JPH02226066A - Reversed phase filler for open column - Google Patents
Reversed phase filler for open columnInfo
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Landscapes
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
（技術分野）
本発明は、オープンカラム用逆相型充填剤に係り、特に
シリカゲルの細孔内部が疎水性とされる一方、その外表
面が部分的に親水性とされて、極性溶媒に対する親和性
が向上せしめられた、オープンカラムクロマトグラフィ
ーに好適に用いられる逆相型充填剤に関するものである
。Detailed Description of the Invention (Technical Field) The present invention relates to a reversed-phase packing material for open columns, and in particular, the inside of the pores of silica gel is hydrophobic, while the outer surface is partially hydrophilic. The present invention relates to a reversed-phase packing material suitable for use in open column chromatography, which has improved affinity for polar solvents.
（背景技術）
従来から、オープンカラムクロマトグラフィー法は、ク
ロマト管に充填剤を入れ、そして展開液を自然流下する
だけで分離カラムの調整が出来、その後直ちに分取が可
能となることから、使用が容易で、また薄層クロマトグ
ラフィーでの結果を直ちにオープンカラムクロマトグラ
フィーの分取条件に移行出来ること、更にクロマト管の
他には、送液ポンプ等のような特別な装置を必要としな
いこと等から、試料の簡易な精製方法として広く用いら
れてきている。(Background technology) Open column chromatography has traditionally been used because the separation column can be prepared by simply placing a packing material in a chromatography tube and allowing the developing solution to flow down, and then fractionation can be performed immediately. It is easy to use, the results from thin layer chromatography can be immediately transferred to the preparative conditions for open column chromatography, and there is no need for special equipment such as a liquid pump or the like other than the chromatography tube. For this reason, it has been widely used as a simple method for purifying samples.
このオープンカラムクロマトグラフィーに適用され得る
クロマトグラフィー的手法としては、大別すると、一般
に、ヘキサン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル等
の極性の低い展開溶媒を使用して、極性の高い、シリカ
ゲル、アルミナ、セルロース粉末等の充填剤を用いる順
相クロマトグラフィーと、メタノール、アセトニトリル
、水。The chromatographic techniques that can be applied to this open column chromatography can be roughly divided into: generally using a developing solvent with low polarity such as hexane, benzene, chloroform, or ethyl acetate; Normal phase chromatography using packing materials such as cellulose powder, methanol, acetonitrile, and water.
緩衝液等或いは水溶性有機溶媒と水の混合液のような極
性の高い展開液と、極性が低く、疎水性の高い充填剤と
を用いる逆相クロマトグラフィーがあるが、実際にオー
ブン力ラムクロマトグラフィ−に使用される充填剤の大
部分は、順相型充填剤である。これは、順相クロマトグ
ラフィーに使用する充填剤が安価であること、分離にお
いて高い立体選択性が得られること、展開液の組成を変
更することで保持時間が容易に調節出来ること、展開液
が揮発性である場合が多く、分取後の試料処理が容易な
こと等を理由としている。There is reversed-phase chromatography, which uses a highly polar developing solution such as a buffer solution or a mixture of a water-soluble organic solvent and water, and a less polar, highly hydrophobic packing material. Most of the fillers used in - are normal phase fillers. This is because the packing materials used in normal phase chromatography are inexpensive, high stereoselectivity can be obtained in separation, retention time can be easily adjusted by changing the composition of the developing solution, and the developing solution is The reason for this is that they are often volatile and sample processing after fractionation is easy.
ところで、オープンカラムクロマトグラフィーに逆相型
充填剤を使用して逆相クロマトグラフィーを実施する場
合には、順相クロマトグラフィーでは問題とはならない
、展開液との親和性が重要となり、使用される展開液に
制限を受けることが考えられる。By the way, when performing reversed-phase chromatography using a reversed-phase packing material in open column chromatography, affinity with the developing solution is important, which is not a problem with normal-phase chromatography. It is possible that there are restrictions on the developing solution.
即ち、逆相クロマトグラフィーに適用され得る展開液の
種類は極めて広いが、汎用的に使用される展開液は、通
常、その組成がｌＯ〜８０％程度において有機溶媒を含
む水溶液であって、この有機溶媒濃度を変更することに
より分離や保持時間を調節しているのであるが、逆相型
オープンカラムクロマトグラフィーに極性の高い展開液
を使用した場合には、充填剤が展開液に浮かぶ現象が起
こるという極めて重大な問題が惹起され、それ故逆相型
充填剤を使用したオープンカラムクロマトグラフィーで
は、展開液中の有機溶媒の濃度に制限を受けることとな
り、保持時間と分離を自由に調節出来ず、そのために逆
相型充填剤が敬遠されることとなるのである。That is, there are a wide variety of developing solutions that can be applied to reversed-phase chromatography, but the commonly used developing solutions are usually aqueous solutions containing an organic solvent at a composition of about 10 to 80%. Separation and retention times are controlled by changing the organic solvent concentration, but when a highly polar developing solution is used in reversed-phase open column chromatography, a phenomenon occurs in which the packing material floats in the developing solution. Therefore, in open column chromatography using reversed-phase packing, the concentration of organic solvent in the developing solution is limited, and retention time and separation cannot be freely adjusted. For this reason, reverse phase type fillers are avoided.
なお、上記の如く、逆相型充填剤が展開液に浮かぶ原因
としては、極性の低い油が極性の高い水に浮かぶのと同
様の理由で、逆相カラムクロマトグラフィー用充填剤は
、その全表面に疎水性基が導入されて構成されているた
めに、極性が低く、且つ高い疎水性を有していることに
よって、展開液の含水量が増加した場合に、該逆相型充
填剤と展開液との親和性が低下して、充填剤が展開液に
馴染まずに、浮上するようになるからであり、これによ
って、正常なりロマトグラフィーが困難になるという問
題が惹起されるのである。このために、極性の高い充填
剤を使用する方法が考えられているが、充填剤の極性を
高めることは逆相分離用充填剤として疎水性を低下する
こととなり、試料を分離する充填剤としては不適当とな
るのである。As mentioned above, the reason why the reversed-phase packing material floats in the developing solution is the same reason that oil with low polarity floats in water with high polarity. Because it has a structure with hydrophobic groups introduced to the surface, it has low polarity and high hydrophobicity, so when the water content of the developing solution increases, it will not work with the reverse phase type packing material. This is because the affinity with the developing solution decreases, and the filler does not become compatible with the developing solution and floats to the surface, which causes the problem that normal chromatography becomes difficult. For this purpose, a method of using a highly polar packing material has been considered, but increasing the polarity of the packing material reduces its hydrophobicity as a packing material for reversed phase separation. becomes inappropriate.
しかしながら、逆相型充填剤は、クロマトグラフィーを
行なうに際して、空気中の水分の影響を順相型よりも受
は難いものであるため、分離の再現性が良く、また試料
の疎水性の違いで分離するものであるところから、分離
が通用出来る試料の範囲が広いという特性を有している
。そして、高速液体クロマトグラフィーのように、充填
剤を密閉したカラムに詰めて使用する場合には、むしろ
逆相クロマトグラフィーが順相クロマトグラフィーより
も広く使用されているのである。However, when performing chromatography, reversed-phase packings are less susceptible to the effects of moisture in the air than normal-phase packings, so separation reproducibility is better, and differences in the hydrophobicity of samples are Because it separates samples, it has the characteristic that it can be used to separate a wide range of samples. In cases such as high-performance liquid chromatography, in which a packing material is packed into a sealed column, reversed-phase chromatography is more widely used than normal-phase chromatography.
このようなことから、より広範囲な試料を分離すること
が出来る逆相クロマトグラフィー分離に適用出来、且つ
展開液の制限がないオープンカラム用充填剤の開発が望
まれているのである。For these reasons, there is a desire to develop an open column packing material that can be applied to reversed-phase chromatography separation that can separate a wider range of samples and that has no limitations on developing solutions.
（解決課題）
ここにおいて、本発明は、かかる事情を背景にして為さ
れたものであって、その解決課題とするところは、前述
の如き逆相型充填剤を広範囲な展開液が適用され得る充
填剤と為すべく、該充填剤の表面にある疎水性基を部分
的に加水分解して、極性の高い溶媒に対する充填剤の親
和性、即ち親水性化を図り、オープンカラムクロマトグ
ラフィーに良好に適用し得るようにすることにある。(Problem to be solved) Here, the present invention was made against the background of the above, and the problem to be solved is that a wide range of developing solutions can be applied to the above-mentioned reverse phase type filler. In order to use it as a packing material, the hydrophobic groups on the surface of the packing material are partially hydrolyzed to increase the affinity of the packing material for highly polar solvents, that is, to make it hydrophilic, making it suitable for open column chromatography. The goal is to make it applicable.
（解決手段）
そして、本発明は、上述の如き課題解決のために、細孔
を有する多孔性シリカゲルの内外面に結合せしめられた
疎水性有機基が酸性媒体中での処理によって５〜３５％
の除去率にて除去されて、かかる多孔性シリカゲルの外
表面に詰合せる疎水性有機基の一部が残存せしめられて
いることを特徴とするオープンカラム用逆相型充填剤を
、その要旨とするものである。(Solution Means) In order to solve the above problems, the present invention provides that the hydrophobic organic groups bonded to the inner and outer surfaces of porous silica gel having pores are reduced by 5 to 35% by treatment in an acidic medium.
The purpose of the present invention is to provide a reversed-phase packing material for open columns, which is removed at a removal rate of It is something to do.
（具体的構成）
ところで、本発明に係る逆相型充填剤を得るには、先ず
、通常の細孔を有する多孔性のシリカゲルに対して、そ
の内外面に、所定のシリル化剤との反応によって疎水性
有機基が結合せしめられるのであるが、このシリカゲル
に結合、導入される疎水性有機基としては、オープンカ
ラム用の充填剤として用いる場合に、プロピル基、オク
チル基、オクタデシル基等のアルキル基、シアノプロピ
ル基等のシアノアルキル基、或いはアミノプロピル基等
のアミノアルキル基等が挙げられる。また、そのような
疎水性有機基を与えるシリル化剤としては、公知の各種
のものが採用され得、その反応条件も、選択されるシリ
ル化剤に応じて適宜に決定される。(Specific structure) By the way, in order to obtain the reverse phase type filler according to the present invention, first, a porous silica gel having normal pores is treated with a predetermined silylating agent on its inner and outer surfaces. When used as a packing material for open columns, hydrophobic organic groups that are bonded and introduced into this silica gel include alkyl groups such as propyl groups, octyl groups, and octadecyl groups. group, a cyanoalkyl group such as a cyanopropyl group, or an aminoalkyl group such as an aminopropyl group. Furthermore, various known silylating agents can be used as the silylating agent that provides such a hydrophobic organic group, and the reaction conditions are also appropriately determined depending on the silylating agent selected.
次いで、この内外面に疎水性有機基が結合せしめられた
シリカゲルに対して、酸性媒体中、一般には酸水溶液中
における処理操作が施され、かかるシリカゲルの外表面
に結合する疎水性有機基が部分的に加水分解されて、５
〜３５％の除去率（全表面に結合せる疎水性有機基を基
準にして）にて除去せしめられることにより、目的とす
る、外表面に結合する疎水性有機基が一部残存せしめら
れた逆相型充填剤が得られるのである。また、この加水
分解によって、シリカゲルの外表面には、親水性基（シ
ラノール基）が形成されることとなる。Next, this silica gel with hydrophobic organic groups bonded to its inner and outer surfaces is subjected to a treatment operation in an acidic medium, generally an acid aqueous solution, so that the hydrophobic organic groups bonded to the outer surface of the silica gel are partially removed. is hydrolyzed to 5
By removing at a removal rate of ~35% (based on the hydrophobic organic groups bonded to the entire surface), the target hydrophobic organic groups bonded to the outer surface are partially left remaining. A phase-type filler is obtained. Further, due to this hydrolysis, hydrophilic groups (silanol groups) are formed on the outer surface of the silica gel.
なお、この酸性媒体処理に用いられる酸としては、例え
ば、塩酸、硝酸、硫酸、燐酸の如き鉱酸（無機酸）等が
挙げられ、また必要に応じて、そのような酸性媒体には
、シリカゲルとの親和性を高めるために、水と共に、メ
タノール等の溶媒が混入される。また、かかる加水分解
処理における操作手法としては、公知の各種の手法が適
宜に採用され、例えば激しい撹拌の下での濃い酸水溶液
を用いた還流操作等が採用されることとなる。Examples of acids used in this acidic medium treatment include mineral acids (inorganic acids) such as hydrochloric acid, nitric acid, sulfuric acid, and phosphoric acid. In order to increase the affinity with water, a solvent such as methanol is mixed together with water. In addition, various known methods may be appropriately employed as operating methods for such hydrolysis treatment, such as reflux operation using a concentrated acid aqueous solution under vigorous stirring.
そして、このような加水分解処理の後、更に必要に応じ
て、シリカゲルの外表面の親水性基（シラノール基）に
、ジオール基等を有する親水性基が導入されることによ
って、充填剤の外表面における部分的な親水性が高めら
れるのである。After such hydrolysis treatment, if necessary, a hydrophilic group having a diol group or the like is introduced into the hydrophilic group (silanol group) on the outer surface of the silica gel, thereby improving the outer appearance of the filler. Partial hydrophilicity on the surface is enhanced.
ところで、本発明に係る充填剤は、上記の如く、加水分
解により充填剤の外表面に結合せる疎水性有機基が部分
的に除去されたものであるが、その除去率が５〜１０％
程度においても極性溶媒に対する親和性の向上が著しく
、１０％メタノール或いはアセトニトリル等の有機溶媒
を含む展開液であれば、充分に親和性を示し、沈降性質
が見られる一方、極性の著しく高い展開液である水単独
での使用或いは緩衝液の如き塩類を含む展開液に対して
は、除去率５〜ｌＯ％の充填剤では展開液に浮遊する粒
子が認められる場合があるため、高極性の展開溶媒を使
用する場合には、更に外表面の剥離程度を増加し、好ま
しくは２５〜３０％程度除去することが望ましい。By the way, the filler according to the present invention is one in which the hydrophobic organic groups bonded to the outer surface of the filler are partially removed by hydrolysis, and the removal rate is 5 to 10%.
Even in terms of polarity, the affinity for polar solvents is significantly improved, and a developing solution containing an organic solvent such as 10% methanol or acetonitrile shows sufficient affinity and sedimentation properties are observed, while a developing solution with extremely high polarity When using water alone or a developing solution containing salts such as a buffer solution, particles with a removal rate of 5 to 10% may be observed in the developing solution. When using a solvent, it is desirable to further increase the degree of peeling of the outer surface, preferably by about 25 to 30%.
また、本発明の如き、部分親水性の逆相型充填剤では、
シリカゲルの外表面に存在する疎水性の固定相（疎水性
有機基）を３５％を越えて除去すると、充填剤（シリカ
ゲル）の疎水性が減少し、またシリカゲルの溶解性が促
進するという問題が生じることから、その除去率として
は、５〜３５％の範囲が採用されることとなるのである
。In addition, in a partially hydrophilic reverse phase filler such as the present invention,
If more than 35% of the hydrophobic stationary phase (hydrophobic organic groups) present on the outer surface of silica gel is removed, the hydrophobicity of the filler (silica gel) will decrease and the solubility of silica gel will be promoted. Therefore, the removal rate should be in the range of 5 to 35%.
要するに、逆相クロマトグラフィーにおいて、充填剤た
るシリカゲルに導入されている固定相の割合は、充填剤
の疎水性を決定し、試料の保持時間や分離能に影響を及
ばすものであり、固定相として導入された疎水性基が少
ない場合には、逆相クロマトグラフィーの分離機構であ
る疎水性相互作用が減少し、試料の保持時間は短くなる
ことから、充分な分離が得られなくなる場合がある。こ
のことから、短いカラムで、即ちより少量の充填剤の使
用で、効率的な分離を達成するには、出来る限り多くの
固定相を導入することが望ましいのである。従って、本
発明に係る部分親水性の充填剤においても、必要以上の
固定相の剥離は充填剤の疎水性の低下をもたらし、疎水
性に基づく分離能の低下に繋がることから、外表面部に
存在する疎水性基は、極性溶媒に対する親和性を損なわ
ない程度に残存させる方が望ましいのである。In short, in reversed-phase chromatography, the proportion of the stationary phase introduced into the silica gel packing material determines the hydrophobicity of the packing material, which affects the retention time and separation ability of the sample. If there are few hydrophobic groups introduced as chromatography, the hydrophobic interaction, which is the separation mechanism of reversed phase chromatography, will decrease, and the retention time of the sample will become shorter, which may make it impossible to obtain sufficient separation. . For this reason, it is desirable to incorporate as much stationary phase as possible in order to achieve efficient separations in short columns, ie using less packing material. Therefore, even in the partially hydrophilic packing material according to the present invention, excessive exfoliation of the stationary phase causes a decrease in the hydrophobicity of the packing material, leading to a decrease in the separation ability based on hydrophobicity. It is desirable that the existing hydrophobic groups remain to an extent that does not impair the affinity for polar solvents.
また、本発明の如く、シリカゲルを担体とするクロマト
グラフ用充填剤を使用する場合には、常に担体の安定性
を考慮する必要がある。即ち、シリカゲルは、使用する
溶媒がアルカリ性でない限り、比較的難溶性の担体であ
るが、クロマトグラフィーのように溶媒を通液する場合
には僅かな溶解性が問題となるのである。これは、順相
用のシリカゲルカラムに水を含む移動相を送液した場合
に、シリカゲルが徐々に溶解して理論段数の低下やピー
クの分裂等の原因となることからも理解出来る。これに
対して、Ｃｒｙ型充填剤の如き逆相型充填剤では、含水
溶媒の使用においても安定に使用することが出来るとこ
ろから、これらを考慮すると、部分親水性型充填剤につ
いても充填剤の溶解に対する安定性からも、疎水性基を
除去する割合は少ない方が好ましく、固定相の剥離によ
って生じるシリカゲルの露呈部分の減少は、充填剤の安
定性に寄与すると考えられるのである。Further, when using a chromatographic packing material using silica gel as a carrier as in the present invention, it is necessary to always consider the stability of the carrier. That is, silica gel is a relatively poorly soluble carrier unless the solvent used is alkaline, but its slight solubility becomes a problem when a solvent is passed through it, as in chromatography. This can be understood from the fact that when a mobile phase containing water is sent to a normal phase silica gel column, the silica gel gradually dissolves, causing a decrease in the number of theoretical plates and splitting of peaks. On the other hand, reverse-phase fillers such as Cry-type fillers can be used stably even when using water-containing solvents. From the viewpoint of stability against dissolution, it is preferable that the proportion of hydrophobic groups removed is small, and the reduction in the exposed portion of silica gel caused by peeling off the stationary phase is thought to contribute to the stability of the filler.
（実施例）
以下に、本発明の幾つかの実施例を示し、本発明を更に
具体的に明らかにすることとするが、本発明が、そのよ
うな実施例の記載によって、何等の制約をも受けるもの
でないことは、言うまでもないところである。(Examples) Below, some examples of the present invention will be shown to clarify the present invention more specifically, but the present invention is not limited in any way by the description of such examples. Needless to say, it is not something that can be accepted.
また、本発明には、以下の実施例の他にも、更には上記
の具体的記述以外にも、本発明の趣旨を逸脱しない限り
において、当業者の知識に基づいて種々なる変更、修正
、改良等を加え得るものであることが、理解されるべき
である。In addition to the following examples and the above-mentioned specific description, the present invention includes various changes, modifications, and changes based on the knowledge of those skilled in the art, as long as they do not depart from the spirit of the present invention. It should be understood that improvements and the like may be made.
なお、以下に示される部及び百分率は、特に断わりのな
い限り、重量を基準とするものである。The parts and percentages shown below are based on weight unless otherwise specified.
実施例 １
予め、粒径が２３０〜４００メツシユの多孔性シリカゲ
ルを、２００ｍｍＨＨの減圧下において、１５０″Ｃで
３時間の間、加熱減圧乾燥を施した。Example 1 Porous silica gel having a particle size of 230 to 400 mesh was previously dried under reduced pressure of 200 mmHH at 150''C for 3 hours under reduced pressure.
次いで、この得られたシリカゲルの１０部に対して、シ
リル化剤としてのオクタデシルジメチルクロロシランの
１０部を用い、ピリジン：３部を触媒として、トルエン
中で、６時間還流することにより、反応せしめ、該シリ
カゲルの内外面（細孔内面及び外表面）の全面にオクタ
デシル基が導入された、ＯＤＳ （オクタデシルジメチ
ルシリル化）シリカ（Ｃｉａ型充填剤）を合成した。Next, 10 parts of the obtained silica gel was reacted with 10 parts of octadecyldimethylchlorosilane as a silylating agent by refluxing in toluene for 6 hours using 3 parts of pyridine as a catalyst, ODS (octadecyldimethylsilylated) silica (Cia-type filler) was synthesized, in which octadecyl groups were introduced throughout the inner and outer surfaces (inner and outer surfaces of pores) of the silica gel.
そして、この得られたＯＤＳシリカ：１０部を、１１Ｎ
の塩酸：２００部中に投入し、加熱温度：１００°Ｃの
下で激しく撹拌（約１０１０００ｒｐしながら、加水分
解反応を行なった。Then, 10 parts of the obtained ODS silica was added to 11N
was added to 200 parts of hydrochloric acid, and the hydrolysis reaction was carried out with vigorous stirring (approximately 101,000 rpm) at a heating temperature of 100°C.
この加水分解操作における疎水性有機基（ＯＤＳ）の除
去状況を調べるために、各時間ごとにシリカゲルをサン
プルアウトして、内径：４．６ａａｘ長さ＝１５０−の
ステンレス・スチール製のカラムに湿式充填法にて充填
した後、メタノール；水＝６０１０（容量比）なる組成
の溶媒を移動相として使用して、トルエンのキャパシテ
ィー比二に′の変化を測定し、その結果を、第１図に示
した。In order to investigate the removal status of hydrophobic organic groups (ODS) during this hydrolysis operation, samples of silica gel were taken out at each time interval and wet-coated into a stainless steel column with an inner diameter of 4.6 aax and a length of 150 mm. After filling using the filling method, the change in the capacity ratio of toluene was measured using a solvent with a composition of methanol and water = 6010 (volume ratio) as the mobile phase, and the results are shown in Figure 1. It was shown to.
なお、充填剤の評価条件は、逆相条件下で測定している
ことから、充填剤の疎水性を発現するオクタデシル基が
除去されるに従って、トルエンのに′値は小さくなる傾
向を示し、このキャパシティー比の変化から、シリル化
剤の除去率が推定出来るのである。Furthermore, since the evaluation conditions for the filler were measured under reversed-phase conditions, the value of toluene tends to decrease as the octadecyl group that makes the filler hydrophobic is removed; The removal rate of the silylating agent can be estimated from the change in capacity ratio.
即ち、かかる第１図から明らかなように、ｋ′値は５時
間までに速やかに低下し、その後、非常に僅かずつ低下
しているところから、充填剤の外表面の加水分解反応は
、約若しくは概略５時間以内に大部分完了しているもの
と考えられる。従って、本発明においてシリカゲルの外
表面にオクタデシル基を残存させるには、前記加水分解
条件下では５時間以内の条件を採用する必要のあること
が判る。That is, as is clear from FIG. 1, the k' value rapidly decreases by 5 hours, and then decreases very gradually, indicating that the hydrolysis reaction on the outer surface of the filler is approximately Alternatively, it is considered that most of the process is completed within approximately 5 hours. Therefore, it can be seen that in the present invention, in order to leave the octadecyl group on the outer surface of the silica gel, it is necessary to use the hydrolysis conditions for 5 hours or less under the above-mentioned hydrolysis conditions.
実施例 ２
実施例１において得られた、オクタデシル基が内外面の
全表面に導入されたシリカゲル及び外表面部のオクタデ
シル基が部分的に加水分解除去されたシリカゲルについ
て、それぞれの炭素の含有率を測定したところ、下記の
第１表の如き結果が得られた。Example 2 The carbon content of each of the silica gel obtained in Example 1 in which octadecyl groups were introduced into the entire inner and outer surfaces and the silica gel in which the octadecyl groups on the outer surface were partially removed by hydrolysis was determined. As a result of the measurement, the results shown in Table 1 below were obtained.
第１表
この結果、表面を加水分解によって部分的に剥離した充
填剤の炭素含有率は、オクタデシル基を全面に導入した
充填剤上比較して、５％の低下に止まり、比較的多くの
オクタデシル基が残存していることがｉ認出来た。Table 1 As a result, the carbon content of the filler whose surface was partially exfoliated by hydrolysis was only 5% lower than that of the filler with octadecyl groups introduced over the entire surface, and a relatively large amount of octadecyl It was confirmed that the group remained.
実施例 ３
実施例２における、表面のシリル化剤（ｃｏｇ）を塩酸
触媒によって部分的に加水分解して得られた部分親水性
型逆相充填剤（以下、Ｐｌ（Ｓと略称する）を用いて、
かかる充填剤の溶媒に対する親和性に関する評価を行な
い、その結果を、下記第２表に示した。また、比較とし
て、−船釣な逆相型充填剤（Ｃｒ ｓ型、Ｃ，型、Ｃ＋
型充填剤）を用い、同様に評価した。なお、かかるＣ
ＩＩ型充填剤は加水分解の施されていない前記オクタデ
シル基が全面に導入されたシリカゲルであり、またＣ１
ｌ型、Ｃ１型充填剤は、それぞれ、シリル化剤としてオ
クチルジメチルクロロシラン、トリメチルクロロシラン
を用いて合成されたものである。Example 3 In Example 2, a partially hydrophilic reverse phase filler (hereinafter referred to as Pl (abbreviated as S)) obtained by partially hydrolyzing the surface silylating agent (cog) with a hydrochloric acid catalyst was used. hand,
The affinity of such fillers for solvents was evaluated, and the results are shown in Table 2 below. In addition, as a comparison, - boat fishing reverse phase type fillers (Cr s type, C, type, C +
The same evaluation was performed using mold filler). In addition, such C
The type II filler is a silica gel in which the above-mentioned octadecyl groups are introduced throughout the surface without being hydrolyzed, and C1
The I-type and C1-type fillers were synthesized using octyldimethylchlorosilane and trimethylchlorosilane as silylating agents, respectively.
そして、それら充填剤の評価方法としては、メタノール
：水の割合を変化させて調製した含水メタノールに、前
記各種の充填剤をそれぞれ加え、振盪して均一に充填剤
を分散せしめた後、静置して、それぞれの充填剤の沈降
状態を観察して行なった。The evaluation method for these fillers is to add each of the above-mentioned fillers to water-containing methanol prepared by varying the methanol:water ratio, shake to uniformly disperse the fillers, and then let stand. The sedimentation state of each filler was observed.
第２表 この結果から明らかなように、Ｃ１ｌ型、Ｃ１型。Table 2 As is clear from this result, C1l type and C1 type.
ＣＩ型の各充填剤においては、メタノール含有率が６０
％より低下すると、即ち水の含有率が４０％よりも増加
すると、充填剤が溶媒に対して浮いてしまい、カラムク
ロマトグラフィー用充填剤としては使用出来ないことが
判明した。In each type CI filler, the methanol content is 60
%, that is, when the water content increases above 40%, the packing material floats on the solvent, and it has been found that it cannot be used as a packing material for column chromatography.
これに対して、部分親水性型逆相充填剤（ＰＨ８）にあ
っては、メタノールを全く含まない水に対しても、完全
に親和性を示していることから、極性の非常に高い溶媒
を使用した逆相カラムクロマトグラフィー用の充填剤と
して良好に使用し得ることが確認出来た。On the other hand, the partially hydrophilic reversed-phase packing material (PH8) shows complete affinity for water, which does not contain any methanol, so it is difficult to use extremely polar solvents. It was confirmed that it could be used satisfactorily as a packing material for reversed phase column chromatography.
実施例 ４
実施例３にて用いられた部分親水性型逆相充填剤を使用
して、テオブロミンとテオフィリンのカラムクロマトグ
ラフィーについて、検討を行なった。なお、その評価方
法としては、かかるテオブロミンとテオフィリンを充填
カラムに同時に注入することで、分析、評価し、その結
果を第２図に示した。また、展開液としては、２０％メ
タノールを使用した。Example 4 Using the partially hydrophilic reverse phase packing material used in Example 3, column chromatography of theobromine and theophylline was investigated. The evaluation method was to simultaneously inject the theobromine and theophylline into a packed column for analysis and evaluation, and the results are shown in FIG. Moreover, 20% methanol was used as a developing solution.
一般に、上記テオブロミンとテオフィリンは、比較的親
水性の高い薬剤であり、その分子構造は極めて類似し、
両試料にはメチル基１個の存無に違いがあるだけである
。このように疎水性基であるメチル基の差について、カ
ラムクロマトグラフィー分離を通用する場合、順相クロ
マトグラフィーでは認識が困難であり、反面従来の疎水
性の認識能が高い逆相クロマトグラフィーでは、試料の
親水性が高いために、充填剤が浮上しない有機溶媒濃度
の展開液では充填剤に保持されず、カラムクロマトグラ
フィーにおいては分離し難い試料である。In general, theobromine and theophylline are relatively hydrophilic drugs, and their molecular structures are extremely similar.
Both samples differ only in the presence or absence of one methyl group. Differences in methyl groups, which are hydrophobic groups, are difficult to recognize using normal phase chromatography when column chromatography separation is used.On the other hand, with conventional reversed phase chromatography, which has a high ability to recognize hydrophobic Because the sample is highly hydrophilic, it is not retained by the packing material in a developing solution with an organic solvent concentration that does not allow the packing material to float, making it difficult to separate in column chromatography.
しかしながら、第２図の結果から明らかなように、本発
明に係る部分親水性の逆相型充填剤を用いて分析したと
ころ、テオブロミンとテオフィリンを分離することが出
来た。However, as is clear from the results shown in FIG. 2, theobromine and theophylline could be separated when analyzed using the partially hydrophilic reversed-phase packing material according to the present invention.
（発明の効果）
以上の説明から明らかなように、本発明に係る充填剤に
あっては、多孔性シリカゲルの内外面に結合せしめられ
た疎水性有機基が酸性媒体中での加水分解により５〜３
５％の割合で除去されて、シリカゲルの外表面が部分的
に親水性化されたものであるところから、オープンカラ
ムクロマトグラフィーで有機溶媒を全く含まない展開液
を使用した場合においても、充填剤の浮遊は何等惹起さ
れ得す、逆相高速液体クロマトグラフィーで使用可能な
移動相は全て適用可能となったのである。(Effects of the Invention) As is clear from the above explanation, in the filler according to the present invention, the hydrophobic organic groups bonded to the inner and outer surfaces of the porous silica gel are ~3
Since the outer surface of the silica gel is partially hydrophilized by being removed at a rate of 5%, even when a developing solution containing no organic solvent is used in open column chromatography, the packing material is removed at a rate of 5%. All mobile phases that can be used in reversed-phase high-performance liquid chromatography can now be applied.
また、シリカゲルの内表面には、疎水性基が残存してい
るため、充填剤は、充分な疎水性も有し、これによって
逆相クロマトグラフィーの通用を可能としているのであ
る。In addition, since hydrophobic groups remain on the inner surface of the silica gel, the packing material also has sufficient hydrophobicity, which allows it to be used in reversed phase chromatography.
第１図は、塩酸を触媒としてオクタデシル基を加水分解
して除去した時の進行状態を表す、トルエンのキャパシ
ティー比＝に′の時間による変化を示すグラフであり、
第２図は、本発明に係る部分親水性の逆相型充填剤を用
いた時のテオプロミンとテオフィリンのクロマトグラム
である。
出願人 ナカライテスク株式会社
第１
加水分解時間
（ｈｒ）
第２０FIG. 1 is a graph showing the change in the capacity ratio of toluene with time, representing the progress of hydrolyzing and removing octadecyl groups using hydrochloric acid as a catalyst.
FIG. 2 is a chromatogram of theopromine and theophylline when the partially hydrophilic reverse phase packing material according to the present invention is used. Applicant: Nacalai Tesque Co., Ltd. No. 1 Hydrolysis time (hr) No. 20
Claims (1)
れた疎水性有機基が酸性媒体中での処理によって５〜３
５％の除去率にて除去されて、かかる多孔性シリカゲル
の外表面に結合せる疎水性有機基の一部が残存せしめら
れていることを特徴とするオープンカラム用逆相型充填
剤。The hydrophobic organic groups bonded to the inner and outer surfaces of the porous silica gel with pores are reduced to 5 to 3 by treatment in an acidic medium.
A reversed-phase packing material for an open column, characterized in that it is removed at a removal rate of 5%, leaving a portion of the hydrophobic organic groups bonded to the outer surface of the porous silica gel.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1046260A JP2592519B2 (en) | 1989-02-27 | 1989-02-27 | Reversed phase packing for open columns |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1046260A JP2592519B2 (en) | 1989-02-27 | 1989-02-27 | Reversed phase packing for open columns |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02226066A true JPH02226066A (en) | 1990-09-07 |
| JP2592519B2 JP2592519B2 (en) | 1997-03-19 |
Family
ID=12742233
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1046260A Expired - Fee Related JP2592519B2 (en) | 1989-02-27 | 1989-02-27 | Reversed phase packing for open columns |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2592519B2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999036355A3 (en) * | 1998-01-15 | 1999-12-09 | Cabot Corp | Method of preparing hydrophobic silica |
| US6594213B1 (en) | 1999-11-22 | 2003-07-15 | Sanyo Electric Co., Ltd. | Data recorder |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63163273A (en) * | 1986-12-26 | 1988-07-06 | Shimadzu Corp | Packing material for liquid chromatography |
-
1989
- 1989-02-27 JP JP1046260A patent/JP2592519B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63163273A (en) * | 1986-12-26 | 1988-07-06 | Shimadzu Corp | Packing material for liquid chromatography |
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| WO1999036355A3 (en) * | 1998-01-15 | 1999-12-09 | Cabot Corp | Method of preparing hydrophobic silica |
| US6594213B1 (en) | 1999-11-22 | 2003-07-15 | Sanyo Electric Co., Ltd. | Data recorder |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2592519B2 (en) | 1997-03-19 |
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