JP6792900B1 - 生理活性物質が均一に分散されたマイクロスフェアー及びそれを含有する徐放性製剤 - Google Patents

Abstract

本出願において、生理活性物質が均一に分散された乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を主成分とするマイクロスフェアーであって、前記マイクロスフェアーの平均体積基準粒子径が１μｍ以上１５０μｍ以下であり、前記マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の前記生理活性物質の塊又は空孔がないことを特徴とするマイクロスフェアーが提供される。本発明のマイクロスフェアーは、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができる。

Description

本発明は、生理活性物質が均一に分散されたマイクロスフェアー及びそれを含有する徐放性製剤に関する。本発明は、特に、生理活性物質が均一に分散された乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を主成分とするマイクロスフェアー及びそれを含有する徐放性製剤に関する。

生理活性物質を含有する医薬品等の徐放性製剤等として、最近、マイクロスフェアー又はナノスフェアーが注目されている。マイクロスフェアーとは、通常、粒子径が１μｍから１５０μｍ程度の製剤をいい、それよりも小さい１μｍ未満の製剤をナノスフェアーと呼ばれる。これらは、例えば、生理活性物質を生分解性の合成高分子又は天然高分子に内包させて、局所で生理活性物質を持続的に放出することができ、又は組織への生理活性物質のターゲッティング等を行うことができる。

生理活性物質を一定の速度で徐々に放出する徐放性マイクロスフェアー製剤には、例えば、生分解性高分子、生理活性物質、添加剤、溶媒等が適切に制御された製剤が必要である。徐放性マイクロスフェアー製剤が生体内で一定期間、有効に薬理学的効果を示すためには、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度を適切に制御して、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することが必要である。

その生理活性物質の放出速度を決定する重要な因子の一つに生分解性高分子の種類がある。特に最も広く用いられる乳酸・グリコール酸共重合体（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ Ａｃｉｄ，ＰＬＧＡ）は、その物理化学的特性、例えば構成成分である乳酸とグリコール酸の割合、分子量、水親和性等で生体分解速度が異なるため、これらによって、所望の放出期間となるように調整することができる（特許文献１）。

更に、それに加えて、生理活性物質の初期放出量異常（初期バースト）を抑え、放出期間中の放出速度を一定に制御するためには、マイクロスフェアーの粒子径とマイクロスフェアー中の生理活性物質の分散状態が関係する。マイクロスフェアーの粒子径は、歩留まりの問題があるが、ろ過などの操作で目的とする粒子径に合わせこむことができる。しかし、マイクロスフェアー中の生理活性物質の分散状態は、ただ一様とされており確認されていない。

ＰＬＧＡのマイクロスフェアーは、例えば、液中乾燥法、噴霧乾燥法、噴霧凍結乾燥法、超臨界流体工程を用いた乾燥法、二重乳化法等を用いて製造することができる。これらの中で最も一般的な製造方法は、生理活性物質が親油性である場合、ＰＬＧＡ及び生理活性物質を有機溶媒に溶解又は分散させ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を溶解した水溶液に混合させてエマルション化し、エマルションから脱溶媒を行う液中乾燥法である。

特許文献１には、ＰＬＧＡ等の生分解性高分子とペプチド薬物を含む徐放性マイクロスフェアーを、噴霧乾燥法、噴霧凍結乾燥法又は超臨界流体工程を用いた乾燥法で製造する方法が開示されている。しかし、徐放性マイクロスフェアーの粒子径がどの程度ばらついているか、徐放性マイクロスフェアー中にペプチド薬物が均一に分散されているか、均一なものが得られるかについては、記載されていない。

特許文献２には、ハロゲン化物炭化水素、及び薬物の溶解度が０．３％（Ｗ／Ｖ）以上である非水混和性有機溶媒からなる混合溶媒を用いて、ＰＬＧＡ微粒子を液中乾燥法により製造する方法が開示されている。製造例１及び２で得られた微粒子の粒子径（メディアン径）が１４及び１６μｍであったことが記載されているが、微粒子中の薬物の分散状態については、記載されていない。

特許文献３には、生物活性物質を含むＰＬＧＡナノ粒子が開示されている。これらのナノ粒子は、主として特定組織へのターゲッティングのためのものであり、そこで毛細血管の微小な穴を通り抜けることができる数十〜数百ｎｍ程度のナノ粒子である。しかし、特許文献３には、これらのナノ粒子よりも遥かに大きい１μｍ以上のマイクロスフェアーについては、記載されていない。また、特許文献３の技術を用いても、当業者は、粒子径が１μｍ以上のマイクロスフェアーを製造することはできなかった。

特許文献４には、皮下注射することで黄体形成ホルモン放出ホルモン誘導体であるリュープロレリン酢酸塩を約１ヶ月から数ヶ月にわたって放出する製剤が開示されている。同製剤には粒子径の粒度分布が１μｍから４００μｍと非常に広いとの問題がある。そこで、特許文献５では、この問題を解決する方法として、二重乳化法により担体用高分子内に生理活性物質が封入されたマイクロスフェアーを製造する方法が提案されている。しかし、実施例１〜５で得られたリュープロレイン酢酸塩含有マイクロスフェアーは、粒子中の薬物の分散状態については、記載されていない。

特許文献６には、少なくとも２８日間（６７２時間）、慢性の痛みを軽減するマイクロスフェアーが開示されている。同マイクロスフェアーは、生分解性ポリマ―及び局所麻酔剤（生理活性物質）を含み、局所麻酔剤の約７５％が約７２時間までに放出され、局所麻酔剤の約８０〜９０％が約１２０時間までに放出される。このことから、マイクロスフェアー中の局所麻酔剤の分布はマイクロスフェアー中に均一ではなく外側に偏っていることが示唆される。図２に記載されたマイクロスフェアーの断面のＳＥＭ（走査型電子顕微鏡）画像からは、局所麻酔剤の分散状態は判断できず、１．５μｍ以上の局所麻酔剤又は空孔が確認される。

特許文献７には、コアが固体状のアリピプラゾールを含有し、生分解性ポリマーを含むシェルがコアの表面を被覆したコアシェル構造のマイクロスフェアーが開示されている。このように、特許文献７のマイクロスフェアーは、マイクロスフェアー中に生理活性物質が均一に分散されたものではない。また、図５に記載された実施例で得られたマイクロスフェアーを切断した断面の電子顕微鏡写真によれば、１．５μｍより大きな空孔が確認される。

特開２００５−０３５９９４号公報 特開２００５−０１５４７６号公報 特許４８５６７５２号公報 特許２６５３２５５号公報 特開２０１４−２２４１１４号公報 特開２０１６−０６９３７８号公報 特表２０１０−５３１３０３号公報

平均体積基準粒子径が１μｍ以上１５０μｍ以下である生分解性高分子マイクロスフェアーは、マイクロスフェアー中の生理活性物質の分布及び空孔の制御がなされていなければ、放出期間を設計通りに実現することができない。例えば、マイクロスフェアーの表面近くに生理活性物質が偏っていれば、投与後初期にマイクロスフェアーから多量の生理活性物質が放出され、初期バーストの問題が発生する。逆に、マイクロスフェアーの中心部に生理活性物質が偏っていれば、又はコアシェルの様な状態であれば、初期から持続的に放出することができない。また、微粒子の生理活性物質が均一に分散された状態が望ましい。大きな塊の生理活性物質が点在するような分散状態では、初期から持続的に放出することはできない。同様に、空孔の制御がなされていなければ、生理活性物質の放出において同様な問題が発生する。

マイクロスフェアー中に生理活性物質が均一に分散されていることが、生理活性物質を生体内で一定期間継続して放出するための絶対条件である。マイクロスフェアーの粒子径は、ナノ粒子と違って大きいため、一般的に均一化が難しい。そこで、マイクロスフェアー中の生理活性物質の分散状態を必ず確認する必要がある。

図１は、特許文献４に記載されるＬＨ−ＲＨ誘導体の長期徐放型マイクロカプセルに相当する、マイクロカプセル型徐放性剤リュープリン（登録商標）注射用１．８８ｍｇ（武田薬品工業株式会社製）の顕微鏡写真である。本製剤には大きな粒子から小さな粒子までいろいろ含まれているが、その代表的な粒子である約３５μｍの粒子を選択して、その粒子の断面のＳＥＭ（走査型電子顕微鏡）画像が図２である。参考例１の生理活性物質を含まないＰＬＧＡ微粒子のＳＥＭ画像である図３と比較すると、図２には、分散された生理活性物質及び空孔が確認され、２μｍ以上の生理活性物質の塊や空孔が多く確認される。ＥＤＳ（エネルギー分散型Ｘ線分光器）で元素分析を行うことで、生理活性物質と空孔のいずれかが確認される。このような粒子中に分散された生理活性物質が均一でない分散状態では、放出期間中の放出速度を適切に制御することができない。

そこで、本発明の課題は、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができるマイクロスフェアーを提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討した結果、驚くべきことに、マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がないマイクロスフェアーであれば、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができることを見出して、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下の通りである。

［１］本発明の第１の態様は、生理活性物質が均一に分散された乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を主成分とするマイクロスフェアーであって、前記マイクロスフェアーの平均体積基準粒子径が１μｍ以上１５０μｍ以下であり、前記マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の前記生理活性物質の塊又は空孔がないことを特徴とするマイクロスフェアーである。

［２］本発明の第２の態様は、前記マイクロスフェアー中に１．０μｍ以上の前記生理活性物質の塊又は空孔がない、［１］に記載のマイクロスフェアーである。
［３］本発明の第３の態様は、分散された前記生理活性物質の平均体積基準粒子径が５ｎｍ〜５００ｎｍである、［１］又は［２］に記載のマイクロスフェアーである。
［４］本発明の第４の態様は、前記生理活性物質が親油性生理活性物質である、［１］〜［３］のいずれかに記載のマイクロスフェアーである。
［５］本発明の第５の態様は、［１］〜［４］のいずれかに記載のマイクロスフェアーを含有する徐放性製剤である。

本発明のマイクロスフェアーによって、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができる。

リュープリン（登録商標）の顕微鏡写真である。 リュープリン（登録商標）の約３５μｍの粒子の断面のＳＥＭ画像である。 参考例１の生理活性物質を含まないマイクロスフェアーの断面のＳＥＭ画像である。 実施例１のマイクロスフェアーの断面のＳＥＭ画像である。 比較例２のマイクロスフェアーの断面のＳＥＭ画像である。 比較例３のマイクロスフェアーの断面のＳＥＭ画像である。

１．マイクロスフェアー
本発明のマイクロスフェアーは、生理活性物質が均一に分散された乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を主成分とするマイクロスフェアーであって、前記マイクロスフェアーの平均体積基準粒子径が１μｍ以上１５０μｍ以下であり、前記マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の前記生理活性物質の塊又は空孔がないことを特徴とするマイクロスフェアーである。本発明のマイクロスフェアーによって、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができる。また、前記マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の前記生理活性物質の塊又は空孔がないにおいて、塊とは生理活性物質の粗大な粒子や凝集体を意味し、空孔とは気泡や溝などの空洞を意味し、１．５μｍ以上とは、その大きさが略円形の場合最大直径、矩形の場合は長辺、針状の場合も最大長が１．５μｍ以上を意味する。

＜マイクロスフェアーの断面の観察＞
マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上又は１．０μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がないことは、例えば、分散された生理活性物質の微粒子を確認できる倍率で、マイクロスフェアーの断面を電子顕微鏡写真で観察することで確認することができる。具体的には、先ずマイクロスフェアーを液体窒素により凍結させる。凍結後、ＦＩＢ（集束イオンビーム：Ｆｏｃｕｓｅｄ Ｉｏｎ Ｂｅａｍ）断面を作成する。すなわち、ＦＩＢ装置を用いて、集束したイオンビームを試料に照射し、試料内部の所望位置の構造を切り出すことで、マイクロスフェアーの断面を観察する。分散された生理活性物質の微粒子の好ましい粒子径は数１０ｎｍ〜数１００ｎｍであるが、この大きさの分散微粒子を確認できる電子顕微鏡の観察倍率でマイクロスフェアーの断面全体を観察する。通常、電子顕微鏡の観察倍率は２５００倍から数万倍程度以上である。また、マイクロスフェアー全体を観察できない高い倍率を用いた場合、観察された部分を繋ぎ合わして全体を観察してもよい。生理活性物質の構成元素にもよるが、マイクロスフェアーの断面をＥＤＳ（エネルギー分散型Ｘ線分光器）で元素分析を行うことができる。

＜ＰＬＧＡ＞
ＰＬＧＡは、乳酸に由来する構成単位と、グリコール酸に由来する構成単位とを有する乳酸・グリコール酸共重合体である。ＰＬＧＡは、ポリラクチド（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ，ＰＬＡ）、ポリグリコリド（Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ、ＰＧＡ）等の他の生体分解性高分子を含んでいてもよい。本明細書に記載したＰＬＧＡは一例として記載したものであり、記載されたものに制限されるものではない。

ＰＬＧＡにおける、乳酸に由来する構成単位（Ｌ）と、グリコール酸に由来する構成単位（Ｇ）とのモル比率（Ｌ：Ｇ）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１：９９〜９９：１が好ましく、２５：７５〜９９：１がより好ましく、３０：７０〜９０：１０が更に好ましく、５０：５０〜８５：１５が特に好ましい。

本発明のマイクロスフェアーに用いられるＰＬＧＡは、例えば、乳酸とグリコール酸とを、イオン交換樹脂を触媒として弱い減圧下に加熱し、縮合重合させることにより製造することができる。その際、乳酸に代えて、ラクチドを用いてもよい。ＰＬＧＡは、市販品であってもよい。市販品としては、例えば、富士フイルム和光純薬工業（株）、多木化学（株）、Ｅｖｏｎｉｃ Ｒｏｈｍ ＧｍｂＨ社、Ｍｅｒｃｋ社、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社等から購入することができる。

本発明のマイクロスフェアーにおけるＰＬＧＡの含有量は、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１質量％以上が好ましく、３０質量％以上９５質量％以下が更により好ましく、５０質量％以上９０質量％以下が特に好ましい。

＜マイクロスフェアー＞
本発明のマイクロスフェアーには、ＰＬＧＡ及び生理活性物質が含まれる。更に必要に応じて、分散剤、その他の成分を含有する。マイクロスフェアーのマトリックス中に、生理活性物質、分散剤、その他の成分等が分散されている。

［生理活性物質］
本発明のマイクロスフェアーに含まれる生理活性物質としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬化合物、機能性食品化合物、機能性化粧品化合物等が挙げられる。医薬化合物を含むマイクロスフェアーは、例えば、徐放性医薬製剤として好適に用いることができる。生理活性物質には、親油性生理活性物質及び親水性生理活性物質のいずれもが含まれる。好ましい生理活性物質として親油性生理活性物質が挙げられる。親油性生理活性物質は、例えば、水／オクタノール分配係数のｌｏｇＰ値が３以上である物質を意味し、親油性生理活性物質に含まれない生理活性物質は、親水性生理活性物質に分類される。水／オクタノール分配係数は、ＪＩＳＺ７２６０−１０７（２０００）フラスコ振とう法に準拠して測定することができる。生理活性物質は、徐放性製剤が望まれるものであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。生理活性物質には、塩、水和物等のいずれの形態も包含される。

本発明のマイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がなく、好ましくは、マイクロスフェアー中に１．０μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がない。その構成を取ることで、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができる。マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上又は１．０μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がないことは、マイクロスフェアー全量に対する生理活性物質の含有量で制御することができる。生理活性物質の好ましい含有量としては、生理活性物質によっても変化するが、マイクロスフェアー全量に対して、例えば、０．０１〜２質量％が挙げられ、好ましくは０．１〜１．５質量％が挙げられ、より好ましくは０．２〜１．２質量％が挙げられる。
分散された生理活性物質の微粒子の平均体積基準粒子径は、５ｎｍ〜５００ｎｍが好ましく、より好ましくは１０ｎｍ〜４００ｎｍが挙げられ、更に好ましくは２０ｎｍ〜２００ｎｍが挙げられる。

［分散剤］
生理活性物質を分散させるために、分散剤を用いることができる。分散剤としては、低分子量の分散剤であってもよく、高分子量の分散剤ポリマーであってもよい。低分子量の分散剤とは、重量平均分子量が１５，０００未満の化合物を意味し、高分子量の分散剤ポリマーとは、１つ以上のモノマーの間に繰り返しの共有結合を含み、重量平均分子量が１５，０００以上の化合物を意味する。

低分子量の分散剤としては、医薬化合物、機能性食品化合物、機能性化粧品化合物等に許容されるものであれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。具体的には、脂質類、糖類、シクロデキストリン類、アミノ酸類、有機酸類、その他の成分等が挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

脂質類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、中鎖又は長鎖のモノグリセリド、ジグリセリド又はトリグリセリド、リン脂質、植物油（例えば、大豆油、アボカド油、スクアレン油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、ナタネ油、サフラワー油、ヒマワリ油等）、魚油、調味油、水不溶性ビタミン、脂肪酸、及びこれらの混合物を含み、これらの誘導体などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

糖類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グルコース、マンノース、イドース、ガラクトース、フコース、リボース、キシロース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、ツラノース、ラフィノース、マルトトリオース、アカルボース、水溶性セルロース、合成セルロース、糖アルコール、グリセリン、ソルビトール、ラクチトール、マルチトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、若しくはポリオール、又はこれらの誘導体などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、従来、医薬に使用できるものが好ましい。

＜平均体積基準粒子径＞
本発明のマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は、１μｍ以上１５０μｍ以下であり、１０μｍ以上１００μｍ以下が好ましく、２０μｍ以上７５μｍ以下がより好ましい。平均体積基準粒子径は、レーザー回折式粒度分布測定装置を用いて測定することができる。本発明においては、平均体積基準粒子径が、１５０μｍを超えると、マイクロスフェアー内の生理活性物質の分散不均一性によって初期バーストの問題が発生し、凝集や沈降し易くなり、後工程の処理も難しくなる。１μｍより小さくなると著しく初期バーストの問題が発生する。

本発明のマイクロスフェアーによって、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができる。

２．徐放性製剤
本発明のマイクロスフェアーを用いて、マイクロスフェアーを含有する徐放性製剤を調製することができる。本発明の徐放性製剤によって、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出し、有効に薬理学的効果を示すことができる。

本発明の徐放性製剤は、そのまま筋肉内、皮下、血管、臓器、関節腔、腫瘍などの病巣等に容易に注射剤及び埋め込み剤として、又は経皮剤として投与することができる。その他種々の製剤形態として投与することもできる。例えば、本発明の徐放性製剤を注射剤とするには、分散剤（Ｔｗｅｅｎ８０、ＨＣＯ−６０、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム等）、保存剤（メチルパラベン、プロピルパラベン等）、等張化剤（塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ブドウ糖等）などと共に水性懸濁剤とするか、大豆油、ゴマ油、コーン油などの植物油と共に分散して油性懸濁剤として、徐放性注射剤とする。

３．マイクロスフェアーの製造方法
＜マイクロスフェアーの製造工程＞
本発明のマイクロスフェアーの製造方法は、粒子形成工程を少なくとも含み、更に必要に応じて、ろ過滅菌工程、良溶媒除去工程、その他の工程等を含んでもよい。

［粒子形成工程］
粒子形成工程は、特開２００９−１３２８７１号公報又は特開２０１１−１８９３４８号公報に記載の接近離反可能な対向して配設された、少なくとも一方が他方に対して相対的に回転する複数の処理用面の間で粒子化処理がなされる粒子化処理装置を用いることが好ましい。粒子形成工程は、例えば、前記の粒子化処理装置を用いて、ＰＬＧＡの良溶媒にＰＬＧＡ及び生理活性物質を溶解又は分散させて得られるＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液と、ＰＬＧＡの貧溶媒を含む溶液とを連続投入して、乳化粒子を作製し、作製された粒子から良溶媒を除去することによって、本発明のマイクロスフェアーを析出させることで実施される。ここで、「分散」とは、生理活性物質を固体のままＰＬＧＡの良溶媒に分散させること、生理活性物質をＰＬＧＡの良溶媒に乳化させること、親水性生理活性物質の水性溶液とＰＬＧＡの良溶媒を含むｗ／ｏエマルションを形成させること等を含む。

ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液としては、ＰＬＧＡの良溶媒にＰＬＧＡ及び生理活性物質が溶解又は分散している溶液であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。良溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ハロゲン化脂肪族炭化水素、脂肪族エステル、アルコール、ケトン、エーテル、アセトニトリルなどが挙げられる。ハロゲン化脂肪族炭化水素としては、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、クロロエタン、２，２，２−トリクロロエタンなどが挙げられる。脂肪族エステルとしては、例えば、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチルなどが挙げられる。アルコールとしては、例えば、ベンジルアルコール、フェニルアルコール、ｎ−ブタノール等の水への溶解度が低いアルコールが挙げられる。ケトンとしては、例えば、炭素数３〜６のケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、シクロヘキサノン等）などが挙げられる。エーテルとしては、例えば、炭素数２〜６のエーテル（例えば、ジメチルエーテル、メチルエチルエーテル、ジエチルエーテル等）などが挙げられる。水への溶解度が低い溶媒を選択するほうが、生理活性物質の含有量の観点や初期バーストを防止する目的では好ましい。好ましい良溶媒として、ハロゲン化脂肪族炭化水素、ケトン、及びこれらの混合溶媒が挙げられ、より好ましくはジクロロメタン、アセトン及びこれらの混合溶媒が挙げられる。また、これらは、１種類単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。溶媒種や混合量を変化させることにより粒子径を制御することができる。

良溶媒とは、ＰＬＧＡの溶解度が大きい溶媒を意味し、貧溶媒とは、ＰＬＧＡの溶解度が小さい又は溶解しない溶媒を意味する。良溶媒及び貧溶媒は、それぞれマイクロスフェアーの断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔が生じないものを選択する。また、良溶媒及び貧溶媒は、例えば、２５℃における溶媒１００ｇに溶解し得るＰＬＧＡの質量で規定することができる。本発明において、良溶媒は、ＰＬＧＡを０．１ｇ以上溶解する溶媒であることが好ましく、より好ましくは０．２ｇ以上が挙げられ、更に好ましくは０．５ｇ以上が挙げられる。貧溶媒は、ＰＬＧＡを０．０５ｇ以下しか溶解しない溶媒であることが好ましく、より好ましくは０．０２ｇ以下が挙げられ、更に好ましくは０．０１ｇ以下が挙げられる。貧溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水が好ましい。

ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液中のＰＬＧＡの含有量は、良溶媒に応じて、目的とするマイクロスフェアーの粒子径に応じて、またマイクロスフェアーの断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がないように、変化させることができる。ＰＬＧＡの含有量は、例えば、１〜３０質量％が挙げられ、好ましくは３〜２０質量％が挙げられ、より好ましくは５〜１５質量％が挙げられる。ＰＬＧＡ溶液中の生理活性物質の含有量は、目的、薬理効果等に応じて、またマイクロスフェアーの断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がないように、適宜変化させることができる。

作製したマイクロスフェアーの安定性を更に確保するため、貧溶媒に安定剤を加えてもよい。安定剤としては、特に制限は無く、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、レシチン、ポリソルベート８０等が挙げられ、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）が好ましい。また、添加する安定剤の濃度は好ましくは０．０１〜２０質量％が挙げられ、５質量％以下であることがより好ましい。好ましい貧溶媒としては、例えば、ＰＶＡ水溶液などが挙げられる。

ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液並びに貧溶媒を含む溶液は、棒状、板状、プロペラ状等の種々の形状の撹拌子を槽内で回転させるものや、撹拌子に対して相対的に回転するスクリーンを備えたものなど、流体にせん断力を加えるなどして、均質な混合を実現する回転式分散機などの調製装置を用いて調製されることが望ましい。回転式分散機の好ましい例としては、特許第５１４７０９１号に開示されている撹拌機を適用することができる。マイクロスフェアーの断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔が生じないためには、ＰＬＧＡ溶液と品溶媒を完全混合する必要がある。完全混合のために、少なくとも分子レベルでの均一化を目指す必要がある。

回転式分散機はバッチ式で行うものであっても、連続式で行うものであってもよい。連続式で行う場合には、撹拌槽に対する流体の供給と排出とを連続的に行うものであってもよく、撹拌槽を用いずに連続式のミキサーを用いて行うものであってもよく、公知の撹拌機や撹拌手段を用い、適宜撹拌エネルギーを制御することができる。なお、撹拌エネルギーに関しては、本出願人による特開平０４−１１４７２５号公報に詳述されている。本発明における撹拌の方法は特に限定されないが、各種せん断式、摩擦式、高圧ジェット式、超音波式などの撹拌機や溶解機、乳化機、分散機、ホジナイザーなどを用いて実施することができる。一例としては、ウルトラタラックス（ＩＫＡ製）、ポリトロン（キネマティカ製）、ＴＫホモミキサー（プライミクス製）、エバラマイルダー（荏原製作所製）、ＴＫホモミックラインフロー（プライミクス製）、コロイドミル（神鋼環境ソリューション製）、スラッシャー（日本コークス工業製）、トリゴナル湿式微粉砕機（三井三池化工機製）、キャビトロン（ユーロテック製）、ファインフローミル（太平洋機工製）などの連続式乳化機、クレアミックス（エム・テクニック製）、クレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）などのバッチ式又は連続両用乳化機が挙げられる。また、撹拌処理は、高速回転する撹拌翼を備えたものであって、撹拌翼の外側にスクリーンを備え、スクリーンの開口から流体がジェット流となって吐出する撹拌機、特に上記のクレアミックス（エム・テクニック製）やクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いることが望ましい。

前記の粒子化処理装置において、回転する処理用面の停止時の接面圧を調整することにより、ＰＬＧＡ微粒子の粒子径及び粒子径分布の制御が可能である。本発明者による実験の結果、接面圧は、好ましくは２０ｇ／ｃｍ^２〜２５０ｇ／ｃｍ^２である。接面圧が２０ｇ／ｃｍ^２より低い場合には薄膜が安定せず、粒子径分布が広くなる。接面圧が２５０ｇ／ｃｍ^２より高いと目的としている粒子径の調整が難しくなることが判明した。より好ましくは５０ｇ／ｃｍ^２〜２００ｇ／ｃｍ^２が挙げられ、さらに好ましくは８０ｇ／ｃｍ^２〜１５０ｇ／ｃｍ^２が挙げられる。

ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液と貧溶媒を含む溶液とが接することで形成されるマイクロスフェアーのそれぞれが合着することを防ぐことが好ましい。その合着を防ぐ方法としては、溶液吐出液回収タンクに予め貧溶媒を含む溶液を入れておき、緩やかに撹拌しておくことが好ましい。撹拌を行うことにより、マイクロスフェアーの合着がより抑制できる。撹拌については、回転式分散機が好ましく、クレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）が望ましい。全体を緩やかに流動させることができるものであれば特に限定するものではない。撹拌が強いと、ＰＬＧＡ乳化粒子が壊れ、分布幅が広くなり、生理活性物質の分散状態が崩れる可能性がある。

生理活性物質が親油性生理活性物質である場合、上記の説明に従って、粒子形成工程を好適に実施することができ、マイクロスフェアーを製造することができる。生理活性物質が親水性生理活性物質である場合、親水性生理活性物質を例えば分散剤を用いて、ＰＬＧＡの良溶媒に分散させることで、同様に粒子形成工程を実施して、マイクロスフェアーを製造することができる。

また、生理活性物質が親水性生理活性物質である場合、親水性生理活性物質を、必要に応じて安定剤と共に水等の水性溶媒に溶解させて、ＰＬＧＡの良溶媒にＰＬＧＡを溶解させた溶液と共に混合することで調製されるｗ／ｏエマルションを、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液として用い、前記の粒子化処理装置を用いて、前記の粒子形成工程を実施することもできる。ｗ／ｏエマルションの調製には、断続振とう法、プロペラ型撹拌機、タービン型撹拌機を用いるミキサーによる方法、コロイドミル法、ホモジナイザー法、超音波照射法を用いることができる。前記の粒子化処理装置を用いて、このｗ／ｏエマルションであるＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液と、ＰＬＧＡの貧溶媒を含む溶液とを連続投入して、ｗ／ｏ／ｗエマルションとして乳化粒子を作製し、作製された粒子から良溶媒を除去することによって、本発明のマイクロスフェアーを析出させることで実施される。このマイクロスフェアーをそのまま用いることもできるが、さらに賦形剤（マンニトール、ソルビトール、ラクトース、ブドウ糖等）を加えて、再分散した後、凍結乾燥又は噴霧乾燥して固形化することもできる。この固形化したマイクロスフェアーは、使用時に、注射用蒸留水又は適当な分散媒を加えることで、より安定した徐放性注射剤が得ることができる。

［ろ過滅菌工程］
必要に応じて、粒子形成工程の前に、調製されたＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液並びに貧溶媒を含む溶液の無菌ろ過を行うことも好ましい。貧溶媒を含む溶液は親水性フィルターを用いて、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液は疎水性フィルターを用いてろ過滅菌することができる。ろ過に用いるフィルターの孔径は０．１μｍ〜０．４５μｍが好ましく、０．２μｍがより好ましい。

前記のろ過滅菌フィルターとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、貧溶媒を含む溶液の滅菌ろ過のためには、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）やポリエーテルサルフォン等の親水性フィルターが挙げられる。ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液のろ過滅菌のためには、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）などの疎水性フィルターが挙げられる。ここに記載している材質に限定されるものではなく、薬物の吸着や溶媒種により選定を行う必要がある。

［良溶媒除去工程］
良溶媒除去工程において、ＰＬＧＡ及び生理活性物質を含む前記乳化粒子から良溶媒を除去する。良溶媒除去工程は、マイクロスフェアーの断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔が生じないようにして、前記乳化粒子を含有する液から前記良溶媒を除去することができれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。例えば、撹拌しながら前記液を加熱すること、前記液の液面に窒素などのガスをフローすること、及び前記液を減圧させることの少なくともいずれかにより、前記良溶媒を蒸発させて前記液から除去する方法などが挙げられる。マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上又は１．０μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔が生じないようにするためには、良溶媒を早く除去することが好ましい。良溶媒を除去する時間としては、例えば、３０分間〜１２時間が挙げられ、好ましくは１〜１０時間が挙げられ、より好ましくは２〜８時間が挙げられる。

［その他の工程］
その他の工程としては、例えば、溶媒組成調製、分級工程、粒子洗浄工程などが挙げられる。通常、分級工程において粗粉カットや微粉カットが行われるが、本発明において製造した粒子は、実質的に分級工程を行う必要はなくなる。但し、念のため分級工程を含んでおいても構わない。

上記の製造方法によって、マイクロスフェアーの断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がないマイクロスフェアーを製造することができる。

以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。

（参考例１）
参考例１で、生理活性物質を含まないマイクロスフェアー（ＰＬＧＡ微粒子）を作製した。参考例１のマイクロスフェアーを指標に用いて、実施例及び比較例のマイクロスフェアーの断面をＳＥＭ画像で観察することで、実施例及び比較例のマイクロスフェアー中の生理活性物質の分散状態を、以下で確認した。

＜ＰＬＧＡ溶液とＰＶＡ水溶液の調製＞
乳酸・グリコール酸共重合体（Ｒｅｓｏｍｅｒ ＲＧ５０４，エボニック製）が１３質量％なるようにジクロロメタン（関東化学製）を加え、高速回転式分散機クレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて溶解させ、ＰＬＧＡ溶液を得た。その後、０．２μｍのベントフィルター（φ６２，メルク製）でろ過を行った。ポリビニルアルコール（ＰＶＡ，ＥＧ−４０Ｐ，日本合成化学工業製）が１．５質量％となるようにイオン交換水を加え、高速回転式分散機クレアミックス（エム・テクニック製）を用いて溶解させ、ＰＶＡ水溶液を得た。その後、親水性ＰＶＤＦメンブレンフィルター（φ４７，メルク製）でろ過を行った。ＰＬＧＡ乳化粒子を回収するタンクに予めＰＶＡ水溶液を入れ、液面が動く程度に撹拌を行った。

＜マイクロスフェアー（ＰＬＧＡ微粒子）の調製＞
粒子形成工程として、調製したＰＬＧＡ溶液とＰＶＡ水溶液とを特開２０１１−１８９３４８号公報に記載の粒子化処理装置を用いて混合した。ここで特開２０１１−１８９３４８号公報に記載の粒子化処理装置とは、同公報の図２５に記載の装置であって、第２導入口ｄ２０がリング状ディスクである処理用面２の中央の開口を取り巻く同心円状の円環形状であるものであり、ディスク直径は７５ｍｍである。具体的には、調製されたＰＶＡ水溶液を第１導入部ｄ１から処理用面１、２間に、０．０２ＭＰａＧ、６５ｍＬ／分、３０℃で導入し、処理用部１０を２０００ｒｐｍで回転させながら、調製されたＰＬＧＡ溶液を第２導入部ｄ２から処理用面１、２間に、０．６５ＭＰａＧ、２０ｍＬ／分、３０℃で導入して、ＰＶＡ水溶液とＰＬＧＡ溶液とを強制薄膜中で混合し、処理用面１、２間においてジクロロメタンを含むＰＬＧＡ乳化粒子を作製した。処理用面１、２間におけるＰＬＧＡ乳化粒子を含む流体（以下、ＰＬＧＡ乳化粒子分散液）を粒子化処理装置の処理用面１、２間から吐出させた。吐出させたＰＬＧＡ乳化粒子分散液を捕集するためのアウターケーシング６１を介してＰＬＧＡ乳化粒子分散液を、回収タンクに回収した。

次に脱溶媒工程として、前記吐出液をクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて周速度４．７ｍ／秒で撹拌しながら、アルゴンガスを液面に吹き付けるようフローして３．５時間かけてジクロロメタンを除去し、ＰＬＧＡ微粒子を含む懸濁液（ＰＬＧＡ微粒子懸濁液）を得た。得られたＰＬＧＡ微粒子の平均体積基準粒子径は３４．０μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像（図３）を観察した。

図３の通り、上記のＦＩＢ断面に生理活性物質及び空孔がないことが確認された。また、参考例１のマイクロスフェアーの断面が、実施例及び比較例のマイクロスフェアーの断面の観察における指標として用いることができることが解った。

（実施例１）
＜ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液とＰＶＡ水溶液の調製＞
乳酸・グリコール酸共重合体（Ｒｅｓｏｍｅｒ ＲＧ５０４，エボニック製）が１３質量％に、生理活性物質としてプロゲステロン（富士フイルム和光純薬製，細胞生化学用）が１．０質量％になるようにジクロロメタン（関東化学製）を加え、高速回転式分散機クレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて溶解させ、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液を得た。その後、０．２μｍのエアベントフィルター（φ６２，メルク製）でろ過を行った。ＰＶＡ水溶液は、参考例１と同様にして調製した。ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を回収するタンクに予めＰＶＡ水溶液を入れ、液面が動く程度に撹拌を行った。

＜マイクロスフェアーの調製＞
粒子形成工程として、参考例１と同様にして、調製されたＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液とＰＶＡ水溶液とを、特開２０１１−１８９３４８号公報に記載の粒子化処理装置を用いて混合した。具体的には、調製されたＰＶＡ水溶液を第１導入部ｄ１から処理用面１、２間に、０．０２ＭＰａＧ、６５ｍＬ／分、３０℃で導入し、処理用部１０を２０００ｒｐｍで回転させながら、調製されたＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液を第２導入部ｄ２から処理用面１、２間に、０．６５ＭＰａＧ、２０ｍＬ／分、３０℃で導入して、ＰＶＡ水溶液とＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液とを強制薄膜中で混合し、処理用面１、２間においてジクロロメタンを含むＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を作製した。処理用面１、２間におけるＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を含む流体（以下、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液）を粒子化処理装置の処理用面１、２間から吐出させた。吐出させたＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を捕集するためのアウターケーシング６１を介して、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を、回収タンクに回収した。

次に脱溶媒工程として、前記吐出液をクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて周速度４．７ｍ／秒で撹拌しながら、アルゴンガスを液面に吹き付けるようフローして３．５時間かけてジクロロメタンを除去し、マイクロスフェアーを含む懸濁液（マイクロスフェアー懸濁液）を得た。得られたマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は３５．５μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像（図４）を観察した。

図４の通り、上記のＦＩＢ断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がなく、マイクロスフェアー中に生理活性物質が０．１μｍから０．２２μｍの微粒子として均一に分散されていることが確認された。

（実施例２）
実施例1と同様にして、粒子形成工程として、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を調製した。次に脱溶媒工程として、回収した吐出液をクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて、周速度４．７ｍ／秒で撹拌しながら、アルゴンガスをフローして８時間かけてジクロロメタンを除去し、マイクロスフェアーを含む懸濁液（マイクロスフェアー懸濁液）を得た。得られたマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は３５．３μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像を観察した。

そのＳＥＭ画像の観察から、上記のＦＩＢ断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がなく、マイクロスフェアー中に生理活性物質が０．１μｍから０．５５μｍの微粒子として均一に分散されていることが確認された。

（比較例１）
実施例1と同様にして、粒子形成工程として、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を調製した。次に脱溶媒工程として、回収した吐出液をクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて、周速度４．７ｍ／秒で撹拌しながら、大気中で１５時間かけてジクロロメタンを除去し、マイクロスフェアーを含む懸濁液（マイクロスフェアー懸濁液）を得た。得られたマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は３５．４μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像を観察した。

そのＳＥＭ画像の観察から、上記のＦＩＢ断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊が確認された。マイクロスフェアー中に生理活性物質が０．１μｍから１．７μｍの微粒子として不均一に分散されていることが確認された。

（実施例３）
乳酸・グリコール酸共重合体（Ｒｅｓｏｍｅｒ ＲＧ５０４，エボニック製）が１３質量％に、生理活性物質としてプロブコール（富士フイルム和光純薬製、生化学用）が０．７５質量％になるようにジクロロメタン（関東化学製）を加え、高速回転式分散機クレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて溶解させ、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液を得た。その後、０．２μｍのエアベントフィルター（φ６２，メルク製）でろ過を行った。ＰＶＡ水溶液は、参考例１と同様にして調製した。ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を回収するタンクに予めＰＶＡ水溶液を入れ、液面が動く程度に撹拌を行った。

＜マイクロスフェアーの調製＞
粒子形成工程として、参考例１と同様にして、調製されたＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液とＰＶＡ水溶液とを特開２０１１−１８９３４８号公報に記載の粒子化処理装置を用いて混合した。具体的には、調製されたＰＶＡ水溶液を第１導入部ｄ１から処理用面１、２間に、０．０２５ＭＰａＧ、５０ｍＬ／分、３０℃で導入し、処理用部１０を１８００ｒｐｍで回転させながら、調製されたＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液を第２導入部ｄ２から処理用面１、２間に、０．６ＭＰａＧ、１６ｍＬ／分、３０℃で導入して、ＰＶＡ水溶液とＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液とを強制薄膜中で混合し、処理用面１、２間においてジクロロメタンを含むＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を作製した。処理用面１、２間におけるＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を含む流体（以下、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液）を粒子化処理装置の処理用面１、２間から吐出させた。吐出させたＰＬＧＡ及び生理活性物質乳化粒子分散液を捕集するためのアウターケーシング６１を介して、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を、回収タンクに回収した。

次に脱溶媒工程として、前記吐出液をクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて、周速度４．７ｍ／秒で撹拌しながら、アルゴンガスを液面に吹き付けるようフローして２．０時間かけてジクロロメタンを除去し、マイクロスフェアーを含む懸濁液（マイクロスフェアー懸濁液）を得た。得られたマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は２８．５μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像を観察した。

ＳＥＭ画像の観察から、上記のＦＩＢ断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がなく、マイクロスフェアー中に生理活性物質が０．３μｍから０．７μｍの微粒子として均一に分散されていることが確認された。

（実施例４）
乳酸・グリコール酸共重合体（Ｒｅｓｏｍｅｒ ＲＧ５０４，エボニック製）が１３質量％に、生理活性物質としてプロブコール（富士フイルム和光純薬製，生化学用）が１．０質量％になるようにジクロロメタン（関東化学製）を加え、高速回転式分散機クレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて溶解させ、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液を得た。その後、０．２μｍのエアベントフィルター（φ６２，メルク製）でろ過を行った。その後、実施例３と同様に実施して、マイクロスフェアー懸濁液を得た。得られたマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は２８．８μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像を観察した。

ＳＥＭ画像の観察から、上記のＦＩＢ断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊又は空孔がなく、マイクロスフェアー中に生理活性物質が０．３μｍから０．９μｍの微粒子として均一に分散されていることが確認された。

（比較例２）
乳酸・グリコール酸共重合体（Ｒｅｓｏｍｅｒ ＲＧ５０４，エボニック製）が１３質量％に、生理活性物質としてプロブコール（富士フイルム和光純薬製、生化学用）が２．０質量％になるようにジクロロメタン（関東化学製）を加え、高速回転式分散機クレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて溶解させ、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液を得た。その後、０．２μｍのエアベントフィルター（φ６２，メルク製）でろ過を行った。ＰＶＡ水溶液は、参考例１と同様にして調製した。ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を回収するタンクに予めＰＶＡ水溶液を入れ、液面が動く程度に撹拌を行った。

＜マイクロスフェアーの調製＞
粒子形成工程として、参考例１と同様にして、調製されたＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液とＰＶＡ水溶液とを特開２０１１−１８９３４８号公報に記載の粒子化処理装置を用いて混合した。具体的には、調製されたＰＶＡ水溶液を第１導入部ｄ１から処理用面１、２間に、０．０２５ＭＰａＧ、５０ｍＬ／分、３０℃で導入し、処理用部１０を１８００ｒｐｍで回転させながら、調製されたＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液を第２導入部ｄ２から処理用面１、２間に、０．６ＭＰａＧ、１６ｍＬ／分、３０℃で導入して、ＰＶＡ水溶液とＰＬＧＡ及び生理活性物質の溶液とを強制薄膜中で混合し、処理用面１、２間においてジクロロメタンを含むＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を作製した。処理用面１、２間におけるＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子を含む流体（以下、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液）を粒子化処理装置の処理用面１、２間から吐出させた。吐出させたＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を捕集するためのアウターケーシング６１を介して、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を、回収タンクに回収した。

次に脱溶媒工程として、前記吐出液をクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて周速度４．７ｍ／秒で撹拌しながら、アルゴンガスを液面に吹き付けるようフローして２．０時間かけてジクロロメタンを除去し、マイクロスフェアーを含む懸濁液（マイクロスフェアー懸濁液）を得た。得られたマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は２８．９μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像（図５）を観察した。

図５の通り、上記のＦＩＢ断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊が確認された。マイクロスフェアー中に生理活性物質が０．１μｍから１．６μｍの微粒子として不均一に分散されていることが確認された。

（比較例３）
粒子形成工程として、実施例４と同様にして、ＰＬＧＡ及び生理活性物質の乳化粒子分散液を、回収タンクに回収した。次に脱溶媒工程として、回収された吐出液をクレアミックスディゾルバー（エム・テクニック製）を用いて周速度４．７ｍ／秒で撹拌しながら、大気中で３６時間かけてジクロロメタンを除去し、マイクロスフェアーを含む懸濁液（マイクロスフェアー懸濁液）を得た。得られたマイクロスフェアーの平均体積基準粒子径は２８．６μｍであり、代表的な粒子を液体窒素により凍結後、ＦＩＢ断面を作成し、ＳＥＭ画像（図６）を観察した。

図６の通り、上記のＦＩＢ断面に１．５μｍ以上の生理活性物質の塊が確認された。マイクロスフェアー中に生理活性物質が２．０μｍから４．３μｍの微粒子として不均一に分散されており、特に表層部（マイクロスフェアーの最外殻部）に生理活性物質が多く存在していることが確認された。

実施例１〜４及び比較例１〜３のマイクロスフェアーの調製条件の一部及び調製されたマイクロスフェアーの粒子径等を、表１及び表２に示す。

表１から分かる通り、実施例１、実施例２と比較例１で、乾燥条件及び乾燥時間に従って、生理活性物質の微粒子の粒子径が変化した。すなわち、生理活性物質の微粒子の粒子径は、アルゴンの吹き付けの条件で３．５時間で乾燥した実施例１では０．１〜０．２２μｍであったが、アルゴンのフローの条件で８時間で乾燥した実施例２では０．１〜０．５５μｍと大きくなった。大気中の条件で１５時間で乾燥した比較例１では０．１〜１．７μｍと大きく、１．５μｍを超えるものがあった。このように、乾燥条件及び乾燥時間を制御することで、マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の前記生理活性物質の塊又は空孔がない本発明のマイクロスフェアーを製造することができる。

表２から分かる通り、実施例３、実施例４と比較例２で、生理活性物質の含有量に従って、生理活性物質の微粒子の粒子径が変化した。すなわち、生理活性物質の微粒子の粒子径は、含有量が０．７５質量％の実施例３では０．３〜０．７μｍであったが、含有量が１．０質量％の実施例４では０．３〜０．９μｍと大きくなり、更に含有量が２．０質量％の比較例２では０．１〜１．６μｍと大きく、１．５μｍを超えるものであった。また、大気中の条件で３６時間で乾燥した比較例３では２．０〜４．３μｍと大きく、１．５μｍを超えるものがあった。このように、生理活性物質の含有量を制御することで、マイクロスフェアー中に１．５μｍ以上の前記生理活性物質の塊又は空孔がない本発明のマイクロスフェアーを製造することができる。

本発明によって、生理活性物質の初期放出量とその後の放出期間中の放出速度が適切に制御され、生理活性物質を生体内で一定期間、継続して放出することができるマイクロスフェアーを提供することができる。

Claims (5)

1. 乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）を主成分とするマイクロスフェアーであって、
   前記マイクロスフェアーの平均体積基準粒子径が１μｍ以上１５０μｍ以下であり、
   生理活性物質が前記マイクロスフェアーの内部に均一に分散され、
   前記マイクロスフェアーの断面の電子顕微鏡画像において、前記マイクロスフェアーの内部に１．５μｍ以上の前記生理活性物質の塊及び空孔が観察されないことを特徴とするマイクロスフェアー。
2. 前記マイクロスフェアーの内部に１．０μｍ以上の前記生理活性物質の塊及び空孔が観察されない、請求項１に記載のマイクロスフェアー。
3. 分散された前記生理活性物質の平均体積基準粒子径が５ｎｍ〜５００ｎｍである、請求項１又は２に記載のマイクロスフェアー。
4. 前記生理活性物質が親油性生理活性物質である、請求項１〜３のいずれかに記載のマイクロスフェアー。
5. 請求項１〜４のいずれかに記載のマイクロスフェアーを含有する徐放性製剤。