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JP4407322B2 - ペプチドの製造方法 - Google Patents

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JP4407322B2
JP4407322B2 JP2004066256A JP2004066256A JP4407322B2 JP 4407322 B2 JP4407322 B2 JP 4407322B2 JP 2004066256 A JP2004066256 A JP 2004066256A JP 2004066256 A JP2004066256 A JP 2004066256A JP 4407322 B2 JP4407322 B2 JP 4407322B2
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Description

本発明は、ペプチド、とりわけ、黄体ホルモン放出ホルモン（Luteinizing Hormone-Releasing Hormone：以下、「ＬＨＲＨ」と略記する場合もある。）アンタゴニスト中間体の製造方法に関する。
ＬＨＲＨアンタゴニストとしては、例えば、
Cetrolelix:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2；
Antarelix:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-Tyr-Hci-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2；
Abarelix:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-Tyr(NCH3)-D-Asn-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2；
Ganirelix:
Ac-D-2Nal-D-4ClPhe-D-3Pal-Ser-Tyr-D-Lys(C(EtNH)2)-Leu-Lys(C(EtNH)2)-Pro-D-Ala-NH2などが知られている。
上記ＬＨＲＨアンタゴニストの共通重要中間体は、式［Ｉ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ ［Ｉ］
で表されるトリペプチドである（Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニル−Ｄ−３−ピリジルアラニン）。
上記式および本願明細書において、
Ａｃは、アセチルを示し、
２Ｎａｌは、式：
Figure 0004407322
で表される２価の基を示し、
４ＣｌＰｈｅは、式：
Figure 0004407322
で表される２価の基を示し、
３Ｐａｌは、式：
Figure 0004407322
で表される２価の基を示し、
Ｄは、Ｄ体を示す接頭語であり、
Ｌは、Ｌ体を示す接頭語である。
上記式［Ｉ］で表されるトリペプチドの製造方法において、例えば、Ｂｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨ［本願明細書において、Ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を示す。］を活性化（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドとの反応）後に、Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ ２ＨＣｌと縮合し、ジペプチド：Ｂｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨを得る。次いで、脱Ｂｏｃ化によりＨ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ―ＯＨを調製し、Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨを別途活性化（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドとの反応を含む）させたものと縮合させ、Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨを得る。再度、脱Ｂｏｃ化を行い、Ｎ末端をアセチル化することにより目的のトリペプチドを得ている（特許文献１を参照のこと）。
しかし、この方法は、Ｂｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨを用いていることから、Ｂｏｃ基の脱保護および／またはアセチル基への変換が必要であるため、工程数が多くなるなどの問題がある。また、脱Ｂｏｃ化したＮ−無保護ペプチドは、吸湿性が高く、取り扱いが困難である。従って、最終トリペプチドの純度も９３．９％（ＨＰＬＣ Ａｒｅａ％）と低い。
また、上記と同様Ｃ末端からの合成法において、Ｂｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨと、Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ ２ＨＣｌとを縮合し、ジペプチド：Ｂｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅを合成し、脱Ｂｏｃ化後、Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨと縮合し、トリペプチド：Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ（収率８５．４％）を得ている（特許文献２を参照のこと）。しかし、式［Ｉ］で表されるトリペプチドを得るためには、上記と同様に、Ｂｏｃ基からアセチル基への変換が必要であり、また、吸湿性の高いＮ−無保護ペプチドを経由しなくてはならない。
別法として、Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨと、Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＭｅ ＨＣｌとを縮合した後、脱Ｂｏｃ化、アセチル化を行い、ジペプチド：Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＭｅ（収率８５．７％）を得る方法がある（特許文献３を参照のこと）。この方法も保護基の変換（Ｂｏｃ→Ａｃ）が必要であり、工程数が増える。このジペプチドを加水分解することにより、Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨ（収率８８．０％）を得るが、Ｄ−４ＣｌＰｈｅ部分がラセミ化し、Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｌ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨが２．６％混入し、純度も９３．７％（ＨＰＬＣ Ａｒｅａ％）と低い（特許文献４を参照のこと）。
また、概して、アセチルアミノ酸を出発原料として用いた場合、ラセミ化の進行が多く見られることが報告されている（非特許文献１を参照のこと）。
ラセミ化が進行すると、煩雑なジアステレオマーの抽出工程および／またはカラム精製工程が必要となり、工程数が増加する傾向にある。
従って、当該分野では、より工程数の少ないＬＨＲＨアンタゴニスト中間体：式［Ｉ］で表される化合物の製造方法、ならびに、高収率および高純度で目的とする中間体が得られる方法が切望されている。
国際公開第０３／０５５９０２号パンフレット 国際公開第９７／０３４９２４号パンフレット 国際公開第９９／０２６９６４号パンフレット 米国特許第６,４９２,４９０号明細書 Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．２８，１９８６，４４４−４４９，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，７４，１９９１，６１７−６２７
本発明の目的は、従来と比較して工程数が少なく、なおかつ、高収率および高純度でＬＨＲＨアンタゴニスト中間体を得ることができる、ＬＨＲＨアンタゴニスト中間体製造方法の提供である。
本発明者は、上記問題点に鑑み、鋭意検討した結果、ＬＨＲＨアンタゴニスト中間体の製造方法において、出発原料として、式［ＩＩ］：Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨで表される化合物、その塩、またはその反応性誘導体を用いることによって、煩雑な保護−脱保護工程を省略することができ、また、ジアステレオマーの抽出工程、カラム精製工程なども省略することができることを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本願発明は、以下に示す通りである。
〔１〕工程（１）〜（４）の少なくとも１つを包含する式［Ｉ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ ［Ｉ］
で表されるトリペプチドまたはその塩の製造方法：
（１）式［ＩＩ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨ ［ＩＩ］
で表される化合物、その塩、またはその反応性誘導体と、式［ＩＩＩ］：
Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲ１ ［ＩＩＩ］
（式中、Ｒ１は、メチル、エチルまたはベンジルを示す。）
で表される化合物またはその塩とを縮合させることによって、式［ＩＶ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲ１ ［ＩＶ］
（式中、Ｒ１は上記定義の通りである。）
で表される化合物を調製する工程；
（２）上記式［ＩＶ］で表される化合物を加水分解反応に付し、式［Ｖ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨ ［Ｖ］
で表される化合物またはその塩を調製する工程；
（３）上記式［Ｖ］で表される化合物、その塩、またはその反応性誘導体と、式［ＶＩ］：
Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２ ［ＶＩ］
（式中、Ｒ２は、メチル、エチルまたはベンジルを示す。）
で表される化合物またはその塩とを縮合させることによって、式［ＶＩＩ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２ ［ＶＩＩ］
（式中、Ｒ２は上記定義の通りである。）
で表される化合物またはその塩を調製する工程；および
（４）上記式［ＶＩＩ］で表される化合物またはその塩を加水分解反応に付し、上記式［Ｉ］で表されるトリペプチドまたはその塩を得る工程。
〔２〕式［ＩＩ］で表される化合物の反応性誘導体が、式［ＩＩａ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＲａ ［ＩＩａ］
（式中、Ｒａは、
Figure 0004407322
からなる群から選択される基を示す。）
で表される化合物である、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔３〕Ｒ１がメチルである、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔４〕式［ＩＩＩ］で表される化合物の塩が、Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＭｅ ＨＣｌである、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔５〕Ｒ２がメチルである、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔６〕式［ＶＩ］で表される化合物の塩が、Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ ２ＨＣｌである、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔７〕式［Ｖ］で表される化合物の反応性誘導体が、式［Ｖａ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲａ ［Ｖａ］
（式中、Ｒａは、
Figure 0004407322
からなる群から選択される基を示す。）
で表される化合物である、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔８〕工程（２）の加水分解反応において塩基を用いる、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔９〕塩基が水酸化ナトリウムである、上記〔８〕に記載の製造方法。
〔１０〕工程（２）の加水分解反応において、溶媒として、テトラヒドロフランを用いる、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔１１〕工程（４）の加水分解反応において塩基を用いる、上記〔１〕に記載の製造方法。
〔１２〕塩基が水酸化ナトリウムである、上記〔１１〕に記載の製造方法。
〔１３〕工程（４）の加水分解反応において、溶媒として、テトラヒドロフランと水との混合溶媒を用いる、上記〔１〕に記載の製造方法。
上記式［Ｉ］で表されるトリペプチド（以下、トリペプチド［Ｉ］と略記する場合もある。）またはその塩の製造方法を以下のスキームを参照しながら詳細に説明する。
Figure 0004407322
スキーム中、Ｒ１は、メチル、エチルまたはベンジルを示し、Ｒ２は、メチル、エチルまたはベンジルを示す。
当該方法の特徴は、わずか４工程［上記スキームに示す工程（１）〜（４）］でトリペプチド［Ｉ］またはその塩を製造することができる点にある。また、当該方法における各工程での抽出、濃縮、カラム精製は不要であり、反応液の分離（例えば、濾過など）および／またはスラリー洗浄のみで高純度のトリペプチド［Ｉ］またはその塩を高収率で得ることが可能である。
本願明細書中、トリペプチド［Ｉ］の塩としては、特に限定はなく、例えば、酸付加塩［例えば、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸など）との塩、有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸など）との塩など］；無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属；アンモニアなど）との塩；有機塩基（例えば、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、Ｎ−メチルモルホリン、ジイソプロピルエチルアミン、シクロへキシルアミン、ジシクロヘキシルアミンなど）との塩などが挙げられる。
以下、各工程について詳細に説明する。
工程（１）は、式［ＩＩ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨ ［ＩＩ］
で表される化合物（以下、化合物［ＩＩ］と略記する場合もある。）、その塩、またはその反応性誘導体と、式［ＩＩＩ］：
Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲ１ ［ＩＩＩ］
（式中、Ｒ１は、メチル、エチルまたはベンジルを示す。）
で表される化合物（以下、化合物［ＩＩＩ］と略記する場合もある。）またはその塩との縮合反応工程である。
化合物［ＩＩ］は、当業者に公知の方法によって合成することもできるが、市販品を用いてもよい。
工程（１）で使用する化合物［ＩＩ］の反応性誘導体としては、当業者に公知の方法に従って化合物［ＩＩ］から誘導され得るものであれば特に限定はないが、例えば、式［ＩＩａ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＲａ ［ＩＩａ］
（式中、Ｒａは、
Figure 0004407322
からなる群から選択される基を示す。）
で表される化合物（以下、化合物［ＩＩａ］と略記する場合もある。）などが挙げられる。
化合物［ＩＩａ］は、化合物［ＩＩ］から、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）無水物および１水和物、好ましくは１水和物、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、エンドＮ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシミド（ＨＯＮＢ）、３−ヒドロキシ−１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン（ＨＯＯＢｔ）等の添加剤および下記例示の縮合剤を反応系に添加することによって容易に得ることができる。
添加剤の構造を以下に示す。
Figure 0004407322
反応系に添加剤を添加することによって、化合物［ＩＩ］の反応性の向上、ラセミ化の抑制などの効果が得られる。なかでも、ラセミ化の抑制、除去の容易性、コストの観点から、ＨＯＢｔ １水和物が好ましい。
上記添加剤の使用量は、化合物［ＩＩ］１モルに対して、０．５〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．１モルである。
縮合剤としては、例えば、１，３−ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド 塩酸塩（ＥＤＣＩ ＨＣｌ）等が挙げられ、なかでも、反応後に副生する尿素誘導体を容易に淘汰することができるので、ＥＤＣＩ ＨＣｌが好ましい。
縮合剤の使用量は、化合物［ＩＩ］またはその塩１モルに対して、１．０〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．１モルである。
化合物［ＩＩａ］は、予め別途調製していてもよい。
化合物［ＩＩ］の塩としては、例えば、上記トリペプチド［Ｉ］の塩として例示した無機塩基との塩、有機塩基との塩などが挙げられる。
工程（１）で使用する化合物［ＩＩＩ］は、当業者に公知の方法によって合成することもできるが、市販品を用いてもよい。
化合物［ＩＩＩ］としては、調製の容易性、コストの観点から、Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＭｅ（Ｒ１＝メチル）が好ましい。
化合物［ＩＩＩ］の塩としては、例えば、上記トリペプチド［Ｉ］の塩として例示した酸付加塩などが挙げられ、なかでも、塩酸塩（より好ましくは１塩酸塩）が好ましい。
化合物［ＩＩＩ］の塩として、特に、Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＭｅ ＨＣｌが好ましい。
化合物［ＩＩＩ］またはその塩の使用量は、化合物［ＩＩ］、その塩、またはその反応性誘導体１モルに対して、１．０〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．１モルである。
反応溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）等が挙げられる。生成物と、ジアステレオマー、添加剤、縮合剤等との分離の観点から、アセトニトリルが好ましい。
反応溶媒の使用量は、化合物［ＩＩ］の重量に対して、５〜５０倍、好ましくは１０〜３０倍、より好ましくは２０〜２５倍である。
また、化合物［ＩＩＩ］が塩である場合、反応系に、さらに、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）等の塩基を添加する。なかでも、反応性、コストの観点から、トリエチルアミンおよびＮＭＭが好ましい。
塩基の使用量は、化合物［ＩＩＩ］の塩１モルに対して、１．０〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．１モル、さらに好ましくは１．０モルである。
反応時間は、通常３〜４８時間、好ましくは６〜２４時間、より好ましくは８〜１２時間である。
反応温度は、通常−１０〜４０℃、好ましくは０〜２５℃、より好ましくは１０〜２０℃である。
反応終了後、析出した結晶を分離（例えば、濾過など）、必要に応じて、乾燥（例えば、減圧下、４０℃）することにより、式［ＩＶ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲ１ ［ＩＶ］
（式中、Ｒ１は上記定義の通りである。）
で表される化合物（以下、化合物［ＩＶ］と略記する場合もある。）が得られる。
分離後、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、水などの溶媒、およびこれらの溶媒と水との混合溶媒（混合比は特に限定されない）などで化合物［ＩＶ］を洗浄してもよい。
洗浄の際に使用する溶媒の量（全量）は、化合物［ＩＩ］の重量に対して、０．５〜５倍、好ましくは１〜３倍、より好ましくは２〜２．５倍である。
工程（１）において、（Ｎ末端がアセチル基で保護されている）化合物［ＩＩ］またはその塩を出発原料として使用しているので、従来技術のようなＮ末端の保護・脱保護、保護基のアセチル基への変換は不要である。よって、保護・脱保護および保護基の変換に伴う、吸湿性の高いＮ−無保護ペプチドの使用を回避することができる。また、工程（１）においてラセミ化が進行し、ジアステレオマーであるＡｃ−Ｌ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲ１も生成するが、ジアステレオマーは、化合物［ＩＶ］に対して２〜４ ａｒｅａ％程度であり、濾過の際に完全に母液に淘汰され、化合物［ＩＶ］が高純度・高収率で得られる（純度９９．０ ａｒｅａ％以上、収率９０．０〜９３．０％）。
従って、工程（１）において、従来必要であったジアステレオマーの抽出、濃縮、カラム精製は不要となり、結果、総工程数を少なくすることができる。
単位「ａｒｅａ％」は、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）におけるピーク面積比を百分率で表したものである。
工程（１）におけるＨＰＬＣ条件は、カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−２（４．６×１５０ｍｍ）、溶離液 ０．０５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ３）：ＣＨ３ＣＮ＝６０：４０、波長：２１０ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度：室温（約１５〜２５℃）である。
工程（２）は、化合物［ＩＶ］を加水分解反応に付し、式［Ｖ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨ ［Ｖ］
で表される化合物（以下、化合物［Ｖ］と略記する場合もある。）またはその塩を得る工程である。
化合物［Ｖ］の塩としては、例えば、上記トリペプチド［Ｉ］の塩として例示した無機塩基との塩、有機塩基との塩などが挙げられる。
工程（２）で使用する溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、もしくはこれらの有機溶媒と水との混合溶液等が挙げられる。反応速度およびラセミ化抑制の観点から、テトラヒドロフランが好ましい。
上記有機溶媒と、水との混合溶媒を用いる場合、その混合比（有機溶媒：水）に特に限定はなく、通常９９：１〜１：９９（ｖ／ｖ）、好ましくは２０：８０〜７０：３０（ｖ／ｖ）、より好ましくは４０：６０〜５０：５０（ｖ／ｖ）である。
溶媒の使用量（全量）は、化合物［ＩＶ］の重量に対して、５〜３０倍、好ましくは１０〜２０倍、より好ましくは１０〜１５倍である。
工程（２）の加水分解反応は、酸性条件下では脱アセチル化反応が進行する可能性があるため、塩基の存在下で行うのが好ましい。
塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。なかでも、コストの観点から、水酸化ナトリウムが好ましい。
塩基の使用量は、化合物［ＩＶ］１モルに対して、１．０〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．１モル、さらにより好ましくは１．０５モルである。
また、上記塩基の水溶液を用いてもよい。塩基水溶液を調製する場合、水の使用量は、塩基１モルに対して、０．２〜５Ｌ、好ましくは０．４〜２Ｌ、より好ましくは０．５〜１Ｌである。
反応時間は、通常２〜２４時間、好ましくは４〜１８時間、より好ましくは６〜１２時間である。
反応温度は、通常−２０〜５０℃、好ましくは−２０〜２０℃、より好ましくは０〜５℃である。
加水分解反応終了後、反応で使用した有機溶媒の１〜３倍、好ましくは１．５倍容量の水を加え、酸を用いてｐＨを通常４．０〜１．０、好ましくは２．５〜１．５、より好ましくは２とし、化合物［Ｖ］を晶析させる。
使用する酸としては、例えば、塩酸、硫酸等が挙げられる。使用する酸の濃度および量は上記ｐＨの範囲を達成できるものであれば、特に限定されない。
析出した結晶を分離（例えば、濾過など）、必要に応じて、乾燥（例えば、減圧下、４０℃）することにより、化合物［Ｖ］を高純度、高収率で得ることができる（純度９８．０ ａｒｅａ％以上、収率９３〜９８％）。得られた化合物［Ｖ］を公知の方法に従って上記トリペプチド［Ｉ］の塩で例示した無機塩基または有機塩基との塩などに変換してもよい。
上記分離後（但し、乾燥前）、例えば、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、水などの溶媒、およびこれらの溶媒と水との混合溶媒（混合比は特に限定されない）で化合物［Ｖ］を洗浄してもよい。
洗浄の際に使用する溶媒の量（全量）は、化合物［ＩＶ］の重量に対して、０．５〜５倍、好ましくは１〜３倍、より好ましくは２〜２．５倍である。
また、工程（２）においてラセミ化が進行し、ジアステレオマーであるＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｌ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨも生成するが、ジアステレオマーは、化合物［Ｖ］に対して０．５〜１．０ ａｒｅａ％程度であり、分離・洗浄後、化合物［Ｖ］が高純度、高収率で得られる（純度９９．０ ａｒｅａ％以上、収率９３．０〜９８．０％）。
従って、工程（２）においても、ジアステレオマーの抽出、濃縮、カラム精製は不要となり、結果、総工程数を少なくすることができる。
工程（２）におけるＨＰＬＣ条件は、カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−２（４．６×１５０ｍｍ）、溶離液 ０．０５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ３）：ＣＨ３ＣＮ＝６５：３５、波長：２１０ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度：室温（約１５〜２５℃）である。
工程（３）は、化合物［Ｖ］、その塩、またはその反応性誘導体と、式［ＶＩ］：
Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２ ［ＶＩ］
（式中、Ｒ２は、メチル、エチルまたはベンジルを示す。）
で表される化合物（以下、化合物［ＶＩ］と略記する場合もある。）またはその塩との縮合反応工程である。
工程（３）で使用する化合物［Ｖ］の反応性誘導体としては、当業者に公知の方法に従って化合物［Ｖ］から誘導され得るものであれば特に限定はないが、例えば、式［Ｖａ］：Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲａ ［Ｖａ］
（式中、Ｒａは、上記に定義する通りであり、上記化合物［ＩＩａ］におけるＲａとは独立して、同一であっても、異なっていてもよい。）
で表される化合物（以下、化合物［Ｖａ］と略記する場合もある。）などが挙げられる。
化合物［Ｖａ］は、化合物［Ｖ］から、例えば、ＨＯＳｕ、ＨＯＢｔ 無水物および１水和物、好ましくは１水和物、ＨＯＰｈｔ、ＨＯＡｔ、ＨＯＮＢ、ＨＯＯＢｔ等の添加剤および下記例示の縮合剤を反応系に添加することによって容易に得ることができる。
反応系に上記添加剤を添加することによって、化合物［Ｖ］の反応性の向上、ラセミ化の抑制などの効果が得られる。なかでも、ラセミ化の抑制、除去の容易性、コストなどの観点から、ＨＯＢｔ １水和物が好ましい。
添加剤の使用量は、化合物［Ｖ］１モルに対して、０．５〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．２モルである。
縮合剤としては、例えば、ＤＣＣ、ＤＩＰＣＩ、ＥＤＣＩ ＨＣｌ等が挙げられ、なかでも、反応後に副生する尿素誘導体を淘汰することが容易であるので、ＥＤＣＩ ＨＣｌが好ましい。
縮合剤の使用量は、化合物［Ｖ］またはその塩１モルに対して、１．０〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．１モルである。
化合物［Ｖａ］は、予め別途調製していてもよい。
化合物［Ｖ］の塩としては、例えば、上記トリペプチド［Ｉ］の塩として例示した無機塩基との塩、有機塩基との塩などが挙げられる。
工程（３）で使用する化合物［ＶＩ］は、当業者に公知の方法によって合成することもできるが、市販品を用いてもよい。
化合物［ＶＩ］としては、調製の容易性、コストの観点から、Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ （Ｒ２＝メチル）が好ましい。
化合物［ＶＩ］の塩としては、例えば、上記トリペプチド［Ｉ］の塩として例示した酸付加塩などが挙げられ、なかでも、塩酸塩（より好ましくは２塩酸塩）が好ましい。
化合物［ＶＩ］の塩として、特に、Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ ２ＨＣｌが好ましい。
化合物［ＶＩ］またはその塩の使用量は、化合物［Ｖ］、その塩、またはその反応性誘導体１モルに対して、１．０〜１．５モル、好ましくは１．０〜１．２モル、より好ましくは１．０〜１．１モルである。
反応溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）等が挙げられる。生成物の単離の容易性、コスト、光学純度の観点から、アセトニトリルおよびＤＭＦが好ましく、特にアセトニトリルが好ましい。
反応溶媒の使用量は、化合物［Ｖ］の重量に対して、５〜５０倍、好ましくは１０〜４０倍、より好ましくは２５〜３０倍である。
さらに、反応系に、トリエチルアミン、ピリジン、ＮＭＭ、ＤＩＥＡ等の塩基、なかでも、反応性、コストの観点から、トリエチルアミンを添加することが好ましい。
塩基の使用量は、化合物［ＶＩ］１モルに対して、１．０〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．０５モル、さらに好ましくは１．０モルである。
化合物［ＶＩ］が塩の場合、塩基の使用量は、化合物［ＶＩ］の塩１モルに対して、２．０〜４．０モル、好ましくは２．０〜３．０モル、より好ましくは２．０〜２．１モル、さらに好ましくは２．０モルである。
反応時間は、通常３〜４８時間、好ましくは６〜２４時間、より好ましくは８〜１８時間である。
反応温度は、通常−１０〜４０℃、好ましくは０〜２５℃、より好ましくは１０〜２０℃である。
反応終了後、溶媒がＤＭＦの場合、用いたＤＭＦと同容量の水を反応系に添加することが好ましい。析出した結晶を分離（例えば、濾過など）することにより、式［ＶＩＩ］：
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２ ［ＶＩＩ］
（式中、Ｒ２は上記定義の通りである。）
で表される化合物（以下、化合物［ＶＩＩ］と略記する場合もある。）またはその塩を得る。化合物［ＶＩＩ］の塩としては、例えば、上記トリペプチド［Ｉ］の塩として例示した酸付加塩などが挙げられる。
また、分離後、例えば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、水などの溶媒、およびこれらの溶媒と水との混合溶媒（混合比は特に限定されない）などで化合物［ＶＩＩ］またはその塩を洗浄してもよい。
洗浄の際に使用する溶媒の量（全量）は、化合物［Ｖ］またはその塩の重量に対して、１〜１５倍、好ましくは２〜１０倍、より好ましくは４〜５倍である。
上記工程で得られる化合物［ＶＩＩ］が、ジアステレオマーであるＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｌ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２を含む場合もあるが、このジアステレオマーは、化合物［ＶＩＩ］に対して１．０ ａｒｅａ％以下（ただし、アセトニトリルの場合は、０．５ ａｒｅａ％以下）である。
工程（３）におけるＨＰＬＣ条件は、カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−２（４．６×１５０ｍｍ）、溶離液 ０．０５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ３）：ＣＨ３ＣＮ＝６５：３５、波長：２１０ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度：室温（約１５〜２５℃）である。
分離によって不要なジアステレオマーを母液に淘汰し、化合物［ＶＩＩ］またはその塩を高純度・高収率で得ることができるが、上記で得られた化合物［ＶＩＩ］またはその塩をスラリー洗浄することによってさらに簡便に効率よく精製することができる。
化合物［ＶＩＩ］またはその塩のスラリー洗浄は、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトン、ＤＭＦ等の有機溶媒、または、前記有機溶媒と水との混合溶液、好ましくはテトラヒドロフランと水との混合溶媒を用いて行われる。
上記有機溶媒と、水との混合溶媒を用いる場合、その混合比（有機溶媒：水）に特に限定はなく、通常２：１〜１：２（ｖ／ｖ）、好ましく１：１〜１：３（ｖ／ｖ）、より好ましくは３：４（ｖ／ｖ）である。
溶媒の使用量（全量）は、化合物［Ｖ］またはその塩の重量に対して、１０〜４０倍、好ましくは１５〜３０倍、より好ましくは２０〜２５倍である。
スラリー洗浄におけるｐＨは、通常６〜１０、好ましくは７．０〜９．０、より好ましくは８．０〜８．５である。
ｐＨの調整には、例えば、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウムなどの塩基を用い、好ましくは水溶液として用いる。使用する塩基の濃度および量は、上記ｐＨの範囲を達成できるものであれば、特に限定されない。
スラリー洗浄によって得られた結晶を分離（例えば、濾過など）、必要に応じて、乾燥（例えば、減圧下、４０℃）することにより、化合物［ＶＩＩ］またはその塩をさらに高純度、高収率で得ることができる（純度９８．０ ａｒｅａ％以上、収率７５〜９０％）。なお、スラリー洗浄後、ジアステレオマー：Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｌ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２は、０．２ ａｒｅａ％以下（ただし、アセトニトリルの場合は、０．１ ａｒｅａ％以下）である。
さらに、上記分離後（ただし、乾燥前）、例えば、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、水などの溶媒、およびこれらの溶媒と水との混合溶媒（混合比は特に限定されない）などの溶媒で化合物［ＶＩＩ］またはその塩をさらに洗浄してもよい。
洗浄の際に使用する溶媒の量（全量）は、化合物［Ｖ］またはその塩の重量に対して、１〜４倍、好ましくは１．５〜３倍、より好ましくは２〜２．５倍である。
化合物［ＶＩＩ］またはその塩の精製は、濾過および／またはスラリー洗浄で十分であり、従来必要であったジアステレオマーの抽出、濃縮、カラム精製は不要となり、結果、総工程数を少なくすることができる。
工程（４）は、化合物［ＶＩＩ］またはその塩を加水分解反応に付し、トリペプチド［Ｉ］またはその塩を得る工程である。
工程（４）で使用する溶媒としては、反応に悪影響を及ぼさない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の有機溶媒、もしくはこれらの有機溶媒と水との混合溶液等が挙げられる。反応温度およびラセミ化抑制の観点から、テトラヒドロフランと水との混合溶媒が好ましい。
上記有機溶媒と、水との混合溶媒を用いる場合、その混合比（有機溶媒：水）に特に限定はなく、通常２：１〜１：４（ｖ／ｖ）、好ましくは１：１〜１：３（ｖ／ｖ）、より好ましくは１：１（ｖ／ｖ）である。
溶媒の使用量（全量）は、化合物［ＶＩＩ］またはその塩の重量に対して、１０〜５０倍、好ましくは２０〜４０倍、より好ましくは３０〜３５倍である。
工程（４）の加水分解反応は、酸性条件下では脱アセチル化反応が進行する可能性があるので、塩基の存在下で行うのが好ましい。
塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等が挙げられる。なかでも、コストの観点から、水酸化ナトリウムが好ましい。
塩基の使用量は、化合物［ＶＩＩ］またはその塩１モルに対して、１．０〜２．０モル、好ましくは１．０〜１．５モル、より好ましくは１．０〜１．１モル、さらにより好ましくは１．０５モルである。
また、上記塩基の水溶液を用いてもよい。塩基水溶液を調製する場合、水の使用量は、塩基１モルに対して、０．２〜５Ｌ、好ましくは０．４〜２Ｌ、より好ましくは０．５〜１Ｌである。
反応時間は、通常４〜４８時間、好ましくは６〜２４時間、より好ましくは１２〜１８時間である。
反応温度は、通常−２０〜４０℃、好ましくは−１０〜２０℃、より好ましくは０〜５℃である。
加水分解反応終了後、反応で使用した有機溶媒の０．５〜１倍、好ましくは０．５倍容量の水を加え、酸を用いてｐＨを通常４〜６、好ましくは４．５〜５．５、より好ましくは５とし、トリペプチド［Ｉ］またはその塩を晶析させる。
使用する酸としては、例えば、塩酸、硫酸等が挙げられる。使用する酸の濃度および量は、上記ｐＨを達成できるものであれば、特に限定されない。
析出した結晶を分離（例えば、濾過など）、必要に応じて、乾燥（例えば、減圧下、５０℃）することにより、トリペプチド［Ｉ］またはその塩を高純度、高収率で得ることができる（純度９９．０ ａｒｅａ％以上、収率９２〜９７％）。
さらに、上記分離後（ただし、乾燥前）、例えば、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、イソプロパノ-ル、アセトン、水などの溶媒、およびこれらの溶媒と水との混合溶媒（混合比は特に限定されない）でトリペプチド［Ｉ］またはその塩を洗浄してもよい。
洗浄の際に使用する溶媒の量（全量）は、トリペプチド［ＶＩＩ］またはその塩の重量に対して、１〜１０倍、好ましくは２〜８倍、より好ましくは４〜５倍である。
また、工程（４）においてラセミ化が進行し、ジアステレオマーであるＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｌ−３Ｐａｌ−ＯＨも生成するが、ジアステレオマーは、トリペプチド［Ｉ］またはその塩に対して１．０ ａｒｅａ％以下であり、濾過または洗浄の際に完全に母液または洗浄液に淘汰され、トリペプチド［Ｉ］またはその塩が高純度、高収率で得られる（純度９９．０ ａｒｅａ％以上、収率９２〜９７％）。
従って、工程（４）においても、ジアステレオマーの抽出、濃縮、カラム精製は不要となり、結果、総工程数を少なくすることができる。
工程（４）におけるＨＰＬＣ条件は、カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−２（４．６×１５０ｍｍ）、溶離液 ０．０５Ｍ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ３）：ＣＨ３ＣＮ＝７０：３０、波長：２１０ｎｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度：室温（約１５〜２５℃）である。
本発明によると、従来と比較して工程数が少なく、なおかつ、高収率および高純度でＬＨＲＨアンタゴニスト中間体を得ることができる。
以下に本願発明の実施例を示すが、当業者は、本願発明がこれらに限定されないことを理解するだろう。
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン メチルエステル（Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＭｅ）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニン（２５．７ｇ、０．１モル）と、Ｄ−４−クロロフェニルアラニン メチルエステル塩酸塩（２５．０ｇ、０．１モル）をアセトニトリル（６００ｍｌ）に懸濁し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール １水和物（１５．３ｇ、０．１モル）を加えて５℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン（１１．０ｍｌ、０．１モル）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド 塩酸塩（１９．１７ｇ、０．１モル）を加えて、５℃で１時間、室温で一晩攪拌した。析出した結晶を分離し、アセトニトリル（１００ｍｌ）で洗浄した。４０℃で減圧乾燥し、目的化合物を４２．０ｇ得た。収率９２．３％、純度９９．５３ ａｒｅａ％、ジアステレオマーはＮＤ（検出不可）であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．７１（ｓ，３Ｈ），２．８２−２．９６（ｍ，２Ｈ），３．０２−３．１３（ｍ，２Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），４．４９（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｍ，２Ｈ），７．３０（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．５０（ｍ，３Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｍ，２Ｈ），７．８６（ｍ，１Ｈ），８．１１（ｍ，１Ｈ），８．５１（ｍ，１Ｈ）．
マススペクトル ｍ／ｅ：４５１（ＭＨ−）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン（Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨ）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン メチルエステル（４２．０ｇ、９２．７ミリモル）をＴＨＦ（４６０ｍｌ）に懸濁し、０〜５℃に冷却した。１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（９７．４ｍｌ、９７．４ミリモル）を３０分かけて、温度０〜５℃で滴下した。同温度で６時間攪拌し、加水分解を終了した。１５〜２０℃に昇温した後、不溶物をろ過して除いた。水（６９０ｍｌ）を加えた後、６Ｍ塩酸（１９ｍｌ）を加えてｐＨ２に調整し、晶析した。析出した結晶を分離し、ＴＨＦ：水＝２：３（４０ｍｌ）で洗浄した。４０℃で減圧乾燥して目的化合物を４０．１ｇ得た。収率９７．６％、純度９９．０ ａｒｅａ％、ジアステレオマー比 ＤＤ：ＤＬ＝９９．３２：０．６８
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．７１（ｓ，３Ｈ），２．８１−２．９６（ｍ，２Ｈ），３．０６−３．１６（ｍ，２Ｈ），４．４６（ｍ，１Ｈ），４．６４（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｍ，２Ｈ），７．３１（ｍ，２Ｈ），７．４１−７．４８（ｍ，３Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．７９（ｍ，２Ｈ），７．８５（ｍ，１Ｈ），８．０６（ｍ，１Ｈ），８．３３（ｍ，１Ｈ）．
マススペクトル ｍ／ｅ：４３７（ＭＨ−）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニル−Ｄ−３−ピリジルアラニン メチルエステル（Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン（４．３９ｇ、１０ミリモル）をアセトニトリル（１２０ｍｌ）に懸濁し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール １水和物（１．６８ｇ、１１ミリモル）を加えて５℃に冷却した。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド 塩酸塩（２．０ｇ、１０．５ミリモル）を加えて、５℃で１時間、室温で一晩攪拌した。再度５℃に冷却し、Ｄ−３−ピリジルアラニン メチルエステル ２塩酸塩（２．６６ｇ、１０．５ミリモル）、トリエチルアミン（２．９２ｍｌ、２１ミリモル）を加えて、室温で４時間攪拌した。析出した結晶を分離し、アセトニトリル（２０ｍｌ）で洗浄した。粗結晶のジアステレオマー比は、ＤＤＤ：ＤＬＤ＝９９．６：０．４であった。この粗結晶を水（６０ｍｌ）、ＴＨＦ（４５ｍｌ）に懸濁し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液によりｐＨ８に調整して一晩スラリー洗浄した。結晶を分離し、ＴＨＦ：水＝３：４（４２ｍｌ）で洗浄した。４０℃で減圧乾燥し、目的化合物を５．１４ｇ得た。収率８３．３％、純度９８．５ ａｒｅａ％、ジアステレオマーは、＜０．１ ａｒｅａ％であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．７０（ｓ，３Ｈ），２．７５−２．８３（ｍ，２Ｈ），２．９３−２．９９（ｍ，２Ｈ），３．０３−３．１０（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），４．５３−４．５８（ｍ，３Ｈ），７．２３−７．３１（ｍ，５Ｈ），７．３８−７．４８（ｍ，３Ｈ），７．６３−７．７８（ｍ，５Ｈ），８．０４−８．１５（ｍ，２Ｈ），８．４０−８．４４（ｍ，２Ｈ），８．５２−８．５４（ｍ，１Ｈ）．
マススペクトル ｍ／ｅ：６０１（ＭＨ＋）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン １−ベンゾトリアゾールエステル（Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＢｔ）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン（４．３９ｇ、１０ミリモル）をアセトニトリル（１２０ｍｌ）に懸濁し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール １水和物（１．６８ｇ、１１ミリモル）を加えて５℃に冷却した。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド 塩酸塩（２．０ｇ、１０．５ミリモル）を加えて、５℃で１時間、室温で一晩攪拌した。析出した結晶を分離し、アセトニトリル（２０ｍｌ）で洗浄した。室温で減圧乾燥し、目的化合物を５．３ｇ得た。収率９５．３％。
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニル−Ｄ−３−ピリジルアラニン メチルエステル（Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ）
Ｄ−３−ピリジルアラニン メチルエステル ２塩酸塩（０．５８ｇ、２．１ミリモル）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に懸濁し、５℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン（０．４６ｍｌ、４．２ミリモル）を加えた後、Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン １−ベンゾトリアゾールエステル（１．１ｇ、２ミリモル）を加え、室温で１時間攪拌した。水（２０ｍｌ）を加え、析出した結晶を分離した。粗結晶のジアステレオマー比は、ＤＤＤ：ＤＬＤ＝９９．４：０．６であった。この粗結晶を水（２０ｍｌ）、ＴＨＦ（１５ｍｌ）に懸濁し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液によりｐＨ８に調整して一晩スラリー洗浄した。結晶を分離し、ＴＨＦ：水＝３：４（１４ｍｌ）で洗浄した。４０℃で減圧乾燥し、目的化合物を１．１ｇ得た。収率８９．３％、純度９９．３ ａｒｅａ％、ジアステレオマーは、０．２ ａｒｅａ％であった。
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニル−Ｄ−３−ピリジルアラニン メチルエステル（Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ）
Ｄ−３−ピリジルアラニン メチルエステル ２塩酸塩（０．５３ｇ、２．１ミリモル）をアセトニトリル（２４ｍｌ）に懸濁し、５℃に冷却した。トリエチルアミン（０．５９ｍｌ、４．２ミリモル）を加えた後、Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン １−ベンゾトリアゾールエステル（１．１ｇ、２ミリモル）を加え、室温で１時間攪拌した。析出した結晶を分離した。粗結晶のジアステレオマー比は、ＤＤＤ：ＤＬＤ＝９９．６：０．４であった。この粗結晶を水（２０ｍｌ）、ＴＨＦ（１５ｍｌ）に懸濁し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液によりｐＨ８に調整して一晩スラリー洗浄した。結晶を分離し、ＴＨＦ：水＝３：４（１４ｍｌ）で洗浄した。４０℃で減圧乾燥し、目的化合物を１．０ｇ得た。収率８３．２％、純度９９．２ ａｒｅａ％、ジアステレオマーは、０．１ ａｒｅａ％以下であった。
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニル−Ｄ−３−ピリジルアラニン（Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ）
Ｎ−アセチル−Ｄ−２−ナフチルアラニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニル−Ｄ−３−ピリジルアラニン メチルエステル（２．４ｇ、４ミリモル）をＴＨＦ（４０ｍｌ）、水（４０ｍｌ）に懸濁し、０℃に冷却した。１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（４．２ｍｌ、４．２ミリモル）を加えて同温度で一晩攪拌した。１０℃に昇温し、不溶物をろ過により除いた。水（２０ｍｌ）を加えて、６Ｍ塩酸でｐＨ５に調整し、晶析した。ＴＨＦ：水＝１：１（１０ｍｌ）、水（１０ｍｌ）で洗浄した。５０℃で減圧乾燥し、目的化合物を２．２７ｇ得た。収率９６．５％、純度９９．８ ａｒｅａ％、ジアステレオマーは、＜０．１ ａｒｅａ％であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．６９（ｓ，３Ｈ），２．７５−２．８３（ｍ，２Ｈ），２．９４−３．１２（ｍ，４Ｈ），４．４８−４．６０（ｍ，３Ｈ），７．２３−７．２９（ｍ，５Ｈ），７．３７−７．４７（ｍ，３Ｈ），７．６８−７．７８（ｍ，５Ｈ），８．０３−８．１３（ｍ，２Ｈ），８．３７−８．４６（ｍ，３Ｈ）．
マススペクトル ｍ／ｅ：５８６．６（ＭＨ＋）
本発明によれば、従来と比較して工程数が少なく、なおかつ、高収率および高純度でＬＨＲＨアンタゴニスト中間体を得ることができる、ＬＨＲＨアンタゴニスト中間体の製造方法を提供することができる。

Claims (14)

  1. 工程（１）〜（４）の少なくとも１つを包含する式［Ｉ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ ［Ｉ］
    で表されるトリペプチドまたはその塩の製造方法：
    （１）式［ＩＩ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨ ［ＩＩ］
    で表される化合物、その塩、またはその反応性誘導体と、式［ＩＩＩ］：
    Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲ１ ［ＩＩＩ］
    （式中、Ｒ１は、メチル、エチルまたはベンジルを示す。）
    で表される化合物またはその塩とを縮合させることによって、式［ＩＶ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲ１ ［ＩＶ］
    （式中、Ｒ１は上記定義の通りである。）
    で表される化合物を調製する工程；
    （２）上記式［ＩＶ］で表される化合物を加水分解反応に付し、式［Ｖ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨ ［Ｖ］
    で表される化合物またはその塩を調製する工程；
    （３）上記式［Ｖ］で表される化合物、その塩、またはその反応性誘導体と、式［ＶＩ］：
    Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２ ［ＶＩ］
    （式中、Ｒ２は、メチル、エチルまたはベンジルを示す。）
    で表される化合物またはその塩とを縮合させることによって、式［ＶＩＩ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＲ２ ［ＶＩＩ］（式中、Ｒ２は上記定義の通りである。）
    で表される化合物またはその塩を調製する工程；および
    （４）上記式［ＶＩＩ］で表される化合物またはその塩を加水分解反応に付し、上記式［Ｉ］で表されるトリペプチドまたはその塩を得る工程。
  2. 式［ＩＩ］で表される化合物の反応性誘導体が、式［ＩＩａ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＲａ ［ＩＩａ］
    （式中、Ｒａは、
    Figure 0004407322
    からなる群から選択される基を示す。）
    で表される化合物である、請求項１に記載の製造方法。
  3. Ｒ１がメチルである、請求項１に記載の製造方法。
  4. 式［ＩＩＩ］で表される化合物の塩が、Ｈ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＭｅ ＨＣｌである、請求項１に記載の製造方法。
  5. Ｒ２がメチルである、請求項１に記載の製造方法。
  6. 式［ＶＩ］で表される化合物の塩が、Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＭｅ ２ＨＣｌである、請求項１に記載の製造方法。
  7. 式［Ｖ］で表される化合物の反応性誘導体が、式［Ｖａ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＲａ ［Ｖａ］
    （式中、Ｒａは、
    Figure 0004407322
    からなる群から選択される基を示す。）
    で表される化合物である、請求項１に記載の製造方法。
  8. 工程（２）の加水分解反応において塩基を用いる、請求項１に記載の製造方法。
  9. 塩基が水酸化ナトリウムである、請求項８に記載の製造方法。
  10. 工程（２）の加水分解反応において、溶媒として、テトラヒドロフランを用いる、請求項１に記載の製造方法。
  11. 工程（４）の加水分解反応において塩基を用いる、請求項１に記載の製造方法。
  12. 塩基が水酸化ナトリウムである、請求項１１に記載の製造方法。
  13. 工程（４）の加水分解反応において、溶媒として、テトラヒドロフランと水との混合溶媒を用いる、請求項１に記載の製造方法。
  14. 請求項１〜１３のいずれかに記載の製造方法によって、式［Ｉ］：
    Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ ［Ｉ］
    で表されるトリペプチドまたはその塩を製造する工程、および前記トリペプチドまたはその塩をＬＨＲＨアンタゴニストに変換する工程を含む、ＬＨＲＨアンタゴニストの製造方法。
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