KR100445560B1 - 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하기 위한 키트의 제조방법과, 그 방법에 의해 제조된 키트와, 그 키트를사용하는 장치 - Google Patents
핵산 또는 생물학적 물질을 분리하기 위한 키트의 제조방법과, 그 방법에 의해 제조된 키트와, 그 키트를사용하는 장치 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100445560B1 KR100445560B1 KR20010067742A KR20010067742A KR100445560B1 KR 100445560 B1 KR100445560 B1 KR 100445560B1 KR 20010067742 A KR20010067742 A KR 20010067742A KR 20010067742 A KR20010067742 A KR 20010067742A KR 100445560 B1 KR100445560 B1 KR 100445560B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- kit
- lyophilized
- biological
- nucleic acid
- container
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 55
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 55
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 47
- 239000011343 solid material Substances 0.000 claims abstract description 47
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000003566 sealing material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 29
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 13
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 9
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 8
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 claims description 8
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 8
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 3
- 239000007769 metal material Substances 0.000 claims description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006223 plastic coating Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012056 semi-solid material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 핵산 또는 다양한 생물학적 물질을 분리하고 정제하기 위한 키트를 제조하는 방법과, 그 방법에 의해 제조된 키트와, 그 키트를 사용하는 장치에 관한 것이다.
핵산과 결합하는 성질을 가진 고체 물질을 사용하여 생물학적 시료로부터 핵산 또는 생물학적 물질들을 분리 또는 정제하기 위한 키트를 제조하는 방법은, (a) 핵산 또는 생물학적 물질들을 분리하는 데에 적합한 고체 물질들과 버퍼를 보유하도록 구성된 복수의 챔버들을 구비하는 용기를 제조하는 단계와, (b) 보어가 관통 형성되어 있고 상기 용기의 각 챔버 내로 담궈지는 돌출부를 구비하고, 상기 보어를 통해 상기 고체 물질을 모으기 위한 자성 바아가 챔버 내로 진입할 수 있도록 구성된 덮개를 제조하는 단계와, (c) 소정의 절차에 따라 핵산과 생물학적 물질들을 분리하기 위해 고체 물질들과 버퍼들로 챔버들을 채우는 단계와, (d) 소정의 밀봉 재료로 상기 용기를 밀봉하는 단계와, (e) 상기 용기와 덮개를 개별 케이스에 포장하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의하면, 간단하고, 저렴하고, 중, 소량의 시료 처리가 효과적인 키트가 제조된다. 따라서, 임상적 또는 생물학적 실험에 충분히 훈련되지 않은 사람에 의한 수동의 피펫(pipette) 작업이 회피될 수 있게 된다. 또한, 생물학적 시료로부터 분리된 핵산이 미리 채워져 있는 컬럼을 갖는 일회용 키트는 다른 버퍼나 튜브를 바꾸지 않고서도 PCR 증폭을 수행하기 위해 일반적인 PCR 사이클러에 바로 이동될 수 있다.
Description
본 발명은 혈액이나 세포 또는 다양한 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 분리 또는 정제하기 위한 키트의 제작 방법과, 그 방법에 의해 제작된키트와, 그리고 그 키트를 사용하는 장치에 관한 것이다.
혈액이나 다른 다양한 생물학적 시료로부터 핵산을 분리, 정제하는 것은 생물학, 생화학, 분자의학, 법의학, 진단의학 등과 같은 많은 분야의 범위에서 중요한 출발점이 된다. 최근 들어서 DNA 증폭을 위한 다양한 중합 효소 연쇄 반응(이하, "PCR"이라 함)은 생물학적 연구와 진단 분야에서 빈번하고 필수적인 단계로서 생물학적 시료로부터 핵산의 분리를 필요로 하도록 하였다(미국 특허 제4,683,195호 참조). 핵산의 분리를 위한 기존의 방법들은 페놀과 클로로포름과 같은 유해한 유기 용매들을 사용한다. (참조 문헌: Sambrook, J., E. F. Fritsoh and T. Maniatis 1989, Molecular cloning: A Laboratory Manual, 2nd ea., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)
최근에는 핵산과 결합하는 성질을 가진 물질을 사용하는 몇몇 방법들이 제안되었다. 이러한 물질들로, 예컨대 실리카(참조 문헌: Boom, R., Sol, C. J. A. Salimans, M. M. M., Jansen, C. L., Wertheim-van Dillen, P. M. E., and van der Noordaa, J. (1990) J. Clin, Microbiol. 28, 495-503)와, 유리 섬유(참조 문헌: Vogelstein, B., and Gillespie, D. (1979) Proc. Natl. Acs. Sci. USA 76, 615-619, Marko, M. A., Chlpperfield, R., and Birnbolm, H. C. (1982) Anal. Biochem. 121, 382-387)와, 음이온 교환 수지(참조 문헌: Wang, K , Kroken, M., Dahlherg, O. J., Deggerdal, A., Jakobsen, K. S., and Larsen, F. (1997) BioTechniques 22, 506-511; and Deggerdal, A. and Larsen, F. (1997) BioTechniques 22, 554-557)와, 변형된 자성 비드(참조 문헌: Rudi, K., Kroken,M., Dahlherg, O. J., Deggerdal, A., Jakobsen, K. S., and Larsen, F. (1997) BioTechniques 22, 506-511; and Deggerdal, A. and Larsen, F. (1997) BioTechniques 22, 554-557)가 있다.
이러한 물질들을 사용하는 방법들의 이점은 유해한 유기 용매를 사용하지 않는다는 것과 분리 과정에서 핵산이 물리적, 생화학적으로 분해되는 것을 최소화한다는 것이다. 뿐만 아니라 고착된 핵산은 핵산을 분해하는 효소에 덜 영향을 받는다.
그러나, 이러한 방법들은 여전히 고체 물질을 다른 용기로 옮기기 위해 힘들게 손으로 피펫(pipette)을 사용하여 옮기는 단계를 필요로 하며 그 실험자가 핵산을 분리해야 하는 시작 물질로 감염된 혈액 또는 박테리아를 사용한다면 감염된 바이러스와 박테리아로부터 잠재된 바이러스와 세균의 감염에 그 실험자는 노출되게 된다.
힘들고 지루한 수동 단계들을 피하고 실험자의 잠재적인 오류를 제거하기 위해 "MagNa Pure LC"(Roche, Mannheim, Germany AG)와 "GENESIS"(Techan, Hombrechtikon, Switzerland) 등으로 알려진 몇몇 자동화 기계들이 개발되었다. 이 기계들은 미국특허 제 3,985,649호에 개시된 개념을 기초로 하여 많은 수의 시료를 취급할 수 있도록 고안되었다. 이러한 자동화 기계의 대부분은 다양한 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 수집하는 과정 중에서 유해한 화학적 용매를 사용하는 단계와 원심분리 단계를 제거하기 위해 자성 비드를 사용한다. 비록 이러한 기계들이 핵산이나 생물학적 물질을 분리하는데 있어 높은 처리량을 가지기는하지만, 중, 소량의 시료 취급에 있어서 그 기계들은 크고 고가이며 복잡하고 비효율적이다. 그러므로, 결과적으로 이러한 기계들은 대부분의 임상 진단과 소형 실험실에서는 실용적이지 못하다.
더욱이, 이러한 기계들을 작동하기 위해서 실험자가 실시간으로 그 기계에 자성 비드 등을 포함하는 고체 물질과 충분한 버퍼를 공급해 주어야 한다. 그러나, 생물학적, 임상적 실험으로 훈련되지 않은 사람이 이러한 기계를 사용하는 것은 부담스럽고 힘든 일이다.
또한, 종래의 기계에서 얻어진 추출된 핵산은 다시 PCR 버퍼가 담긴 튜브로 이송해야 함으로 PCR 증폭을 하는데 있어 불편을 감수해야 한다.
생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질들을 분리하기 위한 종래의 기계들의 단점들을 고려하여 PCR 증폭이나 다른 생물학적 실험들을 수행하기에 적합한 키트와 장치를 작고 이동하기 쉽고 효율적으로 제조해 해야 할 필요성이 여전히 있게 된다.
본 발명은 종래 기술들이 갖는 전술한 문제점들을 해결하기 위하여 발명되었다.
본 발명의 목적은 그 내부의 챔버 및 컬럼에 고체 물질, 버퍼, 효소들과 같은 적절한 물질들이 미리 채워져 있고 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 분리, 정제하기 위한 키트를 제작하는 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 분리, 정제하기 위해 그 챔버에 생물학적 물질을 분리하는데 필요한 고체 물질, 버퍼, 효소와 같은 적절한 물질들이 미리 채워져 있는 일회용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 챔버와 컬럼이 핵산의 분리를 위해 필요한 다양한 고체 물질, 버퍼, 효소들과 같은 적절한 물질들로 미리 채워져 있고 핵산의 분리 후에 PCR 증폭을 하기 위해 다른 버퍼를 첨가하거나 튜브를 바꾸지 않고서도 PCR 기계에 쉽게 옮길 수 있고 이에 밀착 고정시킬 수 있는 일회용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 분리, 정제하기 위한 일회용 키트(kit)를 사용되고 가격이 저렴하며 생물학적, 임상적 실험으로 훈련되지 않은 사람도 쉽게 사용할 수 있는 휴대용 장치를 제공하는 것이다.
도 1은 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 분리 또는 정제하기 위한 본 발명의 일회용 키트(kit)의 제조 방법을 설명한 흐름도.
도 2는 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 분리하기 위해 필요한 다양한 버퍼와 자성을 띤 고체 물질들이 담겨있는 챔버와 컬럼을 구비한 본 발명의 제1 실시예에 의한 일회용 키트의 구성을 도시하는 전개 사시도.
도 3의 (a) 및 (b)는 생물학적 시료로부터 핵산을 분리하기 위한 다양한 버퍼(buffer)와 자성 비드 물질(magnetic bead material)을 담고 있는 복수의 챔버와, 후속 중합 효소 연쇄 반응(PCR) 증폭을 위한 효소, 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP), 및 마그네슘 클로라이드(MgCl2) 등으로 구성된 PCR 버퍼를 담고 있는 컬럼을 구비한 본 발명의 제2 실시예에 따른 용기(container)의 단면도 및 정면도.
도 4의 (a) 및 (b)는 복수의 챔버와 컬럼을 구비한 본 발명의 제2 실시예에따른 덮개의 단면도 및 정면도.
도 5의 (a) 및 (b)는 다양한 버퍼와, 자성 비드 물질과, 자성 입자 및 동결 건조된 PCR 성분으로 구성된 고체 물질을 담고 있는 복수의 챔버와, PCR 버퍼를 담고 있는 컬럼을 구비한 본 발명의 제3 실시예에 따른 용기의 단면도 및 정면도.
도 6은 본 발명에 따른 생물학적 시료로부터 핵산과 생물학적 물질을 분리, 정제하기 위한 일회용 키트를 사용하는 장치의 개략도.
<도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명>
10, 10: 용기
20: 덮개
15: 챔버
17: 컬럼
40: 덮개 상하 이동 수단
50: 자성 바아 상하 이동 수단
60: 용기 이동 수단
70: 제어 수단
이러한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 태양에 의하면, (a) 핵산 또는 생물학적 물질들을 분리하는 데에 적합한 고체 물질들과 버퍼를 보유하도록 구성된 복수의 챔버들을 구비하는 용기를 제조하는 단계와, (b) 보어(bore)가 관통 형성되어 있고 상기 용기의 각 챔버 내로 담궈지는 돌출부를 구비하고, 상기 보어를 통해 상기 고체 물질을 모으기 위한 자성 바아가 챔버 내로 진입할 수 있도록 구성된 덮개를 제조하는 단계와, (c) 소정의 절차에 따라 핵산과 생물학적 물질들을 분리하기 위해 고체 물질들과 버퍼들로 챔버들을 채우는 단계와, (d) 소정의 밀봉 재료로 상기 용기를 밀봉하는 단계와, (e) 상기 용기와 덮개를 개별 케이스에 포장하는 단계를 포함하는, 핵산과 결합하는 성질을 가진 고체 물질들을 사용하여 생물학적 시료로부터 핵산 또는 생물학적 물질들을 분리하기 위한 키트를 제조하는 방법이 제공된다.
본 발명에 의하면, 상기 제조된 용기는 중합 효소 연쇄 반응(PCR)을 위한 버퍼들을 담도록 구성된 컬럼을 더 구비하고 있으며, 상기 컬럼은 생물학적 시료로부터 분리된 핵산으로 PCR 증폭을 수행하기 위한 버퍼가 채워져 있는 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 태양에 의하면, 상기 방법에 의해 제조된 키트가 제공된다.
또한, 본 발명의 또 다른 태양에 의하면, 각 챔버 내의 버퍼 및 고체 물질들 또는 컬럼 내의 효소 및 버퍼를 혼합하거나 교반하기 위해 상기 덮개를 상하 이동시키기 위한 수단과, 상기 덮개의 돌출부 내에 형성된 구멍을 통해 해당 챔버 또는 컬럼 내로 자성 바아를 상하 이동시키기 위한 수단과, 상기 덮개의 보어가 상기 용기의 다음 챔버 또는 컬럼에 대응되게 정렬되도록 상기 용기를 이동시키거나 위치시키기 위한 수단과, 그리고 생물학적 시료로부터 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하는 과정에 따라 소정의 절차에 의해 상기 모든 장치를 제어하기 위한 제어 수단을 포함하여, 생물학적 시료로부터 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하기 위한 장치가 제공된다.
본 발명의 상기 및 여타 목적과 특징들은 첨부 도면을 참조하여 양호한 실시예에 대한 이하의 상세한 설명으로부터 명백해 질 것이다.
이하에서, 본 발명의 양호한 실시예들을 첨부 도면을 참조하여 상세히 설명한다.
도 1 내지 도 5에 의하면, 생물학적 시료로부터 핵산과 생물학적 물질을 분리하기 위해 PCR 버퍼를 포함하는 본 발명의 일회용 키트를 제조하는 방법과, 그 방법에 따라 제조된 키트가 상세히 설명되어 있다.
본 발명에 따른 키트 제조 과정에서, 키트를 구성하는 용기(10)와 덮개(20)가 먼저 제조된다.
키트의 용기(10)는 생물학적 물질의 분리를 위해 적합한 고체 물질과 버퍼를 담도록 구성된 복수의 챔버(15)를 구비하도록 구성되어 있다. 복수의 챔버(15)를 형성하기 위해, 용기(10)는 소정의 높이(H)를 갖는 내벽 및 외벽(11, 12)과 바닥판(13)을 구비한다. 복수의 챔버(15)는 내벽 및 외벽(11, 12)이 그들 사이에 배치되어 고정되는 소정 개수의 칸막이(16)에 의해 서로 연결되는 방식으로 내벽 및 외벽(11, 12) 사이에 형성된다. 즉, 용기(10)의 각 챔버(15)는 내벽 및 외벽(11, 12)과, 바닥판(13)과, 2개의 인접한 칸막이(16)로 형성된다. 중앙 구멍(14)이 내벽(11) 내부에 또한 형성된다.
키트의 덮개(20)는, 이를 관통하여 형성된 보어(24)를 갖고 용기(10)의 챔버(15) 내로 잠길 수 있는 돌출부(23)를 구비하도록 구성된다. 이 덮개(20)는 평판부(21)와 중앙 축(22)을 더 구비한다. 이 평판부(21)는 돌출부(23)와 중앙 축(22)이 이로부터 돌출하는 기저판(base plate)의 형태로 형성된다. 덮개(20)의 중앙 축(22)은 덮개(20)가 용기(10)에 밀착되어 이를 덮을 때 용기(10)의 중앙 구멍(14)에 꼭 끼게 된다. 덮개(20)는 중앙 축(22)이 용기(10)의 중앙 구멍(15)에 의해 안내되고 지지되는 상태로 용기(10)에 대해 상승 및 하강될 수 있다. 보어(24)는 자성 스틱(stick) 또는 바아(bar; 30)(도 4 참조)가 이를 통해 활주될 수 있도록 돌출부(23)를 관통하여 형성된다. 후술되는 바와 같이, 자성 바아(30)는 챔버(15) 내의 고체 물질을 모으고 추가 과정을 위해 다음 챔버 안으로 모아진 고체 물질들을 이동시키는 데에 사용된다. 여기서, 용기(10)와 덮개(20)는 성형공정을 통해 폴리카보네이트, 폴리프로필렌, 또는 폴리스티렌 등으로 제조되는 것이 바람직하다.
용기(10)와 덮개(20)가 완전히 제조된 후, 용기(10)의 각 챔버(15)는 생물학적 물질의 분리를 위한 고체 물질들과 버퍼들로 채워진다.
그 후, 챔버들에 고체 물질과 버퍼가 미리 채워진 용기의 개방 상부를 소정의 밀봉 재료로 밀봉한다. 이 밀봉 재료는 챔버(15) 내에 미리 채워진 고체 물질들과 버퍼들이 누설되는 것을 방지할 수 있는 알루미늄 호일, 비닐 또는 플라스틱 랩(wrap) 등으로 제조되는 것이 바람직하다. 이와 같이 하여, 생물학적 시료로부터 생물학적 물질을 분리하기 위한 일회용 키트가 제조되게 된다.
최종적으로, 이 키트를 개별 케이스로 포장하여 판매하게 된다.
도 3과 도 4를 참조하여, 핵산 증폭용 PCR 적용예에 사용하기 위한 용기와 덮개를 포함하는 키트를 제조하기 위한 방법의 다른 실시예를 설명한다. 본 발명의 상기 양호한 실시예에 있어서, 컬럼(17)이 용기(10') 내에 더 형성된다. 즉, 컬럼(17)은 챔버(15)들 중의 하나를 용기(10')의 바닥판(13)으로부터 아래쪽으로 소정의 길이(d)만큼 더 연장시킴으로써 형성된다. 물론, 효소, 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP) 등의 성분으로 구성된 PCR 버퍼들이 컬럼(17)에 채워져 있다. 컬럼(17)은 이후 사용될 종래의 PCR 사이클러(cycler)의 웰(well)에 밀착되게 끼워지도록 종래의 PCR 사이클러의 웰에 대응하는 형상을 갖는다. 전술한 바와 같이, 용기(10')의 컬럼(17)은 PCR용 효소와 버퍼로 채워지며, 이 경우 물론 용기(10')의 챔버(15)는 생물학적 물질의 분리를 위한 고체 물질과 버퍼로 채워져 있다. 그 후, 용기(10')를 소정의 밀봉 재료로 밀봉하여 개별 케이스에 낱개로 포장한다. 이렇게 해서, 생물학적 시료로부터 핵산을 분리하기 위한 일회용 키트가 완전히 제작되는 것이다.
도 5를 참조하여, 핵산 증폭을 위한 PCR 적용예에 사용되기 위한 용기와 덮개를 구비한 키트를 제조하는 방법의 다른 실시예를 설명한다. 본 발명의 양호한 실시예에 있어서, 용기(10')의 적어도 하나의 챔버(15)는 2가지 상이한 형태의 고체 물질들을 수용하도록 구성된다. 이러한 고체 물질들 중의 한 형태는 자성 바아(30)가 소정 챔버에서 고체 물질을 모아 이를 다음 챔버로 이동시키는 데에 사용되는 자성 구슬 형태의 물질이다. 상기 고체 물질의 다른 형태는 왁스와, 자성체에 반응하는 입자와, 동결 건조된 효소, 동결 건조된 프라이머와 같은 동결 건조 물질들로 구성된 준 고체 물질(semi-solid material)의 형태이다. 보다 구체적으로는, 고체 물질(31)은 왁스(34)와, 자성체에 반응하는 입자(32)와, 효소, 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP), 마그네슘 클로라이드(MgCl2), 프라이머(primer) 및 트리스(Tris)와 같은 PCR 성분(33)으로 구성된다. 물론, 필요하다면, 상기 왁스는 상기의 고체 물질(31)에 포함되지 않을 수도 있다. 이 고체 물질에 동결 건조된 PCR 성분을 사용하는 중요한 이점은 동결 건조된 PCR 성분은 매우 안정하고 활성도(shelf life)가 오래 지속된다는 점이다. 자성체에 반응하는 입자(32)는 챔버들 내의 버퍼들과 반응하지 않고 자체에 자성을 갖고 있는 플라스틱, 고무 또는 그와 유사한 물질이나 단지 자성에 반응하고 챔버들 내의 버퍼에 반응하지 않는 금속 또는 플라스틱 코팅된 금속 물질이다.
다음으로, 도 6을 참조하여, 상기의 공정에 의해 제조된 키트를 사용하여, 소정의 순서나 절차에 따라 생물학적 시료로부터 핵산이나 생물학적 물질을 분리하기 위한 장치(300)를 설명한다.
이 장치(300)는 덮개(20)를 상하 이동시키기 위한 수단(40)과, 챔버(15) 또는 컬럼(17) 내로 자성 바아(30)를 상하 이동시키기 위한 수단(50)과, 다음 챔버나 컬럼에 대응되는 위치로 용기(10 또는 10')를 이동시켜 위치시키기 위한 수단(60)과, 그리고 소정의 절차에 따라 상기의 수단(40, 50, 60)들을 제어하기 위한 제어수단(70)으로 구성된다.
덮개(20)를 상하 이동시키기 위한 수단(40)은 제1 모터에 의해 상하로 이동한다. 전술한 바와 같이, 덮개(20)의 돌출부(23)는 덮개(20)가 용기(10 또는 10')에 근접 접촉하게 될 때 해당 챔버 또는 컬럼 내로 잠길 수 있도록 구성된다. 따라서, 버퍼들(예를 들어, 액체 반응물)과 고체 물질들은 덮개(20)의 상하 운동을 통해 돌출부(23)에 의해 각각의 챔버(15) 내에서 효과적으로 혼합되거나 교반될 수 있다. 고체 물질들과 버퍼들을 더욱 효과적으로 교반하거나 혼합하기 위해, 용기(10 또는 10')를 흔들 수 있는 다른 수단이 제공될 수 있다.
자성 바아(30)를 상하로 이동시키기 위한 자성 바아 이동 수단(50)은 현재 해당 챔버에서 고체 물질을 모아서 다음 챔버나 컬럼으로 이동시키기 위하여 자성 바아(30)를 덮개(20)의 보어(24)를 통해 삽입하거나 인출한다. 이 자성 바아 이동 수단(50)은 덮개 이동 수단(40)과 동기화되는 것이 바람직하다. 즉, 덮개(20)가 용기(10 또는 10')와 근접 접촉하게 되면 자성 바아(30)가 챔버(15) 내의 버퍼 안으로 담궈지고 해당 챔버로부터 고체 물질을 수집하게 된다. 그 다음, 용기(10 또는 10')가 덮개(20)의 돌출부(23)에 방해를 주지 않고 이동할 수 있는 정도로 덮개(20)가 상승될 때, 자성 바아(30)도 또한 고체 물질을 모은 상태에서 상기 용기와 같은 정도 또는 그 이상으로 상승하게 된다.
(도시되지 않은) 작업대 상에서 용기(10 또는 10')를 위치시키거나 이동시키기 위한 수단(60)은 용기(10 또는 10')를 현 위치에서 덮개(20)의 보어(24)에 용기(10 또는 10')의 후속 챔버 또는 컬럼이 정렬 또는 대응되는 다음 작동 위치로 이동시킨다. 이 용기 이동 수단은 이동 판(moving plate)의 형태로 제조될 수도 있다.
도 2 및 도 3에 도시된 높이가 낮은 원통형 키트가 사용되는 경우에, 용기(10 또는 10')는 중앙 구멍(14)의 중심축에 대해 회전하는 것이 바람직하다. 용기 이동 수단(60)은 용기(10 또는 10')를 원하는 위치로 이동시키기 위해 용기(10 또는 10')의 바닥판(13)의 (도시되지 않은) 소정 부분에 통상의 수단을 통해 고정될 수도 있다. 상기 고정 수단은 소정 위치에 형성된 오목한 부분(recess)과 이 오목한 부분에 끼워지고 용기 이동 수단(60) 내에 구비된 (도시되지 않은) 보스(boss)로 구성될 수도 있다. 양호하게는, 용기 이동 수단(60)은 용기(10 또는 10')를 회전시키기 위한 통상의 기어 시스템이나 벨트 시스템을 구비하여 구성된다. 용기 이동 수단(60)은 360도의 각도를 챔버와 컬럼(있다면)의 총 개수로 나눈 값에 대응하는 소정의 각도만큼 용기(10 또는 10')를 중앙 구멍(14)의 중심축에 대하여 회전할 수 있게 한다. 물론, 용기 이동 수단(60)은 제3 모터에 의해 회전된다.
또한, 소정의 순서 또는 절차에 따라 상기의 모든 수단(40, 50, 60)들을 제어하기 위한 제어 수단(70)이 또한 제공된다. 이 제어 수단(70)은 마이크로컴퓨터가 될 수도 있다. 즉, 본 발명의 키트를 이용하는 장치는 다음과 같은 방법으로 제어될 수 있다. 덮개(20)가 용기(10 또는 10')에 근접 접촉될 때, 덮개(20)의 돌출부(23)는 챔버 안의 버퍼들과 고체 물질들을 교반하거나 혼합하기 위해 제1 챔버에 담궈진 상태가 되고, 이어서 자성 바아 이동 수단(50)은 자성 바아(30)를 덮개(20)의 보어(24)를 통해 제1 챔버 속으로 들어가게 한다. 그런 후에, 자성 바아(30)는 제1 챔버에서 고체 물질을 수집하여 수집된 고체 물질을 집은 상태에서 덮개(20)와 함께 또는 이와 별도로 상승된다. 그리고 나서, 용기(10 또는 10')는 제2 챔버가 덮개(20)의 돌출부(23) 바로 아래에 위치하도록 용기 이동 수단(60)에 의해 이동하거나 회전된다. 덮개(20)는 제2 챔버 내로 다시 하강하여 버퍼 속에 고체 물질을 떨어뜨린 후 상승하여, 버퍼 속의 고체 물질이 섞이거나 교반되도록 용기(10 또는 10')가 이동되거나 회전된다. 혼합 및 교반 후, 덮개(20)와 자성 바아(30)는 다시 제2 챔버로 내려가서 고체 물질을 모아 집는다. 이상의 과정들은 모든 절차가 완료될 때까지 반복될 것이다. 따라서, 핵산이나 생물학적 물질과 같은 최종 성분들은 컬럼이나 최종 챔버 내에서 용이하게 얻을 수 있게 된다. 물론, 용기(10 또는 10')를 이동시키거나 회전시키는 대신에, 덮개(20)를 회전시키거나 이동시킬 수도 있다.
비록 본 발명이 상기의 양호한 실시예를 참조하여 도시되고 기술되었으나, 후속의 특허청구범위에 청구된 본 발명의 기술적 요지 및 범위를 벗어나지 않고서도 다양한 변경 및 수정이 당업자에 의해 용이하게 수행될 수 있다는 것을 알 수 있다. 따라서, 본 발명은 특허청구범위에 청구된 발명 및 그 등가물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명에 따르면 챔버나 컬럼에 실험 목적에 따라 버퍼, 고체 물질, 효소가 미리 채워지기 때문에, 간단하고, 저렴하고, 중, 소량의 시료를 처리하는 데에 효과적인 키트가 제조될 수 있으며, 임상적, 생물학적 실험에 충분히 훈련되지 않은 사람에 의한 피펫을 이용한 수동 작업이 불필요하게 된다는 이점들이 있다. 또한, 생물학적 시료로부터 분리된 핵산이 들어있는 컬럼을 갖는 일회용 키트는 다른 버퍼나 튜브를 바꾸지 않고서도 PCR 증폭을 수행하기 위해 종래의 PCR 사이클러로 직접 이동될 수 있다.
Claims (21)
- 핵산과 결합하는 성질을 가진 고체 물질들을 사용하여 생물학적 시료로부터 핵산 또는 생물학적 물질들을 분리하기 위한 키트를 제조하는 방법에 있어서,(a) 핵산 또는 생물학적 물질들을 분리하는 데에 적합한 고체 물질들과 버퍼를 보유하도록 구성된 복수의 챔버들을 구비하는 용기를 제조하는 단계와,(b) 보어가 관통 형성되어 있고 상기 용기의 각 챔버 내로 담궈지는 돌출부를 구비하고, 상기 보어를 통해 상기 고체 물질을 모으기 위한 자성 바아가 챔버내로 진입할 수 있도록 구성된 덮개를 제조하는 단계와,(c) 소정의 절차에 따라 핵산과 생물학적 물질들을 분리하기 위해 고체 물질들과 버퍼들로 챔버들을 채우는 단계와,(d) 소정의 밀봉 재료로 상기 용기를 밀봉하는 단계와,(e) 상기 용기와 덮개를 개별 케이스에 포장하는 단계를포함하는 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 제조된 용기는 중합 효소 연쇄 반응(PCR)을 위한 버퍼들을 담도록 구성된 컬럼을 더 구비하고 있으며, 상기 컬럼은 생물학적 시료로부터 분리된 핵산으로 PCR 증폭을 수행하기 위한 버퍼가 채워져 있는 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 고체 물질들은 핵산 또는 생물학적 물질을 흡수 또는 운반하는 자성 비드인 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제3항에 있어서, 자성체에 반응하는 입자, 동결 건조된 효소, 동결 건조된 프라이머, 동결 건조된 마그네슘 클로라이드(MgCl2) 및 동결 건조된 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP)로 구성된 물질이 상기 챔버들 중의 적어도 하나에 담겨 있는 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제3항에 있어서, 왁스, 자성체에 반응하는 입자, 동결 건조된 효소, 동결 건조된 프라이머, 동결 건조된 마그네슘 클로라이드(MgCl2) 및 동결 건조된 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP)로 구성된 물질이 상기 챔버들 중의 적어도 하나에 담겨 있는 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 자성체에 반응하는 입자는 자성을 띤 플라스틱 또는 고무인 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 자성체에 반응하는 입자는 금속 또는 코팅된 금속 물질인 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 자성체에 반응하는 입자는 금속 또는 코팅된 금속 물질인 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제5항에 있어서, 상기 자성체에 반응하는 입자는 자성을 띤 플라스틱 또는 고무인 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 컬럼은 그 돌출된 부분이 PCR 사이클러의 웰에 밀착되게 끼워질 수 있는 형상을 갖는 것을 특징으로 하는 키트 제조 방법.
- 청구항 제1항의 방법에 따라 제조된 키트.
- 제11항에 있어서, 상기 제조된 용기는 중합 효소 연쇄 반응(PCR)을 위한 버퍼들을 담도록 구성된 컬럼을 더 구비하고 있으며, 상기 컬럼은 생물학적 시료로부터 분리된 핵산으로 PCR 증폭을 수행하기 위한 버퍼가 채워져 있는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 고체 물질들은 핵산 또는 생물학적 물질을 흡수 또는 운반하는 자성 비드인 것을 특징으로 하는 키트.
- 제12항에 있어서, 상기 컬럼은 그 돌출된 부분이 PCR 사이클러의 웰에 밀착되게 끼워질 수 있는 형상을 갖는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제12항에 있어서, 자성체에 반응하는 입자, 동결 건조된 효소, 동결 건조된 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP), 동결 건조된 마그네슘 클로라이드(MgCl2), 동결 건조된 트리스(Tris)와 동결 건조된 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)로 구성된 고체 입자들이 상기 챔버들 내에 담겨 있고, 생물학적 시료로부터 분리된 핵산으로 PCR 증폭을 수행하기 위해 사용되는 PCR 버퍼들은 상기 컬럼에 담겨 있는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 용기는 내벽 및 외벽과, 바닥판과, 복수의 칸막이로 구성되고, 상기 챔버들의 각각은 내벽 및 외벽과, 바닥판과, 인접한 2개의 칸막이로 형성되는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 덮개는 용기의 내벽에 의해 형성된 중앙 구멍 내로 끼워지도록 구성된 중앙 축을 구비하며, 상기 중앙 축은 상기 덮개가 상하 이동할 수 있도록 중앙 구멍 내로 안내되고 이에 의해 지지되는 것을 특징으로 하는 키트.
- 청구항 제11항의 키트를 사용하여 생물학적 시료로부터 핵산 또는 생물학적물질을 분리하기 위한 장치에 있어서,(a) 각 챔버 내의 버퍼 및 고체 물질들 또는 컬럼 내의 효소 및 버퍼를 혼합하거나 교반하기 위해 상기 덮개를 상하 이동시키기 위한 수단과,(b) 상기 덮개의 돌출부 내에 형성된 구멍을 통해 해당 챔버 또는 컬럼 내로 자성 바아를 상하 이동시키기 위한 수단과,(c) 상기 덮개의 보어가 상기 용기의 다음 챔버 또는 컬럼에 대응되게 정렬되도록 상기 용기를 이동시키거나 위치시키기 위한 수단과, 그리고(d) 생물학적 시료로부터 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하는 과정에 따라 소정의 절차에 의해 상기 모든 장치를 제어하기 위한 제어 수단을포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
- 제18항에 있어서, 상기 고체 물질들은 핵산 또는 생물학적 물질을 흡수 또는 운반하는 자성 비드인 것을 특징으로 하는 장치.
- 제18항에 있어서, 자성체에 반응하는 입자, 동결 건조된 효소, 동결 건조된 프라이머, 동결 건조된 마그네슘 클로라이드(MgCl2) 및 동결 건조된 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP)로 구성된 물질이 상기 챔버들 중의 적어도 하나에 담겨 있는 것을 특징으로 하는 장치.
- 제18항에 있어서, 왁스, 자성체에 반응하는 입자, 동결 건조된 효소, 동결 건조된 프라이머, 동결 건조된 마그네슘 클로라이드(MgCl2) 및 동결 건조된 4종류의 뉴클레오타이드(dATP, dTTP, dGTP 및 dCTP)로 구성된 물질이 상기 챔버들 중의 적어도 하나에 담겨 있는 것을 특징으로 하는 장치.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20010067742A KR100445560B1 (ko) | 2001-10-31 | 2001-10-31 | 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하기 위한 키트의 제조방법과, 그 방법에 의해 제조된 키트와, 그 키트를사용하는 장치 |
| US10/076,733 US6908759B2 (en) | 2001-10-31 | 2002-02-14 | Method of manufacturing kit for isolation nucleic acids or biological materials |
| JP2002051582A JP2003144133A (ja) | 2001-10-31 | 2002-02-27 | 核酸又は生物学的物質を分離するためのキットの製造方法と、該方法により製造されたキット、及び該キットを用いる装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20010067742A KR100445560B1 (ko) | 2001-10-31 | 2001-10-31 | 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하기 위한 키트의 제조방법과, 그 방법에 의해 제조된 키트와, 그 키트를사용하는 장치 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20030035621A KR20030035621A (ko) | 2003-05-09 |
| KR100445560B1 true KR100445560B1 (ko) | 2004-08-21 |
Family
ID=19715586
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR20010067742A Expired - Lifetime KR100445560B1 (ko) | 2001-10-31 | 2001-10-31 | 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하기 위한 키트의 제조방법과, 그 방법에 의해 제조된 키트와, 그 키트를사용하는 장치 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6908759B2 (ko) |
| JP (1) | JP2003144133A (ko) |
| KR (1) | KR100445560B1 (ko) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE202008011578U1 (de) | 2007-09-19 | 2008-11-06 | Liang, Don | Flüssigkeitstransfervorrichtung |
| WO2009125971A3 (ko) * | 2008-04-09 | 2009-12-17 | (주)바이오니아 | 자동정제장치, 멀티 웰 플레이트 키트 및 생물학적 시료로부터 핵산을 추출하는 방법 |
| KR101025135B1 (ko) | 2008-04-09 | 2011-03-31 | (주)바이오니아 | 자동정제장치, 멀티 웰 플레이트 키트 및 생물학적 시료로부터 핵산을 추출하는 방법 |
| WO2018155764A1 (ko) * | 2017-02-27 | 2018-08-30 | (주)어핀텍 | 밀폐형 추출물 분리 및 정제장치 |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8030000B2 (en) | 2002-02-21 | 2011-10-04 | Alere San Diego, Inc. | Recombinase polymerase amplification |
| US7399590B2 (en) | 2002-02-21 | 2008-07-15 | Asm Scientific, Inc. | Recombinase polymerase amplification |
| ATE400663T1 (de) | 2002-02-21 | 2008-07-15 | Asm Scient Inc | Rekombinase-polymerase-amplifikation |
| CN1230531C (zh) * | 2002-12-09 | 2005-12-07 | 清华大学 | 从样品中分离细胞粒子的方法 |
| CN1223680C (zh) * | 2002-12-10 | 2005-10-19 | 清华大学 | 扩增靶细胞或病毒的核酸的方法 |
| KR100483684B1 (ko) * | 2003-01-29 | 2005-04-18 | (주)바이오넥스 | 핵산 또는 다양한 생물학적 물질을 분리 및 정제하기 위한키트와, 이러한 키트를 이용하여 생물학적 물질의 분리또는 정제 작업을 자동화하기 위한 시스템 |
| GB0319671D0 (en) * | 2003-08-21 | 2003-09-24 | Secr Defence | Apparatus for processing a fluid sample |
| KR100601972B1 (ko) * | 2004-11-03 | 2006-07-18 | 삼성전자주식회사 | 레이저와 비드를 이용한 상 분리에 의한 핵산의 정제 장치및 방법 |
| EP1929049B1 (en) | 2005-07-25 | 2013-04-10 | Alere San Diego, Inc. | Methods for multiplexing recombinase polymerase amplification |
| US20100015604A1 (en) * | 2005-08-17 | 2010-01-21 | Evriklia Lianidou | Composition and method for determination of ck19 expression |
| US7754148B2 (en) | 2006-12-27 | 2010-07-13 | Progentech Limited | Instrument for cassette for sample preparation |
| US7727473B2 (en) | 2005-10-19 | 2010-06-01 | Progentech Limited | Cassette for sample preparation |
| JP2009535053A (ja) | 2006-05-04 | 2009-10-01 | エーエスエム サイエンティフィック， インコーポレイテッド | レコンビナーゼポリメラーゼ増幅 |
| KR100790880B1 (ko) * | 2006-07-05 | 2008-01-02 | 삼성전자주식회사 | 자성 비드가 결합되어 있는 소수성 다공성 중합체가 벽면에결합되어 있는 마이크로채널 또는 마이크로챔버를포함하는 미세유동장치 및 그를 이용하는 방법 |
| US10407660B2 (en) * | 2010-08-10 | 2019-09-10 | Greiner Bio-One North America, Inc. | Hardware for magnetic 3D culture |
| JP5847076B2 (ja) * | 2009-05-20 | 2016-01-20 | バイオサイト インコーポレイテッド | Ｄｎａグリコシラーゼ／リアーゼおよびａｐエンドヌクレアーゼ基質 |
| EP2438196B1 (en) | 2009-06-05 | 2016-12-21 | Alere San Diego, Inc. | Recombinase polymerase amplification reagents and kits |
| CA3084515C (en) | 2010-02-23 | 2022-12-06 | Luminex Corporation | Apparatus and methods for integrated sample preparation, reaction and detection comprising a first, second and third module |
| US9248422B2 (en) | 2010-02-23 | 2016-02-02 | Luminex Corporation | Apparatus and methods for integrated sample preparation, reaction and detection |
| CN103923831B (zh) * | 2013-01-15 | 2015-09-16 | 常州金麦格生物技术有限公司 | 用于提取生物活性物质的仪器和方法 |
| CN103923829B (zh) * | 2013-01-15 | 2015-08-26 | 常州金麦格生物技术有限公司 | 磁棒法提取仪的磁针和套管移动系统和其应用 |
| CN103923162B (zh) * | 2013-01-15 | 2016-08-10 | 常州金麦格生物技术有限公司 | 用于磁棒法生物活性物质提取仪的振动机构及其用途 |
| CN103805497B (zh) * | 2013-07-16 | 2015-12-02 | 常州金麦格生物技术有限公司 | 用于磁珠法提取生物活性物质的装置和方法 |
| CN103805508B (zh) * | 2013-07-16 | 2015-08-26 | 常州金麦格生物技术有限公司 | 用于磁珠法提取生物活性物质的仪器和方法 |
| US9738923B2 (en) * | 2014-06-18 | 2017-08-22 | Luminex Corporation | Methods for generating stabilized lyophilized materials |
| EP3274069B1 (en) * | 2015-03-24 | 2020-08-19 | 3M Innovative Properties Company | Method of purifying a biological composition and article therefor |
| KR102738971B1 (ko) | 2016-02-05 | 2024-12-06 | 젠-프로브 인코포레이티드 | 건조된 증폭 조성물 |
| EP3625367A1 (en) | 2017-05-19 | 2020-03-25 | Gen-Probe Incorporated | Dried compositions containing flap endonuclease |
| CN110923124B (zh) * | 2020-02-17 | 2020-05-22 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 用于磁珠法提取纯化核酸的仪器 |
| CN113370471B (zh) * | 2021-06-29 | 2025-04-01 | 浙江拱东医疗器械股份有限公司 | 核酸检测磁棒搅拌套注塑模具 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3985649A (en) * | 1974-11-25 | 1976-10-12 | Eddelman Roy T | Ferromagnetic separation process and material |
| WO1991012079A1 (en) * | 1990-02-13 | 1991-08-22 | Amersham International Plc | Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules |
| WO1996010644A1 (en) * | 1994-10-03 | 1996-04-11 | Adelman Lonnie W | Magnetizable moieties in separation, sequencing and amplification of polynucleotides and polypeptides and magnetic detection thereof |
| WO1996018731A2 (en) * | 1994-12-12 | 1996-06-20 | Dynal A/S | Isolation of nucleic acid |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2970002A (en) * | 1959-01-20 | 1961-01-31 | Laviano Samuel | Magnetic pickup |
| US4683195A (en) * | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| SE8601143L (sv) | 1986-03-12 | 1987-09-13 | Carbematrix Ab | Sett och anordning for samling och spridning av ferromagnetiska partiklar i ett fluidformigt medium |
| US5599660A (en) * | 1993-01-19 | 1997-02-04 | Pharmacia Biotech Inc. | Method and preparation for sequential delivery of wax-embedded, inactivated biological and chemical reagents |
| FI944940A0 (fi) * | 1994-10-20 | 1994-10-20 | Labsystems Oy | Tvaofasigt separeringsfoerfarande |
| US5861251A (en) * | 1996-10-15 | 1999-01-19 | Bioneer Corporation | Lyophilized reagent for polymerase chain reaction |
| US5912129A (en) * | 1998-03-05 | 1999-06-15 | Vinayagamoorthy; Thuraiayah | Multi-zone polymerase/ligase chain reaction |
-
2001
- 2001-10-31 KR KR20010067742A patent/KR100445560B1/ko not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-02-14 US US10/076,733 patent/US6908759B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-27 JP JP2002051582A patent/JP2003144133A/ja active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3985649A (en) * | 1974-11-25 | 1976-10-12 | Eddelman Roy T | Ferromagnetic separation process and material |
| WO1991012079A1 (en) * | 1990-02-13 | 1991-08-22 | Amersham International Plc | Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules |
| WO1996010644A1 (en) * | 1994-10-03 | 1996-04-11 | Adelman Lonnie W | Magnetizable moieties in separation, sequencing and amplification of polynucleotides and polypeptides and magnetic detection thereof |
| WO1996018731A2 (en) * | 1994-12-12 | 1996-06-20 | Dynal A/S | Isolation of nucleic acid |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE202008011578U1 (de) | 2007-09-19 | 2008-11-06 | Liang, Don | Flüssigkeitstransfervorrichtung |
| WO2009125971A3 (ko) * | 2008-04-09 | 2009-12-17 | (주)바이오니아 | 자동정제장치, 멀티 웰 플레이트 키트 및 생물학적 시료로부터 핵산을 추출하는 방법 |
| KR101025135B1 (ko) | 2008-04-09 | 2011-03-31 | (주)바이오니아 | 자동정제장치, 멀티 웰 플레이트 키트 및 생물학적 시료로부터 핵산을 추출하는 방법 |
| WO2018155764A1 (ko) * | 2017-02-27 | 2018-08-30 | (주)어핀텍 | 밀폐형 추출물 분리 및 정제장치 |
| KR20180098788A (ko) * | 2017-02-27 | 2018-09-05 | (주)어핀텍 | 밀폐형 추출물 분리 및 정제장치 |
| KR101964131B1 (ko) * | 2017-02-27 | 2019-08-07 | (주)어핀텍 | 밀폐형 추출물 분리 및 정제장치 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6908759B2 (en) | 2005-06-21 |
| US20030082565A1 (en) | 2003-05-01 |
| KR20030035621A (ko) | 2003-05-09 |
| JP2003144133A (ja) | 2003-05-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100445560B1 (ko) | 핵산 또는 생물학적 물질을 분리하기 위한 키트의 제조방법과, 그 방법에 의해 제조된 키트와, 그 키트를사용하는 장치 | |
| KR100483684B1 (ko) | 핵산 또는 다양한 생물학적 물질을 분리 및 정제하기 위한키트와, 이러한 키트를 이용하여 생물학적 물질의 분리또는 정제 작업을 자동화하기 위한 시스템 | |
| JP2675989B2 (ja) | 核酸増幅のための方法および装置 | |
| RU2244559C2 (ru) | Устройство и способ экстракции нуклеиновых кислот | |
| CA2265770C (en) | Cartridge and system for storing and dispensing of reagents | |
| US6884395B2 (en) | Integrated microfluidic disc | |
| US9695414B2 (en) | Suspension container for binding particles for the isolation of biological material | |
| US20140179909A1 (en) | Microfluidic device for nucleic acid extraction and fractionation | |
| US10240144B2 (en) | Sequential delivery device and method | |
| WO2001047638A2 (en) | Integrated microfluidic disc | |
| EP3074131B1 (en) | Transportable composite liquid cells | |
| CA2758973A1 (en) | Devices and methods for interfacing microfluidic devices with macrofluidic devices | |
| CA2490197A1 (en) | Apparatus for polynucleotide detection and quantitation | |
| EP2423688B1 (en) | Suspension container for binding particles for the isolation of biological material | |
| JP5979838B2 (ja) | 生物学的材料の単離のための結合粒子のための懸濁容器 | |
| WO2002063042A1 (en) | Apparatus for isolating nucleic acid or biological material | |
| EP1242186B1 (en) | Method for processing a nucleic acid template using an integrated microfluidic disc | |
| WO2009074177A1 (en) | Forensic sample processor | |
| Katz | Using the SOLO for PCR Automation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20011031 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| PG1501 | Laying open of application | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20040227 Patent event code: PE09021S01D |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20040726 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20040813 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20040813 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20070810 Start annual number: 4 End annual number: 4 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20080811 Start annual number: 5 End annual number: 5 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20090810 Start annual number: 6 End annual number: 6 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20100812 Start annual number: 7 End annual number: 7 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20110811 Start annual number: 8 End annual number: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20120614 Year of fee payment: 9 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20120614 Start annual number: 9 End annual number: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130722 Year of fee payment: 10 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20130722 Start annual number: 10 End annual number: 10 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140721 Year of fee payment: 11 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20140721 Start annual number: 11 End annual number: 11 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150810 Year of fee payment: 12 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20150810 Start annual number: 12 End annual number: 12 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160727 Year of fee payment: 13 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20160727 Start annual number: 13 End annual number: 13 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170807 Year of fee payment: 14 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20170807 Start annual number: 14 End annual number: 14 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180813 Year of fee payment: 15 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20180813 Start annual number: 15 End annual number: 15 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190812 Year of fee payment: 16 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20190812 Start annual number: 16 End annual number: 16 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20200810 Start annual number: 17 End annual number: 17 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20210526 Start annual number: 18 End annual number: 18 |
|
| PC1801 | Expiration of term |
Termination date: 20220430 Termination category: Expiration of duration |