JPH08509607A

JPH08509607A - ヒトｎ−メチル−ｄ−アスパラギン酸受容体サブユニット、これをコードする核酸およびその用途

Info

Publication number: JPH08509607A
Application number: JP6523578A
Authority: JP
Inventors: ピー．ダゲット，ロリー; ビー．エリス，スチーブン; ワングリアウ，チェン; − チュンル，チン
Original assignee: ザソールクインスチチュートバイオテクノロジー／インダストリアルアソシエイツ，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-04-20
Filing date: 1994-04-20
Publication date: 1996-10-15
Also published as: GB2286188B; US6956102B2; DE69431432T2; US6469142B1; WO1994024284A1; US6825322B2; US6376660B1; US20020161215A1; EP0696320A1; US6521413B1; CA2159106A1; US6033865A; US6111091A; US5849895A; ATE224952T1; AU6817594A; US6864358B2; EP0696320B1; GB2286188A; CA2159106C

Abstract

(57)【要約】本発明において、ヒトＮＭＤＡ受容体蛋白サブユニットをコードする核酸、およびこれにコードされる蛋白が提供される。本発明のＮＭＤＡ受容体サブユニットは、陽イオン選択性チャネルを有しグルタミン酸とＮＭＤＡに結合する、ＮＭＤＡ受容体の成分よりなる。本発明の１つの面において、核酸はヒトＮＭＤＡ受容体のＮＭＤＡＲ１およびＮＭＤＡＲ２サブユニットをコードする。好適な実施態様において本発明の核酸は、ヒトＮＭＤＡ受容体のＮＭＤＡＲ１、ＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、ＮＭＤＡＲ２Ｃ、およびＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニットをコードする。これらの核酸はＮＭＤＡ受容体蛋白サブユニットの産生に有用である以外に、プローブとしても有用であり、従って当業者は不要な実験をすることなく関連するヒト受容体サブユニットを同定し単離することが可能である。本発明では、複数の１つの型のＮＭＤＡ受容体サブユニット蛋白（ホモマー）、または２つまたはそれ以上の異なる型のサブユニット蛋白の組合せ（ヘテロマー）から、機能性グルタミン酸受容体を組み立てることができる。本発明は、新規のＮＭＤＡ受容体蛋白サブユニットを開示する以外にまた、このような受容体の機能に影響を与える化合物（例えば、グルタミン酸受容体機能のアゴニスト、アンタゴニスト、およびモジュレーター）を同定し性状解析するための、このような受容体サブユニットの使用方法を包含する。本発明はまた、未知の蛋白がＮＭＤＡ受容体サブユニットとして機能するか否かを測定する方法も包含する。

Description

【発明の詳細な説明】ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体サブユニット、これをコードする核酸およびその用途本発明は、核酸とそれによりコードされる受容体蛋白に関する。本発明の核酸は、新規のヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットをコードする。本発明はまた、そのような受容体サブユニットの作成方法、およびそのような受容体の機能に影響を与える化合物（例えば、ＮＭＤＡ受容体のアゴニストやアンタゴニスト）を同定し性状解析するための測定法における、受容体蛋白の使用法に関する。発明の背景アミノ酸のＬ−グルタミン酸は、哺乳動物の中枢神経系の主要な興奮性神経伝達物質である。解剖学的、生化学的および電気生理学的分析は、グルタミン酸産生系は、広範囲のニューロン作用過程（例えば、急速シナプス伝達、神経伝達物質放出の制御、長期増強、学習および記憶、成長性シナプス可塑性、低酸素性虚血傷害およびニューロン細胞の死、てんかん様発作、およびいくつかの神経変性障害の病変性）に関与していることを示唆している。一般的には、モナガン（Mo naghan）ら、Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.,29：365-402（1980）を参照。この広範囲の機能（特に学習、神経毒性および神経病理に関する機能）のために、近年グルタミン酸の作用機構を記載し規定しようという研究が始まった。現在グルタミン酸受容体の分類の概要は、薬理学的基準に基づいている。グルタミン酸は、２つの主要な受容体（イオノトロピック（ionotropic）受容体とメタボトロピック（metabotropic）受容体）に分類されている受容体を介してその作用を媒介することが認められている。イオノトロピックグルタミン酸受容体は完全な陽イオン特異的、リガンドゲート（ligand-gated）イオンチャネルを含有し、メタボトロピックグルタミン酸受容体は、細胞内第二メッセンジャー系の活性化を介して細胞外シグナルを変換するＧ蛋白結合受容体である。イオノトロピック受容体は、受容体の薬理学的および機能的性質に基づきさらに少なくとも２つの範疇に分類されている。その２つの主要な型のイオノトロピック受容体は、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体とカイニン酸（ＫＡ）／α −アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−イソキサゾール−４−プロピオン酸（ＡＭＰＡ）（以前はキスカル酸、すなわちＱＵＩＳと呼ばれていた）受容体である。メタボトロピック受容体はイオノトロピックグルタミン酸受容体が結合するリガンドと同じリガンドのいくつかに結合するが、メタボトロピック受容体はＧＴＰ−結合蛋白および第二メッセンジャー（例えば、サイクリックＡＭＰ、サイクリックＧＭＰ、ジアシルグリセロール、イノシトール１，４，５−トリホスフェートおよびカルシウム）を介してシナプスの生理機能を変更させる［グンデルセン（Gundersen）ら、Proc.R.Soc.LondonDer．221：127（1984）；スラデツェック（Sladeczek）ら、Nature 317：717（1985）；ニコレッティ（Nicoletti）ら、J.Neurosci．６：1905（1986）；スギヤマ（Sugiyama）ら、Nature325：531 （1987）］。グルタミン酸受容体の電気生理学的および薬理学的性質は、受容体供給源として動物組織や細胞株、および組換え技術で産生した非ヒト受容体を用いて研究されている。ヒトの治療薬開発へのそのような研究の意義は、ヒトでない受容体サブユニットのみしか入手できないことにより限定されている。さらに、グルタミン酸受容体の特性や構造が分子レベルで研究され出したのはつい最近である。しかしこのような研究の大部分は、ヒト以外の種で行われている。グルタミン酸受容体の生理学的および病理学的重要性の可能性により（例えば、薬剤スクリーニング測定法のために）、グルタミン酸受容体の種々のサブタイプの代表的メンバーをコードするヒトの配列（すなわち、ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白）が利用できることが好ましい。そのようなヒトの配列が入手できれば、ヒトでの受容体の分布の研究、特定の受容体の修飾と種々の疾患の発生の関係の研究も可能になるであろう。発明の簡単な説明本発明は、ＮＭＤＡ受容体蛋白サブユニットをコードする新規の核酸、およびこれにコードされる蛋白を開示する。具体的な実施態様において、新規の核酸はヒトＮＭＤＡ受容体のＮＭＤＡＲ１およびＮＭＤＡＲ２サブユニットをコードする。さらに詳しくは本発明の核酸は、ＮＭＤＡ活性化陽イオン選択性チャネルの形成に寄与するＮＭＤＡＲ１、ＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、ＮＭＤＡＲ２Ｃ、およびＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニットをコードする。これらの核酸はＮＭＤＡ受容体サブユニット蛋白の産生に有用である以外に、プローブとしても有用であり、従って当業者は不要な実験をすることなく、関連する受容体サブユニットをコードする核酸を同定し単離することが可能である。本発明において、１つの型の多数のＮＭＤＡ受容体サブユニット蛋白（ホモマー）、または異なる型のサブユニット蛋白の組合せ（ヘテロマー）から、機能性グルタミン酸受容体を組み立てることができる。本発明は、新規のＮＭＤＡ受容体蛋白サブユニットを開示する以外に、このような受容体に影響を与える化合物（例えば、グルタミン酸受容体機能のアゴニスト、アンタゴニスト、およびモジュレーター（活性調節因子））を同定し性状解析するための、このような受容体の使用方法を包含する。また本発明は、公知の蛋白がＮＭＤＡ受容体サブユニットとして機能するか否かを測定する方法を包含する。図面の簡単な説明図１は、各クローンの部分制限地図とともに、本発明の種々のヒトＮＭＤＡＲ１クローンの略図を示す。クローンは配列され、クローンＮＭＤＡ１０と比較したＤＮＡの差異（すなわち、欠失や挿入）が示されている。翻訳開始部位と停止部位は、それぞれ「Ｖ」と「＊」で示してある。挿入は逆三角形で示し、欠失は四角の中のスペースで示してある。挿入や欠失部の上の数字は、ＮＭＤＡ１０に比較して挿入または欠失されたヌクレオチドの数を示す。図２は、各ＤＮＡの部分制限地図とともに、本発明の全長ヒトＮＭＤＡＲ１サブユニットのサブタイプの略図を示す。全長ＤＮＡは、図１に示すクローンの適当な部分の結合により作成される。特定のクローンに対応するヌクレオチド配列よりなる各全長ｃＤＮＡの領域は、黒四角、斜線、斜交平行線をつけた四角または白い四角で区別してある。図３は、作成体ＮＭＤＡＲ１Ａの全ヌクレオチド配列（配列番号１を参照）を、ＮＭＤＡＲ１サブユニット転写体のスプライスの変更が簡単に比較できるように、以下の情報とともに示してある；小文字は配列番号１に示すＮＭＤＡＲ１スプライス変種の５’非翻訳配列と３’非翻訳配列を示す（蛋白のスプライス変種のあるものではこの３’非翻訳配列は実際はコーディング配列である）；大文字はコーディング配列を示す；翻訳開始コドンは「ＳＴＡＲＴ」という文字で記してあり、異なるスプライス変種中で使用される３つの異なる翻訳停止コドン（ＴＧＡ）は小さい四角で示してある；全長変種作成体を調製するのに使用される重要な制限酵素部位は、部位の上に名前を示してある；いくつかの変種に存在する６３塩基対（配列番号３を参照）の挿入の位置は「６３塩基対挿入」と記してある；いくつかの変種で欠失しているヌクレオチド配列は四角で囲ってあり、「２０４塩基対欠失」、「３６３塩基対欠失」、および「１０８７塩基対欠失」と記してある。図４は、各クローンの部分制限地図とともに、本発明の種々のヒトＮＭＤＡＲ２Ｃクローンの略図を示す。図１と同様にクローンは配列され、クローンＮＭＤＡ２６と比較したＤＮＡの差異が示してある。図５は、各ＤＮＡの部分制限地図とともに、本発明の全長ヒトＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニットのサブタイプの略図を示す。全長ｃＤＮＡは、図４に示すクローンの適当な部分の結合により作成される。特定のクローンに対応するヌクレオチド配列よりなる各全長ｃＤＮＡの領域は、黒四角、斜線または斜交平行線をつけた四角または白い四角で区別してある。図６は、ＣＭＶプロモーターをベースにしたベクターであるｐＣＭＶ−Ｔ７− ２とｐＣＭＶ−Ｔ７−３の制限地図を示す。発明の詳細な説明本発明において、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットをコードする単離された核酸が提供される。本発明の１つの面において、ＮＭＤＡＲ１サブタイプのＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードする核酸が提供される。別の面において、ＮＭＤＡＲ２サブタイプのＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードする核酸が提供される。さらなる面において、このような核酸を含有する真核細胞と、このような核酸を発現する真核細胞が提供される。また前述の核酸によりコードされる蛋白、および該蛋白に対して産生される抗体が提供される。本発明の別の面において、上記核酸の少なくともＮＭＤＡ受容体サブユニット選択性部分よりなる核酸プローブが提供される。本明細書において、「Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニット」とは、ＮＭＤＡへの暴露により活性化される電位感受性陽イオン選択性チャネルの形成に参加し、少なくとも１つのトランスメンブレンドメイン、大きなＮ−末端細胞外ドメインなどを有する、組換えにより産生された（すなわち、単離されたかまたは実質的に純粋な）蛋白に関し、一次転写体の別のスプライスにより産生されるｍＲＮＡにコードされるその変種、および上記性質の１つまたはそれ以上を保持するその断片を含む。本明細書および請求の範囲において、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチドまたは蛋白の修飾物質の「組換えで産生される」、「単離される」、「実質的に純粋」という用語は、このように呼ばれるＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチドまたは蛋白はヒトの手によりそのような形で産生され、従ってその本来のインビボの細胞環境からは分離されていることを示す。このヒトの介入による結果、本発明の組換えＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチドおよび蛋白は、天然に存在するＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチドまたは蛋白では役に立たないような方法（例えば、選択的薬剤または化合物の同定）において有用である。本発明の受容体蛋白の修飾物質として使用される時、「機能性」とは、蛋白よりなる受容体にＮＭＤＡ（ＮＭＤＡ様）リガンドが結合することにより、受容体の「イオンチャネル」が開くことを意味する。これは陽イオン（特にＣａ²⁺、およびＮａ⁺、Ｋ⁺）が膜を通過して移動することを可能にする。言い方を変えると、「機能性」とは、受容体蛋白のアゴニスト活性化の結果としてシグナルが産生されることを意味する。本明細書においてスプライス変種とは、ゲノムＤＮＡの一次転写体の差別的処理により産生され、その結果２つ以上の型のｍＲＮＡの産生に至る、変種ＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードする核酸を意味する。差別的に処理された一次転写体から得られるｃＤＮＡは、完全なアミノ酸本体の領域と、異なるアミノ酸配列を有する領域を有する、ＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするであろう。すなわち同じゲノム配列から、多数の関連するｍＲＮＡや蛋白が得られる。得られるｍＲＮＡや蛋白はいずれも本明細書では「スプライス変種」と呼ぶ。さらに、上記のＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするが、遺伝子コードの縮重のため規定されたハイブリダイゼーション条件下で、開示されたＤＮＡと必ずしもハイブリダイズしないＤＮＡも、本発明の範囲内であると考えられる。本明細書に記載の方法または当業者に公知の方法により評価すると、そのようなサブユニットはまた、１つまたはそれ以上の追加の同じまたは異なる型のＮＭＤＡ受容体サブユニットとともに、機能性受容体の生成に寄与する（サブユニットがＮＭＤＡＲ１サブユニットの時は、異なる型の追加のサブユニットが存在しない場合もある）。典型的には、ＮＭＤＡ受容体サブユニットが代替スプライスにより得られるＲＮＡにコード（すなわち、スプライス変種）されないなら、ＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡとこれによりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットは、本明細書に記載の少なくとも１つのＮＭＤＡ受容体サブユニットＤＮＡ（およびこれによりコードされる蛋白）と実質的な配列相同性を有する。スプライス変種をコードするＤＮＡまたはＲＮＡは、本明細書で提供されるＤＮＡまたはＲＮＡとの配列全体の相同性は９０％未満であるが、本明細書中のＤＮＡ断片とほとんど１００％の相同性を有する領域を含有し、開始コドンおよび停止コドンを含むオープンリーディングフレームをコードし、機能性ＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードすることを理解すべきである。本発明において「ＮＭＤＡＲ１サブタイプのＮＭＤＡ受容体サブユニット」とは、予想されるアミノ酸配列の疎水性解析により、４つまたはそれ以上のトランスメンブレンドメインと推定される部分を含有し、その前に大きな細胞外Ｎ−末端ドメインがあると考えられる蛋白を意味する。このアミノ酸配列は典型的には、Ｃａ²⁺／カルモジュリン依存性蛋白キナーゼII型と蛋白キナーゼＣ［例えば、ケンプ（Kemp）ら、（1990）Trends in Biological Sciences 第15巻：342-346 ；キシモト（Kishimoto）ら、（1985）J.Biol.Chem．第260巻：12492-12499；ウィットモア（Whittemore）ら、（1993）Nature364：70-73を参照］のリン酸化可能な部位を含有する（これらの蛋白キナーゼは長期増強の誘導と維持において決定的に重要な役割を果たすと報告されている）。この推定のＴＭIIセグメント（すなわち、第２トランスメンブレンドメイン）は、典型的には細胞外のグルタミン酸残基と、細胞質側の一連のグルタミン酸残基が隣接している。このセグメントは、ＮＭＤＡＲチャネルの高Ｃａ²⁺透過性に関与していると考えられるアスパラギン酸残基を含有する。ＮＭＤＡＲの性質に関する要約は、ベン−アリ（Ben-Ari）ら、TINS 15：333-339（1992）、特にp.3 34を参照。ヒトＮＭＤＡＲ１サブユニットをコードするＤＮＡ配列の例は、配列番号２、２Ｅ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ、２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ、２Ｍ、２Ｎ、または２Ｐに記載されるものと実質的に同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチドにより示される。好適な配列は、配列番号２、２Ｅ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ、または２Ｐに示されるものと実質的に同じアミノ酸配列をコードする別のＤＮＡの例は、ヒトＮＭＤＡＲ１サブユニットをコードし、高緊縮性条件下で配列番号１、１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ、１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、１Ｊ、１Ｋ、１Ｌ、１Ｍ、１Ｎ、または１Ｐの任意の１つの実質的に配列全体、またはその大部分（すなわち、典型的には少なくともその２５−３０ヌクレオチド）にハイブリダイズするヌクレオチドであることが特徴である。好ましくはＤＮＡの例は、高緊縮性条件下で、配列番号１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、または１Ｐの任意の１つの実質的に配列全体、またはそれらの大部分とハイブリダイズする。本明細書において、ハイブリダイゼーションの緊縮性とは、ポリ核酸ハイブリッドが安定である条件を意味する。当業者に公知なように、ハイブリッドの安定性はハイブリッドの融点（Ｔｍ）に反映される。Ｔｍは式： 81.5℃−16.6（log10［Ｎａ⁺］）＋0.41（％Ｇ＋Ｃ）−600／１（式中、１はヌクレオチド中のハイブリッドの長さである）により近似的に表される。配列の相同性が１％減少する毎に、Ｔｍは約１−１．５℃低下する。一般にハイブリッドの安定性は、ナトリウムイオン濃度と温度の関数である。典型的には、ハイブリダイゼーション反応を低緊縮性条件下で行い、次に種々の（ただし、より高い緊縮性の）条件下で洗浄する。ハイブリダイゼーション緊縮性は、このような洗浄条件に関する。すなわち、本明細書において、（１）断片のハイブリダイゼーションに関して、高緊縮性条件とは、６５℃で０．０１８ＭのＮａＣｌ中で安定なハイブリッドを形成する核酸配列のみのハイブリダイゼーションを可能にする条件を意味する（すなわち、本明細書で企図されるように、もしハイブリッドが６５℃で０．０１８ＭのＮａＣｌ中で安定でない場合、高緊縮性条件下で安定ではないであろう）。高緊縮性条件は、例えば５０％ホルムアミド、５×デンハルツ（Denhart'ｓ）溶液、５×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で４２℃でハイブリダイゼーションし、次に６５℃で０．１ＸＳＳＰＥによる洗浄、そして０．１％ＳＤＳによる洗浄により提供される。（２）断片のハイブリダイゼーションに関して、中緊縮性条件とは、４２℃で５０％ホルムアミド、５×デンハルツ（Denhart'ｓ）溶液、５×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中でハイブリダイゼーションし、次に６５℃で０．２×ＳＳＰＥによる洗浄、そして０．２％ＳＤＳによる洗浄と同等の条件を意味する。（３）断片のハイブリダイゼーションに関して、低緊縮性条件とは、４２℃で１０％ホルムアルミド、５×デンハルツ溶液、６×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中でハイブリダイゼーションし、次に５０℃で１×ＳＳＰＥによる洗浄、そして０．２％ＳＤＳによる洗浄と同等の条件を意味する。そして、（４）オリゴヌクレオチド（すなわち、長さが約３０ヌクレオチド以下の合成ＤＮＡ）に関して、高緊縮性条件とは、４２℃で１０％ホルムアルミド、５×デンハルツ溶液、６×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中でハイブリダイゼーションし、次に５０℃で１ＸＳＳＰＥによる洗浄、そして０．２％ＳＤＳによる洗浄に等しい条件を意味する。種々の緩衝液や温度を用いてこれらの条件を再現することができ、これらは必ずしも正確である必要はないことを理解すべきである。デンハルツ溶液およびＳＳＰＥ（例えば、サムブルーク、フリッチ、およびマニアチス（Sambrook，Fritsch，and Maniatis）、モレキュラークローニング、実験室マニュアル（Molecular Cloning、A Laboratory Manual）、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、1989）は、他の適当なハイブリダイゼーション緩衝液と同様に、当業者に公知である。例えば、ＳＳＰＥはｐＨ7.4のリン酸緩衝化された０．１８ＭのＮａＣｌである。ＳＳＰＥは例えば、１７５．３ｇのＮａＣｌ、２７．６ｇのＮａＨ₂ＰＯ₄および７．４ｇのＥＤＴＡを８００ｍｌの水に溶解しｐＨを７．４に調整して、次に１リットルになるように水を加えて２０×保存溶液として調製することができる。デンハルツ溶液（デンハルト（Denhart）（1966 ）Biochem.Biophys.Res.Commun．23：641を参照）は、例えば５ｇのFicoll（タイプ４００、ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー社（Pharmacia LKB Biotec hnology、INC.）、ピスカタウェイ（Piscataway）、ニュージャージー州）、５ｇのポリビニルピロリドン、５ｇのウシ血清アルブミン（第５画分；シグマ（Si gma）、セントルイス、ミズーリ州）、そして水を５００mlになるように加え、濾過して粒状物質を除去することにより、５０×保存溶液として調製することができる。特に好適な配列は、配列番号１、１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、１Ｊ、１Ｋ、１Ｌ、１Ｍ、１Ｎ、または１Ｐの任意の１つと実質的に同じヌクレオチド配列を有するものであり、配列番号１、１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、または１Ｐ中のコーディング配列と実質的に同じ配列を有するものが特に好ましい。本明細書において、「実質的な配列相同性」とは、少なくとも約９０％の相同性を有するヌクレオチド配列、そして典型的には９５％以上のアミノ酸の同一性（ＮＭＤＡＲ１サブユニットの場合は９９％以上のアミノ酸の同一性）を有するヌクレオチド配列を意味する。しかし、スプライス変種であること、または保存的アミノ酸置換（または縮重コドンの置換）により修飾されているため、前記レベルより低い相同性を有する蛋白（およびこのような蛋白をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡ）は、本発明の範囲内にあることを理解すべきである。本明細書において、「実質的に同じ」とは、本明細書に記載の実際の配列とはわずかに異なるかまたは重大でない配列の変化を有する、ＤＮＡのヌクレオチド配列、ＲＮＡのリボヌクレオチド配列、または蛋白のアミノ酸配列を意味する。「実質的に同じ」分子種は、開示された配列と同等であると考えられ、従って本発明の請求の範囲の範囲に包含されると考えられる。この点で「わずかに異なるかまたは重大でない配列の変化」は、開示され、特許請求のされているＤＮＡ、ＲＮＡ、または蛋白と実質的に同じ配列は、開示され特許請求のされているヒト由来の配列と機能的に同等であることを意味する。機能的に同等の配列は、実質的に同じ方法で機能して、ヒト由来の核酸および本明細書に開示され特許請求されているアミノ酸組成物と実質的に同じ組成物を産生する。特に機能的に同じＤＮＡは、本明細書に開示されたものと同じであるか、または保存性のアミノ酸変化（例えば非極性残基を別の非極性残基で置換、または荷電残基を類似の荷電残基で置換）を有するものと実質的に同じヒト由来の蛋白をコードする。これらの変化には、当業者に認識される、蛋白の３次元構造を実質的に変化させないものが含まれる。本明細書において、「ＮＭＤＡＲ２サブタイプのＮＭＤＡ受容体サブユニット」とは、アミノ末端領域に推定される大きい細胞外ドメインを有する蛋白を意味する。別の場合には、ＮＭＤＡＲ２サブユニットの推測される構造は、ＮＭＤＡＲ１サブユニット構造と同じ一般的特徴を示す。顕著な典型的例外は、ＮＭＤＡＲ１サブユニットの推定のＴＭIIセグメント中に一般に存在する陰性に荷電したグルタミン酸残基は、ＮＭＤＡＲ２のＴＭIIセグメントには一般には存在しないことである。そのかわり、ＮＭＤＡＲ２サブユニットは、ＴＭIIに陽性に荷電したリジン残基を含有する。ＮＭＤＡＲ１サブユニットと異なり、ＮＭＤＡＲ２サブユニットは一般にホモマー性ＮＭＤＡ受容体を形成しない。さらにＮＭＤＡＲ１とＮＭＤＡＲ２サブユニットのアミノ酸配列の同一性は、一般に５０％未満であり、典型的には３０％未満の同一性が観察される。本発明に企図されるＮＭＤＡＲ２サブユニットは、ＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、ＮＭＤＡＲ２Ｃ、およびＮＭＤＡＲ２Ｄ型のサブユニットを含む。ヒトＮＭＤＡＲ２ＡサブユニットをコードするＤＮＡ配列またはその部分の例は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列、またはクローンＮＭＤＡ５７（整理番号７５４４２でアメリカンタイプカルチャーコレクションに寄託されている）のＮＭＤＡＲ２Ａコーディング部分によりコードされるアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチドである。寄託されたクローンは、「特許化のための微生物の寄託の国際認識に関するブダペスト条約」（the Budapest Treaty on the International Recognition of Deposits of Microorganisms for Purposes of Patent Procedure）の条件と、この条約の名のもとに公布された規則に従い、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（１２３０１パークローンドライブ（ＰａｒｋｌａｗｎＤｒｉｖｅ）、ロックヴィル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）、メリーランド州、アメリカ合衆国２０８５２）に寄託されている。この条約と規則の条件下で、およびさもなくばアメリカ合衆国の特許法や規則に従い受領する法的資格のある工業所有権事務所および他の個人、または本出願または本出願の優先権を主張する出願が提出されたかまたはこのような出願に対して何らかの特許権が与えられた国または国際組織は、寄託された物質の試料を入手することができる。特にこれに基づきまたはこの優先権を主張する出願またはこれに関する出願を取り込んでいる出願に基づき米国特許の与えられた時点で、本寄託物質の入手に関するすべての規制は永久に取り消されるであろう。あるいは、ヒトＮＭＤＡＲ２ＡサブユニットをコードするＤＮＡの例は、高緊縮性条件下で配列番号１０の全配列またはその大部分（すなわち、典型的にはその少なくとも２５−３０ヌクレオチド）、またはクローンＮＭＤＡ５７（ＡＴＣＣ整理番号７５４４２）のＮＭＤＡＲ２Ａコーディング部分と、ハイブリダイズするヌクレオチド配列として特徴付けられる。ヒトＮＭＤＡＲ２Ａサブユニットをコードする特に好適な配列は、配列番号１０のコーディング配列と実質的に同じヌクレオチド配列、またはクローンＮＭＤＡ５７のＮＭＤＡＲ２Ａコーディング部分のコーディング配列と実質的に同じ配列を有するものである。ヒトＮＭＤＡＲ２ＢサブユニットをコードするＤＮＡ配列の例は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチドにより示される。あるいはＤＮＡの例は、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｂサブユニットをコードし、配列番号１３の実質的に全ての配列またはその大部分（すなわち、典型的にはその少なくとも２５−３０ヌクレオチド）に高緊縮性条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列で示される。特に好適なＮＭＤＡＲ２Ｂをコードする配列は、配列番号１３のコーディング配列と実質的に同じヌクレオチド配列を有するものである。ヒトＮＭＤＡＲ２ＣサブユニットをコードするＤＮＡ配列の例は、配列番号６、６Ｅ、６Ｆ、６Ｇ、６Ｈ、または６１に記載のアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するヌクレオチドにより示される。あるいはＤＮＡの例は、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニットをコードし、高緊縮性条件下で配列番号５、５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、５Ｇ、５Ｈ、または５Ｉの任意の１つの実質的に全配列、またはそれらの大部分（すなわち、典型的には少なくとも２５−３０ヌクレオチド）にハイブリダイズするヌクレオチドとして特徴付けられる。好ましくはＤＮＡの例は、高緊縮性条件下で、配列番号５、５Ｅ、５Ｆ、または５Ｇの任意の１つの実質的に全配列、またはそれらの大部分とハイブリダイズする。特に好適なＮＭＤＡＲ２Ｃコーディング配列は、配列番号５、５Ｅ、５Ｆ、５Ｇ、５Ｈ、または５Ｉの任意の１つのコーディング配列と実質的に同じヌクレオチド配列を有する配列であり、配列番号５、５Ｅ、５Ｆ、または５Ｇのコーディング配列と実質的に同じヌクレオチド配列を有する配列が最も好ましい。ヒトＮＭＤＡＲ２ＤサブユニットをコードするＤＮＡ配列の例は、配列番号１６に記載のアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチドにより示される。あるいはＤＮＡの例は、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニットをコードし、配列番号１５の実質的に全ての配列またはその大部分（すなわち、典型的にはその少なくとも２５−３０ヌクレオチド）に高緊縮性条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列として特徴付けられる。特に好適なＮＭＤＡＲ２Ｄをコードする配列は、配列番号１５のコーディング配列と実質的に同じヌクレオチド配列を有する配列である。ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡは、本明細書に開示したＤＮＡ（配列番号１、１Ａ−１Ｐ、５、５Ａ−５Ｉ、１０、１３、または１５の任意のものより得られるヌクレオチドを含む）により、適当なハイブリダイゼーション条件下で適当なヒトｃＤＮＡまたはヒトゲノムライブラリーをスクリーニングすることにより単離される。適当なライブラリーは、ニューロン組織試料（例えば、海馬や小脳組織、細胞株など）から調製される。例えばライブラリーは、その実質的に全てのサブユニットコーディング配列を含むＤＮＡの一部を用いてスクリーニングされる。あるいはライブラリーは適当なプローブでスクリーニングされる。本明細書においてプローブは、配列番号１、１Ａ−１Ｐ、５、５Ａ−５Ｉ、１０、１３、または１５に記載の任意の１４またはそれ以上の隣接する塩基と同じ少なくとも１４個の隣接する塩基（またはその相補物）を含む、ヌクレオチドの配列を有する１本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡである。プローブを作成するのに好適な領域は、５’および／または３’コーディング配列、トランスメンブレンドメインをコードすると予測される配列、細胞質ループをコードすると予測される配列、シグナル配列、ＮＭＤＡ結合部位などがある。全長ｃＤＮＡクローンまたはその断片はプローブとして使用され、好ましくは容易に検出するために適当な標識物で標識される。断片がプローブとして使用される時、ＤＮＡ配列は好ましくはＤＮＡのカルボキシ末端をコードする部分であり、最も好ましくはＤＮＡ配列の予測されるトランスメンブレンドメインをコードする部分を含む（ドメインは、例えばカイトとドーリトル（Kyte and Doolitt le）（1982）、J.Mol.Biol．第157巻：105）の方法を用いて、推定されるアミノ酸配列のハイドロパシー解析に基づき予測される。これらプローブは例えば、グルタミン酸受容体ファミリーの追加メンバーの同定と単離のために使用される。本発明の配列の特定の応用として、本発明のヌクレオチド配列をプローブとして使用して遺伝スクリーニングを実施することができる。すなわち、任意の内因性グルタミン酸受容体に異常が存在するか否かを測定するために、グルタミン酸受容体の任意の１つまたはそれ以上の変化／修飾が関与していることが疑われる神経病理的症状を有する患者の核酸試料を、適当なプローブで測定することができる。同様に、グルタミン酸受容体の機能不全に関連する疾患の家族歴がある患者をスクリーニングして、このような疾患に罹りやすい体質であるか否かを決定することができる。本発明の別の実施態様において、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体蛋白サブユニットをコードするＤＮＡの同定方法が提供され、この方法は、ヒトＤＮＡを上記の核酸プローブと高緊縮性条件下で接触させ、そして該プローブにハイブリダイズするＤＮＡを同定することよりなる。ライブラリーのスクリーニング後、ハイブリダイゼーションシグナルを検出して陽性クローンを同定する。同定されたクローンを制限酵素マッピングおよび／またはＤＮＡ配列解析により性状解析し、次にこれらが完全なＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡを含有するか否か（すなわち、これらが翻訳開始コドンおよび停止コドンを含有するか否か）を確認するために前述の配列と比較することにより試験する。選択された配列が不完全な場合は、これらを用いて同じかまたは異なるライブラリーを再スクリーニングして重複するクローンを得ることができる。もしライブラリーがゲノム性の場合は、重複クローンはエクソンとイントロンを含有する。もしライブラリーがｃＤＮＡライブラリーの場合は、重複クローンはオープンリーディングフレームを含有するであろう。いずれの場合も完全なクローンは、本明細書で提供されるＤＮＡおよびコードされた蛋白と比較して同定される。種々のヒトＮＭＤＡ受容体サブユニット（例えば、ＮＭＤＡＲ１、ＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、ＮＭＤＡＲ２Ｃ、ＮＭＤＡＲ２Ｄ）をコードする、相補的なＤＮＡクローンが単離されている。各タイプのサブユニットは、異なる遺伝子にコードされているようである。本明細書に記載されるＤＮＡクローンは、各タイプのサブユニットをコードするゲノムクローンを単離し、異なる神経組織から調製されたライブラリーをスクリーニングすることにより、スプライス変種を単離するために使用できる。当業者に公知の核酸増幅法を使用して、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットのスプライス変種をコードするＤＮＡを見つけることができる。これは、ヒトＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを増幅するために、互いに異なる配列を取り囲むＤＮＡ配列に基づくオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いることにより達成される。増幅生成物のサイズと配列の決定により、スプライス変種の存在が明らかになる。さらにハイブリダイゼーションによるヒトゲノムＤＮＡ配列の単離により、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードする転写体の異なるスプライス変種に対応する、イントロンにより分離された多数のエクソンを含有するＤＮＡが得られる。必ずしもすべてのサブユニット（およびその変種）がすべての神経組織または脳のすべての部分に発現されているのではないことは、見いだされている。すなわち特定のサブユニットまたはそのスプライス変種をコードするｃＤＮＡを単離するためには、異なるニューロンまたは神経組織から調製されるライブラリーをスクリーニングすることが好ましい。各サブユニットをコードするＤＮＡを得るためにライブラリーを調製するための核酸の供給源として使用される好適な組織には：ヒトＮＭＤＡ１をコードするＤＮＡを単離するための海馬；ＮＭＤＡＲ２をコードするＤＮＡを単離するための海馬、小脳および胎児脳などがある。サブユニットをコードするＤＮＡが一旦単離されると、特定のＮＭＤＡサブユニットサブタイプまたは変種をコードするｍＲＮＡを発現する組織を決定するために、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）保護測定法が実施される。この測定法は、全細胞性ＲＮＡの複雑な混合物中の１つのＲＮＡ種を検出し定量するための高感度の手段を与える。サブユニットＤＮＡは標識され、細胞性ＲＮＡとハイブリダイズされる。もし細胞性ＲＮＡ中に相補的なｍＲＮＡが存在する場合、ＤＮＡ −ＲＮＡハイブリッドが得られる。次にＲＮＡ試料をＲＮａｓｅで処理する（これは１本鎖ＲＮＡを分解する）。ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッドはＲＮａｓｅ分解から保護され、ゲル電気泳動やオートラジオグラフィーにより肉眼で見ることができる。特定のＮＭＤＡサブユニットをコードするｍＲＮＡを発現する組織を決定するために、ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーションを使用することができる。標識されたＤＮＡは異なる脳の領域のスライスとハイブリダイズして肉眼で見えるようになる。いくつかのヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットの発現の分布は、この受容体のラットでの分布とは異なる。例えばラットのＮＭＤＡＲ２ＣサブユニットをコードするＲＮＡはラットの小脳に多く存在するが、ラットの海馬にはあまり存在しない［例えば、モイアー（Moyer）ら、Science 256：1217-1221（1992）を参照］。しかし最終的にヒトの海馬ライブラリーから無数のヒトＮＭＤＡＲ２Ｃクローンが得られた。すなわちヒトとラットではいくつかの受容体サブユニットの分布が異なっているようである。前述のヌクレオチド配列はベクターに取り込んでさらに操作することができる。本明細書においてベクター（またはプラスミド）とは、異種ＤＮＡを細胞に取り込んでその発現または複製をさせるのに使用される、独立した成分である。このような担体（vehicle）の選択と使用は、当業者には公知である。発現ベクターとは、ＤＮＡ断片の発現を可能にする制御配列（例えばプロモーター領域）に機能的に結合したＤＮＡを発現することができるベクターを含む。すなわち発現ベクターとは、適当な宿主細胞内に取り込まれるとクローン化ＤＮＡを発現する、組換えＤＮＡまたはＲＮＡ作成体（例えば、プラスミド、ファージ、組換えウイルスまたは他のベクター）を意味する。適当な発現ベクターは当業者に公知であり、真核細胞および／または原核細胞中で複製されるもの、およびエピソームとしてとどまるか宿主細胞内に取り込まれるものも含まれる。真核生物の宿主細胞（特に哺乳動物）中での本発明のＮＭＤＡ受容体サブユニットの発現のために好適なプラスミドには、例えば、ｐＣＭＶ−Ｔ７−２、ｐＣＭＶ− Ｔ７−３（図６を参照）、ｐＭＭＴＶＴ７（＋）またはｐＭＭＴＶＴ７（−）（前述のように調製されたｐＭＡＭｎｅｏ（クロンテク（Clontek）、パロアルト（Palo Alto）、カリホルニア州）を修飾したもの）、ｐｃＤＮＡ１などのサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター含有ベクターがある。本明細書において、プロモーター領域とは、そこに機能的に結合したＤＮＡの転写を調節するＤＮＡのセグメントを意味する。プロモーター領域は、ＲＮＡポリメラーゼによる認識、結合および転写の開始に充分な特異的配列を含有する。このプロモーター領域の部分をプロモーターと呼ぶ。さらにこのプロモーター領域は、このＲＮＡポリメラーゼの認識、結合および転写開始を調節する配列を含む。これらの配列はｃｉｓ作用性であるか、またはｔｒａｎｓ活性化因子に対して応答する。制御の性質により、プロモーターは構成性であるかまたは制御されている。本発明の実施において使用されるプロモーターの例には、ＳＶ４０早期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）ステロイド誘導性プロモーター、モロニー（Moloney）マウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）プロモーターなどがある。本明細書において、「機能的に結合している」とは、ＤＮＡとヌクレオチドの制御性配列やエフェクター配列（例えばプロモーター、エンハンサー、転写および翻訳停止部位、および他のシグナル配列）との機能的関係を意味する。例えば、ＤＮＡとプロモーターの機能的結合は、ＤＮＡの転写はプロモーターを特異的に認識してこれに結合し、ＤＮＡを転写するＲＮＡポリメラーゼによりプロモーターから開始されるような、ＤＮＡとプロモーターの間の物理的および機能的結合を意味する。発現および／またはインビトロの転写を最適化するために、転写または翻訳のレベルで発現を妨害するかまたは低下させる、不適当な代替翻訳開始コドンまたは他の配列を除去するために、クローンの５’および／または３’非翻訳部分を除去、付加または変更することが必要なこともある。あるいはコンセンサスリボゾーム結合部位（例えば、コザック（Kozak）（1991）J.Biol．Chem ．266：19867-19870）を開始コドンの５’のすぐ近くに挿入して、発現を増強させることもできる。同様に、転写を増強するために、ＮＭＤＡサブユニットのコーディング配列の代わりに同じアミノ酸をコードする代替コドンを用いることができる（例えば、宿主細胞のコドンの選択性が採用され、Ｇ−Ｃの豊富なドメインを減少させるなど）。さらに両生類の卵母細胞中のＮＭＤＡ受容体サブユニットの発現増強の可能性のために、サブユニットコーディング配列を随時発現作成体中に取り込むことができる（ここではコーディング配列の５’末端と３’末端は、それぞれツメガエル（Xenopus）のβ−グロビン遺伝子の５’と３’の非翻訳配列に隣接している）。例えば、ＮＭＤＡ受容体サブユニットコーディング配列は、ｐＳＰ６４（プロメガ（Promega）、マジソン、ウィスコンシン州、より入手できる）の修飾型であるベクターｐＳＰ６４Ｔに取り組むことができる（クリーグとメルトン（Krieg and Melton）（1984）Nucleic Acids Research 12:70 57-7070を参照）。このコーディング配列は、ＳＰ６プロモーターの下流に位置するβ−グロビン遺伝子の５’末端と３’非翻訳配列の間に挿入される。次に得られるベクターから、インビトロの転写体を作成される。このような修飾の好ましい点（またはニーズ）は実験的に決定されている。本明細書において、発現とはポリ核酸がｍＲＮＡに転写され、ペプチド、ポリペプチドまたは蛋白に翻訳される過程を意味する。ポリ核酸がゲノムＤＮＡから得られる場合、適当な真核生物宿主細胞または微生物が選択されるなら、発現にはｍＲＮＡのスプライシングを含む。哺乳動物細胞のトランスフェクションに特に好適なベクターは、ＳＶ４０早期プロモーター、マウスｄｈｆr遺伝子、ＳＶ４０ポリアデニル化部位およびスプライシング部位、そして細菌中でベクターを維持するのに必要な配列を含有するｐＳＶ２ｄｈｆｒ発現ベクター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターをベースにしたベクター（例えば、ｐＣＭＶ−Ｔ７−２およびｐＣＭＶ−Ｔ７− ３（本明細書に記載））またはｐＣＤＮＡ１（インビトロゲン（Invitrogen）、サンジエゴ、カリホルニア州））、およびＭＭＴＶプロモーターをベースにしたベクター（例えば、ｐＭＭＴＶＴ７（＋）またはｐＭＭＴＶＴ７（−）（本明細書中に記載））である。ヒトＮＭＤＡＲ受容体サブユニットをコードする全長ＤＮＡは、ベクターｐｃＤＮＡ１、ｐＭＭＴＶＴ７（＋）、ｐＣＭＶ−Ｔ７−２およびｐＣＭＶ−Ｔ７− ３に挿入されている。ｐＣＭＶ−Ｔ７−２は、ＣＭＶプロモーター／エンハンサー、プロモーターのすぐ下流に存在するＳＶ４０スプライス／ドナー部位、スプライス部位の下流に位置するＴ７バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼプロモーター、その後にＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、そしてＴ７プロモーターとポリアデニル化シグナルの間にポリリンカーを有するｐＵＣ１９をベースにした哺乳動物細胞発現ベクターである。ＣＭＶプロモーターとＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの間にＮＭＤＡ受容体サブユニットを配置させると、この作成体によりトランスフェクションされた哺乳動物の宿主細胞中で外来ＤＮＡの構成的発現（constitutive expression）が与えられる。プラスミドｐＣＭＶ−Ｔ７−３は、ポリリンカー中の制限酵素部位が逆転している以外は、ｐＣＭＶ−Ｔ７−２と同じである。ベクターｐＭＭＴＶＴ７（＋）とｐＭＭＴＶＴ７（−）はベクターｐＭＡＭｎｅｏ（クロンテック（Clontech）、パロアルト（Palo Alto）、カリホルニア州）を修飾することにより調製された。ｐＭＡＭｎｅｏは、デキサメタゾン誘導体性マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）−ＬＴＲプロモーターに結合した（この後にＳＶ４０スプライス部位とポリアデニル化部位が続く）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の長い末端反復配列（ＬＴＲ）を含有する、哺乳動物の発現ベクターである。ｐＭＡＭｎｅｏはまた、大腸菌の増殖のためのβ−ラクタマーゼ遺伝子（アンピシリン耐性を与える遺伝子をコードする）と同様に、形質転換体の選択のための大腸菌ｎｅｏ遺伝子を含有する。ベクターｐＭＭＴＶＴ７（＋）は、ｐＭＡＭｎｅｏからｎｅｏ遺伝子を除去しｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ストラタジーン（Stratagene）、ラホイア（La Jolla）、カリホルニア州））からのマルチプルクローニング部位とＴ７およびＴ３プロモーターを挿入することにより作成される。従ってｐＭＭＴＶＴ７（＋）はＭＭＴＶ−ＬＴＲプロモーターに結合したＲＳＶ−ＬＴＲエンハンサー、ＭＭＴＶ−ＬＴＲプロモーターの下流に位置するＴ７バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼプロモーター、Ｔ７プロモーターの下流に位置するポリリンカー、Ｔ７プロモーターの下流に位置するＴ３バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼプロモーター、そしてＴ３プロモーターの下流に位置するＳＶ４０スプライシング部位とポリアデニル化部位を含有する。ｐＭＡＭｎｅｏからのβ−ラクタマーゼ遺伝子（アンピシリン耐性を与える蛋白をコードする）はｐＭＭＴＶＴ７（＋）中で保持されるが、ｐＭＡＭｎｅｏ中の配向に対して配向は逆転している。ベクターｐＭＭＴＶＴ７（−）はｐＭＭＴＶＴ７（＋）と同じであるが、Ｔ７プロモーターとＴ３プロモーターの位置が逆転しており、ｐＭＭＴＶＴ７（−）中のＴ３プロモーターはｐＭＭＴＶＴ７（＋）中のＴ７プロモーターがある場所に位置しており、ｐＭＭＴＶＴ７（−）中のＴ７プロモーターはｐＭＭＴＶＴ７（＋）中のＴ３プロモーターがある場所に位置している。従ってｐＭＭＴＶＴ７（＋）とｐＭＭＴＶＴ７（−）ベクターは、哺乳動物宿主細胞中で異種ＤＮＡ（ここで異種ＤＮＡはポリリンカーでベクター内に取り込まれている）が発現するのに必要な制御成分のすべてを含有している。さらにＴ７プロモーターとＴ３プロモーターはポリリンカーのどちらかの側に位置しているため、これらのプラスミドはポリリンカーでベクター内にサブクローニングされている異種ＤＮＡのインビトロ転写体の合成に使用することができる。哺乳動物細胞中のヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡの誘導性発現のために、ＤＮＡをｐＭＭＴＶＴ７（＋）またはｐＭＭＴＶＴ７（−）のようなプラスミド中に挿入することができる。これらのプラスミドは、機能的に関連する外来ＤＮＡのステロイド誘導性発現のためのマウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーターを含有する。宿主細胞が糖質コルチコイド（すなわちＭＭＴＶプロモーターのインデューサー）の摂取に必要な内因性糖質コルチコイド受容体を発現しない場合は、糖質コルチコイド受容体をコードするＤＮＡ（ＡＴＣＣ整理番号６７２００）で細胞を追加的にトランスフェクションする必要がある。インビトロ転写体の合成のために、ヒトＮＭＤＡＲ１、ＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、ＮＭＤＡＲ２ＣおよびＮＭＤＡＲ２Ｄをコードする全長ヒトＤＮＡクローンを、ｐＩＢＩ２４（インターナショナル・バイオテクノロジーズ社（Inte rnational Biotechnologies，Inc．）、ニューヘーブン、コネチカット州）、ｐＣＭＶ−Ｔ７−２、ｐＣＭＶ−Ｔ７−３、ｐＭＭＴＶＴ７（＋）、ｐＭＭＴＶＴ７（−）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ストラタジーン（Stratagene）、ラホイア（LaJolla）、カリホルニア州）またはｐＧＥＭ７Ｚ（プロメガ（Promega）、マジソン、ウィスコンシン州）中にサブクローニングすることもできる。本発明の別の実施態様において、前述のポリ核酸（すなわちＤＮＡまたはＲＮＡ）を含有する細胞が提供される。細菌、酵母および哺乳動物のような宿主細胞は、ＲＮＡを複製しＮＭＤＡ受容体サブユニットを産生するために使用することができる。受容体の発現と機能の評価法は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５６２５とＰＣＴ／ＵＳ９２／１１０９０、および同時係属出願０７／５６３，７５１号と０７／８１２，２５４号に記載されている。これらの文献の主題はその全体が参考のため本明細書中に引用されている。適当な発現ベクターへのクローン化ＤＮＡの導入法、１つのプラスミドベクターまたはプラスミドベクターの組合せ（それぞれが１つまたはそれ以上の異なる遺伝子をコードする）または線状ＤＮＡによる真核細胞のトランスフェクション、そしてトランスフェクションした細胞の選択法は公知である（例えば、サムブルーク（Sambrook）ら、（１９８９）分子クローニング：実験室マニュアル（Mo lecular Cloning：A Laboratory Manual）、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）を参照）。異種ＤＮＡは、当業者に公知の任意の方法により宿主細胞に導入される：例えば、ＣａＰＯ₄沈殿法（例えば、ウィグラー（Wigler）ら、（1979）、Proc ．Natl．Acad．Sci．76:1373-1376）またはリポフェクタミン（ギブコ（ＧＩＢＣＯ）ＢＲＬ＃18324-012）を用いる異種ＤＮＡをコードするベクターによるトランスフェクション。次に組換え細胞は、ＤＮＡによりコードされたサブユニットが発現される条件下で培養することができる。好適な細胞は哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３、ＣＨＯ、ＢＨＫＢＩおよびＬｔｋ^-細胞、マウス単球マクロファージＰ３８８Ｄ１およびＪ７７４Ａ−１細胞（ＡＴＣＣ、ロックヴィル、メリーランド州から入手できる）など）、酵母細胞（例えば、ピキア・パストリス（Pichia Pastoris）のようなメチル親和性（methilotrophic）酵母細胞）、細菌細胞（例えば大腸菌）などがある。本明細書で提供されるＤＮＡは任意の真核細胞（例えば、ピキア・パストリス（Pichia Pastoris）（米国特許第４，８８２，２７９号、４，８３７，１４８号、４，９２９，５５５号および４，８５５，２３１号を参照）、サッカロミセス．セレビッシェ（Saccharomyces cerevisiae）、カンジダ・トロピカリス（Ca ndida tropicalis）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）などの酵母細胞）中で発現されるが、本明細書で提供されるヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡの発現のためには市販の発現系や当業者に公知の他の発現系を含む哺乳動物発現系が好ましい。ＤＮＡのインビトロＲＮＡ転写体の発現にはツノガエル（Xenopus）卵母細胞が好適である。好適な実施態様において、ヒトＮＭＤＡＲサブユニットをコードするＤＮＡはベクターに結合され、適当な宿主細胞中に導入されて、特異的なヒトＮＭＤＡ受容体サブタイプまたはサブユニットの特異的な組合せを発現する、形質転換された細胞株を産生する。得られる細胞株は次に、公知の薬剤または可能性のある薬剤の受容体機能への影響の再現性のある定量的解析のために大量に産生される。他の実施態様においては、各サブユニットをコードするＤＮＡのインビトロ転写によりｍＲＮＡが産生される。このｍＲＮＡ（単一のサブユニットクローンからであってもまたはクローンの組合せからであっても）は、ツノガエル（Xenopus ）卵母細胞に注入され、ここでｍＲＮＡはヒト受容体サブユニットの合成を指令し、これが次に機能性受容体を形成する。あるいは機能性受容体の発現のために、サブユニットをコードするＤＮＡは卵母細胞に直接注入される。次にトランスフェクションされた細胞または注入された細胞は、本明細書に記載の薬剤スクリーニング法に使用される。ＤＮＡまたはＲＮＡが導入される真核細胞は、このようなＤＮＡまたはＲＮＡにより、トランスフェクションされることができるものまたはこのようなＤＮＡまたはＲＮＡを注入することができるものである。好適な細胞は一時的または安定にトランスフェクションされ、またＤＮＡやＲＮＡを発現するものである。最も好適な細胞は、異種ＤＮＡによりコードされる１つまたはそれ以上のサブユニットよりなる組換えまたは異種ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットを形成することができるものである。このような細胞は実験的に同定されるか、または容易にトランスフェクションまたは注入することができるものの中から選択される。ＤＮＡを導入するための細胞の例は、哺乳動物起源の細胞（例えば、ＣＯＳ細胞、マウスＬ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児性腎（ＨＥＫ）細胞（特に、液体窒素中で凍結された後融解され再増殖が可能なＨＥＫ２９３細胞；例えばゴーマン（Gorman）の米国特許第５，０２４，９３９号（また、スチルマン（Stillman）ら、（1985）Mol．Cel．Biol．5:2051-2060も参照）に記載のもの）、アフリカミドリザル（African green monkey）細胞および当業者に公知の他の細胞）、両生類の細胞（例えば、ゼノプス・ラエビス（Xeno pus laevis）卵母細胞）、酵母細胞（例えば、サッカロミセス・セレビッシェ（ Saccharomyces cerevisiae）、ピキア・パストリス（Pichia Pastoris））などがある。注入されたＲＮＡ転写体を発現するための細胞の例は、ゼノプス・ラエビス（Xenopus laevis）卵母細胞がある。ＤＮＡのトランスフェクションに好適な細胞は、当業者に公知であるかまたは実験的に同定され、ＨＥＫ２９３細胞（整理番号＃ＣＲＬ１５７３でＡＴＣＣより入手できる）；Ｌｔｋ^-細胞（整理番号＃ＣＣＬ１．３でＡＴＣＣより入手できる）；ＣＯＳ−７細胞（整理番号＃ＣＲＬ１６５１でＡＴＣＣより入手できる）；そしてＤＧ４４細胞（ｄｈｆｒＣＨＯ細胞；例えば、ウーラウプ（Urlaub）ら（1986）Cell．Molec．Genet．12:5 55を参照）がある。好適な細胞には、ＬＴＫ−細胞とＤＧ４４細胞がある。ＤＮＡは当業者に公知の方法を用いて細胞内に安定に取り込まれるか、または一時的に発現される。安定にトランスフェクションされる哺乳動物細胞は、選択マーカー遺伝子（例えば、チミジンキナーゼ、ジヒドロ葉酸還元酵素、ネオマイシン耐性などの遺伝子）を有する発現ベクターで細胞をトランスフェクションし、トランスフェクションされた細胞をマーカー遺伝子を発現する細胞に選択的な条件下で増殖させることにより調製される。一時的トランスフェクション体を調製するためには、哺乳動物細胞をレポーター遺伝子（例えば大腸菌β−ガラクトシダーゼ遺伝子）でトランスフェクションしてトランスフェクション効率を追跡する。トランスフェクション体は典型的には選択性条件下では増殖しないため選択マーカー遺伝子は一時的トランスフェクション体には含有されず、普通トランスフエクション後数日以内に分析される。このような安定トランスフエクション細胞または一時的トランスフェクション細胞を産生するために、細胞を充分な濃度のサブユニットをコードする核酸でトランスフェクションして、異種ＤＮＡにコードされるヒトサブユニットを含有するヒトＮＭＤＡ受容体を形成させる。サブユニットをコードするＤＮＡの正確な量と比率は実験的に決定されるか、またはサブユニット、細胞および測定条件の特定の組合せについて最適化される。異種ＤＮＡまたはＲＮＡのみにコードされるサブユニットを含有するＮＭＤＡ受容体を発現する組換え細胞が特に好適である。異種ＤＮＡは細胞中でエピソーム成分として維持されるか、または細胞の染色体ＤＮＡに取り込まれる。次に得られる組換え細胞を培養し、この培養物またはサブ培養物からサブ培養（または、哺乳動物細胞の場合は継代する）する。組換え細胞のトランスフェクション、注入および培養法は当業者に公知である。同様に当業者に公知の精製法を用いて、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットが精製される。例えば１つまたはそれ以上のサブユニットに特異的に結合する抗体または他のリガンドが、サブユニットまたはサブユニットを含有するヒトＮＭＤＡ受容体の親和性精製と免疫沈降に使用される。本明細書において、異種ＤＮＡまたは外来ＤＮＡおよびＲＮＡは、互いに交換して使用することができ、細胞のゲノムの一部としては存在しないか、または天然に存在するものとは異なるゲノム中に見いだされるＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。典型的には異種ＤＮＡまたは外来ＤＮＡまたはＲＮＡは、宿主細胞に内因性ではなく人工的に細胞に取り込まれたＤＮＡまたはＲＮＡを意味する。異種ＤＮＡの例としては、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡ、転写、翻訳または他の制御可能な生化学過程などに影響を与えることにより内因性ＤＮＡの発現を媒介または変更するＲＮＡまたは蛋白をコードするＤＮＡなどがある。異種ＤＮＡを発現する細胞は、同じであるかまたは異なる発現生成物をコードするＤＮＡを含有する。異種ＤＮＡは発現される必要はなく、宿主細胞ゲノム中に取り込まれるかまたはエピソーム的に維持される。組換え受容体または組換え真核細胞表面は、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡまたはＲＮＡにコードされる１つまたはそれ以上のサブユニットを含有するか、または宿主細胞にコードされるサブユニットと異種ＤＮＡまたはｍＲＮＡにコードされるサブユニットの混合物を含有してもよい。組換え受容体はホモマー（homomer）であるかまたは多数のサブユニットのヘテロマー（h eteromer）の組合せであってよい。多くの種（例えばラットやヒト）の受容体をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの混合物を、細胞中に導入することができる。すなわち本明細書記載のＮＭＤＡＲ１のみまたは１つまたはそれ以上のＮＭＤＡＲ１と１つまたはそれ以上のＮＭDＡＲ２サブユニットの組合せを含有する細胞が調製される。例えば本発明のＮＭＤＡＲ１サブユニットは、ＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、ＮＭＤＡＲ２Ｃおよび／またはＮＭＤＡＲ２Ｄ受容体サブユニットとともに同時発現することができる。ツノガエル（Xenopus）卵母細胞中で発現された組換えヒトＮＭＤＡサブユニットのヘテロマーの組合せの例としては、ＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡＲ２Ｂ、そしてＮＭＤＡＲ１＋ＮＭＤＡＲ２Ａ＋ＮＭＤＡＲ２Ｃがある（実施例９を参照）。本明細書に記載のＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ベクター、受容体サブユニット、受容体サブユニットの組合せおよび細胞により、選択されたＮＭＤＡ受容体サブユニットやその特異的組合せおよび該受容体サブユニットに対する抗体の産生が可能である。これは、その存在が単一のＮＭＤＡ受容体サブユニットの分析を妨害する多くの他の受容体蛋白の汚染が実質的にない、合成または組換え受容体および受容体サブユニットを調製する手段を与える。目的の受容体のサブタイプが利用できることが、特定の受容体サブタイプまたはＮＭＤＡ受容体サブユニットの組合せへの薬剤の影響を観察し、従ってヒトに特異的でありヒトＮＭＤＡ受容体サブタイプまたはＮＭＤＡ受容体サブユニットの組合せに特異的な試験系で薬剤の初期のインビトロスクリーニングの実施を可能にする。特異的抗体が利用できることは、インビボで発現されるサブユニットを同定することを可能にする。すなわち、このような特異的組合せは、薬剤スクリーニングの好適な標的として使用される。特異的な受容体組成物への薬剤の影響を測定するためにインビトロで薬剤物質をスクリーニングすることができることは、受容体サブタイプ特異的または疾患特異的薬剤の開発とスクリーニングを可能にするはずである。また単一の受容体サブユニットまたは種々の型の受容体サブユニットと種々のアゴニストまたはアンタゴニストの可能性のある物質との特定の組合せを試験することにより、個々のサブユニットの機能と活性に関する追加情報が得られ、１つまたはそれ以上の受容体サブユニットまたは受容体サブタイプと非常に特異的に相互作用することができる化合物の同定と設計を可能にするであろう。得られる薬剤は、種々の受容体サブタイプを発現する細胞を用いてスクリーニングすることにより同定される薬剤より、不要な副作用はより少ないであろう。さらに種々の疾患の薬剤開発と治療法に関して、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡが利用できることは、ある種の疾患の発症に相関する遺伝子の変化（例えば、突然変異）の同定を可能にする。さらに、このような突然変異を合成ＤＮＡ配列に特異的に導入し、次にこれを実験室動物に導入するかまたはインビトロ測定系でその効果を測定することにより、そのような疾患の動物モデルの作成が可能になる。別の面において、本発明は本発明のＤＮＡによりコードされる機能性ペプチド断片およびその機能性組合せよりなる。ペプチドがグルタミン酸受容体として機能するのに必須ではない配列中のアミノ酸の一部またはすべてを排除することにより、不要な実験をすることなく当業者はこのような機能性ペプチド断片を産生することができる。グルタミン酸受容体機能に必須のアミノ酸は、例えばペプチドをコードするＤＮＡの体系的消化および／またはＤＮＡへの欠失の導入により決定することができる。修飾（例えば欠失または消化）ＤＮＡは、例えばＤＮＡをトランスフェクションし、次に得られるｍＲＮＡをツノガエル（Xenopus）卵母細胞に導入して、ｍＲＮＡを翻訳させることにより発現することができる。卵母細胞中のこうして発現された蛋白の機能的分析は、グルタミン酸受容体に結合しこれを機能的に活性化することが公知のリガンドに卵母細胞を暴露して、次に発現された断片がイオンチャネルを生成するか否かについて卵母細胞を追跡することにより、行われる。イオンチャネルが検出されるなら、断片はグルタミン酸受容体として機能する。上記の方法は、ＮＭＤＡＲ１様受容体サブユニット単独の存在下、またはＮＭＤＡＲ１様およびＮＭＤＡＲ２様受容体サブユニットの組合せの存在下で行われる。例えば試験される蛋白がＮＭＤＡＲ２様受容体サブユニットである時、追加のサブユニットは好ましくはＮＭＤＡＲ１様サブユニットである。本発明の別の実施態様において、競合的結合測定法で本発明の受容体蛋白を使用することよりなる、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットに結合する化合物の同定方法が提供される。この測定法は多数の化合物を迅速にスクリーニングして、どの化合物（もし、あるとすれば）がＮＭＤＡ受容体に結合することができるかを調べることができる。このような化合物が本発明の受容体のモジュレーター、アゴニストまたはアンタゴニストとして作用するのか否かをさらに調べるために、さらに詳しい測定法が実施される。本発明の結合測定法の別の応用は、本発明の受容体の存在の有無に関する試料（例えば生物学的液体）の測定である。例えばグルタミン酸産生経路の機能不全に関連する症状を示す患者の血清を測定して、観察される症状がこのような受容体の産生不足かまたは過剰なのかを決めることができる。本発明において企図される結合測定法は、当業者は容易に判定できるように種種の方法で実施することができる。例えばラジオ受容体測定法などの競合的結合測定法を使用することができる。本発明のさらなる実施態様において、本発明のヒトＮＭＤＡ受容体の活性を調節する化合物を同定するための生物測定法が提供され、該方法は：（ａ）ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡを含有する細胞（この細胞は機能性ＮＭＤＡ受容体を発現する）を、受容体のイオンチャネル活性の調節を測定すべき少なくとも１つの化合物に暴露させて、（ｂ）細胞のイオンチャネル活性の変化を追跡することよりなる。上記のバイオアッセイはヒトＮＭＤＡ受容体のアゴニストやアンタゴニストの同定を可能にする。この方法では組換えＮＭＤＡ受容体に「未知の」すなわち試験物質と（アンタゴニスト活性が試験される時は、さらに公知のＮＭＤＡアゴニストの存在下で）接触させ、この「未知の」すなわち試験物質との接触後、公知のグルタミン酸受容体のイオンチャネル活性を追跡し、公知のグルタミン酸受容体のイオンチャネル応答を増加または低下させる物質を、ヒトＮＭＤＡ受容体の機能性リガンド（すなわち、モジュレーター、アゴニストまたはアンタゴニスト）として同定する。本発明の特定の実施態様において、組換えヒトＮＭＤＡ受容体を発現する哺乳動物細胞または卵母細胞を試験化合物と接触させて、次に試験化合物がある場合またはない場合のＮＭＤＡ受容体介在応答を比較し、試験細胞または対照細胞（すなわち、ＮＭＤＡ受容体を発現しない細胞）の、化合物の存在に対する応答を比較して、その調節作用を評価することができる。本明細書において、「ＮＭＤＡ受容体の活性を調節する」化合物またはシグナルとは、ＮＭＤＡ受容体の活性を変化させ、化合物またはシグナルの存在下ではこれらが存在しない場合とはＮＭＤＡ受容体の活性が異なるようになる化合物またはシグナルを意味する。特にこのような化合物またはシグナルはアゴニストやアンタゴニストを含む。アゴニストという用語は、受容体機能を活性化するＮＭＤＡのような物質またはシグナルを意味し；アンタゴニストという用語は、受容体機能を妨害する物質を意味する。典型的にはアンタゴニストの作用はアゴニストにより活性化をブロックするものとして観察される。アンタゴニストは競合的および非競合的アンタゴニストを含む。競合的アンタゴニスト（または競合的ブロッカー）は、アゴニスト（例えば、リガンドまたは神経伝達物質）の特異的な部位またはその近傍と相互作用する。非競合的アンタゴニストまたはブロッカーは、アゴニストと相互作用する部位とは異なる部位と相互作用することにより、受容体の機能を不活性化する。当業者は理解できるように、ヒトＮＭＤＡ受容体活性を調節する化合物（例えば、アゴニストおよびアンタゴニスト）の同定方法には、一般に対照との比較が必要である。「対照」細胞または「対照」培養物の１つのタイプは、試験化合物に暴露された細胞または培養物と実質的に同様に処理された細胞または培養物である（ただし、対照培養物は試験化合物に暴露されない）。例えば、電圧固定電気生理学的方法を用いる方法では、細胞を浸漬している外部溶液を単に交換することにより、試験化合物の存在下または非存在下で同じ細胞を試験することができる。別のタイプの「対照」細胞または「対照」培養物は、トランスフェクションされた細胞と同一の細胞または細胞の培養物である（ただし、対照培養物に使用される細胞は機能性ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットを発現しない）。この場合、細胞または各タイプの細胞の培養物が、測定される化合物の存在下と実質的に同じ反応条件下に暴露される時、試験化合物に対する試験細胞の応答は、受容体のない（対照）細胞の試験化合物に対する応答と比較される。本発明のさらに別の実施態様において、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体のイオンチャネル活性は、この受容体を、上記バイオアッセイにより同定される少なくとも１つの化合物の有効量と接触させることにより調節される。本発明のさらに別の実施態様において、上記の受容体蛋白に対して産生された抗体が提供される。この抗体は、受容体組織局在化、サブユニット組成、機能性ドメインの構造の研究用、および診断用、治療用などに使用することができる。好ましくは治療用途では、使用される抗体はモノクローナル抗体である。本発明の受容体蛋白またはその部分を抗体産生の抗原として用いることにより、上記の抗体は当業者に公知の標準的方法を使用して産生することができる。抗ペプチドおよび抗融合蛋白抗体ともに使用することができる［例えば、バホウト（Bahouth）ら、（1991）Trends Parmacol Sci．第12巻:338-343；Current Prot ocols in Molecular Biology（アウスベル（Ausubel）ら、編）ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（John Wiley and Sons）、ニューヨーク（1989）］。免疫原として（合成ペプチドまたは組換え細菌融合蛋白として）使用するためのＮＭＤＡサブユニットの部分を選択する場合に考慮すべき因子は、抗原性、入手し易さ（すなわち、細胞外ドメインおよび細胞質ドメイン）、特定のサブユニットに特異的であるかなどである。サブユニット特異的抗体が利用できることは、（例えば、正常の脳組織対疾患の脳組織中の）種々のサブユニットの分布と発現密度を追跡するのに免疫組織学的方法を使用することを可能にする。このような抗体はまた、診断および治療応用に利用できる。本発明のさらに別の実施態様において、有効量の上記の抗体に本発明の受容体を接触させることにより、該受容体のイオンチャネル活性を調節する方法が提供される。本発明の抗体は、標準的方法（例えば、腹腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、または皮下注射、移植または経皮的投与法など）により、対象者に投与することができる。当業者は、使用される投与法により、投与型、治療処方などを容易に決定することができる。以下の非限定例を参照して本発明をさらに詳細に説明する。実施例１ヒトＮＭＤＡ受容体ＮＭＤＡＲ１サブユニットをコードするＤＮＡの単離Ａ．ｃＤＮＡライブラリースクリーニングヒト海馬組織から単離したＲＮＡを、オリゴｄＴ−プライムおよびランダムプライムした１本鎖ｃＤＮＡの合成のための鋳型として使用した［例えば、マニアチス（Maniatis）ら、（1982）分子クローニング：実験室マニュアル（Molecula r Cloning：A Laboratory Manual）、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、コールド・スプリング・ハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク］。１本鎖ｃＤＮＡを２本鎖ｃＤＮＡに変換し、その末端にＥｃｏＲＩ／ＳｎａＢＩ／ＸｈｏＩアダプターを付け加えた。アガロースゲル電気泳動を用いてサイズによりｃＤＮＡを分離し、＞２．０ｋｂのものをＥｃｏＲＩ消化したλｇｔ１０バクテリオファージベクター中に結合した。得られるｃＤＮＡライブラリーを、細菌宿主の限界感染により各クローンを複製して増幅し、−７０℃で保存した。保存してある増幅した海馬オリゴｄＴ−プライムｃＤＮＡライブラリーを取り出し、１×Ｉ０⁶個の組換え体を、ラットＮＭＤＡＲ１Ａ受容体ｃＤＮＡのヌクレオチド９６−１２８（ＳＥ７）とヌクレオチド２５７６−２６０９（ＳＥ８）に対応するオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションについてスクリーニングした（ミヨシ（Miyoshi）ら、（1991）Nature 354:31を参照）。ハイブリダイゼーションは、４２℃で６×ＳＳＰＥ、５×デンハルツ（Denhart'ｓ）溶液、１０％ホルムアルミド、０．２％ＳＤＳおよび２００μｇ/ml ニシン精子ＤＮＡ中で行なった。洗浄は５０℃で１×ＳＳＰＥと０．２％ＳＤＳ中で行なった。ハイブリダイズするクローンを同定した。これらのクローンはＳＥ８にはハイブリダイズしたがＳＥ７にはハイブリダイズしなかった。ランダムにプライムした一次ヒト海馬ｃＤＮＡライブラリー（ライブラリーに含めるために２．０ｋｂより大きいｃＤＮＡのみをスクリーニングして調製された〜２×１０⁵個の組換え体）を、オリゴヌクレオチドＳＥ８とラットＮＭＤＡＲＩＡ受容体ｃＤＮＡのヌクレオチド１２９−１４１に対応するオリゴヌクレオチド（ＳＥ１１）へのハイブリダイゼーションと同じ条件下で、スクリーニングした。ＳＥ８にハイブリダイズするがＳＥ１１にはハイブリダイズしない５個のハイブリダイズクローンが同定された：ＮＭＤＡ５−７とＮＭＤＡ１０−１１。Ｂ．クローンの性状解析クローンをプラーク精製し、制限酵素マッピングと挿入体のＤＮＡ配列解析により性状解析した。クローンの１つであるＮＭＤＡ１１（ＮＭＤＡ１１の部分の記載については配列番号１Ｂを参照）は、完全ＮＭＤＡＲ１サブユニットをコードする全長ｃＤＮＡである（すなわち、翻訳開始コドンと翻訳停止コドンを含有する）。残りのクローンは部分的ｃＤＮＡである。クローンＮＭＤＡ２、ＮＭＤＡ３（配列番号１Ｄを参照）、ＮＭＤＡ５、ＮＭＤＡ６、ＮＭＤＡ７（配列番号１Ｃを参照）、およびＮＭＤＡ１０（ＮＭＤＡ１０の一部の記載については配列番号１Ａを参照）は翻訳停止コドンを含有するが、コーディング配列の５’末端でヌクレオチドが欠如している。クローンの性状解析により、単離されたｃＤＮＡはヒトＮＭＤＡサブユニット転写体の異なってスプライスされた型に対応することが明らかになった。クローンにより示される４つの型のスプライシングは図１に概略が示されている。クローンＮＭＤＡ１０（５’非翻訳配列、およびコーディング配列の５’末端の６０ヌクレオチドが欠失している）を参照して他の変種を比較する。クローンＮＭＤＡ１１は、ＮＭＤＡ１０に存在する３６３ヌクレオチド（クローンの３’部分）が欠失している。この３６３ヌクレオチド欠失は、転写体のリーディングフレームを破壊しない。しかしこのため停止コドンが変わる。ＮＭＤＡ１１のコーディング配列の最後の６９ヌクレオチドは、クローンＮＭＤＡ１０の３’非翻訳配列（すなわち、配列番号１のヌクレオチド３３２５−３３９３）に対応する。クローンＮＭＤＡ７は、ＮＭＤＡ１１から欠失しているものと同じ３６３ヌクレオチドが欠如している。しかしＮＭＤＡ７はさらに、ＮＭＤＡ１０とＮＭＤＡ１１に存在する５’末端の２０４ヌクレオチドが欠如している。この２０４ヌクレオチドの欠失も転写体のリーディングフレームを破壊しない。ＮＭＤＡ７はＮＭＤＡ１０とＮＭＤＡ１１に対して５’末端に６３ヌクレオチドのフレーム内挿入（in -frame insertion）を含有する。ＮＭＤＡ７のコーディング配列の最後の６９塩基対は、ＮＭＤＡＩ０の３’非翻訳配列（すなわち、配列番号１のヌクレオチド３３２５−３３９３）に対応する。クローンＮＭＤＡ３はＮＭＤＡ１０に存在する３’末端１０８７塩基対が欠如している。この１０８７塩基対欠失は転写体のリーディングフレームを破壊しないが、異なる停止コドンが得られる。ＮＭＤＡ３のコーディング配列の最後の２３１塩基対は、クローンＮＭＤＡ１０の３’末端非翻訳配列（すなわち、配列番号１のヌクレオチド４０４９−４２７９）に対応する。実施例２全長ＮＭＤＡＲ１サブユニットｃＤＮＡ作成体の調製クローンＮＭＤＡ１０、ＮＭＤＡ１１、ＮＭＤＡ７およびＮＭＤＡ３を一緒に結合させて、ＮＭＤＡ受容体ＮＭＤＡＲ１サブユニットの変種をコードする全長ｃＤＮＡを作成する。この全長ＮＭＤＡＲ１サブユニットｃＤＮＡをベクターｐｃＤＮＡ１（インビトロゲン（Invtrogen）、サンジエゴ、カリホルニア州）に取り込んで、哺乳動物宿主細胞での受容体サブユニットの発現、およびツノガエル（Xenopus）卵母細胞中で発現されるＤＮＡのインビトロ転写体を作成するのに使用する。ベクターｐｃＤＮＡ１は、５’から３’の順序で以下の成分を含有するｐＵＣ１９ベースのプラスミドである：サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期プロモーター（immediate early gene promoter）／エンハンサー、バクテリオファージＴ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、ポリリンカー、バクテリオファージＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、ＳＶ４０ＲＮＡ処理（すなわちスプライスドナー／アクセプター）シグナル、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、そしてＣｏｌＥ１原点および大腸菌株中でＰ３エピソームとともにベクターを維持するためのｓｕｐＦサプレッサーｔＲＮＡ。すなわちこのベクターは、哺乳動物宿主細胞中での異種ＤＮＡの発現に必要なすべての制御成分を含有する（ここで異種ＤＮＡはポリリンカーでベクターに取り込まれている）。さらにＴ７とＳＰ６プロモーターはポリリンカーのどちらかの側に位置しているため、このプラスミドはポリリンカーでベクターにサブクローニングされた異種ＤＮＡのインビトロ転写体の合成のために使用される。Ａ．ＮＭＤＡＲ１Ａ図２に記載のようにＮＭＤＡ１１（翻訳開始コドンの５’から始まり、クローンの中間のＨｉｎｄIII部位まで延長している）の５’部分とＮＭＤＡ１０（クローンの中間のＨｉｎｄIII部位から始まり、翻訳停止コドンの３’まで延長している）の３’部分を結合させて、全長作成体ＮＭＤＡＲ１Ａを調製した。２つのＤＮＡ断片は哺乳動物発現ベクターｐｃＤＮＡ１中で結合させた。まずＮＭＤＡＲ１作成体を作成する作戦は、ＮＭＤＡ１０の全４．０ｋｂのＥｃｏＲＩ挿入体断片とＮＭＤＡ１１の全４．０ｋｂのＳｎａＢＩ挿入体断片をｐｃＤＮＡ１中に別々にサブクローニングすることよりなっていたが、このクローニングの２つの試みはうまくいかなかった。生存している大腸菌を分析するとヌクレオチドが欠失した不完全な挿入体ｃＤＮＡが含まれていたため、完全な挿入断片を有する大腸菌宿主に対して選択があったのかも知れない。従って以下のようにｐｃＤＮＡ１中のＮＭＤＡ１０やＮＭＤＡ１１の種々の断片をサブクローニングし結合させていくつかの方法で全長ＮＭＤＡＲ１Ａを調製する必要があった（制限酵素部位の位置については図３を参照）。クローンＮＭＤＡ１０をＢｇ１IIとＥｃｏＲＩで消化して、配列番号１のヌクレオチド１０２０−４２９８を含有する〜３．３ｋｂ断片を単離し、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ消化ｐｃＤＮＡ１にクローン化した。得られたプラスミドをＨｉｎｄIIIとＮｈｅＩで消化して配列番号１のヌクレオチド２１３７−４２９８を含有する断片とｐｃＤＮＡ１の一部を単離した。クローンＮＭＤＡ１１をＥｃｏＲＩとＨｉｎｄIIIで消化して、ヌクレオチド１−２１３６を含有する〜２.１ｋｂ断片を単離し、ＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄIII消化修飾ｐｃＤＮＡ１（ポリリンカー中のＥｃｏＲＩ部位の５’に位置するＨｉｎｄIII部位の欠失と、ＥｃｏＲＩ部位の３’でポリリンカーにＨｉｎｄIII部位を付加することにより修飾した）にサブクローニングした。得られたプラスミドをＮｈｅＩとＨｉｎｄIIIで消化し、配列番号１のヌクレオチド１−２１３６と修飾ｐｃＤＮＡ１の一部を含有する断片を単離した。次にこのＮｈｅＩ／Ｈｉｎｄ III断片を、配列番号１のヌクレオチド２１３７−４２９８を含有するＨｉｎｄI II／ＮｈｅＩ断片に結合させて、全長作成体ＮＭＤＡＲ１Ａを作成した（図２を参照）。この結合混合物を大腸菌ＭＣ１０６１／Ｐ３株を形質転換するのに使用した。ｐｃＤＮＡ１中のＮｈｅＩ部位はｓｕｐＦ選択遺伝子内にあるため、正しく結合され完全なＮＭＤＡＲ１Ａプラスミド（これは完全な機能性選択遺伝子を有する）を含有する大腸菌のみがこの選択操作中に生き延びることができた。この断片サブクローニング作戦により、その組換え宿主細胞の数は少なかったが目的の正しいＮＭＤＡＲ１Ａを含有する大腸菌宿主細胞を選択することができた。要約すると作成体ＮＭＤＡＲ１Ａは、ＮＭＤＡ１１からの５’非翻訳配列の２６１塩基対（配列番号１のヌクレオチド１−２６１）とＮＭＤＡＲ１サブユニットのＮＭＤＡＲ１Ａ変種の完全なコーディング配列（配列番号１のヌクレオチド２６３−３０７８）、および３’非翻訳配列の１２２０塩基対（配列番号１のヌクレオチド３０７９−４２９８）を含有する。ＮＭＤＡＲ１Ａコーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐｃＤＮＡ１中の制御遺伝子に機能的に結合している。Ｂ．ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３ＮＭＤＡ１１の５’部分（翻訳開始コドンの５’から始まり、クローンの中間のＨｉｎｄIII部位まで延長している、すなわち配列番号１のヌクレオチド１− ２１３６）とＮＭＤＡ１１の３’部分（クローンの中間のＨｉｎｄIIIから始まり、翻訳停止コドンの３’まで延長している、すなわち配列番号１のヌクレオチド２１３７−２９６１と３３２５−４２９８）を結合させて、全長作成体ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３を調製した。前述のように４．０ｋｂのＳｎａＢＩＮＭＤＡ１１挿入体全体を直接ｐｃＤＮＡ１にサブクローニングすることは難しいため、以下のように（制限酵素部位の位置については図３を参照）ｐｃＤＮＡ１内にＮＭＤＡ１１挿入体の２つの断片を結合して作成体を作成することが必要であった。５’ＮＭＤＡ１１断片を得るために、クローンＮＭＤＡ１１をＥｃｏＲＩとＨｉｎｄIIIで消化し、配列番号１のヌクレオチド１−２１３６を含有する〜２．２ｋｂ断片を単離し、ＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄIII消化修飾ｐｃＤＮＡ１（前述のように修飾）中にサブクローニングした。得られたプラスミドをＮｈｅＩとＨｉｎｄIIIで消化し、配列番号１のヌクレオチド１−２１３６と修飾ｐｃＤＮＡ１の一部を含有する断片を単離した。３’ＮＭＤＡ１１断片を得るために、クローンＮＭＤＡ１１をＢｇ１IIとＥｃｏＲＩで消化し、配列番号１のヌクレオチド１０２０−２９６１と３３２５−４２９８を含有する３.０ｋｂ断片を単離し、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ消化ｐｃＤＮＡ１中にサブクローニングした。得られたプラスミドをＨｉｎｄIIIとＮｈｅＩで消化し、配列番号１のヌクレオチド２１３７−２９６１と３３２５−４２９８とｐｃＤＮＡ１の一部を含有する断片を単離した。次にＨｉｎｄIII／ＮｈｅＩ断片を、配列番号１のヌクレオチド１−２１３６を含有するＮｈｅＩ／ＨｉｎｄIII断片に結合して、ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３を作成した。要約すると作成体ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３は、５’非翻訳配列の２６１塩基対（配列番号１のヌクレオチド１−２６１）とＮＭＤＡＲ１−Δ３６３変種ＮＭＤＡＲ１サブユニットの完全なコーディング配列（配列番号１のヌクレオチド２６２−２９６１と３３２５−３３９３）、および３’非翻訳配列の９０５塩基対（配列番号１のヌクレオチド３３９４−４２９８）を含有する。ＮＭＤＡＲ１−Δ ３６３は、コーディング配列の最後の１１７ヌクレオチドを含む３６３ヌクレオチド（配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４）と、ＮＭＤＡＲ１の３’ 非翻訳配列の最初の246ヌクレオチドが欠如していることで、ＮＭＤＡＲ１とは異なる。このＮＭＤＡＲ１−Δ３６３サブユニット変種コーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐｃＤＮＡ１中の制御成分に機能的に結合している。Ｃ．ＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３のＮＭＤＡＲ１変種をコードする挿入体の３’末端をクローンＮＭＤＡ３（図２を参照）の３’末端からの断片で置換し、全長作成体ＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７を調製した。プラスミドＮＭＤＡＲ１−Δ３６３をＰｓｔＩで部分的に消化し、ＸｂａＩで完全に消化した。ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３の３６３ヌクレオチド欠失の位置の〜112ヌクレオチド上流にＰｓｔＩ部位と、ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３の３’非翻訳配列の下流のポリリンカー中にＸｂａＩ部位がある（図３を参照）。従ってＮＭＤＡＲ１−Δ３６３のＰｓｔＩ／ＸｂａＩ消化により、ベクターから配列番号１のヌクレオチド２８５０−２９６１と３３２５−４２９８を含有する断片が除去される。大きい方の断片を消化物から単離した。クローンＮＭＤＡ３の挿入体をｐＧＥＭ（プロメガ（Promega）、マジソン、ウィスコンシン州）のＥｃｏＲＩ制限部位にクローン化し、得られたプラスミドをＰｓｔＩとＸｂａＩで消化した。配列番号１のヌクレオチド２８５０−２９６１と４０４９−４２９８を含有する小さい断片を単離し、ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３のＰｓｔＩ／ＸｂａＩ消化物からの大きい断片と結合させた。得られた作成体をＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７と命名した。要約すると作成体ＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７は、５’非翻訳配列の２６１塩基対（配列番号１のヌクレオチド１−２６１）とＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７変種ＮＭＤＡＲ１サブユニットの完全なコーディング配列（配列番号１のヌクレオチド２６２−２９６１と４０４９−４２７９）、および３’非翻訳配列の19塩基対（配列番号１のヌクレオチド４２８０−４２９８）を含有する。ＮＭＤＡＲ１−Δ １０８７は、コーディング配列の最後の１１７ヌクレオチドを含む１０８７ヌクレオチド（配列番号１のヌクレオチド２９６２−４０４８）と、ＮＭＤＡＲ１の３’非翻訳配列の最初の970ヌクレオチドが欠如していることで、ＮＭＤＡＲ１とは異なる。このＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７サブユニット変種コーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐｃＤＮＡ１中の制御成分に機能的に結合している。Ｄ．ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４ＮＭＤＡＲ１Ａ１３９９ヌクレオチド（すなわち、配列番号１の７３８−２１３６）をＮＭＤＡ７のＰｖｕII−ＨｉｎｄIII断片（すなわち、配列番号１のヌクレオチド７３８−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３と配列番号１のヌクレオチド８３２−９８４と１１８９−２１３６）で置換し、図２に記載のように全長作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４を調製した。ＮＭＤＡＲ１作成体には複数のＰｖｕII部位があるため、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４の作成には以下のように数段階の工程が必要であった（制限酵素の部位については図３を参照）。作成体ＮＭＤＡＲ１から単離され配列番号１のヌクレオチド１−２１３６を含有する〜２．２ｋｂのＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄIII断片を、ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄI IIで消化した修飾ｐｃＤＮＡ１（実施例２Ａに記載のように修飾した）に結合させた。得られたプラスミドをＡｖｒIIで消化し、自己結合させてｐｃＤＮＡ１により寄与されるプラスミドの部分から２つのＰｖｕII部位を除去した。次にこのプラスミドをＰｖｕIIで部分的に消化し、ＨｉｎｄIIIで完全に消化した。この消化物を、クローンＮＭＤＡ７から単離された１２５８ヌクレオチドのＰｖｕII −ＨｉｎｄIII断片に結合させた。得られたプラスミドをＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３ −Δ２０４−５’と命名し、ＢａｍＨＩとＨｉｎｄIIIで消化し、配列番号１のヌクレオチド１−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３および配列番号１のヌクレオチド８３２−９８４と１１８９−２１３６を含有する断片を単離し、ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄIII消化ＮＭＤＡＲ１に結合させてＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３ −Δ２０４を作成した。ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４は、５’非翻訳配列の２６１塩基対（配列番号１のヌクレオチド１−２６１）とＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４変種ＮＭＤＡＲ１サブユニットの完全なコーディング配列（配列番号１のヌクレオチド２６２−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３および配列番号１のヌクレオチド８３２−９８４と１１８９−３０７８）、および３’非翻訳配列の１２２０塩基対（配列番号１のヌクレオチド３０７９−４２９８）を含有する。従って、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４は、ＮＭＤＡＲ１に存在しない６３ヌクレオチド（配列番号３のヌクレオチド１−６３）を、配列番号１のヌクレオチド８３１と８３２の間に位置して含有することで、ＮＭＤＡＲ１とは異なる。さらにＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４は、ＮＭＤＡＲ１に存在する２０４ヌクレオチド（配列番号１のヌクレオチド９５８−１１８８）を欠如している。ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４サブユニット変種コーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐｃＤＮＡ１中の制御成分に機能的に結合している。Ｅ．ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３全長作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３は、１７３塩基対断片（配列番号１のヌクレオチド７３８−９１０）がＮＭＤＡ７の２３６塩基対のＰｖｕII−ＳｍａＩ断片（配列番号１のヌクレオチド７３８−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３、および配列番号１のヌクレオチド８３２−９１０）で置換されたＮＭＤＡＲ１として説明することができる。ＮＭＤＡＲＩ作成体には複数のＰｖｕII部位があるため、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３の作成のためには以下のように数段階の工程が必要であった。プラスミドＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−５’をＳｍａＩで部分的に消化し、ＨｉｎｄIIIで完全に消化した。大きい方のベクター断片を、ＮＭＤＡ１１から単離した１２２６塩基対のＳｍａＩ／ＨｉｎｄIII断片（配列番号１のヌクレオチド９１１−２１３６）に結合させた。得られたベクターをＢａｍＨＩとＨｉｎｄIIIで消化し、配列番号１のヌクレオチド１−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３および配列番号１のヌクレオチド８３２−２１３６を含有する〜２．２ｋｂ断片を単離し、ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄIII消化ＮＭＤＡＲ１に結合させてＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３を作成した。ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３は、５’非翻訳配列の２６１塩基対（配列番号１のヌクレオチド１−２６１）、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３変種ＮＭＤＡＲ１サブユニットの完全なコーディング配列（配列番号１のヌクレオチド２６２−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３および配列番号１のヌクレオチド８３２−３０７８）、および３’非翻訳配列の１２２０塩基対（配列番号１のヌクレオチド３０７９ −４２９８）を含有する。従って、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３は、ＮＭＤＡＲ１に存在しない６３ヌクレオチド（配列番号３のヌクレオチド１−６３）を配列番号１のヌクレオチド８３１と８３２の間に位置して含有することで、ＮＭＤＡＲ１とは異なる。ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３サブユニット変種コーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐｃＤＮＡ１中の制御成分に機能的に結合している。Ｆ．ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４からの2861ヌクレオチド（すなわち、配列番号１のヌクレオチド１４３８−４２９８）をＮＭＤＡＲ１−Δ３６３のＫｐｎＩ−ＸｂａＩ（ポリリンカー部位）断片（すなわち、配列番号１のヌクレオチド１４３８−２９６１と３３２５−４２９８）で置換し、図２に記載のように全長作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３を調製した。ベクター配列中に２つの余分のＫｐｎＩ部位があるため、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４をＸｂａＩで完全に消化し次にＫｐｎＩで部分的に消化した。ｐｃＤＮＡ１ベクター配列を含有する得られた５’ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４断片を、ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３からの３’ＫｐｎＩ−ＸｂａＩ断片に結合させて、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３を作成した。要約すると、作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３は、５’非翻訳配列の２６１塩基対（配列番号１のヌクレオチド１−２６１）、ＮＭＤＡＲ１ −Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３変種ＮＭＤＡＲ１サブユニットの完全なコーディング配列（配列番号１のヌクレオチド２６２−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３および配列番号１のヌクレオチド８３２−９８４、１１８９−２９６１および３３２５−３３９３）、および３’非翻訳配列の９０５塩基対（配列番号１のヌクレオチド３３９４−４２９８）を含有する。従って、ＮＭＤＡＲ１− Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３は、ＮＭＤＡＲ１Ａに存在しない６３ヌクレオチド（配列番号３のヌクレオチド１−６３）を配列番号１のヌクレオチド８３１と８３２の間に位置して含有することで、ＮＭＤＡＲ１Ａとは異なる。さらにＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３は、ＮＭＤＡＲ１Ａに存在する２０４ヌクレオチド（配列番号１のヌクレオチド９８５−１１８８）、およびＮＭＤＡＲ１Ａのコーディング配列の最後の１１７ヌクレオチドと３’非翻訳配列の最初の２４６ヌクレオチドよりなるＮＭＤＡＲ１Ａ中に存在する３６３ヌクレオチド（配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４）を欠如している。ＮＭＤＡＲ１− Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３サブユニット変種コーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐｃＤＮＡ１中の制御成分に機能的に結合している。Ｇ．ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ１０８７作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４からの２８６１ヌクレオチド（すなわち、配列番号１のヌクレオチド１４３８−４２９８）をＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７のＫｐｎＩ−ＸｂａＩ（ポリリンカー部位）断片（すなわち、配列番号１のヌクレオチド１４３８−２９６１と４０４９−４２９８）で置換し、図２に記載のように全長作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ１０８７を調製した。ベクター配列中に２つの余分のＫｐｎＩ部位があるため、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３− Δ２０４をＸｂａＩで完全に消化し次にＫｐｎＩで部分的に消化した。ｐｃＤＮＡ１ベクター配列を含有する得られた５’ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４断片を、ＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７からの３’ＫｐｎＩ−ＸｂａＩ断片に結合させて、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ１０８７を作成した。要約すると、作成体ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ１０８７は、５’非翻訳配列の２６１塩基対（配列番号１のヌクレオチド１−２６１）、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ３６３変種ＮＭＤＡＲ１サブユニットの完全なコーディング配列（配列番号１のヌクレオチド２６２−８３１と配列番号３のヌクレオチド１−６３および配列番号１のヌクレオチド８３２−９８４、１１８９−２９６１そして４２８０−４２９８）、および３’非翻訳配列の１９塩基対（配列番号１のヌクレオチド４２８０−４２９８）を含有する。従って、ＮＭＤＡＲ１− Ｉ６３−Δ２０４−Δ１０８７は、ＮＭＤＡＲ１Ａに存在しない６３ヌクレオチド（配列番号３のヌクレオチド１−６３）を配列番号１のヌクレオチド８３１と８３２の間に位置して含有することで、ＮＭＤＡＲ１Ａとは異なる。さらにＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ１０８７は、ＮＭＤＡＲ１Ａに存在する２０４ヌクレオチド（配列番号１のヌクレオチド９８５−１１８８）、およびＮＭＤＡＲ１Ａのコーディング配列の最後の１１７ヌクレオチドと３’非翻訳配列の最初の９７０ヌクレオチドよりなるＮＭＤＡＲ１Ａ中に存在する１０８７ヌクレオチド（配列番号１のヌクレオチド２９６２−４０４８）を欠如している。ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４−Δ１０８７サブユニット変種コーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐｃＤＮＡ１中の制御成分に機能的に結合している。Ｈ．ＭＤＡＲ１サブユニットの変種をコードする全長ｃＤＮＡを含有する追加的作成体前述の実施例２Ａ−Ｇに記載の方法と類似の方法を用いて、さらに可能なＮＭＤＡＲ１変種をコードする追加的全長ｃＤＮＡを作成した。具体的には、図２に記載のクローンＮＭＤＡ１１、ＮＭＤＡ１０、ＮＭＤＡ７およびＮＭＤＡ３の一部を結合することにより、以下の作成体を調製した：ＮＭＤＡＲ１−Δ２０４（配列番号１Ｊ）ＮＭＤＡＲ１−Δ２０４−Δ３６３（配列番号１Ｋ）ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ３６３（配列番号１Ｍ）ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ１０８７（配列番号１Ｎ）ＮＭＤＡＲ１−Δ２０４−Δ１０８７（配列番号１Ｌ）実施例２Ａ−Ｇに記載したように、全長ｃＤＮＡもｐｃＤＮＡ１のような哺乳動物発現ベクターに取り込むことができる。種々のヒトの組織で発現されるＮＭＤＡＲ１サブユニットを決定するためにいくつかの方法を用いることができる。例えば前述のＮＭＤＡＲ１転写体の挿入部や欠失部の５’および３’に位置するヌクレオチド配列に特異的オリゴヌクレオチドを用いて、種々の組織から単離されたＲＮＡおよび／または種々の組織から調製されたｃＤＮＡライブラリーの核酸増幅をプライムすることができる。増幅生成物の有無および生成物のサイズは、組織内で発現された変種を示している。この生成物はまた、ＤＮＡ配列解析によりさらに詳細に性状解析される。種々のヒトの組織で発現される種々の転写体を決定するためにＲＮＡ保護測定法を用いることもできる。この測定法は全細胞性ＲＮＡの複雑な混合物中の１つのＲＮＡ種を検出し定量するための感度の高い方法である。ＮＭＤＡＲ１サブユニット変種ＤＮＡの一部を標識し、細胞性ＲＮＡとハイブリダイズさせる。細胞性ＲＮＡ中に相補的なｍＲＮＡが存在する場合、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドが得られる。次にこのＲＮＡ試料をＲＮａｓｅで処理して、１本鎖ＲＮＡを分解する。すべてのＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッドはＲＮａｓｅ分解から保護され、ゲル電気泳動やオートラジオグラフィーにより可視化できる。ＮＭＤＡＲ１−次転写体の可能なスプライス変種に関するさらなる情報は、ＮＭＤＡＲ１サブユニットコーディング配列を含有するゲノムクローンを単離（例えば、本明細書に開示したヒトＮＭＤＡＲ１サブユニットｃＤＮＡへのハイブリダイゼーションにより）し、次に得られるクローンを性状解析することにより得られる。実施例３ヒトＮＭＤＡ受容体ＮＭＤＡＲ２ＣサブユニットをコードするＤＮＡの単離推定される第１と第４のトランスメンブレンドメインをコードするラットＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２ＢおよびＮＭＤＡＲ２ＣＤＮＡの２つの保存領域に基づき、縮重オリゴヌクレオチドを合成した。ラットのＮＭＤＡＲ２ＡＤＮＡでは、これらの領域はそれぞれヌクレオチド１６６９−１６９２（オリゴＳＥ７４）と２４３７−２４６５（オリゴＳＥ７５）にコードされている［モニエ（Mo nyer）ら、（1992）Science256:1217-1221を参照］。これらのオリゴヌクレオチドは、ヒト海馬、小脳および前眼窩組織（orbitofrontal tissue）から単離されたＲＮＡから調製したｃＤＮＡの核酸増幅をプライムするのに使用した。反応混合物をゲル電気泳動と臭化エチジウム染色により解析すると、２つの生成物（７９５塩基対断片と６４０塩基対断片）が検出された。小脳ｃＤＮＡから増幅された７９５塩基対断片をＰＣＲ１０００（インビトロゲン（Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ）、サンジエゴ、カリホルニア州）中にサブクローニングし、ＤＮＡ配列解析により性状解析した結果、これはラットＮＭＤＡＲ２ＡＤＮＡ配列に〜86％相同で、ラットＮＭＤＡＲ２ＢＤＮＡ配列に〜78％相同で、ラットＮＭＤＡＲ２ＣＤＮＡ配列に〜74％相同であった。こうしてこのプラスミドをｐｃｒＮＭＤＡＲ２Ａと命名した。ｐｃｒＮＭＤＡＲ２Ａからの795塩基対挿入体を用いて、ヒト海馬ｃＤＮＡライブラリー（ランダムプライマーを用いて海馬組織からｃＤＮＡを合成して、λ ｇｔ１０ベクターへの挿入のために＞２．０ｋｂの断片を選択して調製した）とヒト小脳ｃＤＮＡライブラリー（λｇｔ１０中の＞２．８ｋｂの断片についてサイズ選択したランダムプライムしたライブラリー）の１×１０⁶個の組換え体をスクリーニングした。ハイブリダイゼーションは、５×ＳＳＰＥ、５×デンハルツ溶液、５０％脱イオン化ホルムアルミド、０．２％ＳＤＳ、２００μｇ/mlの超音波処理し変性させたニシン精子ＤＮＡ中で４２℃で行なった。洗浄は、１× ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で５５℃で行なった。プローブは海馬ライブラリーからの１１プラークと小脳ライブラリーからの８プラークにハイブリダイズした。ハイブリダイズしたプラークを精製したものの１５個はＤＮＡ配列解析と制限酵素マッピングにより、ラットＮＭＤＡＲ２ＡＤＮＡよりラットＮＭＤＡＲ２ＣＤＮＡにより近いことが明らかになった。クローンのすべては部分的ｃＤＮＡ（すなわち、翻訳開始コドンおよび／または翻訳停止コドンが欠如している）であり、ＮＭＤＡＲ２ＣｃＤＮＡと命名した。クローンの比較により、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニット転写体が差別的に処理されたことが明らかになった。クローンＮＭＤＡ２６、ＮＭＤＡ２４、ＮＭＤＡ２２、およびＮＭＤＡ２１（図４を参照）は、同定された４つの基本的なクローンであり、そのすべてがスプライス変種と考えられる。クローンＮＭＤＡ２６（配列番号５Ｄ）を標準として用いて他の変種を比較した。クローンＮＭＤＡ２４（配列番号５Ｃ）は、ＮＭＤＡ２６には存在しない２４塩基対の配列を含有する（配列番号７を参照）。クローン２２（配列番号５Ｂ）はＮＭＤＡ２６に存在する15塩基対が欠如しており、クローンＮＭＤＡ２１（配列番号５Ａ）は、ＮＭＤＡ２６に存在する51塩基対が欠如している。クローンＮＭＤＡ２２とＮＭＤＡ２４はいずれも、ＮＭＤＡ２６には存在しない11塩基対の配列（配列番号９）を含有する（配列番号５のヌクレオチド１１１６−１１１７の間）。この配列をこれらのクローンに導入すると（配列番号５のヌクレオチド１１１６−１１１７の間）、転写体のリーディングフレームが破壊され、転写体内に未成熟（premature）の翻訳停止（すなわち、ＳＴＯＰ）コドンが導入される。クローンＮＭＤＡ２６とＮＭＤＡ２７（図２４を参照）は、５’非翻訳配列、翻訳開始コドンおよびコーディング配列のいくつかを含有する部分的ＮＭＤＡＲ２ＣｃＤＮＡである。クローンＮＭＤＡ２６は５’非翻訳配列の１８８塩基対を含有し、クローンＮＭＤＡ２７は５’非翻訳配列の〜１．１ｋｂを含有する。これらの２つのクローンの５’非翻訳領域の配列は、５’翻訳開始コドンに先行する最初の１５ヌクレオチドについては同じである。しかし５’翻訳開始コドンである１６番目のヌクレオチドから始まって、２つのクローンは分岐していく（配列番号５のヌクレオチド１１６−１９１と配列番号１２のヌクレオチド１− ７４を比較のこと）。実施例４全長ＮＭＤＡＲ２ＣサブユニットｃＤＮＡ作成体の調製部分的ＮＭＤＡＲ２Ｃクローンの部分は種々の方法で結合させて、全長ＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニット変種をコードする作成体を作成することができる。各ＮＭＤＡＲ２ＣｃＤＮＡの５’末端はＮＭＤＡ２６に由来し、作成体の３’末端はクローンＮＭＤＡ２１、ＮＭＤＡ２２、およびＮＭＤＡ２４に由来する。図５は全長ＮＭＤＡＲ２Ｃ作成体を示し、各作成体に寄与する異なるクローンの部分を示す。例えば全長作成体は、ＮＭＤＡＲ１作成体の調製に関する実施例２記載の方法を用いて調製することができる。すなわち、操作し易くするためクローン挿入体をベクター（例えば、ｐｃＤＮＡ１）に移し、次にｃＤＮＡの目的の部分をベクターの制限酵素消化により単離する。これは、もし例えば目的のｃＤＮＡの部分の周りに単一の制限酵素部位がない場合は、数段階の工程および／または部分的消化が必要である。次に目的のｃＤＮＡ断片を結合し、ｐｃＤＮＡ１またはｐＣＭＶ−Ｔ７−２のような発現プラスミド中に導入する。プラスミドｐＣＭＶ−Ｔ７−２（図６を参照）は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター／エンハンサー、プロモーターのすぐ下流に位置するＳＶ４０スプライスドナー／スプライスアクセプター部位、ＳＶ４０スプライス部位の下流に位置するＴ７バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼプロモーター、Ｔ７プロモーターの下流のＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、そしてＴ７プロモーターとポリアデニル化シグナルの間のポリリンカーを含有するｐＵＣ１９ベースのベクターである。すなわちこのベクターは、哺乳動物宿主細胞中での異種ＤＮＡの発現に必要なすべての制御成分を含有する（異種ＤＮＡはポリリンカーでベクターに取り込まれる）。さらにＴ７プロモーターはポリリンカーのすぐ上流に位置するため、このプラスミドは、ポリリンカーでベクターにサブクローニングされた異種ＤＮＡのインビトロ転写体の合成に使用される。プラスミドｐＣＭＶ− Ｔ７−３（これも図６に記載されている）はｐＣＭＶ−Ｔ７−２と同じであるが、ポリリンカー中の制限酵素部位の順序は逆転している。このプラスミドもまた、ＮＭＤＡサブユニットＤＮＡの異種発現に使用することができる。作成体ｐｃＤＮＡ１−２６−ＮｏｔＩ−２４−５’ＵＴは、５’非翻訳配列の１８８塩基対（配列番号５のヌクレオチド１−１８８）、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニットの最初の変種の完全なコーディング配列（配列番号５のヌクレオチド１８９−３８９９）、および３’非翻訳配列の〜４４０塩基対（配列番号５のヌクレオチド３９００−４３４０）を含有する。ＮＭＤＡＲ２ＣｃＤＮＡは発現のための発現ベクターｐｃＤＮＡ１のポリリンカー内に含有されている。作成体ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４（配列番号５）は、５’非翻訳配列の 49塩基対（配列番号５のヌクレオチド１４０−１８８）、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニットの最初の変種の完全なコーディング配列（配列番号５のヌクレオチド１８９−３８９９）、および３’非翻訳配列の〜４４０塩基対（配列番号５のヌクレオチド３９００−４３４０）を含有する。ＮＭＤＡＲ２ＣｃＤＮＡは発現のための発現ベクターｐＣＭＶ−Ｔ７−２のポリリンカー内に含有されている。作成体ｐＣＭＶ−２６−ＳｃａＩ−２４（配列番号５Ｅ）は、配列番号５のヌクレオチド２３５０と２３５１の間に２４塩基対（配列番号７）が挿入されているいること以外は、ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４と同じである。作成体ｐＣＭＶ−２６−ＳｃａＩ−２２（配列番号５Ｆ）は、15塩基対が欠如している（配列番号５のヌクレオチド１９６０−１９７４）こと以外は、ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４と同じである。作成体ｐＣＭＶ−２６−ＳｃａＩ−２１−ＮｏｔＩ−２４（配列番号５Ｇ）は、５１塩基対が欠如している（配列番号５のヌクレオチド２３５１−２４０１）こと以外は、ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４と同じである。作成体ＮＭＤＡＲ２Ｃ−Δ１５−１２４（配列番号５Ｈ）は、１５塩基対が欠如している（すなわち、配列番号５のヌクレオチド１９６０−１９７４）こと、および２４塩基対配列を含有する（すなわち、配列番号７；配列番号５のヌクレオチド２３５０と２３５１の間に挿入されている）こと以外は、ｐＣＭＶ−２６ −ＮｏｔＩ−２４と同じである。作成体ＮＭＤＡＲ２Ｃ−Δ１５−Δ５１（配列番号５１）は、１５塩基対（すなわち、配列番号５のヌクレオチド１９６０−１９７４）と５１塩基対（すなわち、配列番号５のヌクレオチド２３５１−２４０１）こと以外は、ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４と同じである。追加の全長ＮＭＤＡＲ２Ｃ作成体は本明細書に記載のように容易に調製される。例えば、ＮＭＤＡ２７（ＮＭＤＡ２６の代わりに）から得られた５’非翻訳配列を使用することができ、作成体の３’末端はクローンＮＭＤＡ２１、ＮＭＤＡ２２、およびＮＭＤＡ２４の種々の組合せに由来する。種々のヒト組織で実際に発現されるＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニット変種を決定するために、実施例２に記載の数種の方法（例えば、核酸増幅、ＲＮＡ保護測定法など）が使用できる。ヒトＮＭＤＡＲ２Ｃはヌクレオチド２９５７と３１６６の間に８３．５％のＧＣヌクレオチドを含有する。ＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニット発現をおそらく上昇させるために、未変性のアミノ酸配列を維持しながらこの領域のＧＣ含量は減少させることができる。合成ＤＮＡは、この領域のオリゴヌクレオチドプライマーにより作成することができる。４つのオリゴヌクレオチド、ＳＥ３４３（配列番号１７）、ＳＥ３４４（配列番号１８）、ｓｅ３４５（配列番号１９）、およびＳＥ３４６（配列番号２０）を合成した。これらのプライマーはヒトＮＭＤＡＲ２Ｄ受容体のアミノ酸配列を保持しているが、この領域のＧＣ含量を５３．４％に低下している。塩基の修飾の基準は：１）可能であれば、連続して５個以上のグアニンヌクレオチドを有さないこと、２）ＮｏｔＩ（配列番号５のヌクレオチド２９６２−２９６９）、ＡｖａII（配列番号５のヌクレオチド３０６９−３０７３）、およびＡａｔII（配列番号５のヌクレオチド３１５６−３１６１）の制限切断部位を保持すること、３）オリゴヌクレオチドの２次構造をできるだけ低下させること、４）余分なＮｏｔＩ、ＡｖａIIまたはＡａｔII制限部位を配列内に導入しないこと、５）オリゴヌクレオチド対の間に塩基対重複を有することであった。｛ＳＥ３４３とＳＥ３４４｝または｛ＳＥ３４５とＳＥ３４６｝は、６２ −６６℃の間に提唱される融解温度を有する。オリゴヌクレオチド対ＳＥ３４３とＳＥ３４４は、配列番号１７と配列番号１８のヌクレオチド５１−７１からの相補的な配列を有する。オリゴヌクレオチド対ＳＥ３４５とＳＥ３４６は、それぞれ配列番号１９のヌクレオチド４２−６１と配列番号２０のヌクレオチド４３ −６２から相補的な配列を有する。プライマー対｛ＳＥ３４３とＳＥ３４４｝または｛ＳＥ３４５およびＳＥ３４６｝は、標準的ＰＣＲ反応混合物中で組合され、この混合物は各５０ピコモルのオリゴヌクレオチドを含有し、以下のＰＣＲプロトコルにより増幅される：アニーリング温度５５℃で１時間、延長温度７２℃で２分間、そして融解温度９６℃ で３０秒間を３０サイクル。プライマー対ＳＥ３４３−ＳＥ３４４から得られる121塩基対のＰＣＲ生成物をＮｏｔＩとＡｖａＩで消化し、プライマー対ＳＥ３４５−ＳＥ３４６から得られる103塩基対のＰＣＲ生成物をＡｖａＩとＡａｔIIで消化する。これらの断片をｐＣＭＶ−ＮＭＤＡＲ２Ｃ−２６−ＮｏｔＩ−２４に結合させる。これはベクター配列中に余分なＮｏｔＩおよび／またはＡａｔII制限部位を有するためＮｏｔＩとＡａｔIIの両方で部分消化して、ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４−ＧＣＭＯＤを作成する。この作成体ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４−ＧＣＭＯＤは、配列番号５のヌクレオチド１４０−２９６５を含有し、この後に配列番号２１に示す１９５ヌクレオチドが続き、次に配列番号５のヌクレオチド３１６１−４３４０が続く。実施例５ヒトＮＭＤＡ受容体ＮＭＤＡＲ２ＡサブユニットをコードするＤＮＡの単離小脳組織から単離されたＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成をプライムするために異なるオリゴヌクレオチド（ランダムおよび特異的プライマー）を用いて、ヒトｃＤＮＡライブラリーを調製した。最初の鎖の合成に使用した特異的プライマーはＳＥ１６２（配列番号１０のヌクレオチド９０４−９２９）であった。ランダムプライミングにより合成されサイズが１．０−２．８ｋｂのｃＤＮＡ、および特異的プライミングにより合成されサイズが０．６−１．１ｋｂのｃＤＮＡを単離し、λｇｔ１０ファージベクターに挿入して２つのライブラリーを作成した。ランダムプライミングで作成したライブラリー（３×１０⁶組換え体）を、５ ×ＳＳＰＥ、５×デンハルツ溶液、５０％脱イオン化ホルムアミド、０．２％ＳＤＳ、２００μｇ/mlの超音波処理し変性させたニシン精子ＤＮＡ中で４２℃で、ｐｃｒＮＭＤＡＲ２Ａ（実施例３を参照）からの795塩基対挿入体にハイブリダイゼーションさせてスクリーニングした。洗浄は１×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で５５℃で行なった。プローブは11個のプラークにハイブリダイズした。特異的プライミングで作成したライブラリー（６×１０⁵組換え体）を、６× ＳＳＰＥ、５×デンハルツ溶液、１０％脱イオン化ホルムアミド、０．２％ＳＤＳ、２００μｇ/mlの超音波処理し変性させたニシン精子ＤＮＡ中で４２℃で、オリゴヌクレオチドＳＥ１７７（配列番号１０のヌクレオチド８５９−８８４）にハイブリダイズさせてスクリーニングした。洗浄は１×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で５０℃で行なった。プローブは２個のプラークにハイブリダイズした。ハイブリダイズするプラークの９つを精製し、挿入体を制限酵素マッピングとＤＮＡ配列解析により性状解析した。すべてのクローンは部分的ｃＤＮＡを含有していた。２つのクローン（ＮＭＤＡ５３とＮＭＤＡ５４）は、翻訳開始コドンと５’非翻訳配列の、それぞれ３２０塩基対および８８塩基対を含有していた。４つのクローン（ＮＭＤＡ４７、ＮＭＤＡ４９、ＮＭＤＡ５０、およびＮＭＤＡ５１）の配列およびＮＭＤＡ５３とＮＭＤＡ５４の配列は重複して、ヒトＮＭＤＡＲ２Ａサブユニットコーディング配列の〜７０％を構成する（配列番号１０のヌクレオチド１−３０８４を参照）。ＮＭＤＡＲ２Ａコーディング配列を完了させるのに必要な残りの〜１３００塩基対を含有するクローンを得るために、追加のヒトｃＤＮＡライブラリーの６．６×１０⁶組換え体（長さが１．０−２．８ｋｂの範囲の挿入体を有する、ランダムにプライムした小脳の増幅したｃＤＮＡライブラリー）を、前述の特異的にプライムした小脳ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするのに使用したのと同じ条件を用いて、クローンＮＭＤＡ５１の３’末端に対応するオリゴヌクレオチド（オリゴＳＥ１７１；配列番号１０のヌクレオチド３４５４−３４７９）へのハイブリダイゼーションについてスクリーニングした。４つのハイブリダイズするプラークを精製して、ＤＮＡ配列解析により性状解析して、コーディング配列の３’末端と翻訳停止コドンを含有するか否かを決定した。２つのクローン（ＮＭＤＡ５７とＮＭＤＡ５８、これらは測定の結果同一であった）は、ＤＮＡ配列解析により翻訳停止コドンを含有する。クローンＮＭＤＡ５７を含有するファージ溶解物を、ブダペスト条約の規定の下に1993年４月13日にアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）に寄託し、整理番号７５４４２を与えられた。実施例６全長ＮＭＤＡＲ２ＡサブユニットｃＤＮＡ作成体の調製全長ＮＭＤＡＲ２Ａサブユニットをコードする２つの異なる作成体（ｐＣＭＶ −ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−１（５３）およびｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−２（５４））を、以下の部分的ＮＭＤＡＲ２Ａクローンの部分を結合させて調製した：ＮＭＤＡ４７、ＮＭＤＡ５０、ＮＭＤＡ５８、およびＮＭＤＡ５３またはＮＭＤＡ５４のいずれか（ＮＭＤＡ５３とＮＭＤＡ５４はクローンに含有される非翻訳配列の量のみが異なる）。クローンＮＭＤＡ４７、ＮＭＤＡ５０、およびＮＭＤＡ５８の挿入体をＥｃｏＲＩ断片として単離し、ＥｃｏＲＩ消化ｐＣＭＶ−Ｔ７− ２に結合させて、それぞれｐＮＭＤＡ４７、ｐＮＭＤＡ５０、ｐＮＭＤＡ５８を作成した。クローンＮＭＤＡ５３とＮＭＤＡ５４の挿入体をＸｈｏＩ断片として単離し、ＳａｌＩ消化ｐＣＭＶ−Ｔ７−２と結合させて、それぞれｐＮＭＤＡ５３とｐＮＭＤＡ５４を作成した。ｐＮＭＤＡ４７をＳｃａＩとＮｓｉＩで消化して、β−ラクタマーゼ遺伝子（これはアンピシリン耐性を与える蛋白をコードする）の３’部分および配列番号１０のヌクレオチド８２４−２４１５を含有する〜３３５０塩基対断片を遊離させた。この断片をｐＮＭＤＡ５０の〜２８９０塩基対のＮｓｉＩ／ＳｃａＩ断片（β−ラクタマーゼ遺伝子の５’部分と配列番号１０のヌクレオチド２４１−６３３４６を含有する）と結合させてｐＮＭＤＡ４７＋５０を作成した。ＮＭＤＡＲ２Ａの３’末端をコードするｐＮＭＤＡ５８の部分は２つのＭｓｃＩ部位を含有する。３’末端ＭｓｃＩ部位は５’末端ＭｓｃＩ部位に優先して切断されるため、ｐＮＭＤＡ５８の部分的消化は選択しなかった。すなわちｐＮＭＤＡ５８をＳｃａＩ／ＭｓｃＩで消化して、β−ラクタマーゼ遺伝子と挿入体の３’部分（配列番号１０のヌクレオチド４７５１−４８０８）を含有する〜２０２０塩基対断片を単離した。この断片をｐＮＭＤＡ４７＋５０の〜４１５０塩基対のＳｃａＩ／ＭｓｃＩ断片（β−ラクタマーゼ遺伝子の３’部分と配列番号１０の８２４−３２１２を含有する）に結合させて、ｐＮＭＤＡ４７＋５０＋３’ ＥＮＤ５８を作成した。このプラスミドは完全なβ−ラクタマーゼ遺伝子と配列番号１０のヌクレオチド８２４−３２１４と４７５１−４８０８を含有していた。ｐＮＭＤＡ４７＋５０＋３’ＥＮＤ５８に配列番号１０のヌクレオチド３４３ −４７５０を付加するために、ｐＮＭＤＡ５８をＭｓｃＩで消化し、ヌクレオチド３２１３−４７５０よりなる単離された１５３７塩基対断片を、ＭｓｃＩ消化ｐＮＭＤＡ４７＋５０＋３’ＥＮＤ５８に結合させた。得られたプラスミド（ｐＮＭＤＡ４７＋５０＋５８）は、配列番号１０のヌクレオチド８２４−４８０８を含有していた。同じＮＭＤＡＲ２Ａコーディング配列であるが異なる量の５’非翻訳配列を含有する２つの作成体を作成するために、ｐＮＭＤＡ５３とｐＮＭＤＡ５４をＳｃａＩ／ＥｃｏＲＩで消化して、β−ラクタマーゼ遺伝子の３’部分とそれぞれ配列番号１０のヌクレオチド１−８５４と２２５−８５４を含有する断片を遊離させた。ｐＮＭＤＡ４７＋５０＋５８をＳｃａＩ／ＥｃｏＲＩ（部分的）で消化し、β−ラクタマーゼ遺伝子の５’部分と配列番号１０のヌクレオチド８５５−４８０８を含有する３９５４塩基対断片を別々に、ｐＮＭＤＡ５３とｐＮＭＤＡ５４のＳｃａｌ／ＥｃｏＲＩ断片に結合させて、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−１（５３）とｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−２（５４）を作成した。これらの２つの作成体は、それぞれに含有される５’非翻訳配列の量以外は同一であった。いずれも全長ＮＭＤＡＲ２Ａコーディング配列（配列番号１０のヌクレオチド３１１−４７０５）と３’非翻訳配列の１０３ヌクレオチド（配列番号１０の４７０６−４８０８ヌクレオチド）を含有していた。ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−１（５３）は５’非翻訳配列の３１０ヌクレオチド（配列番号１０の１−３１０ヌクレオチド）を含有し、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−２（５４）は５’非翻訳配列の８７ヌクレオチド（配列番号１０のヌクレオチド２２４−３１０）を含有していた。ＮＭＤＡＲ２ＡｃＤＮＡは、哺乳動物宿主細胞での発現のためにｐＣＭＶ−Ｔ７−２の制御成分に機能的に結合している。ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−１（５３）には、ツノガエル（Xenopus）卵母細胞中に注入するためのインビトロ転写体を調製するためにプラスミドを線状化するのに使用される、ＮＭＤＡＲ２Ａ特異的ＤＮＡの３’にユニークな制限部位はない。ユニークな３’制限部位を有する作成体（ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ −３（５３））を作るために、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−１（５３）の基本的にすべてのＮＭＤＡＲ２Ａ特異的ＤＮＡを以下のようにベクターｐＣＭＶ−Ｔ７−３に移した。ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−１（５３）をＮｏｔＩで消化し、〜4.4ｋｂ断片を単離し、ＮｏｔＩ消化ｐＣＭＶ−Ｔ７−３に結合させて、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−３（５３）を作成した。実施例７ヒトＮＭＤＡ受容体ＮＭＤＡＲ２ＢサブユニットをコードするＤＮＡの単離ヒト胎児脳λＺＡＰｃＤＮＡライブラリー（１×１０⁶組換え体；ストラタジーン（Stratagene）、ラホイア（LaJolla）、カリホルニア州）を、ラットＮＭＤＡＲ２Ｂサブユニットコーディング配列（モニエ（Monyer）ら、（1992）Sc ience256:1217-1221）を含有するＤＮＡ断片へのハイブリダイゼーションについてスクリーニングした。ハイブリダイゼーションは、５０％脱イオン化ホルムアミド、５×デンハルツ溶液、５×ＳＳＰＥ、２００μｇ/mlの超音波処理し変性させたニシン精子ＤＮＡおよび０．２％ＳＤＳ中で４２℃で行なった。洗浄は、０．５×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で６５℃で行なった。ヒトの胎児脳ライブラリーから切り取ったハイブリダイズするクローンの１つ（ＮＭＤＡ８１）は、 5435塩基対の挿入体と翻訳開始コドンおよび翻訳停止コドンを含有し、全長ＮＭＤＡＲ２Ｂサブユニットをコードする。この切り取ったプラスミド（これはｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター内にある）はｐＢＳ−ｈＮＭＤＡＲ２Ｂと命名した。ＮＭＤＡ８ｌをＥｃｏＲＩ／ＥｃｏＲＶで消化し、〜5.5ｋ塩基対の断片を単離し、ＥｃｏＲＩ／ＥｃｏＲＶ消化ｐＣＭＶ−Ｔ７−３に結合させた。得られる作成体（ｐＣＭＶＰＬ３−ｈＮＭＤＡＲ２Ｂ）はＮＭＤＡＲ２Ｂコーディング配列（配列番号１３のヌクレオチド210-4664）、および５’非翻訳配列の209ヌクレオチド（配列番号１３のヌクレオチド1-209）そして３’非翻訳配列の339ヌクレオチド（配列番号１３のヌクレオチド4665-5003）を含有する。この作成体中のＮＭＤＡＲ２ＢコーディングＤＮＡは、哺乳動物宿主細胞での発現のためにｐＣＭＶ−Ｔ７−３中の制御成分に機能的に結合している。実施例８ヒトＮＭＤＡ受容体ＮＭＤＡＲ２ＤサブユニットをコードするＤＮＡの単離ヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリー（１×１０⁶組換え体；ストラタジーン（Str atagene）、ラホイア（La Jolla）、カリホルニア州）を、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｄ受容体サブユニットをコードするＤＮＡについてサブトラクションスクリーニング法によりスクリーニングした。この方法では、ヒトＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、およびＮＭＤＡＲ２ＣサブユニットをコードするＤＮＡへの弱いハイブリダイゼーションまたはハイブリダイゼーションなしを基礎にしてプラークを選択した。まずライブラリーを低緊縮性条件（30％脱イオン化ホルムアミド、５×デンハルツ溶液、５×ＳＳＰＥ、２００ｎｇ/mlの超音波処理したニシン精子ＤＮＡ、０．２％ＳＤＳ、４２℃）で、ｐｃｒＮＭＤＡＲ２Ａ（実施例３を参照）へのハイブリダイゼーションについてスクリーニングした。洗浄も低緊縮性条件（２× ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ、５０℃）で行なった。フィルターをはがし、次にｐｃｒＮＭＤＡＲ２Ａ断片へのハイブリダイゼーション、そしてヒトＮＭＤＡＲ２Ｂサブユニット（実施例７を参照）をコードするＤＮＡの〜１２００塩基対ＰｓｔＩ断片およびヒトＮＭＤＡＲ２ＣサブユニットをコードするＤＮＡの〜９５０塩基対ＡｃｃＩ断片（実施例３を参照）へのハイブリダイゼーションについてスクリーニングした。これらの断片は、サブユニットの推定のトランスメンブレンドメインのすべてをコードするＤＮＡを含有する。ハイブリダイゼーションは高緊縮性条件（５０％脱イオン化ホルムアミド、５×デンハルツ溶液、５×ＳＳＰＥ、２００ｎｇ／ｍｌの超音波処理したニシン精子ＤＮＡ、０．２％ＳＤＳ、４２℃）で行ない、洗浄も高緊縮性条件（０．１×ＳＳＰＥ、０．１％ＳＤＳ、６５℃）で行なった。ライブラリーの最初の低緊縮性条件でのスクリーニングでｐｃｒＮＭＤＡＲ２Ａに弱くハイブリダイズした１８のプラークは、ヒトＮＭＤＡＲ２Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ｂ、およびＮＭＤＡＲ２ＣサブユニットをコードするＤＮＡの部分に、高緊縮性条件では非常に弱くハイブリダイズするのみかまたは全くハイブリダイズしなかった。プラークを精製し、挿入体断片をＤＮＡ配列解析により性状解析した。挿入体の１つのＮＭＤＡ９６は、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニット遺伝子コーディング配列の３’の半分に対応する。このクローンの配列は配列番号１５に提供される。ＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニットコーディング配列を完了させるために必要な残りの〜2000塩基対の５’配列を含有するクローンを得るために、ＮＭＤＡＲ２Ｄコーディング配列の３’の半分を含有するクローンの高緊縮性条件での〜８３１塩基対ＳｍａＩ断片へのハイブリダイゼーションについて、ヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、０．５×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳで６５℃で洗浄した。９つのハイブリダイズするプラークを精製し、ＤＮＡ配列決定により解析し、その結果これらのプラークのどれも、翻訳開始コドンをコードし、３’ からＮＭＤＡＲ２Ｄコーディング配列の３’の半分を含有するクローンの少なくとも５’末端へ延長しているＤＮＡを含有するものはなかった。ヒト胎児脳から単離されたＲＮＡからのｃＤＮＡ合成をプライムするために、特異的オリゴヌクレオチドを用いてヒトｃＤＮＡライブラリーを調製した。第１の鎖の合成に使用される特異的プロモーターはＳＥ２９６出会った（配列番号１５のヌクレオチド２９２０−２９４９）。サイズが２．２ｋｂより大きい特異的プライミングにより合成されたｃＤＮＡを単離し、λＺＡＰIIファージベクター中に挿入してライブラリーを作成した。特異的にプライムされたライブラリー（１×１０⁶組換え体）を、５×ＳＳＰＥ、５×デンハルツ溶液、５０％脱イオン化ホルムアミド、０．２％ＳＤＳ、２００μｇ/mlの超音波処理し変性させたニシン精子ＤＮＡ中で４２℃で、ＮＭＤＡＲ２Ｄからの８３１塩基対のＳｍａＩ断片（配列番号１５のヌクレオチド２４３５−３２６５）へのハイブリダイゼーションについてスクリーニングした。洗浄は０．１×ＳＳＰＥ、０．２％ＳＤＳ中で６５℃で行なった。１つのプローブは１１個のプラークにハイブリダイズした。ハイブリダイズするプラークの11個を精製し、挿入体を制限酵素マッピングとＤＮＡ配列解析により性状解析した。６個のクローン（ＮＭＤＡ１１１、ＮＭＤＡ１１２、ＮＭＤＡ１１５、ＮＭＤＡ１１６、ＮＭＤＡ１１９、およびＮＭＤＡ１２１）は翻訳開始コドンと異なる量の５’非翻訳配列を含有する。これらのクローンの配列はＮＭＤＡ９６と重複して、ヒトＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニットコーディング配列（配列番号１５のヌクレオチド４８５−４４９５を参照）の１００％を構成する。ＮＭＤＡ１１５とＮＭＤＡ９６ｃＤＮＡを用いて全長ｈＮＭＤＡＲ２Ｄ作成体を調製した。ＮＭＤＡ１１５とＮＭＤＡ９６ｃＤＮＡはすでにｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター中にあるが、ＮＭＤＡ１１５ｃＤＮＡはＴ７プロモーターからセンス配向にあり、ＮＭＤＡ９６ｃＤＮＡはアンチセンス配向にある。全長作成体のサブクローニングを容易にするために、ＮＭＤＡ９６をＥｃｏＲＩで消化し得られるクローンを配向についてスクリーニングすることによりＮＭＤＡ９６ｃＤＮＡをクローン化した（ＮＭＤＡ９６−Ｔ７）。完全なヒトＮＭＤＡＲ２Ｄ配列内で、ヌクレオチド2804に唯一のＨｉｎｄIIIがありこれをＮＭＤＡ９６とともにＮＭＤＡ１１５のクローン化に使用した。しかしＮＭＤＡ１１５ｃＤＮＡの５’末端のｐＢＳポリリンカー中には追加のＨｉｎｄIII部位がある。従ってＮＭＤＡ１１５をＳｐｅＩ（３’ポリリンカー部位）で完全に消化し、ＨｉｎｄIIIで部分的に消化した。ｐＮＭＤＡ１１５から得られた〜５．６ｋｂのＳｐｅＩ−ＨｉｎｄIII断片（ｐＢＳベクター＋配列番号１５のヌクレオチド３９７−２８０４））を、ＮＭＤＡ９６−Ｔ７からの１．７ｋｂのＨｉｎｄIII− ＳｐｅＩ断片（配列番号１５のヌクレオチド２８０５−４６５１）と結合させて、ｐＢＳ−ｈＮＭＤＡＲ２Ｄを作成した。ツノガエル（Xenopus）卵母細胞中に同時注入してＮＭＤＡＲ１Ａ電流について試験するために、インビトロ転写体を調製した。次に完全なＮＭＤＡＲ２Ｄ挿入体を、〜４．７ｋｂＥｃｏＲＶ／ＳｐｅＩ断片として、ｐＭＭＴＶ−Ｔ７＋哺乳動物発現ベクター中に移動させた。ＥｃｏＲＶとＳｐｅＩ制限部位は、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクターの複数クローニング領域中にある。要約すると、作成体ＮＭＤＡＲ２Ｄは、５’非翻訳配列の８８塩基対（配列番号１５のヌクレオチド３９７−４８４）、ＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニットの完全なコーディング配列（配列番号１５のヌクレオチド４８４−４４９５）、および３ ’非翻訳配列の２００塩基対（配列番号１５のヌクレオチド４４９６−４６９５）を含有する。ＮＭＤＡＲ２Ｄサブユニットコーディング配列は、哺乳動物細胞中での発現のためにｐＭＭＴＶ−Ｔ７中の制御成分に機能的に結合している。実施例９卵母細胞上の組換えヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットの発現ヒトＮＭＤＡ受容体ＮＭＤＡＲ１とＮＭＤＡＲ２サブユニットをコードするＤＮＡを含有する作成体から調製したインビトロ転写体を、ツノガエル（Xenopus ）卵母細胞に注入した。２電極の電位固定法（例えば、スツマー（Stuhmer）Met h.Enzymol.207:319-339を参照）を用いて、卵母細胞トランスメンブレン電流の電気生理的測定を行なった。Ａ．インビトロ転写体の調製作成体ＮＭＤＡＲ１Ａ、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ２０４、ＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７、ＮＭＤＡＲ１−Δ３６３、およびｐＣＭＶ− ２６−ＮｏｔＩ−２４中に含有されるＮＭＤＡ受容体サブユニットｃＤＮＡの組換えキャップされた転写体を、ｍＣＡＰＲＮＡキャッピングキット（カタログ番号200350、ストラタジーン（Stratagene）、ラホイア（La Jolla）、カリホルニア州）を用いて、線状化したプラスミドから合成した。ＮＭＤＡＲ２ＡまたはＮＭＤＡＲ２ＢおよびＮＭＤＡＲ１またはＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３転写体がツノガエル（Xenopus）卵母細胞に同時注入される実験のため、mMEssage mMachine（ Ambion（アンビオン）、カタログ番号1344、オースチン、テキサス州）を用いて、線状化した作成体ＮＭＤＡＲ１Ａ、ＮＭＤＡＲ−Ｉ６３、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−３（５３）、ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４およびｐＢＳ−ｈＮＭＤＡＲ２Ｂから転写体を合成した。各合成転写体の質量を紫外吸光度法により測定し、各転写体の完全性をアガロースゲルの電気泳動により測定した。Ｂ．電気生理学卵母細胞１つにつき、１２．５−５０ｎｇの１つまたはそれ以上のＮＭＤＡ受容体サブユニットで、ツノガエル（Xenopus）卵母細胞に注入した。卵母細胞の調製と注入は、ダスカル（Dascal）の方法［（1987）Crit.Rev.Biochem.22:317- 387］に従って行なった。ｍＲＮＡ注入の２から６日後、２電極電位固定法を用いて卵母細胞を試験した。細胞はリンゲル溶液（１１５ｍＭＮａＣｌ、２．５ｍＭＫＣｌ、１．８ｍＭＣａＣｌ₂、１０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．３）浴に浸漬し、膜電位は−８０から−１００ｍＶに固定した。薬剤含有溶液の６．０μｌずつをピペットで直接浴に入れるか、または流速８ｍｌ／分でワーナー・インスツルメンツ・チャンバー（Warner Instruments chamber）（容量＝１１０ μｌ）中に重力で薬剤を添加した。アクソテープ（AXOTAPE）バージョン１．２ソフトウェアを用いてＰＣ−３８６中のラボマスター（Labmaster）データ採取ボードを用いて２−5Hzでデータをサンプリングした。データをレーザープリンターに取り出すか、またはシグマプロット（Sigmaplot）バージョン５．０を用いてプロットした。ＮＭＤＡアゴニスト、すなわち１０−３０μＭグリシン（ｇｌｙ）および１０ −１００μＭグルタミン酸（ｇｌｕ）または１０−１０００μＭＮＭＤＡを浴に適用した。電流応答が観察された場合、電流がアンタゴニストによりブロックされるか否かを測定するために２つ目のアゴニストを適用する前に浴からアゴニストを洗い流し０．１−１．０ｍＭＭｇＣｌ₂または１μＭもＭＫ８０１（リサーチ・バイオケミカルズ（Reasearch Biochemicals，Inc.）、ナチック（Nati ck）、マサチューセッツ州）（ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト）を適用した。あるいはアゴニスト誘導電流が流れている間ＭｇＣｌ₂またはＭＫ−８０１を適用した。複数回の記録の結果を表１に要約する。表１の結果を解析すると、一般にＮＭＤＡアゴニストに誘導される電流はＭｇＣｌ₂またはＭＫ８０１によりブロックされることを示している。作成体ＮＭＤＡＲＩＡ、ＮＭＤＡＲＩ−Ｉ６３またはＮＭＤＡＲ１−Δ３６３のＮＭＤＡ−１サブユニットコーディング挿入体の転写体（１２．５から６５ｎｇ）を注入した卵母細胞を、グルタミン酸とＮＭＤＡに対するヒトＮＭＤＡ受容体感受性を評価するためにさらに解析した。前述の２電極電位固定法を用いて細胞内の電流を測定した。組換えヒトＮＭＤＡ受容体のグルタミン酸およびＮＭＤＡ感受性を測定するために、種々の濃度のグルタミン酸（０．１−１００μＭ）またはＮＭＤＡ（３− １０００μＭ）を浴に適用（１０−３０μＭグリシン）し、電流応答を記録した。アゴニスト適用の間に浴を洗い流した。受容体の停止（すなわち、長時間の電気生理的記録の間中繰り返し活性化された受容体の不活性化）を追跡するために、実験に１０μＭグリシン＋１０μＭグルタミン酸の中間の適用を含めた。データは用量応答曲線を作成するために使用し、ここから２つのアゴニストのＥＣ₅₀ 値を計算した。１００μＭのＮＭＤＡとともに種々の濃度（０．１−１００μＭ）のグリシンを同時適用してグリシン感受性を測定した。ＮＭＤＡＲ１Ａ、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３またはＮＭＤＡＲ１−Δ３６３転写体を注入した卵母細胞中で発現されたＮＭＤＡ受容体のグルタミン酸剌激について測定したＥＣ₅₀は、それぞれ０．４、０．６および０．５μＭであった。ＮＭＤＡＲ１Ａ、ＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３またはＮＭＤＡＲ１−Δ３６３転写体を注入した卵母細胞中で発現されたＮＭＤＡ受容体のＮＭＤＡ剌激について測定したＥＣ₅₀ は、それぞれ６．３、１０．９および１１．９μＭであった。ＮＭＤＡＲ１ＡまたはＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３単独の転写体を注入した卵母細胞で記録した電流に比較して、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−３（５３）およびＮＭＤＡＲ１ＡまたはＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３のインピトロ転写体を同時注入した卵母細胞中のグルタミン酸やグリシンに応答する電流の強さに顕著な増強が認められた。同様に、ＮＭＤＡＲ１Ａ転写体のみを注入した卵母細胞で記録した電流に比較して、ＮＭＤＡＲ１ＡおよびｐＢＳ−ｈＮＭＤＡＲ２Ｂのインビトロ転写体を同時注入した卵母細胞中のグルタミン酸やグリシンに応答する電流の強さに顕著な増強が認められた。ヒトＮＭＤＡＲ１Ａ、ＮＭＤＡＲ２Ａ、およびＮＭＤＡＲ２Ｃサブユニットの同時発現により産生されるヒトＮＭＤＡ受容体の薬理学的性質を調べるために、ＮＭＤＡＲ１Ａ、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−３、およびｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４（ＮＭＤＡＲ２Ｃ）作成体から調製したインビトロ転写体の各５０ｎｇを卵母細胞に同時注入した。グリシンとＮＭＤＡに対する組換えヘテロマー受容体の感度を前述のように測定した。これらの組換え卵母細胞中の内部電流のグリシン活性化のＥＣ₅₀を、用量応答曲線から０．８７±０．２４μＭ（４つの卵母細胞の平均±標準偏差）であると計算され、これはＮＭＤＡＲ１ＡとｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−３のインビトロ転写体のみを５０ｎｇ注入した卵母細胞のグリシン感度について計算されたＥＣ₅₀とは有意に異なっていた（１．９±０．２６μＭ；ｐ＝０．０００２、片側ｔ検定）。ヒトＮＭＤＡＲ２ＣをヒトＮＭＤＡＲ１ＡとＮＭＤＡＲ２Ａサブユニットと同時発現した時、ＮＭＤＡの感度も上昇した。ＮＭＤＡのＥＣ₅₀は、ＮＭＤＡＲ１ＡとｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ −３のインビトロ転写体を各５０ｎｇ同時注入した卵母細胞の３０．２±９．４ μＭから、ＮＭＤＡＲ１Ａ、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−３およびｐＣＭＶ− ２６−ＮｏｔＩ−２４のインビトロ転写体の各５０ｎｇを同時注入した卵母細胞の１１．９±５．２μＭに移行した（４つの卵母細胞の平均±標準偏差）。実施例１０哺乳動物細胞中のヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットの組換え発現ヒト胎児腎（ＨＥＫ２９３）細胞のような哺乳動物細胞は、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡにより一時的および／または安定にトランスフェクションすることができる（例えば、ＮＭＤＡＲ１サブユニットをコードするＤＮＡ、またはＮＭＤＡＲ１サブユニットをコードするＤＮＡ、ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４、ｐＣＭＶ−ｈＮＭＤＡＲ２Ａ−３（５３）またはｐＣＭＶＰＬ３−ｈＮＭＤＡＲ２ＢのようなＮＭＤＡＲ２サブユニットをコードするＤＮＡ）。ノーザンブロットハイブリダイゼーション、細胞電流の電気生理的記録、Ｃａ²⁺感受性蛍光指示薬をベースにした測定法および［Ｈ³］−ＭＫ８０１結合測定法などの種々の測定法を用いて、ＮＭＤＡ受容体の発現についてトランスフェクション体を解析することができる。Ａ．ＨＥＫ細胞の一時的トランスフェクション２つの一時的トランスフェクションを行なった。１つのトランスフェクションでは、ＨＥＫ２９３細胞をＮＭＤＡＲ１をコードするＤＮＡ（作成体ＮＭＤＡＲ１Ａ）で一時的にトランスフェクションした。もう１つのトランスフェクションでは、ＨＥＫ２９３細胞をＮＭＤＡＲ１（作成体ＮＭＤＡＲ１Ａ）サブユニットをコードするＤＮＡ（作成体ＮＭＤＡＲ１Ａ）とＮＭＤＡＲ２Ｃ（ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４）サブユニットをコードするＤＮＡで一時的に同時トランスフェクションを行なった。両トランスフェクション体において、〜２×１０⁶ＨＥＫ細胞を１９μｇのプラスミドで一時的トランスフェクションを行なった［ウィグラー（Wigler）ら、（1979）Proc．Natl．Acad．Sci．USA76:1373-1376］。さらにＣＭＶプロモーターに融合した大腸菌β−ガラクトシダーゼ遺伝子を含有する、プラスミドｐＣＭＶβｇａｌ（クロンテック・ラボラトリーズ（Clontech Laboratories）、パロアルト（Palo Alto）、カリホルニア州）１μgを、レポーター遺伝子として同時トランスフェクションして、トランスフェクションの効率を追跡した。β−ガラクトシダーゼとＸ−ｇａｌ基質を含む反応の生成物の直接染色により、β−ガラクトシダーゼ発現についてトランスフェクション体を解析した［ジョーンズ（Jones）（1986）EMBO 5:3133-3142］。トランスフェクション体はまた、β−ガラクトシダーゼ活性の測定によるβ−ガラクトシダーゼ発現について解析することもできる［ミラー（Miller）（1972）分子遺伝子学実験（Experiments in Molecular Genetics）のPP.352-355，コールド・スプリング・ハーバー・プレス（Cold Spring Harbor Press）］。ＨＥＫ細胞のこれらのトランスフェクションの効率は、標準的効率に典型的なものであった（すなわち、〜５０％）。Ｂ．哺乳動物細胞の安定なトランスフェクションＨＥＫ２９３細胞のような哺乳動物細胞は、リン酸カルシウムトランスフェクション法を用いて安定にトランスフェクションすることができる［Current Prot ocols in Molecular Biology，Vol.1，ワイリー・インターサイエンス（Wiley I nter-Science）、増刊14号、単元9.1.1.-9.1.9（1990）］。それぞれ１−２×１０⁶細胞を含有する１０ｃｍのプレートを、ＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡ約１９μｇと選択マーカー（例えば、ネオマイシン−耐性遺伝子（すなわち、ｐＳＶ２ｎｅｏ））をコードするＤＮＡ１μｇを含有する培地中で、１０ｍｌのＤＮＡ／リン酸カルシウム沈殿物でトランスフェクションする。典型的には１μｇ／ｍｌのＧ４１８を含有する培地中での〜１４日間の増殖の後、コロニーが形成され、クローニグシリンダーを用いて個々に単離される。次に単離物を限界希釈を行いスクリーニングして、例えば後述の方法を用いてＮＭＤＡ受容体を発現するものを同定する。Ｃ．トランスフェクション体の解析１．ノーザンブロットハイブリダイゼーション解析ＮＭＤＡＲ１とｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４を同時トランスフェクションした〜１×１０⁷ＨＥＫ細胞から全ＲＮＡを単離し、ＲＮＡの５−１０μｇをノーザンブロットハイブリダイゼーション解析に使用した。ヒトニューロン性ＮＭＤＡサブユニットコーディングプラスミドからの断片をランダムにプライムし、³² Ｐ−ｄＣＴＰクレノウ（Klenow）取り込みにより標識し、プローブとして使用した。ノーザンブロットハイブリダイゼーションと洗浄条件は下記の通りである：５×ＳＳＰＥ、５×デンハルツ溶液、５０％ホルムアミド、４２℃でハイブリダイゼーションの後、０．２×ＳＳＰＥ、０．１％ＳＤＳ、６５℃で洗浄。これらの試験の結果は、トランスフェクション体は検出できるレベルのＮＭＤＡＲ１と適当なサイズのＮＭＤＡＲ２ＣｍＲＮＡ（ｃＤＮＡのサイズに基づく）を発現することを示していた。２．蛍光指示薬に基づく測定ＮＭＤＡ受容体によるリガンドゲートの活性化により、ＣＡ²⁺のような陽イオン（１価および２価ともに）が受容体チャネルを介して流入する。チャネルを介してカルシウムが細胞内に入ると、次に細胞内に保存されているカルシウムの放出が誘導される。チャネルを介する１価の陽イオンの流入も、膜の脱分極と引き続く電位依存性カルシウムチャネルの活性化により、細胞質性カルシウムレベルを上昇させる。従って細胞内カルシウム濃度の一時的上昇の検出法は、機能性ＮＭＤＡ受容体発現の解析に応用できる。細胞内カルシウム濃度を測定する１つの方法は、カルシウム感受性蛍光指示薬に基づく。フルオ−３（fluo-3）（カタログ番号Ｆ−１２４１、モレキュラー・プローブズ社（Molecular Probes Inc．）、ユージーン（Eugene）、オレゴン州）のようなカルシウム感受性指示薬は、膜透過性であるアセトキシメチルエステルとして入手できる。アセトキシメチルエステル型の指示薬が細胞内に入ると、サイトゾル性エステラーゼによりエステル基は除去され、このため遊離の指示薬はサイトゾル内に捕捉される。遊離の指示薬とカルシウムが相互作用すると、指示薬の蛍光強度が増加する。従って、指示薬を含有する細胞の細胞内Ｃａ²⁺濃度の上昇は蛍光の増強として直接発現される。ＮＭＤＡ受容体を測定するための自動蛍光検出装置が、本願と同一の者に譲渡された係属中の米国特許出願第０７／８１２，２５４号およびその対応するＰＣＴ特許出願ＵＳ９２／１１０９０号（参考のためその全体が本明細書中に引用される）に記載されている。ＮＭＤＡＲ１またはＮＭＤＡＲ１とＮＭＤＡＲ２サブユニットをコードするＤＮＡでトランスフェクションされた哺乳動物細胞は、自動蛍光指示薬に基づく測定法を用いて機能性組換えＮＭＤＡ受容体の発現について解析することができる。この測定法は以下の通りである。非トランスフェクション哺乳動物宿主細胞（またはｐＣＭＶ−Ｔ７−２で一時的にトランスフェクションした宿主細胞）およびＮＭＤＡＲ１±ＮＭＤＡＲ２サブユニットＤＮＡでトランスフェクションした哺乳動物細胞を、２．５×１０⁵ 細胞／ウェルの濃度でポリ−Ｌ−リジンでプレコーティングし、２０μＭフルオ −３、０．２％プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１２７をＨＢＳ（１２５ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＫＣｌ、１．８ｍＭＣａＣｌ₂、０．６２ｍＭＭｇＣｌ₂、２０ｍＭグルコース、２０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）中に含有する培地中で、２０℃で２時間インキュベートしてフルオ−３を充填した９６ウェルマイクロタイタープレート（ヌンク（Nunc）、カタログ番号１−６７０８、アラメダ・インダストリーズ（Alameda Industries）、エスコンジド（Esco ndido）、カリホルニア州）に広げる。次に細胞を測定緩衝液（すなわち、ＨＢS ）で洗浄する。次にマイクロタイタープレートを蛍光プレートリーダー（例えば、フルオロスカン（Fluoroskan）II、ラボ・プロダクツ・インターナショナル社（Lab Products International，Ltd.）、ラレー（Raleigh）、ノースカロライナ州）に入れ、各ウェルの基礎蛍光を測定し記録してから、ウェルに１０μＭグリシンと１０μＭグルタミン酸を添加する。アゴニストの添加後ウェルの蛍光を繰り返し（０．６３秒間隔で７５回読む）追跡する。トランスフェクションしていない宿主細胞の蛍光は、好ましくはグリシンやグルタミン酸の添加後変化しない。すなわち、宿主細胞は内因性興奮性アミノ酸受容体を発現してはならない。細胞表面に充分な数の機能性ＮＭＤＡ受容体が発現されていて蛍光が迅速に読まれた場合、グリシンとグルタミン酸の添加後ＮＭＤＡＲＩ±ＮＭＤＡＲ２サブユニットＤＮＡでトランスフェクションした哺乳動物細胞の蛍光は上昇するであろう。いくつかの哺乳動物宿主細胞の膜の静止期の電位は比較的陽性である（例えば、-35mV）。比較的陽性の電位ではいくつかのＮＭＤＡ受容体の活性化はかなり低下しているため、蛍光指示薬に基く測定法を用いてＮＭＤＡ受容体活性について細胞を測定する前に、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットをコードするＤＮＡでトランスフェクションした細胞の膜の静止電位を下げる必要があるかも知れない。このためには、ＮＭＤＡ受容体アゴニストを加えて測定を開始する前にトランスフェクションした細胞にバリノマイシン（vallinomycin）（〜１０μＭ）を加える。３．ＮＭＤＡ受容体リガンド結合測定法ＮＭＤＡＲ１±ＮＭＤＡＲ２サブユニットＤＮＡでトランスフェクションした哺乳動物細胞を、［³Ｈ］−ＭＫ８０１結合について分析することができる。 ³Ｈ−ＣＧＰ３９６５３を用いるＮＭＤＡ受容体の追加のリガンド結合測定法を以下に記す。ラット脳の膜を陽性対照として結合測定法中に含める。ａ．膜の調製ｉ．ラット脳皮質からのバッフィーコート（buffy coat）ホモゲネートジョーンズ（Jones）ら［（1989）J.Pharmacl.Meth．21:161］により記載されたように、ラット脳皮質からバッフィーコート膜を調製する。簡単に説明すると新たに融解した１０個のラットの凍結した脳から皮質を切開し、重量を測定する。この組織をガラスホモゲナイズチューブ中でテフロン棒を用いて２０部の０．３２Ｍ氷冷ショ糖中でホモゲナイズする。この懸濁物をデカントし、１、０００ｇで１０分間４℃で遠心分離する。上澄液をデカントし、２０、０００ｇで２０分間４℃で遠心分離する。このペレットをポリトロン（Polytoron）とともに設定６で３０秒間２０部の氷冷蒸留水に再懸濁する。この懸濁物を８、０００ｇで２０分間４℃で遠心分離する。バッフィーコートペレットを上澄液で静かに洗浄し、４８、０００ｇで２０分間４℃で遠心分離する。ペレットをポリトロン（Po lytoron）とともに２０部の氷冷蒸留水に再懸濁し、再び４８、０００ｇで２０分間遠心分離する。洗浄をもう一度繰り返す。最後の懸濁物を分注し、遠心分離する。各ペレットを−２０℃で１２時間または使用するまでそれ以上凍結保存することができる。ｉｉ．トランスフェクションした哺乳動物細胞およびトランスフェクションしてない哺乳動物細胞からの膜トランスフェクションした哺乳動物細胞およびトランスフェクションしてない哺乳動物細胞から膜を調製するために、細胞を組織培養プレートから掻き取って、プレートを５mlのＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水：１３７ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、１０ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄、１．７ｍＭＫＨ₂ＰＯ₄）で洗浄する。卓上遠心分離機で細胞を低速度で遠心分離し、細胞ペレットをＰＢＳで洗浄する。ポリトロンを用いて設定３〜６で３０秒間、細胞ペレットを２０ｍｌの１０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液、ｐＨ７．４に再懸濁する。細胞懸濁物を４８、０００ｇで２０秒間４℃で遠心分離する。上澄液を廃棄し、ペレットを−２０℃ で１２時間またはそれ以上凍結保存する。ｂ．ＮＭＤＡ受容体への［³Ｈ］−ＭＫ８０１結合ＮＭＤＡ受容体への［³Ｈ］−ＭＫ８０１の結合は、ウォン（Won）ら［（1986 ）Proc．Natl．Acad．Sci．USA 83:7104］の記載の方法を少し変更して行う。すなわち測定法の日にラット脳と哺乳動物細胞（トランスフェクションしたものとトランスフェクションしてないもの）膜のペレットを、１０ｍｌのシリンジと２１ゲージの針を用いて５０部の１０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液、ｐＨ７．４に再懸濁し、３７℃で２０分間インキュベートする。上澄液を４８，０００ｇで２０分間４℃で遠心分離する。このペレットを２ｍｌの１０ｍＭＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４に再懸濁し、上記のように遠心分離する。洗浄をもう一度繰り返し、ペレットを１０ｍｌの１０ｍＭＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４に再懸濁する。バイオラッド・ブラッドフォード（Biorad Bradford）試薬を用いて蛋白濃度を測定する。ペレットを最後に測定緩衝液（１０ｍＭＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４）に１mg／ｍ lで再懸濁する。結合試験のために、膜懸濁物を２重測定で総量０．５ｍｌの測定緩衝液（１０ｍＭＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４）中で２．５ｎＭの［³Ｈ］−ＭＫ８０１（ニューイングランド・ニュークレア（New England Nuclear）、ボストン、マサチューセッツ州）で、１０μＭのグルタミン酸と１０μＭのグリシンの存在下または非存在下で、２３℃で６０または１２０分間インキュベートする。０．０５％のポリエチレンイミン中にあらかじめ２−３時間浸漬したワットマンＧＦ／Ｃフィルターを通して高速濾過により、遊離の放射能から結合した放射能を分離する。フィルターを３ｍｌの氷冷測定緩衝液で２回洗浄する。フィルターを乾燥し、１０ｍｌのシンチレーション溶液を含有するシンチレーションバイアルに移す。バイアルをボルテックス混合して、ベックマン（Beckman）シンチレーション・カウンター中で放射能を測定する。特異的結合を求めるために、すべての結合から、１０μＭのＭＫ８０１の存在下で観察される非特異結合を引く。ラットの脳皮質のバッフィーコート膜は、［³Ｈ］−ＭＫ８０１の特異的飽和結合を示した。グリシンとグルタミン酸の存在下で、全結合対非特異結合（Ｓ：Ｎ比）は２８：１であり、グルタミン酸とグリシンの非存在下ではＳ：Ｎ比は５：１であった。すなわちラットＮＭＤＡ受容体に対するＭＫ８０１の結合は、グルタミン酸産生経路アゴニストにより増強されている。ラット脳の膜への［³Ｈ］−ＭＫ８０１結合のスキャチャード（Scatchard）解析は、この測定法の感度が90フエトモルの受容体であることを示していた。Ｃ．ＮＭＤＡ受容体への［³Ｈ］−ＣＧＰ３９６５３結合ラット脳の膜への［³Ｈ］−ＣＧＰ３９６５３の結合は、シルス（Sills）ら［（1991）Eur.J.Pharmacol．192:19］の記載する方法に従って行う。バッフィーコート膜のペレットを、５０部の５ｍＭトリス−塩酸（１０ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．７を含有）に再懸濁し、３７℃で１０分間インキュベートする。上澄液を４８，０００ｇで１０分間４℃で遠心分離する。洗浄をもう一度行い、ペレットを１０ｍｌの５ｍＭトリス−塩酸（１０ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．７を含有）に再懸濁する。このラット脳の膜懸濁物を２重測定または３重測定で総量０．５ｍｌの測定緩衝液（５ｍＭトリス−塩酸、ｐＨ７．７）中で、２．０ｎＭの［³Ｈ］−ＣＧＰ３９６５３（ニューイングランド・ニュークレア（New England Nucl ear））と、０℃で６０分間インキュベートする。１００μＭのグルタミン酸の存在下で非特異結合を求める。濾過マニホールドを用いて、０．０５％のポリエチレンイミン中に２−３時間あらかじめ浸漬したＧＦ／Ｃフィルターを通して真空濾過により、遊離の放射能から結合した放射能を分離する。氷冷した緩衝液を各３ｍｌで２回洗浄して非結合放射能を除く。フィルターを乾燥し、１０ｍｌのシンチレーション溶液を含有するシンチレーションバイアルに移す。バイアルをボルテックス混合して、ベックマン（Beckman）シンチレーション・カウンター中で放射能を測定する。特異的結合を求めるために、すべての結合から、１００ μＭのグルタミン酸の存在下で観察される非特異結合を引く。［³Ｈ］−ＣＧＰ３９６５３結合をまず、膜濃度の関数として測定した。２ｎｍの［³Ｈ］−ＣＧＰ３９６５３の存在下で、蛋白濃度２００μｇまで、膜濃度の上昇に伴い特異的結合は比例して増加した。［³Ｈ］−ＣＧＰ３９６５３結合の飽和解析は、１５０μｇのラットのバッフィーコートホモゲネートを、増加する濃度の［³Ｈ］−ＣＧＰ３９６５３と４℃ で６０分間インキュベートすることにより行なった。スキャチャード（Scatchar d）解析は、Ｂｍａｘ値が０．６９±０．０９ピコモル／ｍｇであり、Ｋｄ値が１２．３±０．１２ｎＭの単一の結合部位であることを示していた。本発明を好適な実施態様に関連して説明したが、ここに記載され特許請求される本発明の精神と範囲を逸脱することなく、その修飾や変更が可能であることは理解されるであろう。配列の要約配列番号１は、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットであるＮＭＤＡＲ１Ａをコードするヌクレオチド配列、およびその推定されるアミノ酸配列である。配列番号１Ａは、配列番号１のヌクレオチド３２０−３４０２よりなる、クローンＮＭＤＡ１０にコードされる３０８３ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号１Ａは、配列番号１の３１９の５’ヌクレオチドと８９６の３’ヌクレオチドを含有しない点で配列番号１とは異なる。配列番号１Ｂは、配列番号１のヌクレオチド１−２９６１とヌクレオチド３３２５−３５１８よりなる、クローンＮＭＤＡ１１によりコードされる３１５５ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号１Ｂは、配列番号１の３’部分から３６３ヌクレオチド（すなわち、配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４が欠失）が欠失し、さらに配列番号１の７８１の３’末端ヌクレオチドが欠如している点で、配列番号１とは異なる。配列番号１Ｃは、配列番号１のヌクレオチド556-831と追加の６３ヌクレオチド（配列番号３に記載）、そして配列番号１のヌクレオチド８３２−９８４、１１８９−２９６１および３３２５−３５９９よりなる、クローンＮＭＤＡ７にコードされる２５４２ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号１Ｃは、配列番号１の５’最末端の５５５ヌクレオチドを含有せず、配列番号１のヌクレオチド９８５−１１８８の２０４ヌクレオチドを含有せず、配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４の３’末端の３６３ヌクレオチドを含有せず、配列番号１の３’最末端の７００ヌクレオチドを含有せず、一方これは配列番号１のヌクレオチド８３１と８３２の間に追加の６３ヌクレオチド（配列番号３）を挿入して含有する点で、配列番号１とは異なる。配列番号１Ｄは、配列番号１のヌクレオチド２６１７−２９６１とヌクレオチド４０４９−４２９８よりなる、クローンＮＭＤＡ３にコードされる５９３ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号１Ｄは、配列番号１の２６１６の５’ ヌクレオチドを含有せず、３’部分から１０８７ヌクレオチド（すなわち、配列番号１のヌクレオチド２９６２−４０４８が欠失）が欠失している点で、配列番号１とは異なる。配列番号１Ｅは、配列番号１のヌクレオチド１−２９６１とヌクレオチド３３２５−４２９８よりなる、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Δ３６３をコードするヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号１Ｅは、配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４の３６３ヌクレオチドを含有しない点で、配列番号１とは異なる。配列番号１Ｆは、配列番号１のヌクレオチド１−２９６１とヌクレオチド４０４９−４２９８よりなる、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Δ１０８７をコードするヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号１Ｆは、配列番号１のヌクレオチド２９６２−４０４８の１０８７ヌクレオチドを含有しない点で、配列番号１とは異なる。配列番号１Ｇは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｇは、配列番号１のヌクレオチド８３１と８３２の間に追加の６３ヌクレオチド（配列番号３）をさらに挿入して含有する、配列番号１と同じ配列である。配列番号１Ｈは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ ２０４をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｈは、配列番号１のヌクレオチド９８５−１１８８の２０４ヌクレオチドを含有しない点を除いて、配列番号１Ｇと同じ配列である。配列番号１Ｉは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ ２０４−Δ３６３をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｉは、配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４の３６３ヌクレオチドを含有しない点を除いて、配列番号１Ｈと同じ配列である。配列番号１Ｊは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Δ２０４をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｊは、配列番号１のヌクレオチド９８５−１１８８の２０４ヌクレオチドを含有しない点を除いて、配列番号１と同じ配列である。配列番号１Ｋは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Δ２０４Δ ３６３をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｋは、配列番号１のヌクレオチド９８５−１１８８の２０４ヌクレオチドを含有せず、配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４の３６３ヌクレオチドを含有しない点で、配列番号１とは異なる。配列番号１Ｌは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Δ２０４Δ １０８７をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｌは、配列番号１のヌクレオチド９８５−１１８８の２０４ヌクレオチドを含有せず、配列番号１のヌクレオチド２９６２−４０４８の１０８７ヌクレオチドを含有しない点で、配列番号１とは異なる。配列番号１Ｍは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ ３６３をコードするヌクレオチド配列である。配列番号ＩＭは、配列番号１のヌクレオチド２９６２−３３２４の３６３ヌクレオチドを含有しない点を除いて、配列番号１Ｇと同じ配列である。配列番号１Ｎは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ １０８７をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｎは、配列番号１のヌクレオチド２９６２−４０４８の１０８７ヌクレオチドを含有しない点を除いて、配列番号１Ｇと同じ配列である。配列番号１Ｐは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ１−Ｉ６３−Δ ２０４−Δ１０８７をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１Ｐは、配列番号１のヌクレオチド２９６２−４０４８の1０８７ヌクレオチドを含有しない点を除いて、配列番号１Ｈと同じ配列である。配列番号２は、配列番号１に示すヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ａは、配列番号１Ａのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットの１つの部分のアミノ酸配列である。配列番号２Ｂは、配列番号１Ｂのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｃは、配列番号１Ｃのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットの１つの部分のアミノ酸配列である。配列番号２Ｄは、配列番号１Ｄのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットの１つの部分のアミノ酸配列である。配列番号２Ｅは、配列番号１Ｅのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｆは、配列番号１Ｆのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｇは、配列番号１Ｇのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｈは、配列番号１Ｈのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｉは、配列番号１Ｉのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｊは、配列番号１Ｊのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｋは、配列番号１Ｋのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｌは、配列番号１Ｌのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｍは、配列番号１Ｍのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｎは、配列番号１Ｎのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号２Ｐは、配列番号１Ｐのヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号３は、配列番号１Ｃ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、１Ｍ、１Ｎ、および１Ｐに存在する63ヌクレオチド挿入体をコードするヌクレオチド配列である。配列番号４は、配列番号３に記載の挿入体によりコードされる21アミノ酸配列である。配列番号５は、ヒトＮ−メチル-Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットであるＮＭＤＡＲ２Ｃをコードするクローン（ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４）のヌクレオチド配列、およびその推定されるアミノ酸配列である。配列番号５Ａは、配列番号５のヌクレオチド９３１−２３５０と２４０２−３３０７よりなる、クローンＮＭＤＡ２１にコードされる２０２６ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号５Ａは、配列番号５の９３０の５’ヌクレオチドと配列番号５の２３５１−２４０１位に位置する５１ヌクレオチド、および配列番号５の１０６１の３’ヌクレオチドを含有しない点で、配列番号５とは異なる。配列番号５Ｂは、配列番号５のヌクレオチド３６７−１３００と追加の１１ヌクレオチド（配列番号９に記載）、そして配列番号５のヌクレオチド１３０１− １９５９と１９７５−４０６８よりなる、クローンＮＭＤＡ２２にコードされる３６９８ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号５Ｂは、配列番号５の３６６の５’最末端ヌクレオチドを含有せず、配列番号５のヌクレオチド１３００と１３０１の間に追加の１１ヌクレオチドが挿入されており、かつさらに配列番号５の残基１９６０から残基１９７４までの１５ヌクレオチドを欠如している点で、配列番号５とは異なる。配列番号５Ｃは、配列番号５のヌクレオチド８６１−１３００と追加の１１ヌクレオチド（配列番号９）、そして配列番号５のヌクレオチド１３０１−２３５０、追加の２４ヌクレオチド（配列番号７に記載）および配列番号５のヌクレオチド２３５１−４０６８よりなる、クローンＮＭＤＡ２４にコードされる３２４３ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号５Ｃは、配列番号５の８６０の５’最末端ヌクレオチドを含有せず、配列番号５のヌクレオチド１３００と１３０１の間に追加の１１ヌクレオチド（配列番号９）が挿入されており、かつヌクレオチド２３５０と２３５１の間に追加の２４ヌクレオチド（配列番号７）が挿入されている点で、配列番号５とは異なる。配列番号５Ｄは、配列番号５のヌクレオチド１−３０２５よりなる、クローンＮＭＤＡ２６にコードされる３０２５ヌクレオチド配列である。すなわち、配列番号５Ｄは、配列番号５の１０４３の３’末端ヌクレオチドを含有しない点で、配列番号５とは異なる。配列番号５Ｅは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットｐＣＭＶ−２６−ＳｃａＩ −２４をコードするヌクレオチド配列であり、配列番号５のヌクレオチド２３５０と２３５１の間に２４ヌクレオチド（配列番号７）を挿入している点のみで、配列番号５とは異なる。配列番号５Ｆは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットｐＣＭＶ−２６−ＳｃａＩ −２２をコードするヌクレオチド配列であり、配列番号５のヌクレオチド１９６０−１９７４が欠失している点のみで、配列番号５と異なる。配列番号５Ｇは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットｐＣＭＶ−２６−ＳｃａＩ −ＮｏｔＩ−２４をコードするヌクレオチド配列であり、配列番号５のヌクレオチド２３５１−２４０１が欠失している点のみで、配列番号５と異なる。配列番号５Ｈは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ２Ｃ−Δ１５− １２４をコードするヌクレオチド配列である。配列番号５Ｈは、配列番号７に記載の２４ヌクレオチド挿入体を、配列番号５のヌクレオチド２３５０と２３５１の間にさらに含有する点を除いて、配列番号５Ｆと同じ配列である。配列番号５Ｉは、ヒトＮＭＤＡ受容体サブユニットＮＭＤＡＲ２Ｃ−Δ１５− Δ５１をコードするヌクレオチド配列である。配列番号５１は、配列番号５のヌクレオチド１９６０−１９７４の１５ヌクレオチドを含有しない点を除いて、配列番号５Ｇと同じ配列である。配列番号６は、配列番号５に記載のＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号６Ａは、配列番号５Ａのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットの１つの部分のアミノ酸配列である。配列番号６Ｂは、配列番号５Ｂのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットの１つの部分のアミノ酸配列である。配列番号６Ｃは、配列番号５Ｃのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットの１つの部分のアミノ酸配列である。配列番号６Ｄは、配列番号５Ｄのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットの１つの部分のアミノ酸配列である。配列番号６Ｅは、配列番号５Ｅのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号６Ｆは、配列番号５Ｆのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号６Ｇは、配列番号５Ｇのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号６Ｈは、配列番号５Ｈのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号６Ｉは、配列番号５Ｉのヌクレオチド配列によりコードされるＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号７は、配列番号５Ｃ、５Ｅ、および５Ｈに存在する２４挿入体をコードするヌクレオチド配列である。配列番号８は、配列番号７に記載の挿入体のヌクレオチド２−２２によりコードされる７アミノ酸配列である。この挿入体はコドン内に導入されるため、挿入体自身は７アミノ酸のみをコードする。ヌクレオチド挿入体の末端残基は、挿入の部位で隣接配列とコドンを形成するのに参加する。配列番号９は、配列番号５Ｂと５Ｃに存在する１１ヌクレオチド挿入体をコードするヌクレオチド配列である。配列番号１０は、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットであるＮＭＤＡＲ２Ａをコードするヌクレオチド配列である。配列番号１１は、配列番号１０に記載のヌクレオチド配列によりコードされる、ＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号１２は、クローンＮＭＤＡ２７の５’非翻訳配列の７１ヌクレオチドと該クローンの開始コドン（ヌクレオチド７２−７４）のヌクレオチド配列である。配列番号１３は、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットであるＮＭＤＡＲ２Ｂをコードするクローンのヌクレオチド配列である。配列番号１４は、配列番号１３に記載のＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号１５は、ヒトＮ−メチル-Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットであるＮＭＤＡＲ２Ｄをコードするクローンのヌクレオチド配列である。配列番号１６は、配列番号１５に記載のＮＭＤＡ受容体サブユニットのアミノ酸配列である。配列番号１７−２０は、ヌクレオチド２９５７と３１６６の間でＧＣ含量が低下している、ＮＭＤＡＲ２Ｃクローン（ｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４−ＧＣＭＯＤ）の調製に使用される４つの合成オリゴヌクレオチドである。配列番号２１は、ＮＭＤＡＲ２ＣクローンｐＣＭＶ−２６−ＮｏｔＩ−２４− ＧＣＭＯＤ（配列番号５のヌクレオチド２９６６−３１６０を置換している）の１９５塩基対挿入体のヌクレオチド配列である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｐ 21/08 6807−4ＢＣ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 9453−4Ｂ 1/68 Ａ 1/68 9281−4ＢＣ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者エリス，スチーブンビー. アメリカ合衆国 92129 カリフォルニア州サンディエゴ，オビエドストリート 8939 (72)発明者リアウ，チェンワングアメリカ合衆国 92129 カリフォルニア州サンディエゴ，サリックスプレース 7668 (72)発明者ル，チン − チュンアメリカ合衆国 92122 カリフォルニア州サンディエゴ，ナンバー 22，アベニダナビダッド 8032

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体サブユニットをコードする単離されたＤＮＡ。２．ＮＭＤＡ受容体サブユニットはＮＭＤＡＲ１サブユニットである、請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ。３．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号２、２Ｂ、２Ｅ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ、２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ、２Ｍ、２Ｎ、または２Ｐのアミノ酸配列をコードする、請求の範囲第２項に記載のＤＮＡ。４．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号２、２Ｂ、２Ｅ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｈ、または２Ｉのアミノ酸配列をコードする、請求の範囲第２項に記載のＤＮＡ。５．ＤＮＡのヌクレオチドは、高緊縮性条件下で、配列番号１、１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ、１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、１Ｊ、１Ｋ、１Ｌ、１Ｍ、１Ｎ、または１Ｐの任意の１つの配列にハイブリダイズする、請求の範囲第２項に記載のＤＮＡ。６．ＤＮＡのヌクレオチドは、高緊縮性条件下で、配列番号１、１Ｂ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、または１Ｐの配列にハイブリダイズする、請求の範囲第２項に記載のＤＮＡ。７．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１、１Ｂ、１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、１Ｊ、１Ｋ、１Ｌ、１Ｍ、１Ｎ、または１Ｐの任意の１つと実質的に同じヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第２項に記載のＤＮＡ。８．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１、１Ｂ、１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、または１Ｐと実質的に同じヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第２項に記載のＤＮＡ。９．ＮＭＤＡ受容体サブユニットはＮＭＤＡＲ２サブユニットである、請求の範囲第１項に記載のＤＮＡ。１０．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号６、６Ｅ、６Ｆ、６Ｇ、６Ｈ、または６１のアミノ酸配列をコードする、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１１．ＤＮＡのヌクレオチドは、高緊縮性条件下で、配列番号５、５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、５Ｇ、５Ｈ、または５Ｉの配列の任意の１つにハイブリダイズする、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１２．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号５、５Ｅ、５Ｆ、５Ｇ、５Ｈ、または５１の配列の任意の１つの配列と実質的に同じヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１３．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１４のアミノ酸配列をコードする、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１４．ＤＮＡのヌクレオチドは、高緊縮性条件下で、配列番号１３の配列にハイブリダイズする、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１５．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１３と実質的に同じヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１６．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１６のアミノ酸配列をコードする、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１７．ＤＮＡのヌクレオチドは、高緊縮性条件下で、配列番号１５の配列にハイブリダイズする、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１８．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１５と実質的に同じヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。１９．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１１のアミノ酸配列、またはクローンＮＭＤＡ５７（ＡＴＣＣ整理番号75442）のＮＭＤＡＲ２Ａをコードする部分のアミノ酸配列をコードする、請求の範囲第９項に記載のＤＮＡ。２０．ＤＮＡのヌクレオチドは、高緊縮性条件下で、クローンＮＭＤＡ５７（ＡＴＣＣ整理番号75442）のＮＭDＡＲ２Ａをコードする部分の配列番号１０にハイブリダイズする、請求の範囲第１９項に記載のＤＮＡ。２１．ＤＮＡのヌクレオチドは、配列番号１０またはクローンＮＭＤＡ５７（ＡＴＣＣ整理番号75442）のＮＭＤＡＲ２Ａをコードする部分と実質的に同じヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第１９項に記載のＤＮＡ。２２．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡによりコードされる単離された蛋白。２３．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡの少なくとも１４個の隣接する塩基よりなる核酸プローブ。２４．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡに相補的な単離されたｍＲＮＡ。２５．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡを含有する真核細胞。２６．請求の範囲第１項に記載のＤＮＡを発現する真核細胞。２７．機能性異種ＮＭＤＡ受容体を発現する、請求の範囲第２６項に記載の細胞。２８．請求の範囲第２４項のｍＲＮＡを発現する、両生類の卵母細胞。２９．ヒトＤＮＡを請求の範囲第２３項に記載のプローブと接触させ、ここでこの接触は高緊縮性ハイブリダイゼーション条件下で行われるものであり、このプローブにハイブリダイズするＤＮＡを同定することよりなる、ヒトＮ−メチル −Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体蛋白サブユニットをコードするＤＮＡの同定方法。３０．請求の範囲第２７項に記載の細胞を競合的結合測定法において使用することよりなる、ヒトＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体に結合する化合物の同定方法。３１．ヒトＮＭＤＡ受容体の活性を調節する化合物を同定するためのバイオアッセイであって、（ａ）請求の範囲第２７項に記載の細胞を、受容体のイオンチャネル活性を調節する能力を測定しようとする少なくとも１つの化合物に暴露させて、（ｂ）イオンチャネル活性の変化について細胞を追跡することよりなる上記バイオアッセイ。３２．請求の範囲第３１項に記載のバイオアッセイにより同定される少なくとも１つの化合物の有効量に受容体を接触させることよりなる、ヒトＮ−メチル− Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体のイオンチャネル活性の調節方法。３３．請求の範囲第３１項記載の方法により同定される、ヒトＮＭＤＡ受容体のアゴニストまたはアンタゴニスト。３４．請求の範囲第２２項に記載の蛋白、またはヒトＮＭＤＡＲサブユニットにユニークなその部分に対して産生された抗体。３５．抗体はモノクローナル抗体である、請求の範囲第３４項に記載の抗体。３６．受容体を請求の範囲第３４項に記載の有効量の抗体に接触させることよりなる、ヒトＮ−メチル-Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体のイオンチャネル活性の調節方法。