KR100272743B1 - Hiv 감염의 치료에 유용한 미코박테리움 바케로부터의 항원물질 - Google Patents

Abstract

본 발명은 AIDS와 함께 또는 없이 및 관련된 결핵과 함께 또는 없이 HIV 감염의 치료를 위해 미코박테리움 바케로부터 유래된 항원 및/또는 면역조절 물질의 사용에 관한 것이다.

Description

HIV 감염의 치료에 유용한 미코박테리움 바케로부터의 항원물질

본 발명은 AIDS(후천성 면역 결핍증)와 함께 또는 없이 HIV 감염의 치료에 유용한 치료제에 관한 것이다.

AIDS의 원인제는 HIV(사람 면역결함 비루스)라고 불리는 레트로비루스 계열의 비루스라고 알려져 있다. 그러나, HIV에 의한 감염은 명백한 AIDS 증상을 즉시 일으키지는 않는다. 비루스에 노출되었다는 유일한 표시는 후에 'HIV 양성'으로 서술되는 감염 대상의 혈액 내에 그에 대한 항체의 존재일 것이다. 감염은 잠복하여 심각한 증상을 일으키지 않고, AIDS가 진전하기 전의 인큐베이션 기간은 몇 달에서 수십 년에 이르기까지 다양하다. AIDS 자체의 진전은 이유 없는 열, 체중감소, 만성 기침 또는 설사를 특징으로 하는 AIDS-관련 복합체(ARC)에 의해 진행될 수 있다.

비루스에 의한 감염과 감염된 개체의 면역계 붕괴 사이의 기간이 다양한 이유는 불충분하게 이해된다. 비루스의 증식을 개시하여 결과적으로 면역계를 붕괴시킬 수 있는 인자들은 현재까지 공지되어 있지 않다. 질병의 피해자는 이후, 불능이 된 면역계로 인해 죽음에 이르는 다양한 감염 및 악성에 놓이게 된다.

HIV 감염과 결핵 사이의 연관성은 잘 알려져 있다. HIV 감염의 초기 효과는 앞서 잠복한 결핵 간상균의 재활성화이다. 미코박테리아에 대한 저항성 유지는 HIV 감염에 의해 절충된 활성 면역학 과정이다. 이중으로 감염된 사람에게서 잠복한 결핵 간상균이 높은 속도로 재활성화되고 이러한 재활성화는 다른 HIV/AIDS-관련 감염의 출현 전에 잘 일어나는데, 이는 HIV 감염의 중요한 효과가, 미코박테리아 잠복을 유지하는 것으로 추정되는 T-세포 매개 면역 기능을 정확하게 파괴함을 강하게 시사한다.

또한 활성 결핵이 HIV 감염과 중복되는 경우에는, CD4 T-세포의 극적인 손실이 있다는 증거가 있는데 이는 명백한 AIDS 중상의 매우 신속한 진전을 초래한다.

이는 결핵에서 방출된 면역 매개자가 HIV 프로비루스의 상호활성화를 가속시킨다는 사실을 나타낸다.

우리는 앞서 결핵의 치료에 미코박테리움 바케(Mvcobacterium vaccae)로부터 유래된 항원 및/또는 면역 조절 물질의 사용을 서술했다(예컨대, 참조 영국특허 제2156673호 및 미국특허 제4724144호). 우리의 국제특허출원 제PCT/GB90/01169호(공개 번호 WO 91/01751)에서, 우리는 AIDS에 대한 면역 예방 치료를 위해, 즉 HIV에 의한 감염과 AIDS의 진전 사이의 기간을 증가시키기 위해 상기 물질의 사용을 서술했다.

우리는 이제 상기 치료제가 HIV에 의해 감염된 환자에 있어 AIDS의 진전을 지연시킬 뿐만 아니라, 질병이 훨씬 진전된 환자의 명백한 AIDS 증상의 완화 또는 심지어 제거를 야기할 수 있음을 발견하게 되었다. 이 효과들은 또한 결핵으로 고통받는 환자들에게도 발견되었으나, AIDS와 함께 또는 AIDS 없이 그리고 관련된 결핵없이 HIV 감염으로 고통받는 환자에게도 또한 일어난다고 예측된다.

따라서 본 발명은 AIDS의 치료에 및 또한 관련된 결핵과 함께 또는 없이 HIV-양성 무증후 환자의 치료에 유용한 약제의 제조를 위해 미코박테리움 바케로부터 유래된 항원 및/또는 면역조절 물질의 사용을 제공한다. 상기 물질은 HIV 양성이고 미코박테리움 결핵에 의한 감염과 함께 또는 감염없이 AIDS의 명백한 증상을 나타내는 대상과 같은 대상에게 적어도 증상의 진전을 완화시키기에 충분한 양으로 투여될 수 있다.

편리하게, 따라서 바람직하게 본 발명의 치료제는 M. 바케의 죽은 세포, 보다 바람직하게 오토클레이빙에 의해 죽은 세포로 이루어진다. 보통 면역치료제는 희석제 ml 당 미생물 10⁸이상 및 바람직하게 희석제 ml 당 미생물 죽은 M. 바케10⁸- 10¹¹으로 이루어진다. 본 발명은 AIDS 와 함께 또는 없이 및 관련된 결핵과 함께 또는 없이 HIV 감염의 치료에 사용하기 위해 M. 바케로부터의 항원 및/또는 면역조절 물질을 그 범위 내에 포함한다.

희석제는 주사용 무발열성 식염수 단독, 또는 pH 8.0 의 붕산염 완충액일 수 있다. 희석제는 멸균되어야 한다. 적당한 붕산염 완충액은 다음과 같다:

Na₂B₄0₇.10H₂03.63g

H₃BO₃5.25 g

NaCl 6.19 g

트윈(Tween) 0.0005%

증류수 1 리터까지

M. 바케중 바람직한 균주는 중앙 우간다의 랑고 지역으로부터의 진흙 샘플로 부터 단리된 R877R로 표시된 것이다(J. L. Stanford and R.C. Paul, Ann. Soc. Belge Med, Trop. 1973, 53, 141-389). 이 균주는 안정한 조면형(rough) 변이체이고 아우럼(aurum)아종에 속한다. 이는 생화학 및 항원 기준에 의해 M. 바케에 속하는 것으로 동정될 수 있다(R. Bonicke, S.E. Juhasz., Zentr albl. Bakteriol. Parasitenkd. Infection skr. Hyg. Abt. 1, Orig., 1964, 192, 133).

균주 R877R은 번호 NCTC 11659 하에 1984년 2월 13일에 영국 런던 NW9 5HT 콜린달 아부뉴, 중앙 공공 위생 연구소 네쇼날 콜렉션 오브 타입 컬쳐즈(NCTC)에 기탁되었다.

면역치료제의 제조를 위해, 미생물 M, 바케를 적당한 고체 배지상에서 증식시킬 수 있다. 변형된 소톤(Sauton)의 액체 배지가 바람직하고(S.V. Boyden and E. Sorkin., J. Immunol, 1955, 75, 15) 한천으로 고체화한다.

바람직하게 고체 배지는 1.3% 한천을 함유한다. 미생물이 접종된 배지는 호기적으로 배양되어 미생물이 일반적으로 32℃에서 10일 동안 성장할 수 있다. 이 유기체를 수확한 다음 계량하고 희석제에 현탁시킨다. 희석제는 완충되지 않은 식염수일 수 있으나 붕산염-완충된 것이 바람직하고 상기 서술된 바대로 트윈 80과 같은 계면활성제를 함유한다. 현탁물을 희석시켜 미생물 100 mg/ml를 얻는다. 부가적인 희석을 위해, 붕산 완충된 식염수를 현탁물이 미생물 습윤 중량 10 mg/희석제 ml를 함유하도록 사용하는 것이 바람직하다. 그다음 현탁액을 5 ml 다중투여 병에 분산시킬 수 있다. 병 안의 미생물을 2.5 메가라드의 조사량으로 예컨대⁶⁰Cobalt로 조사를 사용하거나 임의 다른 수단, 예컨대 화학적으로 죽일 수 있으나, 예컨대 10 psi에서 10분 동안 오토클레이빙에 의해 미생물을 죽이는 것이 바람직하다(115℃-125℃). 오토클레이빙이 조사보다 더 효과적인 제조율을 산출한다고 밝혀졌다.

일반적으로 면역치료제는 0.1-0.2 ml, 바람직하게 0.1 ml 범위의 부피로 피하내로 주사에 의해 투여된다. 일반적으로 단일 투여량은 죽은 M. 바케 미생물 10⁷- 10¹⁰을 함유할 것이다. 죽은 M. 바케 10⁸- 10⁹을 함유하는 단일 투여량을 환자에게 투여하는 것이 바람직하다. 그러나, 투여는 환자의 상태에 따라 반복될 수 있다.

면역치료제는 일반적으로 피하 주사에 의해 투여될 것이나, 경구 투여와 같은 다른 경로도 사용될 수 있다.

본 발명은 그의 범위 내에 결핵과 연관된 AIDS를 포함하여 AIDS와 함께 또는 AIDS 없이, HIV 감염에 대한 치료 방법을 포함하는데, 이는 연관된 결핵과 함께 또는 없이, AIDS와 함께 또는 없이 HIV 감염으로 고통받는 대상에게, AIDS 증상에 대해 효과적인 면역 반응을 유발하기에 충분한 양으로 미코박테리움 바케로부터 유래된 항원 및/또는 면역조절 물질을 투여하는 것으로 구성된다.

HIV에 감염된 아프리카 환자의 20-50%의 경우에 결핵은 AIDS 진전의 첫 번째 증상이다. 결핵 치료를 받은 일군의 환자들 가운데 HIV1에 대해 웰컴(Wellcome) ELISA에 의해 혈청양성은 17명이었다. 모든 환자에게 결핵에 대해 스트렙토마이신, 이소니아지드, 리팜피신 및 피라진아미드를 처방했다. 치료를 줄이고 어느 경우에도 3개월 이상 지속하지 않았다. 17명 환자 중 8명에서 본 발명의 치료제를 주었고 9명은 위약(식염수)을 주었다. 약 1년 후에 항-결핵 약제를 받은 환자 중 3명만이 살아남았고 이들 셋은 모두 결핵이 진전되었다. 본 발명의 치료제로 치료받은 8명 환자 중 7명은 산(acid) 패스트(fast) 바실러스 (즉, 결핵 바실러스)에 대해 타액 도포 음성이 되었고 상태의 일반적 개선은 HIV 양성이 아닌 결핵 환자의 증상과 유사했다. 8명 환자 중 5명은 진단시에 임파선증을 보급시켰다. 이는 사후검토시에 밝혀졌다. 사후검토시에 혈청학적으로 재시험된 단지 2명의 환자만이 HIV1에 대해 음성이었다.

다른 미코박테리아 항원을 치료제에 포함하고/포함하거나 M. 바케의 균주 하나이상을 사용하는 것이 이로울 것이고 이는 본 발명의 범위 내이다. 투베르클린도 또한 포함될 수 있다.

치료제는 또한 그의 효과를 촉진하기 위해 BCG(바실러스 칼메트-글에린) 백신, 특히 이 백신의 동결건조 형태를 함유할 수 있다.

치료제는 보조약, 보존제, 안정화제 등과 같은 부가적 성분을 함유할 수 있다. 이것은 멸균 주사용 액체 형태이거나 또는 사용전에 재구성되는 멸균 동결 건조 형태일 수 있다.

M. 바케는 본 발명에 따른 치료제를 제조하기 위해 그 자체로 또는 이 유기체의 추출물 또는 분획된 부분으로 사용될 수 있다.

다음 실시예는 본 발명에 사용된 치료제의 제법을 서술한다.

M. 바케를 1.3% 한천으로 고체화된 변형된 소톤 배지로 구성되는 고체 배지상에서 증식시켰다. 배지에 이 미생물을 접종하고 10일 동안 32℃에서 배양하여 미생물을 증식시켰다. 그 다음 미생물을 수확하고 계량하고 희석제에 현탁시켜 미생물 100 mg/희석제 ml를 얻었다. 그다음 현탁액을 완충된 식염수로 부가적으로 희석시켜 미생물 습윤 중량 10 mg/희석제 ml를 함유하는 현탁액을 얻고 5 ml 다중투여 병에 나누었다. 살아있는 미생물을 함유하는 병을 10 psi에서 10분 동안 오토클레이빙시켜 미생물을 죽이고 본 발명의 면역치료제를 얻고, 이는 (원한다면)사용을 위해 부가적으로 희석할 수 있다.

이 면역치료제는 이미 서술된 방식으로 피하 주사에 의해 투여할 수 있다.

Claims (7)

1. AIDS와 함께 HIV 감염의 치료에 유용한 약제 제조를 위한 미코박테리움 바케의 죽은 세포로 이루어진 항원 물질.
2. 제1항에 있어서, 미코박테리움 바케의 세포가 오토클레이빙에 의해 죽은 항원 물질.
3. 제1항에 있어서, 미코박테리움 박케로부터 유래된 물질이 번호 NCTC 11659 하에 1984년 2월 13일에 영국 런던 NW9 5HT 콜린달 아부뉴, 중앙 공공 위생 연구소 네쇼날 콜렉션 오브 타입 컬쳐즈(NCTC)에 기탁된 균주로부터 유래되는 항원물질.
4. 제1항에 있어서, 미코박테리움 바케로부터 유래된 물질이 투여당 미생물 10⁷- 10¹⁰을 함유하는 약제에 함유되는 항원 물질.
5. 제1항에 있어서, AIDS와 함께 HIV 감염이 결핵과 관련되는 항원 물질.
6. AIDS와 함께 및 관련된 결핵과 함께 또는 없이 HIV 감염의 치료에 사용하기 위해 미코박테리움 바케의 죽은 세포로 이루어진 항원 물질을 포함하는 면역치료제.
7. 제6항에 있어서, 미코박테리움 바케로부터 유래된 물질이 제2-4항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 면역치료제.