KR100733764B1

KR100733764B1 - 합환피 추출물 또는 그로부터 분리한 쿠라리디놀을함유하는 고지혈증의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR100733764B1
Application number: KR1020060035579A
Authority: KR
Inventors: 최재수
Original assignee: 주식회사 베터앤베터
Priority date: 2006-04-20
Filing date: 2006-04-20
Publication date: 2007-07-02
Anticipated expiration: 2026-04-20

Abstract

본 발명은 합환피 (Albizzia julibrissin cortex) 추출물 또는 그로부터 분리된 화합물인 쿠라리디놀 (Kuraridinol)을 유효성분을 함유하는 고지혈증의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 합환피 추출물 또는 그로부터 분리된 화합물인 쿠라리디놀은 혈중 총콜레스테롤 및 중성지질 함량을 유의적으로 감소시킴으로서 항고지혈 효과를 나타내므로, 상기 조성물은 고지혈증의 예방 및 치료용 약학조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

합환피, 쿠라리디놀, 고지혈증, 총콜레스테롤, 중성지질, 약학 조성물.

Description

합환피 추출물 또는 그로부터 분리한 쿠라리디놀을 함유하는 고지혈증의 예방 및 치료용 조성물 {Composition comprising the cortex extract of Albizzia julibrissin or kuraridinol isolated therefrom for preventing or treating hyperlipidemia}

본 발명은 합환피 추출물 또는 그로부터 분리된 쿠라리디놀 (kuraridinol)을 함유하는, 고지혈증의 예방 및 치료용 약학조성물에 관한 것이다.

고지혈증 (hyperlipidemia)은 혈액 속의 지질성분이 보통이상으로 증가된 상태 (Kim JK, 임상지질학, pp241-270, 1995)를 말한다. 혈청지질의 주요 성분은 콜레스테롤, 중성지질, 인지질 및 유리지방산 등의 지용성물질로 구성되어 있으며, 이들 지질 물질 중 어느 것이 주로 증가하느냐에 따라 고콜레스테롤혈증 (hypercholesterinemia), 고중성지질혈증 (hypertriglyceridemia) 등으로 불리운다. 혈청 내 콜레스테롤 및 중성지질의 증가가 고지혈증의 가장 일반적인 원인으로 취급되고 있는데 과다한 지방질의 축척으로 혈액순환장애 및 미세순환부전을 일으키고, 이로 인하여 죽상동맥경화증, 허혈성심질환, 뇌경색, 고혈압, 비만, 당뇨병 등을 초래할 수 있다 (Schoen FJ et al., Robbins pathologic basis of disease, 5th ed., pp473-484, 1994).

동맥경화의 원인으로서는 여러 가지가 있으나, 혈장 지질, 특히 혈장 콜레스테롤 (cholesterol) 및 중성지질의 상승이 가장 중요한 위험 인자의 하나로 알려져있다.

콜레스테롤은 주로 간에서 생성되며, 지단백 (lipoprotein)이라는 작고 둥근 입자형태로 혈액 중에 존재하게 되는데, 이 지단백이 콜레스테롤을 우리 몸 곳곳으로 운반한다. 지단백에는 저밀도지단백 (low density lipo protein, LDL) 및 고밀도지단백 (high density lipoprotein, HDL) 두 종류가 있으며, 고밀도지단백은 다른 조직에서 간으로 콜레스테롤을 운반하기 때문에 고밀도지단백이 많으면 혈관 등에서 콜레스테롤이 제거되며, 반면 저밀도지단백은 간에서 주로 생성되어 인체의 다른 조직으로 콜레스테롤을 운반하므로 저밀도지단백이 많으면 혈관에 콜레스테롤이 많이 쌓여서 동맥경화가 촉진되며, 혈중 콜레스테롤의 약 70%는 나쁜 콜레스테롤인 저밀도지단백으로 존재한다.

실제적으로 콜레스테롤은 인체의 기능을 정상적으로 유지시키는 데 필수적인 구성 성분이며, 세포를 만드는데 꼭 필요한 영양소이고, 부신피질 호르몬, 남성 호르몬, 여성 호르몬 등 여러 가지 호르몬의 재료가 되는 성분이며, 담즙을 만드는 재료가 된다. 또한 콜레스테롤은 생체막의 구성성분인 동시에 호르몬 합성의 출발물질로 쓰이는 등 인체에 반드시 필요한 영양소이다. 그러나, 콜레스테롤 과다 섭취시 혈관 내에 축적되어 심장계 질환을 유발하는 것으로 알려져 있으며, 아직까지 는 저콜레스테롤 식이요법 외에는 예방할 수 있는 방법이 없으며, 콜레스테롤 저하제 등의 약품 복용이 효과는 있으나, 콜레스테롤 합성효소의 작용억제에 따른 간 기능 장애와 같은 부작용을 유발하는 등의 이유로 인하여 사용이 극히 제한적이다.

인체 내 혈중 콜레스테롤 저하작용을 하는 것으로 알려진 물질로는 키토산 (chitosan), 피토스테롤 (phytosterol), 이노시톨 (inositol), 펙틴 (pectin) 등이 있으나, 피토스테롤을 제외한 경우 그 효과나 대사 기작이 명확히 밝혀져 있지 않다. 식물성 스테롤인 피토스테롤은 콜레스테롤과의 구조적 유사성으로 인하여, 인체에 해로운 저밀도지단백-콜레스테롤과의 경쟁을 통하여 인체 내 콜레스테롤 흡수 대사를 저해하는 작용 기작이 이미 밝혀져 있고, 식품첨가물로서 미국식품의약국 (FDA)의 승인이 되어 있다.

혈장 콜레스테롤의 상승 원인으로서는 우선 유전적인 질환이 있는데, 이 경우, 위독한 환자에 대해서는 식사요법과 동시에 콜레스테롤 합성저해제, 니코몰 (Nicomol), 클로피브레이트 (Clofibrate), 이온교환수지, 단백동화 스테로이드 등의 약제가 사용되고 있으나, 이들의 약제는 간독성, 위장장해, 발암성 등의 부작용이 있다.

혈장 콜레스테롤 상승의 또 하나의 큰 원인으로서, 근래 달걀, 버터, 육류 등을 대량으로 섭취하는 식생활에 의한 지방의 과잉 섭취를 들 수 있으며, 이것은 젊은 연령층에서도 현저히 나타나고 있다. 식사성의 고콜레스테롤혈증 (hypercholesterinemia)의 경우, 통상 위독한 고콜레스테롤혈증에는 이르지 않으나, 젊은 연령기부터 혈관에 서서히 콜레스테롤이 축적하여 성인에 이르러 동맥경 화를 일으키는 것이 문제이며, 고중성지질혈증 (hypertriglyceridemia)과 더불어, 심근경색이나 뇌경색을 초래할 위험성이 있다.

실험적 고지혈증의 병태 모델은 크게 외인성 모델과 내인성 모델로 나누어진다. 외인성 고지혈증 병태 모델로는 고콜레스테롤식이 부하에 의한 고콜레스테롤혈증 유발 모델, 즉 비타민D, 콜레스테롤, 올리브유, 옥수수유 등의 투여에 의한 고지혈증 모델이 있고, 내인성 고지혈증 모델로는 과당 (fructose) 투여 및 트리톤 WR-1339 (Triton WR-1339) 투여에 의한 모델 등이 있다 (Ham IH et al., Kor . J. Herbology, 20, pp45-52, 2005). 그중 폴록사머 407 (Poloxamer 407)은 마취제의 유화제 (Lee HH et al., Korean J. Anesthesiol, 40, pp515-521, 2001), 난용성 약물 용해제 (Choi JY et al., J. Kor . Pharm . Sci., 18, pp240-241, 1988), 피부연고제 (Gill HJ et al., J. Kor . Pharm . Sci., 24, ppS27-S32, 1994; Kim KK et al., J. Kor . Pharm . Sci., 28, pp15-23, 1998) 등으로 사용되어지고 있으나, 인체 내 투여 시 지질이 증가하며 특히 중성지질이 증가됨으로써 고지혈증을 유발한다. 폴록사머 주입 후 최소 24시간 동안 지방세포 (adipocyte)에서 유리지방산이 생성되며 (Nash VJ et al., Pharmacotherapy, 16, pp10-15, 1996), 지단백 분해효소 (lipoprotein lipase, LPL)의 작용을 방해하는 중성지질의 분해속도를 감소시키고 (Stellato C. et al., Br. J. Anaesth., 67, pp751-758, 1991), 혈중 콜레스테롤과 중성지방이 증가되는데 이는 간에서의 3-히드록시-3-메틸글루타릴 보조효소 A (HMG-CoA; 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA)의 활성을 저하시키기 때문이다 (Wout G. M. et al., J. Paren . Sci . Technol., 46, pp192-200, 1992).

자귀나무 (Albizzia julibrissin DURAZZ.)는 콩과 (Leguminosae)에 속하는 낙엽 소교목으로 비단나무 (silk tree) 혹은 미모사 (mimosa)라고도 부른다. 일본,중국, 인도 및 우리나라 제주도, 남부지방, 중부지방, 즉 황해도 이남지방에서 자생하는 식물이다 (김태정, 한국의 자원식물 Ⅱ, p194, 1996). 작은 반구형으로 평평하게 펼쳐져 있으며 회갈색의 껍질과 잎은 호생하고 우수2회 우상복엽이며 분홍색의 꽃이 핀다. 자귀나무의 꽃은 예부터 민간에서는 불면증, 건망증, 인후염 그리고 타박상의 치료에 이용해 왔다 (Kang TH et al., J. Ethnopharmacol ., 71, pp321-323, 2000). 자귀나무의 성분으로는 잎과 뿌리 껍질로부터 포타슘글루코피라노실-11-히드록실자스모네이트 (potassium-glucopyranosyl-11-hydroxyjasmonate), 시스-파라-쿠마로일마그메이션 (cis-p-coumaroylmagmation), 퀘르시트린 (quercitrin), 아프제린 (afzelin), 유스카픽산에스터글루코시드 (euscaphic acid ester glucoside), 루테오린 7-O-네오헤스페리도시드 (luteolin-7-O-neohesperidoside) 및 (-)-시린자레지놀 [(-)-syringaresinol]등이 분리 되었으며 (Ueda M and Yamamura S, Tetrahedron Lett ., 40(44), pp7823-7826, 1999 ; Jang KG et al., Kor . J. Pharmacogn ., 33, pp18-20, 2002 ; Go JJ et al., Kor . J. Pharmacogn., 35, pp194-198, 2004), 꽃에서는 하나의 플라보노이드 배당체인 이소퀘르시트린 (isoquercitrin)이 분리 되었다.

합환피 (Albizzia julibrissin cortex)는 자귀나무 (Albizzia julibrissin DURAZZ.)의 줄기 껍질로서, 해울, 화혈, 소종의 효능이 있고, 심실불안, 우울분면, 옹종, 나력, 근골절상의 치료에 이용되고 있다 (배기환, 한국의 약용식물, pp239, 2000 ; Go JJ et al., Kor . J. Pharmacogn ., 35, pp194-198, 2004).

합환피의 성분으로는 소포플라바세놀 (sophoflavescenol), 다이드제인 (daidzein), 제랄돈 (geraldone), 쿠라리딘 (kuraridin), 알파-스피나스테롤 글루코사이드 (α-spinasterol glucoside), (E)-4-히드록실-도덱-2-엔다이오익 에시드 [(E)-4-hydroxy-dodec-2-enedioic acid], 쿠라리논 (kurarinone), 이소오카닌 (isookanin), 설푸레틴 (sulfuretin), 루테올린 (luteolin), 쿠라리디놀 (kuraridinol), 3',4',7-트리히드록시플라본 (3',4',7-trihydroxyflavone), 쿠라리놀 (kurarinol), (-)-시린자레지놀-4-O-베타-디-글루코피라노사이드 [(-)-syringaresinol-4-O-β-D-glucopyranoside], 소야-세레브로사이드 I (soya-cerebroside I), 오노닌 (ononin), 이카리사리드 E₅ (icariside E₅), 알비브리시노사이드 A (albibrissinoside A), 알비브리시노사이드 B (albibrissinoside B)와 사포닌 화합물인 줄리브로사이드 A₁ (julibroside A₁), 줄리브로사이드 A₂ (julibroside A₂), 줄리브로사이드 A₃ (julibroside A₃), 줄리브로사이드 I (julibroside I), 줄리브로사이드 II (julibroside II), 줄리브로사이드 III (julibroside III) 및 줄리브로사이드 C₁ (julibrloside C₁)이 분리 되었으며, 페놀성 화합물인 3,4,5-트리메톡실페놀 1-O-베타-D-아피오푸라노실 (1→2)-베타-D-글루코피라노사이드 [3,4,5-trimethoxyphenol 1-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside], 보미폴리올 3＇-O-베타-D-아피오푸라노실-(1→6)-베타-D-글루코피라노사이드 [vomifoliol 3＇-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D- glucopyranoside, (+)-리오니레지놀-9＇-O-베타-D-글루코피라노실-(1→4)-베타-D-글루코피라노사이드 [(+)-lyoniresinol-9＇-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside 및 (+)-리오니레지놀-4, 9＇-디-O-베타-D-글루코피라노사이드 [(+)-lyoniresinol-4,9＇-di-O-β-D-glucopyranoside가 분리 되었다.

자귀나무의 잎에 대한 연구 결과로서는 진정효과가 있으며, 합환피의 생리활성에 대한 연구 결과로서는 세포독성 효과, 항산화 활성 및 백혈병세포주인 Jurkat T세포의 세포주기 억제에 미치는 영향에 관한 보고들이 있다 (Jung MJ et al., Arch. Pharm . Res., 26(3), pp207-209, 2003; Jung MJ et al., Arch. Pharm . Res., 26(6), pp458-462, 2003; Jung MJ et al., Chem . Pharm . Bull., 52(12), pp1501-1503, 2004; Jung MJ et al., Arch. Pharm . Res., 27(6), pp593-599, 2004; Hiroyuki H et al., Chem . Pharm . Bull., 40, pp534-535, 1992; Kang TH et al., J. Ethnopharmacol ., 71(1-2), pp321-323, 2000; Go JJ et al., Kor . J. Pharmacogn ., 35, pp194-198, 2004; Ueda M and Yamamura S, Tetrahedron Lett ., 40(44), pp7823-7826, 1999; Jang KG et al., Kor . J. Pharmacogn ., 33, pp18-20, 2002; Ikeda T et al., J. Nat. Prod., 60(2), pp102-107, 1997; Kinjo J et al., Chem . Pharm . Bull., 40(12), pp3269-3273, 1992; Ikeda T. et al., Tetrahedron Letters, 36(9), pp1509-1510, 1995; Ikeda T. et al., Bull, Chem . Soc . Jpn , 68, pp3483-3490, 1995; Hwang SG et al., Kor . J. Pharmacogn ., 33, pp29-34, 2002; Hwang SG et al., Yakhak Hoeji , 45, pp730-738, 2001). 그러나 지금까지 합환피 추출물의 고지혈증에 대한 개선효과에 대해서는 교시되거나 개시된 바 없다.

따라서 본 발명자는 합환피에서 고지혈증을 개선하는 새로운 추출물 및 라반듀릴 (lavandulyl)계 플라보노이드 화합물을 분리, 동정한 후 고지혈증에 대한 개선효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 탁월한 고지혈증 개선 활성을 지닌 합환피 추출물 또는 이로부터 분리한 쿠라리디놀 (kuraridinol)을 유효성분으로 함유하는 고지혈증의 예방 및 치료에 유용한 약학조성물을 제공하는데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 합환피 (Albzzia julibrissin cortex) 추출물 또는 이로부터 분리한 하기 구조식 (1)로 표기되는 쿠라리디놀 (kuraridinol)을 유효성분으로 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 함유하는 고지혈증의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

(1)

상기 추출물은 조추출물 또는 비극성용매 가용 추출물로서, 조추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올과 같은 저급알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 에탄올에 가용한 추출물을 포함하며, 비극성용매 가용추출물은 디클로로메탄, 클로로포름 또는 에틸 아세테이트로부터 선택된 비극성용매로, 바람직하게는 에틸 아세테이트에 가용한 추출물을 포함한다.

본 발명의 합환피 추출물 및 화합물을 함유하는 고지혈증의 치료 및 예방을 위한 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 화합물을 0.1 내지 50 중량 % 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 합환피 조추출물, 비극성용매 가용추출물 및 이로부터 분리되는 플라보노이드류의 화합물은 하기와 같이 수득될 수 있다.

본 발명의 합환피 조추출물은 합환피를 동결건조 후 마쇄하여 분말화 한 후, 합환피 건조 중량의 약 3 내지 20배, 바람직하게는 약 3 내지 6배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올과 같은 저급 알콜 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 에탄올로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 20 내지 80 ℃의 추출 온도에서 약 0.5시간 내지 2일, 바람직하게는 1시간 내지 1일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법으로 1회 내지 5회, 바람직하게는 3회 연속 추출하여 수득한 후, 감압여과하고 여액을 진공회전농축기로 20 내지 100 ℃, 바람직하게는 40 내지 70 ℃에서 감압 농축하여 물, 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매에 가용한 합환피 조추출물을 수득할 수 있다.

상기 합환피 조추출물을 물에 현탁한 후, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올 순으로 용매를 이용하여 추출하여 본 발명의 합환피 비극성용매 가용추출물, 바람직하게는 에틸아세테이트 가용성 분획물을 수득할 수 있고, 더욱 구체적으로는 합환피 조추출물 즉, 합환피 에탄올 추출물에 디클로로메탄을 가하여 디클로로메탄 분획물 및 수가용성 분획물을 수득할 수 있고, 다시 상기 수가용성 분획물에 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트 가용성 분획물 및 수가용성 분획물을 수득할 수 있고, 마지막으로 상기 수가용성 분획물을 부탄올로 추출하여 부탄올 가용성 분획물과 수가용성 분획물을 수득할 수 있다.

상기 비극성 용매 가용성 분획물에 대하여, 에틸아세테이트 가용성 분획물은 전개용매를 디클로로메탄 : 메탄올의 혼합용매를, 바람직하게는 디클로로메탄 : 메탄올의 20 :1의 혼합용매를 시간당 일정용량, 바람직하게는 1000 ㎖의 속도로 사용하는 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 F1부터 F10까지 10개의 분획물을 수득할 수 있다. 상기 분획물중 F7 분획물을 세파덱스 LH-20 (Sephadex LH-20, 25-100 ㎛, Sigma, U.S.A.)을 사용하여 시간당 1000 ㎖씩 분획을 수행하여, 상기 구조식 1로 표시되는 플라보노이드류의 화합물을 분리 및 동정할 수 있다.

본 발명은 합환피로부터 조추출물, 비극성용매 가용추출물 및 이로부터 분리되는 플라보노이드류의 화합물을 분리, 정제하는 방법을 제공한다.

폴록사머 407로 고지혈증을 유도한 랫트에서 상기와 같은 공정으로 수득된 합환피 추출물 또는 그로부터 분리된 플라보노이드류 화합물의 항고지혈 효과를 측정한 결과, 혈청 총콜레스테롤 및 중성지질 함량을 유의성 있게 강하시켰으므로 고지혈증 예방 및 치료용 약학조성물로 유용하게 이용할 수 있음을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 상기와 같은 방법으로 수득한 합환피 추출물 및 그로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 함유하는 고지혈증에 대한 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 합환피 추출물 또는 그로부터 분리된 화합물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 합환피 추출물 및 그로부터 분리된 화합물을 포함하는 약학조성물의 적용량 및 적용방법은 제형 및 사용목적에 따라 다를 수 있다.

또한, 본 발명의 합환피 추출물 및 그로부터 분리된 화합물을 포함하는 조성 물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 합환피 추출물 및 그로부터 분리된 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명에 따른 합환피 추출물 및 그로부터 분리된 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물은 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 합환피 추출물 및 그로부터 분리된 화합물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 100 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 추출물 및 화합물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular)주사에 의해 투여될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예, 제형예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 제형예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 제형예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 합환피 조추출물의 제조

본 발명에 사용한 합환피는 부산의 약재상에서 구입하여 사용하였다. 합환피는 동결건조 후 마쇄하여 얻은 분말 3 ㎏에 에탄올 15 ℓ를 넣고 70 ℃에서 일정시간 간격 (12h, 6h, 3h)으로 3회 반복하여 환류냉각추출한 후 여과지 (와트만사, 미국)를 사용하여 감압여과한 후 수득한 추출물을 진공회전농축기에 적용하여 40 ℃에서 에탄올을 제거한 후 추출된 잔사로서 합환피 조추출물 415 g을 수득하였으며, 이중 5 g을 취하여 동물실험을 위한 시료로 사용하였다.

실시예 2. 합환피 디클로로메탄 가용추출물의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 조추출물에 물 2ℓ를 가하여 수가용성 분획물을 얻었다. 상기 수가용성 분획물에 디클로로메탄 2 ℓ를 가하여 혼합한 후 3~ 4차례 분획하여 수가용성 분획물 2 ℓ 및 디클로로메탄 가용성 분획물 2 ℓ를 얻은 후, 이 디클로로메탄 가용성 분획물을 건조하여 디클로로메탄 가용추출물 72 g을 수득하였다.

실시예 3. 합환피 에틸아세테이트 가용추출물의 제조

상기 실시예 2에서 얻은 수가용성 분획물 2 ℓ에 에틸아세테이트 2 ℓ를 가하여 혼합한 후 3~ 4차례 분획하여 수가용성 분획물 2 ℓ 및 에틸아세테이트 가용성 분획물 2 ℓ를 얻은 후, 이 에틸아세테이트 분획물을 건조하여 에틸아세테이트 가용추출물 24 g을 수득하여 시료로 사용하였으며, 이중 5 g을 취하여 동물실험을 위한 시료로 사용하였다.

실시예 4. 합환피 부탄올 가용추출물의 제조

상기 실시예 3에서 얻은 수가용성 분획층 2 ℓ에 부탄올 2 ℓ를 가하여 혼합한 후 3~ 4차례 분획하여 수가용성 분획물 2 ℓ및 부탄올 가용성 분획물 2 ℓ를 얻은 후, 부탄올 가용성 분획물을 건조하여 부탄올 가용추출물 52 g을 수득하여 시료로 사용하였으며, 이중 5 g을 취하여 동물실험을 위한 시료로 사용하였다.

실시예 5. 합환피 수가용추출물의 제조

상기 실시예 4에서 얻은 수가용성 분획층 2 ℓ을 건조하여 수가용추출물 257 g을 수득하여 시료로 사용하였으며, 이중 5 g을 취하여 동물실험을 위한 시료로 사용하였다.

실시예 6. 플라보노이드류 화합물의 분리

상기 실시예 3의 합환피 에틸아세테이트 추출물 24 g을 실리카겔 칼럼 크로마토크래피 (SiO₂ column chromatography, Merck, Germany)에 적용하였다. 이 때, 전개용매로서 디클로로메탄 : 메탄올의 20 :1의 혼합용매를 1000 ㎖/hour의 속도로 가하여 칼럼 크로마토그래피를 수행하였으며, F1부터 F10까지 10개의 분획물을 수득하였다. 상기 분획물중 F7 분획물을 세파덱스 LH-20 (Sephadex LH-20, 25-100 ㎛, Sigma, U.S.A.)에 적용하였으며, 전개용매로서 메탄올을 사용하였고, 시간당 1000 ㎖씩 분획을 수행하여, 5개 (F7①-F7⑤)의 하부 분획물로 나눈 후, 각각의 분획물의 항산화활성을 측정하여 그중 가장 활성이 뛰어난 F7③ 분획물을 재결정화 하여, 하기의 물성치를 갖는 무정형 오렌지색 분말상의 쿠라리디놀 (kuraridinol) 150 ㎎을 분리하였다.

물질의 성상: 무정형 오렌지색 분말.

분자식: C₂₆H₃₂O₇

¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ )δ: 14.86 (1H, s, OH-9), 7.94 (1H, d, J = 15.6Hz, H-2), 7.86 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-3), 7.43 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-6'), 6.38 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-3'), 6.32 (1H, dd, J = 2.2, 8.6 Hz, H-5'), 6.04 (1H, s, H-6), 4.57 (1H, br s, H-9"a), 4.47 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-9"b), 3.83 (3H, s, OCH3), 2.55 (2H, m, H-1"), 2.35 (1H, m, H-2"), 1.64 (3H, s, H-10"), 1.35 (2H, m, H-3"), 1.19 (2H, m, H-4"), 1.02 (3H, s, H-6"), 1.01 (3H, s, H-7").

¹³C-NMR (100 MHz, DMSO-d ₆ )δ: 191.96 (C-4), 165.28 (C-9), 162.75 (C-7), 161.14 (C-4'), 160.27 (C-5), 159.02 (C-2'), 148.00 (C-8"), 138.63 (C-2), 130.31 (C-6'), 122.79 (C-3), 113.74 (C-1'), 110.92 (C-9"), 108.05 (C-5'), 106.73 (C-8), 104.41 (C-10), 102.58 (C-3'), 90.66 (C-6), 68.64 (C-5"), 55.49 (OCH₃), 46.41 (C-2"), 41.57 (C-4"), 29.55 (C-6"), 29.00 (C-7"), 27.10 (C-1"), 26.65 (C-3"), 17.65 (C-10").

실험예 1. 폴록사머 407 ( Poloxamer 407)로 유도된 고지혈증 병태 랫트에 대한 합환피 에탄올 조추출물의 고지혈증 개선 효과

폴록사머 407 (Poloxamer 407, Sigma Chemical, USA)로 유도된 고지혈증 병태 랫트에 대한 합환피 에탄올 조추출물의 고지혈증 개선 효과를 확인하기 위하여, 실험동물인 체중 120 g 내외의 Sprague-Dawley계 웅성 랫트 (샘타코, 한국)에게 고형사료 (삼양배합사료, 한국)와 물을 충분히 공급하면서 2주 이상 실험실 환경 (온도 22± 2 ℃, 습도 55± 5 %)에 적응 시킨 후 사용하였다. 200 g 내외에 도달한 랫트에 고지혈증 유발물질 폴록사머 407을 400 mg/kg을 1 ㎖ 용량으로 생리식염수에 녹여 차갑게 유지하여 단회 복강 투여하였다. 폴록사머 407 복강 투여 2시간 경과 후, 시료를 최초 경구투여 하였으며, 최초 경구투여 후 24시간 간격으로 총 3번 경구투여 하였다. 시료로서는, 실시예 1에서 수득한 합환피의 에탄올 조추출물을 각각 250, 500 mg/kg 씩 5 % 에탄올을 함유한 생리식염수에 녹여 1 ㎖ 용량으로 경구투여하고, 양성대조군인 로바스타틴 (lovastatin, 중외제약, 한국)은 각각 70, 35 mg/kg씩, 음성대조군은 5 % 에탄올을 함유한 생리식염수를 각각 1 ㎖ 용량으로 경구투여 하였다. 최종 경구 투여로부터 12시간이 지난 후 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액을 25 ℃에 30분간 방치 후 원심분리하여 상등액을 검체로 사용하였다. 검체의 총콜레스테롤과 중성지질 함량 측정은 시약 키트 (콜레스테자임-브이, 트리 글리자임-브이, 신양화학, 한국)를 사용하였다. 총콜레스테롤 및 중성지질 측정은 검체 10 ㎕과 효소시액 1.5 ㎖을 잘 혼합하여 37 ℃ 온수조에서 5분간 가온하여 60분 이내에 시약맹검을 대조로하여 505 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 표준과 시약맹검은 검체 대신 각각 표준액과 증류수로 대신하였다. 고지혈증 개선 효과는 콜레스테롤과 중성지질의 농도를 하기의 수학식 1 로 구하여 나타냈으며, 평균± 표준편차로 나타내었다. 유의성 검증은 SPSS/10.1 을 이용하였고, 유의 수준은 0.05 (*)이며, 고지혈증군은 정상군과 대조(a), 나머지군은 고지혈증군을 대조(b)하여 유의성을 검증하였다.

표준액의 농도/표준액의 흡광도 = Factor

Factor × 검체의 흡광도 = 고지혈증 개선 효과 (%)

시료	총콜레스테롤 (㎎/㎗)	중성지질 (㎎/㎗)
정상군	95.0±3.9 (34)	77.9±2.8 (25)
고지혈증군 (5% 에탄올 함유된 생리 식염수)	279.6±7.9^*a (100)	295.6±7.0^*a (100)
합환피 에탄올 조추출물 250 mg/kg	220.9±5.0^*b (79)	242.4±5.3^*b (82)
합환피 에탄올 조추출물 500 mg/kg	187.3±2.8^*b (67)	221.7±2.3^*b (75)
로바스타틴 35 mg/kg	223.7±4.4^*b (80)	233.5±5.8^*b (79)
로바스타틴 70 mg/kg	181.7±6.8^*b (65)	195.1±5.3^*b (66)

상기 실험 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 합환피 에탄올 조추출물 500 mg/kg 에서 총콜레스테롤과 중성지질농도가 각각 33, 25 %의 개선효과를 나타내었고, 이는 대조약물인 로바스타틴 35 mg/kg (20, 21 %)보다 더 유의적인 효과였다. 이는 합환피 에탄올 조추출물이 탁월한 콜레스테롤 및 중성지질 저하 물질을 다량 함유하고 있음을 나타내는 것이다.

실험예 2. 폴록사머 407 ( Poloxamer 407)로 유도된 고지혈증 병태 랫트에 대한 합환피 비극성 용매 분획물의 고지혈증 개선 효과

고지혈증 병태 랫트에 대한 상기 실시예 3, 4, 5에서 수득된 합환피 비극성 용매 분획물의 고지혈증 개선 효과를 확인하기 위하여, 상기 실험예 1과 같은 방법으로 실시하여, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 부탄올 가용성 분획물 100 mg/kg 에서 총콜레스테롤과 중성지질농도가 각각 31, 27 %의 개선효과를 나타내었고, 이는 양성대조군인 로바스타틴 35 mg/kg (20, 21 %)보다 훨씬 더 유의적인 효과를 나타내었다. 에틸아세테이트 가용성 분획물 100 mg/kg 에서 총콜레스테롤과 중성지질농도가 각각 25, 24 %의 개선효과를 나타내었고, 이는 대조약물인 로바스타틴 35 mg/kg (20, 21 %)보다 더 좋은 결과를 보인다. 에틸아세테이트 가용성 분획물 50 mg/kg 에서는 총콜레스테롤과 중성지질농도 각각 13, 14 %의 억제효과를 보였다.

시료	총콜레스테롤 (㎎/㎗)	중성지질 (㎎/㎗)
정상군	86.2±3.9 (34)	72.3±2.0 (25)
고지혈증군 (5% 에탄올 함유된 생리 식염수)	253.4±9.9^*a (100)	289.3±14.5^*a (100)
합환피 에틸아세테이트 가용성 분획물 50 mg/kg	221.6±6.9^*b (87)	250.7±13.2^*b (86)
합환피 에틸아세테이트 가용성 분획물 100 mg/kg	192.3±9.5^*b (75)	221.5±11.6^*b (76)
합환피 부탄올 가용성 분획물 100 mg/kg	174.9±10.1^*b (69)	211.2±6.9^*b (73)
합환피 수가용성 분획물 100 mg/kg	230.4±13.6^b (90)	265.1±13.9^b (91)
로바스타틴 35 mg/kg	202.7±4.4^*b (80)	228.5±3.8^*b (79)
로바스타틴 70 mg/kg	164.7±5.8^*b (65)	190.9±5.3^*b (66)

실험예 3. 폴록사머 407 ( Poloxamer 407)로 유도된 고지혈증 병태 랫트에 대한 합환피 에틸아세테이트 가용성 분획물에서 분리된 쿠라리디놀 ( Kuraridinol )의 고지혈증 개선효과

폴록사머 407 (Poloxamer 407)로 유도된 고지혈증 병태 흰쥐에 대한 상기 실시예 6에서 수득된 화합물 1의 고지혈증 개선 효과를 확인하기 위하여, 상기 실험예 1과 같은 방법으로 실시하여, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

하기 표 3에 나타낸 바와 같이, 플라보노이드류 화합물인 쿠라리디놀 (Kuraridinol, 화합물 1) 20 mg/kg 처리군은 음성대조군과 비교하였을 때, 총콜레스테롤과 중성지질농도가 각각 44, 24 %인 유의적 개선효과를 나타내었고, 이는 양성대조군인 로바스타틴 35 mg/kg 처리군 (20, 21 %)보다 훨씬 더 효과적이었다. 쿠라리디놀 (Kuraridinol)은 단일 화합물로서 탁월한 고지혈증 개선효과를 나타내었다.

시료	총콜레스테롤 (㎎/㎗)	중성지질 (㎎/㎗)
정상군	93.8±10.0 (35)	81.2±4.1 (27)
고지혈증군 (5% 에탄올 함유된 생리 식염수)	268.0±12.0^*a (100)	300.9±5.9^*a (100)
쿠라리디놀 (Kuraridinol) 10 mg/kg	194.3±6.8^*b (72)	243.4±2.8^*b (81)
쿠라리디놀 (Kuraridinol) 20 mg/kg	149.6±16.3^*b (56)	228.1±10.9^*b (76)
로바스타틴 35 mg/kg	214.4±6.5^*b (80)	237.7±4.0^*b (79)
로바스타틴 70 mg/kg	176.9±5.4^*b (66)	192.6±8.8^*b (64)

하기에 상기 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

실시예 6의 쿠라리디놀 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

실시예 6의 쿠라리디놀 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

실시예 6의 쿠라리디놀 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

실시예 6의 쿠라리디놀 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄,12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

실시예 6의 쿠라리디놀 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

본 발명의 합환피 (Albzzia julibrissin cortex) 추출물 또는 그로부터 분리된 쿠라리디놀 (kuraridinol) 화합물은 동맥경화증과 밀접한 관계가 있는 고지혈증에 대한 개선 효과를 보이므로, 고지혈증 및 동맥경화증의 예방 및 치료를 위한 약학조성물로써 사용할 수 있다.

Claims

합환피 (Albzzia julibrissin cortex) 추출물 또는 이로부터 분리한 하기 구조식 (1)로 표기되는 쿠라리디놀 (kuraridinol)을 유효성분으로 포함하고, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 함유하는 고지혈증의 예방 및 치료용 약학조성물:

(1)
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 조추출물 또는 비극성용매 가용 추출물인 약학조성물.
제 2항에 있어서, 상기 조추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올의 저급알콜 또는 이들의 혼합용매로 가용한 추출물인 약학조성물.
제 2항에 있어서, 상기 비극성용매 가용추출물은 디클로로메탄, 클로로포름 또는 에틸 아세테이트로부터 선택된 비극성용매로 가용한 추출물인 약학조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물 또는 화합물은 조성물 총중량에 대하여 0.1 내지 50 중량 %로 포함됨을 특징으로 하는 약학조성물.