KR101963230B1 - 복수개의 단일 항체를 포함하는 단백질 복합체 - Google Patents
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Abstract
Description
도 3은 일 구체예에 따른 단백질 복합체의 아미노산 서열 구조를 나타낸 것이다.
도 4는 일 구체예에 따른 단백질 복합체를 β-머캅토에탄올 미처리군(-), 처리군(+)으로 나누어 SDS-PAGE를 통해 확인한 결과이다.
도 5는 일 구체예에 따른 단백질 복합체의 다중특이적 항원-항체 반응 효과를 나타낸 센소그램(sensorgram)이다.
| (V2Ub)2 | V2Ub-E2 | (E2)2 | |
| VEGF에 대한 KD 값 (nM) | 3.40 | 2.85 | - |
| EGFR에 대한 KD 값 (nM) | - | 6.37 | 4.91 |
101: 제1 항원 결합 부위
102: 제1 태그
200: 제2 폴리펩티드
201: 제2 항원 결합 부위
202: 제2 태그
300: 링커
Claims (18)
- N-말단으로부터 제1 항원 결합 부위 및 제1 Fc 부위를 포함하는 제1 폴리펩티드;
N-말단으로부터 제2 항원 결합 부위 및 제2 Fc 부위를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
상기 제1 폴리펩티드의 제1 Fc 부위의 C 말단 및 제2 폴리펩티드의 제2 항원 결합 부위의 N 말단을 서로 연결하는 링커를 포함하는 것으로서,
상기 링커는 양 말단 중 적어도 하나의 말단에 태그를 포함하고,
상기 태그는 상기 폴리펩티드의 말단에 연결되며, 절단 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단백질 복합체. - 제1항에 있어서, 상기 제1 항원 결합 부위는 상기 제1 폴리펩티드의 N-말단에 위치하고, 상기 제2 항원 결합 부위는 상기 제2 폴리펩티드의 N-말단에 위치하는 것인 단백질 복합체.
- 제1항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드는 서로 동일하거나, 서로 다른 항원 결합 부위를 갖는 것인 단백질 복합체.
- 제1항에 있어서, 상기 단백질 복합체는
N-말단으로부터 제1 항원 결합 부위 및 제1 Fc 부위를 포함하는 제1 폴리펩티드;
N-말단으로부터 제2 항원 결합 부위 및 제2 Fc 부위를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
상기 제1 폴리펩티드의 제1 Fc 부위의 C 말단 및 제2 폴리펩티드의 제2 항원 결합 부위의 N 말단을 서로 연결하는 링커를 포함하는 것으로서,
상기 링커는 양 말단에 제1 태그 및 제2 태그를 포함하고,
상기 제1 태그는 상기 제1 폴리펩티드의 C-말단에, 상기 제2 태그는 상기 제2 폴리펩티드의 N-말단에 연결되며,
상기 제1 태그 및 제2 태그는 각각 절단 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단백질 복합체. - 제1항에 있어서, 상기 단백질 복합체는
N-말단으로부터 제1 항원 결합 부위 및 제1 Fc 부위를 포함하는 제1 폴리펩티드;
N-말단으로부터 제2 항원 결합 부위 및 제2 Fc 부위를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
상기 제1 폴리펩티드의 제1 Fc 부위의 C 말단 및 제2 폴리펩티드의 제2 항원 결합 부위의 N 말단을 서로 연결하는 링커를 포함하는 것으로서,
상기 링커는 하나의 말단에 태그를 포함하고,
상기 태그는 상기 제1 폴리펩티드의 C-말단 또는 상기 제2 폴리펩티드의 N-말단에 연결되며, 절단 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단백질 복합체. - 제1항에 있어서, 상기 항원 결합 부위를 포함하는 폴리펩티드는 Fab, Fab', Fv 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체 단편의 중쇄(heavy chain) 또는 단쇄(light chain) 또는 단일-도메인 항체(single-domain antibody)인 것인 단백질 복합체.
- 제1항에 있어서, 상기 태그는 유비퀴틴, 유비퀴틴-유사 단백질 및 TEV 절단 펩티드(TEV cleavage peptide) 및 퓨린(furin) 절단 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 단백질 복합체.
- 제1항에 있어서, 상기 태그는 상기 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 연결된 것인 단백질 복합체.
- 제1항에 있어서, 상기 링커는 1 내지 100개의 임의의 아미노산으로 이루어진 폴리펩티드인 것인 단백질 복합체.
- 제1항에 있어서, 상기 단백질 복합체는 서열번호 8 내지 서열번호 44로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것인 단백질 복합체.
- N-말단으로부터 제1 항원 결합 부위 및 제1 Fc 부위를 포함하는 제1 폴리펩티드;
N-말단으로부터 제2 항원 결합 부위 및 제2 Fc 부위를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
상기 제1 폴리펩티드의 제1 Fc 부위의 C 말단 및 제2 폴리펩티드의 제2 항원 결합 부위의 N 말단을 서로 연결하는 링커를 포함하는 것으로서,
상기 링커는 양 말단 중 적어도 하나의 말단에 태그를 포함하고,
상기 태그는 상기 폴리펩티드의 말단에 연결되며, 절단 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단백질 복합체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드. - 제11항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 45 내지 서열번호 81로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기서열을 갖는 것인 폴리뉴클레오티드.
- N-말단으로부터 제1 항원 결합 부위 및 제1 Fc 부위를 포함하는 제1 폴리펩티드;
N-말단으로부터 제2 항원 결합 부위 및 제2 Fc 부위를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
상기 제1 폴리펩티드의 제1 Fc 부위의 C 말단 및 제2 폴리펩티드의 제2 항원 결합 부위의 N 말단을 서로 연결하는 링커를 포함하는 것으로서,
상기 링커는 양 말단 중 적어도 하나의 말단에 태그를 포함하고,
상기 태그는 상기 폴리펩티드의 말단에 연결되며, 절단 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단백질 복합체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및
상기 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된(operatively linked) 프로모터를 포함하는 재조합 벡터. - N-말단으로부터 제1 항원 결합 부위 및 제1 Fc 부위를 포함하는 제1 폴리펩티드;
N-말단으로부터 제2 항원 결합 부위 및 제2 Fc 부위를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
상기 제1 폴리펩티드의 제1 Fc 부위의 C 말단 및 제2 폴리펩티드의 제2 항원 결합 부위의 N 말단을 서로 연결하는 링커를 포함하는 것으로서,
상기 링커는 양 말단 중 적어도 하나의 말단에 태그를 포함하고,
상기 태그는 상기 폴리펩티드의 말단에 연결되며, 절단 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단백질 복합체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및
상기 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된 프로모터를 포함하는 재조합 벡터를 포함하는 숙주세포. - N-말단으로부터 제1 항원 결합 부위 및 제1 Fc 부위를 포함하는 제1 폴리펩티드;
N-말단으로부터 제2 항원 결합 부위 및 제2 Fc 부위를 포함하는 제2 폴리펩티드; 및
상기 제1 폴리펩티드의 제1 Fc 부위의 C 말단 및 제2 폴리펩티드의 제2 항원 결합 부위의 N 말단을 서로 연결하는 링커를 포함하는 것으로서,
상기 링커는 양 말단 중 적어도 하나의 말단에 태그를 포함하고,
상기 태그는 상기 폴리펩티드의 말단에 연결되며, 절단 가능한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단백질 복합체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및
상기 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된 프로모터를 포함하는 재조합 벡터를 발현시켜 상기 단백질 복합체를 생산하는 단계를 포함하는 다중특이 항체의 제조 방법. - 제15항에 있어서, 상기 생산하는 단계 이후, 상기 태그를 절단시키는 단계를 더 포함하는 것인 방법.
- 제16항에 있어서, 상기 절단시키는 단계는 태그에 포함된 절단 가능한 아미노산 서열을 인식하는 프로테아제를 첨가하여 절단시키는 것인 방법.
- 제15항에 있어서, 상기 태그는 유비퀴틴, 유비퀴틴-유사 단백질, TEV 절단 펩티드 및 퓨린 절단 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
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