JPH06192269A - ２１−ノルラパマイシン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ２１−ノルラパマイシンおよびそれを含有す
る医薬組成物の提供。 【構成】 式： 【化１】 で示される化合物およびそれを含有してなる医薬組成
物。 【効果】 ２１−ノルラパマイシンは免疫抑制剤、抗炎
症剤、抗真菌剤、抗潰瘍剤および抗増殖剤として有用で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はラパマイシン（rapamyci
n）のアナログ、すなわち、２１−ノルラパマイシン（2
1-norrapamycin）に、および免疫抑制を誘発するのに、
および移植拒絶、宿主対移植片疾患、自己免疫疾患、炎
症疾患、充実性腫瘍、真菌感染および過増殖性血管病の
治療または予防における２１−ノルラパマイシンの使用
方法に関する。

【０００２】

【従来の技術および課題】ラパマイシンは、ストレプト
ミセス・ヒグロスコピカス（Streptomyces hygroscopic
us）により産生される大環状トリエン抗生物質であり、
in vitroおよびinvivoの両方にて、特にカンジダ・アル
ビカンス（Candida albicans）に対して、抗真菌活性を
有することが判明した［シー・ベジナ（C.Vezina）ら、
ジャーナル・オブ・アンチバイオテックス（J.Antibio
t.）２８，７２１（１９７５）；エス・エヌ・セガル
（S,N.Sehgal）ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオテ
ックス（J.Antibiot.）２８，７２７（１９７５）；エ
ッチ・エイ・ベーカー（H.A.Baker）ら、ジャーナル・
オブ・アンチバイオテックス（J.Antibiot.）３１，５
３９（１９７８）；米国特許第３,９２９,９９２号およ
び米国特許第３,９９３,７４９号］。

【０００３】ラパマイシンは単独で（米国特許第４,８
８５,１７１号）またはピシバニル（picibanil）と組み
合わさって（米国特許第４,４０１,６５３号）、抗腫瘍
活性を有することが示されている。アール・マーテル
（R.Martel）ら［カナディアン・ジャーナル・オブ・フ
ィジオロジー・アンド・ファーマコロジー（Can.J.Phys
iol.Pharmacol.）５５，４８（１９７７）］は、ラパマ
イシンが実験アレルギー性脳脊髄炎モデル、多発性硬化
症用のモデルにおいて；アジュバント関節炎モデル、リ
ウマチ様関節炎用のモデルにおいて効果的であり；Ｉg
Ｅ−様抗体の形成を効果的に抑制したことを開示してい
る。

【０００４】ラパマイシンの免疫抑制効果がＦＡＳＥＢ
３，３４１１（１９８９）に開示されている。シクロス
ポリンＡ（CyclosporinＡ）およびＦＫ−５０６、他の
大環状分子もまた、免疫抑制剤として効果的であり、従
って移植拒絶を防止するに有用であることが示されてい
る［ＦＡＳＥＢ３，３４１１（１９８９）；ＦＡＳＥＢ
３，５２５６（１９８９）；アール・ワイ・カルネ（R.
Y.Calne）ら、ランセット（Lancet）１１８３（１９７
８）；および米国特許第５,１００,８９９号］。

【０００５】ラパマイシンはまた、全身性紅斑性狼瘡
［米国特許第５,０７８,９９９号］、肺炎［米国特許第
５,０８０,８９９号］、インスリン依存性真性糖尿病
［FifthInt.Conf.Inflamm.Res.Assoc.121（要約書），
（１９９０）］および平滑筋細胞増殖および血管損傷後
の内膜肥厚症［モリス・アール（Morris,R.）J.Heart L
ung Transplant１１（pt.２）：１９７（１９９２）］
の予防または治療において有用であることが示されてい
る。

【０００６】ラパマイシンのモノ−およびジアシル化誘
導体（２８および４３位でエステル化）は抗真菌剤とし
て有用であり（米国特許第４,３１６,８８５号）、ラパ
マイシンの水溶性プロドラッグを製造するのに用いられ
る（米国特許第４,６５０,８０３号）と示されている。
近年、ラパマイシンのついての番号付の規約が変更され
た；ケミカル・アブストラクトの命名法に従えば、前記
エステルは３１−および４２−位にあることとなろう。
２１−ノルラパマイシンはまた旧命名系では１９−ノル
ラパマイシンと称することもできる。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、免疫抑制剤、
抗炎症剤、抗真菌剤、抗腫瘍剤および抗増殖剤として有
用である、２１−ノルラパマイシンと称される化合物ま
たはその医薬上許容される塩を提供するものである。２
１−ノルラパマイシンは次の化学構造を有する。

【０００８】

【化１】

【０００９】本発明はまた、実質的に純粋な２１−ノル
ラパマイシンに関するものであり；「実質的に純粋な」
とは、９８％を越える純度で、ラパマイシンが不含であ
ると定義される。

【００１０】医薬上許容される塩は、ナトリウム、カリ
ウムなどの無機カチオン；およびアルキル基当たり炭素
数１〜６のモノ−、ジ−およびトリアルキルアミンおよ
びアルキル基当たり炭素数１〜６のモノ−、ジ−および
トリヒドロキシアルキルアミンなどの有機塩基から誘導
されるものである。

【００１１】本発明はまた、医薬担体と、治療上有効量
の２１−ノルラパマイシンとからなる、免疫抑制の誘発
を必要とする哺乳動物における免疫抑制誘発用の医薬組
成物を提供する。本発明はさらに免疫抑制有効量の２１
−ノルラパマイシンを免疫抑制の誘発を必要とする哺乳
動物に投与することからなる、該哺乳動物における免疫
抑制誘発法を提供する。２１−ノルラパマイシンは、ス
トレプトミセス・ヒグロスコピカス、すなわち、イリノ
イ州、ペオリア、National Center for Agricultural U
tilization Research,USDA,ARSのカルチャー・コレクシ
ョンより入手可能であるＮＲＲＬ５４９１の培養液の発
酵によって調製した。ＮＲＲＬ５４９１はまた、ＡＴＣ
Ｃ２９２５３の下、メリーランド州、ロックビルのAmer
ican Type Culture Collectionより入手可能である。

【００１２】２１−ノルラパマイシンは、標準的な発
酵、単離および精製技法を用い、ＮＲＲＬ５４９１の好
気性発酵により得ることができる。第１期（first stag
e）接種源の製法およびＮＲＲＬ５４９１の発酵が米国
特許第３,９２９,９９２号に記載されている。ＮＲＲＬ
５４９１の発酵ならびに２１−ノルラパマイシンの単離
および精製についての具体例を実施例１にて提供する。
２１−ノルラパマイシンの好ましい生成法は発酵強化前
駆体を用いて達成された［パビア・エヌ・エル（Pavia,
N.L.）、ジャーナル・オブ・ナチュラル・プロダクツ
（J.Nat.Prod.）５１：１６７（１９９１）］。ＮＲＲ
Ｌ５４９１を、リジン濃度が制限され、プロリン濃度が
補足されており、それによってリジンの代わりにプロリ
ンをマクロライド中に取り込ませることを微生物に強い
る、限定培地にて発酵させた。リジンはラパマイシンマ
クロライドに含まれるピペコリン酸基の前駆体である。
発酵強化前駆体を用いて２１−ノルラパマイシンを製造
するのに用いる方法が実施例２に記載されている。

【００１３】２１−ノルラパマイシンの免疫抑制活性
は、２１−ノルラパマイシンのリンパ球増殖（ＬＡＦ）
抑制能を測定するin vitroにおける標準薬理試験操作に
て確立された。比較のためにさらにラパマイシンを評価
した。用いた操作および得られた結果を以下に記載す
る。

【００１４】代表的化合物の免疫抑制効果のin vitroに
おける測定法として、コミトゲン誘発の胸腺細胞増殖操
作（ＬＡＦ）を用いた。簡単には、正常なＢＡＬＢ／ｃ
マウスの胸腺細胞をＰＨＡおよびＩＬ−１と一緒に７２
時間培養し、最後の６時間、トリチウム化チミジンでパ
ルスする。細胞を種々の濃度のラパマイシンまたは試験
化合物と共にまたはなしで培養する。細胞を収穫し、取
り込まれた放射活性を測定する。リンパ球増殖の抑制を
薬剤非処理対照からの１分間当たりの計数のパーセント
変化として評価する。２回の評価にて、２１−ノルラパ
マイシンについて、３３.２と３２.０ｎＭのＩＣ₅₀を
得、ラパマイシンについて、７.８と７.５ｎＭのＩＣ₅₀
を得た。１μＭと０.１μＭの用量で、２１−ノルラパ
マイシンは、各々、９６％および９０％まで増殖を抑制
した。同じ濃度で、ラパマイシンは、各々、９７％およ
び９６％まで増殖を抑制した。

【００１５】この標準薬理試験操作の結果は、ミトゲン
刺激に応答してＴ−細胞増殖を抑制する２１−ノルラパ
マイシンの能力によりそれが免疫抑制活性であることを
証明する。２１−ノルラパマイシンは構造的にラパマイ
シンに類似し、ラパマイシンと同様の活性プロフィール
を有するため、２１−ノルラパマイシンもまた、抗腫
瘍、抗真菌、抗炎症および平滑筋細胞抗増殖活性を有す
ると考えられる。

【００１６】特に、２１−ノルラパマイシンは、腎臓、
心臓、肝臓、肺、骨髄、膵臓（膵島細胞）、角膜、小
腸、皮膚同種移植片および心臓弁異種移植片のような移
植拒絶；狼瘡、リウマチ様関節炎、真性糖尿病、重症筋
無力症および多発性硬化症のような自己免疫疾患；およ
び乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏、炎症性腸疾患および眼ブ
ドウ膜炎のような炎症疾患；充実性腫瘍；真菌感染；喘
息、慢性閉塞性肺疾患、気腫、急性呼吸窮迫症候群およ
び気管支炎のような肺炎；および生物学的にまたは機械
的に介在する血管損傷後の再狭窄のような内膜平滑筋細
胞増殖関連の病態の治療および予防にて有用である。

【００１７】２１−ノルラパマイシンはまた、他の免疫
抑制剤、例えば、アザチオプリン、プレドニゾンおよび
メチルプレドニゾロンのようなコルチコステロイド、シ
クロホスファミド、ラパマイシン、シクロスポリンＡ、
ＯＫＴ−３およびＡＴＧと組み合わせて用いることがで
きる。２１−ノルラパマイシンをそのような免疫抑制を
誘発する他の医薬および薬剤と組み合わせることによ
り、その後者の毒性を免疫抑制を誘発するのに必要なそ
のような薬剤の量より少ない量の毒性に減少させること
ができる。このような組み合わせ療法の基本原理は、治
療用量以下でラパマイシンとシクロスポリンＡを組み合
わせて使用することで心臓同種移植片の生存期間を有意
に延長させたことを示す、ステプコフスキー（Stepkows
ki）の結果により確立された。［トランスプランテーシ
ョン・プロシーディングス（Transplantation Proc.）
２３：５０７（１９９１）］。２１−ノルラパマイシン
は純物としてまたは医薬担体と一緒に処方できる。医薬
担体は固体または液体であってもよい。

【００１８】固体担体は、フレーバー剤、滑沢剤、可溶
化剤、沈殿防止剤、充填剤、滑動剤、圧縮助剤、結合剤
または錠剤崩壊剤としても作用しうる１種またはそれ以
上の物質を包含でき；それはまたカプセル化物質でもあ
り得る。粉末においては、担体は微細化活性成分と混合
した微細化固体である。錠剤においては、活性成分を、
必要な圧縮特性を有する担体と適当な割合に混合し、所
望の形状および大きさに打錠する。該粉末および錠剤
は、好ましくは、９９％までの活性成分を含有する。適
当な固体担体は、例えば、リン酸カルシウム、ステアリ
ン酸マグネシウム、タルク、糖類、ラクトース、デキス
トリン、スターチ、ゼラチン、セルロース、メチルセル
ロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリジン、低融点ワックスおよびイオン交換樹
脂を包含する。

【００１９】液体担体は溶液、懸濁液、エマルジョン、
シロップ、エリキシル剤および圧縮組成物を調製するの
に用いる。活性成分を水、有機溶媒、両者の混合液また
は医薬上許容される油脂のごとき医薬上許容される液体
担体に溶解または懸濁できる。該液体担体は、可溶化
剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤、甘味剤、フレーバー剤、
沈殿防止剤、増稠剤、着色剤、粘度調節剤、安定剤また
は浸透圧調節剤のごとき他の適当な医薬添加剤を含有し
得る。経口および非経口投与用の適当な液体担体の例
は、水（前記の添加剤、例えば、セルロース誘導体、好
ましくはナトリウムカルボキシメチルセルロース溶液を
部分的に含有）、アルコール類（一価アルコールおよび
多価アルコール、例えばグリコールを含有）およびそれ
らの誘導体、および油類（分別ヤシ油および落花生油）
を包含する。非経口投与の場合、該担体はオレイン酸エ
チルおよびミリスチン酸イソプロピルのごとき油状エス
テルとすることができる。滅菌液体担体は、非経口投与
用の滅菌液体形組成物において有用である。圧縮組成物
用液体担体はハロゲン化炭化水素または他の医薬上許容
される噴射剤とすることができる。

【００２０】滅菌溶液または懸濁液である液体医薬組成
物は、例えば、筋肉内投与、腹腔内投与または皮下注射
によって利用できる。また、滅菌溶液は静脈内投与でき
る。また、該化合物は液体または固体形のいずれかの組
成物にて経口投与できる。

【００２１】２１−ノルラパマイシンは慣用されている
坐剤形にて直腸投与してもよい。直腸内投与または気管
支内吸入あるいは通気により投与する場合、２１−ノル
ラパマイシンは水溶液または一部水溶液に処方してもよ
く、ついでエアロゾルの形態にて用いることができる。
２１−ノルラパマイシンはまた、活性化合物と、該活性
化合物に不活性であり、皮膚に対して非毒性であって、
皮膚を介して全身性吸収用の薬剤の血流中へのデリバリ
ーを可能とする担体とを含有する経皮パッチの使用を通
して経皮的に投与してもよい。該担体はクリームおよび
軟膏、ペースト、ゲルおよび閉塞装置のようなかなりの
数の形態をとることができる。クリームおよび軟膏は、
粘性液体または水中油型あるいは油中水型のいずれかの
半固体エマルジョンであってもよい。吸収性粉末を活性
成分含有の石油または親水ワセリン中に分散させたこと
からなるペーストもまた適当である。担体と共にまたは
なしで活性成分を含有するリザバー、または活性成分含
有のマトリックスをカバーする半透膜のような、種々の
閉塞装置を用いて活性成分を血流中に放出してもよい。
他の閉塞装置が文献で知られている。

【００２２】好ましくは、医薬組成物は、例えば錠剤ま
たはカンプセル剤のような単位投与形である。かかる形
態において、組成物を適量の有効成分を含有する単位用
量に細分割し；該単位投与形はパッケージ組成物、例え
ば、パケット散剤、バイアル、アンプル、予備充填シリ
ンジまたは液体含有のサシェーとすることができる。該
単位投与形は、例えば、カプセル剤または錠剤自体であ
り得るか、あるいはそれは適当数のパッケージ形態のい
ずれかのかかる組成物であり得る。治療において用いる
べき用量は顧問医により主観的に決定されなければなら
ない。

【００２３】加えて、２１−ノルラパマイシンは、患部
に投与してもよい活性化合物を０.１−５％、好ましく
は２％含有する医薬上許容されるビヒクルで処方するこ
とにより、溶液、クリームまたはローションとして使用
できる。必要な投与量は、用いる個々の組成物、投与経
路、存在する徴候の重篤度、および治療される個々の対
象で変化する。標準薬理試験操作にて得られる結果に基
づいて、２１−ノルラパマイシンの一日の推定静脈内投
与量は、０.００１−１００mg／kg、好ましくは０.００
５−２０mg／kg、さらに好ましくは０.０１−２mg／kg
であろう。２１−ノルラパマイシンの一日の推定経口投
与量は、０.００５−３００mg／kg、好ましくは０.０１
−２００mg／kg、さらに好ましくは０.０５−４０mg／k
gであろう。

【００２４】治療は、一般に、最適用量よりも少ない投
与量の化合物で開始される。その後、その環境下で最適
の効果が得られるまで投与量を増加させる；経口、非経
口、鼻腔内、気管支内、経皮または直腸投与用の正確な
投与量は、治療する個々の対象での実験に基づいて投与
する医者により決定されるであろう。一般に、２１−ノ
ルラパマイシンは、いずれの有害または有毒な副作用も
引き起こすことなく、一般に効果的な結果を付与するで
あろう濃度で投与することが最も望ましい。

【００２５】

【実施例】以下の実施例は、常套手段、および発酵強化
前駆体を用いる手段の両者による２１−ノルラパマイシ
ンの製造を説明する。

【００２６】実施例１ ストレプトミセス・ヒグロスコピカス ＮＲＲＬ５４９
１を増殖させ、オートミール・トマトペーストの寒天斜
面上（テイ・ジイ・プリダム（T.G.Pridham）ら、アン
チバイオティック・アニュアル（Antibiotic Annual）
１９５６−１９５７，メディカル・エンシクロペディア
・インコーポレイテッド（Medical Encyclopedia In
c.），ニューヨーク，９４７頁）および同培地含有のル
ー（Roux）ボトル中に維持した。良好な増殖体が２８℃
で７日間のインキュベーション後に得られた。１のルー
ボトルからの胞子を洗浄し、５０ｍｌの滅菌蒸留水中に
懸濁させた。この懸濁液を用いて第１期接種源を接種し
た。

【００２７】第１期接種源．エレンマイエルフラスコ
（５００ｍｌ）を以下の培養液１００ｍｌで充填した： 大豆粉末（ミシガン州、ミッドランド、 アーチャー・ダニエルス（Archer-Daniels） 「Soecial Ｘ」 ＝４％重量／容量 グルコース（Cerelose） ＝２％重量／容量 硫酸アンモニウム ＝０.３％重量／容量 炭酸カルシウム ＝０.１５％重量／容量

【００２８】該フラスコを１２１℃で３５分間滅菌し、
２５℃に冷却した。該フラスコに前記の４％（４ｍｌ）
胞子懸濁液を接種し、回転振盪機（２インチ・ストロー
ク）上、２４０ｒｐｍで２４時間、２５℃にてインキュ
ベーションした。

【００２９】第２期接種源．pＨ約７.１〜７.３で前記
の接種源培養液３.２リットル含有の２４リットルの平
底フラスコを、１２１℃で３５分間オートクレーブに付
すことで滅菌し、不溶性物質を再懸濁させるのに振盪さ
せ、さらに４５分間再滅菌した。該フラスコを２５℃に
冷却し、第１期接種源６４ｍｌを接種し、６５ｒｐｍに
セットした往復振盪機（４インチ・ストローク）上に置
き、２５℃で１８時間インキュベーションした。

【００３０】生成期．生成期は、アンチフォーム自動添
加システムおよびpＨ記録計／調節器を備えた２５０リ
ットルのニュー・ブランズウィック（New Brunswick）
発酵槽モデルＦ−２５０で行なわれた。該発酵槽を、以
下の成分からなる生成培養水溶液１６０リットルで充填
した： 大豆粉末（ミシガン州、ミッドランド、 アーチャー・ダニエルス、 「Soecial Ｘ」 ＝３％重量／容量 グルコース（Cerelose） ＝２％重量／容量 硫酸アンモニウム ＝０.１％重量／容量 炭酸カルシウム（一塩基性） ＝０.５％重量／容量 アンチフォーム剤（イリノイ州、ガーネー マザー・ケミカル・インコーポレイテッド （Mazer Chemicals,Inc.） 「ＤＦ-１４３-ＰＸ」 ＝０.０５％重量／容量

【００３１】該発酵槽を１２１℃で３０分間滅菌し、冷
却し、pＨを水酸化アンモニウムで５.８〜６.２に調整
した。ついで該発酵槽に１フラスコ（２％）の第２期接
種源を接種し、０.２５ｖ／ｖ／分で通気し、２００ｒ
ｐｍで撹拌しながら、発酵を２５℃で続行させた。

【００３２】発酵ブロスのpＨが３０−３５時間で落ち
始め、発酵の終わりまで、必要があれば、水酸化アンモ
ニウムの自動添加により６.０に調整した。約４８時間
の増殖で、ブロス中のグルコース濃度が約０.５％に落
ち、４０％グルコース溶液の連続的添加を３.７５％発
酵混合物容量／日の割合で開始し、発酵の終わりまで続
けた。カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）を
接種した寒天プレート上の微生物学的アッセイにより測
定される、約６０μｇ／ｍｌの力価に、４ないし５日で
到達した。発酵をこの時点で終えた。

【００３３】２１−ノルラパマイシンの抽出および単離
を以下の操作により行った：菌糸体成長ブロスをアセト
ンで抽出し、水性部が残るだけになるまで真空下で蒸発
させた。該水性部を塩化メチレンで３回抽出した。該塩
化メチレン抽出液を合し、減圧下で蒸発させた。残渣を
少容量の塩化メチレンに溶かし、小プラグのシリカゲル
上に充填した。シリカを、５０／５０（ｖ／ｖ）ヘキサ
ン／酢酸エチルから１００％酢酸エチルのステップ勾配
でフラッシュ溶出に付した。該プラグの最終洗浄をアセ
トンで行った。各フラクションのアリコートを窒素下で
蒸発させ、分析用ＨＰＬＣ用にアセトニトリルに再溶解
させた。試料を、１.０ｍｌ／分の流速で、移動相とし
てジオキサン／水（６０／４０）を用いるＮova ＰakＣ
１８ １５ｃｍ×３.９ｍｍカラム（ウォータース（Wate
rs））上に充填した。２８０ｎｍでのＵＶ検出を用いて
保持時間を測定した。２１−ノルラパマイシンは前記の
ＨＰＬＣ条件下で７.３分の保持時間を有した。

【００３４】２１−ノルラパマイシン含有のフラクショ
ンを蒸発させ、Ｄynamax１インチ径のＣ１８カラムを用
いる分取用クロマトグラフィーにより精製した。アセト
ニトリル／水（７０／３０，ｖ／ｖ）のイソクラティッ
ク移動相を、１５ｍｌ／分の流速で溶出液として用い
た。ＵＶ検出は２８０ｎｍであった。フラクションを前
記のように純度について分析用ＨＰＬＣによりチェック
し、２１−ノルラパマイシン含有のフラクションを合
し、蒸発させて純粋な２１−ノルラパマイシンを得た。

【００３５】負イオンＦＡＢ質量スペクトルは、ｍ／ｚ
＝８９９と８９８の混合およびｍ／ｚ＝５７６の断片イ
オン（大環状体のＣ−２１〜Ｃ−１／Ｃ−１〜Ｃ−２９
部）を示した。該分子のＣ−３２−Ｃ−３６−Ｃ−１−
Ｃ−２３より生じるｍ／ｚ＝５９０の断片もまた観察さ
れた。

【００３６】¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（内部基準物質とし
てのＴＭＳ含有の、アルミナ中和ＣＤＣl₃，４００ＭＨ
z）：選定された共鳴は以下のメチル共鳴を包含する：
δ３.３８ｐｐｍ（Ｃ−４１ ＯＣＨ₃）、３.３６ｐｐ
ｍ（Ｃ−３２ ＯＣＨ₃）、３.１１ｐｐｍ（Ｃ−７ Ｏ
ＣＨ₃）、１.７５ｐｐｍ（Ｃ−３０ ビニルＣＨ₃）、
１.６４ｐｐｍ（Ｃ−６ ビニルＣＨ₃）、１.０９ｐｐ
ｍ（Ｃ−２８ セカンダリーＣＨ₃）、１.０３ｐｐｍ
（Ｃ−３６ セカンダリーＣＨ₃）、１.０１ｐｐｍ（Ｃ
−３４ セカンダリーＣＨ₃）、０.９３ｐｐｍ（Ｃ−１
２ セカンダリーＣＨ₃）および０.８９ｐｐｍ（Ｃ−３
７ セカンダリーＣＨ₃）。Ｈ−２２プロトンは、５.４
４ｐｐｍで観察された。

【００３７】実施例２ ストレプトミセス・ヒグロスコピカス ＮＲＲＬ５４９
１を増殖させて維持し、胞子懸濁液を実施例１に記載の
ように調製した。胞子を増殖およびマチュレーションす
るのに、７〜１５日間のインキュベーションで十分であ
った。ついで、高粘度の接種源を得るのに必要な最少量
の滅菌水中に胞子をこすり落とした。約５ｍｌのこの胞
子懸濁液を用いて、２１−ノルラパマイシンの強化生成
物を得るのにプロリンおよびリジンを加えた、以下の培
養液５００ｍｌを接種した。

【００３８】 Ｈ₂Ｏ １８００ｍｌ ＫＨ₂ＰＯ₄ ４ｇ Ｋ₂ＨＰＯ₄ ４ｇ ＮaＣl １０ｇ ＣaＣＯ₃ ３ｇ グリセロール ４０ｍｌ Ｌ−グルタメ−ト ４ｇ Ｌ−ロイシン ２ｇ 酵母エキス １０ｇ Ｎa₂ＳＯ₄ ０.７１ｇ ＭgＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.５１ｇ ＦeＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０.２ｇ ＭgＣl₂・６Ｈ₂Ｏ １.０２ｇ ＣoＣl₂ ２０ｍｇ ボラックス（Borax） ２０ｍｇ （ＮＨ₄)₆Ｍo₇Ｏ₂₄・４Ｈ₂Ｏ ３６ｍｇ ＭnＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ ２４ｍｇ ＺnＳＯ₄ １２０ｍｇ ＣuＣl₂・２Ｈ₂Ｏ ２.６ｍｇ

【００３９】培養液のpＨを６.０に調整し、プロリンお
よびリジンを以下の表に示すような種々の濃度で該培養
液に加えた。接種されたフラスコを、回転振盪機上、２
５℃、２００ｒｐｍ（２”ストローク）にてインキュベ
ーションした。インキュベーションの７日後、菌糸体
を、該ブロスを１３００×ｇで１２分間遠心操作に付す
ことにより回収した。菌糸体ペレットを激しく撹拌する
ことにより３倍容量のアセトンで３回抽出した。ＨＰＬ
Ｃ分析および精製は、実施例１に記載の操作に従って行
った。以下の表は、プロリンおよびリジンの濃度を変化
させることにより得られた２１−ノルラパマイシンとラ
パマイシンの収量を示す。

【００４０】 発酵強化前駆体により産生される２１−ラパマイシンの収量 ２１−ノルラパマイシン ラパマイシン プロリン リジン （ｍｇ／ｌ） （ｍｇ／ｌ） ０.６％ ０.０５％ １４.６ ６０ ０.６％ ０.１％ １０.６ ５３ ０.６％ ０.０％ １２.６ ３６ ０.４％ ０.０５％ ９.５ ６０ ０.３％ ０.０５％ ７.４ ５７ ０.２％ ０.０５％ ５.０ ５７

【００４１】

【発明の効果】本発明によれば、免疫抑制剤、抗炎症
剤、抗真菌剤、抗腫瘍剤および抗増殖剤として有用な２
１−ノルラパマイシンまたはその医薬上許容される塩お
よびそれを含有してなる医薬組成物が提供される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/40 ＡＣＤ 7431−4Ｃ ＡＤＡ 7431−4Ｃ (72)発明者 スタンリー・レイ・ハウエル アメリカ合衆国92122カリフォルニア州サ ン・ディエゴ、ノベル・ドライブ3833番 アパートメント3101 (72)発明者 スレンドラ・ネイス・シーガル アメリカ合衆国08540ニュージャージー州 プレインズボロ、セイル・ドライブ４番

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ２１−ノルラパマイシンである化合物ま
   たはその医薬上許容される塩。
2. 【請求項２】 治療上有効量の２１−ノルラパマイシン
   と医薬担体とからなることを特徴とする、免疫抑制を必
   要とする哺乳動物における免疫抑制誘発用医薬組成物。
3. 【請求項３】 免疫抑制有効量の２１−ノルラパマイシ
   ンを哺乳動物に投与することを特徴とする、免疫抑制を
   必要とする哺乳動物における免疫抑制誘発方法。
4. 【請求項４】 有効量の２１−ノルラパマイシンを投与
   することを特徴とする、移植拒絶；宿主対移植片疾患；
   自己免疫疾患；炎症疾患；充実性腫瘍；真菌感染；肺
   炎；および内膜平滑筋細胞増殖関連の病態の治療または
   予防方法。
5. 【請求項５】 移植される器官が、腎臓、心臓、肝臓、
   骨髄、膵臓（膵島細胞）、角膜、小腸、皮膚および心臓
   弁からなる群より選択される請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】 自己免疫疾患が、狼瘡、リウマチ様関節
   炎、真性糖尿病、重症筋無力症および多発性硬化症から
   なる群より選択される請求項４記載の方法。
7. 【請求項７】 炎症疾患が、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂
   漏、炎症性腸疾患および眼部ブドウ膜炎である請求項４
   記載の方法。
8. 【請求項８】 肺炎が、喘息、慢性閉塞性肺疾患、気
   腫、急性呼吸窮迫症候群および気管支炎からなる群より
   選択される請求項４記載の方法。
9. 【請求項９】 内膜平滑筋細胞増殖関連の病態が再狭窄
   である請求項４記載の方法。