JPWO2002076935A1

JPWO2002076935A1 - 新規α−リポ酸誘導体およびその用途

Info

Publication number: JPWO2002076935A1
Application number: JP2002576197A
Authority: JP
Inventors: 一美緒方; 享宏阪上; 伊藤　和彦; 和彦伊藤
Original assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2001-03-19
Filing date: 2002-03-18
Publication date: 2004-07-15
Anticipated expiration: 2022-03-18
Also published as: US20100152288A1; WO2002076935A1; EP1371640A1; EP1371640B1; WO2002076935A8; JP4072062B2; ES2331832T3; DE60234164D1; US20040092586A1; EP1371640A4; US7700080B2; ATE446949T1

Abstract

チロシナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用およびエラスターゼ阻害作用を有する、次の式（Ｉ）で表される新規のα−リポ酸誘導体を提供する。（式中、Ｍは金属を示し、ＡはＮ結合したアミノ酸残基を示す。）

Description

技術分野
本発明は、新規なα−リポ酸誘導体またはその薬理学的に許容できる塩およびその用途に関する。
背景技術
α−リポ酸（別名：チオクト酸または６，８−ジチオオクタン酸）はミトコンドリアに存在する補酵素で、抗酸化能を有し、酸化ストレスによる種々の病態の治療、たとえば動脈硬化症および白内障の治療薬として注目されている。また、その還元型のジメルカプトオクタン酸は酸化型のグルタチオンやビタミンＣなどを還元再生させる作用がある。
α−リポ酸誘導体として、α−リポ酸にグリシン、メチオニン、グルタミン酸、バリンなどがそれぞれ結合したα−リポイルアミノ酸が知られている（特公昭４２−１２８６号，対応米国特許Ｎｏ．３，２３８，２２４）。また、特開２０００−１６９３７１号公報にはα−リポイルアミノエチルスルホン酸のイミダゾール塩が記載され、グルタチオン還元酵素活性増強剤としての用途が記載されている。
上記のような状況下、本発明者らは種々検討を重ねた結果、新規のα−リポイルアミノ酸の還元体（ジハイドロ体）の金属キレート化合物およびそれらの薬理学的に許容される塩を効率的に合成することに成功し、これら化合物がチロシナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用およびエラスターゼ阻害作用を有することを見出し、さらに研究を進めて本発明を完成させた。
発明の開示
すなわち、本発明は、
（１）次の式（Ｉ）

（式中、Ｍは金属を示し、ＡはＮ結合したアミノ酸残基を示す。）で表されるＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩（以下、本化合物という。）、
（２）Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物がＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−α−アミノ酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−β−アミノ酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−γ−アミノ酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−δ−アミノ酸金属キレートおよびＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−ε−アミノ酸金属キレートからなる群から選ばれるものである、上記（１）記載のＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩、
（３）Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物がＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノエタンスルホン酸金属キレート、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）グリシン金属キレート、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アスパラギン酸金属キレート、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−６−アミノヘキサン酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−γ−アミノ−ｎ−酪酸金属キレートＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）フェニルアラニン金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アントラニル酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）メチオニン金属キレートおよびＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）システイン金属キレートからなる群から選ばれるものである、上記（１）記載のＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩、
（４）金属が亜鉛である上記（１）記載のＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩、
（５）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する医薬、
（６）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有するチロシナーゼ阻害剤、
（７）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有するメラニン産生抑制剤、
（８）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する皮膚のしみ、そばかすまたは日焼けの予防・治療剤、
（９）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する美白剤、
（１０）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する美肌剤、
（１１）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有するエラスターゼ阻害剤、
（１２）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する抗シワ剤、
（１３）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する化粧品、
（１４）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、チロシナーゼを阻害する方法、
（１５）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、メラニン産生を抑制する方法、
（１６）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、皮膚のしみ、そばかすまたは日焼けの予防・治療方法、
（１７）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、皮膚の美白方法、
（１８）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、皮膚の美肌方法、
（１９）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、エラスターゼを阻害する方法、
（２０）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、シワの予防・治療方法、
（２１）医薬製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、
（２２）チロシナーゼ阻害剤の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、
（２３）メラニン産生抑制剤の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、
（２４）皮膚のしみ、そばかすまたは日焼けの予防・治療剤の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、
（２５）美白剤の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、
（２６）美肌剤の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、
（２７）エラスターゼ阻害剤の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、
（２８）抗シワ剤の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用、および
（２９）化粧品の製造のための上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用に関する。
本化合物はα−リポ酸とアミノ酸がアミド結合し、さらに金属がキレート結合した構造を有し、文献未載の新規化合物である。本発明において、アミノ酸とは同一分子内にカルボキシル基とアミノ基を有する、いわゆるα−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、δ−アミノ酸、ε−アミノ酸、並びにアミノメチルシクロヘキサンカルボン酸およびアントラニル酸、並びに同一分子内にスルホン酸基とアミノ基を有するアミノエタンスルホン酸（タウリン）をいう。α−アミノ酸としては、たとえばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、トリプトファンなどが挙げられ、β−アミノ酸としてはβ−アラニンが挙げられ、γ−アミノ酸としてはγ−アミノ−ｎ−酪酸（ＧＡＢＡ）やカルニチンが挙げられ、δ−アミノ酸としては５−アミノレブリン酸や５−アミノ吉草酸、ε−アミノ酸としては６−アミノヘキサン酸が挙げられる。これらアミノ酸のうち、アントラニル酸、アミノエタンスルホン酸、メチオニン、フェニルアラニン、γ−アミノ−ｎ−酪酸、６−アミノヘキサン酸が好ましい。
本願の金属キレート化合物の金属としては、２価の金属である亜鉛やコバルト、２価または３価の金属である鉄または４価のゲルマニウムを用いるのが好ましい。このうち特に２価の金属である亜鉛が好ましい。本化合物は精製も簡単で安定な化合物である。
本化合物の薬理学的に許容できる塩としては、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩およびカルシウム塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩が挙げられるが、これら以外の塩であっても薬理学的に許容できる塩であればいずれのものであっても本発明の目的のため適宜に用いることができる。
さらに、これらの１水和物、２水和物、１／２水和物、１／３水和物、１／４水和物、２／３水和物、３／２水和物、６／５水和物も本発明に含まれる。
中間体のα−リポイルアミノ酸の合成法としては、アミノ酸の酸性基のカルボン酸を保護基としてエステル化し、α−リポ酸と脱水縮合剤で酸アミドとし、最後にケン化するのが一般的である。しかし、アミノエタンスルホン酸などの場合、この方法では合成するのが困難である。
本化合物は、例えば次の合成法により、またはこれに準じて適宜合成することができる。

（式中のＡおよびＭは前記と同義である。）
本化合物の中間体α−リポイルアミノ酸の効率的な製造方法について検討の結果、混合酸無水物法（ＭＡ法）により合成すると目的化合物のα−リポイルアミノ酸を高収率で得ることができることがわかった。すなわち、α−リポ酸を有機溶媒（たとえばクロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトニトリルなど）に溶かし、これに３級アミン（トリエチルアミン、トリブチルアミンやＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）など）の存在下−１５℃〜−５℃でハロゲン化炭酸エステル（クロル炭酸エチル、クロル炭酸ブチルなど）、イソブチルオキシカルボニルクロリド、塩化ジエチルアセチルまたは塩化トリメチルアセチルなどの混合酸無水物化試薬を反応させてα−リポ酸の混合酸無水物とする。反応時間は１〜２分から数１０分程度である。さらにアミノ酸を塩基（水酸化ナトリウム、水酸化カリウムやトリエチルアミン、トリブチルアミンなどの３級アミン）存在下でアルコール、水またはそれらの混液などの溶媒に溶かしたものを加えて反応させた後、適当な溶媒、たとえば水またはアルコールから再結晶させると、高収率でα−リポイルアミノ酸を得る。
このようにして得られたα−リポイルアミノ酸を金属と酸で還元することにより、ジハイドロ体を経て、本発明の金属キレート化合物を高収率で得ることができる。安定なα−リポイルアミノ酸を還元する際に用いられる酸としては、塩酸や硫酸などの無機酸および酢酸やクエン酸などの有機酸が挙げられる。亜鉛キレート化合物の場合、分子内の２個のＳＨ基（メルカプト基）が１原子の亜鉛と結合していると考えられる。
皮膚におけるメラニンの産生はメラノサイトで行われ、メラニン産生を制御する酵素として、チロシナーゼが唯一の律速酵素として長い間知られてきた。チロシナーゼを触媒するものとしてはチロシンハイドロキシラーゼ、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）オキシダーゼ、５，６−ジハイドロキシ−インドール（ＤＨＩ）オキシダーゼの３つがあり、メラニン産生の初期および後期の反応において重要な役割を果たす。後記の試験例から明らかなように、本化合物は、チロシンハイドロキシラーゼを阻害することにより、律速酵素であるチロシナーゼを阻害しメラニンの産生を抑制する。
一方、エラスターゼは皮膚などの伸展性に富んだ組織にみられる構造タンパク質であり、ペプチド間に架橋が多く弾性に富むエラスチンの分解酵素である。従って、皮膚のエラスターゼを阻害することにより皮膚などの伸展性、弾力を維持できるので、シワの予防、美肌の維持に有用である。後記の試験例から明らかなように、本化合物はエラスターゼ阻害活性も有する。
このように、本化合物はメラニン産生抑制作用とエラスターゼ阻害作用を有するという特長がある。
したがって、本化合物は皮膚のしみ、そばかす、日焼けの予防・治療剤、美白剤、美肌剤および抗シワ剤として有用である。
また、本化合物は抗酸化作用およびラジカル抑制作用（１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドロラジカル（ＤＰＰＨ）の安定ラジカルを消去する）を示す。本化合物にこのような作用があることは、たとえばヨウ素（Ｉ_２）１モルを還元脱色させるために本化合物は１モル必要であり、これは理論値に一致し、本化合物は酸化されて元のα−リポイルアミノ酸となることからわかる（下記の式参照）。

（式中のＡは前記と同義である。）
本化合物は哺乳動物（たとえば、ウシ、ウマ、ウサギ、マウス、ラット、ヒトなど）の酸化ストレスによる種々の疾患、たとえば虚血性心疾患、脳虚血、動脈硬化症、糖尿病、白内障などの予防・治療に有用である。
本化合物を医薬として用いる場合、目的と必要に応じて、本化合物のうち１種または２種以上を適宜組み合せて含有させることもできる。
本化合物は上記のような疾患の治療のための医薬として経口的にあるいは非経口的に適宜に使用される。製剤の形態としては、たとえば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固形製剤または注射剤や点眼剤等の液剤などいずれの形にも公知の方法により調製することができる。これらの製剤には通常用いられる賦形剤、結合剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解補助剤、保存剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤、ｐＨ調整剤等の各種添加剤を適宜使用してもよい。
本化合物を医薬として使用する際の投与量は、使用する本化合物の種類、患者の体重や年齢、対象とする疾患の種類やその状態および投与方法などによっても異なるが、虚血性心疾患、脳虚血、動脈硬化症または糖尿病に適応する場合は、たとえば注射剤の成人への投与量は１日１回約１ｍｇ〜約３０ｍｇ程度、内服剤の成人への投与量は、１日数回、１回量約１ｍｇ〜約１００ｍｇ程度である。また抗白内障剤として用いる場合、１日数回、１回数滴，濃度が約０．０１〜５（ｗ／ｖ）％の点眼剤を成人に投与するのがよい。
本化合物を含有する医薬には、本発明の目的に反しない限り、その他の同種または別種の薬効成分を適宜含有させてもよい。
本化合物は皮膚のしみ、そばかす、日焼けの予防・治療、美白、美肌または抗シワを目的として、クリーム剤、パック剤、パウダー、ローション剤や化粧水などに適宜配合することができる。また、本化合物を化粧品に配合させるときは、通常化粧品に用いられる成分、たとえば賦形剤、安定化剤、顔料、香料、紫外線吸収剤、酸化防止剤、防腐剤、金属封鎖剤、有機酸などを適宜配合してもよい。
本化合物を化粧品として用いる場合は、その化合物の種類、配合しようとする化粧品の種類や配合目的などによっても異なるが、通常約０．００１〜５（ｗ／ｗ）％、好ましくは約０．００５〜２（ｗ／ｗ）％程度配合するのがよい。
実施例
次に、参考例、実施例および試験例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されない。
参考例１Ｎ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸ナトリウム
ＤＬ−α−リポ酸６．２ｇをクロロホルム６０ｍｌに溶かし、トリエチルアミン３．２ｇを加えて−５℃に冷却して置き、これにクロル炭酸エチル３．３ｇを徐々に滴下し、滴下終了１５分後にこれにアミノエタンスルホン酸４．５ｇおよび水酸化ナトリウム１．５ｇをメタノール６０ｍｌに溶かしたものを一挙に加えて、その温度で１５分間、さらに室温に戻して１時間攪拌させた。次に、これに水酸化ナトリウム１．５ｇをメタノール５０ｍｌに溶かした溶液を加えて、減圧下で溶媒を１／３になるまで濃縮させ、これにエタノール６０ｍｌを加えて析出した結晶を濾取した。これを水−メタノールから再結晶させて、目的化合物のナトリウム塩の白色結晶５．８ｇを得た。融点２３５〜２３７℃。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．５３（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）
元素分析：Ｃ_１０Ｈ_１７ＮＯ_４Ｓ_３Ｎａ・Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，３４．０８Ｈ，５．４３Ｎ，３．９７
実測値：Ｃ，３４．２３Ｈ，５．５４Ｎ，３．８０
参考例２Ｎ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸カリウム
参考例１の水酸化ナトリウムを水酸化カリウム４．０ｇに代えて参考例１と同様に反応処理してこれを水／メタノールから再結晶させて、目的化合物のカリウム塩の白色結晶６．５ｇを得た。融点２４０〜２４２℃。
参考例３Ｎ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸カルシウムおよびマグネシウム
参考例１で得られたナトリウム塩を水に溶かし、スルホン酸樹脂で脱塩して遊離酸として、これらに炭酸カルシウムまたは塩基性炭酸マグネシウムで、それぞれ中和させて、それぞれ水溶性のカルシウム塩またはマグネシウム塩を得た。それぞれ融点３００℃以上。
参考例４Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸ナトリウム
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよび６−アミノヘキサン酸３．０ｇを用いて、参考例１と同様に反応させエタノールから再結晶させて、目的化合物の黄色がかった白色結晶３．０ｇを得た。融点２００〜２０２℃（分解）。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８４（クロロホルム：メタノール：水＝５：４：１）
参考例５Ｎ−α−リポイルアスパラギン酸ジナトリウム
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびＬ−アスパラギン酸２．９ｇを用いて、参考例１と同様に反応処理して、水／メタノールから再結晶させて、目的化合物の白色結晶４．５ｇを得た。融点３００℃以上。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．４７（クロロホルム：メタノール：水＝４：１：２）
参考例６Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ−ｎ−酪酸ナトリウム
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびγ−アミノ−ｎ−酪酸２．３ｇを用いて、参考例１と同様に反応処理して、エタノールから再結晶させて、目的化合物のナトリウム塩４．０ｇを得た。融点２３５℃付近から徐々に分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．７６（クロロホルム：メタノール：水＝４：１：２）
参考例７Ｎ−α−リポイルグリシンナトリウム
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびグリシン１．９ｇを用いて、参考例１と同様に反応処理して、メタノール／エタノールから再結晶させて、目的化合物の淡黄色結晶４．５ｇを得た。融点２１８〜２２０℃（分解）。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．６４（クロロホルム：メタノール：水＝４：１：２）
参考例８Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびＬ−フェニルアラニン３．５ｇを用いて、参考例１と同様に反応させ、溶媒を留去させた後、塩酸酸性として酢酸エチルで抽出し、水洗後、酢酸エチルを留去させた。残渣結晶をエタノール／イソプロピルエーテルから再結晶させて、淡黄色結晶５．４ｇを得た。融点１５４℃〜１５６℃。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８６（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）。
参考例９Ｎ−α−リポイルアントラニル酸ナトリウム
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびアントラニル酸２．９ｇを用いて、参考例１と同様にして白色結晶３．６ｇを得た。融点３００℃以上。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８９（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）。
参考例１０Ｎ−α−リポイルメチオニン
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびＬ−メチオニン３．５ｇを用いて、参考例８と同様にして淡黄色結晶４．０ｇを得た。融点１０８℃〜１０９℃。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８１（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）。
参考例１１Ｎ−α−リポイルシステインナトリウム
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびトリエチルアミン２．２ｇをテトラハイドロフラン６０ｍｌに溶かして−５℃に冷却して置き、攪拌下、これにクロル炭酸エチル２．３ｇを徐々に滴下し、滴下終了後、さらに６分後にＬ−システイン２．６ｇおよびトリエチルアミン２．５ｇを水２０ｍｌに溶かした溶液を加えて、参考例１と同様に反応させた後、塩酸酸性として酢酸エチルで抽出し水洗後、酢酸エチルを留去させ残渣をエタノールに溶かし、これに水酸化ナトリウム／メタノール溶液を徐々に加えてｐＨ７として析出する白色結晶４．３ｇを得た。融点１５０℃付近から徐々に分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．７２（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）。また、Ｎ−エチルマレイン酸イミドを添加したものはＲｆ＝０．６９を示した。
参考例１２Ｎ−α−リポイル−５−ハイドロキシトリプトファン
ＤＬ−α−リポ酸４．２ｇおよびＬ−５−ハイドロキシトリプトファン５．０ｇを用いて、参考例８と同様にして白色結晶６．４ｇを得た。融点１１８℃〜１２０℃。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８５（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）。
実施例１Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノエタンスルホン酸ナトリウム亜鉛キレート化合物
参考例１で得られた化合物のナトリウム塩５．０ｇを水１００ｍｌに溶かし、これに酢酸１０ｍｌおよび亜鉛末１．３ｇを加えて５０℃、１時間攪拌後、未反応の亜鉛を濾別し、濾液を減圧下で濃縮して、これにエタノールを加えて析出する白色結晶を濾取した後、さらにこれを水に溶かし、炭酸水素ナトリウムで約ｐＨ８として濃縮し、メタノールを加えて析出する白色結晶を濾取し、これを水／メタノールから再結晶させると、目的化合物４．３ｇを得た。融点２９３℃付近から分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．５１（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）
元素分析：Ｃ_１０Ｈ_１７ＮＯ_４Ｓ_３ＮａＺｎ・Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，２８．７５Ｈ，４．５８Ｎ，３．３５
実測値：Ｃ，２８．５６Ｈ，４．６９Ｎ，３．１３
実施例２Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノエタンスルホン酸カリウム亜鉛キレート化合物
参考例２で得られた化合物６．５ｇを実施例１と同様に反応処理して目的化合物５．０ｇを得た。
元素分析：Ｃ_１０Ｈ_１７ＮＯ_４Ｓ_３ＫＺｎ・１／２Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，２８．２７Ｈ，４．２７Ｎ，３．３０
実測値：Ｃ，２８．３８Ｈ，４．５２Ｎ，３．１０
実施例３Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）グリシンナトリウム亜鉛キレート化合物
参考例７で得られた化合物４．５ｇを実施例１と同様に反応処理して、目的化合物３．９ｇを得た。融点２９７℃付近から分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．６４（クロロホルム：メタノール：水＝４：１：２）
元素分析：Ｃ_１０Ｈ_１６ＮＯ_３Ｓ_２ＮａＺｎ・Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，３２．５７Ｈ，４．９２Ｎ，３．８０
実測値：Ｃ，３２．４３Ｈ，４．８３Ｎ，３．７４
実施例４Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アスパラギン酸ナトリウム亜鉛キレート化合物
参考例５で得られた化合物３．０ｇを用いて、実施例１と同様に還元し、析出した白色結晶を濾取し、これを水にサスペンドしておき、水酸化ナトリウムでｐＨ７〜８として溶解させ、不溶物を濾別後、濾液を濃縮し、さらにメタノールを加えて析出する白色結晶を濾取して、目的化合物２．３ｇを得た。融点２９５℃付近から分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．５３（クロロホルム：メタノール：水＝５：４：１）
元素分析：Ｃ_１２Ｈ_１７ＮＯ_５Ｓ_２ＮａＺｎ・Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，３２．１１Ｈ，４．２９Ｎ，３．１２
実測値：Ｃ，３２．０９Ｈ，４．４４Ｎ，３．１０
実施例５Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−６−アミノヘキサン酸ナトリウム亜鉛キレート化合物
参考例４で得られた化合物３．０ｇを５０％のテトラハイドロフラン７０ｍｌに溶かし、実施例１と同様に還元し、溶媒を留去し析出した白色結晶を濾取する。融点２１５〜２１７℃。これを水にサスペンドしておき、水酸化ナトリウムでｐＨ７〜８として溶解させ、溶液を濃縮し、さらにメタノールを加えて析出する白色結晶を濾取して、目的化合物２．０ｇを得た。融点２９５℃付近から分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８４（クロロホルム：メタノール：水＝５：４：１）
元素分析：Ｃ_１４Ｈ_２４ＮＯ_３Ｓ_２ＮａＺｎ・Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，３９．５８Ｈ，６．１７Ｎ，３．３０
実測値：Ｃ，３９．３８Ｈ，６．０２Ｎ，３．１３
実施例６Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−γ−アミノ−ｎ−酪酸ナトリウム亜鉛キレート化合物
参考例６で得られた化合物４．０ｇを、実施例１と同様に還元、処理して、目的化合物の白色結晶２．１ｇを得た。融点２９７℃から分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．７０（クロロホルム：メタノール：水＝５：４：１）
元素分析：Ｃ_１２Ｈ_２０ＮＯ_３Ｓ_２ＮａＺｎ・Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，３６．３２Ｈ，５．５９Ｎ，３．５３
実測値：Ｃ，３６．０８Ｈ，５．８１Ｎ，３．２９
実施例７Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）フェニルアラニンナトリウム亜鉛キレート化合物
参考例８で得られた化合物５．４ｇに３０％メタノール８０ｍｌ、亜鉛末２．０ｇ、酢酸１０ｍｌおよび２Ｎ−塩酸２０ｍｌを加えて、５０℃、３時間攪拌後、未反応の亜鉛を濾別した後、濾液を濃縮し、水を加えて析出する油状物を集めた。これをナトリウム塩にするため、メタノールに溶かし、水酸化ナトリウム／メタノールでｐＨ７として析出結晶を濾取して３．９ｇを得た。融点２７０℃付近から徐々に分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８２（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）
元素分析：Ｃ_１７Ｈ_２３ＮＯ_３Ｓ_２ＮａＺｎ・１／２Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，４５．３９Ｈ，５．１５Ｎ，３．１１
実測値：Ｃ，４５．５５Ｈ，５．３３Ｎ，３．２３
実施例８Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アントラニル酸ナトリウム亜鉛キレート化合物
参考例９で得られた化合物３．６ｇを用いて、実施例７と同様にして白色結晶２．１ｇを得た。融点２９０℃付近から分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８８（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）
元素分析：Ｃ_１５Ｈ_１８ＮＯ_３Ｓ_２２ＮａＺｎ・Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，４１．８１Ｈ，４．６８Ｎ，３．２５
実測値：Ｃ，４１．９８Ｈ，４．６４Ｎ，３．２６
実施例９Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）メチオニン亜鉛キレート化合物
参考例１０で得られた化合物４．０ｇを用いて、実施例７と同様にして遊離酸の目的化合物２．８ｇを得た。融点２６０℃付近から徐々に分解。ＴＬＣ、Ｒｆ＝０．８２（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１：２）
元素分析：Ｃ_１３Ｈ_２３ＮＯ_３Ｓ_３Ｚｎ・１．５Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，３６．３２Ｈ，６．１０Ｎ，３．２６
実測値：Ｃ，３６．１７Ｈ，５．７８Ｎ，３．３４
実施例１０Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）システイン亜鉛キレート化合物
参考例１１で得られた化合物５．７ｇに５０％メタノール１００ｍｌ、亜鉛末３．５ｇ、酢酸１０ｍｌおよび２Ｎ−塩酸４０ｍｌを加えて、５０℃、３時間攪拌した後、未反応の亜鉛を濾別し、濾液を約１／２まで濃縮し、これに２Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨ３〜４として析出する白色結晶を濾取し、３％酢酸および水で洗った。これに１％水酸化ナトリウム液に溶かし、酢酸酸性として析出する結晶を濾取し、水およびメタノールで洗って乾燥させた。融点２８０℃付近から分解。ＴＬＣ、（アンモニア水で中和して溶かしたもの）Ｒｆ＝０．７１（クロロホルム：メタノール：水＝５：４：１）
元素分析：Ｃ_２２Ｈ_３６Ｎ_２Ｏ_６Ｓ_６Ｚｎ・３Ｈ_２Ｏとして
理論値：Ｃ，３１．７９Ｈ，４．６１Ｎ，３．３７
実測値：Ｃ，３１．９８Ｈ，４．７７Ｎ，３．１４
試験例１本化合物のチロシンハイドロキシラーゼ阻害作用
本化合物のチロシンハイドロキシラーゼ阻害作用について試験した。
（試験方法）
ラット脳由来のチロシンハイドロキシラーゼを試験に供した。
Ｌ−［３，５−^３Ｈ］チロシン（０．５μＣｉ／ａｓｓａｙ）を含む１００μＭチロシンとチロシンハイドロキシラーゼ１ｍｇ、０．２ｍＭ（６Ｒ）−５，６，７，８−テトラハイドロ−Ｌ−バイオプテリン、カタラーゼ１．８ｍｇ／ｍＬ、５ｍＭジチオセレイトール（ＭＥＳ緩衝液中、ｐＨ６．０）および試験物質を加えて３７℃、４０分間でインキュベートした。反応は１Ｍ塩酸に入った７．５％炭（Ｃｈａｒｃｏａｌ）により停止させた。
３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（ＤＯＰＡ）からできた^３Ｈ_２Ｏを液体シンチレーションにより測定した。
（試験物質）
参考例１の化合物，実施例１の化合物、α−リポ酸（０．１ｍＭ、１ｍＭ、最終濃度）
（試験結果）
その結果を表１に示す。

表１から明らかなように、本化合物にチロシンハイドロキシラーゼ阻害活性が認められた。これに対し、α−リポ酸にチロシンハイドロキシラーゼ阻害活性は認められなかった。このことから、本化合物はメラニン産生を制御する酵素であるチロシナーゼを阻害することがわかった。
試験例２本化合物のメラニン産生抑制作用
試験方法
大日本製薬より購入のマウス由来Ｂ１６−ＦＯメラノーマ細胞株を実験に用いた。６０ｍｍのシャーレに２０万個の細胞を藩種し、糖合成阻害剤であるＤ−ＧｌｕｃｏｓａｍｉｎｅＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅを０．１％加えた培地（Ｄ−ＭＥＭ^＊＋１０％ＦＢＳ^＊）で５日間培養し、メラニン合成を停止させ白色化した。５日間培養後に細胞をＰＢＳ（−）^＊で洗浄してＤ−ＧｌｕｃｏｓａｍｉｎｅＨｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅを除去した後、ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ阻害剤であるＴｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ２ｍＭ（２５０倍濃縮液／蒸留水）を加えて細胞内ｃＡＭＰを増加させることによりチロシナーゼの生合成の回復を促進した。これと同時に試験物質（２５０倍濃縮液／ＰＢＳ（−））を添加した。Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅおよび試験物質添加３日後に細胞をトリプシンにより回収した。細胞ペレットを１ｍｌのＰＢＳ（−）に懸濁させ、このうち０．１ｍｌを細胞数計測に、残りの０．９ｍｌをメラニン量測定に用いた。メラニン量の測定は細胞ペレットを５％トリクロロ酢酸、エタノール／ジエチルエーテル（３：１）、ジエチルエーテルで一回ずつ洗浄し風乾した後、２ＮＮａＯＨ１ｍｌを加えて溶解させ、４２０ｎｍにおける吸光度を測定してメラニン量を標準品による検量線より求めた。
＊（注）
Ｄ−ＭＥＷ：Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥＡＧＬＥＭＥＤＩＵＭ“Ｎｉｓｓｕｉ”▲２▼（ダルベッコ変法イーグル培地“ニッスイ”▲２▼）
ＦＢＳ：ＦｅｔａｌＢｏｖｉｎｅＳｅｒｕｍＣｅｒｔｉｆｉｅｄ，Ｏｒｉｇｉｎ：ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓ（非働化ウシ胎児血清）
ＰＢＳ（−）：Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＰＢＳ（−）”Ｎｉｓｓｕｉ”（ダルベッコＰＢＳ（−）“ニッスイ”）
その結果を表２に示す。

表２から明らかなように、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノエタンスルホン酸Ｎａ・Ｚｎ、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノヘキサン酸Ｎａ・Ｚｎ、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−γ−アミノ−ｎ−酪酸Ｎａ・Ｚｎ、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）メチオニンＺｎ、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）フェニルアラニンＮａ・Ｚｎ、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アントラニル酸Ｎａ・Ｚｎに強いメラニン産生抑制作用が認められ、その作用は従来から美白剤として使用されているアルブチン、コウジ酸よりかなり強いことがわかった。
試験例３本化合物のエラスターゼ阻害活性
試験方法
９６穴のプレートを用いて行った。Ｓｕｃ（Ｏｍｅ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＭＣＡ１ｍＭ、検体３０μｌ、Ｔｒｉｓ−ＮａＣｌＢｕｆｆｅｒ（２５℃，ｐＨ７．５）２１０μｌおよびＥｌａｓｔａｓｅ１ｕｎｉｔ／ｍｌ３０μｌを加えて１分ごとに蛍光（Ｅｘ．３６０／４０ｎｍＥｍ．４６０／４０ｎｍ）を測定し、エラスターゼ阻害率をＡＭＣ（７−Ａｍｉｎｏ−４−Ｍｅｔｈｙｌ−Ｃｏｕｍａｒｉｎ）標準品による検量線より求めた。
その結果を表３に示す。

表３より明らかなように、Ｎ−α−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−６−アミノヘキサン酸Ｎａ・Ｚｎ、Ｎ−α−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−γ−アミノ−ｎ−酪酸Ｎａ・Ｚｎ、Ｎ−α−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）メチオニンＺｎ、Ｎ−α−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）フェニルアラニンＮａ・Ｚｎ、Ｎ−α−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アントラニル酸Ｎａ・ＺｎはＥｌａｓｔｉｎａｌと同等のエラスターゼ阻害活性を示した。一方、α−リポ酸には全くエラスターゼ阻害作用は認められなかった。
本結果から本化合物は抗シワ剤として有用であることがわかった。
製剤実施例１注射剤
実施例１の化合物２．０ｍｇ
Ｄ−マンニトール５．０ｇ
注射用蒸留水全量１００ｍｌ
以上の成分を常法により注射剤とする。
【００５４】
製剤実施例２点眼剤
実施例２の化合物０．５ｇ
塩化ナトリウム０．５ｇ
ホウ酸０．７ｇ
ホウ砂０．３ｇ
ｐ−オキシ安息香酸メチル０．０２６ｇ
ｐ−オキシ安息香酸プロピル０．０１４ｇ
滅菌精製水全量１００ｍｌ
以上の成分を常法により調製し点眼剤とする。
製剤実施例３錠剤
実施例１の化合物５０ｍｇ
乳糖８０ｍｇ
馬鈴薯デンプン１７ｍｇ
ポリエチレングリコール３ｍｇ
以上を１錠剤分の材料として常法により錠剤に成型する。
製剤実施例４化粧用クリーム剤
実施例７、８または９の化合物０．５ｇ
ステアリン酸２．０ｇ
ステアリルアルコール７．０ｇ
スクワラン５．０ｇ
オクチルデカノール６．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル３．０ｇ
グリセリンモノステアレート２．０ｇ
プロピレングリコール５．０ｇ
ｐ−オキシ安息香酸メチル０．２ｇ
ｐ−オキシ安息香酸プロピル０．１ｇ
滅菌精製水７３．７ｇ
以上の成分を混和して化粧用クリーム剤とする。
産業上の利用可能性
本発明の金属キレート化合物またはそれらの薬理学的に許容できる塩はチロシナーゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用およびエラスターゼ阻害作用を有しているので、皮膚のしみ、そばかす、日焼けの予防・治療薬、美白剤、美肌剤および抗シワ剤などとして有用である。
さらに、本発明の金属キレート化合物は酸化ストレスによる種々の疾患、たとえば虚血性心疾患、脳虚血、動脈硬化症、糖尿病、白内障などの予防・治療にも有用である。
以上、本発明の態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の新規な教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で色々な修正と変更をなし得ることは可能であるので、そのような修正および変更も、全て後記の特許請求の範囲で定義される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。
本出願は日本で出願された特願２００１−０７８５７１を基礎としており、その内容は本願明細書に全て包含するものとする。

Claims

次の式（Ｉ）

（式中、Ｍは金属を示し、ＡはＮ結合したアミノ酸残基を示す。）で表されるＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物がＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−α−アミノ酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−β−アミノ酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−γ−アミノ酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−δ−アミノ酸金属キレートおよびＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−ε−アミノ酸金属キレートからなる群から選ばれるものである、請求項１記載のＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物がＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノエタンスルホン酸金属キレート、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）グリシン金属キレート、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アスパラギン酸金属キレート、Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−６−アミノヘキサン酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）−γ−アミノ−ｎ−酪酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）フェニルアラニン金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アントラニル酸金属キレート，Ｎ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）メチオニン金属キレートおよびＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）システイン金属キレートからなる群から選ばれるものである、請求項１記載のＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
金属が亜鉛である請求項１記載のＮ−（６，８−ジメルカプトオクタノイル）アミノ酸金属キレート化合物またはその薬理学的に許容できる塩。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する医薬。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有するチロシナーゼ阻害剤。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有するメラニン産生抑制剤。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する皮膚のしみ、そばかすまたは日焼けの予防・治療剤。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する美白剤。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する美肌剤。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有するエラスターゼ阻害剤。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する抗シワ剤。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩を含有する化粧品。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、チロシナーゼを阻害する方法。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、メラニン産生を抑制する方法。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、皮膚のしみ、そばかすまたは日焼けの予防・治療方法。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、皮膚の美白方法。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、皮膚の美肌方法。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、エラスターゼを阻害する方法。
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の有効量をヒトに投与することを含む、シワの予防・治療方法。
医薬製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
チロシナーゼ阻害剤の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
メラニン産生抑制剤の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
皮膚のしみ、そばかすまたは日焼けの予防・治療剤の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
美白剤の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
美肌剤の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
エラスターゼ阻害剤の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
抗シワ剤の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。
化粧品の製造のための請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容できる塩の使用。