KR20000049206A

KR20000049206A - 프로안토시아니딘 중합체로 된 항-설사 장용피 조제물

Info

Publication number: KR20000049206A
Application number: KR1019990703305A
Authority: KR
Inventors: 에드워드제이. 로존; 아툴에스. 칸드와라; 아크람 사보니
Original assignee: 리사 에이 콘티; 쉐만 팔마큐티칼스 인코퍼레이션
Priority date: 1996-10-16
Filing date: 1997-10-14
Publication date: 2000-07-25
Anticipated expiration: 2017-10-14
Also published as: US20140329896A1; US20140011869A1; DE69739394D1; US8574634B2; TW537898B; US7323195B2; US20090148397A1; JP4195728B2; NZ335317A; JP2001524938A; PT935417E; EP0935417A4; ATE430477T1; EP0935417A1; ES2326933T3; CA2269078A1; AU4988197A; WO1998016111A1; DK0935417T3; CA2269078C

Abstract

분비성 설사를 치료하는데 유용한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 본 발명은 특히 크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함한다. 특히, 본 발명은 구강 투여후에 위산으로부터 조성물을 보호하기 위해 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 조제한 장용피 제약학적 조성물을 제공한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물과 위산 분비를 저해하는 또는 위산을 중화시키는데 효과적인 화합물을 복합한 제약학적 조성물을 제조하는 방법 및 이를 이용하는 방법에 대해 설명한다.

Description

프로안토시아니딘 중합체로 된 항-설사 장용피 조제물{Enteric Formulation of Proanthocyanidin Polymer Anti-diarrheal Compositions}

2. 발명의 배경

2단락에서 언급되는 임의 문헌은 본 발명의 이전에 선행기술로써 해석해서는 안된다.

2.1 분비성 설사

장액성 설사로 불리는 분비성 설사는 개발도상국 특히 유아 및 어린이의 주요 질병 및 치사의 원인이 되는데, 특히, 선진국에서 개발도상국으로 여행하는 여행자의 상당비율이 이 질병에 걸리고, 외국을 방문하는 자("여행자 설사")들로 이 질병에 걸릴 수 있다. 분비성 설사는 내장관을 통하여 유체 및 전해질이 손실되어, 심각한, 가끔은 생명을 위협하는 탈수를 유발하는 것을 특징으로 한다. 분비성 설사는 다양한 박테리아, 바이러스, 프로토조아 병인균에 의해 발병되고, 또한 궤양성 결장염, 염증성 장염, 암, 위장관의 신형성등의 비-감염성 병인으로도 발병된다. 사실, 모든 형태의 질환은 분비성 성분을 가진다.

분비성 설사의 두 가지 주요 박테리아 원인은 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae)와 대장균(E. coli)이다. 대장균(E. coli)의 장독소가 개발도상국에서 설사의 주요 원인이 되고, 이는 여행자 설사의 주요 원인이 되기도 한다. 설사를 일으키는 대장균(E. coli)의 다른 균주는 장출혈, 장침투, 장병인 및 다른 균주를 포함한다. 설사를 일으키는 다른 박테리아 균주에는 비브리오 종(Vibrio spp)., 캄필로박터종(Campylobacter spp)., 살모넬라 종(Salmonella spp)., 에어로모나스 종(Aeromonas spp)., 플레시모나스 종(Plesimonas spp)., 쉬겔라 종(Shigella spp)., 클렙스엘라 종(Klebsiella spp)., 시트로박터 종(Citrobacter spp)., 에르시니아 종(Yersinia spp)., 클로스트리듐 종(Clostridium spp)., 박테로이드 종(Bacteriodes spp)., 스타필로코커스 종(Staphylococcus spp)., 바실러스 종(Bacillus spp) 및 다른 장내 박테리아를 포함한다. 또한 분비성 설사는 크립토스포리듐 파르붐(Cryptosporidum parvum)과 같은 프로토조아 병인균에 의해 발생될 수도 있다(Holland, 1990, clin. Microbiol. Rev. 3:345; Harris, 1998, Ann. Clin. Lab. Sci. 18:102; Gracey, 1986, Clin. in Gastroent., 15:21; Ooms and Degryes, 1986, Veterinary Res. Comm. 10:355; Black, 1982, Med. Clin. Nor. Am. 66:611).

비브리오 콜레라(Vibrio cholerae)., 대장균(E. coli) 장균독소 균주 및 다른 장내 박테리아들은 유사한 메카니즘을 통하여 분비성 설사를 유도한다. 이들 병인균은 내장 상피의 정점 막에 있는 특이적인 수용체에 결합하는 독소를 만든다. 이들 수용체에 독소가 결합함으로써 아데닐레이트 사이클라제 또는 구아닐레이트 사이클라제-중개되는 시그날 변환을 자극하여, cAMP 또는 cGMP의 수준을 증가시키게 된다. 특정 정점 막 단백질의 포스포릴화반응을 통하여 작용되는 것으로 보이는 이와 같은 일련의 조절에 의해 내장 상피 음와 세포로부터 내장으로 염소 유출을 자극하고, 장 상피 융모 세포가 나트륨 및 염소 이온을 정상적으로 흡수하는 것을 방해하게 된다. 염소이온 및 나트륨 이온 농도가 증가되면 삼투압에 의해 내장 관강으로 물이 들어오게 되고, 이에 따라 탈수 및 전해질이 손실된다. 따라서, 염소 이온 방출을 감소시키는 물질이 내장으로 유체가 이동되는 것을 막고 때라서 전체적으로 유체가 손실되는 것을 방지한다. 따라서, 분비성 설사와 연관된 위험한 탈수 및 전해질 손실을 치료 및 예방하는데 이와 같은 물질이 특히 유용하다.

본 발명의 제약학적 조성물은 여행자 설사 및 비-특이적 설사를 치료하는데 특히 유용하다. 분비성 설사의 일종인 여행자 설사는 문명화된 사회의 국민이 "제 3 세계" 지역으로 여행할 때 경험하는 것으로 정의한다. 여행자 설사의 예로는 미국 시민이 멕시코로 처음 여행하였을 때, 여행지에 도착후 3-5일 이내에 경험한 설사 질환이다(Castelli & Carose, 1995, Chemotherapy 4(supp. 1):20-32). 여행자 설사의 85%는 대장균 장내독소(ETEC), 쉬겔라 종(Shigella spp)., 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)등이 주요 병인으로 평가되고 있다. 프로토조아 및 바이러스고 여행자 설사를 일으킬 수 있지만, 박테리아보다는 그 발병 빈도가 낮다(Dupont, 1995, Chemotherapy 4(supp. 1):33-39)). 멕시코에서, 여름동안에(5월부터 11월까지), 여행자 설사를 일으키는 주요 병인 물질은 ETEC이고, 겨울 동안에는 주요 병인 균은 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)가 된다(Dupont, 1995, "Traveler's diarrhea", M. Blaser et al., eds., pp.299-311, Raven Press, New York). 처음으로 멕시코로 여행하는 미국인의 약 40%는 여행자 설사를 경험한다.

여행자 설사와는 대조적으로, 분비성 성분을 가지는 것으로 보이는 비-특이적 설사(NSD)는 자생 집단에 의해 경험하는 급성 풍토성 설사 질환이다. 멕시코 거주자에서 비-특이성 설사 발병률은 7%(H.L., personal communication)이다. 여행자 설사와는 달리, 비-특이성 설사는 일반적으로 항생제 치료에 반응을 나타내지 않고, 병인도 알려져 있지 않다.

1975년이후로, Dupont and colleagues at Univ. of Texas Health Science Cneter at Houston은 멕시코에서 일련의 임상 실험을 하여 다양한 항-설사제의 효과에 대해 연구하였다. 이들 연구에 위약 집단의 결과를 기초로 하여, 이들은 미국 여행자 및 멕시코 시민에서 여행자 설사 및 비-특이적 설사의 자연적인 병력을 특징화시킬 수 있었다. 데이터를 보면, 여름에 여행자 설사를 겪은 환자군과 비-특이적인 설사를 경험한 환자 군 사이에 설사 질환의 강도 및 지속 시간 등에서 모두 차이가 있다는 것을 알 수 있다. 5일 평가 후에, 질병 기간(병적에 들러간 시점에서 마지막 설변까지 평균 시간)이 미국 여행자의 경우에는 69시간이고, 이에 비해 멕시코 시민의 경우에는 38시간이었다(p=0.0001). 병적에 기록된 시점에서 설변의 총 회수를 분석하면(0-120시간), 미국 여행자는 10.6회 설변을 하였는데 비해, 멕시코 거주민들은 5.6회 설변을 보았다는 것이다(p=0.0001)(H.L. Dupont, personal communication).

멕시코에 겨울동안에 발생되는 여행자 설사에 대한 데이터는 없지만, 일반적으로 미국에서 여행온 초행자에서 설사 질환은 수개월 동안 멕시코에 머문 미국시민이 경험한 설사와 유사하다. 이는 여름에 겪는 여행자 설사보다는 그 정도가 덜하나, 비-특이적인 설사보다는 심각하다(H.L.Dupont, personal communication).

분비성 설사는 바이러스 감염과 연관이 있는데, 이는 사람 면역 결핍 바이러스(HIV) 감염, 후천성 면역 결핍 증후군(AIDS), 레트로바이러스 감염에 수반하여 설사가 발생된다. 거의 모든 AIDS 환자는 질병 과정동안에 어느 정도 설사로 인하여 고통을 받고, AIDS 환자의 30%는 만성적인 설사에 시달린다. AIDS에 수반되는 설사는 "HIV-수반된 만성 설사"라 명명한다. 이와 같은 HIV 질병의 설사 성분은 일부 환자의 경우에, 프로토조아 병인균 특히 크립토스포리움 종(Cryptosporidium spp.)의 2차 감염에 의한 것이다. 또한, 레트로바이러스 감염은 개발도상국에서 영아 및 어린이에게서 설사를 일으키게 된다.

분비성 설사는 또한 소와 같은 농장 동물, 돼지, 양(양과 같은 동물), 가금류(닭), 말 뿐만 아니라 다른 가정에서 키우는 동물 가령, 고양이 및 고양이과 동물등의 사람이 아닌 동물에서도 문제가 된다. 설사 질환은 어린 동물 및 최근에 약해진 농장 동물에서 흔히 발생되는 질병이다. 농장 동물 특히, 소, 양, 돼지 등의 식용 동물은 장내독성, 장내출혈과 같은 박테리아성 병인균, 다른 대장균(E. coli), 살로넬라 종(Salmonella spp.,), 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 박테리오드 프라질리스(Bacteriodes fragilis), 캄필로박터 종(Campylobacter spp.), 에르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)등에 의해 발병된다. 추가로, 프로토조아 병인균 특히, 크립토스포리움 파르붐(Cryptosporidium parvum) 및 바이러스 물질, 특히 레트로바이러스 및 코로나바이러스등도 농장 동물에서 설사의 원인이 된다. 농장 동물의 설사에 관련되는 다른 바이러스성 물질에는 타가바이러스(tagavirus), 파르보바이러스(parovirus), 칼리치바이러스(calicivirus), 아데노바이러스(adenovirus), 브레다바이러스(bredavirus), 아스트로바이러스(astrovirus) 등을 포함한다(Holland, 1990, Clin. Microbiology Rev. 3:345; see also Gutzwiller and Blum, 1996, AJVR 57:560; Strombeck, 1995, Veterinary Quarterly 17(Suppl. 1):S12; Vermunt, 1994, Austral. Veterinary J. 71:33; Driesen et al., 1993, Austral. Veterinary J. 70:259; Mouricout, 1991, Eur. J. Epidemiol. 7:588; Ooms and Degryse, 1986, Veterinary Res. Comm. 10:355).

2.2. 타닌산 및 프로안토시아니딘을 포함하는 식물 추출물 및 이를 설사 치료에 이용

다양한 식물에서 타닌산이 발견되는데, 이는 가수분해 가능한 또는 응축된 물질로 분류된다. 프로안토시아니딘은 응축된 타닌산의 일종으로 하기에서 설명한다. 설사를 치료 또는 예방하는 전통 약물에 이용되는 많은 식물에 특히 타닌산 및 프로안토시아니딘을 포함하는 것을 알 수 있다(see, e.g., Yoshida et al., 1993, Phytochemistry 32:1033; Yoshida et al., 1992. Chem. Pharm. Bull., 40:1997; Tamaka et al., 1992, Chem. Pharm. Bull. 40:2092). 약용 식물 예를 들면, 피칸투스 안골레니스(Pycanthus angolenis) 및 바피아 니티다(Baphia nitida)등에서 추출한 추출물을 동물 테스트한 결과 항-설사 물질을 가지는 것을 알았다Onwukaeme and Anuforo, 1993, Discovery and Innovation, 5:317; Onwukaeme and Lot, 1991, Phytotherapy Res., 5:254). 설사를 치료 또는 예방하는데 콩 꼬투리 및 밤나무에서 추출한 추출물에 포함된 타닌산을 이용하였다(미국 특허 5,043,160; European Patent No. 481,396).

프로안토시아니딘을 포함하는 식물 추출물이 설사의 치료 및 예방에 사용되어 왔다. 예를 들면, 프로안토시아니딘 및 다른 화합물을 포함하는 과일 표피 추출물이 지사제로 이용되었다(미국 특허 4,857,327). Q. petrea 나무의 표피는 전통적으로 지사제로 이용되는데, 여기에는 올리고머 프로안토시아니딘을 포함하는 것으로 나타났다(Konig and Scholz, 1994, J. Nat. Prod., 57:1411; Pallenbach, 1993, Planta Med., 59:264). 스케로카리아 비레아(Sclerocarya birrae) 표피 추출물 분취물에도 역시 프로안토시아니딘을 포함하는데 이는 실험적으로 유도한 설사와 관련된 내장 위축을 감소시켰다(Galvez et al., 1993, Phyt. Res., 7:25; Galvez et al., 1991, Phyt. Res., 5:276). 그러나, 이들 연구에서는 프로안토시아니딘이 추출물의 항-설사 활성에 대해 그 핵심이 된다는 설명을 제시하지는 못하였다.

프로안토시아니딘을 포함하는 특정 제조물이 장에서 콜라라 독소 작용을 방해한다는 일부 연구가 있었다. 차 추출물에는 카테친(프로안토시아니딘 단량체)를 포함하는데, 이는 배양된 CHO 세포에서 콜라라 독소에 의해 유도되는 형태학적 변화 및 쥐에게 콜라라 독소를 투입하고 5분뒤에 콜레라 독소에 의해 유도되는 장 유체 축적을 예방한다고 설명하였다(Toda et al., 1991, J. App. Bact., 70:109). 그러나, 차 추출물을 콜레라 독소 투입후 30분 뒤에 투여하면, 쥐 내장에서 장 유체 축적을 방지하지 못하였고, 추출물에서 카테친은 활성 물질이 아니라는 것이다. 또한, 프로안토시아니딘을 포함하는 구아주마 울미폴리아(Guazuma ulmifolia) 표피 추출물은 분리된 토끼 내장 조직에서 콜레라 독소에 의해 유도되는 이온 유출을 감소시키고, 실제 SDS-PAGE 분석에 의하면, 콜레라 독소와 프로안토시아니딘 중합체의 물리적인 상호작용을 통하여 일어나는 것을 알 수 있다(Hor et al., 1996, Phytochemistry 42:109; Hor et al., 1995, Planta Med., 61:208). 그러나, 콜레라 독소의 첨가에 추가하여 분취물을 첨가하여도 염소 이온 분비에는 아무런 영향을 주지 못한다. 따라서, 본 발명과는 완전히 상반되게, 이와 같은 분취물은 분비성 설사의 원인이 되는 물질에 노출된 후에 유체 손실을 감소시키거나 예방하는데 효과가 없고, 따라서 분비성 설사의 치료요법제로 이용할 수 없다.

프로안토시아니딘은 이들 구조 및 원료에 따라 상이한 생리학적 효과를 가진다. 다른 프로안토시아니딘은 설사의 예방 및 치료에 금기된다. 검은 콩에서 분리한 올리고머 프로안토시아니딘은 분리된 내장 조직에서 염소 이온 분비를 증가시키고, 나트륨 이온의 재흡수를 감소시키는 것을 알 수 있다[Silverstein, 1989, "Procyanidin from Black Bean(Phaseolus Vulgaris): Effects on Transport of Sodium, Chloride, Glucose, and Alanine in the Rat Ileum," Washington State University(Dissertation)]. 내장에서 이온 농도가 증가되면 내장 관강으로 유체 축적을 촉진시키고, 분비성 설사와 연관된 내장 전해질 손실 및 탈수를 악화시킨다. 사실, 이들 문헌은 설사를 치료하는데 프로안토시아니딘을 이용하는 것과는 거리가 멀고, 프로안토시아니딘이 분비성 설사의 원인이 된다고 설명하고 있다.

2.3. 프로안토시아니딘

프로안토시아니딘 및 프로안토시아니딘 중합체는 다양한 식물에서 발견되는 페놀성 물질로, 생장이 목질 성질을 가진 식물[크로톤(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)]에서 발견된다. 프로안토시아니딘 중합체의 일반적인 화학 구조는 5,7,3',4' 테트라하이드록시 또는 5,7,3',5'펜타하이드록시 플라보노이드 3-올 단위가 C(4)-(6) 또는 C(4)-C(8)결합에 연결된 선형 사슬로 구성되는데, 다음과 같다.

생합성 연구에 따르면, 프로안토시아니딘 중합체는 하기에서 볼 수 있는 형태의 단량체 유닛으로 구성된다(Fletcher et al., 1997, J.C.S. Perkin, 1:1628).

중합체 사슬에서 단량체 유닛(일반적으로 "루코안토시아니딘"이라고 칭함)는 시스(에피카테친) 또는 트란스(카테친)의 2 또는 4번 위치에 C-링의 두 개 이성질체가 된다. 따라서, 중합체 사슬은 다른 구조적 단위에 기초하여, 다양한 프로안토시아니딘 중합체와 여러 가지 가능한 이성질체를 만들 수 있다(Hemingway et al., 1982, J.C.S. Perkin, 1:1217).¹³C-NMR을 이용하여, 중합체 프로안토시아니딘의 구조를 확인하고, 디-, 트리-, 테트라-중합체 프로안토시아니딘에 대해서도 밝혀낸다. 플라보노이드 3-올과 같은 큰 중합체가 대부분 식물에 주요 물질이고, 이는 6 또는 그 이상의 유닛을 포함하여 평균 분자량이 2,000달톤이상이다(Newman et al., 1987, Mag. Res. Chem., 25:118).

2.4.크로톤(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)으로부터 추출물 및 화합물의 용도

남미에서 발견되는 크로톤 사쿠타리스(Croton sakutaris), 크로톤 가시피홀리우스(Croton gossypifolius), 크로톤 팔라노스티마(Croton palanostima), 크로톤 레치레리(Croton lechleri), 크로톤 에리트로칠리스(Croton erythrochilus), 크로톤 드라코노이데스(Croton draconoides)등을 포함하는 상이한 크로톤 나무 종이 붉은 점액성 라텍스 수액을 만드는데, 이를 Sangre de Drago 또는 "공룡 피(Dragon's Blood)라고 부른다. 흔히 Sangre de Drago는 페루비아 아마존 원주민 및 혼혈 민족등에서 유행성 감기 및 설사를 치료하는데 이용된다. 편두선염, 인후 감염, 결핵, 소화성 궤양, 장 질환, 류마티스등에도 이용되고, 수정률을 증가시키고, 성인 및 어린이 모두에서 이용할 수 있다. 또한, 허피스 바이러스 병소 및 상처 치료용으로 지혈하는데에도 광범위하게 이용된다. 수액을 상처난 개방 부위에 직접 바르면 항-감염제 역할을 하고, 치료 과정을 가속화시킨다. 또한 과도한 출혈이 있는 경우에 질 세척액으로 이용된다.

크로톤 드라코노이드(Croton draconoides) 및 크로톤 레치레리(Croton lechleri)에서 얻은 Sangre de Drago은 항염증 활성이 있는 타스핀(taspine)으로 확인되었다(Persinos et al., 1979, J. Pharm. Sci., 68:124). 타스핀은 조류 미엘로블라스토시스 바이러스(myeloblastosis virus), 라스췌르 루키미아 바이러스(Rauscher leukemia virus), 원숭이 살코마 바이러스(Simian sarcoma virus)에서 RNA-관련된 DNA 중합효소 활성을 방해한다는 것이 밝혀졌다(Sethi, 1977, Canadian J. Pharm. Sci., 12:7).

Sanfre de Drago에서 분리한 다양한 페놀성 디테르핀 화합물을 항-종양, 항-박테라아 및 상처 치료 성질 등에 대해 테스트하였다(Chen et al., Planta Med., 60:541). 수액에서 프로안토시아니딘은 항종양 또는 항박테리아 활성은 거의 없고, 약간의 상처 치료 활성을 가지는 것을 알았다.

미국 특허 5,211,944에서는 처음으로 크로톤종(Croton spp.)에서 프로안토시아니딘을 분리하였고, 이 화합물을 항-바이러스제로 사용한다고 보고하였다(See also Ubillas et al., 1994, Phytomedicine, 1:77). 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 호흡기 합체 바이러스, 인플루엔자, 파라인플루엔자, 허피스 바이러스등을 포함하는 다양한 바이러스에 대해 항-바이러스 활성을 가지는 것을 알았다.

카로필럼 이노필럼(Calophyllum inophylum)은 인도에서 폴리네시아(태평양 중남부 섬총칭)까지 산재하는 나무이다. 옴, 백선, 피부염등을 치료하는 항-기생충제 및 무통제와 같은 다른 용도로 종자씨 오일을 이용하였다. 인도차이나에서는 궤양 및 상처를 치료하는데 분말형 수지를 이용한다. 인도네시아에서, 박피는 팽창된 선을 치료하는 외용 및 이뇨제로 내복용으로 사용하였다. 수액을 이용하는 가슴 통증 완화를 시키고, 종양 및 팽창을 완화시키는데 이용한다. 잎 추출물은 충혈된 눈 세척액으로 이용하고, 캄보디아에서는 선회병 및 편두통을 치료하는데 잎 추출물을 이용한다. 사모아에서는 활 독으로 수액을 이용한다.

미국 특허 5,211,944에서는 카로필럼 이노필럼(Calophyllum inophylum)에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 분리하고, 이를 항-바이러스제로 사용한다는 것을 설명하고 있다.

본 발명의 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 산에 불안정하고, 위장의 산성 환경에서는 활성을 갖지 못한다. 본 발명 출원 전에는 크로톤 종(Croton) 또는 카로필럼 종(Calophyllum)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 제약학적 조성물로 이용한다는 내용은 없고, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 위장의 산성 유체로부터 보호하여, 분비성 설사 치료를 위해 구강으로 투여할 수 있다는 내용은 없다.

분비성 설사에 의해 장으로 이온 유출을 감소시킬 수 있는 효과적인 제약학적 조성물이 필요하다. 이와 같은 물질은 분비성 설사에 의한 유체 및 전해질의 손실 및 탈수를 예방하는데 유용하다. 본 발명의 목적은 이와 같은 요구를 수행할 수 잇는 항-설사제로써 효과적인 제약학적 조성물을 제공하고, 특히 위장의 산성 환경으로부터 항-설사제를 보호하고, 이와 같은 제약학적 조성물을 이용하여 설사를 치료하는 방법을 제공한다.

3. 발명의 요약

본 발명은 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 항-설사제가 치료요법적으로 효과적인 양을 포함하는 제약학적 조성물에 관계한다. 프로안토시아니딘 중합제 조성물은 크로톤 종(Croton spp) 적절하게는 크로톤 레치레리(Croton lechleri)에서 준비한다. 또한 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 카로필럼 종(Calophyllum) 특히 카로필럼 이노필럼(Calophyllum inophylum)으로부터 만들 수 있다.

본 발명의 제약학적 조성물은 위장의 산성 환경으로부터 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 분해되는 것을 방지하도록 제조한다. 적절한 구체예에서, 프로안토시아니딘은 장용피된다. 또 다른 적절한 구체예에서는 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산의 분비를 감소시키고, 위산의 산성을 약화시킬 수 있는 물질과 복합하여 제공된다.

본 발명에는 또한, 사람을 포함하는 온혈동물에서 설사 특히 분비성 설사를 치료하는 방법을 포함하는데, 예를 들면 크로톤종(Croton) 또는 카로필럼 종(Calophyllum)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 효과량과 제약학적으로 수용 가능한 유도체(프로안토시아니딘 중합체 조성물을 위산으로부터 보호하는) 및 제약학적 수용가능한 담체로 구성된 제약학적 조성물을 설사를 앓고 있는 사람 또는 사람이 아닌 동물에 투여하는 것으로 구성된다. 또한, 본 발명은 사람을 포함하는 동물에서 분비성 설사를 치료하는 방법을 포함하는데, 이 방법은 (a) 크로톤종(Croton) 또는 카로필럼 종(Calophyllum)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 효과량으로 구성된 제약학적 조성물; (b)위산 분비를 저해하는데 효과적인 또는 위산 분비를 방해하는데 효과적인 화합물 또는 위산을 중화시키는데 효과적인 화합물로 구성된 제약학적 조성물; 그리고 제약학적 수용 가능한 담체로 구성된 제약학적 조성물을 설사를 앓고 있는 환자(사람 및 동물)에 투여하는 것으로 구성된다.

본 발명은 또한 사람을 포함하는 온혈 동물에서 설사를 예방하는 방법을 제공하는데, 이는 설사가 일어날 확률이 큰 사람 또는 사람이 아닌 동물에 제약학적 조성물을 투여하는 것으로 구성되는데, 이 조성물은 크로톤종(Croton) 또는 카로필럼 종(Calophyllum)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 효과량과 제약학적으로 수용 가능한 유도체(프로안토시아니딘 중합체 조성물을 위산으로부터 보호하) 및 제약학적 수용 가능한 담체로 구성된다.

1. 발명의 분야

본 발명은 설사를 치료하는데 효과가 있는 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 제약학적 조제물에 관계한다. 특히, 본 발명은 크로톤(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물로 제약학적 조제물을 만드는 것에 관계하는데, 이와 같은 조제물은 분비성 설사 특히 분비성 설사에 따른 수분 손실로 인한 탈수를 치료하는데 효과가 있다. 본 발명의 적절한 구체예에서는 구강으로 투약한 후에 위장의 산성 환경으로부터 조성물을 보호할 수 있는 프로안토시아니딘 중합체로 된 제약학적 조제물에 관계하는데, 특히, 이와 같은 조제물은 장용피로 되어 있다.

도 1의 HPLC 크로마코그램은 상이한 크로마코그래피 시간(분)동안에 다른 처리를 한 후, C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 크로마코그래피 프로파일을 UV흡수도(단위 mAU)로 나타낸 것이다. 점선으로 나타낸 크로마토그래피 곡선은 물에 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 프로파일을 나타내고("물에서), 직선은 0.03시간동안 HCl에 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 프로파일을 나타내고("HCl after 0.03 h"), 빗금친 선은 2.0시간동안 HCl에 배양한 후에 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 나타낸다("HCl after 2.0 h").

도 2는 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 0.03시간동안 37℃에서 위산 모방 유체에 배양한 후에 샘플의 HPLC 크로마토그래피를 나타낸다. 크로마토그래피는 시간(분)에 따른 UV 흡수도(mAU)로 나타낸다.

도 3은 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 2시간동안 37℃에서 위산 모방 유체에 배양한 후에 샘플의 HPLC 크로마토그래피를 나타낸다. 크로마토그래피는 시간(분)에 따른 UV 흡수도(mAU)로 나타낸다.

도 4는 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 2시간동안 37℃에서 위산 모방 유체에 배양한 후에 모방 내장 유체와 1:1로 희석한 후에 4시간 추가 배양한 후 샘플의 HPLC 크로마토그래피를 나타낸다. 크로마토그래피는 시간(분)에 따른 UV 흡수도(mAU)로 나타낸다.

도 5는 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 2시간동안 37℃에서 위산 모방 유체에 배양한 후에 모방 내장 유체와 1:1로 희석한 후에 6시간 추가 배양한 후 샘플의 HPLC 크로마토그래피를 나타낸다. 크로마토그래피는 시간(분)에 따른 UV 흡수도(mAU)로 나타낸다.

도 6은 피크 면적 비율(피크 면적 %)을 나타내는데, 이것은 물에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 HPLC 프로파일을 테스트-매체에서 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 HPLC 프로파일의 피크 면적으로 나누고, 시간에 대한 배양 함수로써 100을 곱하여 계산한다. 빈 네모가 있는 선은 SGF(모방 위액)에 배양한 후에, 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 피크 면적%을 나타낸다. 점선은 SGF에 2시간 배양하고, SIF(모방 장액)과 1:1로 희석을 한 후에 추가 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 피크 면적%을 나타낸다.

도 7의 막대 그래프는 콜레라 독소에 노출된 쥐에서 내장에 유체가 축적되는 것에 대해 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 장용피 조제물의 효과를 나타내는 것이다. 각 쥐 A-C에서 유체 축적 비율 평균치로 나타내었다(㎎ 유체/㎎ 내장). A집단 쥐는 물로만 처리를 하였고; B 집단의 쥐는 131㎎ 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물/구아르 검(㎏)으로 처리하였고; C 집단의 쥐는 "EUDRAGIT^TM"와 구아르검으로 처리하였다. 모든 집단에서 쥐는 콜레라 독소에 노출된 후 7시간 경에 평가하였다(단락 7 참고).

도 8의 막대 그래프는 콜레라 독소에 노출된 쥐에서 내장에 유체가 축적되는 것에 대해 C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 장용피 조제물의 효과를 나타내는 것이다. 각 쥐 A-B에서 유체 축적 비율 평균치로 나타내었다(㎎ 유체/㎎ 내장). 각 쥐 A-B에서 유체 축적 비율 평균치로 나타내었다. A집단 쥐는 "EUDRAGIT^TM"와 당을 포함하는 물로 처리를 하였고; B 집단의 쥐는 131㎎ 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물/구아르 검(㎏)으로 처리하였다.

5.1. 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 준비

설사 치료에 효과가 있는 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 루코안토시아닌 단량체로 구성된다. 루코안토시아니딘은 일반적으로 카테친, 에피카테친, 갈로카테친, 갈로에피카테친, 플라보놀, 플라보놀, 플라본-3,4--디올, 구로시아니딘, 안토시아니딘을 포함하는 단량체 플라보노이드이다. 분비성 설사를 치료하는데 유용한 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 2 내지 30개 플라보노이드 유닛, 적절하게는 2 내지 15개 플라보노이드 유닛, 좀더 적절하게는 2 내지 11개 플라보노이드 유닛, 가장 적절하게는 평균 7개 플라보노이드(평균 분자량 2100달톤)로 구성된다.

본 발명에서 유용한 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 미국 특허 5,211,944에서 설명하는 방법을 이용하여, 크로톤(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)으로부터 분리한다.

적절한 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 크로톤 레치레리(Croton lechleri)에서 분리하였다. 또 다른 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 카로필럼 이노필럼(Calophyllum inophylum)으로부터 분리하였다.

5.2. 제약학적 조성물

프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위장의 산성 환경에서 불안정하고, pH 5.0에서 pH8.0까지는 안정한 것으로 알려졌다(단락 6 참고). 따라서, 본 발명은 위산으로부터 조성물을 보호하는 프로안토시아니딘 중합체 조성물로 구성된 제약학적 조제물을 제공한다. 적절한 구체예에서, 본 발명의 조제물은 제약학적 수용 가능한 운반체와 함께 장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산을 중화시키는 또는 위산 분비를 억제하는 하나 이상의 물질을 포함한다. 이 조제물은 공지의 방법으로 만들 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990).

임의 치료요법적 수용 가능한 제약학적 조성물형으로 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 제공할 수 있다. 구강으로 투여되는 제약학적 조성물은 약물 분말, 결정, 과립, 소립자(마이크로미터 크기의 입자 가령, 미소구 및 마이크로캡슐), 과립(밀리미터 크기의 입자), 비드, 마이크로비드, 펠렛, 알약, 미정제, 압착 정제 또는 정제 저작물, 주형 정제 또는 정에 저작물의 형태가 될 수 있고, 캡슐의 경우에는 경질 및 연질이 되고, 조성물은 분말, 과립, 비드, 용액 및 현탁액의 형태로 포함된다. 제약학적 조성물은 또한 용액 또는 수용액에 현탁액으로 제조될 수 있고, 액체가 결합된 겔 캡슐 또는 투여할 수 있는 임의 통상 조제물로 제조될 수 있고, 직장 투여를 하기 위해서는 좌약 또는 관장제 또는 다른 통상적인 형태가 될 수 있다. 방출이 조절되는 시스템 형태로 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 제공할 수 있다(Langer, 1990, Science 249: 1527-1533).

제약학적 조성물에는 제약학적으로 수용 가능한 임의 부형제, 첨가제 또는 운반체를 포함한다. 예를 들면, 이인산칼슘, 황산칼슘, 락토즈, 셀룰로오즈, 카오린, 만니톨, 염화나트륨, 건조 전분, 솔비톨, 슈크로즈, 이노시톨, 분말당, 벤토나이트, 미소결정 셀룰로오즈 또는 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈등을 포함하나 이에 국한되지 않는 같은 희석제 또는 충진제를 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 첨가하여, 조성물의 양을 증가시킬 수 있다. 또한, 전분, 겔라틴, 슈크로즈, 포도당, 덱스트로즈, 당밀, 락토즈, 아카시아 검, 알지네이트 나트륨, 아일랜드 이끼 추출물, 판와르(panwar)검, 가티검(ghatti gum), 이사폴(isapol)껍질 고무풀, 카르복시메틸셀룰로오즈, 메틸셀룰로오즈, 폴리비닐피롤리돈, 비검(Veegum), 낙엽송 아라보갈락탄, 폴리에틸렌 글리콜, 에틸셀룰로오즈, 밀랍 등을 포함하나 이에 국한되지 않은 결합제를 조성물에 첨가하여 결찰 성질을 증가시킬 수 있다. 또한, 활석, 스테아레이트 마그네슘, 스테아레이트 칼슘, 스테아르산, 수소화된 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 벤조에이트 나트륨, 염화나트륨, 루이신, 카르보왁스, 라우릴 설페이트 나트륨, 라우릴 설페이트 마그네슘등을 포함하나 이에 국한되지 않는 윤활제를 첨가할 수 있다. 또한, 분말 조제물의 유동 성질을 개선시키기 위해 콜로이드성 이산화 실리콘 또는 활석등을 첨가시킬 수 있다. 마지막으로, 전분, 점토, 알긴, 검, 교차결합제(가령, 크로스아르멜로즈, 크로즈포비돈, 글리콜레이트 전분 나트륨), 비검, 메틸셀룰로오즈, 한천, 벤토나이트, 셀룰로오즈, 나무 생성물, 천연 스폰지, 음이온 교환 수지, 알긴산, 구아르검, 시트러스 펄프, 카르복시메틸셀룰로오즈 또는 라우릴 설페이트 나트륨 및 전분 등을 포함하나 이에 국한시키지 않는 분해제를 첨가하여 내장에서 조제물이 분해될 수 있도록 한다.

본 발명의 적절한 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산으로부터 보호받을 수 있도록 보호 물질과 함께 조제된다. 좀더 적절한 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 장용피한다. 장용피는 위장에서는 그대로 유지되나, 일단 소장에 도달하면 약량의 내용물이 용해 및 방출된다. 대다수의 장용피는 위장에 있는 극도로 낮은 pH 가령 pH 1.5 내지 2.5에서 산성기가 이온화되지 않고, 코팅은 분해되지 않고, 불용성인 형태로 남아있는 산성기를 가지는 성분으로 만든다. pH가 높아지면, 가령 내장의 환경에서는 장용피는 이온화된 형으로 전환되어, 용해됨으로써, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 방출한다. 다른 장용피는 소장의 효소에 의해 이들이 분해될 때까지 원래대로 유지되고, 다른 것들은 수분에 노출되면 이들은 분해되어, 코팅은 소장을 통과할 때 가지 원래대로 유지된다.

장용피를 만드는데 유용한 중합체에는 셀렉, 전분, 아밀로즈 아세테이트 프탈레이트, 스티렌-말레산 혼성 중합체, 셀룰로오즈 아세테이트 숙시네이트, 셀룰로오즈 아세테이트 프탈레이트(CAP), 폴리비닐아세테이트 프탈레이트(PVAP), 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 프탈레이트(등급 HP-50 and HP-55), 에틸셀룰로오즈, 지방, 부틸 스테아레이트, 산 이온화가능한 기("EUDRAGIT^TM")를 가지는 메타아크릴산-메타아크릴산 에스테르 혼성중합체 가령, "EUDRAGIT^TML 30D", "EUDRAGIT^TMRL 30D", "EUDRAGIT^TMRS 30D", EUDRAGIT^TML 100-55등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다. 적절한 구체예에서, 제약학적 조성물은 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 장용피 중합체 "EUDRAGIT^TML 30D", 메타아크릴산과 메틸 아크릴레이트 혼성 중합체(평균 분자량이 250,000달톤)으로 구성된다.

이용되는 장용피의 형태에 따라서, 내장 효소에 의한 가수분해 또는 담즙염에 의한 에멸젼화 및 분산등으로 장용피가 분해된다. 예를 들면, 에스테라제는 에스테르부틸 스테아레이트를 부탄올과 스테아르산으로 가수분해시켜, 부탄올은 용해되고, 약물로부터 스테아르산이 방출된다. 추가로, 담즙염은 에틸셀롤로오즈, 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 지방 및 지방 유도체를 유화시켜, 분산시킨다. 다른 형태의 장용피는 수분과 접촉하는 시간에 따라 제거될 수 있는데, 예를 들면, 분말형 카르나우바 왁스, 스테아르산, 한천 및 느릅나무 껍질로 된 식물성 섬유로 만든 장용피의 경우에 식물성 섬유는 수분을 흡수하여, 팽창한 후에, 파열된다. 장용피의 두께, 식물성 섬유와 밀랍의 비율에 따라 분해되는데 필요한 시간이 달라진다.

장용피를 제공하는 당분야에 공지된 기술을 이용하면, 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 장용피를 제공할 수 있다. 예를 들면, 5 내지 10% w/w 중합체를 포함하는 유기 용매계 용액을 이용하여 분무 방법으로 장용피를 제공하거나 최고 30% w/w 중합체를 포함하는 유기 용매계 용액을 이용하여 팬 코팅 방법으로 장용피를 제공하나 이에 국한시키지는 않는다. 흔히 사용되는 용매로는 아세톤, 아세톤, 에틸 아세테이트 혼합물, 염화메틸렌/메탄올 혼합물, 이들 용매를 포함하는 3차 혼합물등이 있으나 이에 국한시키지는 않는다. 일부 장용피 고분자 예를 들면 메타아크릴산-메타아크릴산 에스테르 혼성중합체("EUDRAGIT^TM")는 물을 용매로 사용하여 제공한다. 끈기로 인하여 달라붙는 것을 막고, 성급한 건조 또는 용매가 증발되고 중합체가 침전되어 발생되는 코팅에 구멍이 생기는 것을 막기위해 용매계 휘발성 정도를 조절해야 한다.

또한, 코팅 필름이 갈라지는 것을 방지하기 위해 장용피에 가소제를 첨가할 수 있다. 적절한 가소제에는 디에틸 프탈레이트, 아세틸화된 모노글리세리드, 트리에틸 시트레이트/폴리에틸 글리콜트리부틸 시트레이트, 트리아세틴과 같은 저분자량 프탈레이트 에스테르를 포함한다. 일반적으로, 가소제는 장용피 중합체 중랭의 10%정도의 농도로 첨가된다. 유화제 가령, 계면활성제, 시메티콘등과 같은 다른 첨가제, 활석과 같은 분말을 장용피에 첨가하여, 코팅의 강도 및 연성도를 개선시킬 수 있다. 또한 색소를 장용피에 참가하여 제약학적 조성물에 색을 제공할 수 있다.

적절한 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물로 된 제약학적 조성물은 경질 젤라틴 캡슐내에 장용피된 비드의 형태로 만들어진다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 하이드록시메틸셀룰로오즈와 혼합하고, 혼합물을 nonpareil 씨앗(슈가 구체)에 얹어서 프로안토시아니딘 중합체 비드를 만든다. 그 다음 비드는 오파드라이 클리어[Opadry Clear] 밀봉 코트(물과 혼합된)으로 덮는다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 코팅할 수 있는 적절한 장용피로는 "EUDRAGIT^TML 30D"인데, 이는 0.7% 라우릴 설페이트 나크륨 NF(SLS), 유화제로써 2.3% 폴리소르베이트 80NF(Tween 20)를 포함하는 30%w/w 건조 중합체 물질을 포함하는 수용성 분산액이고, 이에 코팅의 탄성을 개선시키기 위해 가소제, 폴리에틸렌 글리콜, 시트르산 에스테르등이 첨가되고, 과정동안에 장용피 중합체가 교착하는 것을 감소시키고, 필름의 연성을 증가시키기 위해 활석이 첨가된다. 장용피된 비드의 최종 조성물은 17.3%w/w nonpareil 씨앗, 64.5%w/w 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 1.5%w/w 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 0.5%w/w 오파드라이 클리어, 14.5%w/w "EUDRAGIT^TML 30D", 1.45%w/w 트리에틸 시트레이트, 0.25%w/w 글리세릴 모노스테아레이트이다. 이와 같은 제약학적 조성물은 8.1에서 설명하는 방법 또는 당분야에 공지된 임의 방법을 통하여 제조할 수 있다.

또 다른 적절한 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 제약학적 조성물 조성물은 장용피된 과립 또는 분말(미소구로 직경이 300-500μ임) 형태로 제조될 수 있는데, 이들은 경질 젤라틴 캡슐 또는 아동에게 투여하기 위해, 경구용 용액에 현탁될 수 있다. 장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물 분말 또는 과립은 특히 어린이에게 투여할 경우 음식물과 혼합한다. 이와 같은 조제물은 단락 8.2에서 설명하는 방법과 같은 당분야에 공지된 기술을 이용하여 준비할 수 있다. 일반적으로, 프로안토시아니딘 중합체 조성물 입자 및 분말은 당분야에 공지된 임의 방법을 이용하여 제조할 수 있는데, 가령, 결정화방법, 분무-건조 또는 임의 복합 방법 특히 고속 믹서/입상화기를 이용하여 제조할 수 있으나 이에 국한시키지는 않는다. 고속 믹서/과립화기를 예로 들면 "LITTLEFORD LODIGE^TM"믹서, "LITTLEFORD LODIGE^TM" MGT 믹서, "GRAL^TM" 믹서등이 있다. 고전단으로 분말을 혼합하는 동안에 결합제로 불리는 과립화 물질 용액을 분말 위에 분무하여, 분말 입자가 응겨 더 큰 입자 또는 과립을 형성하게 한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 만드는데 유용한 입상화제에는 셀룰로오즈 유도체(카르복시메틸셀룰로오즈, 메틸셀룰로오즈, 에틸셀룰로오즈를 포함), 젤라틴, 포도당, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 전분 풀, 소르비톨, 슈크로즈, 덱스트로즈, 당밀, 락토즈, 아카시아검, 알지네이트 나트륨, 아일랜드 이끼 추출물, 판와르 검, 가티검, 이사폴 껍질 점액, 비검(Veegum), 낙엽송 아라보갈라틴, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다. 과립화제는 입자 또는 분말의 양에 약 1 내지 30%범위의 농도에서 첨가될 수 있다.

유동화된 베드 장비를 이용하여 프로안토시아니딘 중합체 조성물 분말 또는 입자를 적절하게 코팅할 수 있다. 입자 또는 분말은 아파드라이 클리어(물과 혼합된)로 밀봉 코팅한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 경우에 적절한 장용피는

"EUDRAGIT^TML 30D"인데, 이는 0.7% 라우릴 설페이트 나크륨 NF(SLS), 유화제로써 2.3% 폴리소르베이트 80NF(Tween 20)를 포함하는 30%w/w 건조 중합체 물질을 포함하는 수용성 분산액이고, 이에 코팅의 탄성을 개선시키기 위해 가소제, 폴리에틸렌 글리콜, 시트르산 에스테르등이 첨가되고, 과정동안에 장용피 중합체가 교착하는 것을 감소시키고, 필름의 연성을 증가시키기 위해 활석이 첨가된다. 장용피된 비드의 최종 조성물은 81.8%w/w 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 1.5%w/w 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 0.5%w/w 오파드라이 클리어, 14.5%w/w "EUDRAGIT^TML 30D", 1.45%w/w 트리에틸 시트레이트, 0.25%w/w 글리세릴 모노스테아레이트이다. 장용피된 과립의 최종 조성물은 81.8%w/w 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 1.5%w/w 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 0.5%w/w 오파드라이 클리어, 14.5%w/w "EUDRAGIT^TML 30D", 1.45%w/w 트리에틸 시트레이트, 0.25%w/w 글리세릴 모노스테아레이트이다.

장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물 입자 또는 분말 입자는 경구용 특히, 어린이들에게 투여하기 위해 용액에 현탁시킬 수 있다. 용액에 농후제, 보호성 콜로이드를 첨가하여, 용액의 점성을 증가시켜 장용피된 분말 또는 입자가 너무 빨리 가라앉는 것을 방지하여 현탁액을 만들 수 있다. 분자 상호작용을 통하여 현탁된 입자 주변에 형성된 수화층 강도를 증가시키고, 프로안토시아니딘 중합체 조성물과 제약학적으로 필적할 수 있는 임의 물질을 농후제로 이용할 수 있는데, 예를 들면, 젤라틴, 천연 검(가령, 트라가탄, 산탄, 구아르, 아카시아, 판와르, 가티등), 셀룰로오즈 유도체(카르복시메틸셀룰로오즈, 하이드록시프로필셀룰로오즈, 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈)등이 있으나 이에 국한시키지는 않는다. 선택적으로 Tween과 같은 계면활성제를 첨가하여, 농후제의 작용을 개선시킬 수 있다. 적절한 현탁 용액은 0.2% Tween을 포함하는 물에 2%w/w 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 용액이 된다.

또 다른 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 장용피 정제로 만들 수 있다. 이 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 프로안토시아니딘 중합체 조성물 과립을 준비하는데 사용된 방법으로 임의 제약학적 수용 가능한 희석제(상기에서 언급한 것과 같은)으로 과립화시킬 수 있다. 그 다음, 과립은 당분야에 공지된 임의 기술을 이용하여 압착하는데 예를 들면, 습식 과립화 방법, 건조 과립화 방법 또는 직접 압착 방법 등을 이용하나 이에 한정시키지는 않는다. 적절한 희석제는 미소결정 셀룰로오즈("AVICEL^TMPH 200/300")이다. 추가로, 상기에서 언급한 것과 같은 분해제, 상기에서 언급한 것과 같은 윤활제를 정제 조성물에 첨가할 수 있다. 적절한 정제 조성물에는 250㎎ 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 7㎎ 분해제 "AC-DI-SOL^TM"(교차결합된 카르복시메틸셀룰로오즈 나트륨), 1.75㎎ 윤활제 스테아레이트 마그네슘을 포함하고, 혼합물을 만드는데 필요한 "AVICEL^TMPH 200/300"의 중량은 최고 350㎎이 된다. 정제는 250 grams "EUDRAGIT^TML 30 D-55", 7.5grams 트리에틸 시트레이트, 37.5 grams 활석 및 205 grams 물로 만든 장용피 혼합물로 코팅한다. 이와 같은 조제물은 당분야에 고지된 방법 또는 8.3에서 설명하는 방법으로 준비할 수 있다.

유동화된 베드 고정을 이용하여 작은 입자(마이크로미터 크기의 입자, 마이스코스페어, 마이크로캡슐 등을 포함), 과립(밀리미터 크기의 입자를 포함), 약물 결정, 펠렛, 알약, 마이크로비드로 만들어진 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 피복할 수 있다. 이 공정은 "GLATT^TM", "AEROMATIC^TM", "WURSTER^TM" 또는 다른 장치등에서 공급하는 것과 같은 유동화된 베드 장치를 이용하는데, 이들 장치에 의해 프로안토시아니딘 중합체 조성물 코어는 밀폐된 실린더형 용기에서 아래로 들어오는 기류에 의해 소용돌이 치고, 유동화 시간동안에 코어에 분무 건조시켜, 장용피를 얻을 수 있다. 정제 또는 캡슐을 피복시키기 위해, Accela-Cota 공정("MANESTY^TM")을 이용할 수 있다. 이 공정에 의해, 정제 또는 캡슐은 천공된 재킷이 있는 회전 실린더 코팅 팬에 두고, 분무 유닛은 팬에 내장되어, 정제 또는 캡슐을 회정시키면서 건조 공기를 끌어 당긴다.

또 다른 형태의 임의 코팅 팬 가령, "GLATT^TM" 침잠 검 공정, "DRIAM^TM" 드라이코트(Dricoater), "STEINBERG^TM" 장비, "PELLEGRINI^TM" 장비 또는 "WALTHER^TM"장비등을 이용할 수 있다.

또 다른 적절한 구체예에서, 직장으로 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 투여하기 위해 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 좌약 형태로 제공된다. 좌약을 만드는데 이용되는 제약학적 수용 가능하고, 프로안토시아니딘 중합체 조성물과 필적할 수 있는 임의 물질로 제조할 수 있다. 직장으로 투여하는 경우에는 위장의 산성 환경에 노출되지 않기 때문에, 직장 투여용 제약학적 조성물은 조성물을 산으로부터 보호하기 위한 조제를 할 필요는 없다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 좌약을 만드는데 필요한 좌약 베이그에는 코코아 버터, 글리세린화된 젤라틴, 수화된 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜 지방산 또는 글리콜-계면활성제 복합물 또는 비이온성 계면활성제 물질(폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르(Tweens), 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 소르비탄 지방산 에스테르 혼합물 등을 포함할 수 있으나, 이에 국한시키지는 않는다(Span and Arlacel). 그러나, 프로안토시아니딘 중합체 조성물 조성물의 친수성 성질로 인하여, 좌약용으로 친수성 염기를 제시한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물용 적절한 좌약 조성물은 91g 글리세린, 9g 스테아레이트 나트륨, 5g 정제된 물로 만들고, 이는 5% 내지 50% w/w 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 될 수 있다. 또는, 좌약에는 10g 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 20g 젤라틴, 70g 글리세린을 포함할 수 있다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물로 만든 좌약은 몰딩, 융합 또는 용융 몰딩등을 포함하는 공지의 방법으로 모양을 만들 수 있다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물로 좌약을 준비하는 방법은 하기 단락 8.4에서 설명하고 있다.

또 다른 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산을 중화시키는 화합물과 함께 조제할 수 있다. 또는, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산을 중화시키는 제약학적 조성물과 동시에 또는 연속적으로 투여할 수 있다. 위산을 중화시키는데 유용한 안타시드와 같은 화합물에는 탄산 알루미늄염, 탄산 칼슘염, 중탄산 하이드록시알루미늄 나트륨, 마갈드레이트, 탄산 마그네슘, 수산화 마그네슘, 산화 마그네슘, 이의 혼합물을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다.

또 다른 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산 분비를 방해하는 조성물과 함께 제조할 수 있다. 또는 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산 분비를 저해하는 제약학적 조성물과 동시에 또는 연속적으로 투여할 수 있다. 위산 분비를 저해시키는데 유용한 화합물에는 라니티딘, 니카티딘, 파모티딘, 시메티딘 및 미소프로스톨등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다.

5.3. 이용 방법

프로안토시아니딘 중합체 조성물은 분비성 설사를 수반하는 유체 손실 및 탈수를 일으키게 되는 내장 상피 세포를 가로질러 염소 이온의 유동을 감소시키고, 내장 관간으로 유체가 이동되는 것을 감소시킨다. 따라서, 본 발명의 제약학적 조성물 및 방법은 분비성 설사 특히 분비성 설사에 수반되는 수분 손실 및 탈수를 예방하는 예방 및 치료 방법에 유용하다.

프로안토시아니딘 중합체 조성물로 된 제약학적 조성물은 사람 또는 동물에서 분비성 설사에 대한 치료 및 예방용으로 이용된다. 적절한 구체예에서, 제약학적 조성물은 장내균에 의한 분비성 설사를 치료하는데 이용된다. 이와 같은 장내균에는 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae), 장병연성, 장독성, 장흡착성, 장출혈성, 장침투성형태의 대장균을 포함하는 대장균(E. coli), 다른 비브리오 종(Vibrio spp), 캄필로박터종(Campylobacter spp)., 살모넬라 종(Salmonella spp)., 에어로모나스 종(Aeromonas spp)., 플레시모나스 종(Plesimonas spp)., 쉬겔라 종(Shigella spp)., 클렙스엘라 종(Klebsiella spp)., 시트로박터 종(Citrobacter spp)., 에르시니아 종(Yersinia spp)., 클로스트리듐 종(Clostridium spp)., 박테로이드 종(Bacteriodes spp)., 스타필로코커스 종(Staphylococcus spp)., 바실러스 종(Bacillus spp)등을 포함하나 이에 국한시키지는 않는다. 또한 이구체예에서는 여행자 설사를 치료하는 것도 포함한다.

또 다른 구체예에서는 제약학적 조성물을 이용하여 지아르디아(Giardia), 크립토스포리듐 파르붐(Cryptosporidum parvum)과 같은 프로토조아에 의한 분비성 설사를 치료한다.

또 다른 구체예에서는 비-감염성 병인 예를 들면, 비-특이적 설사, 장염 증후군, 궤양성 결장염, 암, 위장관 신형성증에 의한 분비성 설사를 치료하는데 이용된다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 AIDS 환자에서 HIV-관련 만성 설사를 치료하는데 이용된다. 또 다른 구체예에서, 제약학적 조성물은 로타바이러스에 의한 설사를 포함하는 영아 또는 어린이에서 설사를 치료하는데 이용된다.

본 발명의 제약학적 조성물은 소, 돼지, 양(양과 같은 동물), 가금류(닭), 말 등의 농장 동물, 말 뿐만 아니라 다른 가정에서 키우는 동물 가령, 고양이 및 고양이과 동물등의 사람이 아닌 동물에서 설사를 치료하는데 이용된다. 특히, 본 발명의 제약학적 조성물은 사람이 아닌 동물, 특히 소, 양, 돼지 등에서 장내독소, 장출혈등과 같은 세균성 병인균, 다른 대장균(E. coli), 살모넬라 종(Salmonella spp)., 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)., 박테로이드 프라질리스(Bacteriodes fragilis)., 캄필로박터 종(Campylobacter spp)., 에르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)., 크립토스포리듐 파르붐(Cryptosporidum parvum)과 같은 프로토조아 병인균, 바이러스 물질, 특히 레트로바이러스 및 코로나바이러스, 타가바이러스, 파르보바이러스, 칼리치바이러스, 아데노바이러스, 브레다바이러스, 아스트로바이러스등을 포함한다.

또는, 본 발명의 제약학적 조성물을 이용하여, 분비성 설사가 발생되는 것을 방지하기 위해 사람 및 사람이 아닌 동물에 예방차원으로 투여할 수 있다. 예를 들면, 프로안토시아니딘 중합체 제약학적 조성물을 여행자 설사를 유발시킬 수 있는 여행지로 떠나는 여행자에게 질병을 예방하는데 효과적인 시점에서 투여하는 것이다. 본 발명의 제약학적 조성물은 HIV-관련된 만성 설사가 발생되는 것을 방지하기 위해 AIDS 환자에세 투여할 수 있다. 또는, 본 발명의 제약학적 조성물은 질병이 만연되는 것을 방지하기 위해, 콜레라 또는 로타바이러스가 만연하는 지역사회의 어린이에게 투여할 수 있다. 유사하게, 본 발명의 제약학적 조성물은 농장 동물, 특히, 어린 또는 최근에 약해진 동물에 투여하여, 설사 질환이 발생되는 것을 방지할 수 있다.

설사를 치료하기 위해 본 발명의 제약학적 조성물 및 이를 이용하는 방법에 따라, 경구 투여의 경우 프로안토시아니딘 중합체 조성물로 된 제약학적 조성물의 효과적인 약량은 하루에 0.1 내지 100㎎/㎏, 적절하게는 0.1 내지 약 40㎎/㎏, 선택적으로 0.1 내지 25㎎/㎏, 또는 0.1 내지 10㎎/㎏가 된다. 적절한 약량은 분비성 설사의 정도 및 형태에 따라 달라진다는 것을 인지할 것이다. 사람은 최고 2일간 하루에 프로안토시아니딘 중합체 조성물 최고 2g(25-30㎎/㎏/day)에 대해 내성을 가지는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 약량은 하루에 40㎎/㎏ 최고 100㎎/㎏까지 과도하게 사용할 수 있으나, 단 이와 같은 약량이 설사를 치료하는데 필수적인 경우에 한한다.

설사를 예방하기 위해, 본 발명의 조제물 및 방법을 이용하는 경우에, 경구 투여의 경우, 프로안토시아니딘 중합체 조성물로 된 제약학적 조성물의 효과적인 약량은 하루에 0.1 내지 100㎎/㎏, 적절하게는 0.1 내지 약 40㎎/㎏, 선택적으로 0.1 내지 25㎎/㎏, 또는 0.1 내지 10㎎/㎏가 된다. 적절한 약량은 예방할 분비성 설사의 정도 및 형태에 따라 달라진다는 것을 인지할 것이다. 사람은 최고 2일간 하루에 프로안토시아니딘 중합체 조성물 최고 2g(25-30㎎/㎏/day)에 대해 내성을 가지는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 약량은 하루에 40㎎/㎏ 최고 100㎎/㎏까지 과도하게 사용할 수 있으나, 단 이와 같은 약량이 설사를 예방하는데 필수적인 경우에 한한다.

임의 치료요법적 수용 가능한 제약학적 조성물의 형에서, 분비성 설사를 치료 또는 예방하기 위해 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 투여할 수 있다. 구강으로 투여되는 제약학적 조성물은 약물 결정, 과립, 소립자(마이크로미터 크기의 입자 가령, 미소구 및 마이크로캡슐), 과립(밀리미터 크기의 입자), 비드, 마이크로비드, 펠렛, 알약, 미정제, 압착 정제 또는 정제 저작물, 주형 정제 또는 정에 저작물의 형태가 될 수 있고, 캡슐의 경우에는 경질 및 연질이 되고, 조성물은 분말, 과립, 비드, 용액 및 현탁액의 형태로 포함된다. 제약학적 조성물은 또한 용액 또는 수용액에 현탁액으로 제조될 수 있고, 액체가 결합된 겔 캡슐 또는 투여할 수 있는 임의 통상 조제물로 제조될 수 있고, 직장 투여를 하기 위해서는 좌약 또는 관장제 또는 다른 통상적인 형태가 될 수 있다.

적절한 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 장용피된 제약학적 조성물은 설사를 치료 또는 예방하기 위해 투여할 수 있다. 적절한 장용피 조성물에는 경질 젤라틴 캡슐에 포함된 장용피 비드, 경질 젤라틴 캡슐에 포함된 장용피된 미소구, 음식물에 혼합된 또는 현탁된 장용피 미소구(이와 같은 제조물은 어린이에게 투여하기에 적합), 장용피된 압착 정제 등을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물과 위산을 중화시키는 또는 위산 분비를 저해시키는 화합물을 포함하는 제약학적 조성물은 분비성 설사를 치료하기 위해 투여할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산을 중화시키는 또는 위산 분비를 저해하는 화합물과 동시에 또는 연속하여 투여함으로써 분비성 설사를 치료할 수 있다. 또한 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 직장으로 투여하기 위해 좌약형태로 제조될 수 있다.

본 발명의 제약학적 조성물은 분비성 설사를 치료 또는 완화시키기 위해 단독으로 또는 다른 화합물과 복합하여 사용할 수 있는데, 가령, 재수화제, 항생제, 항-운동제, 유체 흡수제 가령 attapilgite등을 이용할 수 있다.

본 발명의 제약학적 조성물은 소, 돼지, 양, 가금류, 말, 개 및 고양이과 동물에서 분비성 설사를 치료하기 위해 사료에 혼합시킬 수 있다.

다음의 본 발명을 설명하기 위한 실시예를 제공하는데, 이에 본 발명을 국한시키는 의도가 아님을 인지할 것이다.

실시예 6.

C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 모방 위산, 모방 내장 유체, 염산의 영향

C. lechleri에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 구강투여한 후에, 사람 또는 동물 혈장 샘플에서는 중합체 또는 이의 유도체도 감지되지 않았다. 그러나, 정맥으로 투여하였을 경우에는 동물의 혈정에서 중합체가 감지되어 정량화하였다. 이는 경구 투여시에 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위장에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물로부터 유도된 화합물로 변형되어, HPLC 방법으로 감지할 수 없고, 이것이 순환계로 흡수되는다는 설이다. 두 번째 가능성은 위장에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 그대로 흡수되고 흡수된 다음에 빠르게 변형될 가능성이다. 또 다른 가능성은 분자량이 큰 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위 또는 장에서 흡수되지 않는다는 것이다.

따라서, C. lechleri에서 구한 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 대해 HCl, 모방 위산, 모방 장액에서 안정성에 대해 연구를 하였다. 이들 조건은 소화기관의 화학적인 조건에 상응하도록 선택된 것이다. HCl에 배양하면, 몇분안에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 농도가 약 25% 감소되었다. 모방 위산(SGF)에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 배양하면 수분 안에 약 32%가 감소되는 유사한 결과를 얻었고, 배양후 2시간 후에는 48%가 감소되었다. HCl에 배양 후에 관찰되는 손실과 비교하였을 때, 모방 위산에 배양 후에 관찰되는 추가적 손실은 모방 위산에 있는 펩신에 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 결합하기 때문인 것으로 보인다. 모방 위산에 배양한 후에, 프로안토시아니딘 중합체 조성물-모방 위산 혼합물은 모방 장 유체와 배양하였을 경우에는 농도가 눈에 띄게 감소되지는 않았다.

6.1 재료 및 방법.

경구 투여한 후에, 약물은 약 2 내지 3시간동안 위액과 접하게 되고, 그 다음 위액과 약물은 십이지장에서 장액이과 신속하게 혼합된다. 따라서, in vivo 조건을 가장 잘 흉내내기 위해, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 우선 모방 위산에 2시간동안 배양시키고, 그 다음 모방 내장 유체와 1:1비율로 희석하고, 추가로 37℃에서 6시간 배양한다. 또한, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 모방 위산(SGF), HCl 또는 물과 37℃에서 배양한다. 각 처리 군에서 상이한 시간별로 취한 샘플은 HPLC로 적량한다.

테스트 혼합물과 샘플 준비:

1. USP XX, p1105에 따라 모방 위산(SGF)은 염화나트륨 2.0g, 펩신(돼지 위 점막에서 구함) 3.2g을 7.0㎖ 염산, 충분한 양의 물(HPLC grade, Fisher)에 용해시켜, 1000㎖을 만들면 된다. 이와 같은 테스트 용액의 pH는 약 1.2이다.

2. USP XX, p1105에 따라 모방 장액(SIF)은 인산 칼륨 일염기 6.8g을 물 250㎖에 용해시키고, 190㎖ 0.2N 수산화나트륨 및 400㎖물에 첨가한다. 그 다음 10.0g 판크레아틴(돼지 췌장, Sigma)을 첨가하고, 혼합하여, 생성된 용액의 pH는 0.2N NaOH로 pH 7.5+/-0.1이 되도록 한다. 용액은 물로 희석하여, 1000㎖이 되도록 한다.

3. 염산(pH=1.7)은 800㎕ 12N 염산을 100㎖ 물에 첨가하여 준비한다.

4. 프로안토시아니딘 중합체 조성물 원액은 C. lechleri에서 구한 1.0g 프로안토시아니딘 중합체 조성물 중합체를 증류수 10㎖에 용해시켜 준비한다.

과정

프로안토시아니딘 중합체 조성물 원액 조성물은 SGF 또는 정제수를 이용하여 1:20(총 용적은 10㎖)으로 희석한다. 테스트 용액은 37℃ 오븐에 배양을 하면서, 0.03, 0.5, 2.0시간 간격으로 1㎖씩 취한다. 14,000 rpm에서 10분간 취한 샘플을 원심분리하고, 700㎕ 상청액을 빼내고, 1N NaOH(50mM 인산나트륨 이염기를 포함)를 이용하여 pH를 7.0+/-0.1으로 조정한다. 2시간 배양 종료시점에서, SIF를 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 1:1비율로 첨가하고, pH는 7.0+/-0.1가 되도록 조정한다. 몇 방울의 샘플을 취하여, SGF와 처음 혼합한 후에, 2, 2.5, 4, 6시간대에서 상기에서 설명하는 과정과 같이 처리한다. 중화된 상청액은 테트라하이드로퓨란(HPLC 등급, Fisher)으로 1:9로 희석한다. 샘플은 Hewlett Packard 1050 High Performance Liquid Chromatograph에서 5m PLgel 500A column(Polymer Laboratories)(300 × 7.5㎜)와 5m 가드 컬럼(50 ×7.5㎜)을 이용하여, 이동상으로는 95% 테트라하이드로퓨람 및 5% 물을 이용하여, HPLC를 하는데, 이때 주입 용적은 50㎖이고, 유속은 1㎖/min이고, 실시 시간은 11분이다. 280㎚에서, UV 흡수도를 검사하여, 프로안토시아니딘 중합체를 감지한다.

6.2. 결과 및 토론

프로안토시아니딘 중합체 조성물을 정량화하는데 이용되는 HPLC 방법에는 단백질에 결합된 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 제외한 결합안된 또는 "자유" 프로안토시아니딘 중합체 조성물 중합체의 측정하거나 이의 유도체 또는 이온 교환을 포함하지는 않는다. 또한, HPLC 크로마코그래피는 280㎚에서 크기 또는 몰 상계 인자에 영향을 주지 않는 화학적 변화가 아닌 프로안토시아니딘 중합체의 분자 크기에 변화(중합 또는 분해)를 감지하는 크기 압출 크로마토그래피에 기초한 것이다.

프로안토시아니딘 중합체 조성물에서 HCl의 효과

in vitro에서 C. lechleri에서 구한 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 HCl(위산의 주요 성분)의 효과를 테스트하기 위해, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 pH 1.2의 HCl에 2시간동안 배양시켰다. 0.03, 0.5, 2.0시간에 샘플을 취하고, HPLC를 이용하여 분석하였다. HCl에 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 HPLC프로파일의 피크 면적은 물에서 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 HPLC 프로파일의 피크 면적과 비교하였다(표 1).

프로안토시아니딘 중합체 조성물에서 염산(pH 1.7)의 효과(PH = 1.7)

시간, h	Sample #1% 피크 면적	Sample #2% 피크 면적	평균(n=2)
0.03	94	67	81
0.5	73	71	72
2.0	77	70	74

*피크 면적%는 테스트 배지에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 프로파일 피크면적을 물에서의 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 피크면적(기준)으로 나누고, 100을 곱하여 계산한다.

결과에서, HCl에 0.03시간 배양한 후에, 프로안토시아니딘 중합체 조성물 프로파일의 피크 면적 즉 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 농도는 19%정도 감소하였다. HCl과 0.5시간 및 2.0시간동안 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 피크 면적은 각각 28%, 26% 감소되었다. 이들 결과에서, HCl에 노출되어 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 감소되는 대부분 시기는 배양후 처음 2-3분 이내가 된다.

도 1은 물, HCl(0.03시간), HCl(2.0시간)에 배양한 후에, 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 샘플 크로마토그래피를 나타낸다.

HCl에서 2시간동안 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물 프로파일의 피크 면적에 명백한 감소에 추가하여, 숄드의 보유 시간이 눈에 띄게 변환되었음을 알 수 있다. HCl에 조성물을 배양한 후에 5.8 내지 6.2분이내에 숄드의 보유 시간에서 관찰되는 변이는 HCl이 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 분자량이 조금 적은 소단위(모 화합물보다 보유시간이 더 긴)로 분해시키기 때문인 것으로 해석할 수 있다.

프로안토시아니딘 중합체 조성물에서 SGF의 효과

C. lechleri에서 구한 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 SGF에 첨가하면, 혼합물은 불투명한 붉은 색 침전물을 형성한다. 침전물이 펩신 또는 염화나트륨으로 인한 것인가를 결정하기 위해, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 SGF(염화나트륨없음) 또는 SGF(펩신없음)에 최종 농도가 5㎎/㎖이 되도록 첨가한다. 샘플은 10분간 14,000rpm에서 원심분리한 후에, 펩신만을 포함하는 혼합물은 불투명한 적색 침전물을 형성하게 되는데, 이는 침전이 펩신을 가지는 프로안토시아니딘 중합체 조성물과의 상호작용으로 인한 것이라는 것을 설명하는 것이다.

SGF에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 2분(0.03시간) 배양한 후에, HPLC 분석에 따르면, 프로안토시아니딘 중합체 조성물 프로파일의 피크 면적이 약 32% 감소되었음을 알 수 있다. 37℃에서 0.5시간, 2.0시간 샘플을 배양하면, 프로안토시아니딘 중합체 조성물 프로파일의 피크 면적이 상당한 변화가 없다는 것을 알 수 있다. SGF에 2분 및 2시간동안 배양된 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 크로마코그래피는 각 도 2와 도 3에 나타내었고, 이 실험의 데이터에서 피크 면적은 표 2에 나타내었다.

in vitro에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물에서 SGF의 효과

시간, h	Sample #1% 피크 면적	Sample #2% 피크 면적	평균(n=2)
0.03	59	76	68
0.5	70	67	69
2.0	54	49	52
6.0	45	55	50

프로안토시아니딘 중합체 조성물 농도가 감소되는 대부분이 SGF에 노출된 후에 2분이내에 발생된다. 또한, HPLC에 의해 감지하였을 경우에 프로안토시아니딘 중합체 조성물 농도가 감소되는 것은 SGF에서 산에 의한 감소와 SGF에있는 펩신에 결합되는 복합 효과로 인한 것이다.

SGF 용액에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 첨가한 후에 곡선 아래 면적이 급격하게 감소되는 것은 도 4와 5에서 설명하는데, 이는 SGF에서 2분 및 2시간 배양한 후에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 샘플 크로마토그래피를 나타낸 것이다.

프로안토시아니딘 중합체 조성물에서 SIF의 영향

소장에서 C. lechleri에서 구한 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 운명을 더 잘 이해하기 위해, in vitro에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 대해 내장 유체의 영향을 조사하였다. in vivo조건에 가장 근접하도록 하기 위해, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 우선 모방 위산으로 2시간동안 배양하고, 그 다음 모방 내장 유체와 1:1로 혼합하고, 그 다음 37℃에서 추가 6시간동안 배양한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물-SGF 용액에 SIF를 첨가한 후에 다양한 시간간격에서 샘플을 취하여 HPLC로 분석한다. 대표적인 크로마토그래피는 도 4와 5에 나타낸다. 그 결과는 표 3과 도6에 나타내었는데, 이는 SIF가 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 양을 감소시키는데 별 영향을 주지 않는다는 것을 말한다.

SGF에서 2시간 배양한 후에, SIF로 1:1희석한 후 추가 4시간동안 배양한 경우에 SIF와 SGF-프로안토시아니딘 중합체 조성물의 상호작용

시간, h	Sample #1% 피크 면적	Sample #2% 피크 면적	평균(n=2)
2.0	44	52	48
2.5	50	42	46
4.0	59	45	52
6.0	45	55	50

6.3. 결론

본 연구에서 테스트된 배양 조건은 C. lechleri에서 구한 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 미리 구강으로 투여한 후에 접하게 되는 조건과 유사하다. 희석된 HCl과 SGF와 조성물을 배양한 후 수분이내에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 일부(25-32%)이 손실되었다는 것을 알 수 있다. HCl과 배양한 후에 손실되는 양과 비교하였을 경우에, SGF에 배양한 후에 손실되는 양이 더 큰 것은 SGF에 있는 펩신에 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 결합되기 때문이다. 모방 유산에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 용액을 모방 장유체에 배양하였을 경우에, 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 눈에 띄게 감소되지는 않았다.

프로안토시아니딘 중합체 조성물를 분석하는데 이용되는 방법은 크기 압축 크로마코그래피이기 때문에, 여기에서 설명하는 결과를 해석하는데 주의를 요한다, 그 이유는 이 방법은 고유 프로안토시아니딘 중합체 조성물과 크기 변화가 없는 방법으로 화학적으로 변형된 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 분별할 수 없기 때문이다.

7. 실시예; 콜레라 독소로 처리된 쥐에서 유체 축적에 있어서, 장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 효과 평가

본 연구의 목적은 콜레라 독소(CT)로 처리된 쥐의 내장에서 장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물(Croton lechleri에서 구함)의 영향을 결정한다. 쥐에서 콜레라 독소에 의해 생성되는 유체 축적의 병리학적 메카니즘은 콜레라 독소 및 다른 세균성 독소에 의해 사람에서 생산되는 유체 축적으로 인한 메카니즘과 동일하다. 테스트 화합물에 의해 이 모델에서 축적되는 유체가 감소된다는 것은 화합물이 항-설사제로 이용한다는 것을 의미한다. 초기 시간(t₀)에, 쥐에 위관법으로 콜레라 독소(약 20g 체중당 15㎍)를 제공하고, 시아노-아실아미드 에스테르로 봉한다. 3시간 후(t₃h)에, 0.75% 구아르 검(운반체)에 현탁된 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물(131㎎/㎏) 단일 약량을 구강 위관으로 투여한다. 운반체에 동일한 농도의 "EUDRAGIT^TM"와 당을 포함하는 기준 용액과 물을 두 마리 기준 집단에 투여한다. 콜레라에 노출된 후 7시간(t₇h)에, 쥐를 죽이고, 맹장을 포함하는 유문에서 직장까지 전체 쥐 내장을 분리한다. 비록 유체 축적이 소장에서 이루어지지만, 전체 쥐 내장을 분리하는 이유는 일부 유체가 대장으로 누출되기 때문이다. 내장, 직장(맹장을 포함)에 축적되는 유체의 양과 내장의 양에 유체의 양을 뺀 비율로 측정할 수 있다. 실험 조건에서, 구강으로 투여되는 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 콜레라 독소로 처리한 밀봉한 성인 쥐의 내장에 유체 축적이 상당히 감소된 것으로 보인다. 용장피 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 구강으로 투여하는 경우에(131㎎/㎏) 물, "EUDRAGIT^TM/당/유체 기준"에서 평균 유체 축적 비율을 비교하면 각각 평균적으로 45%, 38% 감소되었다.

7.1 콜레라 독소 및 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 준비

다음의 물질은 각 회사에서 구입하였다; 콜레라 독소(List Biological Lab, lot # CVX-48-3D); 시아노-아크릴아미드 에스테르(Borden Inc., Columbus, OH); 동물 사료 공급용 바늘(Popper and Sons, Hyde Park, NY); 중탄산 나트륨(ACROS lot # 83559/1); 구아르 검(Sigma, lot # 94H0195); "EUDRAGIT^TML30D" (PMRS, lot # R10538); 40-60메쉬 당 입자(PMRS, lot # R10542).

콜레라 독소 원액을 만들기 위해, 1㎖ HPLC용 물(Mill Q)을 1㎎ 콜레라 독소를 포함하는 바이알에 첨가하고, 두 개의 다른 바이알을 모아서, 4℃에 저장한다. 동물에 투여하기 위한 콜레라 독소는 240㎕ 콜레라 독소를 560㎕ 7%w/vol NaHCO₃에 희석시켜 새로 만든다. NaHCO₃의 최종 농도는 4.9%이다. 처음(t₀)에, 구강 위간으로 15㎍ 콜레라 독소/50㎕ 용적을 각 쥐에 제공한다.

C. lechleri에서 구한 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물 조제물에는 17.3%(w/w) nonpareil 씨(sugar spheres, 46/60 mech)(Paulaur, lot # 60084060), 64.6% 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 1.5% 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈(HPMC, Dow Chemical Co., lot # MM9410162E), 0.5% 아파드라이 클리어(Colorcon, lot # S835563), 14.5% "EUDRAGIT^TML 30D"(Rohm Tech., lot # 1250514132), 1.45% 트리에틸 시트레이트(Morflex, lot # N5X291), 글리세릴 모노스테아레이트(Rohmm Tech, lot # 502-229), 정제수(USP)를 포함한다.

HPMC와 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 정제수(USP)에 첨가하고, 용해될 때까지 혼합하여 당 입자에 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 적층하는 용액을 만든다. 유체 상 프로세서(Niro-Precision Coater)의 장 생성물에 nonpareil 씨를 적하한다. 그 다음 프로안토시아니딘 중합체 조성물/HPMC 용액을 유동화된 nonpareil 씨에 분무하고, 표적이 되는 상의 온도는 30-35℃로 유지한다. 모든 용액이 제공될 때까지 적층 공정을 지속한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물 적층이 일단 완료되면, 오파드라이 클리어 밀봉 코트(정제수, USP로 오파드라이 코드를 혼합하여 만듬)를 제공하고, 표적 상의 온도는 30-35℃로 유지한다. 밀봉 코트를 제공할 때, 펠렛은 버리고, 1000μ내지 425μ스크린으로 스크린하고, 425μ이상 그리고 1000μ이하의 적층된 구는 유체 상 프로세서로 다시 충전한다. 한편, 장용피 코팅 용액은 지속적인 혼합을 하면서 65℃로 가열된 물에 트리에틸 시트레이트 및 글리세롤 모노스테아레이트를 첨가하여 만든다. 이 용액은 혼합하면서 "EUDRAGIT^TML 30D-55"에 첨가한다. 그 다음 생성된 장용피 코팅은 30-35℃에서 유동화된 상 프로세서에 적층 구에 분무하고 상에 모든 장용피 용액을 분무한다.

구강 위관을 실행하고, 비드의 즉각적인 침전을 방지하기 위해 농후제, 구아르 검을 이용한다. 100㎖ 0.7% 구아르검을 준비하고, 2㎖ 0.5 M HCl를 이용하여 pH를 2로 조정한다. 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물 중합체 조성물은 0.7% 구아르 검 용액에 현탁시킨다. 동일한 최종 농도의 "EUDRAGIT^TM"와 당으로 구성된 기준 용액은 0.7% 구아르 검 용액으로 준비한다.

7.2. 방법 및 결과

Richardson and Kuhn, 1986, Infect. and Immun. 54: 522-528에 따라 실험을 실행하는데, 50 내지 52일 된 수컷 쥐(체중이 15.7 내지 18.7g인)를 이용한다. 테스트 동물은 야생형 C57B1/6 쥐이고, Charles River Lab.에서 구하였다. 모든 동물은 실험하는 동안에 무제한으로 물을 제공하는 대사 우리에 유지시킨다. 쥐는 실험을 하기전과 실험을 하는 동안 24시간동안 금식시킨다. 초기(t₀h)에, 쥐에 위관으로 15㎍ 콜레라 독소를 제공하고, 시아노-아크릴아미드 에스테르(Superglue)로 봉한다. 3시간(t₃h)뒤에, 쥐에 구아르 검 용액 또는 기준 용액에 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물 현탁액을 제공한다. 콜레라 독소에 노출된 후 7시간 뒤에(t₇h), 쥐를 죽이고, 유문에서 맹장을 포함하는 직장까지 전체 쥐 내장을 분리하였다. 조직 파열 및 수분 손실이 되지 않도록 주위하고, 부착된 장간막 및 이에 포함된 유체의 양은 분석용 저울을 이용하여 결정한다. 그 다음 조직은 종축으로 개방하여 유체를 제거하고, 조직은 건조시킨다. 유체 축적량은 내장(맹장을 포함하는 조상 및 대장)에 축적된 유체의 양에 대한 유체 질량을 뺀 소장의 질량비로 나타낸다.

상이한 처리를 한 경우에 유체 축적 비율의 통계학적 분석은 마이크로소프트 엑셀(version 5.0)을 이용하여 분석한다. p<0.05의 p값을 이용하여 유의성을 결정한다. Duncan's multiple range test를 실행하여 물 또는 "EUDRAGIT^TM"+당/0.75% 구아르 검 용액을 수용한 쥐의 것과 비교하였을 때, 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 제공받은 쥐에서 발생되는 콜레라 독소에 의해 유도되는 유체 축적양이 감소되는 정도를 결정한다.

하기에서 설명하는 실험에서, 총 24마리(각 처리에 8마리)는 다음과 같이 처리한다;

Group A: t₀에 콜레라 독소를 쥐에 제공하고, t₃에 일회 약량을 제공하고, 콜레라 독소를 투입한 후 t₇에 쥐를 죽인다.

Group B: t₀에 콜레라 독소를 쥐에 제공하고, t₃에 장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물(131㎎/㎏) 단일 약량을 제공한다. 운반체는 산성화된 0.75% 구아르 검 용액으로 구성된다. 모든 동물은 t₇에 죽인다.

Group C: t₀에 콜레라 독소를 쥐에 제공하고, t₃에 동일한 농도의"EUDRAGIT^TM"+당(1.33㎎ "EUDRAGIT^TM"과 1.046㎎ 당/㎏)를 제공한다. 운반체는 산성화된 0.75% 구아르 검 용액으로 구성된다. 모든 동물은 t₇에 죽인다.

내장으로 피복된 비드를 완전히 전달될 수 있을 정도의 충분한 시간을 예비 실험으로 조사하여 이를 근거하여, 모든 동물은 콜레라 독소 약량을 제공한 후에 t₇에 죽인다. 좀더 신뢰성 있는 결과를 얻기 위해, 동물의 수를 각 집단마다 8마리로 늘린다. 표 4와 도7에서는 밀봉된 성인 쥐 모델에 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 효과를 나타낸다. 볼 수 있는 것과 같이, 131㎎ 프로안토시아니딘 중합체 조성물/㎏ 단일 약량은 콜레라 독소로 7시간 배양 후에 콜레라 독소-유도된 유체 축적을 상당히 감소시킨다는 것(P<0.05)을 알 수 있다. 기준 집단(집단 A, C)와 비교할 때, 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물(집단 B)은 유체 축적되는 양이 각 45%, 38% 감소된다는 것을 알 수 있다.

이 실험에서, 구강 위간 처리 때문에 죽은 쥐는 없다.

콜레라 독소로 처리한 쥐에서 내장 유체 축적에 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 효과

그룹	쥐의 수	처리	유체 축적(유체㎎/내장㎎)
A	8	H₂O	1.28 ±0.09 a
B	8	구아르검용액/㎏에 131㎎ 프로안토시아닌 중합체 조성물	0.71 ±0.17 b
C	8	"EUDRAGIT^TM" 당/당 검용액	1.15 ±0.16 a

*상이한 문자는 Duncan Multiple Range Test에 의한 유의성의 차이(p<0.05)를 나타낸다.

실험 조건에서, 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 콜레라 독소로 처리한 밀봉된 성인 쥐의 내장에 유체 축적이 상당히 감소되었다. 이결과에 기초하여, 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물(131 ㎎/㎏)을 구강 투여하면, "EUDRAGIT^TM"와 당 기준에서 평균 유체 축적과 비교하였을 경우에 평균 38%정도 유체 축적 비율이 감소된다.

집단마다 18-20마리 쥐를 이용하여, 실험한 결과는 도 8과 표 5에서 제시하였고, 이 결과는 처음 실험 결과를 확인하는 것이다. 콜레라 독소에 노출된 후 3시간(t₃)에, 131㎎ 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 수용한 집단 B 쥐는 t₃에 "EUDRAGIT^TM"와 당을 제공받은 쥐와 비교하였을 경우에 유체 축적이 상당히 감소되었음을 알 수 있다.

그룹	쥐의 수	t₀hr	t₃hr	유체 축적(유체㎎/내장㎎)
A	20	CT/NaHCO₃	"EUDRAGIT" & 당/H₂O	1.34 ±0.09a*
B	18	CT/NaHCO₃	131㎎/㎏ 프로안토시아니딘 중합체 조성물	0.75 ±0.10b*

*상이한 문자는 T-test에 의한 유의성의 차이(p<0.001)를 나타낸다.

8. 실시예: 제약학적 조성물 준비

하기에서 설명하는 실시예는 본 발명에 따라 C. lechleri에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 상이한 적절한 제약학적 조성물로 제조 및 포장하는 방법을 예로 들어 설명한다.

8.1. 포집된 장용피 비드

하기에는 포집된 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물 비드 조제물을 준비하기 위해 배치 조제물 및 이용되는 방법을 제공한다. 각 경질 젤라틴 캡슐에는 250㎎ 장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물 피복된 비드를 포함한다. 캡슐은 각 250㎎ 캡 16개를 포함하는 HDPE 병에 포장한다. 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 제조물에는 17.3%(w/w) nonpareil 씨(sugar spheres 40/60 mesh, Paulaur, lot #60084060), 64.5% 프로안토시아니딘 중합체 조성물(C. lechleri에서 구함), 1.5% 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈(Methocel E5 Premium, Dow Chemical Co., lot #MM9410162E), 0.5% 오파드라이 클리어(Colorcon, lot #S83563), 14.5% "EUDRAGIT^TM" L30D" (Rohm Tech., lot #1250514132), 1.45% 트리에틸 시트레이트(Morflex, lot #N5X291), 글리세릴 모노스테아레이트(Imwitor-900, Rohm Tech, lot #502-229)를 포함한다.

정제수(USP)에 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈와 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 첨가하고, 완전히 용해될 때까지 혼합하여, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 적층 코팅 용액을 준비한다. nonpareil 씨는 유체 상 프로세서(Nior-Precision Coater)의 생성물 용기에 적하한다. 그 다음, 표적이 되는 상 온도를 30-50℃로 유지시키면서, 유동화된 nonpareil 씨에 용액을 분무하여 중합체 용액을 적하시킨다. 일단 프로안토시아니딘 중합체 조성물 적층이 완료되면, 오파드라이 클리어(오파드라이 클리어와 정제수(USP)를 혼합하여 만듬)를 이용한 밀봉 코트는 30-35℃의 표적 상 온도에 제공된다. 밀봉 코트가 제공되면, 펠렛은 버리고, 1000μ내지 425μ스크린으로 스크린하고, 425μ이상 그리고 1000μ이하의 적층된 구는 유체 상 프로세서로 다시 충전한다. 한편, 장용피 코팅 용액은 지속적인 혼합을 하면서 65℃로 가열된 물에 트리에틸 시트레이트 및 글리세롤 모노스테아레이트를 첨가하여 만든다. 이 용액은 혼합하면서 "EUDRAGIT^TML 30D-55"에 첨가한다. 그 다음 생성된 장용피 코팅은 30-35℃에서 유동화된 상 프로세서에 적층 구에 분무하고 상에 모든 장용피 용액을 분무한다. HPLC 검사 결과를 기초로 하면, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 52.9% 농도로 존재하고, 장용피된 비드는 Size #0 경질 젤라틴 캡슐에 충전하여, 250㎎ 약량을 제공하고, 이는 적절한 HDPE 병(열 유도 라인이 있는 뚜껑을 가진 병)에 포장한다.

배치 조성물; 생성물은 프로안토시아니딘 중합체 조성물 장용피 비드

배치 크기 : 578.0gm
재료	배치당 이용된 양
Sugar Nonpareil Spheres, NF (40/60)	100.0 gm
프로안토시아닌 고분자 조성물	372.8 gm
하이드록시 프로필셀룰로오스 E5, USP (K29/32)	8.7 gm
Opadry Clear (YS-1-19025A)	2.9 gm
"EUDRAGIT^TML 30D-55" (30% solids)	279.4 gm
트리에틸 시트레이트	8.4 gm
글리세롤 모노스테아레이트	1.4 gm
물, USP (공정중에 제거됨)	1284.8 gm

8.2. 장용피된 과립과 분말 입자

하기에는 경질 젤라틴 캡슐 또는 구강 용액에 현탁된 장용피 과립 또는 분말(직경이 300-500μ인 미소구)형태의 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 제조하는 방법을 설명한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물 분말 입자는 고속 믹서/과립화기에 프로안토시아니딘 중합체 조성물 및 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 조성물을 고전단으로 혼합하여 준비한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물 과립은 고전단 믹서/과립화기에서 입자에 폴리비닐피롤리돈을 분무하여, 분말이 응집되어 더 큰 입자로 만든다. 유동화된 상 장비를 이용하여 과립 또는 분말은 아파드라이 코트(물과 혼합된)로 피복하고, 그 다음 수용액으로 제공되는 장용피 용액 "EUDRAGIT^TML 30D"을 제공하는데, 이 용액에는 30% w/w 무수 메타아크릴레이트 중합체 물질과 유화제로 0.7% 라우릴 설페이트 나트륨 NF (SLS), 2.3% 폴리소르베이트 80 NF(Tween 20)를 포함하고, 트리에틸 시트레이트와 글리세릴 모노스테아레이트를 가소제로 첨가하여 코팅의 탄성을 개선한다. 장용피된 분말 최종 조성물에는 81.8% w/w 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 1.5% w/w 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 0.5% w/w 오파드라이 클리어, 14.5% w/w "EUDRAGIT^TML 30D", 1.45% w/w 트리에틸 시트레이트, 0.25% w/w 글리세릴 모노스테아레이트를 포함한다. 장용피 입자의 최종 조성물은 81.8% w/w 프로안토시아니딘 중합체 조성물, 10% 폴리비닐필롤리돈, 1.5% w/w 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 0.5% w/w 오파드라이 클리어, 14.5% w/w "EUDRAGIT^TML 30D", 1.45% w/w 트리에틸 시트레이트, 0.25% w/w 글리세릴 모노스테아레이트를 포함한다.

장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물 입자 또는 과립은 적절한 약량을 제공할 수 있도록 경질 젤라틴 캡슐에 충전시킨다.

장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물 과립 또는 분말은 경구 투여를 위해 특히 어린이에게 투여하기 위해 용액에 현탁할 수 있다. 97.8㎖ 물에 2g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈와 2g Tween 80을 적시고, 이 혼합물은 초음파를 이용하여 균질하게 하고, 용액은 40℃로 가열시키고, 3시간동안 교반시킨 다음 장용피 프로안토시아니딘 중합체 조성물 분말 입자는 균질한 용액에 첨가하여, 현탁액을 만들 수 있다.

8.3. 장용피된 압착 정제

하기에서는 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 장용피된 정제로 만드는 방법을 설명한다. 각 350㎎ 정제에는 250㎎ 프로안토시아니딘 중합체 조성물이 7㎎ 교차결합된 카르복시메틸셀룰로오즈 나트륨("AC-DI-SOL^TM"), 충분한 양의 미소결정 셀룰로오즈("AVICEL^TMPH 200/300")로 과립화하여, 총 중량이 350㎎이 되도록 한다. 이들 성분은 V 혼합기에서 20-30분간 혼합한다. 20 내지 30분간 혼합한 후에, 1.75㎎ 스테아레이트 마그네슘을 첨가하고, 혼합물은 추가 4 내지 5분간 혼합한다. 생성된 입자는 5/16인치 표준 오목 펀치를 이용하여 회전 정제 프레스에서 압착한다. 정제는 장용피 혼합물로 피복하는데, 이때 혼합물은 250g "EUDRAGIT^TML 30 D-55", 7.5g 트리에틸 시트레이트, 37.5g 활석, 205g 물로 만든다. 그 다음 정제는 천공 팬 피복기("ACCELA-COTA^TM" system)에 두고, 40℃에서 15rpm으로 회전시킨다. 장용피 조성물은 다음의 조건을 이용하여 분무한다; 유입 공기 온도는 44℃-48℃; 배출 기체 온도는 29℃-32℃; 생성물 온도는 26℃-30℃; 1㎜ 분무 노즐이용; 팬 속도는 30 내지o 32 rpm; 공기 흐름은 30-32 CFM; 분무 압력은 20 PSI. 정제는 최종적으로 처리하고, 팬은 15 rpm에서 유입 공기(60℃)로 회전시키고, 열을 차단한 후에, 정제는 실온으로 정제의 온도가 낮아질때까지 15 rpm으로 회전시킨다.

8.4. 좌약

하기에서는 직장으로 투여할 수 있도록 좌약으로 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 만드는 것을 설명한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물로된 한 개의 좌약 조성물은 91g 글리세린을 120℃로 가열하고, 9g 스테아레이트 나트륨을 가열된 글리세린에 용해시키고, 그 다음 5g 정제수를 첨가하여 만든다. 5% 내지 50% 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 염기에 첨가하고, 혼합물은 그 다음 적절한 틀에 넣는다. 또는, 20g 젤라틴과 70g 글리세린을 70℃로 가열하고, 2시간동안 교반하여, 5분간 초음파에 의해 정제수에 용해된 10g 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 첨가하고, 균질화된 혼합물을 얻을 때까지 40℃에서 혼합하여 좌약을 준비한다. 그 다음 좌약을 만들기 위해 적절한 주형에 넣는다.

9. 실시예: 여행자 또는 비-특이적인 설사를 앓고 있는 환자에서 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 효과

급성 비-특이적인 설사 및 여행자 설사 증상을 치료하기 위해 C. lechleri에서 구한 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 안정성 및 효과에 대한 처음 20명 환자에서 실시한 임상 테스트의 잠정적인 결과를 요약한 것이다.

9.1 사람에서의 안정성 및 효과 연구

여행사 설사를 앓고 있는 총 20명의 환자가 등록되었다. 한자는 미국에서 멕시코로 공부하러온 젊은(평균 연령이 24세) 남녀 환자로 구성된다. 환자는 연구자들에 의해 회복되었는데, 이들은 임의 약물 치료하기 전과 설사가 일어난 후에 증상을 병원에 보고하였다.

다음 변수에 대해 개체를 평가하였다;

(a) 통상적인 배변 빈도(하루 또는 일주일에 배변 수)

(b) 설사 시작 일시

(c) 지난 24시간에 배변 수, 다음의 범주에 속하는 것으로 기록

-보통 변: 물에서 변의 원래 모양이 유지됨

-묽은 변: 용기의 모양으로 확인

-설변: 부을 수 있을 정도의 것

(혼합형 변(묽은 변/설변)은 설변으로 분류함)

(d) 지난 24 시간동안 경험한 증상

-복통

-항문 자극

-이급후증(배설후에 남아있는 불쾌한 동통)

-긴급(15분이상 지연시킬 수 있음)

-부자유스런 배변(장 운동 조절이 안됨)

-실금(정상 활동이 불가능)

-메스꺼움

-구토

-방귀 빈도가 증가

평가를 완료한 후에, 기준 실험실 테스트를 위한 샘플을 얻고, 연구 의약용 제 1 약량을 투여한다. 개체에 장용피된 프로안토시아니딘 중합체 조성물 1250㎎ 초기 약량을 투여하고, 이는 치료 처음 24시간동안에 매 6시간마다 250㎎ 약량을 3회 투여하고, 그 다음 2일째에 하루에 총 2g으로 4회 500㎎을 투여한다. 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 2일간만 투여한다.

기본적인 병원 방문동안에, 연구 참여자는 일지를 정확하게 기록하고 그 형태를 연구하고, 다음의 평가 변수를 고려한다;

1. 안정성

연구하는 동안에 환자에게 임의 부작용에 대해 질문한다. 이와 같은 부작용은 연구하는 동안에 그리고 임의 작용에 대해 심각성, 지속시간, 관계등으로 분류한다. 연구시작시와 연구 완료시에 혈액과 소변을 이용하여 임의 변화를 평가한다.

2. 효과

환자의 매일 기록을 평가한다. 측정한 주요 효과 변수는 배변 빈도, 농도, 설변 지속 시간

9.2. 결과

연구하는 동안에, 프로안토시아니딘 중합체 조성물에 의한 임의 부작용에 대해서 보고된 바가 없었다. 이번 실험에서 주요 효과 변수는 자신이 보고하는 배변 빈도, 설변이 지속되는 시간등을 포함한다. 이들 데이터는 표 7에 요약하였다.

보고된 배변횟수(치료를 받은 20명 환자)

시간	하루에 배변수 (평균)
치료전 24시간	5.6
Day 1	4.0
Day 2	2.9
Day 3	2.1
Usual	1.6

평균적으로, 연구하는 3일간 비정상적인 배변 횟수는 정상치로 행하는 경향이 있다. 하루에 평균 배변수는 3일경에 거의 정상에 가깝다. 4명의 환자는 3일째에 정상적인 배변 빈도로 복구되었다. 또한, 평균적으로 설변이 지속되는 시간은 30.3시간이다.

위장 증후의 기준 및 이후 보고를 얻었다. 메스꺼움, 구토, 복통, 방귀, 위급, 이급후증, 항문 자극, 실금, 불쾌감등의 9개 증상의 심각성(약함, 중간, 심각)에 대해 질문하였다.

3일 끝나는 시점에 9명 환자 전부 증상이 완전히 해결되었다. 표 8에는 시간별 모든 증상이 완전히 해결된 환자의 수를 나타낸다.

시간별 모든 증상이 해결된 환자(20명 치료)

시간	해결된 환자수
24시	1
48시	2
60시	4
72시	2

증상이 없는 경우에 0: 약한 경우에는 1: 중간정도의 경우에는 3: 심각한 경우에는 3으로 기록하였다. 표 9에는 각 시간에 따른 평균 기록을 나타낸 것이다.

시간에 따른 증후 기록(20명 환자 치료)

시간	평균 수
참가시	8.9
12시	6.1
24시	4.5
36시	3.8
48시	3.0
60시	1.8
72시	1.1

이들 데이터를 점검한 우리의 견해에 따르면, 다음의 결론을 얻을 수 있다:

1. 약물은 일반적으로 수용가능하고, 3명의 환자는 연구약물에 대해 심각한 자신이 참을 수 있을 정도의 메스꺼움을 경험하였다. 그러나, 심각한 부작용으로 연구에서 빠진 환자는 없었다.

2. 치료 기간동안에 발생된 혈청 화학 또는 혈액학에 임의 변화는 없었다. 6명의 환자는 뇨분석에서 약한 변화가 있었다. 우리는 이와 같은 뇨분석에서 변화가 심각한 부작용을 나타낸다고 보지 않는다. 이들 변화가 내재된 질병으로 인한 것인지 또는 약물로 인한 것인지는 분명하지 않다.

3. 3일간 치료기간동안에 배변 빈도는 정상으로 복귀되었다.

4. 병력 기준에서 보고된 69시간을 비교하면 평균 설변 지속 시간은 30.3시간이다.

요약하면, 우리는 C. lechleri에서 구한 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 장용피 조제물은 여행자 설사를 겪고 있는 환자에서 배변 빈도 및 위장 증상을 완화시키는데 유용하다는 것이다. 전반적으로 약물은 안전하며, 가장 흔히 나타나는 부작용은 메스꺼움이다.

본 발명은 여기에서 설명하는 특정 구체예를 통하여 설명하였으나, 이는 설명을 위함으로 이에 본 발명의 범위를 한정시키고자 함은 아니다. 임의 등가의 구체예도 본 발명의 범위에 속한다. 또한, 본 발명에 추가하여 본 발명에 다양한 변화 및 수정도 당업자에게는 가능하다는 것을 인지할 것이다. 이와 같은 변화 및 수정도 본 발명의 범위에 속한다.

여기에서 언급하는 모든 문헌은 전문을 첨부한다.

Claims

크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 치료요법적 효과량과 위산으로부터 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 보호할 수 있도록 조제된 이의 제약학적 수용가능한 물질과 제약학적 수용가능한 담체로 제조된 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 크로톤 종(croton spp.)은 크로톤 레치레리(Croton lechleri)인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 조성물은 장용피된 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 3 항에 있어서, 조성물은 캡슐로 제조되고, 캡슐은 장용피된 것이거나 아닌 것을 수 있는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 3 항에 있어서, 장용피는 산 이온화가능한 기와 메타아크릴산-메타아크릴산 에스테르 공중합체로 구성되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 5 항에 있어서, 장용피는 하나이상의 가소제 화합물로 구성되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 6 항에 있어서, 가소제 화합물은 폴리에틸렌 글리콜 에스테르 및 시트르산 에스테르인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 7 항에 있어서, 조성물은 압착 정제로 제조되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 7 항에 있어서, 조성물은 비드를 포함하는 캡슐로 조제되고, 비드는 당 입자에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 적층 및 장용피층으로 구성되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 7 항에 있어서, 조성물은 300 내지 500 미크론의 미소구로 제조되는데, 이소구는 프로안토시아니딘 중합체 조성물 입자과 장용피층으로 구성되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 10 항에 있어서, 미소구를 캡슐에 충전시키는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 10 항에 있어서, 미소구는 현탁액으로 조제되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산 분비를 저해시키는 물질과 함께 조제되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산을 중화시키는 물질과 함께 조제되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 치료요법적 효과량 또는 이의 제약학적 수용 가능한 물질로 구성된 제약학적 조성물에 있어서, 조제물은 제약학적 수용가능한 담체로 좌약으로 제조되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
사람을 포함하는 동물에서 분비성 설사를 치료하는 방법에 있어서, 설사를 앓고 있는 사람 또는 사람이 아닌 동물에 제약학적 조성물을 투여하는데, 이때 조성물은 크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 또는 위산으로부터 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 보호할 수 있도록 되어 조제된 이의 유도체 및 제약학적 수용가능한 담체로 제조된 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 크로톤 종(croton spp.)은 크로톤 레치레리(Croton lechleri)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 조성물은 장용피된 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 조성물은 캡슐로 제조되고, 캡슐은 장용피된 것이거나 아닌 것을 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서, 장용피는 산 이온화가능한 기와 메타아크릴산-메타아크릴산 에스테르 공중합체로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 20 항에 있어서, 장용피는 하나이상의 가소제 화합물로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 21 항에 있어서, 가소제 화합물은 폴리에틸렌 글리콜 에스테르 및 시트르산 에스테르인 것을 특징으로 하는 방법.
제 22 항에 있어서, 조성물은 압착 정제로 제조되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 22 항에 있어서, 조성물은 비드를 포함하는 캡슐로 조제되고, 비드는 당 입자에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 적층 및 장용피층으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 22 항에 있어서, 조성물은 300 내지 500 미크론의 미소구로 제조되는데, 이소구는 프로안토시아니딘 중합체 조성물 입자과 장용피층으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산 분비를 저해시키는 물질과 함께 조제되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물은 위산을 중화시키는 물질과 함께 조제되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 설사는 박테리아에 의해 발생되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 28 항에 있어서, 박테리아는 대장균(E. coli), 비브리오 종(Vibrio spp)., 캄필로박터종(Campylobacter spp)., 살모넬라 종(Salmonella spp)., 에어로모나스 종(Aeromonas spp)., 플레시모나스 종(Plesimonas spp)., 쉬겔라 종(Shigella spp)., 클렙스엘라 종(Klebsiella spp)., 시트로박터 종(Citrobacter spp)., 에르시니아 종(Yersinia spp)., 클로스트리듐 종(Clostridium spp)., 박테로이드 종(Bacteriodes spp)., 스타필로코커스 종(Staphylococcus spp)., 바실러스 종(Bacillus spp)에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 29 항에 있어서, 박테리아는 장독성 대장균(E. coli) 또는 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 분비성 설사는 비-감염성 병인으로 인한 것을 특징으로 하는 방법.
제 31 항에 있어서, 비-감염성 병인은 비-특이적 설사, 궤양성 결장염, 장염, 위장관의 신형성에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 설사를 앓고 있는 사람은 영아 또는 어린이인 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사을 앓고 있는 사람을 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 34 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사는 클로스트리듐 종(Clostridium spp)에 의한 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 사람이 아닌 동물의 분비성 설사를 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 36 항에 있어서, 사람이 아닌 동물은 소, 돼지, 말, 가금류, 개, 양, 고량이등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 37 항에 있어서, 분비성 설사는 대장균(E. coli), 살모넬라 종(Salmonella spp)., 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 박테리오드 프라질리스(Bacteriodes fragilis), 캄필로박터 종(Campylobacter spp.), 에르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica), 크립토스포리움 파르붐(Cryptosporidium parvum), 로타바이러스, 코로나바이러스등에서 분리된 물질에 의해 발생되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 36 항에 있어서, 제약학적 조성물은 동물 사료로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 36 항에 있어서, 제약학적 조성물은 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 40 항에 있어서, 제약학적 조성물은 음식물을 통하여 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 40 항에 있어서, 사람 또는 사람이 아닌 동물에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 0.1 내지 40㎎/㎏의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
사람을 포함하는 동물에서 분비성 설사를 치료하는 방법에 있어서, 설사를 앓고 있는 사람 또는 사람이 아닌 동물에 제약학적 조성물을 투여하는데, 이때 조성물은 크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 또는 이의 유도체 및 제약학적 수용 가능한 담체로 제조되고, 이 조제물은 직장 투여를 위해 좌약형인 것을 특징으로 하는 방법.
사람을 포함하는 동물에서 분비성 설사를 치료하는 방법에 있어서, 설사를 앓고 있는 사람 또는 사람이 아닌 동물에 제약학적 조성물을 투여하는데, 이때 조성물은 (a) 크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 또는 이의 유도체 및 제약학적 수용가능한 담체로 제조되고, (b) 조성물은 위산 분비를 저해시키는데 효과적인 화합물 및 제약학적 수용가능한 담체로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산 분비를 저해하는 기간 동안에만 위산 분비를 저해시키는데 효과적인 화합물을 포함하는 제약학적 조성물을 연속하여 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산 분비를 저해하는 기간 동안에만 위산 분비를 저해시키는데 효과적인 화합물을 포함하는 제약학적 조성물과 동시에 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, 설사는 박테리아에 의해 발생되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 47 항에 있어서, 박테리아는 대장균(E. coli), 비브리오 종(Vibrio spp)., 캄필로박터종(Campylobacter spp)., 살모넬라 종(Salmonella spp)., 에어로모나스 종(Aeromonas spp)., 플레시모나스 종(Plesimonas spp)., 쉬겔라 종(Shigella spp)., 클렙스엘라 종(Klebsiella spp)., 시트로박터 종(Citrobacter spp)., 에르시니아 종(Yersinia spp)., 클로스트리듐 종(Clostridium spp)., 박테로이드 종(Bacteriodes spp)., 스타필로코커스 종(Staphylococcus spp)., 바실러스 종(Bacillus spp)에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 48 항에 있어서, 박테리아는 장독성 대장균(E. coli) 또는 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, 분비성 설사는 비-감염성 병인으로 인한 것을 특징으로 하는 방법.
제 50 항에 있어서, 비-감염성 병인은 비-특이적 설사, 궤양성 결장염, 장염, 위장관의 신형성에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, 설사를 앓고 있는 사람은 영아 또는 어린이인 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사을 앓고 있는 사람을 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사는 클로스트리듐 종(Clostridium spp)에 의한 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, 사람이 아닌 동물의 분비성 설사를 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 55 항에 있어서, 제약학적 조성물은 동물 사료로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 44 항에 있어서, 제약학적 조성물은 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 57 항에 있어서, 제약학적 조성물은 음식물을 통하여 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 57 항에 있어서, 사람 또는 사람이 아닌 동물에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 0.1 내지 40㎎/㎏의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
사람을 포함하는 동물에서 분비성 설사를 치료하는 방법에 있어서, 설사를 앓고 있는 사람 또는 사람이 아닌 동물에 제약학적 조성물을 투여하는데, 이때 조성물은 (a) 크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 또는 이의 유도체 및 제약학적 수용가능한 담체로 제조되고, (b) 조성물은 위산을 중화시키는데 효과적인 화합물 및 제약학적 수용가능한 담체로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산을 중화하는 기간 동안에만 위산을 중화시키는데 효과적인 화합물을 포함하는 제약학적 조성물을 연속하여 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 포함하는 제약학적 조성물은 위산을 중화시키는 기간 동안에만 위산을 중화시키는데 효과적인 화합물을 포함하는 제약학적 조성물과 동시에 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 설사는 박테리아에 의해 발생되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 63 항에 있어서, 박테리아는 대장균(E. coli), 비브리오 종(Vibrio spp)., 캄필로박터종(Campylobacter spp)., 살모넬라 종(Salmonella spp)., 에어로모나스 종(Aeromonas spp)., 플레시모나스 종(Plesimonas spp)., 쉬겔라 종(Shigella spp)., 클렙스엘라 종(Klebsiella spp)., 시트로박터 종(Citrobacter spp)., 에르시니아 종(Yersinia spp)., 클로스트리듐 종(Clostridium spp)., 박테로이드 종(Bacteriodes spp)., 스타필로코커스 종(Staphylococcus spp)., 바실러스 종(Bacillus spp)에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 64 항에 있어서, 박테리아는 장독성 대장균(E. coli) 또는 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 분비성 설사는 비-감염성 병인으로 인한 것을 특징으로 하는 방법.
제 66 항에 있어서, 비-감염성 병인은 비-특이적 설사, 궤양성 결장염, 장염, 위장관의 신형성에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 설사를 앓고 있는 사람은 영아 또는 어린이인 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사을 앓고 있는 사람을 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 69 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사는 클로스트리듐 종(Clostridium spp)에 의한 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 사람이 아닌 동물의 분비성 설사를 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 71 항에 있어서, 제약학적 조성물은 동물 사료로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 60 항에 있어서, 제약학적 조성물은 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 73 항에 있어서, 제약학적 조성물은 음식물을 통하여 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 73 항에 있어서, 사람 또는 사람이 아닌 동물에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 0.1 내지 40㎎/㎏의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
사람을 포함하는 동물에서 분비성 설사를 예방하는 방법에 있어서, 설사를 앓을 가능성 위험이 있는 사람 또는 사람이 아닌 동물에 제약학적 조성물을 투여하는데, 이때 조성물은 크로톤 종(croton spp.) 또는 카로필럼(Calophyllum spp)에서 분리한 프로안토시아니딘 중합체 조성물 또는 위산으로부터 프로안토시아니딘 중합체 조성물를 보호할 수 있도록 되어 조제된 이의 유도체 및 제약학적 수용가능한 담체로 제조된 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, 크로톤 종(croton spp.)은 크로톤 레치레리(Croton lechleri)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, 조성물은 장용피된 것을 특징으로 하는 방법.
제 78 항에 있어서, 조성물은 캡슐로 제조되고, 캡슐은 장용피된 것이거나 아닌 것을 수 있는 것을 특징으로 하는 방법.
제 78 항에 있어서, 장용피는 산 이온화가능한 기와 메타아크릴산-메타아크릴산 에스테르 공중합체로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 80 항에 있어서, 장용피는 하나이상의 가소제 화합물로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 81 항에 있어서, 가소제 화합물은 폴리에틸렌 글리콜 에스테르 및 시트르산 에스테르인 것을 특징으로 하는 방법.
제 82 항에 있어서, 조성물은 압착 정제로 제조되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 82 항에 있어서, 조성물은 비드를 포함하는 캡슐로 조제되고, 비드는 당 입자에 프로안토시아니딘 중합체 조성물의 적층 및 장용피층으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 82 항에 있어서, 조성물은 300 내지 500 미크론의 미소구로 제조되는데, 이소구는 프로안토시아니딘 중합체 조성물 입자과 장용피층으로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, 설사는 박테리아에 의해 발생되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 86 항에 있어서, 박테리아는 대장균(E. coli), 비브리오 종(Vibrio spp)., 캄필로박터종(Campylobacter spp)., 살모넬라 종(Salmonella spp)., 에어로모나스 종(Aeromonas spp)., 플레시모나스 종(Plesimonas spp)., 쉬겔라 종(Shigella spp)., 클렙스엘라 종(Klebsiella spp)., 시트로박터 종(Citrobacter spp)., 에르시니아 종(Yersinia spp)., 클로스트리듐 종(Clostridium spp)., 박테로이드 종(Bacteriodes spp)., 스타필로코커스 종(Staphylococcus spp)., 바실러스 종(Bacillus spp)에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 87 항에 있어서, 박테리아는 장독성 대장균(E. coli) 또는 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni)인 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, 분비성 설사는 비-감염성 병인으로 인한 것을 특징으로 하는 방법.
제 89 항에 있어서, 비-감염성 병인은 비-특이적 설사, 궤양성 결장염, 장염, 위장관의 신형성에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, 설사를 앓을 가능성이 있는 사람은 영아 또는 어린이인 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사을 앓고 있는 사람을 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 92 항에 있어서, HIV-관련된 만성 설사는 클로스트리듐 종(Clostridium spp)에 의한 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, 사람이 아닌 동물의 분비성 설사를 치료하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 94 항에 있어서, 사람이 아닌 동물은 소, 돼지, 말, 가금류, 개, 양, 고량이등에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 95 항에 있어서, 분비성 설사는 대장균(E. coli), 살모넬라 종(Salmonella spp)., 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens), 박테리오드 프라질리스(Bacteriodes fragilis), 캄필로박터 종(Campylobacter spp.), 에르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica), 크립토스포리움 파르붐(Cryptosporidium parvum), 로타바이러스, 코로나바이러스등에서 분리된 물질에 의해 발생되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 94 항에 있어서, 제약학적 조성물은 동물 사료로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 76 항에 있어서, 제약학적 조성물은 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 98 항에 있어서, 제약학적 조성물은 음식물을 통하여 구강으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 99 항에 있어서, 사람 또는 사람이 아닌 동물에 프로안토시아니딘 중합체 조성물을 0.1 내지 40㎎/㎏의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.