JPH06502618A

JPH06502618A - 新規な合成ｇｒｆ類似物

Info

Publication number: JPH06502618A
Application number: JP3509839A
Authority: JP
Inventors: コイ、ディヴィッド・エイチ; マーフィー、ウィリアム; ホカート、サイモン・ジェイ
Original assignee: ジ・アドミニストレイターズ・オブ・ザ・テュレイン・エデュケイショナル・ファンド
Priority date: 1990-05-04
Filing date: 1991-04-30
Publication date: 1994-03-24
Also published as: AU7882291A; CA2082059A1; EP0527914A1; AU651976B2; WO1991016923A1; EP0527914A4

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】新規な合成ＧＲＦ類似物１　発明の分野本発明は治療有用性を有する新規ペプチドに関する。より詳しくは、本発明は天然産生ペプチドである成長ホルモン放出因子（ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇｆａｃｔｏｒ　：　Ｇ　ＲＦ　）のペプチド類似物に関する。

また、本発明はこれらのペプチドためにこれらのペプチドを用いる治療方法にも関する。

２　発明の背景成長ホルモン（ＧＨまたはソマトトロピン）は下垂体前葉により分泌される、１９１個のアミノ酸からなるペプチドである。成長ホルモンはそれ自身が直接的に真に成長を促すわけではないが、肝臓により産生されるソマトメジン等の多くの真の成長因子の一つの産生を刺激することで作用する。しかしながら成長ホルモンの最終効果は広い。全体的レベルにおいて、このホルモンは骨格、結合組織、筋肉ならびに内臓に影響する。分子レベルにおいて、成長ホルモンおよびソマトメジンの代謝影響は核酸および蛋白質合成の刺激、能動窒素バランスの誘導、脂肪分解の刺激および尿素排出の減少を包含する。

子供における成長ホルモンの不適当なレベルは成長、置端の発達および骨年齢の遅滞を引き起こす。また、二次性徴の発達遅滞をも引き起こす。成長ホルモン欠乏の付加的な影響は、喉頭の発達障害、生殖腺の成熟遅滞および低血糖を包含する。これらの効果は、全て正常レベルの成長ホルモンにより打ち消すことができる。

成長ホルモンの産生は、視床下部内に配置される、放出および阻害感化因子両方のコントロール下にある。−次放出感化因子は視床下部の弓状核において最初に産生される成長ホルモン放出因子（ＧＲＦまたはＧＨＲＨ）であり、そして該因子は門脈循環により下垂体に運ばれる。しかし、膵臓腫瘍細胞等、体の他の細胞も、やはりこのホルモンを産生ずることができる。ヒトの成長ホルモン放出因子は４４個のアミノ酸からなるペプチドであり、その先頭の２９個のアミノ酸が全ての生物学的活性を有している。また、これに類似のペプチドが牛、ラット、羊および豚からも単離され、その配列が同定されている（Ｅｓｃｈ　ｅｔ　ａｌ、、　ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｌｌｍｕｎ、　１１７：７７２．１９８３）。

ＧＲＦ配列の知見は、成長ホルモン欠乏の個体を治療するための生理学的に自然な手段を提供した。その後の努力は合成ＧＲＦ類似物の開発に向けられてきたが、これはそのような類似物が成長ホルモンの放出を引き起こすためにより効果的であろうという希望があったからである。

新規置換を作り出すための努力は、生物学的活性を有する、分子のＮ末端を含む部分、特に１位〜２９位の残基に塩点が合わされている。一つまたはそれ以上のアミノ酸残基における種々の置換は、対応する本来のペプチドと比べて、合成ペプチドの効力を増加させるのに効果的であることが示されている。ペプチドデザインにおける近年のアプローチの一つは、通常、ペプチドの親水性二次構造を強化する修飾の探査であった（Ｄｅ　Ｇｒａｄｏ　ｅｔ　ａｌ、　、　Ｊ、＾ｍ、　Ｃｈｅ＋ｎ、　Ｓｏｃ、　１０３：６７９〜６８６、１９８１　；　Ｍｕｅ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、＾ｍ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　１０５：４１００〜４１０２．１９８３）、ある種のペプチドホルモン、即ち分子の一面が疎水性残基を選択的に有し、他の面が一次的に親水性ドメインを含有しているペプチドホルモンは、この親水特性の最適化によりその活性が強化され得る。ＧＲＦは、その− 重二分子膜リン脂質小胞との結合および空気−水境界面における単分子膜形成の観察に基づき、実質的に親水性ポテンシャルを有するものと記されている（Ｋａｉｓｅｒ　ｅｔ、　ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　２２３．２４９〜２５５．１９８４）。

ＧＲＦの二次構造を変えようとする試みの多（は文献に報告されている。例えばランス（Ｌａｎｃｅ）らは、１位〜３位のＬ−アミノ酸（Ｔｙｒ’、Ａｌａ２、Ａｓｐ３）をそれぞれのＤ−異性体で置換して、ＧＲＦ分子のＮ末端領域における立体配座の制限を行おうと試みた（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍａ＋、　１１９：２６５．１９８４）　ｏ　Ｄ−類似物は本来のペプチドよりも活性が高いことが判明した。その後の研究では、このアプローチは４位、５位、６位、７位および８位にまで拡張された。５位、６位および７位の置換は活性を実質的に減少させたが、４位におけるＤ−ｆｉ換は本来のそれに近い活性であり、また、８位のＤ−置換は活性を増加させた（Ｃｏｙ　ｅｔａｌ、、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｎ、　２８：１８１〜１８５．１９８５）。

本来のＧＲＦ分子の二次構造を変えるためのさらなる試みは、分子上のある他の点における計画された親水性を強化する試みに絞られた。例えばタウ（Ｔａｕ）らは、（１〜２９位の）ＧＲＦ分子上のα−らせんの予想した位置に注目し、１３〜２９位領域内の特定のアミノ酸を、β−ターンが存在すると期待される６〜１０位のアミノ酸と同様に、置換することによりＧＲＦ分子の特定領域を修飾した。９位のＳｅｒの（“良好なα−らせん形成素”である）Ａｌａによる置き換えは拡張されたらせん立体配座に好都合であると述べられた。このパターンで作り出された全てのペプチドは、本来のＧＲＦに比べて強化された活性を示した。

本来の分子の８位でのＬ−Ａｌａもしくはその等価アミノ酸残基による置換は、そのように修飾されたペプチドの成長ホルモン放出活性の非常な増加をもたらすという、驚くべき知見が得られた。第８位における他の置換がかねてから示唆されていた（例えば、Ｄ−ＡｒｇＳＳｅｒおよびＤ−３ｅｒが置換されている米国特許第４、５１８．５８６号明細書；　Ｓｅｒ、＾ｓｎ、　ＴｈｒまたはＧｌｎが置換されている米国特許第４、６８９．３１８号明細書；　Ｄ−ＡｒｇまたはＤ−Ｌｙｓが置換されている米国特許第４、６２６．５２３号明細書参照）が、この位置におけるし一＾１ａの使用は誰も意図しなかった。実際、サイトウ（Ｓａｉｔｏ）らはこの位置でのＤ−Ａｌａによる置換を行い、活性（７）　実Ｎ　的なＭ少を認メテイる（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、　１４９：５３１〜５３７゜１９８７）。従って、本発明の特別な置換で観察された強化は非常に驚（べきものである。

３、発明の概要本発明は本来のホルモンＧＲＦの類似物である新規ペプチドグループに関する。

新規ホルモンは、本来の分子では通常第８位に位置するＡｓｎをα−らせん形成誘導性アミノ酸で置換することにより特徴付けられる。特に、本発明は、以下の式を含むペプチドに関する　Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ａｌａ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｒ７ −ＲＨ−Ｒｇ−Ｒ１６−＾ｒｇ−Ｒ１２−Ｒ１３−Ｒｌ４４１５−Ｇ１ｎ４１７４１８−＾１ａ−Ａｒｇ−Ｒ２１−Ｌｅｕ−Ｒ２３−Ｒｚ＜−Ｒ２ｓ−Ｒｚｓ− ｔ？＋７−Ｒｚｓ−Ｒｚ。

但し式中、Ｒ１はアミノ基欠損Ｔｙｒ　（ｄｅｓ−ａｍｉｎｏ−Ｔｙｒ）またはＡ−Ｒ，で表され、その際Ａは低級アルキル、低級シクロアルキル、ベンジルまたは低級アシルであり、Ｒ１はＣ’ＭｅもしくはＮ’Ｍｅ置換基を有する／有さないＴｙｒ、　Ｄ−Ｔｙｒ、　Ｍｅｔ。

ＰｈｅＳＤ−Ｐｈｅ、　ｐｃｌ−ＰｈｅＳＬｅｕ、　Ｈｉｓ、またはＤ−Ｈｉｓであり；Ｒ２は＾ｌａ、　Ｄ−ＡｌａｌＤ−ＮＭ＾またはＤ−Ａｒｇであり；Ｒ３はＡｓｐまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ７はＴｈｒ、＾ｉｂ、　ＮＯ２、Ｌｅｕ、　Ｔｒｐ、β−Ｎａｌ、またはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ，ＦＳＣｌ、Ｂｒ１Ｎｏ２またはＭｅであり；Ｒ８は＾ｌａ、＾１ｂＳＬｅｕ、　Ｔｒｐ、β−Ｎａｌまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨｌＦ、　Ｃ１、Ｂｒ、　ＮＯ２またはＭｅであり；ＲｏはＳｅｒ、＾ｌａ、＾ｉｂ、　Ｌｅｕ、　Ｔｒｐ、β−Ｎａｌまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ，ＦｌＣｌ、Ｂｒ、　Ｎｏ２またはトであり；ＲＩＯはＴｙｒまたはＤ−Ｔｙｒであり。

Ｒ１２およびＲ２１はＬｙｓ、ＡｒｇまたはＮ’−Ｂ−Ｌｙｓで表され、その際Ｂは低級アルキルまたはシクロアルキルであり、Ｒ２２とＲＨは同じであっても、異なっていてもよく；Ｒ１３はＩｌｅまたはＶａｔであり：Ｒ１４はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり：Ｒ１５はｃｘｙ、＾ｌａ、　Ｌｅｕ、＾ｓｎ、　ＧｉｎまたはＡｉｂであり；Ｒ１７はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり：ＲＩ８はＴｙｒまたはＳｅｒであり；Ｒ２３はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり；Ｒ２４はＨｉｓまたはＧｉｎであり；Ｒ２５はＧｌｕ、　ＡｓｐＸＤ−ＧｌｕまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ２６はＩｌｅまたはＬｅｕであり：Ｒ２７はＭｅｔＳＤ−１１ｅｔＳＡｌａＳＮｌｅＳｌｉｅ、　Ｌｅｕ、　ＮｖａまたはＶａｌであり；Ｒ２１１は＾ｓｎ、　Ｓｅｒまたは欠損（ｄｅｓＲ２ｇ）であり；Ｒ２９は＾ｒｇ、　Ｄ−Ａｒｇまたは欠損（ｄｅｓＲｕ）であり：また、医薬学的に許容し得るその塩であってもよい。

好ましい実施態様ではＲ，がＡｌａであり、特に好ましい実施態様ではＲ８およびＲ１５がＡｌａであり、最も好ましくは、Ｒ８、Ｒ８およびＲＩ　５がＡｌａである。特に効果的なペプチドは、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１５がＡｌａで、且つＲ２がＤ−Ａｌａであるときに形成される。

上記式は２９個のアミノ酸残基を含有しているが、当業者であれば、これが分子の憇部位を表したものであり、配列のＣ末端までのさらなるアミノ酸残基の付加はその効果に影響しないことを理解されよう。総数４４個までの残基をもたらす付加は、本来のＧＲＦ分子において表されるように、効果を挙げないであろう。

これらのアミノ酸は活性にとって本質的なものではないので、それらの同一性は重要なものではなく：それらは本来のＧＲＦ配列におけると同じものでよく、または手頃な等価物であってもよい。これらの代替置換は、例えば米国特許第４、６２６．５２３号ならびに第４．７２８．７２６号の明細書に見られる。

また本発明は、医薬学的に許容し得る担体と組み合わせて、上記ペプチド／塩を成長ホルモン放出に効果的な量含有する組成物も提供する。また、そのような治療を必要とする個体に対する本発明組成物の投与により、成長ホルモンの放出を刺激する方法も提供される。このような方法は、成長ホルモンの放出による利益が期待される、生理学的な状態の治療に有益である。また、正常な動物においてその成長を刺激する方法も提供され、そのような方法では、正常な動物に対する本発明組成物の投与も含をされる。

一つの代替実施態様においては、８位、９位および１５位における特定の置換とＲ２の位置におけるＤ−Ａｒｇの置換とを組み合わせることで、特に効果的なＧＲＦ受容体拮抗的阻害体が生産される。このようなペプチドは生来のＧＲＦの活性を阻害し、そして引き続いて成長ホルモンの放出を防ぐ。か（して、また、このようなペプチドのＧＲＦを拮抗的に阻害するに有効な量と医薬学的に許容し得る担体との組み合わせを含む治療用組成物も提供され、同様に、これらの組成物をこのような治療を必要とする個体に投与することにより成長ホルモンの放出を阻害するための方法も提供される。

４　明以下の略語が本明細書および請求の範囲を通して用いられる。

Ａｌａ　アラニンＡｒｇ　アルギニン＾ｓｎ　アスパラギンＣｙｓ　シスチンＧｉｎ　グルタミンＰｈｅ　フェニルアラニン＾ｉｂ　α−アミノ酪酸ｄｅｓ−ａｍｉｎｏ−Ｔｙｒ　［β−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロピオニルコノルロイシンＮｌｅ　ノルロイシンＮｖａ　ノルバリン β−ＮＭＡ　α−アミノ基がメチルで置換されたＤ−アラニンＢｏｃ　ｔ−ブチルオキシカルボニルＢｚｌ　ベンジルＴｏｓＰ−ｈルエンサルホニル２−ＣＩ−２２−クロロベンジルオキシカルボニル２−Ｂｒ−２２−ブロモベンジルオキシカルボニルｃｈｘ　シクロヘキシルいずれの場合にもアミノ酸の異性体型が存在するが、名前を記載した残基より重要なものはなく、天然産生し一アミノ酸が意図されている。また、特定のＣ末端代替物が注記されていなければ、−〇Ｈ（遊離酸）および−Ｎｌｈ（アミド）の形態のペプチドは両方共に意図されている。

同様に、本明細書中で”低級アルキル”低級アシル”および“低級シクロアルキル”として用いられている“低級”という術語は炭素数３〜４個のものをさしており、“シクロアルキル”は炭素数３〜６個である。

５、本発明の詳細な説明本発明のペプチドは本来のＧＲＦの類似物であり、成長ホルモン放出においてｔ来のホルモンよりも非常に優れた効力を示す。これらのペプチドの効力増強はＧＲＦ分子Ｎ末端部位のα−らせん特性の強化によるものであると信じられている。Ｃ末端領域の親水性α−らせん特性の強化がペプチドの効力を増強することは以前から示されていたが、Ｎ末端におけるそのような修飾が分子の活性にどのように影響するのかは知られていなかった。本発明の結果は、［１〜２９位の］ＧＲＦの８位において、α−らせんを形成する傾向特性を有するアミノ酸残基による置換により、効力の予想外の増強が得られることを示している。アミノ酸の中でこの範喀にはいるものは、Ａｌａ、＾１ｂＳＩ−ｅｕＳＴｒｐｓβ−Ｎａｌ、またはｐ−Ｘ−Ｐｈｅであり、ここでＸはＨ，Ｆ、　Ｃ１、Ｂｒ、　ＮＯ２またはＭｅである。最も好ましいＲ８はＡｌａである。［１〜２９位の］ＧＲＦの修飾が＾ｓｎ’のＡｌａ’による置換だけである類似物は、生体内において、本来の分子の少なくとも４倍の効力を有する（表１）。１５位における＾ｌａ、　Ｌｅｕ、＾５ｎＳＧｌｎまたはＡｉｂ、好ましくはＡｌａによる置換は、生体内において、本来のＧＲＦの約５倍までの、大幅な効力の増強をもたらす。さらなる好ましい修飾は、８位において用いられたと同じ好ましい残基の一つによる９位の置換である。これら８．９および１５位における置換の組み合わせは、特にそれら全てがＡｌａによる置換であるときには、効力を強化する。また、さらにＧｌｕ”とＬｅｕ２６．２７が組み合わされたときには、活性は本来のＧＲＦ分子の３３倍にまで増強される。２位におけるＤ−Ａｌａによる置換が［１〜２９位の］　ＧＲＦ活性の増加をもたらすことは従来から開示されている。本発明の特に好ましい実施態様においては、この置換が８．９および１５位の置換の一つまたはそれ以上と組み合わされて、生体内において、本来のＧＲＦの４９倍までの活性を有する高動力ＧＲＦ類似物を作り出す。

ＧＲＦ拮抗的阻害体活性の強化のためには、２位にＡｒｇを有するペプチドを用いた、８位および／または９位および／または１５位における計画された置換が特に好ましい。Ａｒｇ２置換の使用はＧＲＦ拮抗的阻害体活性を生じることがすでに報告されているが、計画された組み合わせはより強力な、Ｄ−Ａｒｇ　２置換単独の活性の１０倍までの拮抗的阻害体活性を生じる。

５．１．調製方法本発明のペプチドの調製は、すべての公知のペプチド合成方法によりなされることができる。好ましい方法は、マリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）により記載されたような固相合成である（Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　８５：２１４９．１９６３）、この方法では、ペプチドの構築はＣ末端から始められ；アミノ基を保護されたアミノ酸が公知の方法により、クロロメチル化樹脂、α −アミノジフェニルメタン樹脂またはα−アミノ−（１，１−ジフェニル）エチルアルコール樹脂等の適切な樹脂にカンプリングされる。一度カツブリングがなされた後で、末端アミノ酸の保護解除が当業者に公知の技術により行われる。典型的な保護解除溶媒はトリクロロ酢酸を単独で、あるいは塩化メチレンと組み合わせて含有している。所望の配列の残りの保護されたアミノ酸は適切な順序で連続的に固相に添加され、先のアミノ酸とカップリングされる。通常のカップリング溶液は、ジシクロへキシルシアナミドおよびジイソプロピルシアナミド等のシアナミド誘導体である。あるいは、固相合成機に添加される前に、幾つかのアミノ酸が互いにカップリングしていてもよい。

配列が完成したならば、全てのペプチドが樹脂から外され、ＨＰＬＣもしくは他のクロマトグラフ手法等の当該技術の決まり切った手順により純化することができる。

５．２．医薬学的組成物合成ペプチドは、しばしば、酸付加塩および金属錯体等の医薬学的に許容し得る塩の形態で医薬学的に用いられるが、その酸添加塩には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、くえん酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩またはリン酸塩が含まれ、金属複合体は鉄または亜鉛を含む。

ペプチドは好ましくは非経口的に、即ち皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内または経皮的に投与される。これらの投与形式のために、ペプチドは通常、水または等張食塩水等の医薬学的に許容し得る担体と組み合わされる。あるいは、ペプチドは、適切な結合剤、滑剤その他を含む錠剤もしくはカプセル剤の形態で経口的に投与されてもよい。

組成物当たりに必要なペプチド量および／または単位投薬量は、現在ＧＲＦペプチドに用いられている公知の組成物および投薬量の形態を参照および比較することにより予め測定することができる。しかし、一般的には、投薬量の範囲は個体の体重１ｋｇ当たり５０ｎｇ〜５μｇである。投薬量は投与形式および意図する結果に依存する。しかし、このような手技は充分に当業者の能力の範囲内である。

５．３．治療的使用本発明の合成ペプチドは、成長ホルモンの直接投与が望ましいいずれの状況においても有用である。獣医学的な使用には、例えば牛、鶏、七面鳥、豚、山羊、魚その他等の家畜へ投与して、成長を促したり、また、これらの動物の蛋白質（筋肉）と脂質との割合を変化させるあるいは改善させることの両方が含まれる。

ペプチドはまた、下垂体小人症等の成長ホルモン欠乏関連障害の治療にも有用である。また、傷の治癒等、その地条（の代謝もしくは発達過程も成長ホルモンに影響されており、従って、本発明のＧＲＦ類似物の投与により利益を受けることができる。これらのペプチドのその他の用途は当業者によりすぐに認識されるだろう。

一つもしくはそれ以上の計画された＾１ａｌｉｌ換がＡｒｇ　２と組み合わされた本発明のそれらのペプチドはＧＲＦ拮抗的阻害体であり、且つそれゆえに成長ホルモン過剰により引き起こされる状態の治療に用いられることができる。そのような状態の一例が先端巨大症であり、これは症状の一つとして、顔および四肢の骨の異常な巨大化をもたらす。

塩化イオン形態のベンジルヒドロイルアミン−ポリスチレン樹脂（ＡｄｖａｎｃｅｄＣｈｅｍＴｅｃｈ社製）（１，２５ｇ、０．５ｍＭ）が、Ａｄｖａｎｃｅｄ　ＣｈｅｍＴｅｃｈペプチド合成機の反応容器内に置かれるが、該合成機は以下の反応サイクルを行うようプログラムされている：　（ａ）塩化メチレン：　（ｂ）塩化メチレン中の３３％のトリフルオロ酢酸（１分および１５分の２回）；　（Ｃ）塩化メチレン：　（ｄ）エタノール：　（ｅ）塩化メチレン：　け）塩化メチレン中に１０％ジイソプロピルエチルアミン。

中性にされた樹脂は、Ｂｏｃ−Ｎ’−ｔｏｓｙｌ−Ａｒｇおよびジイソプロピルカルボジイミド（各々１．５ｍＭ）と共に塩化メチレン中で１時間撹拌され、得られたアミノ酸は次に、上記（ａ）〜（ｆ）の洗浄プログラムに沿って作業周期の各工程へ回される。次に下記のアミノ酸（１，５ｍＭ）が、ＧｉｎとＡｓｎが１．５ｍＭの１−ハイドロオキシベンゾトリアゾールの存在下でカップリングされた以外は同様の手順で、連続的にカップリングされる：Ｂｏｃ−３ｅｔ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｍｅｔ、　Ｂｏａ−Ａｓｐ（ｃｈｘ）、Ｂｏｃ−ＧｉｎＳＢｏｃ−ＬｅｕＳＢｏｃ−Ｌｙｓ（２−ＣＩ|ｚ）、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｂｏｃ−＾１ａ、　Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、　Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、　Ｂｏｃ−ＧｌｙｌＢｏメ|Ｌｅｕ。

Ｂｏｃ−ＶａｌＳＢｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃ１−ｚ）、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−ｚ）、Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚ戟j、Ｂｏｃ−Ａｌａ、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏａ−Ｐｈｅ、　Ｂｏｃ−１１ｅＳＢｏｃ−＾１ａ、　Ｂｏｃ−Ａｓｐ、　Ｂｏｃ−＾１＝A　Ｂｏｃ− Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−ｚ）。最後のｔ−ブトキシカルボニル基を除去し洗浄および乾燥した後に完成した樹脂の重量は２．５ｇであった。

６、１．２．　Ａ１ａ’ＧＲＦ（１〜２９）ＮＨｚ前節６．１．１．にて記述された樹脂（２，５ｇ、０．５ｍＭ）は、ｐ−クレゾール（５ｍｌ）、ジチオトレイトール（１００ｍｇ）および無水弗化水素（３５ｍｌ）と１℃で混合されて、４５分間撹拌される。過剰の弗化水素は乾燥窒素流のもとて速やかに蒸発させられ、遊離ペプチドは沈殿させられてエーテルで洗浄される。

次に、粗ペプチドは最小容量の２Ｍ酢酸に溶解され、同一溶媒を用いたセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　Ｇ　−５０のカラム（２，５Ｘ１００ｃｍ）により容離される。

次に、紫外線吸収および薄層クロマトグラフィーによる主要成分を含有する画分が収集されて小容量にまで蒸発させられ、そしてパイダックオクタデシルシランシリカ（Ｖｙｄａｃ　ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌａｎｅ　５ｉｌｉｃａ）　（１０〜１５　μＭ）のカラム（２，５ｘ５Ｑｃｍ）に供される。

これは水中の０．１％トリフルオロ酢酸中の１０〜４５％アセトニトリルの線勾配を用いて容離される。画分は薄層クロマトグラフィーおよび高性能分析液体クロマトグラフィーにより試験され、そして最大限に純化するために収集される。

溶液の水からの凍結乾燥を繰り返すことで、白色でふわふわした（ｆｌｕｆｆの粉末状の生産物が得られる。

生産物はＨＰ　Ｌ　ＣならびにＴＬＣにより均質であることが認められる。酸氷解物のアミノ酸分析によりオクタペプチドの組成が確認される。

６．１．３．　［＾１ａ’１”］−ＧＲＦ（１−２９）−メチルへｙノルヒドロイルアミン樹脂塩化イオン形態のベンノルヒドロイルアミン−ポリスチレン樹脂（ＡｄｖａｎｃｅｄＣｈｅｍＴｅｃｈ社製）（１，２５ｇ、領５ｍＭ）が、＾ｄｖａｎｃｅｄ　ＣｈｅｍＴｅｃｈペプチド合成機の反応容器内に置かれるが、該合成機は以下の反応サイクルを行うようプログラムされている・　（ａ）塩化メチレン：　（ｂ）塩化メチレン中の３３％のトリフルオロ酢酸（１分および１５分の２回）；　（Ｃ）塩化メチレン：　（ｄ）エタノール：　（ｅ）塩化メチレン：　（ｆ）塩化メチレン中の１０％ジイソプロピルエチルアミン。

中性にされた樹脂は、Ｂｏｃ−Ｎ’−ｔｏｓｙｌ−＾ｒｇおよびジイソプロピルカルボジイミド（各々１．５ｍＭ）と共に塩化メチレン中で１時間撹拌され、得られたアミノ酸は次に、上記（ａ）〜（ｆ）の洗浄プログラムに沿って作業周期の各工程へ回される。次に下記のアミノ酸（１，５ｍＭ）が、Ｇｉｎと＾ｓｎが１．５ｍＭの１−ハイドロオキシベンゾトリアゾールの存在下でカップリングされた以外は同様の手順で、連続的にカップリングされる：Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−ＭｅｔＳＢｏｃ−＾５ｐ（ｃｈｘ）、Ｂｏｃ−ＧｉｎＳＢｏｃ−Ｌｅｕ、　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃ１|ｚ）、Ｂｏｃ−＾ｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｂｏｃ−Ａ１．ａ、　Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、　Ｂｏｃ−Ｇｌｎ、　Ｂｏｃ−＾１ａＳＢ盾メ|Ｌｅｕ。

Ｂｏｃ−Ｖａｌ、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃ１−ｚ）、Ｂｏｃ−＾ｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−ｚ）、Ｂｏａ−３ｅｒ（Ｂｚ戟j、Ｂｏｃ−Ａｌａ、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ、　Ｂｏｃ−１１ｅ、　Ｂｏｃ−ＡｌａＳＢｏｃ−ＡｓｐＳＢｏｃ−ＡｌａB Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２−Ｂｒ−ｚ）。最後のｔ−ブトキンカルボニル基を除去し洗浄および乾燥した後に完成した樹脂の重量は２６ｇであった。

６、１．４．Ａｌａ”＋５−ＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２前節６．１．３．１：記述された樹脂（２，６ｇ、０．５ｍＭ）は、６．１．２．節にて既述したように、弗化水素を用いた開裂ならびにカラム法による純化に付される。

溶液の水からの凍結乾燥を繰り返すことで、白色でふわふわした粉末状の生産物が得られる。

また、同様の手順にて、以下のペプチドも作成された：Ａｉｂ”、Ａｌａ”−ＧＲＦ（１〜２９）ＮＨｚ＾１ａ８　ＩＳ、Ｇｌｕ２５、Ｌｅｕ”ｔ”−ＧＲＦ（１−２９）ＮＦｌｚＤ−Ａｌａ２、Ｌｅｕ’、Ａｌａ４　、　ｌ　５、Ｇｌｕ２５、Ｌｅｕ”　＋　２７−ＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２Ｏ−＾１ａ２１．＾１ａ８．　＋　５、Ｇｌｕ”、Ｌｅｕ”　２７−ＧＲＦ（１〜２９）ＮＨ２ＡＩＢ”＋　９．　＋　ｓ、Ｇｌｕ”、Ｌｅｕ”　２７−ＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２Ｏ−Ａｌａ”、Ａｌａ’９”−ＧＲＦ（１〜２９）ＮＨｚＤ−Ａｌａ２１、Ａｌａ”ｔ　’　Ｉ”−ＧＲＦ（１〜２９）ＮＨ２＾Ｌａ”　”　’−ＧＲＦ（１〜２９）ＮＨ２Ａｌａ”　＋　”　＋　”−ＧＲＦ（１−２９）ＮＨ２Ｏ−＾ｒｇ　２、Ａｌａ”う’−ＧＲＦ（１〜２９）ＮＨ２ン放出を刺激するための有用性を試験された。

６、２．１．下垂体細胞分散体重２００〜２５０ｇで調節条件下（０５：ＱＯ〜１９：００時の開光条件におく）で飼育された雄成熟ラット由来下垂体前葉が他の手法（Ｂｅｎ−Ｊｏｎａｔｈａｎ、　Ｍｅｔｈ。

Ｅｎｚｙｍｏｌ、　１０３＋２４９〜２５７．１９８３；　Ｈｏｅｆｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　ＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌA　３５：２２９〜２３５．１９８４）から派生し、従来公知のトリプシン／デオキシリボヌクレアーゼ法（Ｈｅｉｍａｎ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　１１６：４１０−４１５．１９８５）による無菌技術を用いて分散させられた。

６、２．２．細胞培養分散細胞は、無菌濾過されたダルベツコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）の改良イーグル培地［ＭＥＭ　；　Ｇｉｂｃｏ　Ｌａｂｒｏｔｏｒｉｅｓ　（ＧＩＢＣＯ）、　Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、　ＮＹ］に希釈されたが、該培地には２．５％の牛胎児血清（ＧＩＢＣＯ）、３％の馬血清（ＧＩＢＣＯ）、（氷上で保存した採取後１時間以内の）１０％の新鮮な下垂体提供個体由来ラット血清、１％ＭＥＭ可欠アミノ酸（ＧＩＢＣＯ）、ゲンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ、１０　ｎｇ／ｍｌ　：　Ｓｉｇｍａ）およびナイスクチン（Ｎｙｓｔａｔｉｎ、　１０．０００　Ｕ／ｍｌ　；　ＧＩＢＣＯ）が付加されていた。細胞は血球計算器（ｈｅｍａｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）により計測され（適切には下垂体当たり２．０００．　ｏａａ細胞）、そしてウェル（ｗｅｌｌ、　Ｃｏ５ｔａｒ　ｃｌｕｓｔｅｒ　２４；Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ。

Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、　ＮＹ）当たり２００．０００細胞の密度でランダムに配置された。配置された細胞は、９５％の空気および５％の二酸化炭素からなる加湿された大気中の上記ホルモン抗原投与のための準備において、細胞は旧培地および浮遊細胞を除くために培地１９９　（ｍｃｄｉｕｍ　１９９、ＧＩＢＣＯ）により３回洗浄された。（シリコンコーティングされた試験管内に希釈された）分泌促進物質の施用量はそれぞれ、四層付きウェル内の、１％ＢＳＡ（画分Ｖ；　Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ、　Ｓｔ　Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）を含む総量１ｍｌの培地１９９中で試験された。調節レベルを狭い範囲に維持し、且つ付加的な成長因子または糖質コルチコイドの添加無しに基底分泌レベルに対する最大限に刺激されたレベルの比率を増加させるために、細胞は０．１　ｎＭのソマトスタチンの存在下でパルスされた。空気／二酸化炭素（９５１５％）の大気中で３７℃、３時装置いた後、培地は除去されて、ホルモン含量の検定を行うまで一２０℃で保存された。

６、２．４．ＧＨＲＩ　Ａ血漿もしくは中膜内のＧＨは、ＮＩＤＤＫならびにメリーランド大学医学部のホルモンおよび下垂体に関する国家プログラムにより広く一般に供給される成分を用いた、標準二重抗体ＲＩＡにより測定された。

６、２．５．結果効力はバグスレイ（Ｐｕｇｓｌ、ｅｙ）により記載された方法（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　３９：１６１−１７６．１９４６）に従い、４点検定により計算された。これらの試験の結果は表１に示されている。これらのデータに見られるように、８位のＡｌａと１５位のＡｌａとの組み合わせは、Ａｌａ１５だけの類似物と比べて、ペプチドの効果を非常に大きく増加する。同様に、＾ｌａ’および／またはＤ−Ａｌａ２の付加もまた、ペプチドＧＲＦ活性を強化する。一方、Ｎ末端領域の他の位置におけるＡｌａによる置換、即ち７位及び１０位のＡｌａによる置換は、Ａｌａ８・９・１５の組合せと組み合わせたとき（ご、本質的に障害効果を有する。

表１生体内におけるＧＲＦ（１〜２９）ＮＨ２類似物の効力＾１　ａ　＋　町５±１（４）＾１ａ’　４±１（１３）＾１ａ８，１５　１５±２（１５）Ａｉｂ’、＾１ａ＋５　２±１（３）Ａｌａ４．＋　５、　Ｇｌｕ２５、　Ｌｅｕ２６，２７　７上２（５）Ｄ−Ａｌａ２、Ｌｅｕ’、Ａｌａ８．　＋　５、Ｇｌｕ”、Ｌｅｕ”＋　２７０．３±０．２（５）Ｄ−Ａｌａ２、＾１ａ８，１５、Ｇｌｕ２５、Ｌｅａ”＋　２７　７ ±１（４）Ａ１ａ８＋　ｅ、　Ｉｓ、Ｇｌｕ２５、Ｌｅｕ””　３３±９（６）Ｄ−Ａｌａ２、Ａｌａ”＋　”　２７±１０（８）Ｄ−Ａｌａ２、Ｄ−＾１ａ’ ＋　９＋　＋　５　４ｇ±１４（８）＾１ａｔ、ｇ、ｏ、＋ｓ　２±１（２）＾１ａ’＋　９．１０．１５　１±１（２）効力は４点検定により計算された。値は、平均値上（ｓｅｗ、　）である。括弧内の値は、平均効力の計算に用いられた類似物の多数回分の施用量を用いた関連実験の回数である。ＧＲＦ　（１〜２９）ＮＨｚ標準（効力＝１）はそれぞれの検定中に含まれていた。さらなる詳細に関しては、マーフィ（Ｍｕｒｐｈｙ）およびカイ（Ｃｏｙ）のＰｅｐｕｔｉｄｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１（１）：　３６〜４１（１９８８）を参照して欲しい。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成　４年１１月　４日

Claims

【特許請求の範囲】１．下記配列を含有するペプチおよび医薬学的に許容し得るその塩：【配列があります】［但し配列中、Ｒ１はアミノ基欠損ＴｙｒまたはＡ−Ｒ１で表され、その際Ａは低級アルキル、低級シクロアルキル、ベンジルまたは低級アシルであり、Ｒ１はＣ′′ＭｅもしくはＮ′′Ｍｅ置換基を有するまたは有しないＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、ｐＣｌ−Ｐｈｅ、Ｌｃｕ、Ｈｉｓ、またはＤ −Ｈｉｓであり；Ｒ２はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−ＮＭＡまたはＤ−Ａｒｇであり；Ｒ３はＡｓｐまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ７はＴｈｒ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌ、またはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２またはＭｅであり；Ｒ８はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、β− Ｎａｌまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２またはＭｅであり；Ｒ９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２またはＭｅであり；Ｒ１０はＴｙｒまたはＤ−Ｔｙｒであり；Ｒ１２およびＲ２１はＬｙｓ、ＡｒｇまたはＮ′−Ｂ−Ｌｙｓで表され、その際Ｂは低級アルキルまたはシクロアルキルであり、Ｒ１２とＲ２１は同じであっても、異なっていてもよく；Ｒ１３はＩＬｅまたはＶａｌであり；Ｒ１４はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり；Ｒ１５はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、ＧｌｎまたはＡｉｂであり；Ｒ１７はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり；Ｒ１８はＴｙｒまたはＳｅｒであり；Ｒ２３はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり；Ｒ２４はＨｉｓまたはＧｌｎであり；Ｒ２５はＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ−ＧｌｕまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ２６はＩＬｅまたはＬｅｕであり；Ｒ２７はＭｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ａｌａ、ＩＬｅ、Ｌｅｕ、Ｎｖａ、またはＶａｌであり；Ｒ２８はＡｓｎ、Ｓｅｒまたは欠損（ｄｅｓＲ２８）であり；Ｒ２９はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇまたは欠損（ｄｅｓＲ２９）である］２．前記Ｒ８がＡｌａである、請求項１に記載のペプチド。３．前記Ｒ１５がＡｌａである、請求項２に記載のペプチド。４．前記Ｒ９がＡｌａである、請求項３に記載のペプチド。５．前記Ｒ２がＤ−Ａｌａである、請求項１〜４のいずれかに記載のペプチド。６．前記Ｒ２５がＧｌｕである、請求項４に記載のペプチド。７．前記のＲ２６およびＲ２７がそれぞれＬｅｕである、請求項６に記載のペプチド。８．前記Ｒ２５がＧｌｕである、請求項５に記載のペプチド。９．前記のＲ２６およびＲ２７がそれぞれＬｅｕである、請求項５に記載のペプチド。１０．Ａｌａ８−ＧＲＦ（１〜２９）を含有する、請求項１に記載のペプチド。１１．Ａｌａ８，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有する、請求項１に記載のペプチド。１２．Ａｌａ８，９，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有する、請求項１に記載のペプチド。１３．Ｄ−Ａｌａ２およびＡｌａ８，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有する、請求項１に記載のペプチド。１４．Ｄ−Ａｌａ２およびＡｌａ８，９，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有する、請求項１に記載のペプチド。１５．Ｄ−Ａｌａ２、Ａｌａ８，１５、Ｇｌｕ２５、Ｌｅｕ２６，２７−ＧＲＦ（１〜２９）を含有する、請求項１に記載のペプチド。１６．前記Ｒ２がＤ−Ａｒｇである、請求項１に記載のペプチド。１７．前記Ｒ２がＡｌａである、請求項１６に記載のペプチド。１８．前記Ｒ１５がＡｌａである、請求項１６に記載のペプチド。１９．前記Ｒ１５がＡｌａである、請求項１７に記載のペプチド。２０．前記Ｒ９がＡｌａである、請求項１９に記載のペプチド。２１．前記Ｒ２５がＧｌｕである、請求項２０に記載のペプチド。２２．前記のＲ２６およびＲ２７がＬｅｕである、請求項２１に記載のペプチド。２３．Ｄ−Ａｒｇ２およびＡｌａ８−ＧＲＦ（１〜２９）を含む、請求項１６に記載のペプチド。２４．Ｄ−Ａｒｇ２およびＡｌａ８，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含む、請求項１６に記載のペプチド。２５．Ｄ−Ａｒｇ２およびＡｌａ８，９，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含む、請求項１６に記載のペプチド。２６．医薬学的に許容し得る担体と組み合わせて、下記配列を含有するペプチドおよび医薬学的に許容し得るその塩を有効量含有する医薬組成物：【配列があります】［但し配列中、Ｒ１はアミノ基欠損ＴｙｒまたはＡ−Ｒ１で表され、その際Ａは低級アルキル、低級シクロアルキル、ベンジルまたは低級アシルであり、Ｒ１はＣ′′ＭｅもしくはＮ′′Ｍｅ置換基を有するまたは有しないＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ、ｐＣｌ−Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、またはＤ −Ｈｉｓであり；Ｒ２はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−ＮＭＡまたはＤ−Ａｒｇであり；Ｒ３はＡｓｐまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ７はＴｈｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌ、またはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２またはＭｅであり；Ｒ８はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２またはＭｅであり；Ｒ９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、 β−Ｎａｌまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅで表され、その際ＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２またはＭｅであり；Ｒ１０はＡｌａ、ＴｙｒまたはＤ−Ｔｙｒであり；Ｒ１２およびＲ２１はＬｙｓ、ＡｒｇまたはＮ′′−Ｂ−Ｌｙｓで表され、その際Ｂは低級アルキルまたはシクロアルキルであり、Ｒ１２とＲ２１は同じであっても、異なっていてもよく；Ｒ１３はＩｌｅまたはＶａｌであり；Ｒ１４はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり；Ｒ１５はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、ＧｌｎまたはＡｉｂであり；Ｒ１７はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり；Ｒ１８はＴｙｒまたはＳｅｒであり；Ｒ２３はＬｅｕまたはＤ−Ｌｅｕであり；Ｒ２４はＨｉｓまたはＣｌｎであり；Ｒ２５はＧｌｕ、Ａｓｐ、Ｄ−ＧｌｕまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ２６はＩｌｅまたはＬｅｕであり；Ｒ２７はＭｅｔ、Ｄ−Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ＮｖａまたはＶａｌであり；Ｒ２８はＡｓｎ、Ｓｅｒまたは欠損（ｄｅｓＲ２８）であり；Ｒ２９はＡｒｇ、Ｄ−Ａｒｇまたは欠損（ｄｅｓＲ２９）である］２７．前記Ｒ８がＡｌａである、請求項２６に記載の組成物。２８．前記Ｒ１５がＡｌａである、請求項２７に記載の組成物。２９．前記Ｒ９がＡｌａである、請求項２９に記載の組成物。３０．前記Ｒ２がＤ−Ａｌａである、請求項２６〜２９のいずれかに記載の組成物。３１．前記Ｒ２５がＧｌｕである、請求項２９に記載の組成物。３２．前記のＲ２６およびＲ２７がそれぞれＬｅｕである、請求項２９に記載の組成物。３３．前記Ｒ２５がＧｌｕである、請求項３０に記載の組成物。３４．前記のＲ２６およびＲ２７がそれぞれＬｅｕである、請求項３０に記載の組成物。３５．Ａｌａ８−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項２６に記載の組成物。３６．Ａｌａ８，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチを含む、請求項２６に記載の組成物。３７．Ａｌａ８，９，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項２６に記載の組成物。３８．Ｄ−Ａｌａ２およびＡｌａ８−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項２６に記載の組成物。３９．Ｄ−Ａｌａ２およびＡｌａ８，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項２６に記載の組成物。４０．Ｄ−Ａｌａ２、Ｄ−Ａｌａ２およびＡｌａ８，９，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項２６に記載の組成物。４１．Ｄ−Ａｌａ２、Ａｌａ８，１５、Ｇｌｕ２５、Ｌｅｕ２６，〜２７−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項２６に記載の組成物。４２．前記Ｒ２がＤ−Ａｒｇである、請求項２６に記載の組成物。４３．前記Ｒ８がＡｌａである、請求項４２に記載の組成物。４４．前記Ｒ１５がＡｌａである、請求項２６に記載の組成物。４５．前記Ｒ１５がＡｌａである、請求項４２に記載の組成物。４６．前記Ｒ９がＡｌａである、請求項４５に記載の組成物。４７．前記Ｒ２５がＧｌｕである、請求項４６に記載の組成物。４８．前記のＲ２６よびＲ２７がそれぞれＬｅｕである、請求項４７に記載の組成物。４９．Ｄ−Ａｒｇ２およびＡｌａ８−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項４２に記載の組成物。５０．Ｄ−Ａｒｇ２およびＡｌａ８，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項４２に記載の組成物。５１．Ｄ−Ａｒｇ２およびＡｌａ８，９，１５−ＧＲＦ（１〜２９）を含有するペプチドを含む、請求項４２に記載の組成物。５２．請求項１に記載のペプチドの有効量を個体に投与することを含むような治療法を必要とする個体において、成長ホルモンの生産を増加させる方法。５３．前記個体が哺乳類である、請求項５２に記載の方法。５４．前記個体が人間である、請求項５２に記載の方法。５５．単位投薬量が体重１ｋｇ当たり５μｇ〜５μｇである、請求項５２〜５４のいずれかに記載の方法。５６．前記ペプチドが下垂体性小人症の治療に用いられる、請求項５２に記載の方法。５７．前記ペプチドが家畜の乳生産を増強するために用いられる、請求項５２に記載の方法。５８．前記ペプチドが家畜の成長促進のために用いられる、請求項５２に記載の方法。５９．前記ペプチドが動物において、脂質に対する蛋白質の比率を上げるために用いられる、請求項５２に記載の方法。６０．前記家畜が牛または豚である、請求項５８〜６０のいずれかに記載の方法。６１．請求項１６に記載のペプチドの効果的な量を個体に投与することを含むような治療法を必要とする個体において、成長ホルモンの生産を減少させる方法。６２．前記個体が人間である、請求項６１に記載の方法。６３．単位投薬量が体重１ｋｇ当たり５μｇ〜５μｇである、請求項６１または６２に記載の方法。６４．前記ペプチドが先端巨大症の治療に用いられる、請求項６２〜６４のいずれかに記載の方法。