KR101648787B1

KR101648787B1 - 타이로신 키나제 억제제로서 유용한 4－（치환된 아닐리노）－퀴나졸린 유도체

Info

Publication number: KR101648787B1
Application number: KR1020127010888A
Authority: KR
Inventors: 정이 왕; 추완웬 판; 용 장; 종루 구오; 잉 이; 샤오보 양; 쇼우셩 얀; 지안롱 주; 큉민 양; 밍후이 장
Original assignee: 치루 파머수티컬 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2009-09-28
Filing date: 2010-09-20
Publication date: 2016-08-17
Anticipated expiration: 2030-09-20
Also published as: CA2775601C; US20120208833A1; CN102030742B; CA2775601A1; EP2484678A1; US8916574B2; ES2535176T3; CN102030742A; JP2013505899A; EP2484678A4; KR20120125226A; WO2011035540A1; EP2484678B1

Abstract

본 발명은 타이로신 키나제 억제제로서 4-(치환된 아닐리노)-퀴나졸린 유도체에 관한 것이다. 구체적으로, 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 개시하며, 이때 화학식 I의 각 치환체는 명세서에 정의되어 있다. 화학식 I 화합물의 제조 방법, 그의 약학 조성물 및 약학적 용도가 또한 개시되어 있다. 화학식 I의 화합물은 유효한 타이로신 키나제 억제제이다.
화학식 I

Description

타이로신 키나제 억제제로서 유용한 4－（치환된 아닐리노）－퀴나졸린 유도체{4-(SUBSTITUTED ANILINO)-QUINAZOLINE DERIVATIVES USEFUL AS TYROSINE KINASE INHIBITORS}

본 발명은 의 화학 분야에 속하며, 구체적으로 종양 억제 활성을 갖는 새로운 부류의 4-(치환된 아닐리노)-퀴나졸린 유도체 및 그의 제조 방법뿐만 아니라, 포유동물(인간 포함)에 있어서 수용체 타이로신 키나제에 의해 매개된 종양 또는 수용체 타이로신 키나제에 의해 구동된 종양 세포의 증식 및 이동의 치료 또는 보조 치료를 위한 약제로서 상기 4-(치환된 아닐리노)-퀴나졸린 유도체의 용도에 관한 것이다.

종양은 인간의 생명 및 삶의 질을 심각하게 위협하는 주요 질병들 중 하나이다. 세계 보건 기구(WHO)의 통계학적 데이터에 따르면, 종양으로 인해 사망하는 환자는 세계적으로 연간 약 690만 명이다. 생활 환경 및 생활 습관이 변함에 따라, 종양의 유병률 및 사망률이 유해한 환경 및 일부 불리한 인자들로 인해 최근 수년간 점진적으로 증가하여 왔다.

종양의 전통적인 치료 섭생은 종양을 발견하여 파괴함으로써 수행된다. 현재, 종양 세포에서의 세포 신호 전달 경로의 추가적인 연구 및 종양 유전자 및 종양 억제유전자의 작용에 대한 깊은 이해로 인해, 암-특이적 분자 표적을 향하는 종양 억제 약물의 개발이 보다 많은 주의를 끌고 있으며 당해 분야의 연구 초점이 되고 있다. 신규의 치료 섭생으로서 종양의 표적 요법이 임상적으로 적용되었으며, 최근 수년간 현저하게 진보하였다. 단백질 타이로신 키나제(PTK)의 신호 경로가 종양 세포의 증식, 분화, 이동 및 세포사멸에 밀접하게 관련되며(문헌[Li Sun, et al., Drug Discov Today, 2000, 5, 344-353] 참조), 단백질 타이로신 키나제 억제제를 사용하여 타이로신 키나제 경로를 방해하거나 차단하여 종양을 치료할 수 있음(문헌[Fabbro D., et al., Curr Opin Pharmacol, 2002, 2, 374-381] 참조)이 공지되어 있다.

단백질 타이로신 키나제(PTK)는 정상적인 및 비정상적인 세포 증식에 중요한 종양 단백질 및 원-종양 단백질 패밀리의 구성원이며, 상이한 기질의 타이로신 잔기를 선택적으로 인산화하고, 아데노신 트라이포스페이트로부터 다수의 중요한 단백질들의 타이로신 잔기로의 γ-포스페이트 그룹의 운반을 촉매화하며, 페놀 하이드록실을 인산화할 수 있는 효소이다. 단백질 타이로신 키나제는 수용체 타이로신 키나제(RTK), 비-수용체 타이로신 키나제, 및 IR 및 야누스 키나제 등을 포함하고(문헌[Robinson D.R., et al., Oncogene, 2000, 19, 5548-5557] 참조), 여기에서 이들의 대부분은 수용체 타이로신 키나제(RTK)이다. 수용체 타이로신 키나제(RTK)는 내생적인 단백질 타이로신 키나제이며, 다수의 세포 조절에 관여하고, 세포 복제를 개시하는 분열촉진 신호의 전달에 중요한 역할을 하며, 세포 성장 및 분화를 조절한다. 모든 RTK는 유사한 위상 구조를 갖는 I형 막 걸침(membrane-spanning) 세포 표면 단백질에 속한다, 즉 이들은 큰 글리코실화된 세포 외 리간드 결합 도메인, 소수성 막관통 도메인, 및 세포 내 타이로신 키나제 촉매 도메인뿐만 아니라 조절 서열을 갖는다. 리간드 결합(예를 들어 표피 성장 인자(EGF) 또는 EGFR의 결합)은 수용체 중의 부분 암호화된 수용체 키나제의 활성을 활성화시키며, 이에 의해 중요한 타이로신 아미노산을 인산화하여 세포막을 가로질러 증식 신호의 전달을 도출하는 것으로 공지되어 있다.

상기 수용체 타이로신 키나제는 세포 외 리간드 결합 도메인 중의 서브유닛들의 상이한 구조(문헌[Ullrich A. et al., Cell, 1990, 61, 203-212] 참조)를 기준으로 하기와 같은 4 개의 상이한 하위 그룹으로 분류될 수 있다, 즉 제 1 하위 그룹(즉 erbB 패밀리)은 표피 성장 인자 수용체(EGFR), HER2/Neu, HER3/c-erbB3 등을 포함하고; 제 2 하위 그룹은 인슐린 수용체, 인슐린 유사 성장 인자-1(IGF-1) 수용체 등을 포함하며; 제 3 하위 그룹은 PDGFR-α, PDGFR-β, 콜로니-자극 인자-1 수용체(CSF-1R), c-키트 등을 포함하고; 추가의 하위 그룹은 FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3, FGFR-4 등을 포함하며, 여기에서 상기 제 3 및 제 4 하위 그룹은 각각 5 및 3 개의 세포 외 면역글로불린-유사 도메인을 함유한다. 상응하는 리간드에 결합 후에, RTK는 수용체 중에 동종 이량체 또는 이종 이량체의 형성을 개시하고, PTK를 활성화하며, 포스페이트 그룹의 아데노신 트라이포스페이트로부터 수용체의 타이로신 잔기로의 운반을 촉매화하여 상기 타이로신 잔기를 인산화할 수 있다. 상기 수용체의 자기인산화는 2 가지 효과, 즉 고유 촉매 활성의 활성화 및 효과 단백질의 결합 부위의 형성을 생성시켜, 하부 신호 분자들을 활성화한다(문헌[Zhu Xiaofeng et al, Acta Pharmaceutica Sinica, 2002, 37, 229-234; Deng Xiaoqiang et al, Acta Pharmaceutica Sinica, 2007, 42, 1232-1236] 참조).

상기 수용체 타이로신 키나제의 주요 신호 전달 경로는 Ras(레트로바이러스-관련된 DNA 서열)/Raf(빠르게 가속화된 섬유육종)/MAPK(분열촉진물질 활성화된 단백질 키나제) 경로 및 PI-3K(포스파티딜이노시톨-3 키나제)/Akt(단백질 키나제 B, PKB) 경로를 포함한다. Ras/Raf/MAPK 경로는 주로 세포 증식 및 생존을 조절한다. MAPK는 분열촉진 신호이며, 활성화된 MAPK는 세포 핵에 들어가 인산화로 인해 전사 인자(예를 들어 Elkl, Etsl, c-Myc 등)를 활성화하고, 이에 의해 세포 주기 및 형질전환 과정을 방해하여 종양을 형성시킨다. MAPK는 또한 단백질 및 기질의 퇴화를 유발하고, 세포 이동을 촉진하며, 종양 성장을 유지시킬 수 있다(문헌[Liebmann C., et al., Cell Signal, 2001, 13, 777-785] 참조). PI-3K/Akt 신호 전달 경로는 세포 성장, 세포사멸 억제, 침입, 및 이동 과정을 수반하고, Ras/Raf/MAPK 경로의 경우와 동일한 중요한 역할을 하며, 여기에서 Akt는 세포 핵에 들어가 인산화로 인해 보다 많은 전사 인자들(예를 들어 FKHRL1, NF-_kB, Bcl-2 등)을 조절하여, 세포사멸 유전자의 발현을 억제하고; Akt는 또한 글리코젠 신타제 키나제-3(GSK-3) 및 라파마이신의 포유동물 표적(mTOR)을 인산화하며, 따라서 사이클린 D를 상향조절하고, 일련의 억제 단백질들(예를 들어 21^CIPI 및 p27^KIPI)을 인산화하여, 세포 주기를 단축시켜 종양이 형성되게 한다(문헌[Shaw R.J.,et al., Nature, 2006, 441, 424-430] 참조). 따라서, PTK에 의해 촉매화된 수용체의 인산화는 최종적으로 세포 증식을 촉진하고, 세포사멸을 억제하며, 이는 종양 형성과 직접 관련된다.

공지된 연구 결과는 상기 수용체 타이로신 키나제, 예를 들어 Bcr-abl, EGFR, HER 등이 종양을 앓고 있는 환자들에게서 과발현됨, 특히 상기 erbB 패밀리(예를 들어 EFGR, HER2 등)의 과발현이 많은 인간 암들, 예를 들어 비 소세포 폐암(NSCLC) (문헌[Brabender J.,et al., Clin Cancer Res, 2001, 7, 1850-1855] 참조), 백혈병(문헌[Jose' Ignacio　Martin-Suberoac, et al., Cancer Genet Cvtogenet, 2001, 127, 174-176] 참조), 위장암(문헌[Kapitanovic S., et al., Gastroenterology, 2000, 112, 1103-1113; Ross J.S. ,et al., Cancer Invest, 2001, 19, 554-558] 참조), 유방암(문헌[Klijn J.S., et al., Breast Cancer Res Treat, 1994, 29, 73-83] 참조), 전립선암(문헌[Scher H.I., et al., J Natl Cancer Inst, 2000, 92, 1866-1868] 참조), 난소암(문헌[Hellstrom I., et al., Cancer Res, 2001, 61, 2420-2423] 참조), 두경부 암(문헌[Shiga H., et al., Head Neck, 2000, 22, 599-608] 참조) 등에서 검출될 수 있음을 입증하였다. 보다 많은 인간 종양 조직에서 수용체 타이로신 키나제의 발현, 및 PTK 신호 경로와 종양 간의 관계가 더욱 깊이 연구됨에 따라, 이러한 종류의 표적 부위들은 반드시 종양의 치료 섭생에 혁신을 일으킨다.

다수의 종양 세포들 중에 비정상적인 신호 전달 경로들이 존재한다, 예를 들어 상기 EGFR 단백질의 과발현은 대개 표피 세포 유래된 종양에서 나타나고, 상기 PDEFR 단백질의 과발현은 대개 신경교종에서 나타나며, Bcr-Abl의 과활성은 CML 등에서 나타난다. 하나 이상의 수용체의 잘못된 조절의 결과로서, 다수의 종양이 임상적으로 보다 침습성으로 되며, 따라서 이는 나쁜 예후와 밀접하게 관련된다(문헌[Ross J.S., et al., Cancer Investigation, 2001, 19, 554-568] 참조). 상기 임상적인 발견 이외에, 다수의 임상 연구는 상기 erbB 패밀리 중의 타이로신 키나제가 세포화생과 관련됨, 즉 하나 이상의 erbB 수용체가 다수의 세포 주에서 과발현되고 EFGR 또는 erbB2 단백질이 이들 세포에 형질감염 시 비-종양 세포를 형질전환시킬 수 있음을 입증한다. 더욱이, 다수의 전 임상 연구들은 상기 하나 이상의 erbB 수용체의 활성을 소 분자 억제제 또는 억제 항체를 사용함으로써 제거하여 증식에 대한 효과를 유도함을 보인다(문헌[Mendelsohn J., et al., Oncogene, 2000, 19, 6550-6565] 참조).

최근 수년간, 신규의 표적화된 종양 억제 약물을 개발하기 위해 세포 신호 전달 경로의 억제에 초점을 맞추어 왔다. 신호 전달 억제제는 세포독성에 의해서라기 보다는 종양의 생존 및 증식 신호의 하향 조절에 의해 세포사멸을 촉진하며, 따라서 선택성이 높고 독성 부작용은 낮다. 현재, 종양 치료에 임상적으로 적용되는 많은 신호 전달 억제제들이 존재하며, 이들은 주로 종양 억제 약물로서 타이로신 키나제 억제제들이다, 예를 들어 4-(치환된 아닐리노)-퀴나졸린의 구조를 갖는 화합물의 개발이 EGFR 타이로신 키나제의 표적 부위에 대한 소 분자 억제제, 예를 들어 제피티니브(이레사), 에를로티니브(타세바), 라파티니브 등에 대해 진행되고 있다.

제피티니브는 이레사라는 상표명으로 아스트라제네카(AstraZeneca)에 의해 개발된 EGFR 타이로신 키나제 억제제로, 2002년 일본 및 2003년 미국에서 임상적으로 연구되고 판매된 최초의 EGFR 타이로신 키나제 억제제이며, 선행 화학요법을 받은 진행된 또는 전이성 비-소세포 폐암(NSCLC) 환자의 치료에 사용이 지시된다. 에를로티니브는 타세바라는 상표명으로 OSI에 의해 개발되고 제넨테크(Genentech)와 로슈(Roche)로 양도되고, 2004년 미국에서 판매된 EGFR 타이로신 키나제 억제제로, NSCLC 및 췌장암의 치료에 사용이 지시된다. 에를로티니브는 NSCLC의 치료를 위한 1 세대 아닐리노퀴나졸린 소분자 억제제에 속하며, 진행된 NSCLC에 대해 생존 이점을 나타내는 것으로 확인된 유일한 EGFR 타이로신 키나제 억제제이다. 에를로티니브는 다양한 NSCLC에 유효하며, 양호한 내성을 갖고, 골수억제 및 세포독성을 나타내지 않으며, 환자의 생존을 현저하게 연장하고 삶의 질을 개선시킬 수 있다. 라파티니브(타이서브(Tycerb)라는 상표명을 갖는다)는 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)에 의해 개발된 EGFR 및 HER2의 이중 억제제이며, 종양 증식의 신호 전달에 대한 억제 활성 및 신호 수용체 억제제보다 더 높은 생존을 나타낸다. 라파티니브는 2007년 미국 식품의약품 안전청에 의해 승인되었으며, HER2가 과발현되고 안트라사이클린, 탁산 및 트라스투주맵과 같은 화학요법을 받은 진행된 또는 전이성 유방암의 치료에 카페시타빈과의 병용이 지시되었다.

또한, 공개된 특허 출원 WO 96/33977, WO 97/30035, WO 98/13354, WO 00/55141, WO 02/41882, WO 03/82290 및 EP 837063(이들은 모두 4-번 위치에서 아닐리노 그룹으로 치환되거나 또는 6- 및/또는 7-번 위치에 치환체(들)를 갖는 몇몇 퀴나졸린 유도체들을 개시한다)은 수용체 타이로신 키나제의 억제 활성을 갖는다.

신규의 표적 항암 약물로서 소 분자 타이로신 키나제 억제제는 종양의 치료 및 예방을 위한 새로운 창을 열었으며 약간의 부작용과 양호한 내성을 갖는다. 많은 소 분자 타이로신 키나제 억제제들이 종양의 임상 치료에 현저한 기여를 했지만, 현행 타이로신 키나제 억제제보다 양호한 생체 내 활성 및/또는 개선된 약물 작용을 갖는 추가적인 화합물을 발견할 필요가 있다. 따라서, 종양의 임상 치료는, 신규의 개선되거나 보다 유효한 타이로신 키나제 억제제를 개발하고 상기와 같은 신규 억제제와 공지된 표적 단백질들 간의 관계뿐만 아니라 그의 작용 기전을 깊이 연구하는 것이 매우 중요하다.

본 발명의 목적은 타이로신 키나제를 유효하게 억제하는 신규의 화합물을 발견하는 것이다.

본 발명자들은 놀랍게도 화학식 I의 4-(치환된 아닐리노)-퀴나졸린 유도체가 생체 내에서 타이로신 키나제에 대한 유효한 억제 및/또는 양호한 약동학을 가짐을 발견하였다. 본 발명은 상기 발견을 기본으로 완성된다.

따라서, 본 발명의 첫 번째 태양은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 제공한다:

[화학식 I]

상기 식에서,

R은 C₁ _-6-알킬설피닐, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬설피닐, C₁ _-6-알킬티오, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬티오, C₁ _-6-알킬아미도, C₁ _-6-알킬설폰아미도, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬설폰아미도, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬설포닐, 및 화학식

의 그룹 중에서 선택되고;

여기에서 R₁ 및 R₂는 각각 독립적으로 수소, C₁ _-6-알킬, 및 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 R이 C₁ _-6-알킬설피닐, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬설피닐 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명의 화학식 I 화합물의 하나의 실시태양에서, R은 C₁ _-4-알킬설피닐, 및 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬설피닐 중에서 선택된다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 R이 C₁ _-6-알킬티오, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬티오 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명의 화학식 I 화합물의 하나의 실시태양에서, R은 C₁ _-4-알킬티오, 및 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬티오 중에서 선택된다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 R이 C₁ _-6-알킬아미도, C₁ _-6-알킬설폰아미도, 및 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬설폰아미도 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명의 화학식 I 화합물의 하나의 실시태양에서, R은 C₁ _-4-알킬아미도, C₁ _-4-알킬설폰아미도, 및 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬설폰아미도 중에서 선택된다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 R이 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬설포닐 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명의 화학식 I 화합물의 하나의 실시태양에서, R은 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬설포닐 중에서 선택된다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 R이 화학식

(여기에서 R₁ 및 R₂는 본 발명의 첫 번째 태양에 따른 화학식 I 화합물에 대해 정의된 바와 같은 의미를 갖는다)의 그룹 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명의 화학식 I 화합물의 하나의 실시태양에서, R은 화학식

(여기에서 R₁ 및 R₂는 각각 독립적으로 수소, C₁ _-4-알킬, 및 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬, 예를 들어 수소, 메틸, 에틸 및 트라이플루오로메틸로 이루어진 그룹 중에서 선택된다)의 그룹 중에서 선택된다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 R이 C₁ _-4-알킬설피닐, 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬설피닐, C₁ _-4-알킬티오, 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-6-알킬티오, C₁ _-4-알킬아미도, C₁ _-4-알킬설폰아미도, 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬설폰아미도, 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬설포닐, 및 화학식

(여기에서 R₁ 및 R₂는 각각 독립적으로 수소, C₁ _-4-알킬, 및 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C₁ _-4-알킬로 이루어진 그룹 중에서 선택된다)의 그룹 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 할로겐이 불소, 염소 및 브롬 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 할로겐은 불소 및 염소 중에서 선택되고, 바람직하게는 불소이다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 알킬이 선형 또는 분지된 알킬 그룹인 화학식 I의 화합물을 제공한다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 알킬이 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소-프로필, n-부틸, 2급-부틸, 3급-부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소-프로필, n-부틸, 2급-부틸 및 3급-부틸로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 하나의 실시태양에서, 상기 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소-프로필 및 n-부틸 중에서 선택된다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 약학적으로 허용 가능한 염이 하이드로클로라이드, 설페이트, 메실레이트, 자일렌설포네이트, 퓨마레이트, 및 말리에이트로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물, 또는 그의 용매화물, 예를 들어 수화물을 제공한다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(설파모일)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(메틸설피닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(메틸티오)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(메탄설폰아미도)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설포닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(트라이플루오로메틸설포닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(트라이플루오로메틸티오)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(트라이플루오로메틸설피닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸티오)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설피닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(아세트아미도)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(N-메틸설파모일)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(N-에틸설파모일)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민; 및

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설폰아미도)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민

으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 제공한다.

로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화학식 I의 화합물을 제공한다.

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설포닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민; 및

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(트라이플루오로메틸설포닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민

상기 첫 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(메탄설폰아미도)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민; 및

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설포닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민

본 발명의 두 번째 태양은

a) 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 염 또는 반응성 유도체를 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 적합한 염과, 적합한 염기의 존재 하에 적합한 용매, 예를 들어 유기 용매 중에서 반응시키는 단계:

[화학식 II]

[화학식 III]

NH₂CH₂CH₂R

상기 식에서

R은 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에서 정의한 바와 같은 의미를 갖는다; 및

b) 상기 반응 혼합물을 적합한 환원제로 처리하여 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계

를 포함하는, 본 발명의 첫 번째 태양의 실시태양에 따른 화학식 I 화합물의 제조 방법을 제공한다.

상기 두 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 염기가 유기 염기, 예를 들어 트라이에틸아민, 트라이에탄올아민, 알킬다이메틸아민, 및 나트륨 메톡사이드 등, 또는 무기 염기, 예를 들어 수산화 나트륨, 수산화 칼륨 및 탄산 나트륨 등일 수 있는 화학식 I 화합물의 제조 방법을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 염기는 트라이에틸아민이다.

상기 두 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 화학식 III 화합물의 염이 하이드로클로라이드, 설페이트, 및 나이트레이트 등으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화학식 I 화합물의 제조 방법을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 화학식 III 화합물의 염은 하이드로클로라이드 염이다.

상기 두 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 환원제가 붕수소화 나트륨, 시아노붕수소화 나트륨, 및 나트륨 트라이아세톡시보로하이드라이드 등으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화학식 I 화합물의 제조 방법을 제공한다. 하나의 실시태양에서, 상기 환원제는 붕수소화 나트륨이다. 또 다른 실시태양에서, 상기 환원제는 시아노붕수소화 나트륨이다.

상기 두 번째 태양의 실시태양에 따라, 본 발명은 화학식 II 및 H₂CH₂CH₂R 중의 임의의 작용기가 경우에 따라 보호되는 화학식 I 화합물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 두 번째 태양에 따른 방법에서, 필요에 따라, 바람직하지 못한 반응을 방지하기 위해서 화학식 I 화합물의 제조 중에 일부 그룹(예를 들어 아미노, 하이드록실 그룹 등)을 보호할 필요가 있으며, 그동안, 적합한 경우 보호 그룹을 탈보호시킨다. 상기와 같은 예들은 언급하기에 너무 많으며, 구체적으로 언급되지 않은 보호 그룹 및 탈보호 방법의 용도는 모두 본 발명의 범위 내에 있다.

본 발명의 두 번째 태양에 따른 방법에서, 화학식 II의 화합물은 당해 분야에 공지된 기법에 따라 당해 분야의 숙련가에 의해 제조될 수 있으며, 하나의 예시적인 방법으로, 화학식 II의 화합물을 참고문헌, 예를 들어 문헌[Kimberly G. Petrov, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16: 4686-4691]에 따라 제조될 수 있다.

본 발명의 세 번째 태양은 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물, 및 임의로 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체(들) 또는 부형제(들)를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 네 번째 태양은 포유동물(인간 포함)에 있어서 수용체 타이로신 키나제와 관련된 질병 또는 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에서 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 네 번째 태양은 또한 포유동물(인간 포함)에 있어서 수용체 타이로신 키나제-매개된 종양 또는 수용체 타이로신 키나제-구동된 종양 세포의 증식 및 이동의 치료 또는 보조 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에서 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 화합물을 사용하여 erbB 수용체 타이로신 키나제에 민감한 암, 예를 들어 EGFR 또는 Her2이 과발현되는 종양 및 EGF-구동된 종양, 예를 들어 고형 종양, 예를 들어 담관, 뼈, 방광, 뇌/중추 신경계, 유방, 결장직장, 자궁내막, 위, 두경부, 간, 폐(특히 비-소 세포 폐암), 신경, 식도, 난소, 췌장, 전립선, 신장, 피부, 고환, 갑상선, 자궁, 음문 등의 암, 및 비-고형 종양, 예를 들어 백혈병, 다발성 골수종, 또는 림프종 등을 치료할 수 있음은 본 발명에 따라 완벽하게 예견될 수 있다. 따라서, 상기 "수용체 타이로신 키나제와 관련된 질병 또는 질환" 및 "수용체 타이로신 키나제-매개된 종양" 또는 "수용체 타이로신 키나제-구동된 종양 세포의 증식 및 이동"이란 용어와 관련된 종양 또는 암은 erbB 수용체 타이로신 키나제에 민감한 암, 예를 들어 EGFR 또는 Her2이 과발현되는 종양 및 EGF-구동된 종양, 예를 들어 고형 종양, 예를 들어 담관, 뼈, 방광, 뇌/중추 신경계, 유방, 결장직장, 자궁내막, 위, 두경부, 간, 폐(특히 비-소 세포 폐암), 신경, 식도, 난소, 췌장, 전립선, 신장, 피부, 고환, 갑상선, 자궁, 음문 등의 암, 및 비-고형 종양, 예를 들어 백혈병, 다발성 골수종, 또는 림프종 등을 포함할 수도 있다.

본 발명의 다섯 번째 태양은 수용체 타이로신 키나제와 관련된 질병 또는 질환의 치료 및/또는 예방이 필요한 포유동물에게 치료 유효량의 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 포유동물의 상기 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다.

본 발명의 다섯 번째 태양은 또한 수용체 타이로신 키나제-매개된 종양 또는 수용체 타이로신 키나제-구동된 종양 세포의 증식 및 이동의 치료 또는 보조 치료 및/또는 예방이 필요한 포유동물(인간 포함)에게 치료 유효량의 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 포유동물의 상기 치료 또는 보조 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것이다.

본 발명의 다섯 번째 태양은 또한 종양 또는 암의 치료 및/또는 예방이 필요한 포유동물(인간 포함)에게 치료 유효량의 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물을 투여함을 포함하는, 상기 포유동물의 상기 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 여기에서 상기 종양 또는 암은 erbB 수용체 타이로신 키나제에 민감한 암, 예를 들어 EGFR 또는 Her2이 과발현되는 종양 및 EGF-구동된 종양, 예를 들어 고형 종양, 예를 들어 담관, 뼈, 방광, 뇌/중추 신경계, 유방, 결장직장, 자궁내막, 위, 두경부, 간, 폐(특히 비-소 세포 폐암), 신경, 식도, 난소, 췌장, 전립선, 신장, 피부, 고환, 갑상선, 자궁, 음문 등의 암, 및 비-고형 종양, 예를 들어 백혈병, 다발성 골수종, 또는 림프종 등을 포함한다.

본 발명의 여섯 번째 태양은 수용체 타이로신 키나제와 관련된 질병 또는 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약학 조성물에 관한 것이며, 상기 약학 조성물은 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물, 및 임의로 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체(들) 또는 부형제(들)를 포함한다.

본 발명의 여섯 번째 태양은 또한 포유동물(인간 포함)의 수용체 타이로신 키나제-매개된 종양 또는 수용체 타이로신 키나제-구동된 종양 세포의 증식 및 이동의 치료 또는 보조 치료 및/또는 예방을 위한 약학 조성물에 관한 것이며, 상기 약학 조성물은 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물, 및 임의로 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체(들) 또는 부형제(들)를 포함한다.

본 발명의 여섯 번째 태양은 또한 포유동물(인간 포함)의 종양 또는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 약학 조성물에 관한 것이며, 상기 약학 조성물은 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물, 및 임의로 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체(들) 또는 부형제(들)를 포함하고, 여기에서 상기 종양 또는 암은 erbB 수용체 타이로신 키나제에 민감한 암, 예를 들어 EGFR 또는 Her2이 과발현되는 종양 및 EGF-구동된 종양, 예를 들어 고형 종양, 예를 들어 담관, 뼈, 방광, 뇌/중추 신경계, 유방, 결장직장, 자궁내막, 위, 두경부, 간, 폐(특히 비-소 세포 폐암), 신경, 식도, 난소, 췌장, 전립선, 신장, 피부, 고환, 갑상선, 자궁, 음문 등의 암, 및 비-고형 종양, 예를 들어 백혈병, 다발성 골수종, 또는 림프종 등을 포함한다.

본 발명의 일곱 번째 태양은 수용체 타이로신 키나제와 관련된 질병 또는 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 일곱 번째 태양은 또한 포유동물(인간 포함)에 있어서 수용체 타이로신 키나제-매개된 종양 또는 수용체 타이로신 키나제-구동된 종양 세포의 증식 및 이동의 치료 또는 보조 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 일곱 번째 태양은 또한 포유동물(인간 포함)의 종양 또는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양에 따른 화학식 I의 화합물에 관한 것이며, 여기에서 상기 종양 또는 암은 erbB 수용체 타이로신 키나제에 민감한 암, 예를 들어 EGFR 또는 Her2이 과발현되는 종양 및 EGF-구동된 종양, 예를 들어 고형 종양, 예를 들어 담관, 뼈, 방광, 뇌/중추 신경계, 유방, 결장직장, 자궁내막, 위, 두경부, 간, 폐(특히 비-소 세포 폐암), 신경, 식도, 난소, 췌장, 전립선, 신장, 피부, 고환, 갑상선, 자궁, 음문 등의 암, 및 비-고형 종양, 예를 들어 백혈병, 다발성 골수종, 또는 림프종 등을 포함한다.

본 발명의 임의의 태양 또는 상기와 같은 임의의 태양의 임의의 실시태양들의 특징들을, 이들이 서로 반대되지 않는 한, 임의의 다른 태양 또는 상기와 같은 임의의 다른 태양의 임의의 실시태양에 적용할 수도 있다. 물론, 이들이 상호작용성인 경우, 필요에 따라 상응하는 특징들을 적합하게 변경시킬 수도 있다. 본 발명에서, 예를 들어 "본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 실시태양"이란 표현을 언급하는 경우, 상기 "임의의"란 용어는 본 발명의 첫 번째 태양의 임의의 종속적인 태양을 지칭하며; 다른 태양들에 관한 유사한 표현을 언급하는 경우, 상기 용어는 동일한 의미를 갖는다.

본 발명을 하기와 같이 추가로 개시한다.

본 발명에 인용된 모든 참고문헌들은 본 발명에 참고로 인용되며, 이들 참고문헌들에서 표현된 의미들이 본 발명에 정의된 의미들과 상이한 경우, 본 발명의 표현이 우세할 것이다. 또한, 본 발명에 사용된 용어 및 어구들은 달리 나타내지 않는 한 당해 분야의 숙련가들에게 널리 공지된 바와 같은 통상적인 의미를 갖는다. 그럼에도 불구하고, 본 발명에서 이들 용어 및 어구들을 추가로 예시하고 보다 상세히 설명하는 것이 바람직하다. 상기 언급된 용어 및 어구들이 그들의 통상적인 의미와 상이한 의미를 갖는 경우, 본 발명에서 표현된 의미가 우세할 것이다.

본 발명의 화학식 I의 화합물에서, 퀴나졸린 고리는 하기의 예시적인 순서에 따라 넘버링될 수 있다:

본 발명에 사용된 "할로겐" 또는 "할로"란 용어는 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 지칭한다.

본 발명에서 언급 시 상기 사용된 "하이드로카빌"이란 용어는 알킬, 알케닐 및 알키닐을 포함한다.

본 발명에서 언급 시 상기 사용된 "알킬", "알케닐" 및 "알키닐"이란 용어는 당해 분야에 널리 공지된 공통의 의미를 가지며, 이들은 선형이거나 분지된 하이드로카빌 그룹, 예를 들어 비 제한적으로 메틸, 에틸, 프로필, 아이소프로필, n-부틸, 2급-부틸, 3급-부틸, 알릴, 프로페닐, 프로피닐이고, 상기 "알킬", "알케닐" 및 "알키닐"은 또한 집합적으로 "하이드로카빌" 또는 "지방족 하이드로카빌"을 지칭할 수 있다.

본 발명의 화학식 I 화합물의 합성 방법에서, 사용된 모든 원료 물질을, 달리 명시하지 않는 한, 종래 기술에 따라 제조하거나, 또는 종래 기술에 공지된 방법에 따라 제조하거나, 또는 상업적으로 입수할 수 있다. 상기 반응식에 사용된 중간체, 원료 물질, 시약 및 반응 조건들은 모두 당해 분야의 숙련가들에 의해 변경될 수 있다. 또한, 당해 분야의 숙련가들은 또한 본 발명에 열거되지 않은 화학식 I의 다른 화합물들을 본 발명의 두 번째 태양의 방법에 따라 합성할 수 있다.

본 발명의 화학식 I의 화합물을 추가적인 활성 성분과, 상기 활성 성분이 불리한 효과, 예를 들어 아나필락시스를 생성시키지 않는 경우에만 함께 사용할 수 있다.

본 발명의 화학식 I에 나타낸 활성 화합물을 단독의 항암 약물로서, 또는 하나 이상의 추가적인 항종양 약물과 함께 사용할 수 있다. 상기 복합 요법을, 각각의 치료 성분들을 동시에, 순서대로 또는 별도로 투여함으로써 수행한다.

본 발명에서 "조성물"이란 용어는 지시된 양의 지시된 성분들을 포함하는 생성물, 및 지시된 양의 다양한 지시된 성분들을 배합함으로써 직접 또는 간접적으로 수득한 생성물을 지칭한다.

본 발명의 화합물을 무기산 또는 유기산으로부터 유도된 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있다. "약학적으로 허용 가능한 염"이란 용어는 과도한 독성, 자극, 아나필락시스 등 없이 인간 또는 보다 하등 동물의 조직과의 접촉에 적합하고 신뢰할만한 의학적 결정의 범위 내에서 타당한 효과/위험 비에 상응하는 염을 지칭한다. 상기 약학적으로 허용 가능한 염은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어 에스 엠 버지(S.M. Berge) 등은 상세한 약학적으로 허용 가능한 염을 개시한다(문헌[S. M. Berge, et al., J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66: 1] 참조). 상기 염을 본 발명 화합물의 최종 분리 및 정제 공정에서 동일 반응계에서 제조하거나 또는 본 발명 화합물의 유리 염기성 작용기와 적합한 유기산과의 반응에 의해 단독으로 제조할 수 있다. 전형적인 산 부가염으로는 비 제한적으로 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포 설포네이트, 다이글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵틸레이트, 카프로에이트, 퓨마레이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시에실레이트(아이소티오네이트), 락테이트, 말리에이트, 메실레이트, 니코티네이트, 2-나프실레이트, 옥살레이트, 팔메이트, 펙테이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 티오시아나이드, 포스페이트, 글루타메이트, 바이카보네이트, p-토실레이트 및 운데카노에이트가 있다. 마찬가지로, 알칼리성 질소-함유 그룹을 하기의 물질들로 4급화할 수 있다: 저급 알킬 할로게나이드, 예를 들어 에틸, 프로필 및 부틸의 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 다이알킬 설페이트, 예를 들어 다이메틸 설페이트, 다이에틸 설페이트, 다이부틸 설페이트 및 다이펜틸 설페이트; 장 쇄 할로게나이드, 예를 들어 데실, 도데실, 테트라데실 및 옥타데실의 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 아릴알킬 할로게나이드, 예를 들어 벤질 브로마이드, 페닐에틸 브로마이드 등. 따라서, 물 또는 오일에 용매화 가능하거나 분산 가능한 생성물을 수득할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산 부가염을 형성할 수 있는 산의 예로는 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산, 및 유기산, 예를 들어 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산이 있다.

염기 부가염을 본 발명 화합물의 유리 카복실산 부분을 적합한 염기와 반응시킴으로써 본 발명 화합물의 최종 분리 및 정제 공정에서 동일 반응계에서 제조할 수 있으며, 상기 염기는 예를 들어 금속 양이온성 이온, 암모니아 또는 유기 1차 아민, 2차 아민 또는 3차 아민의 약학적으로 허용 가능한 하이드록사이드, 카보네이트 및 바이카보네이트일 수 있다.

상기 약학적으로 허용 가능한 염은 비 제한적으로 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속, 예를 들어 리튬, 나트륨, 칼륨, 마그네슘 및 알루미늄 등의 양이온성 이온 및 무독성 4급 암모늄 및 아민 양이온성 이온, 예를 들어 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸암모늄, 다이메틸암모늄, 트라이메틸암모늄, 트라이에틸암모늄, 다이에틸암모늄, 및 에틸암모늄 등을 기본으로 하는 염이 있다. 상기 염기 부가염을 형성할 수 있는 전형적인 유기 아민은 에틸렌다이아민, 에탄올아민, 다이에탄올아민, 피페리딘, 피페라진 등을 포함한다.

본 발명의 화학식 I의 화합물은 그의 이성체, 라세미, 거울상 이성체, 부분 입체 이성체, 거울상 이성체-풍부 생성물, 용매화물, 및 에스터를 추가로 포함하며, 본 발명의 화학식 I의 화합물 및 그의 이성체, 라세미, 거울상 이성체, 부분 입체 이성체, 거울상 이성체-풍부 생성물, 용매화물 및 에스터는 용매화물, 예를 들어 수화물, 알콜성 용매화물 등을 추가로 형성할 수 있다. 상기 화합물은 추가로 생체 내 대사 후 활성 성분을 방출할 수 있는 형태 또는 전구 약물일 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 적합한 전구약물 유도체를 선택하고 제조하는 것을 통상적으로 알고 있다. 일반적으로, 본 발명의 목적을 위해서, 본 발명 화합물과 약학적으로 허용 가능한 용매, 예를 들어 물, 에탄올과의 용매화물은 비-용매화물 형태의 본 발명의 화합물과 동등하다.

본 발명의 약학 조성물 중의 다양한 활성 성분들의 실제 용량 수준을, 생성되는 활성 화합물의 양이 특정 환자, 투여형 및 투여 방식에서 목적하는 치료 반응을 도출할 수 있도록 변화시킬 수 있다. 상기 용량 수준은 특정 화합물, 투여 경로, 치료되는 질병의 중증도, 및 환자의 상태 및 과거 병력에 따라 결정되어야 한다. 그러나, 당해 분야의 통상적인 방법은 상기 화합물의 용량을 목적하는 치료 효과를 성취하기 위한 용량보다 낮은 수준으로부터 상기 목적하는 치료 효과를 성취하기에 충분한 용량까지 점진적으로 증가시키는 것이다.

상기 언급된 또는 다른 치료 및/또는 예방에서, 치료 및/또는 예방학적 유효량의 본 발명의 화합물을 순수한 화합물의 형태로, 또는 약학적으로 허용 가능한 에스터 또는 그의 전구 약물(존재하는 경우)의 형태로 사용할 수 있다. 한편으로, 상기 화합물을 상기 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학 조성물을 통해 투여할 수 있다. 상기 본 발명 화합물의 "치료 및/또는 예방학적 유효량"이란 용어는 상기 화합물이 예방학적으로 및/또는 치료학적으로 타당한 효과/위험 비를 성취하기에 충분한 양으로 존재함을 의미한다. 본 발명의 화합물 또는 조성물의 하루 총량은 신뢰할만한 의학적 결정의 범위 내에서 의사가 결정해야 함은 물론이다. 임의의 특정 환자에 관하여, 특정 치료량은 다양한 인자들, 예를 들어 치료하려는 질병 및 그의 중증도, 사용된 특정 화합물의 활성, 사용된 특정 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별 및 음식, 사용된 특정 화합물의 투여 시간 및 경로 및 배설 속도, 상기 특정 화합물과 함께 또는 동시에 투여되는 약물(들), 및 약물 분야에 널리 공지된 유사한 인자들을 근거로 결정되어야 한다. 예를 들어, 당해 분야의 통상적인 방법은 상기 화합물의 용량을 목적하는 치료 효과를 성취하기 위한 용량보다 낮은 수준으로부터 상기 목적하는 치료 효과를 성취하기에 충분한 용량까지 점진적으로 증가시키는 것이다. 일반적으로, 포유동물, 특히 인간에 대한 화학식 I 화합물의 용량은 하루에 체중 ㎏당 0.001 내지 1000 ㎎, 예를 들어 0.01 내지 100 ㎎, 0.01 내지 10 ㎎일 수 있다.

유효량의 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 당해 분야의 숙련가들에게 널리 공지된 약학적으로 허용 가능한 담체를 사용함으로써 제조할 수 있다. 따라서, 본 발명은 하나 이상의 무독성의 약학적으로 허용 가능함 담체와 함께 제형화된 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 추가로 제공한다. 상기 약학 조성물을 경구 투여, 비 경구 주사 또는 직장 투여를 위해 고체 또는 액체 형태로 특수하게 제형화할 수 있다.

상기 약학 조성물을 투여를 용이하게 하기 위해 다수의 투여형으로, 예를 들어 경구 제제(예를 들어 정제, 캡슐, 용액 또는 현탁액); 주사용 제제(예를 들어 주사용 용액 또는 현탁액, 또는 주사 전에 물을 가하여 바로 사용할 수 있는 주사용 건조 분말)로 제형화할 수 있다. 상기 약학 조성물 중의 담체는 경구 제제의 경우: 결합제(예를 들어 전분, 전형적으로는 옥수수, 밀 또는 쌀의 전분, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 나트륨 카복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈이다), 희석제(예를 들어 락토오스, 덱스트로스, 슈크로스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로스 및/또는 글리세롤), 윤활제(예를 들어 이산화 규소, 활석, 스테아르산 또는 그의 염, 전형적으로는 마그네슘 스테아레이트 또는 칼슘 스테아레이트, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜이다)를 포함하고, 경우에 따라, 붕해제, 예를 들어 전분, 아가, 알긴산 또는 그의 염, 전형적으로는 나트륨 알기네이트 및/또는 발포 혼합물, 공용매, 안정화제, 현탁제, 착색제, 풍미제 등을 추가로 포함하며; 주사용 제제의 경우: 보존제, 용해제, 안정화제 등; 국소 제제의 경우: 기질, 희석제, 윤활제, 보존제 등을 포함한다. 상기 약학 제제를 경구 또는 비 경구(예를 들어 정맥 내, 피하 또는 국소) 투여할 수 있으며, 일부 약물이 위 조건에서 안정성이 아닌 경우, 이를 장용 코팅된 정제로 제형화할 수 있다.

보다 구체적으로, 본 발명의 약학 조성물을 경구, 직장, 비 경구, 관 내, 질 내, 복강 내, 국소(예를 들어 분말, 연고 또는 점적제를 통해), 구강으로 인간 또는 다른 포유동물에게 투여하거나, 또는 경구 스프레이 또는 코 스프레이로서 투여할 수 있다. 상기와 관련하여 "비 경구"란 용어는 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 흉강 내, 피하 및 관절강 내 주사 또는 주입을 포함한 투여 방식을 지칭한다.

비 경구 주사에 적합한 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 멸균 수성 또는 비 수성 용매, 분산제, 현탁제, 또는 유화제뿐만 아니라 멸균 주사용 용액 또는 분산액의 개량을 위한 멸균 분산제를 포함할 수 있다. 적합한 수성 또는 비 수성 담체, 희석제, 용매 또는 매질의 예는 물, 에탄올, 폴리올(프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤 등), 식물성 오일(예를 들어 올리브 오일), 주사용 유기 에스터, 예를 들어 에틸 올리에이트 및 이들의 적합한 혼합물을 포함한다.

이들 조성물은 부형제, 예를 들어 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 추가로 포함할 수 있다. 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 니파진, 나우티산, 페놀, 소르브산 등의 사용은 미생물 대항 효과를 보장할 수 있다. 또한 이온화제, 예를 들어 당, 염화 나트륨 등을 포함하는 것이 바람직하다. 흡수 지연용 물질, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용은 주사용 투여형의 연장된 흡수를 성취할 수 있다.

현탁액은 상기 활성 화합물 이외에, 현탁제, 예를 들어 에톡실화된 아이소옥타데칸올, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 및 폴리옥시에틸렌 솔비탄, 미정질 셀룰로스, 메타-알루미늄 하이드록사이드, 벤토나이트, 아가 및 트라가칸트 검, 또는 이들 물질의 혼합물을 추가로 포함할 수 있다.

일부의 경우에, 상기 약물의 효과를 연장시키기 위해 피하 또는 근육 내로 투여된 약물의 흡수율을 감소시키는 것이 바람직하다. 이는 불충분한 수용해도를 갖는 결정 또는 비결정성 형태의 액체 현탁액을 사용함으로써 성취될 수 있다. 따라서, 상기 약물의 흡수율은 그의 용해속도에 의존하는 반면, 상기 용해속도는 결정의 크기 및 형태에 의존한다. 또는, 비 경구 투여 시 약물의 지연된 흡수는 상기 약물을 오일 매질에 용해시키거나 분산시킴으로써 성취될 수 있다.

주사용 데포 투여형은 약물의 미세캡슐 기질을 생분해성 중합체, 예를 들어 폴리락타이드-폴리글리콜라이드 중에 형성시킴으로써 제조될 수 있다. 상기 약물의 방출 속도를 상기 약물 대 중합체의 비 및 특수 사용된 중합체의 성질에 따라 조절할 수 있다. 생분해성 중합체의 다른 예는 폴리(오쏘에스터) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 상기 주사용 데포 투여형을 또한 약물을 체 조직에 적합한 리포솜 또는 미세유화액 중에 매몰하여 제조할 수 있다.

상기 주사용 제제를 세균-제거 필터를 사용하는 여과에 의해 또는 멸균 고체 조성물 형태의 멸균제를 혼입함으로써 멸균할 수 있으며, 상기 고체 조성물을 임상 적용 전에 멸균 수 또는 다른 멸균 주사용 매질에 용해 또는 분산시킬 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 그의 조성물을 경구 또는 비 경구 투여할 수 있다. 경구 투여용의 것들은 정제, 캡슐, 코팅된 투여형일 수 있으며, 비 경구 투여용 약학 제제는 주사 및 좌약일 수 있다. 이들 제제를 당해 분야의 숙련가들에게 널리 공지된 방법에 따라 제조한다. 정제, 캡슐 및 코팅된 투여형을 제조하기 위해서, 상기 사용된 부형제는 통상적으로 사용되는 부형제, 예를 들어 전분, 젤라틴, 아라비아 검, 실리카, 폴리에틸렌 글리콜이며, 액체 투여형에 사용되는 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 식물성 오일(예를 들어 옥수수 오일, 땅콩 오일, 올리브 오일 등)이다. 본 발명의 화합물을 포함하는 제제는 다른 부형제, 예를 들어 계면활성제, 윤활제, 붕해제, 보존제, 풍미제 및 착색제 등을 추가로 포함할 수 있다. 정제, 캡슐, 코팅된 투여형, 주사 및 좌약에서, 본 발명의 화학식 I 화합물의 용량을 단위 투여형 중에 존재하는 상기 화합물의 양으로 나타낸다. 단위 투여형에서, 본 발명의 화학식 I 화합물의 양은 대개 1 내지 5000 ㎎이며, 바람직한 단위 투여형은 10 내지 500 ㎎을 함유하고, 보다 바람직한 단위 투여형은 20 내지 300 ㎎을 함유한다. 구체적으로, 본 발명에 제공된 바와 같은 경구 투여용 고체 투여형은 캡슐, 정제, 환제, 분말 및 과립을 포함한다. 상기와 같은 고체 투여형에서, 상기 활성 화합물을 하나 이상의 불활성의 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체, 예를 들어 나트륨 시트레이트 또는 이칼슘 포스페이트 및/또는 하기의 물질과 혼합할 수 있다: a) 충전제 또는 증량제, 예를 들어 전분, 락토오스, 슈크로스, 글루코스, 만니톨 및 규산; b) 결합제, 예를 들어 카복시메틸 셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 슈크로스, 및 아라비아 고무; c) 보습제, 예를 들어 글리세롤; d) 붕해제, 예를 들어 아가, 탄산 칼슘, 감자 또는 카사바 전분, 알긴산, 일부 실리케이트 및 탄산 나트륨; e) 용해 차단제, 예를 들어 파라핀 왁스; f) 흡수 촉진제, 예를 들어 4급 암모늄 화합물; g) 습윤제, 예를 들어 세타놀 및 글리세롤 모노스테아레이트; h) 흡착제, 예를 들어 카올린 및 벤토나이트; 및 i) 윤활제, 예를 들어 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 도데실설페이트 및 이들의 혼합물. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에, 이들 투여형은 또한 완충제를 포함할 수도 있다.

유사한 유형의 고체 조성물은 연질 캡슐 및 경질 캡슐의 충전제로서 또한 사용될 수 있는 부형제, 예를 들어 락토오스 및 고 분자량 폴리에틸렌 글리콜을 사용한다.

정제, 당의정, 캡슐, 환제 및 과립의 고체 투여형을 코팅제 및 외피 물질, 예를 들어 장 코팅 물질 및 약물 제조 분야에 널리 공지된 다른 코팅 물질을 사용하여 제조할 수 있다. 이들 고체 투여형은 일광 차단제를 임의로 포함할 수 있으며, 이들의 조성은 이들을 임의로 지연된 방식으로 장관의 일부 부위에 활성 성분을 단지 또는 우선적으로 방출되게 할 수 있다. 매몰 조성물의 예는 고 분자 물질 및 왁스를 포함한다. 적합한 경우, 상기 활성 화합물을 하나 이상의 상기 언급한 부형제와 함께 미세캡슐의 형태로 제형화할 수 있다.

경구 투여용 액체 투여형은 약학적으로 허용 가능한 유화제, 용매, 현탁제, 시럽 및 엘릭서를 포함한다. 상기 액체 투여형은 상기 활성 화합물 이외에, 당해 분야에 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어 물 또는 다른 용매, 용해제 및 유화제, 예를 들어 에탄올, 아이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 부탄-1,3-다이올, 다이메틸 폼아미드, 오일(예를 들어 면실유, 땅콩 오일, 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유, 및 참깨유), 글리세롤, 테트라하이드로푸르푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 솔비탄의 지방산 에스터, 및 이들의 혼합물을 추가로 포함할 수 있다. 상기 경구 투여용 조성물은 불활성 희석제 이외에, 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 풍미제 및 향료와 같은 부형제를 추가로 포함할 수 있다.

직장 또는 질 투여용 조성물은 바람직하게는 좌약이다. 상기 좌약을, 본 발명의 화합물을 적합한 비-자극성 부형제 또는 담체, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 좌약 왁스와 혼합하여 제조할 수 있으며, 상기 좌약은 실온에서 고체이나, 체온에서 액체일 수 있고 직장 강 또는 질 강 중에 활성 화합물을 방출할 수 있다.

본 발명의 화합물을 국소 투여용으로 사용하는 것이 또한 바람직하다. 국소 투여용의 본 발명 화합물의 투여형은 분말, 스프레이, 연고 및 흡입제를 포함한다. 상기 활성 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 멸균 조건 하에서 임의의 목적하는 보존제, 완충제 또는 추진제와 혼합할 수 있다. 안과용 제제, 안 연고, 분말 및 용액은 모두 본 발명의 범위 내에 있다.

본 발명의 화합물을 리포솜의 형태로 투여할 수 있다. 이는 당해 분야에 널리 공지되어 있으며, 리포솜은 대개 인지질 또는 다른 지질을 사용함으로써 제조된다. 리포솜은 수성 매질 중에 분산되는 단층 또는 다층의 수화된 액정으로 형성된다. 리포솜을 형성할 수 있는 임의의 무독성의 생리학적으로 허용 가능하고 대사 가능한 지질을 사용할 수 있다. 리포솜 형태의 본 발명의 조성물은 본 발명의 화합물 이외에, 안정제, 보존제, 부형제를 포함할 수 있다. 바람직한 지질은 천연 및 합성 인지질 및 포스파티딜콜린(레시틴)이며, 이들을 단독으로 또는 함께 사용할 수 있다. 리포솜의 형성 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어 문헌[Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), p. 33]을 참조할 수 있다.

본 출원의 발명자들은 놀랍게도 화학식 I의 퀴나졸린 유도체가 EGFR 및 Her2 타이로신 키나제 모두에 대해 억제 활성을 나타내고, 이러는 동안 EGFR 및 Her2 타이로신 키나제가 고도로 발현되는 세포 균주를 억제함을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 화합물은 주로 EGFR 패밀리의 하나 이상의 타이로신 키나제를 억제하고, 상기 키나제 활성을 억제함으로써 증식 방지, 이동 방지 및 세포사멸 촉진 효과를 생성시킴으로써, EGFR 및 Her2 수용체 타이로신 키나제에 의해 단독으로 또는 부분적으로 매개되는 질병의 치료에 사용될 수 있다. 구체적으로, EGFR 및 Her2 타이로신 키나제에 대한 억제 효과에 의해, 본 발명의 화합물을 erbB 수용체 타이로신 키나제에 민감한 하나 이상의 종양, 특히 EGF 구동된 종양 및 EGFR 또는 Her2가 고도로 발현되는 종양, 예를 들어 고형 종양, 예를 들어 담관, 뼈, 방광, 뇌/중추 신경계, 유방, 결장직장, 자궁내막, 위, 두경부, 간, 폐(특히 비-소 세포 폐암), 신경, 식도, 난소, 췌장샘, 신장, 피부, 고환, 갑상선, 자궁 및 음문의 암, 및 비-고형 종양, 예를 들어 백혈병, 다발성 골수종, 또는 림프종의 예방 및 치료에 사용할 수 있다.

실시예

본 발명을 특정한 제조 실시예 및 생물 시험 실시예로 추가로 예시하며, 이들 실시예 및 시험 실시예들은 단지 상세한 설명을 위해 사용되는 것이며 본 발명을 어떠한 식으로도 제한하지 않음은 물론이다.

실시예에 사용된 물질 및 방법을 본 발명에 일반적이고/이거나 구체적으로 개시한다. 본 발명의 목적을 이행하기 위해 사용된 다수의 물질 및 시행 방법은 당해 분야에 공지되어 있지만 가능한 한 더욱 상세히 개시한다. 당해 분야의 숙련가들은 특별히 개시하지 않는 한, 본 발명에 사용된 물질 및 방법이 당해 분야에 널리 공지되어 있음을 분명히 알고 있다.

본 발명에서, 달리 나타내지 않는 한, (i) 온도는 섭씨(℃)로 나타내고, 실행은 실온 또는 주변 온도에서 수행하며; (ii) 유기용매를 무수 황산 나트륨으로 건조시키고, 용매의 증발은 감압 하에 60 ℃ 이하의 욕 온도에서 회전 증발기를 사용하여 수행하며; (iii) 반응 과정을 박층 크로마토그래피(TLC)를 사용하여 모니터하고; (iv) 최종 생성물은 만족스러운 양성자 핵 자기 공명 스펙트럼(¹H-NMR) 및 질량 스펙트럼(MS) 데이터를 갖는다.

실시예 1: N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 설파모일 ) 에 틸아미노) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민(화합물 1)의 합성:

a. 아미노- Cbz 보호된 나트륨 타우레이트의 합성:

25.0 g의 타우린을 1M NaOH 용액 200 ㎖에 용해시키고, 다이옥산 중의 카보벤즈옥시 클로라이드(CbzCl, 51 g) 용액 및 300 ㎖의 1M 수산화 나트륨 용액을 격렬한 교반 하에서 동시에 적가하였다. 상기 적가의 완료 시에, 상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 수 상을 에틸 아세테이트로 추출하고, 상기 반응물을 감압 하에서 농축시켜 46.1 g의 백색 고체, 수율 82%를 획득하였다.

b. 2- 벤질옥시폼아미도에틸설포닐 클로라이드의 합성:

반응 플라스크 중에, 20.0 g의 아미노-Cbz 보호된 나트륨 타우레이트, SOCl₂(30 ㎖) 및 DMF 1 ㎖을 가하였다. 상기 혼합물을 환류 하에서 3 시간 동안 반응시키고, 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 감압 하에서 증류시켜 용매를 제거하여 17.9 g의 유질 생성물, 수율 91%를 획득하였다.

c. 2- 벤질옥시폼아미도에틸설폰아미드의 합성:

반응 플라스크 중에, 100 ㎖의 수성 암모니아 및 100 ㎖의 다이옥산을 가하고, 아세토나이트릴(30 ㎖) 중의 17.9 g 2-벤질옥시폼아미도에틸설포닐 클로라이드 용액을 빙-욕 조건 하에서 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 상기 적가의 끝에서, 상기 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 이어서 여과하고, 필터 케이크를 물로 세척하고 건조시켜 백색 고체 12.3 g, 수율 74%를 획득하였다.

d. 2- 폼아미도에틸설폰아미드의 합성:

반응 플라스크 중에 10.3 g의 2-벤질옥시폼아미도에틸설폰아미드, 10% Pd/C(3.0 g) 및 600 ㎖의 메탄올을 가하였다. 상기 혼합물을 수소 분위기 하에 실온에서 밤새 교반하고, 35 ㎖의 폼산을 가하고, 30 분간 교반하고, 여과하고 감압 하에서 농축시켜 5.6 g의 유질 생성물, 수율 93%를 획득하였다.

e. 2- 설폰아미도에틸아민 하이드로클로라이드의 합성:

2-폼아미도에틸설폰아미드를 무수 다이에틸 에테르에 가하였다. 상기 혼합물을 염화 수소 기체 하에서 3 시간 동안 교반하고, 여과하고 필터 케이크를 무수 다이에틸 에테르로 세척하고, 건조시켜 4.6 g의 백색 고체, 수율 87%를 획득하였다.

f. N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 설파모일 ) 에틸아미노 ) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민의 합성:

2.4 g의 화합물 5-(4-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로아닐리노)-6-퀴나졸리닐)퓨란-2-폼알데하이드를 다이클로로메탄/메탄올(3:1)의 혼합물에 용해시켰다. 상기 혼합물에 1.0 g의 트라이에틸아민을 가하고, 10 분간 교반하고, 1.6 g의 2-아미노에틸설폰아미드 하이드로클로라이드를 가하고, 실온에서 교반하였다. TLC에 의해 검출된 출발 물질의 소모 시, 0.57 g의 붕수소화 나트륨을 빙 욕 하에서 배치로 가하였다. TLC에 의해 검출된 반응의 끝에서, 다이클로로메탄(충분량)을 가하였다. 상기 혼합물을 포화된 염화 암모늄 용액으로 세척하고 이어서 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 2.2 g의 황색 고체, 수율 74%를 획득하였다.

¹H NM (600MHz, DMSO-d₆, δppm): 10.06 (s, 1H), 9.1 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.20 (dd, 1H, J = 1.8 Hz, J = 9 Hz), 8.15 (s, 1H), 7.87 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.82 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.48 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.34 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.32 (s, 1H), 7.29 (d, 1H, J = 9 Hz), 7.21 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.18 (d, 1H, J = 1.8 Hz), 7.12 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 3.42 (m, 2H), 3.35 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 3.13 (m, 2H).

MS (m/z): [M+H]⁺ 582.1.

화합물 1을 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 상기 용액을 에탄올 중의 p-톨루엔설폰산 용액에 서서히 적가하였다. 상기 혼합물을 환류 하에서 2 시간 동안 가열하고, 침전시켜 플라보-그린 침착물을 제공하고, 여과하고 건조시켜 화합물 1의 p-토실레이트를 수득하였다.

실시예 2: N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 메틸설피닐 )에틸아미노) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민(화합물 2)의 합성:

a. Boc 보호된 2- 머캅토에틸아민의 합성:

반응 플라스크 중에, 35.3 g의 다이3급부틸 다이카보네이트, 20.4 g의 2-머캅토에틸아민 하이드로클로라이드 및 200 ㎖의 다이클로로메탄을 가하였다. 상기 혼합물을 빙-욕 조건 하에서 25 ㎖의 트라이에틸아민과 함께 배치로 가하고, 이어서 실온에서 밤새 교반하고, 세척을 위해 과잉 량의 0.5M 염산 용액을 가하였다. 상기 유기층을 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 증류시켜 8 g의 유질 액체, 수율 87%를 획득하였다.

b. Boc 보호된 2- 메틸티오에틸아민의 합성:

4.8 g의 NaH를 빙-욕 및 질소 보호 하에서 무수 테트라하이드로퓨란(250 ㎖) 중의 28 g Boc 보호된 2-머캅토에틸아민 용액에 배치로 가하였다. 상기 온도를 실온으로 증가시키고, 상기 혼합물을 1 시간 동안 반응시키고, 빙-욕 조건 하에서 테트라하이드로퓨란 중의 12 ㎖의 요오도메탄을 적가하였다. 상기 적가의 끝에서, 상기 반응을 실온에서 약 1 시간 동안 수행하고, 포화된 탄산 나트륨 용액을 가하여 상기 반응물을 급냉시켰다. 상기 반응 액체를 물에 붓고, 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 상을 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 증류시켜 유질 액체를 수득하고 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 14.2 g의 목적하는 생성물, 수율 47%를 획득하였다.

c. Boc 보호된 2- 메틸설피닐에틸아민의 합성:

빙-욕 조건 하에서, 14.0 g의 Boc 보호된 2-메틸티오에틸아민을 메탄올에 용해시키고, 나트륨 퍼요오데이트 수용액을 적가하였다. 상기 첨가의 끝에서, 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반 하에 반응시키고, 여과하고 필터 케이크를 다이클로로메탄으로 세척하였다. 상기 여액을 감압 하에서 증류시켜 유기 시약을 제거하고, 포화된 염화 나트륨 용액을 가하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 무수 황산 마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 증류시켜 용매를 제거하여 13.2 g의 유질 생성물, 수율 87%를 획득하였다.

d. Boc 보호된 2- 메틸설피닐에틸아민 하이드로클로라이드의 합성:

12 g의 Boc 보호된 2-메틸설피닐에틸아민을 무수 다이에틸 에테르에 용해시키고, 염화 수소 기체를 공급하였다. TLC에 의해 검출된 출발 물질의 소모 시, 상기 혼합물을 감압 하에서 증류시켜 용매를 제거하여 6.8 g의 유질 생성물, 수율 82%를 획득하였다.

e. N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 메틸설피닐 ) 에틸아미노 ) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민의 합성:

12 g의 화합물 5-(4-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로아닐리노)-6-퀴나졸리닐)퓨란-2-폼알데하이드 p-토실레이트를 다이클로로메탄/메탄올(3:1)의 혼합물에 용해시켰다. 상기 혼합물에 12 ㎖의 트라이에틸아민을 가하고, 10 분간 교반하고, 6.0 g의 2-메틸설피닐에틸아민 하이드로클로라이드를 가하고, 실온에서 교반하였다. TLC에 의해 검출된 출발 물질의 소모 시, 2.0 g의 붕수소화 나트륨을 빙 욕 하에서 배치로 가하였다. TLC에 의해 검출된 반응의 끝에서, 다이클로로메탄(충분량)을 가하였다. 상기 혼합물을 포화된 염화 암모늄으로 세척하고 이어서 포화된 염화 암모늄으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 7.3 g의 황색 고체, 수율 69%를 획득하였다.

¹H-NM (600MHz, DMSO-d₆, δppm): 9.92 (s, 1H), 9.044 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.41 (t, 1H, J = 6.6 Hz), 7.93 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.64 (dd, 1H, J = 2.4 Hz, J = 9 Hz), 7.50 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.48 (d, 1H, J = 9.6 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 9 Hz), 7.25 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 7.22 (dd, 1H, J = 2.4 Hz, J = 9 Hz), 7.11 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 7.25 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 5.32 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 3.51 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.67 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.29 (s, 3H).

MS (m/z): [M+H]⁺ 565.5.

실시예 3: N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 메틸티오 ) 에틸아미노 ) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민(화합물 3)의 합성:

10.0 g의 화합물 5-(4-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로아닐리노)-6-퀴나졸리닐)퓨란-2-폼알데하이드를 다이클로로메탄/메탄올(3:1)의 혼합물에 용해시켰다. 상기 혼합물에 4.3 g의 트라이에틸아민을 가하고, 10 분간 교반하고, 6.9 g의 2-메틸티오에틸아민 하이드로클로라이드를 가하고, 실온에서 교반하였다. TLC에 의해 검출된 출발 물질의 소모 시, 2.4 g의 붕수소화 나트륨을 빙 욕 하에서 배치로 가하였다. TLC에 의해 검출된 반응의 끝에서, 다이클로로메탄(충분량)을 가하였다. 상기 혼합물을 포화된 염화 암모늄으로 세척하고 이어서 포화된 염화 나트륨으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 6.5 g의 황색 고체, 수율 56%를 획득하였다.

¹H-NM (600MHz, DMSO-d₆, δppm): 9.93 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.16 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 8.01 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.80 (d, 1H, J = 7.4 Hz), 7.74 (dd, 1H, J = 2.4 Hz, J = 9 Hz), 7.45 (m, 1H), 7.34 (d, 1H, J = 7.8 Hz), 7.32 (s, 1H), 7.29 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.19 (t, 1H, J = 8.4 Hz), 7.05 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 6.48 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 5.25 (s, 2H), 3.83 (s, 2H), 2.77 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.59 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.04 (s, 3H).

MS (m/z): [M+H]⁺ 549.5.

실시예 4: N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 메틸설폰아미도 ) 에틸아미노 ) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민(화합물 4)의 합성:

a. 3급-부틸 2- 아미노에틸아미노포메이트의 합성:

500 ㎖ 반응 플라스크 중에, 30 ㎖의 에틸렌다이아민을 가하고, 다이클로로메탄(200 ㎖) 중의 18.0 g의 다이3급부틸 다이카보네이트를 빙-욕 조건 하에서 적가하고, 온도를 실온으로 자연스럽게 가온하고 상기 반응을 밤새 수행하였다. 상기 혼합물에 100 ㎖의 다이클로로메탄을 가하고, 포화된 탄산 나트륨 용액으로 세척하고, 이어서 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 증류시켜 용매를 제거하여 10.9 g의 밝은 황색 유질 액체, 수율 82.6%를 획득하였다.

b. 3급-부틸 2- 메틸설폰아미도에틸아미노포메이트의 합성:

1000 ㎖ 반응 플라스크 중에, 36.9 g의 3급-부틸 2-아미노에틸아미노포메이트 및 200 ㎖의 다이클로로메탄을 가하였다. 상기 혼합물을 전자기 교반기에 의해 교반하고, 빙-욕으로 냉각시키고, 96 ㎖의 트라이에틸아민을 가하고, 다이클로로메탄 200 ㎖ 중의 35.9 g의 메틸설포닐 클로라이드를 서서히 적가하였다. 상기 혼합물의 온도를 실온으로 자연스럽게 가온하고 상기 혼합을 밤새 수행하였다. 상기 혼합물에 빙-수를 적가하여 반응물을 급냉시키고, 유기층을 분리시키고 수 층을 다이클로로메탄으로 추출하였다. 상기 유기층들을 합하고, 5 mol/L의 묽은 염산, 포화된 중탄산 나트륨 용액 및 포화된 염화 나트륨 용액으로 연속적으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 증류시켜 용매를 제거하여 28.6 g의 갈색을 띤 황색 고체, 수율 52.1%를 획득하였다.

c. N-(2- 아미노에틸 ) 메틸설폰아미드 하이드로클로라이드의 합성:

500 ㎖ 반응 플라스크 중에, 3급-부틸 2-메틸설폰아미도에틸아미노포메이트(25 g) 및 350 ㎖의 에탄올과 메탄올의 혼합물을 가하였다. 상기 혼합물을 전자기 교반기에 의해 교반하고, 무수 염화 수소 기체를 3 시간 동안 공급하고 실온에서 밤새 교반하고, 감압 하에서 작은 부피로 농축시키고, 흡입 여과를 수행하여 14.6 g의 갈색을 띤 회색 분말 고체, 수율 79.3%를 획득하였다.

d. N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 메틸설폰아미도 ) 에틸 아미노) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민의 합성

실온에서, 다이클로로메탄/메탄올(3:1)의 혼합물 중의 10.0 g의 화합물 5-(4-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로아닐리노)-6-퀴나졸리닐)퓨란-2-폼알데하이드, 6.5 g의 화합물 N-(2-아미노에틸)메탄설폰아미드 하이드로클로라이드, 및 14.6 g의 트라이에틸아민을 밤새 교반하고, 이어서 빙-욕으로 0 ℃까지 냉각시키고, 1.4 g의 붕수소화 나트륨을 상기 온도에서 가하였다. 상기 혼합물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하고, 포화된 중탄산 나트륨을 가하여 상기 반응물을 급냉시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 상을 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 5.7 g의 목적하는 생성물, 수율 45.0%를 획득하였다.

¹H-NMR (300MHz, CDCl₃, δppm): 8.65 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.84~7.73 (m, 3H), 7.53 (d, 1H, J = 8.7 Hz), 7.33-7.28 (m, 1H), 7.19~7.15 (m, 2H), 6.98 (t, 1H, J = 8.4 Hz),6.86 (d, 1H J = 4.5 Hz), 6.57 (d, 1H, J = 1.8 Hz), 6.20 (d, 1H, J = 1.8 Hz), 5.04 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.18(t, 2H, J = 8.4 Hz),2.87 (s, 3H),2.78 (t, 2H, J = 8.4);

¹³C-NMR (75MHz, CDCl₃, δppm): 164.4, 161.2, 157.8, 154.4, 153.7, 152.2, 150.7, 148.9, 139.0, 138.9, 132.4, 130.1, 130.0, 124.9, 128.6, 128.5, 124.9, 122.7, 122.4, 122.3, 115.3, 115.1, 114.8, 114.5, 113.9, 113.6, 109.7, 107.1, 70.1, 47.4, 45.2, 42.2, 40.0;

HR-MS (m/z): 계산치: C₂₉H₂₇ClFN₅O₄S [M+H]⁺ 596.1529, 측정치: 596.1533.

실시예 5: N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-(2,2,2- 트라이플루오로에틸설포닐 ) 에틸아미노 ) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민(화합물 5)의 합성:

a. 2,2,2- 트라이플루오로에틸 -(4- 메틸페닐 ) 설포네이트의 합성:

2.1 ㎖의 2,2,2-트라이플루오로에탄올 및 4.4 ㎖의 트라이에틸아민을 100 ㎖의 다이클로로메탄, 및 5.0 g의 p-톨루엔설포닐 클로라이드에 빙-욕 조건 하에서 배치로 가하였다. 상기 첨가의 끝에서, 상기 혼합물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 물로 세척하고 이어서 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 증류시켜 용매를 제거하여 5.9 g의 밝은 황색 유질 액체, 수율 98.7%를 획득하였다.

b. 3급-부틸 2- 머캅토에틸아미노포메이트의 합성:

3.5 g의 다이3급부틸 다이카보네이트 및 2.0 g의 2-머캅토에틸아민 하이드로클로라이드를 200 ㎖의 다이클로로메탄에 가하고, I의 트라이에틸아민을 빙-욕 조건 하에서 적가하였다. 상기 혼합물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 0.5M 염산 수용액으로 세척하고 이어서 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 증류시켜 용매를 제거하여 2.7 g의 유질 액체, 수율 87.1%를 획득하였다.

c. 3급-부틸 2-(2,2,2- 트라이플루오로에틸티오 ) 에틸아미노포메이트의 합성:

1.7 g의 수소화 나트륨을 30 ㎖의 무수 다이메틸폼아미드, 및 이어서 7.5 g의 3급-부틸 2-머캅토에틸아미노포메이트에 가하였다. 상기 첨가의 끝에서, 상기 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 2,2,2-트라이플루오로에틸 (4-메틸페닐)설포네이트를 서서히 가하였다. 상기 첨가의 끝에서, 상기 혼합물을 실온으로 가온하고, 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 물에 붓고, 다이에틸 에테르로 추출하고, 0.5M 수산화 나트륨 수용액으로 세척하고 이어서 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 용매를 제거하고, 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 5.4 g의 밝은 황색 유질 액체, 수율 53.8%를 획득하였다.

d. 3급-부틸 2-(2,2,2- 트라이플루오로에틸설포닐 ) 에틸아미노포메이트의 합성:

3.9 g의 3급-부틸 2-(2,2,2-트라이플루오로에틸티오)에틸아미노포메이트를 50 ㎖의 다이클로로메탄에 용해시키고, 12.2 g의 m-클로로퍼옥시벤조산을 빙-욕 조건 하에서 배치로 가하였다. 상기 반응물을 실온으로 가온하고, 5 시간 동안 교반하였다. 상기 반응물에 포화된 나트륨 바이설파이트 수용액을 가하여 상기 반응물을 급냉시키고, 다이클로로메탄으로 추출하였다. 유기층들을 합하고, 포화된 탄산 나트륨 수용액 및 이어서 포화된 염화 나트륨 수용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 증류시켜 용매를 제거하여 3.9 g의 백색 고체, 수율 89.4%를 획득하였다.

e. 2-(2,2,2- 트라이플루오로에틸설포닐 ) 에틸암모늄 클로라이드의 합성

3.9 g의 3급-부틸 2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설포닐)에틸아미노포메이트를 무수 다이에틸 에테르 60 ㎖에 가하였다. 상기 혼합물을 염화 수소 기체 하에 실온에서 밤새 교반하고, 흡입 여과를 수행하고, 다이에틸 에테르로 세척하여 2.7 g의 백색 고체, 수율 87.7%를 획득하였다.

f. N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-(2,2,2- 트라이플루오 로에틸설포닐) 에틸아미노 ) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민의 합성:

실온에서, 다이클로로메탄/메탄올(3:1)의 혼합물 중의 10.0 g의 화합물 5-(4-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로아닐리노)-6-퀴나졸리닐)퓨란-2-폼알데하이드p-토실레이트, 7.1 g의 화합물 2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설포닐)에틸아민 하이드로클로라이드, 11 ㎖의 트라이에틸아민 및 20 g의 무수 황산 나트륨을 밤새 교반하고, 이어서 빙-욕으로 0 ℃까지 냉각시켰다. 상기 혼합물에 1.8 g의 붕수소화 나트륨을 상기 온도에서 가하고, 자연적으로 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 상기 혼합물에 포화된 중탄산 나트륨을 가하여 상기 반응물을 급냉시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 상을 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 5.4 g의 목적하는 생성물, 수율 53.5%를 획득하였다.

¹H-NMR (400MHz, acetone-d₆, δppm): 9.33 (s, 1H), 8.77-8.75 (m, 2H), 8.30-8.28 (m, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.97 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.61 (q, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53-7.35 (m, 3H), 7.24 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.28-7.24 (m,1H), 7.08 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 4.73 (q, J = 10 Hz, 2H). 3.60 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H);

¹³C-NMR (100MHz, acetone-d₆, δppm): 171.0, 165.3, 162.9, 158.9, 155.9, 155.5, 153.4, 151.6, 150.7, 141.2, 141.2, 134.7, 131.6, 131.5, 130.1, 129.7, 126.4, 125.0, 124.9, 123.3, 122.2, 116.9, 115.8, 115.0, 110.7, 108.6, 71.0, 57.5, 57.2, 56.9, 56.6, 46.6, 43.5, 33.8;

HR-MS (m/z): 계산치: C₃₀H₂₅ClF₄N₄O₄S [M+H]⁺ 649.1294, 측정치: 649.1288.

실시예 6: N-(4-(3- 플루오로벤질옥시 )-3- 클로로페닐 )-6-(5-((2-( 트라이플루 오로메틸설포닐) 에틸아미노 ) 메틸 )-2- 퓨릴 )- 퀴나졸린 -4- 아민(화합물 6)의 합성:

실온에서, 240 ㎎의 화합물 5-(4-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로아닐리노)-6-퀴나졸리닐)퓨란-2-폼알데하이드, 120 ㎎의 화합물 2-트라이플루오로메틸설포닐에틸아민 하이드로클로라이드, 0.2 ㎖의 트라이에틸아민을 10 ㎖의 다이클로로메탄 중에서 혼합하고, 0.2 ㎖의 빙초산을 가하였다. 상기 혼합물을 4 시간 동안 교반하고, 빙-욕으로 0 ℃로 냉각시키고, 상기 온도에서 500 ㎎의 나트륨 트라이아세틸옥시보로하이드라이드를 가하고, 이어서 실온으로 가온하고, 12 시간 동안 추가로 교반하고, 포화된 중탄산 나트륨을 가하여 상기 반응물을 급냉시키고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 상기 유기상을 포화된 염화 나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 35.7 ㎎의 황색 고체, 수율 11.1%를 획득하였다.

¹H-NMR(400MHz, CDCl₃, δppm): 8.70 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.98-7.96 (m, 1H), 7.90-7.88 (m, 2H0, 7.84 (d, J=1.2Hz, 1H), 7.54 (dd, J=2.4Hz, J=8.8Hz, 1H), 7.39-7.34 (m, 1H), 7.24-7.22 (m, 1H), 7.04-6.97 (m, 2H), 6.76 (d, J=1.2Hz, 1H), 6.45 (d, J=1.6Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 3.92 (s, 2H), 3.55-3.49 (m, 2H), 3.37-3.34 (m, 2H);

¹³C-NMR (100MHz, CDCl₃, δppm): 164.20, 161.75, 157.80, 154.97, 153.55, 151.06, 149.77, 49.57, 139.14, 139.07, 132.14, 130.17, 130.09, 129.25, 128.80, 128.18, 125.18, 124.06, 23.40, 123.34, 122.45, 122.43, 122.29, 120.81, 117.56, 115.34, 115.01, 114.95, 114.74, 114.18, 114.08, 113.86, 112.46, 07.11, 70.37, 47.87, 46.12, 45.74;

HR-MS (m/z): 계산치: C₂₉H₂₃ClF₄N₄O₄S [M+H]⁺ 635.1137, 측정치: 635.1142.

N-(4-(3-플루오로벤질옥시)3-클로로페닐)-6-(5-((2-(메틸설포닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민(화합물 61)을, 2-트라이플루오로메틸설포닐에틸아민 하이드로클로라이드를 2-메틸설포닐에틸아민 하이드로클로라이드로 대체함을 제외하고, 화합물 6의 제조 방법에 대한 과정과 유사한 과정을 사용하여 쉽게 수득할 수 있다.

실시예 7: 다른 화합물들의 제조

하기 표에서 화합물 7 내지 14로서 나타낸 바와 같은 화학식 I의 화합물들을 상기 나타낸 바와 같은 상응하는 실시예의 과정과 유사한 과정에 의해 수득할 수 있다:

화학식 I

생물학적 시험

하기의 시험들을 사용하여 EGFR 타이로신 키나제에 대한 본 발명 화합물의 억제 활성 및 시험관 내 NCI-N87 세포 및 BT474 세포 억제제로서 본 발명 화합물의 효과를 측정할 수 있다.

A) 단백질 타이로신 키나제의 인산화의 측정

셀 시그날링 테크놀로지 캄파니(Cell Signaling Technology Company)로부터 HTScan EGF 수용체 키나제 분석 키트(#7909) 및 HTScan HER2/ErbB2 키나제 분석 키트(#7058)를 사용하여 시험관 내 키나제 분석을 수행하였다. 실행 단계들은 상기 사용된 키트의 명세서를 참조하며, 상기 방법을 사용하여 EGFR 또는 Her2 수용체 타이로신 키나제의 기질 펩타이드 인산화에 대한 상기 시험하고자 하는 화합물의 억제 효과를 측정하였다. 실온에서, ATP 및 기질 펩타이드 뿐만 아니라 시험 화합물을 키나제 반응 완충제에서 배양하고, 배양기간 후에, 정지 완충제를 가하여 상기 반응을 종료시키고 상기 샘플을 스트렙트아비딘-코팅된 96-웰 플레이트로 옮기고, 상기 플레이트를 세척하고 기질 펩타이드의 인산화 수준을 기질 인산화에 대한 HRP-표시된 항체를 사용하여 검출하고, TMB로 착색하고, 2M 황산을 사용하여 상기 반응을 종료시켰다. 450 ㎚ 파장에서의 흡광도를 검출하고, IC₅₀ 값(μM)을 계산하였다. 결과를 표 1에 제공한다.

B) 세포 증식의 억제

상기 시험을 문헌[Rusnak et al., Cell Prolif, 2007, 40, 580-594]에 개시된 바와 같은 방법을 참조로 수행하였다. 상기 세포 증식 억제 시험은 인간 유방암 세포 BT474 및 인간 위암 세포 주 NCI-N87, Her2 수용체를 과발현하는 BT474, EGFR 및 Her2 수용체를 과발현하는 N87을 사용하였다.

10% 소 태아 혈청, 2 mM 글루타민 및 불-필수 아미노산을 포함하는 둘베코 변형 이글 배지(DMEM)에서, 세포를 5% CO₂ 세포 배양기 중에서 37 ℃에서 배양하고, 트립신/에틸렌다이아민 테트라아세트산(EDTA)을 사용하여 세포 배양 병 중에 세포를 수확하였다. 상기 세포를 상기 96-웰 세포 배양 플레이트, 4000/웰(0.1 ㎖ 배지)에 가하여, 밤새 벽에 부착시키고, 0.1 ㎖의 상기 시험 화합물의 희석된 용액을 가하였으며, DMSO의 최종 농도는 0.25%이고, 상기 세포 배양 플레이트를 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 72 시간 동안 배양하였다. 세포의 형태 변화를 현미경 하에서 관찰하고, 이어서 웰 당 50 ㎕의 50%(질량/부피) 트라이클로로아세트산(TCA)을 가하여 세포를 고정시켰다. 상기 TCA의 최종 농도는 10%이었으며, 5 분간 정치시키고 4 ℃ 냉장고에 1 시간 동안 두고, 상기 배양 플레이트의 웰을 탈이온수로 5 회 세척하여 TCA를 제거하고, 배수하고, 습윤 잔량이 관찰되지 않을 때까지 공기 중에서 건조시켰다. 100 ㎕의 0.4%(질량/부피) SRB를 각 웰에 가하고, 실온에서 10 분간 정치시키고, 각 웰 중의 액체를 버리고, 이어서 상기 웰들을 1% 아세트산으로 5 회 세척하고, 공기 중에서 건조시키고, 150 ㎕의 10 mM 트리스 염기(트라이하이드록시메틸아미노메탄, pH 10.5)로 추출하고, 540 ㎚ 파장에서 흡광도를 검출하였다. IC₅₀ 값(μM)의 결과를 표 1에 제공한다.

EGFR 및 Her2에 대한 본 발명 화합물의 억제 활성 분석
	시험관 내 키나제의 분석 IC₅₀ (μM)		세포 증식 억제의 시험 IC₅₀ (μM)
시험된 물질	EGFR	Her2	N87	BT474
화합물 1	0.00271	0.00155	0.00728	0.01330
화합물 2	0.05267	0.02250	0.01266	0.01828
화합물 3	0.05624	0.03455	0.02494	0.02337
화합물 4	0.01554	0.00706	0.01783	0.01672
화합물 5	0.01461	0.00808	0.03367	0.01885
화합물 6	0.03240	0.02560	0.05455	0.04974

화합물의 생물 활성을 평가하기 위한 한 가지 중요한 시험으로서 "세포 증식 억제의 시험"에서, 본 발명의 화합물은 보다 양호한 생물 활성을 가짐을 알 수 있다.

또한, 동일한 시험에서, 화합물 61은 화합물 6의 결과에 가까운 생물 활성 결과를 가지며; 화합물 7 내지 14는 또한 화합물 2 또는 3에 가까운 생물 활성 결과를 갖는다. 상기 결과는 본 발명의 화학식 I의 화합물이 유효한 타이로신 키나제에 대한 억제제임을 보인다.

C) 생체 내 생물 활성의 평가

4 내지 6 주된, 체중 22±2g의 암컷 BALB/cA-누드 마우스를 SPF 등급 환경에서 키운, 상하이 SLAC 레보라토리 애니멀 캄파니 리미티드(Shanghai SLAC Laboratory Animal Co. Ltd)로부터 구입하였다.

1) 누드 마우스에서 인간 위암 NCI-N87 이식된 종양에 대한 단일 용량의 본 발명 화합물의 치료 효과:

시험관 내 배양된 NCI-N87 세포를 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이에 피하 접종하였으며, 각각 약 5 x 10⁶ 세포를 접종하고, 종양 형성 후 생체 내에서 2 회 계대배양하였다. 멸균 조건 하에서, 발육양호 종양 조직을 약 1.5 ㎣의 종양 조각으로 절단하고, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이에 접종하였다. 종양 직경을 버니어 캘리퍼스로 측정하였으며, 상기 동물들을 종양이 100 내지 200 ㎣로 자란 후 랜덤하게 분류하였다(d₀). 화합물 2, 3 및 5 및 양성 대조군(화합물 61)(200 ㎎/㎏ 투여량)을 하루에 한 번 연속해서 28일 동안 위 내 투여하였으며, 대조군에게는 동등한 양의 용매를 제공하였다. 투여 기간 동안, 마우스의 체중 및 종양의 직경을 주당 3 회 측정하였다. 종양 부피 및 상대 종양 부피를 상기 측정된 데이터에 따라 계산하였으며, 종양 부피(TV)의 계산식은 TV = 1/2 x a x b²이고, 여기에서 a, b는 종양의 큰 직경 및 작은 직경을 나타내며; 상대 종양 부피(RTV)의 계산식은 RTV = V_t/V₀이고, 여기에서 V₀는 그룹들을 투여에 대해 분류 시(즉 d₀) 측정된 종양 부피이고, V_t는 매번 측정된 종양 부피이다. 종양 억제 활성에 대한 평가 지수는 상대 종양 성장률 T/C(%)이고, 그의 계산식은 T/C(%) = (T_RTV/C_RTV) x 100%이며, 여기에서 T_RTV는 치료그룹의 RTV이고, C_RTV는 음성 대조군의 RTV이다. 상대 종양 억제율의 계산식은 1-T/C(%)이다. 상기 상대 종양 억제율은 ≥60%이고, 통계 처리는 P≤0.05를 나타낸다, 즉 상기 약물은 유효하다. 상기 시험의 결과를 하기 표에 나타낸다:

누드 마우스에서 인간 위암 NCI-N87 이식된 종양에 대한 단일 용량의 본 발명 화합물의 종양 억제에 대한 실험 결과
그룹	d₀		d₂₈				종양 억제율 d₂₁ (%)	P	각 그룹의 동물 수
그룹	V_ave	SD	V_ave	SD	RTV	SD	종양 억제율 d₂₁ (%)	P	전체	편 회귀
대조용	152.72	+88.84	786.92	+752.93	4.838	+1.612	0	-	10	0
화합물 2	165.77	+81.20	49.42	+61.40	0.251	+0.245	94.8	0.001	6	6
화합물 3	164.69	+70.99	143.01	+150.40	0.743	+0.607	84.6	0.001	6	4
화합물 5	169.55	+115.00	414.78	+270.89	2.574	+1.436	46.8	0.013	6	1
화합물 61	160.30	+71.16	106.20	+180.54	0.495	+0.625	89.8	0.001	6	5

생체 내 활성 선별 시험의 결과는 인간 위암 NCI-N87 누드 마우스 이식된 종양 모델의 경우, 화합물 2의 종양 억제율(94.8%)이 화합물 61의 경우(89.8%)보다 현저하게 더 높고, 두 번째는 화합물 3으로, 화합물 61의 경우보다 낮은 활성(종양 억제율: 84.6%)을 갖는다. 화합물 2 그룹의 6 마리 동물은 모두 종양 회귀를 나타내었으며 양성 대조군(화합물 61)의 5 마리 마우스가 종양 회귀를 나타내었고, 화합물 3 그룹의 4 마리 동물이 종양 회귀를 나타내었다.

2) 누드 마우스에서 인간 난소암 SK-OV-3 이식된 종양에 대한 단일 투여량의 본 발명 화합물의 치료 효과:

누드 마우스에게 인간 난소암 SK-OV-3 세포를 피하 접종하였으며, 종양이 60 내지 150 ㎣으로 자란 후에, 상기 동물들을 랜덤하게 그룹들로 분류하였다(d₀). 화합물 2, 3, 5 및 양성 대조군(화합물 61)에 대한 그룹들에게 하루에 1 회 21일 연속해서 200 ㎎/㎏의 용량을 위 내 투여하고, 대조군에게는 동등한 양의 용매를 제공하였다. 상기 투여 기간 동안 마우스의 체중 및 종양의 직경을 주당 3 회 측정하였다. 상기 종양 부피, 상대 종양 억제율 등을 상기 언급한 방법에 따라 계산하였다. 시험 결과를 표 3에 나타낸다:

누드 마우스 모델에서 인간 난소암 SK-OV-3 이식된 종양에 대한 단일 용량의 본 발명 화합물의 종양 억제에 대한 실험 결과
그룹	d₀		d₂₁				종양 억제율 d₂₁ (%)	P	각 그룹의 동물수
그룹	V_ave (mm³)	SD	V_ave (mm³)	SD	RTV	SD	종양 억제율 d₂₁ (%)	P	전체	편 회귀
대조용	124.4	+20.5	1298.6	+616.1	10.5	+4.8	0	-	10	0
화합물 2	120.0	+22.5	173.0	+106.9	1.5	+0.9	86	0.001	6	2
화합물 3	126.2	+21.6	334.8	+113.8	2.7	+0.8	75	0.002	6	0
화합물 5	134.1	+14.9	770.9	+118.5	5.8	+0.7	45	0.033	6	0
화합물 61	134.8	+18.9	291.0	+109.4	2.2	+0.9	79	0.001	6	1

인간 난소암 SK-OV-3 누드 마우스 이식된 종양 모델에 대한 종양 억제 활성 시험 결과는 화합물 2의 종양 억제율이 화합물 61의 경우보다 현저하게 더 높으며(86% 대 79%), 두 번째는 화합물 3으로, 이는 화합물 61의 경우보다 약간 더 낮은 활성(종양 억제율 75%)을 가짐을 보인다. 화합물 2 그룹의 2 마리 마우스가 종양 회귀를 보인 반면, 대조군(화합물 61)의 한 마리 동물이 종양 회귀를 보인다.

3) 누드 마우스에서 인간 난소암 SK-OV-3 이식된 종양에 대한 상이한 투여량의 본 발명 화합물의 치료 효과

누드 마우스에게 인간 난소암 SK-OV-3 세포를 피하 접종하였으며, 종양이 60 내지 150 ㎣으로 자란 후에, 상기 동물들을 랜덤하게 그룹들로 분류하였다(d₀). 3 개의 그룹을 화합물 50 ㎎, 100 ㎎ 및 200 ㎎ 투여량에 대해 지정하고, 음성 대조군에게 200 ㎎/㎏의 용매를 제공하고, 양성 대조군(화합물 61)에게 200 ㎎/㎏의 용량을 제공하였으며, 하루에 한 번 21일 연속해서 위 내 투여하였다. 종양 부피, 및 마우스의 체중을 주당 3 회 측정하고, 모든 데이터를 기록하였다. 상기 종양 부피, 상대 종양 억제율 등을 상기 언급한 방법에 따라 계산하였다. 시험 결과를 하기 표에 나타낸다:

누드 마우스 모델에서 인간 난소암 SK-OV-3 이식된 종양에 대한 상이한 투여량의 본 발명 화합물의 종양 억제에 대한 실험 결과
그룹	d₀		d₂₁				종양 억제율 d₂₁ (%)	P	각 그룹의 동물 수
그룹	V_ave (mm³)	SD	V_ave (mm³)	SD	RTV	SD	종양 억제율 d₂₁ (%)		전체	편 회귀
대조용	123.2	+23.1	1254.0	+558.4	10.1	+3.7	0	-	10	0
화합물 2(50mg/kg)	129.4	+17.3	793.0	+411.7	6.0	+2.8	40	0.037	6	0
화합물 2(100mg/kg)	123.3	+15.5	438.4	+146.4	3.7	+1.6	64	0.001	6	0
화합물 2(200mg/kg)	129.5	+14.0	215.8	+95.0	1.6	+0.7	84	0.000	6	1
화합물 3(50mg/kg)	130.6	+44.2	830.7	+127.1	6.9	+2.3	32	0.077	6	0
화합물 3(100mg/kg)	120.2	+19.3	778.6	+173.5	6.5	+1.2	36	0.039	6	0
화합물 3(200mg/kg)	138.4	+10.7	612.6	+166.9	4.4	+1.1	56	0.002	6	0
화합물 61(200mg/kg)	138.5	+16.8	350.1	+114.5	2.5	+0.6	75	0.000	6	0

인간 난소암 SK-OV-3 누드 마우스 이식된 종양에 대한 상이한 투여량의 화합물의 종양 억제 시험 결과는 화합물 2 및 화합물 3이 모두 상이한 정도로 인간 난소암 SK-OV-3 누드 마우스-이식된 종양의 성장을 억제하며, 상기 억제 효과는 용량 의존성을 보임을 나타낸다. 화합물 2가 최상의 활성을 제공하며, 동등한 투여량의 양성 대조용 약물(화합물 61)의 경우보다 현저하게 더 높은 종양 억제율을 나타내고, 100 ㎎/㎏의 투여량으로 종양에 대해 유효한 억제를 성취할 수 있었다(종양 억제율: 64%).

상기 결과는 본 발명의 화합물이 타이로신 키나제에 의해 구동된 종양에 대한 양호한 종양 억제 효과를 가짐을 보인다.

D) 화합물 2의 약동학의 평가:

체중 200 내지 220 g의 8 마리의 건강한 수컷 SD 래트를 랜덤하게 2 개의 그룹(각 그룹당 4 마리)으로 분류하고, 단일 용량의 화합물 2 및 화합물 61을 각각 위 내 투여하였으며(이들 모두 투여량 100 ㎎/㎏), 약물 투여 부피는 10 ㎖/㎏이었고, 모든 약물을 90% 탈이온수와 함께 10% 트윈-80으로 제형화하였다. 상기 동물들을 시험 전 12 시간 동안 금식시키고, 물은 자유롭게 마시게 하였다. 투여 2 시간 후에 먹이를 주었다. 투여 후 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 5.0, 7.0, 9.0, 12 및 24 시간째에, 0.3 ㎖의 혈액 샘플을 래트의 안구 뒤 정맥총으로부터 헤파린 처리된 시험관으로 채혈하였으며, 이어서 11000 rpm에서 5 분간 원심분리하고, 혈장을 분리하고 20 ℃에서 보존하였다. 원래 형태의 약물 및 혈장 중 그의 대사 산물의 농도를 액체 크로마토그래피-질량 분광측정에 의해 측정하였다. 결과를 표 5에 나타낸다:

양성 대조군 및 원형의 약동학적 매개변수
	화합물
시험된 물질	화합물 61 ^*1	화합물 2
T_max + SD(h)	2.5+0.6	3.5+1.0
C_max + SD(ng/ml)	3902+1208	8881+2061
AUC₀ _-t + SD(ng·h/ml)	26908+9085	50299+12863
AUC₀ _-8 + SD(ng·h/ml)	26921+9092	53236+12248
MRT + SD(h)	5.52+0.90	5.38+0.59
T₁ _/2 + SD(h)	1.91+0.45	2.32+0.5
^*1. 혈장에서 검출된 양성 대조용 화합물 61

화합물 2는 명백하게 보다 양호한 흡수 및 생물학적 이용효능을 가지며, 동일한 투여량 수준에서, 농도-시간 곡선 아래 면적 또는 최대 혈장 농도를 양성 대조군의 2배까지 제공한다. 원형의 AUC₀ _-t로 나타낸 바와 같이, 화합물 2는 화합물 61 대조군에 비해 187%의 상대적인 생물학적 이용효능을 갖는다.

E) hERG 칼륨 전류에 대한 화합물 2의 효과:

HEK293 세포를 리포솜 형질감염 방법에 의해 hERG cDNA를 함유하는 플라스미드로 형질감염시키고, 시험관 내에서 발현된 hERG 칼륨 전류(IKr)에 대한 상이한 농도의 화합물 2의 억제 효과를 완전 세포 패치 클램프 기록 방식을 사용하여 관찰하고, IKr 효과에 대한 상기 약물의 차이의 비교 분석을 양성 대조군으로서 화합물 61을 사용하여 수행하였다.

화합물 2에 관하여, IKr 펄스 전류에 대한 그의 반-유효 억제 용량 IC50은 10.06±0.96 μM이었으며, 꼬리 전류에 대한 그의 반-유효 억제 용량 IC50은 약 9.24±0.33 μM이었다. 화합물 61에 관하여, IKr 펄스 전류에 대한 그의 반-유효 억제 투여량 수준 IC50은 1.09±0.045 μM이었으며, 꼬리 전류에 대한 그의 반-유효 억제 투여량 수준 IC50은 약 0.98±0.40 μM이었다.

상기 발현된 시험관 내 hERG 칼륨 이온 채널에 관하여, 상기에 대한 화합물 2의 억제 강도는 화합물 61의 경우보다 낮았다. 상기 결과는 화합물 2가 보다 양호한 안전성을 가짐을 나타낸다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
[화학식 I]

상기 식에서,
R은 C_1-6-알킬설피닐, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C_1-6-알킬설피닐, C_1-6-알킬티오, 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C_1-6-알킬티오, 또는 C_1-6-알킬아미도 중에서 선택된다.
제 1 항에 있어서,
R이 C_1-6-알킬설피닐, 또는 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C_1-6-알킬설피닐 중에서 선택되는 화합물.
제 1 항에 있어서,
R이 C_1-6-알킬티오, 또는 하나 이상의 할로겐으로 치환된 C_1-6-알킬티오 중에서 선택되는 화합물.
제 1 항에 있어서,
R이 C_1-6-알킬아미도 중에서 선택되는 화합물.
제 1 항에 있어서,
R이 C_1-4-알킬설피닐, 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C_1-4-알킬설피닐, C_1-4-알킬티오, 1 내지 3 개의 할로겐으로 치환된 C_1-6-알킬티오, 또는 C_1-4-알킬아미도 중에서 선택되는 화합물.
제 1 항에 있어서,
하기로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물:
N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(메틸설피닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;
N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(메틸티오)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;
N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(트라이플루오로메틸티오)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;
N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(트라이플루오로메틸설피닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;
N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸티오)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민;
N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(2,2,2-트라이플루오로에틸설피닐)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민; 또는
N-(4-(3-플루오로벤질옥시)-3-클로로페닐)-6-(5-((2-(아세트아미도)에틸아미노)메틸)-2-퓨릴)-퀴나졸린-4-아민.
a) 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 염과 하기 화학식 III의 화합물 또는 그의 염을, 염기의 존재 하에 유기 용매 중에서 반응시키는 단계: 및
[화학식 II]

[화학식 III]
NH₂CH₂CH₂R
(상기 식에서, R은 제 1 항에서 정의한 바와 같은 의미를 갖는다)
b) 상기 반응 혼합물을 환원제로 처리하여 화학식 I의 화합물을 제공하는 단계;
를 포함하는, 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I 화합물의 제조 방법.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 위암 또는 난소암 치료용 약학 조성물.
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