され、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項１７に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１の単量体及び前記第２の単量体は１個以上の除去バリアントを更に含む、請求項１７又は１８に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記１個以上の除去バリアントはＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項１９に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１の単量体又は前記第２の単量体のうちの１つは１個以上のｐＩバリアントを含む、請求項１０～２０のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ｐＩバリアントはＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項２１に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１の単量体は、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第２の単量体は、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
番号付けは、ＥＵの番号付けに従う、請求項１０～２２のいずれか一向に記載のヘテロ二量体抗体。 - 前記第１の単量体及び前記第２の単量体はそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含む、請求項２３に記載のヘテロ二量体抗体。
- ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ｓｃＦｖ－リンカー－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、
ｓｃＦｖは抗ＣＤ３ ｓｃＦＶであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）ＶＬ－ＣＬを含む軽鎖と、を含み、
第１のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、
第２のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、
前記第１のバリアントＦｃドメイン及び前記第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第２の単量体の前記ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬは、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９から選択されるＧＰＣ３結合ドメインの前記可変重鎖ドメイン及び前記可変軽鎖ドメインをそれぞれ含むＧＰＣ３結合ドメインを形成し、
前記抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１から選択されるＣＤ３結合ドメインの前記可変重鎖ドメイン及び前記可変軽鎖ドメインを含み、
番号付けは、ＥＵの番号付けに従う、ヘテロ二量体抗体。 - 前記第１のバリアントＦｃドメイン及び前記第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項２５に記載のヘテロ二量体抗体。
- 核酸組成物であって、
ａ）請求項１０～２６のいずれか一項に記載の第１の単量体をコードする第１の核酸と、
ｂ）請求項１０～２６のいずれか一項に記載の第２の単量体をコードする第２の核酸と、
ｃ）請求項１０～２６のいずれか一項に記載の軽鎖をコードする第３の核酸と、をそれぞれ含む、核酸組成物。 - 発現ベクター組成物であって、
ａ）請求項２６に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）請求項２６に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、
ｃ）請求項２６に記載の第３の核酸を含む第３の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。 - 請求項２８に記載の発現ベクター組成物で形質転換された、宿主細胞。
- ヘテロ二量体抗体を作製する方法であって、前記抗体が発現する条件下で請求項２９に記載の宿主細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、方法。
- ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー１－ｓｃＦｖ－リンカー２－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、
ＶＨ１は第１の可変重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖは抗ＣＤ３ ｓｃＦＶであり、リンカー１及びリンカー２は、それぞれ第１のドメインリンカー及び第２のドメインリンカーであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＶＨ２は第２の可変重鎖ドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）可変軽鎖ドメインを含む共通軽鎖と、を含み、
前記第１の可変重鎖ドメイン及び前記可変軽鎖ドメインは第１のＧＰＣ３ ＡＢＤを形成し、前記第２の可変重鎖ドメイン及び前記可変軽鎖ドメインは第２のＧＰＣ３ ＡＢＤを形成する、ヘテロ二量体抗体。 - 前記第１のＧＰＣ３結合ドメイン及び前記第２のＧＰＣ３結合ドメインはそれぞれ、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを含む、請求項３１に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１のＧＰＣ３結合ドメイン及び前記第２のＧＰＣ３結合ドメインのそれぞれは、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６６、Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．２＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．３＿Ｌ１．７３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．４、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．１６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２３、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．２９、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．３１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６５、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６６、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６７、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．６８、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７０、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７１、［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７２、及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．４＿Ｌ１．７３からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対を有する、請求項３１～３２に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ＶＨ／ＶＬ対は、［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．１６及び［ＧＰＣ３］Ｈ１．１＿Ｌ１．６９からなる群から選択される、請求項３１～３３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１からなる群から選択されるＶＨ／ＶＬ対由来の６個のＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）のセットを有する、請求項３１～３５のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ｓｃＦｖは、次のＣＤ３結合ドメイン、すなわちＨ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１のいずれかの前記可変重鎖ドメイン及び前記可変軽鎖ドメインを含む、請求項３５に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１のＦｃドメイン及び前記第２のＦｃドメインはバリアントＦｃドメインである、請求項３１～３６のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１の単量体及び前記第２の単量体は、図１Ａ～１Ｅに示されるものからなる群から選択されるヘテロ二量体化バリアントのセットを含む、請求項３１～３７のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 選択される前記ヘテロ二量体化バリアントのセットは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ、Ｓ３６４Ｋ：Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ、Ｄ４０１Ｋ：Ｔ４１１Ｅ／Ｋ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ、及びＴ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖからなる群から選択され、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項３８に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１の単量体及び前記第２の単量体は１個以上の除去バリアントを更に含む、請求項３１～３９のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記１個以上の除去バリアントはＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項４０に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１の単量体又は前記第２の単量体のうちの１つは１個以上のｐＩバリアントを更に含む、請求項３１～４１のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記ｐＩバリアントはＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄであり、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項４２に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第２のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ／Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項３１～４３のいずれか一項に記載のヘテロ二量体抗体。 - 前記ｓｃＦｖリンカーは、アミノ酸配列（ＧＫＰＧＳ）４（配列番号：１５）を有する荷電ｓｃＦｖリンカーである、請求項４４に記載のヘテロ二量体抗体。
- 前記第１のバリアントＦｃドメイン及び前記第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含み、番号付けは、ＥＵ番号付けに従う、請求項４５に記載のヘテロ二量体抗体。
- ヘテロ二量体抗体であって、
ａ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－リンカー１－ｓｃＦｖ－リンカー２－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第１の単量体であって、
ｓｃＦｖは抗ＣＤ３ ｓｃＦＶであり、ＣＨ２－ＣＨ３は第１のＦｃドメインである、第１の単量体と、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む第２の単量体であって、ＣＨ２－ＣＨ３は第２のＦｃドメインである、第２の単量体と、
ｃ）ＶＬ－ＣＬを含む共通軽鎖と、を含み、
第１のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含み、
第２のバリアントＦｃドメインは、アミノ酸バリアントＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、
前記第１のバリアントＦｃドメイン及び前記第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアントＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、
前記第２の単量体の前記ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３は、アミノ酸バリアントＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄを含み、
前記ＶＨ及び前記ＶＬは、Ｈ１．９＿Ｌ１．１８７、Ｈ１．２４＿Ｌ１．１８７、Ｈ２．９１＿Ｌ１．１８７、及びＨ１．９＿Ｌ１．１８７から選択されるＧＰＣ３ ＡＢＤの前記可変重鎖ドメイン及び前記可変軽鎖ドメインを含み、
前記抗ＣＤ３ ｓｃＦｖは、Ｈ１．３０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３２＿Ｌ１．４７、Ｈ１．８９＿Ｌ１．４７、Ｈ１．９０＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３３＿Ｌ１．４７、Ｈ１．３１＿Ｌ１．４７、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３２、Ｌ１．４７＿Ｈ１．８９、Ｌ１．４７＿Ｈ１．９０、Ｌ１．４７＿Ｈ１．３３、及びＬ１．４７＿Ｈ１．３１から選択されるＣＤ３結合ドメインの前記可変重鎖ドメイン及び前記可変軽鎖ドメインを含み、
番号付けは、ＥＵの番号付けに従う、ヘテロ二量体抗体。 - 前記第１のバリアントＦｃドメイン及び前記第２のバリアントＦｃドメインはそれぞれ、アミノ酸バリアント４２８／４３４Ｓを更に含む、請求項４７に記載のヘテロ二量体抗体。
- 核酸組成物であって、
ａ）請求項３１～４８のいずれか一項に記載の第１の単量体をコードする第１の核酸と、
ｂ）請求項３１～４８のいずれか一項に記載の第２の単量体をコードする第２の核酸と、
ｃ）請求項３１～４８のいずれか一項に記載の軽鎖をコードする第３の核酸と、をそれぞれ含む、核酸組成物。 - 発現ベクター組成物であって、
ａ）請求項４９に記載の第１の核酸を含む第１の発現ベクターと、
ｂ）請求項４９に記載の第２の核酸を含む第２の発現ベクターと、
ｃ）請求項４９に記載の第３の核酸を含む第３の発現ベクターと、を含む、発現ベクター組成物。 - 請求項５０に記載の発現ベクター組成物で形質転換された、宿主細胞。
- ヘテロ二量体抗体を作製する方法であって、前記抗体が発現する条件下で請求項５１に記載の宿主細胞を培養することと、前記抗体を回収することと、を含む、方法。
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