KR101809266B1

KR101809266B1 - 프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101809266B1
Application number: KR1020150084807A
Authority: KR
Inventors: 이경록; 최정원; 김수영
Original assignee: 주식회사 아미코스메틱
Priority date: 2015-06-16
Filing date: 2015-06-16
Publication date: 2017-12-14
Anticipated expiration: 2035-06-16
Also published as: KR20160148174A

Abstract

본 발명은 프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 프로폴리스 추출물, 꿀 추출물, 로얄젤리 추출물, 황금 추출물, 및 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

Description

프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION CONTAINING PROPOLIS COMPLEX EXTRACTS}

본 발명은 프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 프로폴리스 추출물, 꿀 추출물, 로얄젤리 추출물, 황금 추출물, 및 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하여 피부 보습 효과 및 항노화 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(phtoaging) 두 가지로 구분할 수 있다[Gilchrest BA:　J.　Am.　Acad.　Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상을 의미하며, 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다.

피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 활성산소종이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이는 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진시킬 수 있다.

피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등은 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴될 수 있으며, 결국 피부가 노화될 수 있다. 특히 단백질의 산화에 의해 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되고 과다 염증반응이 나타날 수 있으며, 더욱 심화되는 경우 DNA 변이에 의한 돌연변이, 면역기능의 저하, 암의 유발이 촉진될 수 있다.

따라서, 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개 되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 활발한 신진대사를 통해 손상 받은 세포를 재생시켜 피부 건강을 회복시키는 것이 바람직하다.

피부노화에는 상기 활성산소 종뿐만 아니라 MMP(Matrix metalloproteinase)라는 효소가 관여한다. 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포 외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되지만, 노화 현상이 점차 진행됨에 따라 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 이와 같은 분해 효소는 자외선에 의해 더욱 활성화될 수 있으며, 자외선에 의해 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 필요하다. 그러나, 종래에 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 대부분 분해효소(MMP)의 활성을 단순히 억제하는데 그쳤다.

한편, 멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 타이로시네이즈의 작용에 의해 타이로신으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거쳐 생성된다. 멜라닌은 자외선 등 피부 유해 요소로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비를 조절하는 역할을 한다.

그러나, 멜라닌은 과잉 생산되어 기미, 주근깨의 형성 및 피부노화를 촉진시킬 수 있으며, 피부암의 유발에 관여할 수 있으므로, 멜라닌의 과잉생산을 억제하기 위한 연구개발이 활발하게 이루어지고 있다.

종래에 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 타이로시네이즈 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되었다. 하지만, 상기 성분들은 화장품 제형 중에서 안정성이 미흡하여, 분해되어 착색되거나, 이취를 유발할 수 있으며, 생체 내에서 안전성 또는 효능이 불명확하여 그 사용이 제한되고 있다.

또한, 피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 하는 기관으로서 인체 내의 물이나 전해질 등 생체성분의 손실을 방지하는 동시에 외부로부터 유해물질이 인체 내로 침입하지 못하도록 한다. 상기 피부는 크게 표피층, 진피층 및 피하지방층으로 구분된다. 상기 표피층은 각질세포와 멜라닌 세포로 구성되는데, 피부 최외곽의 각질세포층은 외부환경과 직접 접촉하기 때문에 물리적, 화학적 혹은 물질의 투과에 대한 강한 저항성이 요구되며, 인체의 수분이 손실되는 것을 막아줌과 동시에 자체로도 적당한 수분을 보유하여 유연성을 유지할 필요가 있다.

일반적으로 피부 진피층의 수분량은 70% 정도이지만 표피층으로 갈수록 수분량이 감소하며, 각질세포층의 수분량은 약 10 내지 30%에 불과하다. 상기 진피층의 수분은 주로 수동적 확산에 의해 각질층 상부로 이동하며 최종적으로는 외부로 배출된다. 이를 경피수분 손실(Trans Epidermal Water Loss: TEWL)이라 하며, 이러한 경피 수분 손실을 적절한 수준으로 유지시켜주는 것이 각질세포층의 지질막 성분인 피지성분과 표피지질이라고 알려져 있다.

한편, 각질세포층에 존재하는 천연보습 인자(Natural Moisturizing Factor: NMF)는 친수성의 수분 보유능을 가지며, 피부의 보습에 중요한 역할을 담당한다.

정상적인 각질세포층은 수분량이 약 10 내지 30% 정도 유지될 때 피부가 매끄럽고 부드러우며, 신체 보호기능을 정상적으로 발휘한다. 하지만, 각질세포층의 수분량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 상실하여 피부 노화현상이 일어난다.

예를 들어, 건성 피부의 경우 각질세포의 결집력이 약화되어 피부표면으로부터 비늘조각과 같이 벗겨져 나오는 스케일링현상이 나타나며, 이와 같은 피부의 건성화 현상은 각질세포충의 수분함량이 정상 피부 대비 감소할 때 발생한다. 또한, 건강한 피부라 할지라도 혹독한 외부요인 즉, 바람, 추운 날씨, 햇빛, 세안, 면도 등에 의해 수분 부족현상이 유발될 수 있으므로, 피부 각질세포층의 수분함량은 적절하게 유지되는 것이 바람직하다.

이런 이유로 피지 유사 성분이나 NMF 성분 또는 폴리올과 같은 보습제 등이 화장품에 첨가된다.

예를 들어, 수용성 폴리올로서 수산기(OH 기)가 3개 이상인 글리세린, 솔리톨 등은 뛰어난 보습력을 가지나 끈적임으로 인하여 사용성이 미흡하며, 수산기(OH 기)가 2개인 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등은 피부에 대한 부작용을 유발할 수 있다. 또한, 다른 천연보습인자인 피롤리돈 카르복실산 나트륨(PCA-Na), 젖산나트륨(Sodium lactate), 요소 등은 전해성이 강해 화장료의 유화안정성을 저하시킬 수 있다. 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등도 보습능력이 있으나 보습능력에 한계가 있다.

각질층의 수분을 보유할 수 있는 능력은 피지 성분과 아미노산, 젖산, 요소 및 무기염 등으로 이루어진 천연보습인자(NMF)에 의해 조절될 수 있으며, 화장품의 개발에 있어서 천연보습인자와 같이 안전성 및 사용성이 우수하고, 보습효과가 높은 물질의 발굴이 요구된다.

화장품 업계는 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 제품을 활발히 개발하고 있다. 특히, 최근 화장품 업계는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 소비자의 호응도가 높은 천연 재료를 이용한 화장품의 개발에 많은 노력을 기울이고 있다.

한편, 프로폴리스는 꿀벌이 자신의 생존과 번식을 위해 여러 식물에서 뽑아낸 수지와 같은 물질에 자신의 침과 효소 등을 섞어서 만든 물질로서, 황산화 작용, 항균 작용을 나타내는 유익한 성분을 다량 함유하고 있으며, 이를 화장품 개발에 적용하기 위한 다양한 시도가 이루어지고 있다.

그러나, 상기 프로폴리스는 피부에 대한 유익한 효과를 가지고 있음에도 난용 특성으로 인해, 화장품의 제형을 불안정하게 하고 유효성분이 효과적으로 추출되지 않으므로 통상의 방법으로 추출하는 경우 기능성 및 생산성이 저하되고, 추출물의 활성을 지속적으로 유지, 제어되기 어려워 실용성이 높지 않았다.

또한, 단일의 천연 원료를 사용하는 경우 피부 개선 효과를 구현하기 위한 다양한 종류의 유효성분이 포함되지 않을 수 있어, 최근 화장품 업계에서 점차 트렌드로 자리잡고 있는 다기능성(multi-functional) 화장품 개발에 적합하지 않으므로, 이를 개선하기 위한 다양한 연구가 이루어지고 있다.

본 발명은 전술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 프로폴리스 추출물에 함유된 유효 성분 함량을 증가시켜 피부 개선 효과가 향상된 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 프로폴리스 추출물과 함께 투입된 천연 혼합 추출물에 의해 피부 개선 효과가 극대화된 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 프로폴리스 추출물, 꿀 추출물, 로얄젤리 추출물, 황금 추출물, 및 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 상기 프로폴리스 추출물 20 내지 50 중량부, 상기 꿀 추출물 15 내지 30 중량부, 상기 로얄젤리 추출물 10 내지 25 중량부, 상기 황금 추출물 10 내지 20 중량부, 및 상기 홍삼 추출물 10 내지 20 중량부를 유효성분으로 포함할 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 프로폴리스 추출물, 상기 꿀 추출물, 상기 로얄젤리 추출물, 상기 황금 추출물, 및 상기 홍삼 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 1.0 내지 50.0 중량% 함유될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 프로폴리스 추출물은 초음파 추출 방식으로 추출될 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 초음파 추출은 pH 10 내지 12에서 1차 추출한 후, pH 5 내지 7에서 2차 추출할 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 알코올의 농도는 60 내지 90%일 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 피부 보습용 또는 항노화용일 수 있다.

일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 화장료 조성물은 프로폴리스에 함유된 다량의 유효 성분을 포함하므로 피부 개선 효과, 특히, 피부 보습 효과 및 항노화 효과가 우수하다.

또한, 상기 화장료 조성물은 복합 추출물에 함유된 유익한 성분의 상승작용으로 인하여 피부 개선효과가 극대화될 수 있다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 특허청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 세포 증식 효과를 평가한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 자유라디칼 소거 활성을 평가한 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 콜라겐 생성 촉진 효과를 평가한 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 주름 개선 효과를 평가한 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물의 피부 보습력 개선 효과를 평가한 결과이다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.

상기 화장료 조성물은 상기 복합 추출물을 유효성분으로 포함하므로, 피부 보습 효과 및 항노화 효과가 매우 뛰어나다. 특히, 상기 화장료 조성물은 상기 복합 추출물에 함유된 각 성분의 상승 효과로 인해 상기 단일 추출물을 개별적으로 함유하는 화장료 조성물과 비교하여 피부 개선 효과가 현저히 증대될 수 있다.

상기 “추출물”은 용매와 추출재료를 특정 조건하에서 접촉시킴으로써 추출재료에 함유된 유효성분이 전이된 용매를 지칭하는 것으로, 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 뽑아냄으로써 수득된 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다. 예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출해 낸 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다.

상기 “프로폴리스(propolis)”는 꿀벌이 자신의 생존과 번식을 위해 여러 식물에서 뽑아낸 수지와 같은 물질에 자신의 침과 효소 등을 섞어서 만든 물질로서, 유기물 및 미네랄을 다량 함유하며, 미네랄, 비타민, 아미노산, 지방, 유기산, 플라보노이드 등은 세포대사에 중요한 역할을 한다. 상기 프로폴리스는 항암성, 화상 치유능, 습진, 아토피성 피부염 및 무좀 등과 같은 진균류에 의한 피부병 치유 효과, 탈모 억제 효과, 미용 효과, 세균성 치과적 질환에 대한 치유 효과가 보고되었으며, 그 외에도, 호르몬 자극 활동, 비타민 p의 작용에 의한 괴혈병 치료, 고혈압 환자의 혈압강하작용, 생체 호르몬의 균형 유지 등 다양한 효과가 규명된 바 있다.

상기 “로얄젤리”는 꿀벌 유충의 영양 섭취에 사용되는 꿀벌의 분비물로, 젊은 일벌의 머리 부분에 있는 인두선(咽頭腺)에서 분비되며, 단백질, 당질이 주요 구성으로서, 비타민 A, B1, B2 가 풍부하고 수분, 지질, 당질, 회분, 효소, 호르몬, 스테로이드 등을 함유한다. 로얄젤리는 피부에 도포시 피부 표면의 수분을 적당하게 유지시키고, 피부의 대사를 증가시켜 탄력을 개선시키며, 항염증 작용을 통해 피부 트러블을 예방하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

상기 “황금(Scutellaria baicalensis)”은 꿀풀과에 속하는 여러해살이 초본식물인 황금(Scutellaria baicalensis GEORGE)의 뿌리로 만든 약재를 지칭한다. 상기 황금은 일반적으로 산지의 풀밭에서 자라고 여러 대가 나와 포기로 자라고 털이 있으며 가지가 갈라진다. 원뿌리는 원뿔형이고 살이 황색이다. 한방에서 뿌리는 해열, 이뇨, 지사, 이담 및 소염제로 사용된다. 한편, 상기 황금에 함유된 플라보노이드의 일종인 바이칼린은 항산화, 항암, 항염증의 효과를 가진다고 알려져 있다.

상기 “홍삼”은 오가피과 인삼속 인삼종에 속하는 다년생 식물인 수삼(Panax ginseng C)을 수증기 또는 기타 수단을 이용하여 증숙한 것을 지칭하는 것으로, 인삼의 원산지, 종류 및 형태 등은 제한되지 아니한다. 홍삼은 담황갈색 혹은 담적갈색을 나타내는 외관상 차이뿐만 아니라 건조 과정에서 수분이 증발되어 단위당 생리활성물질의 함량이 매우 높은 특징이 있으며, 항암성분(진세노사이드), 암세포 독소활성 억제성분(파낙시트리올), 혈소판 응집억제성분(말톨), 비만 억제성분, 노화 억제성분 및 중금속 해독성분 등을 함유하는 것으로 알려져 있다.

상기 “꿀”은 꿀벌이 여러 식물의 꽃으로부터 수집한 화밀과 화분을 그들의 식량으로 전환하여 저장한 것을 지칭하는 것으로, 글루코오스(glucose)와 프락토오스(fructose), 탄수화물, 무기질, 식물성 색소, 효소 및 화분 등을 함유하고 있다. 상기 꿀은 오랜 기간 자양 강장, 진정, 해독, 피로회복, 위장장애, 기침, 피부 건조, 습진, 변비, 신경쇠약, 혈당 감소, 대사 균형 유지 등에 사용되어 왔으며, 미용 및 건강에 유익한 효과를 가지며, 비타민 B군, 특히 B6이 풍부하게 함유하고 있는 것으로 알려져 있다. 상기 꿀 추출물은 당업계에 널리 알려진 통상적인 추출 방법으로 제조할 수 있으며, 예컨대, 유채꿀 원액 1kg을 중량 대비 10배 내지 12배의 물에 넣고 잘 저어주면서 4℃에서 24시간 동안 추출한 후 필터프레스로 여과하여 제조할 수 있다.

상기 복합 추출물은 혼합 비율의 편차가 큰 경우 각 추출물의 유효성분에서 유래한 피부 개선 효과가 적절하게 구현되지 않을 수 있으므로, 작업 환경 및 최종 산물의 품질을 고려하여 혼합비율을 적절하게 제어할 수 있다. 본 발명자들은 수천례의 실험 결과를 토대로 상기 원료의 최적 혼합 비율을 도출하고자 하였으며, 상기 혼합 추출물의 피부 개선 효과가 극대화될 수 있다.

상기 추출물은 함량이 0.1 중량% 미만이면 기대하는 효과를 얻기 어려울 수 있으며, 50.0 중량%를 초과이면 첨가량 대비 현저한 효과가 구현되지 않을 수 있을 뿐만 아니라, 과도하게 많은 추출물이 함유되어 상기 조성물이 적용된 제품 본연의 품질이 구현되지 않을 수 있다.

상기 추출 공정에 있어서 용매의 종류는 특별히 한정되지 않으며, 필요에 따라 다양한 용매를 사용할 수 있다. 또한, 상기 추출은 상기 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 당해 기술 분야의 통상적인 방법이 사용될 수 있다.

즉, 상기 원료에 포함된 유효 성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으며, 상기 에탄올은 천연 원료의 생리 활성 물질의 추출에 있어서 선택성이 뛰어나므로 상기 에탄올 추출에 의해 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있다.

특히, 물과 에탄올은 극성이 상이하여, 각 극성에 따라 추출되는 유효성분이 서로 차이가 날 수 있으므로 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있도록 상기 에탄올의 농도를 적절히 제어할 수 있다. 다만, 상기 에탄올은 농도가 90% 초과이면 적정한 수율이 구현되지 않을 수 있고, 농도가 60% 미만이면 피부 개선 효과를 나타내는 유효 성분이 충분하게 추출되지 않을 수 있으므로 상기 알코올의 농도를 상기 범위 내에서 적절히 조정할 수 있다.

상기 프로폴리스 추출물은 통상적으로 이용되는 열수추출, 실온추출, 가온추출 등의 방법 외에 초음파 추출 방식으로 제조되는 경우 추출 수율이 증가하여 생산성이 증대되고, 프로폴리스에 함유된 유효 성분이 효율적으로 용출되어 피부 개선 효과가 더욱 향상될 수 있다.

상기 "초음파 추출"은 추출 원료를 물, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜, 에탄올 등에서 선택된 어느 하나 또는 하나 이상의 추출용매에 넣은 후, 초음파추출기로 약 1 내지 12 시간 동안 추출하는 것을 의미한다. 상기 초음파추출의 시간은 추출하고자 하는 시료의 양에 따라 상이해질 수 있으며, 추출 산물을 여과 또는 정제하는 과정을 거칠 수 있다.

구체적으로, 상기 초음파 추출은 프로폴리스 원괴를 분쇄한 후, 알코올 수용액에 현탁시키는 단계; pH를 10 내지 12로 제어하는 단계; 1차 초음파 추출하는 단계; pH를 5 내지 7로 제어하는 단계; 2차 초음파 추출하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 프로폴리스는 pH 10 내지 12에서 밀랍이 분해되어 효율적으로 유효성분이 추출될 수 있으며, pH 5 내지 7 조건에서 수용성 프로폴리스가 에탄올 수용액에 용해되므로 각 단계에서 pH를 적절히 조절하는 것이 바람직하다.

이 때, 상기 초음파의 주파수는 프로폴리스 원괴의 양이나 상태에 따라 적절히 조절할 수 있으며, 바람직하게는 10~100 kHz일 수 있다.

상기 화장료 조성물은 상기 프로폴리스 복합 추출물을 포함하므로 세포 개선 효과가 우수하며, 단일 추출물만을 함유하거나, 이를 함유하지 않은 경우와 비교하여 세포 증식 효과(실험예 1), 자유라디칼 소거 활성(실험예 2), 콜라겐 생성 촉진 효과(실험예 3), 주름 개선 효과(실험예 4), 피부 보습력 개선 효과(실험예 5)가 현저히 증대되었다.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택하는 것이 바람직하다.

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

실시예 1 - 프로폴리스 복합 추출물

에탄올을 용매로 하고 동결 건조하여 수득된 프로폴리스 추출물 50g, 꿀 추출물 30g, 로얄젤리 추출물 20g, 황금 추출물 20g, 및 홍삼 추출물 20g을 혼합하여, 프로폴리스 복합 추출물을 제조하였다.

상기 각 추출물은 각 원료를 80% 에탄올 2L로 2시간씩 2회 환류 추출하여 제조되었으며, 감압 농축하고 동결 건조하여 고형으로 수득되었다.

상기 수득된 복합 추출물은 화장료 조성물에 투입되었으며, 상기 화장료 조성물에 대한 피부 개선 효과를 검증하였다.

실시예 2 - 프로폴리스 복합 추출물(2단 초음파 추출)

프로폴리스 추출물을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 복합 추출물을 제조하였다. 상기 프로폴리스 추출물은 추출 방법에 따른 피부개선 효과를 검증하기 위해 2단의 초음파 추출 방식으로 추출되었다.

상기 프로폴리스 원괴를 밀링 머신으로 분쇄한 후, 80% 알코올 수용액에 현탁시켜 현탁액을 제조하였다. 이어서, 알칼리를 첨가하여 pH를 11로 조정한 후 20℃를 유지하며, 70 kHz 초음파를 1차로 가하여 1차 초음파 추출을 수행하였다. 다음으로, 상기 1차 추출물에 산을 첨가하여 pH를 6으로 조정한 다음 70 kHz 초음파를 2차로 가하여 2차 초음파 추출을 수행하였으며, 상기 추출물은 여과 공정을 거친 후 감압 농축 및 동결 건조하여 고형으로 수득되었다.

비교예 1 내지 5 - 단일 추출물

상기 복합 추출물의 향상된 피부 개선 효과를 검증하기 위해 상기 제조예 1에서 수득된 각 단일 추출물을 비교예 1 내지 5로 설정하였다.

즉, 프로폴리스 추출물 140g, 꿀 추출물 140g, 로얄젤리 추출물 140g, 황금 추출물 140g, 홍삼 추출물 140g(순서대로, 비교예 1 내지 5)은 화장료 조성물에 개별적으로 투입되었으며, 상기 각 화장료 조성물에 대한 피부 개선 효과를 검증하였다.

실험예 1: 세포 증식 효과 평가

상기 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 내지 5에서 수득된 추출물을 정제수에 현탁하여 농도별(0.1%, 1%, 5%, 10%) 세포 증식 효과를 평가하였다.

HDF(Human Dermal Fibroblast)를 96웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰에 110 세포가 되도록 접종하여 DMEM 배지에 24시간 배양 하였다. 배지는 혈청이 없는 DMEM 배지를 사용하였으며, 각 추출물은 24시간동안 처리하였다. MTT용액[3-(4,5-디메틸아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드: 5㎎/㎖] 100㎕씩 첨가하여 4시간 방치한 후 배지 부분을 버렸다. 각 웰당 100㎕의 디메틸 설폭시드 용액을 첨가하여 20분간 교반한 후 마이크로 플레이트 판독기(microplate reader)로 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험의 정확도를 위하여 동일한 실험이 3회 반복하여 실시되었다. 상기 섬유아 세포 증식의 효과는 하기 수학식 1에 의하여 산출되었고 그 결과는 하기 표 1 에 나타내었다.

[수학식 1]

세포 증식효과(%) = (추출물 처리시 흡광도 - 추출물 미처리시 흡광도) / 추출물 미처리시 흡광도 × 100

[Cell proliferation rate (%)]

구분	0%	0.1%	1%	5%	10%
실시예 1	-	8.2	16.3	21.5	30.7
실시예 2	-	9.4	17.7	23.5	35
비교예 1	-	5.1	8.8	15.1	18.2
비교예 2	-	6.2	8.1	13.9	17.6
비교예 3	-	4.3	7.9	11.6	17.1
비교예 4	-	4.9	8	12.7	20.5
비교예 5	-	1.9	3.5	7.1	11.3

상기 표 1의 결과로부터, 본 발명의 실시예 1 및 실시예 2는 농도가 증가함에 따라 섬유아 세포의 증식효과도 증가하였으며, 세포 증식효과는 비교예 1 내지 4와 비교하여 현저히 우수하였다.

실험예 2: 자유라디칼 소거 활성 평가

상기 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 내지 5에서 수득된 추출물을 정제수에 현탁하여 농도별(5%, 10%, 30%) 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging acticity)을 평가하였다.

DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical)를 소거하여 탈색되는 정도를 540 nm에서 흡광도를 측정하는 방법이다.

자유라디칼 소거 활성에 대한 명확한 평가를 위하여 대조군으로서 디부틸히드록시톨루엔(BHT, Dibutyl hydroxy toluene)을 이용하였다.

상기 디부틸히드록시톨루엔은 무색의 결정, 또는 백색의 결정성 분말로 항산화 효과가 우수하여 식용유지, 유지성 식품의 산화방지제로 널리 사용되고 있다.

실험의 정확도를 위하여 동일한 실험이 3회 반복하여 실시되었으며, 그 결과는 하기 표 2 에 나타내었다.

[DPPH radical scavenging activity(%)]

구분	0%	5%	10%	30%
실시예 1	100	115.6	143.2	195.1
실시예 2	100	119	155	202
비교예 1	100	103.3	118.1	150.6
비교예 2	100	102.4	109.5	128.6
비교예 3	100	103.8	106.6	113.7
비교예 4	100	102.8	110.8	126.1
비교예 5	100	101.9	116.6	134.6
대조군	100	101.3	113.5	128.9

상기 표 1의 결과로부터, 본 발명의 실시예 1 및 실시예 2는 농도가 증가함에 따라 자유라디칼 소거활성도 증가하였으며, 자유라디칼 소거활성은 비교예 1 내지 4와 비교하여 현저히 우수하였다. 자유라디칼 소거활성이 높을수록 항산화 효과가 뛰어난 것으로 평가할 수 있으며, 본 발명에 따른 프로폴리스 복합 추출물의 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었다.

실험예 3: 콜라겐 합성량 평가

상기 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 내지 5에서 수득된 추출물을 정제수에 현탁하여 농도별(0.1%, 1%, 5%, 10%) 콜라겐 생합성 증가율을 평가하였다.

HDF(Human Dermal Fibroblast)를 24-웰 플레이트에 5 x 104 세포/웰의 농도로 분주하여 37℃, 5 % CO₂에서 24시간 동안 배양하였고, 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 내지 5에서 제조된 추출물의 농도를 달리하여 첨가한 무혈청 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지 및 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 각각 24시간 동안 추가로 배양하였다.

배양 후, 각 웰(well)의 상층액을 모아 콜라겐 키트(kit)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen) 타입 I C-펩타이드(PICP) 양을 측정하여 ng/ml 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐양을 측정하였다. 콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 3에 따라 계산하였으며, 대조군은 피부에 대해서 콜라겐 합성을 촉진하는 효과를 지닌 엘-아스코르빅애씨드 (L-AA, L-ascorbic acid)로 하였다.

[수학식 2]

콜라겐 생합성 증가율(%) = 추출물 처리시 콜라겐양 / 추출물 미처리시 콜라겐양 × 100

[Collagen synthesis(%)]

구분	0%	0.1%	1%	5%	10%
실시예 1	100	105.1	110.5	116.7	135.2
실시예 2	100	108.5	118.3	124.8	141.2
비교예 1	100	100.2	101.2	105.6	114.6
비교예 2	100	101.5	102.3	101.9	103.1
비교예 3	100	100.2	104.6	106.7	111.7
비교예 4	100	101.0	100.1	100.6	101.8
비교예 5	100	103.3	107.1	109.9	112.1
대조군	100	100.3	108.6	110.3	118.2

상기 표 3의 결과로부터, 본 발명의 실시예 1 및 실시예 2는 농도가 증가함에 따라 콜라겐 생합성량이 증가하였으며, 콜라겐의 생합성을 촉진하는 효과는 비교예 1 내지 5 및 대조군과 비교하여 현저히 우수하였다.

콜라겐 합성량이 많을수록 콜라겐 생성능이 우수한 것으로 평가할 수 있으며, 본 발명에 따른 프로폴리스 복합 추출물의 콜라겐 합성 촉진 효과를 확인할 수 있었다.

실험예 4: 주름 개선 효과 평가

상기 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 내지 5에서 수득된 추출물을 정제수에 현탁하여 농도별(0.1%, 1%, 5%, 10%) 주름 개선 효과를 평가하고자 하였다.

실험을 위해, 발효 추출물을 UV(Ultraviolet) 챔버를 이용하여 HDF(Human Dermal Fibroblast)에 UVA(Ultraviolet A)를 5J/㎠의 에너지로 조사하였다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP(Matrix metalloproteinase) 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다.

음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고, UVA를 조사한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96-웰 플레이트에 코팅하였다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분 반응시켰다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1mg/ml-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm에서 흡광도를 측정하였으며, 양성 대조군으로 레티놀을 사용하였다

[수학식 3]

MMP-1 저해 활성(%) = 추출물 처리시 흡광도 / 추출물 미처리시 흡광도 × 100

[MMP-1 inhibition activity(%)]

구분	0.1%	1%	5%	10%	retinol (1mg/ml)
실시예 1	18.5	26.4	33.6	45.2	41.25
실시예 2	21.2	31.6	38.5	51.1
비교예 1	14.6	19.6	26.5	35.2
비교예 2	12.3	18.2	24.7	34.2
비교예 3	13.6	20.9	26.9	36.4
비교예 4	10.3	15.3	19.8	31.2
비교예 5	14.2	19.2	26.8	38.6

표 4의 결과에서 보는 바와 같이, 모든 농도(0.1%, 1%, 5%, 10%)에서 본 발명의 프로폴리스 복합 추출물(실시예 1 및 2)이 비교예 1 내지 5와 비교하여 MMP-1 발현 저해능이 우수하였다.

일반적으로 MMP-1 발현 저해능이 높을수록 피부 주름 개선 효과가 우수하며, 본 발명에 따른 프로폴리스 복합 추출물은 단일 추출물(비교예 1내지 5)과 비교하여 피부 주름 개선 효과가 높을 것으로 판단된다.

실험예 5: 피부 보습력 개선 효과 평가

본 발명의 프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 하였다.

먼저, 복합 추출물 및 단일 추출물을 하기 표 5와 같이 제형화하였으며, 다만, 동일 성분으로서 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 내지 5의 추출물만을 달리하여 첨가하였다.

구분	함량(중량%)
추출물(실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 내지 5)	30.0
1, 3 - BG	10.1
글리세린	5.1
프로필렌글리콜	4.2
토코페릴아세테이트	3.0
유동파라핀	4.6
트리에탄올아민	1.0
스쿠알란	3.1
마카다미아너트오일	2.5
폴리소르베이트60	1.6
소르비탄세스퀴롤레이트	1.6
1,2-Hexanediol	2.0
카르복실비닐폴리머	1.5
향	미량
정제수	잔량
계	100

피부 질환이 없는 20~40대 40명을 대상으로 1조당 20명씩 2개 조로 나누고, 각 조별로 상기 제형화한 영양크림을 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전반부에 도포하게 하였으며, 음성 대조군으로서 동일한 양의 정제수를 사용하였다.

미리 도포 시작 전 항온, 항습 조건(24℃, 습도 40%)에서 수분측정기(Corneometer, CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값으로 삼고, 2분 단위로 피부 전도도 증가율(%)을 측정하였다.

[Moisturising activity(%)]

구분	2분	4분	6분	8분	10분	12분	14분	16분	18분	20분
실시예 1	39.63	29.81	22.40	15.27	10.52	8.88	8.37	8.45	7.88	6.91
실시예 2	0.00	41.63	32.9	31.2	19.3	13.2	11.84	10.9	11.1	9.1
비교예 1	19.22	9.86	8.15	6.98	5.24	4.66	3.81	2.59	2.07	1.59
비교예 2	29.72	21.15	15.26	8.84	5.21	5.33	4.81	4.56	3.05	3.21
비교예 3	23.82	18.89	14.21	7.66	5.81	4.96	4.81	4.01	3.22	2.86
비교예 4	20.21	13.77	11.09	6.67	5.88	4.59	4.05	2.92	2.38	1.03
비교예 5	21.08	15.11	8.99	7.05	6.51	6.01	4.08	3.64	3.02	2.55
대조군	18.22	10.31	7.52	5.17	4.81	4.76	2.27	1.55	1.38	0.76

실험 결과, 본 발명의 프로폴리스 복합 추출물(실시예 1, 실시예 2)을 함유하는 영양크림이, 타 영양크림(비교예 1 내지 5)과 비교하여 피부 전도도 증가율이 우수한 것으로 나타났다.

일반적으로 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 본 발명의 프로폴리스 복합 추출물을 함유하는 타 화장료에 비해 피부 수분 함량을 높게 유지하는 것으로 평가할 수 있다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의해 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

프로폴리스 추출물 50 중량부, 꿀 추출물 30 중량부, 로얄젤리 추출물 20 중량부, 황금 추출물 20 중량부, 및 홍삼 추출물 20 중량부를 유효성분으로 포함하되,
상기 프로폴리스 추출물은 pH 10 내지 12에서 1차 초음파 추출되고, pH 5 내지 7에서 2차 초음파 추출되는 항산화용 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 프로폴리스 추출물, 상기 꿀 추출물, 상기 로얄젤리 추출물, 상기 황금 추출물, 및 상기 홍삼 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 1.0 내지 50.0 중량% 함유된 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 화장료 조성물.
삭제
삭제
제4항에 있어서,
상기 알코올의 농도는 60 내지 90%인 화장료 조성물.
제1항, 제3항, 제4항, 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
피부 보습 또는 주름 개선 용도를 더 포함하는 화장료 조성물.
제1항, 제3항, 제4항, 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화된 화장료 조성물.