JPH06501841A - サイトメガウイルス感染の作用を変調するオリゴヌクレオチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 サイトメガロウィルス感染の作用を変調するオリゴヌクレオチド発明の分野 本発明は、サイトメガロウィルスの複製を阻害し且つサイトメガロウィルス感染 を治療するのに投与することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドの設計お よび合成に関する。これらの化合物は、予防的にかまたは治療的に用いて、サイ トメガロウィルスによって引き起こされた疾患の苛酷さを低減することができる 。ＲＮＡＩＥ的と特異的にハイブリッド形成しうるオリゴヌクレオチドまたはオ リゴヌクレオチド類似体を記載する。

発明の背景 サイトメガロウィルス（ＣＭＶ′ｓ＞は天然に遍在し且つ子宮内感染の最も一般 的な原因である。先天的なＳ染は、感染した！親からの新生児において一般的で ある。ある集団においては、小児の１０％程度か周産期感染を示す、低パーセン トの新生児において感染は有毒であり、多数の器官に影響を及ぼす、細網内皮細 胞および中枢神経系への謬著な影響は典型的であり；そして感染は精神遅滞の主 要原因である。入念な試験により、厳密には胎児期に感染した成人の５０％程度 が神経精神医学的疾患または龍聴を示すことかあるということか実証されている ０通常、神経性器官に慢性の病的状態が残るが、ウィルスは長い間賢臓で検出す ることができる。

成人において、サイトメガロウィルスに誘導された単核細胞症は、有意の病的状 態を引き起こすいつまでも長引く疾患である。免疫抑制された患者でそれが生じ た場合、疾患は一層重大であり、そしてそれは、致命的になりうる他の伝染性病 原体によって合併されることがある。サイトメガロウィルス網膜炎は、免疫抑制 された患者においては重大な間組であり、失明に至ることが多い、更に、免疫抑 制された患者は、最も致命的なヒトウィルス疾患の一つであるＣＭＶ肺炎に対し て極めて感受性である。サイトメガロウィルスはＨＩＶ感染のＡＩＤＳへの経過 において、非形質転換同時感染Ｔ細胞中のＨＩＶ長期反復（ＬＴＲ）の転写を刺 激することによってＨＩＶの感染をＡＩＤＳへ進行させることがあるが、ＩＤＳ 患者からの副腎および脳の組織学的実験により、副腎炎、脳炎および末梢神経障 害はＣＭＶ感染によって引き起こされたことが示唆された。

ＣＭＶはＭＡ形成ウィルスであると考えられる。インビトロにおいて、ＣＭＶは 細胞を形質転換し且つ増殖を刺激することかできる。ヒトおよび非ヒト細胞双方 が、ＣＭＶと一緒にインキュベートした場合に形質転換されることがある。形質 転換された細胞はＣＭＶ抗原を含み、それが、適当な動物に接種された場合に！ ！４を形成する。更に、腫瘍形成の可能性は、ＣＭＶゲノムの特定の断片に関係 していた。

ヒトＣＭＶは大型のエンベローブ形ヘルペスウィルスであり、そのゲノムは、長 さが約２４０．０００ヌクレオチドの二本！ｌＤＮＡ分子から成る。このゲノム は、全ＤＮＡウィルスの内の最大の複合体であり、単純庖疹ウィルス（Ｈ５Ｖ） のゲノムより約５０％大きい、完全なウィルスＤＮＡは隣接する長い（Ｌ）断片 および短い（Ｓ）断片から成り、それぞれが反復配列の相同領域によって側面に 位１した独特のＤＮＡ配列の領域を含む、一つの群としてのヒトＣＭＶＩｊＡＭ 物は少なくとも８０％の配列相同性を有して、サイトメガロウィルスを亜群また は亜種に分類することをほとんど不可能にしているが、種々のＣＭＶのＤＮＡ標 品の制限エンドヌクレアーゼパターンの変化は、疫学的に無間係の株において同 一であると証明しつる。ＣＭＶの始原型株のＤＮＡは配列順序決定され且つ１７ ５個の独特の翻訳読み取り枠（ＯＲＦｓ）についての保守的評価を含むことが報 告された。多数の予測されたＣＭＶ遺伝子産物は他のヒトヘルペスウィルス遺伝 子産物に対して相同である。少なくとも４２ＭＵの０ＲＦｓは推定上のグリコプ ロティンをコートし、そして数個のＣＭＶ　０ＲＦｓは、ヒトオプシン受容体タ ンパク質に対してアミノ酸相同性であるタンパク質をコードすると考えられる。

寛容なヒト線維芽細胞において、ＣＭＶＩＩ伝子発現は、転写および回状段階双 方で作用する遺伝学的段階のカスゲートによって調節されている。ＣＭＶ遺伝子 発現は、前初期（ＩＥ）、初期および後期として定義されるＨ５Ｖの場合と同機 に三段階に分けることができる。ウィルスの吸着、侵入および脱外被に続いて、 一群のウィルスの転写物である即時型メツセンジャーＲＮＡ５　（ＩＥｍＲＮＡ ｓ）が、シクロヘキシミドなどの翻訳阻害剤の存在下であっても１〜４時間以内 に合成される０通常の感染経過において、ＩＥｍＲＮＡｓは翻訳され、そしてそ れらのタンパク質産物は初期転写段階の開始の手段となる。少なくとも４種類の タンパク質がＩＥｍＲＮＡｓから合成され：これらの内の１種類は環タンパク質 である。ＩＥＩおよびＩＥ２タンパク質は池のＣＭＶ遺伝子の転写活性化因子で あり、そしてＩＥ３タンパク質は、インビトロにおいてＮＩＨ３Ｔ３細胞を形質 転換することができる一定領域のＣＭＶゲノムを包含している。初期タンパク質 は、ウィルスＤＮＡ合成の前に合成されるｍＲＮＡ５によってコードされる。多 数の初期タンパク質は、感染細胞中のヌクレオチド代謝およびＤＮＡ合成におい である役割を果たす、ウィルスＤＮＡ合成開始後の後期ｍＲＮＡ５の転写は最大 であり、恐らくは、類似のＨ３ＶｍＲＮＡｓについて観察されたのと同様の鋳型 存在量要件を反映している。後期ＣＭＶタンパク質としては、ウィルスエンベロ ー１の環タンパク質成分、ウィルスキャプシドタンパク質並びに、成熟ＣＭＶ粒 子の集合または構造の完全さおよび／または感染細胞からの集められたピリオン の出口に必要な他のタンパク質がある。ＣＭ■遺伝子発現の際に作用する転写調 節に加えて、若干のＣＭＶタンパク質の外観に影響を及ぼす転写後調節の例が知 られている。ｍＲＮＡ５のスゲライジングは、Ｈ３Ｖ遺伝子発現において観察さ れるよりも一般的であり、同族体ｍＲＮＡ中の５′非翻訳領域のヌクレオチド配 列組成は少なくとも１種類の初期ＣＭＶタンパク質の合成に影響を及ぼすことか 報告されている。

ＣＭＶに対する有効な治療法は、多数の抗ウイルス性物質の研究にもかかわらず 未だに開発されていない、インターフェロン、トランスファーファクター、アデ ニンアラビノシド（Ａｒａ−Ａ）、アサイクログアノシン（アサイクロバー。

ＡＣＶ）およびこれらの薬剤のいくつかの組合わせは、ＣＭＶ感染を調節する場 合に巣効であった。前臨床および臨床的データによると、フォスカーネット（ｆ ｏｓｃａｒｎｅｔ）（ＰＦＡ）およびカンシクロノｈ−（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｔ ｒ）（ＤＨＰＧ）は、抗ウイルス性剤として制限された可能性を示す、ＰＦＡ治 療の結果として、５人のＡＩＤＳ患者でＣＭＶＩＩＩＩ膜炎の消散が生じた。Ｄ ＨＰＧの研究により、ＣＭＶ網膜炎または大腸炎に対する有効性が示された。Ｄ ＨＰＧは治療された患者によって十分に耐性であると思われるが、可逆的好中球 減少症の発症、長期投与によるＣＭＶの耐性株の出現およびＣＭＶ肺炎に対する 有効性の欠如により、この化合物の長期適用は制限される。より有効で且つ毒性 か少ない治療用化合物および方法の開発は、急性および慢性双方ヅ】使用に必要 とされている。

古典的な治療薬は、概して、それらの疾患の発症または疾患を増強する機能を変 調しようと努力して、タンパク質との相互作用に的がしぼられていた。このよう な治療方法は、サイトメガロウィルスに関しては失敗であった６本発明は、この ような感染の治療に対する別の方法である、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌ クレオチド類似体の仲介によるサイトメガロウィルス遺伝子発現のアンチセンス 阻害に関する。

アンチセンス方法論は、比較的短いオリゴヌクレオチドの一本ｇ［ｍＲＮＡ若し くは一本鎖ＤＮＡに対する、または二本鎖Ｄ　Ｎ　Ａであっても、これらの細胞 内核酸の正常な本質的機能か破壊されるような相補的ハイブリダイゼーションで ある。

ハイブリダイゼーションは、ＲＮＡまたは一本ｊｉｉ　Ｄ　Ｎ　Ａのワトソン・ クリック塩基対に対するオリゴヌクレオチドの配列特異的水素結合である。この ような塩基対を互いに相補的であると称する。

核酸機能を破壊する段階は、終結段階の２種類の可能性を提案しているコーエン （Ｃｏｈｅｎ）によって、Ｏｌｉ　ｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：Ａｎｔｉｓｅｎ ｓｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ旦工り二且且且工立旦、ＣＲＣプ レス（Ｐｒｅｓｓ）、ポカ・ラドンＦＬ、（１９８９）で論及されている。第一 のハイブリダイゼーション阻止は、オリゴヌクレオチド阻害剤か標的核酸に結合 し、したがって、大部分はリポソームであることか多い必須のタンパク質の核酸 に対する結合を単純な立体障害によって妨げる終結段階を示している。メチルホ スホネートオリゴヌクレオチド：Ｐ、Ｓ、ミラ＜Ｍｉｌｌｅｒ）およびｐ、　ｏ 、　ｐ　ツオ−（Ｔｓ’０）、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕ　Ｄｅｓｉ　ｎ 、第２巻、１１７〜１２８頁（１９８７）＝およびα−アノマーオリゴヌクレオ チド、コーエン、Ｊ、Ｓ、監修、０１ｉ　ｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：Ａｎｔｉ ｓｅｎｓｅ−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘ　ｒｅｓｓｉｏｎ、 ＣＲＣプレス。

ポカ・ラドンＦＬ（１９８９）は、ハイブリダイゼーション阻止によって核酸機 能を破壊すると考えられる最も広範囲にわたって研究されたアンチセンス物質の 内の２種類である。

アンチセンスオリゴヌクレオチドに関する第二の種類の終結段階は、細胞内ＲＮ アーゼＨによる標的ＲＮＡの酵素的開裂を必要とする。オリゴヌクレオチドまた はオリゴヌクレオチド類似体はデオキシリボ形でなければならないか、標的ＲＮ Ａとハイプリント形成し、そしてこの二重らせんは酵素ＲＮアーセＨを活性化し てＲＮＡｇを開裂し、それによってＲＮＡの正常な機能を破壊する。ホスホロチ オエートオリゴヌクレオチドは、この種類の終結１１１階によって作用するアン チセンス剤の；著な例である。

かなりの研究は、治療目的のアンチセンス剤としてのオリゴヌクレオチドおよび オリゴヌクレオチド類似体の用途に向けられている。オリゴヌクレオチドの診断 法、検ｆ試薬および可能な治療薬としての用途には、オリゴヌクレオチドまたは オリゴヌクレオチド類似体が多量に合成され、細胞膜を通って輸送されまたは細 胞によって取り込まれ、標的のＲＮＡまたはＤＮＡに対して適当にハイブリ・ン ド形成した後、核酸機能を停止または破壊することが必要である。これらの重要 な機能は、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ破壊に対する初期の安定性に依存 する。

耐ヌクレアーゼ性を示し、ＲＮＮアーゼ終結段階を活性化し、そして適当な強度 および忠実度で標的ＲＮＡ　（またはＤＮＡ）にハイブリ・ソド形成するように 修飾されたオリゴヌクレオチドおよび類似体は、サイトメガロウィルスに関する アンチセンスオリゴヌクレオチド診断、治療および研究用に大いに望ましい。

発明の目的 本発明の目的は、サイトメガロウィルスのメツセンジャーＲＮＡとハイブリッド 形成して、そのメンセンジャーＲＮＡの機能を阻害することができるオリゴヌク レオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体を提供することである。

本発明の更に別の目的は、サイトメガロウィルスのメツセンジャーＲＮＡとのア ンチセンス相互作用によって該ウィルスの発現を変調することができるオリゴヌ クレオチドおよび類似体を提供することである。

本発明の更にもう一つの目的は、動物におけるサイトメガロウィルスに対する診 断法および治療法を提供することである。

サイトメガロウィルスを有すると疑われる試料においてその存在または不存在を 検出するための方法、材料およびキットは、本発明のもう一つの目的である。

新規のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、本発明のもう一 つの目的である。

これらのおよび他の目的は、本明細書および請求の範囲の論及から当業者に明ら かになるものである。

発明の要約 本発明により、サイトメガロウィルス感染の作用を変調する方法を提供する。

サイトメガロウィルスＲＮＡのある選択された配列と特異的にハイブリ・ｙド形 成しうるヌクレオチド塩基の配列を有するオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌク レオチド類似体を提供する。ＩＥＩ、ＩＥ２またはＤＮＡポリメラーゼタンパク 質をコードするサイトメガロウィルスｍＲＮＡを標的とすることは、これらのオ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体による有効なアンチセンス療 法の一つの手がかりであるということは確認されている。サイトメガロウィルス に感染していると疑われる動物に対して、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌク レオチド類似体を単独でかまたは薬学的に許容しうる担体との組合わせで投与す ることによる疾患状態を治療する方法を提供する。

この関係を、一般的には「アンチセンス」と称する。オリゴヌクレオチドおよび オリゴヌクレオチド類似体は、ＲＮＡの機能、すなわち、タン／＜り雪中への翻 訳、細胞質中へのトランスロケーション、または生物学的機能全体に必要な任意 の他の活性のいずれかを阻害することができる。ＲＮＡがその機能の全部または 一部分を連成することができない結果として、ウィルスの正常な生活環を調節し ているゲノムの一部分が欠失する。

ここで、感染を軽減させるのに有効であるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌク レオチド類似体を、特にサイトメガロウィルス感染用に考案することができるこ とが分かった。オリゴヌクレオチドおよび類似体は約８個〜２５個個の核酸塩基 単位を有するのが好ましい、オリゴヌクレオチドまたは類似体は、ＣＭＶのＩＥ Ｉ、ＩＥ２またはＤＮＡポリメラーゼタンパク質をコードするｍＲＮＡと特異的 にハイブリッド形成しうろことが好ましい、オリゴヌクレオチド類似体は、ヌク レアーゼ耐性を低下させ且つそれらの効力を増大させるように修飾されることが できる。

好ましい実施態様により、ｍＲＮＡは、ＣＭＶ複製を阻害するのに十分な程度ま で妨げられる。したがって、ＣＭＶｍＲＮＡの一部分と相互作用することができ るオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体が包含される。疾患を有 すると疑われる動物に、本発明によって製造されたオリゴヌクレオチドおよびオ リゴヌクレオチド類似体を接触させる。特に、本発明は、サイトメガロウィルス 感染の治療において予防的にかまたは治療的に有効であると考えられる。

図面の説明 図１は、サイトメガロウィルスに対するオリゴヌクレオチド２７２５〜２８９０ の抗ウィルス活性を示す棒グラフである。

図２は、サイトメガロウィルスに対するオリゴヌクレオチド２８９１〜３３００ の抗ウィルス活性を示す棒グラフである。

図３は、８種類のオリゴヌクレオチドの０．０１〜１０μＭの投与量での抗ウイ ルス性効果を示す線グラフである。

図４は、３種類のオリゴヌクレオチドの０．１〜１０μＭの投与量での抗ウイル ス性効果を示す線グラフである。

好ましい実施！３様の詳細な説明 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、多数のヒト疾、慟の治療用のｍ療薬として 大いに期待されていた。オリゴヌクレオチドは、ワトソン・クリック塩基対によ って定義されるように、プレーｍＲＮＡかまたは成熟ｍＲＮＡの相補的配列に対 して特異的に結合して、ＤＮＡからタンパク質への遺伝情報の流れを阻害する。

多数の最近の研究により、標的タンパク質を研究するための生化学的手段として のアンチセンスオリゴヌクレオチドの有用性が実証された。ローセンバーブ（Ｒ ｏｔｈｅｎｂｅｒｇ）ら、Ｊ、Ｎａｔｌ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、、８１：１ ５３９〜１５４４　（１９８９）；シン（Ｚｏｎ）、Ｇ、。

Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅｓ、５：５３９〜５４９（１９８８）、オ リゴヌクレオチド化学、ヌクレアーゼ耐性オリゴヌクレオチドの合成法および、 増大したＭｉ胞取込みを示すオリゴヌクレオチド類似体の種類の利用可能性にお ける最近の発達ゆえに、現在、新規の形態の治療薬としてアンチセンスオリゴヌ クレオチドの使用を考えることは可能である。

治療に関しては、サイトメガロウィルスに感染していると疑われる動物を、本発 明によるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を投与することに よって治療する。当業者は、最適投薬量、投薬方法論および反復率を容易に決定 することができる。概して、このような治療は、治癒するかまたは疾患状態の軽 減が達成されるまで続けられる。

興なる種および一つの種の範囲内の異なる種類のサイトメガロウィルスのＤＮＡ には相違点が存在すると予想される。したがって、例えば、種々のサイトメガロ ウィルス種の領域は、本質的にはそれぞれの種の同一の機能に役立つということ および遺伝情報の発現に関する干渉は種々の種において同様の結果を与えるとい うことが考えられる。これは、たとえ種どうしのヌクレオチド配列の相違が確か に存在するとしてもそのようにあると考えられる。

したがって、本明細書中に示したヌクレオチド配列は、記載されている特定の種 を代表するものであると理解される。異なる種のサイトメガロウィルスの相同の または類似の配列は、特に本発明の範囲内であると考えられる。

本発明は、サイトメガロウィルスＲＮＡの機能のアンチセンス阻害において用い るためのオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体を用いる０本発明 の文脈において、「オリゴヌクレオチド」という用語は、本来のホスホジエステ ル結合によって結合した天然に存在する塩基およびシクロフラノシル基から生成 されたポリヌクレオチドを意味する。この用語は、天然に存在する穆まなは、天 然に存在するサブユニット若しくはそれらに近い同族体から生成された合成穆を 効果的に意味する。

「オリゴヌクレオチド類似体」という用語を本発明に関して用いる場合、オリゴ ヌクレオチドと同様に機能するか、天然に存在しない部分を有する残基を意味す る６例えば、オリゴヌクレオチド類似体は、変更された糖残基または糖内結合を 有していてよい、これらの内の典型的なものは、当該技術分野で用いるのに知ら れているホスホロチオエートおよび他の硫黄含有種である。若干の好ましい実施 ｇ様により、オリゴヌクレオチドの少なくとも若干のホスホジエステル結合は、 活性か変調されることになっているＲＮＡまたはＤＮＡが位！している細胞の領 域中に浸入する組成物の能力を増大させるように機能する構造に１換された。こ のような置換は、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合または短鎖 アルキル若しくはシクロアルキル構造を含むのが好適である。他の好ましい実施 態様により、ホスホジエステル結合は、同時に、実質的に非イオン性で且つ非キ ラルである他の慣遣に、またはキラルであり且つ鏡像異性体によって特異的であ る補遺に置換される。当業者は、本発明の実施において用いるための他の結合を 選択することができる。

オリゴヌクレオチド類似体としては、更に、少なくとも若干の修飾された塩基形 態を含む種を挙げることかできる０例えば、天然に通常見出されるもの以外のプ リンおよびビワミジンをそのように用いることができる。同機に、ヌクレオチド サブユニットのペントフラノシル部分の修飾も、本発明の本質的な見解に従う限 りにおいて存在することができる。

このような類似体は、天然のオリゴヌクレオチド（または天然の系統に沿って合 成されたオリゴヌクレオチド）と機能的に交換可能である場合に最もよく記載さ れているが、天然の構造とは１か所またはそれ以上の相違点を有する。このよう な類似体はいずれも、それらかサイトメガロウィルスＲＮＡとハイブリ・ｙド形 成するように効果的に機能する限りにおいて、本発明によって包含される０本発 明によるオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、好ましくは、 約８個〜２５個個の核酸塩基単位を含む、このようなオリゴヌクレオチドおよび 類似体は約８個〜２５個の核酸塩基単位を含むのが更に好ましく、約１２個〜２ ５個の核酸塩基単位を有するのがなお一層好ましい、理解されるように、核酸塩 基単位は、ホスホジエステルまたは他の結合によって隣接する核酸塩基単位に適 当に結合した塩基−軸組合わせである。

本発明にしたかって用いられたオリゴヌクレオチドおよび類似体は、固相合成の 周知の技法によって好都合に且つ日常的に製造することができる。このような合 成のための装置は、アプライド・バイオシステムズ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙ ｓｔｅｍｓ）を含むいくつかの販売者によって販売されている。このような合成 のための他の手段のいずれを用いてもよいが、しかしながら、オリゴヌクレオチ ドの実際の合成は、十分に、日常的な技術者の能力の範囲内である。

更に、同様の技法を用いて曲のオリゴヌクレオチド類似体、例えば、ホスホロチ オエートおよびアルキル化誘導体を製造することも周知である。

本発明により、当業者は、メツセンジャーＲＮＡが、三文字遺伝暗号を用いてタ ンパク質をコードする情報のみならず、５′非翻駅領域、３′非翻訳領域および イントロン／エキジン結合リボヌクレオチドのような当業者に既知の領域を形成 する関連リボヌクレオチドも含むことを理解するであろう、したがって、オリゴ ヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は本発明によって式化することが でき、これらの関連ヌクレオチド並びに情報のりボヌクレオチドに完全にまたは 部分的に的がしぼられる。好ましい実施態様において、オリゴヌクレオチドまた は類似体は、転写開始部位、回状開始部位、イントロン／エキジン結合部または ５′若しくは３′非翻訳領域中の配列と特異的にハイブリッド形成しうる。

ＨＣＭＶゲノムはそのゲノム構造によってヘルペスウィルスの最大の複合体であ る。ＨＣＭＶの複製能欠損突然変異体は、前初期複合体（ＩＥＩまたはＩＥ２） およびＤＮＡポリメラーゼである２種類のウィルス遺伝子に関して単離されただ けであった。これらの遺伝子はＨＣＭＶ遺伝子発現において主要な役割を果たす ことが知られている。それらはアンチセンス化合物設計のための最初の標的とし て選択された。治療用アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび類似体の設計のた めの第二の標的は、単純庖疹ウィルスの遺伝子に対する類似性によって選択され た。このような遺伝子は、単純庖疹ウィルスの複製に不可欠であるおよび／また はアンチセンス阻害に感受性であることが確認された。アンチセンス阻害に対し て感受性であることが最近分かった単純庖疹ウィルスの４種類の遺伝子産物は、 ピリオン外皮タンパク質（ＵＬ４８）、リボヌクレオチドレダクターゼ酵素を構 成する２種類のタンパク質（ＵＬ３９．４０）およびピリオンホスホトランスフ ェラーゼ（ｔＪＬ１３）である、現在研究されている他の単純庖疹ウィルス遺伝 子は、ＤＮＡ複製補助酵素（ＵＬ５．８．９．２９．４２．５２）および主要キ ャプシドタンパク質（ＵＬ３６）である、ＨＣＭＶは、これらの単純庖疹ウィル スタンパク質それぞれとｌｊ！能が潜在的に類似していると確認されたタンパク 質をコードし、これらの遺伝子は本発明に関して第二の標的として役立つように 選択された。

ＨＣＭＶの前初期転写の分子生物学は、真核細胞中の任意の転写単位の場合と同 様に解明された。簡単に言えば、主要な前初期転写物（ＩＥＩ）の合成は、ｍＲ ＮＡキャンプ部位の５′の多数の反復単位によってＴＡｎされている。これらの 反復は、細胞特屡的および分化特異的方法で作用することが知られている多数の 転写応答分子に対して応答性である。ＩＥｌｍＲＮＡは、長さが１．９ｂであり 、そしてＰＡＧＥ−３ＤＳ上において見掛けの分子量７２ｋＤａで移動するタン パク質をコードする豊富なＲＮＡである。このタンパク質はピリオン中で発見さ れたものであり、それ自体の発現と同様にＩＥ２遺伝子産物の発現も調節する。

前初期転写の最初の段階では、ｒＥＩｍＲＮＡたけが細胞性ＲＮ　Ａポリメラー ゼによって合成される。少量のＩＥ２ｍＲＮＡは、感染のこの初期の際にＩＥｌ ｍＲＮＡのプロセンシングによって製造される１時間の経過により、ＩＥＩタン パク質の量が：１ｊＷＩシ且つＩＥＩ遺伝子のプロモーター領域を結合し、ＩＥ ｌｍＲＮＡが更に転写するのを抑制し、そしてＩＥ２遺伝子に対する一層弱い下 流プロモーターを与えてＩＥ２ｍＲＮＡか更に合成するのを調節する。ＩＥＩ遺 伝子産物は、生産的感染の際にウィルス転写を促進し、或いは、ウィルス遺伝子 発現を潜伏状態から活性化するのに役立つことができると提案された。ＩＥＩ遠 伝予のプロモーター中の細胞種および分化またはホルモン応答性要素のａ察はこ の提案と一致する。ＩＥ２タンパク質は、細胞およびウィルス起源の他の既知の トランスアクティベーティングタンパク質と同様の方法でＨＣＭＶ初期およびｔ 壷期遺伝子の多くを転写によって活性化することができる。したがって、ＩＥ２ タンパク質は、ＨＣＭＶ遺伝子発現のマスタースイッチの一つであると考えられ る。ＣＭＶＪ１！伝子のもう一つの調節スイッチはＤＮＡ、Ｉでリメラーセタン ・バク質て゛ある。？★期ウィルス遺伝子の転写は、ウィルスＤＮＡ複製の開始 まで極めて低水準で作用り、その後、後期遺伝子は増大した鋳型利用可能性によ って活性化される。この増大した鋳型利用可能性において作用している正確な分 子状態は明らかではないが、ウィルスＤＮＡポリメラーゼの存在およびゲノムの 複製はｌＩ！察さＩした効果に不可欠の要件である。

＋ｕＲＮＡ配列内の選択された標的は、ｍＲＮＡ安定牲、プロセンシングおよび ／または翻訳効率を調節することが知られているｍＲＮＡの領域を含む、これら の標的領域としては、５゛キヤツア領域および翻訳開始調節領域がある。ＩＥＩ Ｉ　Ｆ、　２およびＴ）ＮＡボリメラーセ遺伝子に関する凛的配夕１１を表１に 示す。

表１ サイトメガロウィルスのオリゴヌクレオナト合成に関する橡的配列線的逍１云子 　膿的頭域　標的１）　Ｎ　Ａ配列ＤＮＡポリメラーゼ　ＩＩＩＲＮ　Ａキャｌ ブ部１ｉ　（−Ｇ入ＣＣＣＧＧＡＣＣＡＣＣＧＴＣＧＴＣＤＮＡポリメラーゼ　 ＡＩＪＧｔＢ域　ＧＴＣＣＧＣＴＡＴＧＴＴＴＴＴＣＡＡＣＣＣＤＮＡポリメラ ーゼ　保存ＡＡ ＧＧＣＧＣＧＧＧＴＣＡＴＣｒｋＣＧＧ（、ＡＣ（９０５〜９１４） ＤＮＡポリメラーゼ　（１１０９〜１１５　ｇ　）　ｃｃｃｃｃｃｃｃ’ｒｃ’ ｒｃｃｃｃＡｃｃｃｃｃｃｃｃｃｃｃｃｃｃ’ｒｃｃ’ｒ１１＋ｒｃｃｃｃｃＴ ＩＥＩ　ｍＲＮＡ’ｒヤンフ゛部位　ＧＴＧＡＡＣＣにＴＣＡＧＡ？Ｃ（：ＣＣ ＴＧＧＩ　Ｅ　Ｉ　ＡＵＧ鎖域　ＣＴｌ’ＧＡＣＡＣＧＡＴＧＧＡＧＴＣＣＴＣ ＩＥ　１　１／Ｅ　−Ｉ　ＧＣＣＡＡＧ入にＴＧＡｃＧＴ入ＡＧＴＡＣＣＩ　Ｅ 　Ｉ　Ｉ　／Ｅ　−２ＧＴＣＴＴｒＴｃＴＧＣｘＧＴＣＡＣＣにＴＣＴ　Ｅ　１ 　１　／Ｅ　−３Ｃ大入ＧＧＴＧＣＣＪ、ＣＧＧＴｋＣＧＴＧＴＣＩ　Ｅ　１　 １　／Ｅ　−４ＣＡＴＧＴＧＴＴＴＡＣＧＣＣＣに入ＧＡＣＩＥＩ　ｌ／Ｅ−ラ 　ｃｃｃｘｃｙｃ’ｒｃｃｃＴｘｘｃ’ｒｃ”ｒｃＩ　ＥＩ　Ｉ／Ｅ　６　ＣＣ ＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＴＣＡ入ＡＣＡＣＩＥ２　ＡＵＧ／−１ｒヤノグ部位　Ｇ ＣＣＣＣＴＡＴＣＡＴにＣＴＧＣＣＣＣＴＣＩＥ２　ＡｔじＧ　ｎＱＬ４　ｃｃ ＴｃｒｃｃｃｘｃｈＴｃｙｕ＋ｃｃｘｃｃｃＩ　Ｅ　２　＋　／　［：、−Ｉ　 ＣＡＡＧＡＴＴＧＡＣにＡＧＧＴＧＡＧ（”ＣにＩ　Ｅ　２　正／　Ｅ　−２Ｃ ＣＣＡＡＡＣＡＧＧＴＣＡＴＧＧＴＣ，ＣＧＣＩ　Ｅ　２　Ｎ　ＬＪ　ＣＳ　Ｉ 　Ｇ　］　ＧＣＧＴＡＡＧＡＡＡＣＣＧＣにＣＡＡＡＡＣＩ　Ｅ　２　Ｎ　Ｕ　 ＣＳ　Ｔ　Ｇ　−２ｃｃｃＡＡｃｐｖｃｐｖｃｈｃｃｘｍｃｃｃ表１において、 略語１／Ｅはイントロン／エキジン結合部を意味し、Ａ　ＵＧｒｉｆ４域は、転 写かＩＥ２特異的プロモーター饋域によって調節されるＩ　Ｅ　２　ｍ　ＲＮ　 、Ａの翻訳開始領域である。略語：ｎｕＣＳｆｇｌは、ＩＥ２タンパク質の核部 位シグナルを意味する。

本発明において存用なオリゴヌクレオナトまたは類似体は、ｌ）　Ｎ　Ａに対し て（特に、イ／トロン／エキツン結合部に向けつれたオリゴヌクレオナトに関し て）または対巧するメノセ／シャーＲＮＡ　（出代ＮＡ）若しくは罰メＩセンン へ・−トとＮＡに対して相補的である。したかつて、本発明によるオリゴヌクレ オナトおよび類似体は、前述の配夕１ｊの１種類またはそのを効な部分を有する のか好ましい例えば、前記に記載のこれらのオリゴヌクレオチド（またはそれら の闇似体）のいすｔＬかｉたは当業者かウィルス感染の変」８］に好ましいアン チセンス標的の知慮から製造することかでさる１ｈｊ様のヌクレオチドのいずれ かを用いるのが好適でゐる。

本発明のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド類似体は、診断、治療に おいて並びに検量試薬およびキットとして用いることができる。治療使用に関し ては、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を、サイトメガロウ ィルスに感染している動物に対して投与する。概して、本発明による治療薬を内 用に、例えば、静脈内、経皮的または筋向に適用するのが好適である。局所また は病変内などの池の投与形態も有用であることができる。全剤中に包含すること は、おそらく有用であると現在考えられている０本発明のオリゴヌクレオチドお よびオリゴヌクレオチド類似体の予防での使用も有用であると思われる。この種 のものは、例えば、薬剤をコンドームのコーティング等として提供することによ って達成することができる。薬学的に許容しうる担体の使用らいくつかの実施態 様に好適である。

本発明は、更に５診断および研究において有用である０本発明のオリゴヌクレオ チドおよびオリゴヌクレオチド類似体はサイトメガロウィルス由来の核酸にハイ ブリッド形成するので、サンドイツチ法および他の検定法を、このことを利用す るように容易に組み立てることができる。サイトメガロウィルスを有すると疑わ れる試料中に存在するサイトメガロウィルスとオリゴヌクレオチドまたは類似体 のハイブリダイゼーシヨンを検出するための手段の準備は日常的に達成すること ができる。このような準備としては、酵素コンジュゲーション、放射性標識また は任意の他の適当な検出システムを挙げることかでざる。サイトメガロウィルス の存在または不存在を検出するためのキットも製造することができる。

衷旌凹 実施例１ 囮搦ま９μム１ヱ匹１三−用いたヒト包皮ｉ１１芽細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１６ ３５）細胞は、アメリカン・ティシュ−・カルチャー・コレクション（Ａｒｎｅ ｒｉｃａｎ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）から得ら れる。培養物を、グルコース４．５ｇ／Ｌを含むダルベツコ修飾のイーグルの培 地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ’ｓＭｅｄｉｕｍ） （高グルコースＤＭＥＭＪ中で増殖させ且つｌｏ％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）　、 ペニシリン（１００単位／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００マイクログラム ／ｍ＋＞およびし−グルタミン（２ｍＭ）を補った。ヒトサイトメガロウィルス （ＨＣＭＶ　ＡＤ１６９株またはタウン（Ｔｏｗｎｅ））の原培養物を、低多重 感染（感染多重度ｆ：ＭＯＩ］＝０．０２ダラータ形成単位ＵＰＦＵｒ／細胞） を用いて包皮細胞上で増殖させる。

ＣＭＶ複製を阻害するオリゴヌクレオチドの能力を評価するために、感染率検定 法を用いる。この検定を行うために、包皮細胞をファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）の ６ウ工ル！ｉ１ｍ培養プレート中に細胞５Ｘ１０５個／ウェルの密度で播種する 。

細胞に培地（１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭ）２ｍｌを載せ、３７℃で １８〜２４時間インキュベートする。適当なところで、プレートに播種して２４ 時間後に、ｍ胞に培地１ｍｌ中のオリゴヌクレオチド原品を載せる。１８時間の インキュベーション後、全部のウェルをリン酸緩衝溶液で濯ぎ洗浄し、そして血 清不含高グルコースＤＭＥＭ０．５ｍｌ中に懸濁した種々のＭｏ１ｓでＨＣＭＶ に感染させる。ウィルスおよび細胞を振動台上において３７℃で９０分間インキ ュベートする。ウィルス吸着に続いて、非吸着ウィルスをリン酸緩衝溶液で洗浄 することによって濯ぎ落とす、適当なところで、１０μＭａ＄１度のオリゴヌク レオチドを含む培地（１０％ＦＢＳ含有高グルコースＤＭＥＭ）１ｍｌをウェル に加え、そして細胞と３７℃で４〜５日間インキュベートする。対照ウェルには オリゴヌクレオチドを含まない培地１ｍｌを入れる。

ウィルスは上に載せた培地中に集められ、そして各実験項目について三組のウェ ルを組み合わせる。懸濁液を一８０℃で凍結させる。ウィルス力価は、ヒト包皮 細胞単一層上のプラーク検定によって各試料について決定される。各ウィルス標 品の稀釈液を調製し−そして各稀釈液の二組のアリコートを包皮細胞上に振動し ながら９０分間吸着させる。吸着後、非吸着ウィルス接種材料をリン酸Ｍ衝溶液 でプレートを濯ぎ洗浄することによって除去し、そして＃胞に、５％ＦＢＳおよ び０．７５％メチルセルロースを含む高グルコースＤＭＥＭ２ｍｌを載せる。

細胞を３７°Ｃで１２〜１４日間インキュベートしたｔ麦、プラークをホルマリ ンで固定し、クリスタルバイオレットで染色し、そして計数する。処理されたウ ェルからのプラーク数を対照ウェルからのものと比較して、感染ウィルス産物の 阻害の程度を決定する。

ＣＭＶのＩＥＩ、ＩＥ２またはＤＮＡポリメラーゼｍＲＮＡ５に対して相補的な 配列を示すホスホロチオエートオリゴヌクレオチドｌＯμＭＪ度によるＣＭＶ感 染細胞の処理は、ウィルスの感染率を９０％まで減少させると予想される。

実施例２ 活性ＣＭＶアンチセンス化合物の作用機序も実証することができる。何等かの機 序の作用対象を有する分子の性質は、オリゴヌクレオチド阻害の標的であるＣＭ Ｖ遺伝子配列によって指示される。大部分の直接検定法は、標的ＣＭＶ遺伝子に よってコードされたタンパク質の生物学的機能の利点を有する。酵素タンパク質 の生物学的活性はこのような検定法の最終シグナルを増幅させることが多いので 、その検定法はウィルスタンパク質濃度の小さい変化にも極めて感受性である。

これらの種類の検定法に従うＣＭＶ遺伝子の例は、ＤＮＡポリメラーゼおよびＩ Ｅｌおよび２遺伝子座である。

ＤＮＡポリメラーゼタンパク質に関して、単純な機械的検定法は、細胞性ＤＮＡ ポリメラーゼ活性よりもウィルスＤＮＡポリメラーゼ活性に好都合である条件下 において、３Ｈ−チミジンがウィルスＤＮＡ中に入り込むのを阻害する標的特異 的オリゴヌクレオチドの能力を評価することを含む、ある種のＣＭＶ遺伝子のＲ ＮＡ合成をトランスアクティベートするＣＭＶ　ＩＥタンパク質の能力を用いて 、一時的遺伝子発現検定法が考案されたが、その活性は、感染細胞中の生物学的 に活性のＩＥＩまたはＩＥ２タンパク質の存在に依存する。簡単に言えば、ＩＥ ｌまたはＩＥ２それぞれのプロモーター領域は、プラスミドベクター中の指標遺 伝子の５′にクローン化される（例えば、細菌のクロラムフェニコールアセチル トランスフェラーゼ、ＣＡＴ）、ベクターをヒト包皮細胞中に導入し、順次に、 ＨＣＭＶに感染させる。ＣＡＴ活性の検出は細胞溶解産物から決定することがで き、ＣＡＴ活性量を用いてＩＥＩまたはＩＥ２タンパク質濃度を間接的に定量す ることができる。ＣＡＴ活性に対するオリゴヌクレオチドの効果は、ＩＥＩおよ びＩＥ２それぞれの構築物双方に関して比較される。

明白な生物学的活性を容易に実証できない場合、オリゴヌクレオチドに誘導され なタンパク質濃度の変化を、感染細胞タンパク質の免疫沈降反応、５ＤＳ−アク リルアミドマトリックス中の免疫沈降物のゲル電気泳動、およびゲルのオートラ ジオグラフィーによる標的タンパク質濃度の検出によって決定することができる 。生物学的活性を検定しつるタンパク質は、更に、免疫沈降およびゲル電気泳動 法によって定量することかできる。

実施例３ ＣＭＶアンチセンス薬剤の有効性は、宿主細胞機能に悪影響を及ぼすことなくＣ ＭＶのＲＮＡ標的と特異的に相互作用するその能力に大きく依存している。した がって、活性化合物の非特異的相互作用および毒性の潜在性を評価することは重 要である。これらの相反する反応の潜在性は、急性および慢性の細胞毒性の多数 の様式で達せられる。最初に、活性化合物を感染ヒト包皮細胞での毒性に関して 、　Ｈ−ロイシンおよび３Ｈ−チミジンを用いて評価し、タンパク質およびＤＮ Ａ合成それぞれに対する効果を測定する。これらの検定におけるオリゴヌクレオ チドＬＤ５０並ひに第一および第二活性スクリーンにおいて得られたＩＤ５０活 性値の決定から、各活性オリゴヌクレオチド化合物の治療指数（Ｔ、１．）を決 定する。１００を上回るＴ、１．を示すこのような化合物についてのみ次の評価 か考えられる。

実施例４ オリゴヌクレオチドおよび　の４成および　：非修飾ＤＮＡオリゴヌクレオチド を自動Ｄ　Ｎ　Ａ合成機〈アゲライド・バイオシステムズ〈ＡρρＩｉｅｄＢｉ ｏｓｙｓｔｅｍｓ）３８０Ｂ型）で、ヨウ素による酸化を伴う標準的なホスホル アミダイト化学を用いて合成した。β−シアンエチルジイソプロビルホスホルア ミダイトはアプライド・バイオシステムズ（フォスター・シティ−、ＣＡ）から 購入された。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドに関しては、標準酸化ボト ルを、ホスフィ・ソト結舎の段階的チェージョン（ｔｈｉａｔｉｏｎ）のために ３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン−１，１−ジオキシドのアセトニト リル中０．２Ｍ溶液で置き換える。チェージョンサイクル待ち時間工程を６８秒 まで増加させ、そして続いてキャソビング工程を行った。

２′−〇−メチルホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、２′−〇−メチル ーβ−シアンエチルジイソプロピルホスホルアミダイト（ケムジーンズ（Ｃｈｅ ｍｇｅｎｅｓＬニーダム、ＭＡンを用い、テトラゾールおよび塩基のパルス送出 後の待ち時間工程を３６０秒まで増加させたこと以外は非修飾オリゴヌクレオチ ド用標準サイクルを用いて合成された０合成を開始するのに用いられた３゛塩基 は２′−デオキシリボヌクレオチドであった。

制御された細孔ガラスカラム（アプライド・バイオシステムズ）からの開裂およ び濃水酸化アンモニウム中５５℃で１８時間の脱ブロッキング後に、オリゴヌク レオチドを、２．５容量のエタノールを含む０．５Ｍ−ＮａＣＩからの２回の沈 殿によって精製した１分析用ゲル電気泳動を、２０％アクリルアミド、８Ｍ尿素 、４５ｍＭトリス−ホウ酸塩緩衝液、ｐＨ７，０中で行った。オリゴヌクレオチ ドデオキシヌクレオチドおよびそれらのホスホロチオエート類似体は、電気泳動 から判断して、８０％以上が完全な長さの材料であった。

実施例５ アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＨＣＭＶ　の阻　に　るエライザ定迭！ ヒトサイトメガロウィルスｍＲＮＡに対して相補的なオリゴヌクレオチドの抗ウ ィルス活性を、ＨＣＭＶ複製についてのエライザに基づく検定法で試験した。正 常のヒト皮膚繊維芽細胞（クローンティクス・コーポレーション（Ｃ１ｏｎｅｔ ｉｃｓ　Ｃｏｒｐ、）、サン・ディエゴ　ＣＡ）を血清不合培地（クローンティ クス）中で増殖させ且つ９６ウエルプレートに播種するのに用いた。細胞が約８ ０％密集したら、それらをオリゴヌクレオチドで予め処理する。

前処理の約２０時間後に、培地（オリゴヌクレオチド含有）を注意深く流し去り 、そして細胞を、加温した線雌芽細胞基礎培地（ＦＢＭ、クローンティクス）で ２回洗浄する９次に、細胞を、ＦＢＭ中で稀釈したＣＭＶ原１００μｌ／ウェル に感染させる。プレートを３７℃で２時間インキュベートする０次に、培地（ウ ィルス含有）を注意深く流し去り、そして新たな予め加温したＦＢＭ培地１００ μｌ／ウェルで置き換える。プレートを３７℃で簡単にインキュベートした擾、 ＦＢＭ中で稀釈したオリゴヌクレオチド５μｌを各ウェルの培地中に再導入する 。

２日後に、細胞を同一の方法でオリゴヌクレオチドを用いて再度後処理する６６ 日目に、プレートはエライザ用に調製される。

トし且つＰＢＳ中で３回洗浄する。第二抗体であるビオチニル化ヤギ抗マウスＩ に、細胞をストレプタヴイジンーＢ−Ｄ−ガラクトシダーゼ中において洗浄し且 藺 ＋１１１１１　マ　マ　ｃ′Ｘ？　７　Ｑ’ｌ　ｗ　＋ａ　ｖＣｋ＋１−　へ　 −−瓢　へ　−〜　ら　−Ｉ　＋　＋　シー　Ｑ　ロ　小　Ｏｄ　Ｎ　い　ψ　 Φ　０　ぐ　−　ψ　ロ■　Ｏ＋＋−ＦＪ　Ｎ　〜　４　ぐ　−ロ　ヘ　〜　ψ 　＾ω　か　ラ　か　■　■　い　〜　〜　へ　ｈ　〜　〜　へ　へ・Ｄ　［＋ −ＯＱ　（ｈ　Ｏ−ヘーマ　いＤ　トーーー−へＮへへ八　へへ　へ 試験されたオリゴヌクレオチドの内、８！１１類は、ＨＣＭＶのＤＮＡポリメラ ーゼをコードするｍＲＮＡに対して相補的であり且つ残りのものは、ＨＣＭＶの 主要な前初期プロモーターから転写されたＲＮＡに対して相補的であった。この ゲノム領域（ＩＥＩおよびＩＥ２）からの２種類の主要なタンパク質産物は、共 通の１０モーターから転写されるメツセンジャーＲＮＡから合成されるので、こ れらの化合物の内の８種類はＩＥＩおよびＴＥ２ｍＲＮＡ双方に対して相補的で ある。３穆類の化合物はＩＥＩおよびＩＥ２ｍＲＮＡに対してのみ相補的である 。

３種類の化合物はＩＥｌｍＲＮＡに対してのみ相補的であり、そして残りの５種 類はＩＥ２ｍＲＮＡに特異的である。

５μＭのスクリーニング濃度では、１種類の化合物以外の全部が、非処理細胞と 比較してウィルス複製のある程度の低下を示した（図１および図２）、若干の化 合物は、対照オリゴヌクレオチドよりも謬著に大きいウィルス複製阻害を示し、 そしてこれらを更に特徴化するために選択した。

用量反応実験により、アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＨＣＭＶ複製の非 特異的効果と配列特異的阻害との間に区別を生じた。化合物ｒｓＩｓ２９２２（ 配列番号：２２）、ｌ５Ｉ３２８８２　（配列番号：１２）、ｌ５ＩＳ２９１８ （配列番号；１８）、ｌ５ＩＳ２９１９　（配列番号＝１９）およびｌ５ＩＳ３ ３００（配列番号＋　２４．Ｐ＝Ｓ／２′−０−Ｍｅｌはいずれも、ＨＣＭＶに 対して相補的でない無作為のオリゴヌクレオチドよりも低用量でＨＣＭＶ複製阻 害を示しなく図３〉、化合物ｌ５ＩＳ２９１８（配列番号：１８）、ｌ５ＩＳ２ ９１９（配列番号＝１９）およびｌ５ＩＳ２９２２　（配列番号＝２２〉は、Ｉ Ｅ２ＲＮＡ配列に対して相補的である。ｌ５ＩＳ２８８２　（配列番号：１２） およびｌ５ＩＳ３３００　（配列番号：２４．Ｐ＝Ｓおよび２′　ＯＭｅ）は、 ＩＥＩおよびＩＥ２転写物の５′キヤツグ領域に対して相補的である１表２に示 されたオリゴヌクレオチドによってはるかに強い抗ウィルス活性を示すことか分 かった。

無作為の対照オリゴヌクレオチドに相対するｌ５ＩＳ２９１９およびｌ５ＩＳ２ ９２２の活性は独立用量反応実験において確証された（図４〉。

配列表 （１）一般情報： （ｉ＞出願人：アンダーワン・ケビン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ、Ｋｅｖｉｎ）　Ｐト レーパー・ケネス（Ｄｒａｐｅｒ、Ｋｅｎｎｅｔｈ）　Ｇ。

（ｉ　ｉ）発明の名称、サイトメガロウィルス感染作用を変調するためのオリゴ ヌクレオチド （ｉｉｉ）配列の数＝２７ （ｉｖ）宛先： （Ａ）住所：ウッドコック・ウォシュバーン・カーラ・マキーヴイッツ・アンド ・ノリス（Ｗｏｏｄｃｏｃｋ　Ｗａｓｈｂｕｒｎ　ＫｕｒｔｚＭａｃｋｉｅｗｉ ｃｚ　＆　Ｎｏｒｒｉｓ）（Ｂ）地区：ワン・リバティ・ブレイス（Ｏｎｅ　Ｌ ｉｂｅｒｔｙＰｌａｃｅ）−４６１！１ （Ｃ）本名：フィラデルフィア （Ｄ＞州名；ペンシルバニア （Ｅ）国名：米国 （Ｆ）郵便番号：１９１０３ （Ｖ）コンピューター読取り形式： （Ａ）中型：小型ディスク、３．５インチ、記憶装２１．４４Ｍｂ＜８）コンピ ューター：ｒＢＭ　ＰＳ／２（Ｃ）操作システム：　ＰＣ−ＤＯ３ （Ｄ）ソフトウェア：ワードパーフェクト（ＷＯＲＤＰＥＲＦＥＣＴ）５．０ （ｖｉ）現行出顆責料： （Ａ）出願番号：ｒｌ／′ａ （Ｂ）出願日：本明細書と共に （Ｃ）分類： （ｖｉｉｉ）弁理士／代理人情報： （Ａ）氏名：リカタ・ジェーン（Ｌｉｃａｔａ、Ｊａｎｅ）　Ｍ（Ｂ）登録番号 ：３２．２５７ （Ｃ）照会７／事件整理番号：　ｌ５ＩＳ−０４０８（ｉｘ）通信情報： （Ａ）電話：　（２１，５）５６８−３ｆＯＯ（Ｂ）ファクシミリ（２１５＞５ ６８−３４３９（２）配列番号、１の情報： （ｉ）配列の特徴。

（Ａ）長さ＝２０塩基対 （Ｂ）Ｎ類：核酸 （Ｃｌ！１１：　１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉ　ｉ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｔｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号＝１ ＧＴＧＴＣＡＡＧＴＧ　ＧＣＡＣＣＡＴＡＣＧ　２０〈２）配列番号：２の情報 ： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ａ：　１本 （Ｄ）トポロジー、線状 （ｉｉ）分子種類：ＤＮＡｆゲノム） （ｔｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：２ ＴＧＧＡＡＡＧＴＧＴ　、八ＣＡＣＡＧＧＣＧＡ　Ａ　２１（２）配列番号：３ の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）祭＝１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉ　ｉ　ｉ）仮説゛なし くｉｖ）アンチセン・ス：正 （ｘｉ）配列複類：配列番号＝３ ＧＧＧＴＴＧＡＡＡＡ　ＡＣＡＴＡＧＣＧＧＡ　Ｃ２１（２）配列番号：４の情 報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ＝２０塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ＩＩ：１本 （Ｄ）トポロジー；線状 （ｉ目分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム） （ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：４ ＧＡＧＧＡＣＴＣＣＡ　ＴＣＧＴＧＴＣＡＡＧ　２０（２）配列番号：５の悄Ｎ ： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１４基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｊ！ＩＩ：１本 〈Ｄ）トボロジ一二線状 Ｎｉ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム） （ｉ　ｉ　ｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 ＜ｘｆｌ配列樟類：配列番号：５ ＧＴＧＧＧＣＣＡＴＧ　ＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧ　Ｇ　２１（２）配列番号、６の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ＝２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｇ［：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉ　ｔ）分子種’Ｊ：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｆｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：６ ＧＴＣＣＣＧＴＡＧＡ　ＴＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣ２１（２）配列番号ニアの情報 ： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 ＩＣＢＭ：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム）（ｆｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス、正 （ｘｉ）配列種類：配列番号ニア ＣＧＧＣＧＣＡＧＡＴ　ＴＧＣＡＡＧＧＧＣＧ　Ｇ　２１（２）配列番号＝８の 情報。

（ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）１類：核酸 （Ｃ）鎖：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉｔ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｆｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号二８ ＧＣＣＧＧＡＧＣＣＧ　ＧＧＴＧＡＡＡＣＧＣＣ２１（２）配列番号：９の情報 ： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ＝２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 ＜ｉｔ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ＞配列種類：配列番号＝９ ＣＧＣＣＧＴＣＣＧＧ　ＡＣＡＣＣＧＧＧＣＧ　Ｃ２１（２）配列番号：１０の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ＝２１塩基対 （Ｂ）種類二種酸 （Ｃ）！［：１本 （Ｄ〉トポロジー二１ａ状 （ｉｔ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：１０ ＡＣＣＧＧＧＡＡＡＣＣＡＣＧＣＣＧＧＣＧ　Ｇ　２］（２）配列番号＝１１の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａン長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｆｆ：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉｔ）分子種類：　ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス、正 （ｘｉ）配列種類：配列番号＝１１ ＣＣＧＣＧＣＣＣＴＣＴＴＣＴＴＴＧＣＣＧ　Ｇ　２１（２）配列番号、１２の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ、２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｔ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム） （ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：１２ ＧＧＴＡＣＴＴＡＣＧ　ＴＣＡＣＴＣＴＴＧＧ　Ｃ２１（２）配列番号：１３の 情＠１： Ｎ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖＝１本 （Ｄ）トポロジー二線状 ＜ｉ　ｉ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉ　ｉ　ｉ）仮説：なし くｉＶ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：１３ ＧＡＣＧＧＴＧＡＣＴ　ＧＣＡＧＡＡＡＡＧＡ　Ｃ２１（２〉配列番号：１４の 情Ｎ： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）Ｗ１頭：核酸 （Ｃ）鎖＝１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｆ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム） （ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号＝１４ ＧＡＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＧＣＡＣＣＴＴ　Ｇ　２１（２）配列番号：１５の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ＝２０塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉｔ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉｆｆ）仮説：なし （ｔｖ）アンチセンス、正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：１５ ＧＴＣＴＣＧＧＧＣＣＴＡＡＡＣＡＣＡＴＧ　２０（２）配列番号：１６の情報 ： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ＝２０塩基対 （Ｂ）種＃：核酸 （Ｃ）鎖＝１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｆｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：１６ ＣＡＧＡＣＴＴＡＣＣＧＡＣＴＴＣＴＧＣＣ２０（２）配列番号＝１７の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２０塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｇ：１本 （Ｄ）トポロシー二ｌｌ状 （ｉｉ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉ　ｉ　ｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス、正 （ｘｉ配列種類：配列番号：１７ ＣＴＧＴＴＴＧＡＣＴ　ＧＴＡＧＡＧＧＡＧＧ　２０（２）配列番号：１８の情 報： （１）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｔＮ分子穆種類ＤＮＡ　（ゲノム） （ｔｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号＝１８ ＧＧＧＴＣＣＴＴＣＡ　ＴＣＴＧＧＧＡＧＡＧ　Ｃ２１（２）配列番号：１９の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム） （ｆｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号＝１９ ＣＧＧＣＴＣＡＧＧＴ　ＣＧＴＣＡＡＴＣＴＴ　Ｇ　２１（２）配列番号＝２０ の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ、２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｉｌｌ［：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列穐＃：配列番号：２０ ＧＣＧＣＡＣＣＡＴＧ　ＡＣＣＴＧＴＴＴＧＧ　Ｇ　２１（２）配列番号：２１ の情報。

（ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ＝２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｆｉ：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉｉ）分子種類：　ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：２１ ＧＴＴＴＴＧＣＧＣＧ　ＧＴＴＴＣＴＴＡＣＧ　Ｃ２１（２）配列番号、２２の 情報 （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）ｍ類：核酸 （Ｃ）！：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉｔ）分子種類：　ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類、配列番号：２２ ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧ　２１（２）配列番号：２３の情 報。

（ｉ）配列の特徴。

（Ａ）長さ＝２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｉｉ：１本 （Ｄ）トポロジー二線状 （ｉ　ｉ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム）（ｉｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：２３ ＣＧＴＣＴＣＣＡＧＧ　ＣＧＡＴＣＴＧＡＣＧ　Ｃ２１く２）配列番号＝２４の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 ＣＢ）種類、核酸 （Ｃ）ａ：１本 （Ｄ）トポロジー、線状 （ｉｔ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム） （ｔｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：２４ ＴＧＧＣＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＧＡＴＣＴＧ　Ａ　２１（２）配列番号：２５の 悄＠： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２０塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）９１：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｔ）分子種類：ＤＮＡ（ゲノム） （ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種＃：配列番号：２５ ＴＣＴＧＡＧＴＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＣ２０（２）配列番号：２６の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）！：１本 （Ｄ）トポロジー、４１状 （ｉｆ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｔｉｔ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種類：配列番号：２６ ＣＴＣＣＡＣＧＣＧＡ　ＡＴＴＴＴＡＡＣＡＣＡ　２１（２）配列番号：２７の 情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）ｇ：１本 （Ｄ）トポロジー、線状 （ｉ　ｉ）分子種類：ＤＮＡ　（ゲノム）（ｉｉｉ）仮説：なし くｉｖ）アンチセンス：正 （ｘｉ）配列種ｗｉ：配列番号：２７ ＡＣＴＣＧＧＧＣＴＧ　ＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡ　Ｇ　２１（Ｅｌ　１２３８ φ　２９１８ Δ　３３００ プリブタ９１１軒’＝Ｌ庭更Ｈっ ロ　１２３８ ◆　２９１９ −Ｆ勾、４ 手続補正書

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２またはＤＮＡポリメラーゼ遺伝子か ら誘導されるＲＮＡまたはＤＮＡの少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形 成しうるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ２．ＤＮＡポリメラーゼ遺伝子のｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域、保存アミ ノ酸領域または塩基６０８〜６９７若しくは１１０９〜１１５９間のＣＭＶ挿入 領域の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項１に記載のオ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ３．ＩＥ１遺伝子のｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域またはイントロン／エキ ソン結合領域の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項１に 記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ４．ＩＥ２遺伝子のＡＵＧ／ＣＡＰ部位、ＡＵＧ領域、ＩＥ２特異的イントロン ／エキソン結合領域または核部位シグナル領域の少なくとも一部分と特異的にハ イブリッド形成しうる請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレ オチド類似体。 ５．薬学的に許容しうる担体中の請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオ リゴヌクレオチド類似体。 ６．５個〜約５０個の核酸塩基単位を有する請求項１に記載のオリゴヌクレオチ ドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ７．８個〜約２５個の核酸塩基単位を有する請求項１に記載のオリゴヌクレオチ ドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ８．１２個〜約２５個の核酸塩基単位を有する請求項１に記載のオリゴヌクレオ チドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ９．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫 黄含有種を含む請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド 類似体。 １０．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が ホスホロチオエート残基を含む請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリ ゴヌクレオチド類似体。 １１．配列 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】，または 【配列があります】． の内の一つの少なくとも一部分のＤＮＡまたは対応するＲＮＡ若しくは前メッセ ンジャーＲＮＡに対して相補的なオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド 類似体。 １２．薬学的に許容しうる担体中の請求項１１に記載のオリゴヌクレオチドまた はオリゴヌクレオチド類似体。 １３．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が 硫黄含有種を含む請求項１１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオ チド類似体。 １４．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が ホスホロチオエート残基を含む請求項１１に記載のオリゴヌクレオチドまたはオ リゴヌクレオチド類似体。 １５．サイトメガロウイルス感染の活性を変調する方法であって、ＣＭＶに感染 していると疑われる動物に、サイトメガロウイルスのＩＥ１、ＩＥ２またはＤＮ Ａポリメラーゼ遺伝子から誘導されるＲＮＡまたはＤＮＡの少なくとも一部分と 特異的にハイブリッド形成しうるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド 類似体を接触させることを含む上記の方法。 １６．前記の感染がヒトサイトメガロウイルスによる請求項１５に記載の方法。 １７．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が、ＤＮＡポリメラ ーゼ遺伝子のｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域、保存アミノ酸領域または塩基 ６０８〜６９７若しくは１１０９〜１１５９間のＣＭＶ挿入領域の少なくとも一 部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項１５に記載の方法。 １８．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が、ＩＥ１遺伝子の ｍＲＮＡキャップ部位、ＡＵＧ領域またはイントロン／エキソン結合領域の少な くとも一部分と特異的にハイブリッド形成しうる請求項１５に記載の方法。 １９．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が、ＩＥ２遺伝子の ＡＵＧ／ＣＡＰ部位、ＡＵＧ領域、ＩＥ２特異的イントロン／エキソン結合領域 または核部位シグナル領域の少なくとも一部分と特異的にハイブリッド形成しう る請求項１５に記載の方法。 ２０．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が薬学的に許容しう る担体中にある請求項１５に記載の方法。 ２１．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が５個〜約５０個の 核酸塩基単位を有する請求項１５に記載の方法２２．オリゴヌクレオチドまたは オリゴヌクレオチド類似体が８個〜約２５個の核酸塩基単位を有する請求項１５ に記載の方法２３．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が１２ 個〜約２５個の核酸塩基単位を有する請求項１５に記載の方法２４．オリゴヌク レオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が硫黄含有種を含む 請求項１５に記載の方法。 ２５．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が ホスホロチオエート残基を含む請求項１５記載の方法。 ２６．サイトメガロウイルス感染の活性を変調する方法であって、ＣＭＶに感染 していると疑われる動物に、配列 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】，【配列があります】，【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】， 【配列があります】，または 【配列があります】． の内の一つの少なくとも一部分のＤＮＡまたは対応するＲＮＡ若しくは前メッセ ンジャーＲＮＡに対して相補的なオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド 類似体を接触させることを含む上記の方法。 ２７．表２に定義された配列の一つの少くとも一部分を含むサイトメガロウイル スのＤＮＡまたは対応するｍＲＮＡ若しくは前ｍＲＮＡと特異的にハイブリッド 形成しうるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ２８．薬学的に許容しうる担体中の請求項２７に記載のオリゴヌクレオチドまた はオリゴヌクレオチド類似体。 ２９．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が 硫黄含有種を含む請求項２７に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオ チド類似体。 ３０．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基か ホスホロチオエート残基を含む請求項２７に記載のオリゴヌクレオチドまたはオ リゴヌクレオチド類似体。 ３１．少なくとも若干のヌクレオチド塩基か２′−Ｏ−アルキル修飾を有する請 求項２７に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ３２．修飾された塩基か２′−Ｏ−メチルである請求項３１に記載のオリゴヌク レオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ３３．サイトメガロウイルス感染の活性を変調する方法であって、サイトメガロ ウイルスに感染していると疑われる動物に、表２に定義された配列の内の一つの 少なくとも一部分を含むサイトメガロウイルスのＤＮＡまたは対応するｍＲＮＡ 若しくは前ｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成しうるオリゴヌクレオチドまた はオリゴヌクレオチド類似体の治療的有効量を接触させることを含む上記の方法 。 ３４．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体が薬学的に許容しう る担体中にある請求項３３に記載の方法。 ３５．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が 硫黄含有種を含む請求項３３に記載の方法。 ３６．オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間の少なくとも若干の結合性基が ホスホロチオエート残基を含む請求項３３に記載の方法。 ３７．オリゴヌクレオチドの少なくとも若干のヌクレオチド塩基が２′−Ｏ−ア ルキル修飾を有する請求項３３に記載の方法。 ３８．修飾された塩基が２′−Ｏ−メチルである請求項３７に記載の方法。 ３９．ホスホロチオエート結合を有する２′−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドを含 む請求項２７に記載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体。 ４０．前記のオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を有する２′−Ｏ −メチル修飾ヌクレオシドを含む請求項３３に記載の方法。