KR20050037418A

KR20050037418A - 신규한 시클로스포린 유사체 미세유화액 예비농축물

Info

Publication number: KR20050037418A
Application number: KR1020047005700A
Authority: KR
Inventors: 셀바라즈 네이커; 랜달 더블유. 야츠코프; 로버트 티. 포스터
Original assignee: 이소테크니카 인코포레이티드
Priority date: 2001-10-19
Filing date: 2002-10-17
Publication date: 2005-04-21
Anticipated expiration: 2022-10-17
Also published as: US20140249092A1; MA26221A1; DK1435910T3; IL195892A; HK1062525A1; CA2461730A1; NZ531946A; US20110136744A1; EP1435910B1; MEP89008A; CN1274294C; EP2116228A1; JP2005506990A; EP1435910B9; MY145753A; EP1435910A1; DE60233150D1; US20060217309A1; US20030171264A1; ZA200402268B

Abstract

본 발명은 시클로스포린 A와 구조적으로 유사한 시클로스포린 유사체, 특히 시클로스포린 A와 구조적으로 유사한 시클로스포린 유사체의 이성체 혼합물을 함유하는 제형에 관한 것이다. 함유한다. 이러한 제형은 미세유상액(microemulsions)을 형성하고, 우수한 약제 생체이용효율을 제공하며/하거나 시클로스포린의 투여와 관련된 하나 이상의 부작용을 감소할 수 있다. 또한 본 발명은 이러한 제형을 사용하는 방법 및 제조하는 방법을 개시한다.

Description

신규한 시클로스포린 유사체 미세유화액 예비농축물{Novel Cyclosporin analog Microemulsion Preconcentrates}

참고자료

하기의 참고자료는 본 명세서의 해당부분에서 괄호 속에 표기하여 언급될 것이다:

1. Gupta and Robinson, Treatise on Oral Controlled-drug Delivery, Text Ed. 1992, edited by Aegis Cadence, Mandel Decker, Inc.

2. Traber et al., Helv. Chim. Acta, 60: 1ISAtx247-1255 (1977)

3. Kobel et al., Europ. J. Applied Microbiology and Biotechnology, 14: 237-240 (1982)

4. von Wartburg et al., Progress in Allergy, 38: 28-45 (1986)

5. Rich et al., (J. Med. Chem., 29: 978 (1986)

6. U. S. Patent No. 4,384,996, issued on May 24, (1983)

7. U. S. Patent No. 4,771,122, issued on September 13, (1988)

8. U. S. Patent No. 5,284,826, issued on February 8, (1994)

9. U. S. Patent No. 5,525,590, issued on June 11, (1996)

10. Sketris et al., Clin. Biochem., 28: 195-211 (1995)

11. Bennett, Renal Failure, 20: 687-90 (1998)

12. Wang et al., Transplantation, 58 : 940-946 (1994)

13."Eastman Vitamin E TPGS", Eastman Brochure, Eastman Chemical Co., Kingsport, Tenn. (October 1996)

14. Hawley's Condensed Chemical Dictionary, (1987)

15. Ellis, Progress in Medicinal Chemistry 25, (1988) Elsevier, Amsterdam

16. Sokol, R. J., Lancet, 338 (8761) : 212, (1991)

17. Sokol, R. J., Lancet, 338 (8768) : 697, (1991)

상기의 공보 및 특허의 각각의 내용도 마치 각각의 개별적인 공보 및 특허의 언어가 특정하여 개별적으로 참조로 편입되어졌던 것과 동일한 정도로 본 명세서에서 전체적으로 참고하여 편입되었다.

치료제로서 시클로스포린의 용도

대부분의 이식 절차에서, 수혜자-기증자 조직(host-donor tissue) 형태 매칭을 통하여 이식 거부를 회피하려는 노력에도 불구하고, 면역억제 치료는 수혜자내에서 기증자 기관의 생존능력을 결정적으로 좌우한다. 이식 절차에서, 아자티오프린, 메톡트렉세이트, 시클로포스파미드, FK-506, 라파마이신 및 코르티코스테로이드를 포함하는 다양한 면역억제제가 사용되어져 왔다. 시클로스포린은 이들의 T-세포 매개 반응에 대한 바람직한 효과에 기인하여 면역억제 치료에 사용이 증가하고 있다(1).

시클로스포린은 동종이식 거부, 지체된 과민증, 실험적 알러지 뇌척수염, 프로인드 애주번트 관절염 및 이식편대숙주 질병(GVHD)과 같은 체액성 면역 및 세포-매개 면역 반응을 억제하는 것으로 알려진 잠재적인(potent) 면역억제제이다. 이는 기관 이식에 이은 기관 거부의 예방; 류마티스성 관절염의 치료; 건선의 치료; 타입 I 당뇨, 크론 질병, 낭창 등을 포함하는 기타 자기면역 질병의 치료를 위하여 사용되었다. 자연적으로 발생하는 많은 시클로스포린은 당해 분야에서 잘 알려져 있다. 비자연적 시클로스포린은 전체- 또는 반-합성 수단에 의하거나 변형된 배양 기술의 응용에 의하여 제조되었다. 따라서 지금은 시중에서 구입가능한 시클로스포린의 분류가 상당히 많고, 예를 들어 자연적으로 발생하는 시클로스포린 A(CsA) 내지 Z(CsZ)뿐만 아니라, 디히드로- 및 이소-시클로스포린(2,3,4)과 같은 기타 비자연적 시클로스포린 유도체를 포함한다. 1-위치에서 변형된 아미노산을 함유하는 CsA 유사체는 리치 등(Rich et al., (5))에 의하여 알려져 있다. 면역억제성, 항염증성, 및 항기생충 CsA 유사체는 산도스에 모두 양도된 미국특허 제4,384,996호(6), 제4,771,122호(7), 제5,284,826호(8), 및 제5,525,590호(9)에 기재되어 있다.

시클로스포린은 분자량이 1202 달톤인 지방친화성 분자이다. 시클로스포린 A의 빈약한 수용성 및 높은 지방친화성 때문에, 통상적인 고상 또는 액상 약제학적 캐리어와 함께 제조된 시클로스포린 A의 약제학적 조성물은 종종 단점들을 갖게 된다. 예를 들면, 이러한 시클로스포린은 이러한 조성물로부터 만족스럽게 흡수되지 않거나, 조성물은 양호한 내성이 없거나, 저장할 때 충분하게 안정성을 갖고 있지 못하다. 종종, 용해된 농도가 매일 복용과 관련하여서 낮다.

시클로스포린 치료의 부작용

시클로스포린 치료와 관련한 수많은 부작용이 있다. 이들 중에는 신독성, 간독성, 백내장유도, 다모증, 파라파시스, 및 치은과다형성(10)이 있다. 가장 심각한 부작용은 신독성이다.

급성 시클로스포린 신독성은 봉입체, 등장성 공포형성(isometric vacuolation) 및 미세석회화로 특징되어지는 관상 손상에 의하여 형태학적으로 진행되어진다. 이는 사구체 여과율의 감소를 이끌게 되는데, 이러한 사구체 여과율은 시클로스포린으로 처리된 환자내의 혈청 크레아틴의 급속한 증가에 의하여 식별될 수 있다(11).

시클로스포린 A가 신장 손상을 일으키는 정확한 메카니즘은 알려지지 않았다. 쥐 연구에서, 신장의 만성적 CsA-유발 기능적 및 구조적 악화는 신장 지질 과산화에 의하여 진행되어졌다. CsA와 함께 산화방지제의 공투여(co-administration)는 쥐에서 신장 손상을 감소시킨다는 것을 왕 등(Wang et al.)에 의하여 보고 된 바 있었다(12).

시클로스포린 치료와 관련하여 신독성 위험을 감소시키기 위한 당해 분야에서의 과거의 시도들은 치료적 혈중 농도를 유지하는데 요구되는 투여량을 효과적으로 감소시키면서, 시클로스포린의 물질대사를 지연시키는 시약과 함께 약제의 공투여를 포함하고 있다. 그러나 이러한 방법은 종종 시클로스포린 생체이용효율의 높은 변화의 문제점을 해결하지 못한다(12). 따라서 우수한 생체이용효율을 갖지만 부작용을 발생시키지 않는 시클로스포린 제형의 제조상 문제점은 당해 분야에서 잘 알려져 있다.

투여형태

약제가 그 치료 활성을 수행하기 위하여, 약제의 치료양은 생체이용이 가능하여야만 하며, 즉 이는 혼자의 작용 부위에 도달될 수 있도록 해야만 한다. 경구 약제 전달은 당해 분야에서 알려져 있고 용이한 투여 때문에 인기가 있다. 그러나 경구 투여 형태는 약제가 장내에서 주어진 시간을 경과하여 투여 형태로부터 우선적으로 방출되어야만 하고, 위장(gastrointestinal) 경로내에서 용해되어 흡수 되어야만 한다는 사실에 의하여 복잡하다. 따라서 위장(GI) 경로내에서 약제 형태로부터 적당한 약제 방출 및 약제의 용해는 중요한 것이다.

GI 경로로 한정하여 적당하게 작용하는 잘 알려진 경구 투여 형태는 정제, 캡슐, 젤 캡슐, 시럽, 현탁액, 유화액, 미세유화액 및 예비-유화액 농축물을 포함한다. 용해도는 경구 투여 제형의 개발에서 중요한 역할을 하는데, 그 이유는 약제를 전달하는데 사용되는 제형이 주어진 시간을 넘어서 활성부위에 도달하는 약제의 양 및/또는 약제의 농도에 영향을 줄 것이기 때문이다. 또한 제형의 조성물은 위장 경로 내에서 약제 화합물의 용해에 직접적으로 영향을 주고, 결과적으로 활성 약제 화합물의 혈류내로 흡수하는 정도 및 속도에 영향을 줄 것이다. 또한, 약제의 치료가치는 약제가 전달시스템(전달계; delivery system)자체로부터 방출되는 속도에 의하여 영향을 받게 되고, 이는 역으로 흡수 전에 위장 경로내의 활성 화합물의 용해 속도 및 정도에 영향을 준다(1).

당해 분야에서 알려진 통상적인 전달시스템에서, 약제 함량은 짧은 시간 내에 위장 경로내로 방출되며, 혈장 약제 수준은 주어진 시간에, 보통 투여 후 몇 시간 내에 피크에 도달한다. 시클로스포린 제형을 포함하여, 알려진 경구 약제 전달시스템의 설계는 원하지 않는 투여 관련 부작용의 발생 위험에서, 가능한 가장 빠른 약제 분해 속도를 얻는 것에 기초하고 있다.

따라서 독성을 감소시키면서 높은 수준의 생체이용효율을 달성하지만, 다른 시약과 함께 투여할 필요가 없는 시클로스포린 제형의 필요성이 절실히 요구되고 있다.

발명의 개시

본 발명은 특정한 제형, 바람직하게는 미세유화액 예비농축물 및 미세유화액 제형이 시클로스포린과 관련된 하나 이상의 부작용을 감소시키는 반면에, 약제의 높은 생체이용효율을 유지하는 시클로스포린 유사체, ISAtx247의 전달을 제공할 수 있다는 발견에 근거하고 있다. 더욱이, 본 발명의 제형은 또한 충분한 생체이용효율을 제공하여 ISAtx247의 면역억제 효과를 증가시킨다.

본 발명의 제형은 모두 활성 성분으로서 ISAtx247 및 폴리옥실화 잔기를 갖는 비이온성 계면활성제와 같은 합성 공-유화제와 유화되어지는 합성 또는 식물성 오일을 함유한다. 따라서 본 발명의 제형은 ISAtx247, 계면활성제, 에탄올, 지방친화성 및/또는 양쪽친화성 용매를 함유한다. 본 발명의 제형은 필요한 pH 및 등장성을 조절할 수 있으며, 또한 필요시 보호 콜로이드, 현탁 안정제 및 빌더제와 같은 생체적합성 중합체, 부형제, 결합제 및 캐리어를 포함할 수 있다.

바람직한 한 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS, c) MCT 오일, d) 트윈 40 및 트윈 80으로 구성된 군으로부터 선택된 유화제 및 e) 에탄올을 함유하는 미세유화액 예비농축물에 관한 것이다. 바람직한 미세유화액 예비농축물은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247, 0 중량% 초과 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS, 0 중량% 초과 내지 약 50 중량%의 MCT 오일, 0 중량% 초과 내지 약 50 중량 %의 유화제, 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하면서, 상기 제형은 실온에서 액상 미세유화액 예비농축물의 상태인 것이다. 더욱 바람직하게는 a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1: 4: 2: 2: 1인 것이다.

또한 본 발명은 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 유화제, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하면서, 제형이 실온에서 액상인 상기의 미세유화액 예비농축물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS(tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate), c) MCT(medium chain triglyceride)오일, d) 트윈 40 및 e) 에탄올을 함유하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 바람직한 약제학적 제형은 미세유화액이고, 더욱 바람직한 제형은 미세유화액 예비농축물이다. 바람직한 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247, 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS, 약 5 중량% 내지 약 20 중량%의 MCT 오일, 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 40 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유한다. 더욱 바람직하게는, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1: 4: 2: 2: 1인 것이다.

추가적 양태로서, 본 발명은 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS, c) MCT 오일, d) 트윈 40 및 e) 에탄올을 함유하는 상기의 약제학적 제형의 유효량을 면역억제가 필요한 대상자에게 투여하는 과정을 포함하는 면역억제를 발생시키는 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명은 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 40, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 본 발명의 현재 양태의 약제학적 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다.

추가적 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS, c) MCT 오일, d) 트윈 80 및 e) 에탄올을 함유하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 바람직한 약제학적 제형은 미세유화액이고, 더욱 바람직한 제형은 미세유화액 예비농축물이다. 바람직한 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247, 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS, 약 5 중량% 내지 약 20 중량%의 MCT 오일, 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 80, 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유한다. 더욱 바람직하게는, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1: 2: 4: 2: 1인 것이다.

추가적 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS, c) MCT 오일, d) 트윈 80 및 e) 에탄올을 함유하는 상기의 약제학적 제형의 유효량을 면역억제가 필요한 대상자에게 투여하는 과정을 포함하는 면역억제를 발생시키는 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 80, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 본 발명의 현재 양태의 약제학적 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다.

다른 추가적인 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) MCT 오일, c) 트윈 80, d) 트리아세틴 및 e) 에탄올을 함유하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 바람직한 약제학적 제형은 미세유화액이고, 더욱 바람직한 제형은 미세유화액 예비농축물이다.바람직한 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247, 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 트리아세틴, 약 5 중량% 내지 약 50 중량%의 MCT 오일, 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 80 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하는 것이다. 더욱 바람직하게는, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1: 5: 3: 1: 1인 것이다.

추가적 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) MCT 오일, c) 트윈 80, d) 트리아세틴 및 e) 에탄올을 함유하는 상기의 약제학적 제형의 유효량을 면역억제가 필요한 대상자에게 투여하는 과정을 포함하는 면역억제를 발생시키는 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 80, 에탄올, 트리아세틴 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 본 발명의 현재 양태의 약제학적 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 트윈 80, c) 비타민 E TPGS, d) 에탄올 및 e) 이소프로필 미리스테이트를 함유하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 바람직한 약제학적 제형은 미세유화액이고, 더욱 바람직한 제형은 미세유화액 예비농축물이다. 바람직한 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247, 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS, 약 5 중량% 내지 약 55 중량%의 이소프로필 미리스테이트, 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 80 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유한다. 더욱 바람직하게는, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1: 2: 1: 1: 6인 것이다.

추가적 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247, b) 트윈 80, c) 비타민 E TPGS, d) 에탄올 및 e) 이소프로필 미리스테이트를 함유하는 상기의 약제학적 제형의 유효량을 면역억제가 필요한 대상자에게 투여하는 과정을 포함하는 면역억제를 발생시키는 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 이소프로필 미리스테이트, 트윈 80, 에탄올, 비타민 E TPGS 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 본 발명의 현재 양태의 약제학적 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS, c) MCT 오일, d) 트윈 40 및 e) 에탄올을 함유하는 약제학적 제형 예비농축물에 관한 것이다. 바람직한 약제학적 제형 예비농축물은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247, 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS, 약 5 중량% 내지 약 20 중량%의 MCT 오일, 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 40 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유한다. 더욱 바람직하게는, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 : 4: 2: 2: 1인 것이다. 더 더욱 바람직하게는, 이러한 제형은 예비농축물이 수성 매질과 혼합되었을 때, 투명한 안정 미세유화액 용액을 형성하는 미세유화액 예비농축물이다. 바람직한 수성 매질은 물 또는 과일 쥬스(포도 쥬스는 제외함)이다. 또한, 예비농축물은 약 10 내지 약 100 부의 수성 매질에 대하여 약 1 부의 예비농축물의 비율로 수성 매질에 혼합되는 것이 바람직하다.

추가적 양태로서, 본 발명은 수성 매질내에 혼합되어, a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS, c) MCT 오일, d) 트윈 40 및 e) 에탄올을 함유하는 상기의 약제학적 제형의 유효량을 면역억제가 필요한 대상자에게 투여하는 과정을 포함하는 면역억제를 발생시키는 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 40, 에탄올, 비타민 E TPGS 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 본 발명의 현재 양태의 약제학적 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다. 이어서 얻어진 예비농축물은, 바람직하게는 약 10 내지 약 100 부의 수성 매질에 대하여 약 1 부의 예비농축물의 비율로 수성 매질과 혼합되어 진다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 a) ISAtx247의 약제학적 유효량, b) 비타민 E TPGS, c) MCT 오일, d) 트윈 40 및 e) 에탄올을 함유하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 이러한 제형은 비경구적으로, 예를 들면 피하 또는 근육내로 투여될 수 있으며 임의적으로 살균되어진다.

본 발명의 다른 양태로서, 미세유화액 예비농축물 제형들 중 어느 하나는 수성 매질과 혼합되어 투명하고 열역학적으로 안정한 미세유화액 용액을 형성할 수 있다. 수성 매질은 물 또는 과일 쥬스일 수 있으나, 포도 쥬스는 제외하는데, 이는 ISAtx247과 불리하게 반응될 수 있다. 또한, 예비농축물은 약 10 내지 약 100 부의 수성 매질에 대하여 약 1 부의 예비농축물의 비율로 수성 매질에 혼합되어질 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태로서, 미세유화액 예비농축물 제형들 중 어느 하나는 경구 제형일 수 있으며, 바람직하게는 연질 젤라틴 캡슐에 캡슐화될 수 있다.

도 1은 트윈 40 및 MCT 오일에 대한 부형제의 함수로서 미세유화액 예비농축물의 형성에 대한 표를 보여준다.

도 2는 비글 도그내에서 네오랄^R과 비교하여 본 발명의 ISAtx247 미세유화액에 대한 약물동역학(PK) 프로파일의 비교를 제공하는 그래프를 보여준다.

도 3은 반응조건에 따라 입체특이적 경로를 그룹화한 본 발명의 시클로스포린 유사체를 제조하는데 사용될 수 있는 예시적인 합성 경로들의 조감도이다.

도 4는 브롬 전구체로부터 ISAtx247의 (E)-이성체와 (Z)-이성체의 혼합물을 제조하는 합성 경로를 예시한다.

도 5는 알데히드 전구체로부터 ISAtx247의 (E)-이성체와 (Z)-이성체의 혼합물을 제조하는 합성 경로를 예시한다.

일반적으로, 본 명세서에서 사용된 용어는 당해 분야에서 이해되는 방식과 일치하도록 사용된다.

용어 "시클로스포린" 및 "사이클로스포린"은 단순한 단어의 변형에 불과하고 여기서는 동일한 화합물 또는 동일한 종류의 화합물을 호환적으로 언급하는 것으로 사용된다(참고로 시클로스포린의 영어 표현에서 "cyclosporin" 및 "cyclosporine"도 동일한 의미로 사용된다).

용어 "미세유화액 예비농축물(microemulsion preconcentrate)"은 미세유화액을 제공하는 수성 매질과 접촉할 수 있는 계를 의미한다. 여기서 사용된 미세유화액의 용어는 물 및 소수성(지방친화성) 유기성분들을 포함하면서 불투명하지 않은(투명한) 또는 실질적으로 불투명하지 않은(투명한) 열역학적으로 안정한 콜로이드 분산액으로서 통상적으로 인식되는 의미로서 본 명세서에서 사용된다.

용어 "유화액"이란 불균일계이면서, 적어도 하나 이상의 불용성 액체가 다른 액체에 방울(이의 직경은 일반적으로 0.1 mm를 초과함) 형태로서, 친화적으로 분산되어 구성되어진 것이다. 이러한 계는 최소한의 안정성을 가지며, 이는 계면활성제, 미세분말 고체 등과 같은 부가제에 의하여 두드러지게 될 수 있다. 통상적으로 "유화액"은 본 발명의 미세유화액과 상이하게 열역학적으로 불안정한 분산액으로 고려된다.

A. 제형의 제조

본 발명의 제형은 모두, 활성 성분으로서 ISAtx247 및 공-유화제(coemulsifier)로, 바람직하게는 폴리옥실화 잔기를 갖는 비이온성 계면활성제와 같은 합성 공유화제로 유화되어지는 합성 또는 식물성 오일을 함유한다. 본 발명의 제형은 필요한 pH 및 등장성을 조절할 수 있다. 또한 본 발명의 제형은 ISAtx247, 계면활성제, 에탄올, 지방친화성 및/또는 양쪽친화성 용매를 함유한다. 또한 필요시 보호 콜로이드, 현탁 안정제 및 빌더제(building agents)와 같은 생체적합성 중합체, 부형제, 결합제 및 캐리어를 포함할 수 있다. 특정한 바람직한 양태는 비교적 높은 약제 용해성 및 수성 매질내의 비교적 빠른 용해성(교반시 약 5분 미만)을 제공하여 미세유화액을 형성하는 투명한 안정한 제형을 형성한다.

따라서 본 발명의 제형은 ISAtx247, 계면할성제, 오일, 에탄올, 및 지방친화성 및/또는 양쪽친화성인 유화제를 함유하는 미세유화액, 또는 미세유화액 예비농축물이다. 특정 양태에서, 이러한 제형은 약 5 내지 약 10 중량%의 ISAtx247, 토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 카르복실산 에스테르와 같은 약 20 내지 약 50 중량%의 계면활성제(또는 임의적으로 트리아세틴과 같은 유화액 안정제), MCT 오일 또는 이소프로필 미리스테이트와 같은 약 5 내지 20 중량%의 오일 성분, 약 5 내지 약 15 중량%의 에탄올, 및 약 20 내지 약 40 중량%의 지방친화성 용매 및/또는 약 10 내지 약 55 중량 %의 양족친화성 용매를 함유한다. 또한, 이러한 제형은 약 10 내지 약 20 중량%의 다른 계면활성제를 임의로 함유할 수 있다.

본 발명의 제형은 충분한 약제 생체이용효율(표 3 및 5와 도 2 참조) 및/또는 감소된 독성(표 5와 7 참조)을 가질 수 있다. 이러한 증가된 생체이용효율 및/또는 감소된 독성의 메카니즘은 알려지지 않았다. 그러나 이론에 한정하지 않고, 비타민 E TPGS가 이러한 제형의 이들 특성에 공헌할 것이다. 예를 들면, 비타민 E TPGS의 공투여는 어린이의 간 이식 후 시클로스포린의 생체이용효율을 증가시키는 것으로 알려져 있다(Sokol et. al. 참조). 비타민 E TPGS는 장내의 시토크롬 P-450 약제 물질대사를 억제하여 생체이용효율을 증가시킬 수 있다. 또한, 비타민 E TPGS는 시클로스포린 유발 신장 시토크롬 P-450의 발생을 억제하고, 이어서 산화된 대사물의 형성의 감소를 억제할 것이다. 또한, 비타민 E TPGS는 P-gp-통제 후방 이송을 억제하여, 장내의 장낭포(enterocyte)를 통한 약제의 순수한 이동을 증가시켜 공투여 약제의 생체이용효율내의 증가시킬 수 있다. 또한 비타민 E TPGS는 알려진 산화방지제이다. 따라서 비타민 E TPGS는 아라키돈산 방출 및 리폭시지네이스(lipoxygenase)의 효소 활성을 억제하여 프로스타글란딘 형성에 영향을 주어 아라키돈산 물질대사에 중요한 역할을 할 수 있다. 이러한 과정에 의하여, 비타민 E TPGS는 혈소판 응집을 억제할 수 있으므로, ISAtx247의 신독성 효과를 감소시킬 수 있다. 또한, ISAtx247은 자체적으로 시클로스포린 A 및 다른 관련 화합물보다 더한 생체이용효율 및 덜한 독성을 가질 수 있다(15). 이들 메카니즘 중 어느 하나, 이들 메카니즘의 어떤 결합, 또는 알려지지 않은 메카니즘이 본 명세서에서 개시된 제형의 증가된 생체이용효율 및 감소된 독성에 공헌할 것이다.

활성 성분

본 발명의 제형의 바람직한 활성 성분은 시클로스포린의 유사체, ISAtx247이다. 이러한 ISAtx247은 E- 및 Z-이성체의 혼합물로서 또는 단일 E- 또는 Z-이성체로서 제형내에 존재할 수 있다. 이러한 ISAtx247 이성체들의 구조식은 다음과 같다:

이러한 제형은 약제 ISAtx247, 합성 또는 식물성 오일, 바람직하게는 폴리옥시에틸화 잔기를 갖는 비이온성 계면활성제, 바람직하게는 폴리옥시에틸화 비타민 E와 같은 합성 공유화제로 유화된 MCT(중간 사슬 트리글리세라이드)오일로 구성된다. 이러한 제형 함량은 필요시에 pH 및 등장성을 조절될 수 있다. 또한 이러한 제형은 폴리(비닐 피롤리돈)(PVP), 폴리 비닐 알콜(PVA) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)와 같은 생체적합성 중합체 및 보호 콜로이드와 같은 다른 중합체 및 필요시 현탁액 또는 벌크제, 부형제, 결합제 및/또는 캐리어를 포함할 수 있다.

위티그 반응을 통한 ISAtx247의 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물의 합성

여기서 예시된 위티그 반응 경로는 도 3에서 참고번호(31)에 의하여 확인된다. 방법 1은 브롬 중간체인 아세틸-η-브로모시클로스포린(41)을 통하여 진행되는 반면에, 방법 2는 출발점에서 아세틸 시클로스포린 A 알데히드(51)를 이용한다. 하기에서 기술한 예시 방법은 입체 화학적 배열의 혼합물에 알켄 작용성을 도입하기 위하여 위티그 반응을 이용한다.

ISAtx247의 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물을 합성하기 위하여 본 명세서에 개시된 예시 양태에서 사용된 위티그 반응은 할로겐화리튬의 존재하에서 선택적으로 수행될 수 있다. 위티그 반응에서 할로겐화리튬의 존재는 생성된 기하학 이성체의 비율에 영향을 준다고 잘 알려져 있으므로, 이러한 화합물의 첨가는 ISAtx247의 (E) 및 (Z)-이성체의 원하는 혼합물을 제조하는데 도움을 줄 수 있다.

방법 1

본 발명의 한 양태에서, ISAtx247의 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물은 도 4에 나타낸 바와 같이 제조된다. 도 4에 파동선의 사용(특히 화합물(43)과 (44) 참조)은 예시된 연속 반응이 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물을 생성시킨다는 것을 표시하기 위한 것이다. 한 양태에서, 생성된 (E) 대 (Z)-이성체의 백분율은 약 10 내지 90%의 (E)-이성체 대 약 90 내지 10%의 (Z)-이성체의 범위 내일 수 있지만, 이러한 범위는 단지 예시에 불과하고, 많은 다른 범위가 가능하다. 예를 들면, 혼합물은 약 15 내지 85%의 (E)-이성체 대 약 85 내지 15%의 (Z)-이성체를 함유할 수 있다. 다른 양태로서, 혼합물은 약 25 내지 75%의 (E)-이성체 대 약 75 내지 25%의 (Z)-이성체를 함유할 수 있다. 다른 양태로서, 혼합물은 약 35 내지 65%의 (E)-이성체 대 약 65 내지 35%의 (Z)-이성체를 함유할 수 있다. 다른 양태로서, 혼합물은 약 45 내지 55%의 (E)-이성체 대 약 55 내지 45%의 (Z)-이성체를 함유할 수 있다. 또 다른 양태로서, 이성체 혼합물은 약 45 내지 55%의 (E)-이성체 및 약 55 내지 45%의 (Z)-이성체를 함유하는 ISAtx247 혼합물이다. 여기서 중량%는 조성물의 총량을 기준으로 하는 것이며, (E)-이성체와 (Z)-이성체의 중량%의 합은 100%이다. 다른 말로 하면, 혼합물은 65%의 (E)-이성체와 35%의 (Z)-이성체를 함유할 수 있고, 그 역으로도 가능하다.

도 4에서, 아세틸-시클로스포린 A의 1-아미노산 잔기의 측쇄의 말단 η-탄소는 아세틸-시클로스포린 A(35)를 N-브로모숙신이미드 및 아조-비스-이소부티로니트릴과 함께 사염화탄소과 같은 용매의 존재하에서 환류하여, 중간체인 아세틸-η-브로모시클로포린 A(41)을 제조하므로써 반응의 다음 단계에서 브롬화된다. N-브로모숙신이미드는 알릴 수소를 브롬으로 치환하는데 종종 사용하는 시약으로서, 이는 자유라디칼 메카니즘에 의하여 그렇게 진행된다고 믿고 있다. 중간체(41)의 제조는 다음 문헌(M. K. Eberle and F. Nuninger in "Synthesis of the Main Metabolite (OL-17) of Cyclosporin A," J. Org. Chem., Vol. 57, pp. 2689-2691 (1992))에 실질적으로 기재되어 있다.

신규한 중간체인 아세틸 시클로스포린 A의 트리페닐포스포늄 브로마이드(42)는 아세틸-η-브로모시클로스포린 A(41)로부터 제조될 수 있는데, 이러한 화합물을 톨루엔과 같은 용매의 존재하에서 트리페닐포스핀과 함께 가열하여 제조될 수 있다.

신규한 중간체(42), 및 이와 유사한 다른 것들도, 1-아미노산 잔기내에 짝 디엔계(conjugated diene system)를 함유하는 다수의 시클로스포린 A 유사체의 합성에서 중요한 중간체로 간주되고 있다. 예를 들면, 트리페닐포스핀외에도, 트리아릴포스핀, 트리알킬포스핀, 아릴알킬포스핀, 및 트리아릴아르신과 같은 화합물은 아세틸-η-브로모시클로스포린 A(41)과 반응하여 화합물(42)과 유사한 다른 활성화합물을 제조할 수 있다.

도 4에서, 아세틸 1,3-디엔의 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물(43)은 아세틸 시클로스포린 A의 트리페닐포스포늄 브로마이드(42)를 실온에서 톨루엔중의 과량의 포름알데히드와 함께 교반하여 제조될 수 있다. 포름알데히드의 첨가에 이어서, 수산화나트륨과 같은 염기를 적가하여 디엔의 이성체 혼합물을 에틸 아세테이트로서 추출하였다.

수많은 유기화학 책에 위티그 반응에 관하여 기술되어 있다. 특히 언급하는 것은 다음 책(J. McMurry, Oganic Chemisty, 5th Ed. (Brooks/Cole, Pacific Grove, 2000), pp. 780-783)이다. 위티그 반응은 케톤 또는 알데히드를 알켄으로 전환시키기 위하여 사용될 수 있다. 이러한 반응에서, 포스포러스 일라이드(phosphorus ylide) 또는 포스포란이라고 불리는 것은 케톤 또는 알데히드와 반응하여 베타인으로 불리는 이중극성 중간체를 얻을 수 있다. 일반적으로 베타인 중간체는 분리되지 않기 보다는, 오히려, 4-원 고리를 통하여 자발적으로 분해되어 알켄과 트리페닐포스핀 옥사이드를 생성하는 것이다. 정미적 결과는 원래 인에 결합된 R₂C=기에 의하여 카르보닐 산소 원자의 치환이다.

당해 분야의 숙련가는 상기에서 인용된 예시적인 위티그 반응 시약대신에 아주 다양한 시약을 대체할 수 있다는 것은 이해할 것이다. 예를 들면, 수많은 알킬, 아릴, 알데히드, 및 케톤 화합물을 포름알데히드대신에 사용하여 매우 많은 시클로스포린 유도체를 제조할 수 있다. 출원인은 포름알데히드로 상기 합성을 수행하였으며, 포름알데히드 대신에, 아세트알데히드, 중수소화 포름알데히드, 중수소화 아세트알데히드, 2-클로로 벤즈알데히드, 및 부티르알데히드와 같은 화합물을 사용하였다. 이러한 위티그 반응은 트리페닐포스포늄 유도체외에도, 트리아릴포스핀, 트리알킬포스핀, 아릴알킬포스핀 및 트리아릴아르신과 같은 화합물과 함께 수행될 수 있다. 수산화나트륨을 사용하는 대신에, 탄산나트륨, 부틸리튬, 헥실리튬, 나트륨 아미드, 리튬 디이소프로필아미드와 같은 리튬 장애 염기, 및 알칼리금속 알콕시드와 같은 다양한 다른 염기를 사용할 수 있다. 이러한 시약을 변화시키는 외에도, 반응은 다양한 염, 특히 할로겐화 리튬의 존재하에서, 다양한 온도에서 여러 가지 유기용매 또는 유기용매와 물의 혼합물 하에서 수행될 수 있다. 상술한 모든 인자들은 형성된 이중결합의 입체화학에 바람직한 효과, 즉 시스 내지 트랜스-이성체의 비율에 바람직한 효과를 주는 방향에서 당해분야의 숙련가에 의하여 적당하게 선택되어질 수 있다. 본 발명의 한 양태에서, 위티그 반응은 테트라히드로푸란 및 톨루엔으로 구성된 군으로부터 선택된 용매의 존재하에서 수행되며, 이러한 용매는 부틸리튬, 나트륨 저급 알콕사이드, 칼슘 저급 알콕사이드, 및 탄산염을 포함하는 군으로부터 선택된 화합물의 존재하에서 약 -80℃ 내지 110℃ 범위의 온도에서 사용되었다. 칼륨 저급 산화물은 칼륨-t-부톡사이드이다. 더욱이, 칼륨-t-부톡사이드의 존재하에 약 -70℃ 내지 -100℃ 범위의 온도에서 사용되는 용매는 테트라히드로푸란이다.

이러한 합성의 마지막 단계에서, β-탄소상의 보호기는 다음의 방법을 사용하여 제거된다. 아세틸-(E)-1,3-디엔 및 아세틸-(Z)-1,3-디엔의 혼합물(43)을 메탄올에 용해시킨 다음, 물을 첨가하였다. 탄산칼륨과 같은 염기를 첨가하고, 실온에서 반응혼합물을 교반하였다. 사용될 수 있는 탄산칼륨이외의 염기는 수산화나트륨, 탄산나트륨, 나트륨 알콕시드, 및 칼륨 알콕시드를 포함하였다. 이어서 에틸 아세테이트를 사용하여 ISAtx247의 (E) 및 (Z)-이성체의 최종 혼합물(44)을 추출하였다.

방법 2

위티그 반응 전략에 의하여 ISAtx247의 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물을 합성하기 위한 다른 반응 경로에 따르면, 다음과 같은 4단계의 합성 경로를 사용할 수 있다: 1) 방법 1에서와 같은 3-알콜의 보호; 2) 제1 단계로부터 제조된 아세틸-시클로스포린 A를 산화시켜 알데히드의 제조; 3) 위티그 반응; 및 4) 위티그 반응 생성물의 탈아세틸화(de-acetylation) 또는 동등하게, 아세테이트 에스테르의 가수분해로 알콜의 회수. 이러한 반응 과정은 도 5에 나타내었다.

이러한 합성 경로는 제 1단계를 아세테이트 에스테르기로 β-알콜을 보호하는 도 4의 위티드 반응 경로와 유사한 방법으로 시작하였다. 그러나 방법 2의 다음 단계는 아세틸-시클로스포린 A(35)를 알데히드, 아세틸-시클로스포린 A 알데히드(51)로 전환시킨다는 점에서 두 경로는 차이가 있다. 이 반응은 충분하게 강한 산화제를 사용하여 C=C 결합을 절단하여 2개의 물질을 생성한다. 알켄의 절단은 당해 분야에서 알려져 있다. 오존은 아마도 이중결합 절단 시약으로 가장 일반적으로 사용되는 것이지만, 과망간산칼륨(KMnO₄) 또는 사산화오스뮴과 같은 다른 산화제도 마찬가지로 이중결합을 절단시킬 수 있다.

레테늄 기재 산화제의 사용은 다음 문헌(H. J. Carlsen et al. in "A Greatly Improved Procedure for Ruthenium Tetroxide Catalyzed Oxidations of Organic Compounds," J. Org. Chem., Vol. 46, No. 19, pp 3736-3738 (1981))에 논의되어 있다.

칼센 등은 역사적으로, 루테늄 금속의 비용은 촉매적 방법이 발달하도록 자극하였고, 여기서 가장 인기있는 것은 화학양론적 산화제로서 과요오드산염 또는 하이포클로라이트를 사용하는 것이라고 가르치고 있다. 이들 개발자들은 루테늄의 통상적 사용에 의하여 반응과정동안에 촉매활성의 손실을 발견하였는데, 이들은 이를 카르복실산의 존재에 기인한다고 생각하였다. 반응혼합물에 니트릴, 특히 아세토니트릴의 첨가는 CCl₄/H₂O/IO₄ ^- 시스템내에서 알켄의 산화적 절단의 속도와 정도를 상당하게 높인다는 것을 밝혀내었다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 아세틸 시클로스포린 A 알데히드(51)는 아세틸 시클로스포린 A(35)를 아세토니트릴과 물의 혼합물에 용해시킨 다음, 우선 과요오드산 나트륨에 이어서 염화 루테늄 수화물을 첨가하여 아세틸 시클로스포린 A(35)로부터 제조될 수 있다. 알데히드(51)는 에틸 아세테이트에 의하여 추출될 수 있다. 이러한 산화적 절단 전략에 의한 알데히드(51)의 합성은 하기에서 논의될 많은 입체특이적 경로에서 중요하다는 것을 주지하여야만 하며, 따라서 이 부분에 대해서는 후술하는 내용을 참고하면 될 것이다.

방법 2의 세 번째 단계는 알데히드(51)를 방법 1과 유사한 방법에 의하여 위티그 반응을 통하여 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물로 전화하는 과정을 포함하였다. 방법 1에서와 같이, 포스포러스 일라이드를 알데히드에 첨가하여 베타인(betaine, 분리되지 않은 것)을 얻는데, 정미의 결과는 알데히드의 카르보닐 산소원자가 원래 인에 결합된 R₂C=기에 의하여 대체된 것이다. 다시, 위티그 반응은 트리페닐포스포늄 유도체외에도, 트리아릴포스핀, 트리알킬포스핀, 아릴알킬포스핀 및 트리아릴아르신과 같은 인-함유 화합물과 함께 다양한 온도에서 수행될 수 있으며, 다양한 염기성 용액과 용매의 사용 또한 다양한 무기염의 첨가는 새롭게 형성된 이중결합의 입체화학에 영향을 미치게 될 것이다.

한 양태에서, 아세틸 시클로스포린 A 알데히드(51)는 톨루엔에 용해된 다음, 여기에 수산화나트륨 수용액과 같은 염기를 가하였다. 이어서 알릴 트리페닐포스포늄 브로마이드(52)을 첨가한 다음, 몇 시간동안 반응을 교반하였다. 아세틸 (E) 및 (Z)-1,3-디엔의 생성 혼합물(53)의 추가 절차(work-up)는 헥산 및/또는 에틸 아세테이트로 추출하는 과정을 포함하며, 여기서 '추가 절차'의 용어는 반응물, 생성물, 용매 등의 혼합물로부터 반응 생성물을 추출하고/하거나 분리하는 과정을 의미하는 것으로 사용한다.

방법 2의 마지막 단계에서, 방법 1의 마지막 단계와 유사하게, β-탄소 위치에 있는 알콜을 보호하는 아세테이트 에스테르기는 탄산칼륨으로 제거되어, ISAtx247의 (E) 및 (Z)-이성체의 혼합물(54)을 수득한다. 보호기를 제거하기 위하여 사용되는 탄산칼륨이외 염기는 수산화나트륨, 탄산나트륨, 나트륨 알콕시드, 및 칼륨 알콕시드를 포함하였다.

비타민 E TPGS

토코페릴은 제형에서 산화방지제로서 사용된다. D-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트(비타민 E TPGS)(Eastman Kodak, Rochester, NY)는 비타민 E의 수용성 유도체이고, 친수성 및 지방친화성의 양쪽 성질을 갖고 있으며, 당해 분야에서 알려진 제형에서 산화방지제 또는 방부제로서 사용되어진다. 산화방지제로서 사용되어질 경우에, 토코페릴 또는 비타민 E TPGS는 약 0.5 내지 약 1 중량% 범위 내, 5중량% 초과하지 않은 범위 내에서 존재할 수 있다.

비타민 E TPGS는 물에 용해되어 약 20 중량% 까지의 농도에서 물과 함께 용액을 형성하고, 이 범위 이상에서는 액정 상을 형성할 것이다. 비타민 E TPGS는 높은 분해 온도 및 양호한 열적 안정성을 갖는다. 0.02중량%에서는 교질입자(Micelles)을 형성한다.

비타민 E TPGS 농도가 20 중량%를 초과할 경우에는, 더욱 높은 점도의 액정 상을 형성한다. 물속에서 비타민 E TPGS의 농도를 증가시킬 경우, 더욱 복잡한 액정 상들은 등장성 공모양의(globular) 교질입자로부터 등장성 실린더형 교질입자 및 육선형(hexagonal) 교질입자, 육선형 교질입자, 혼합된 육선형과 역육선형(reversed hexagonal) 교질입자, 역 공모양의 교질입자, 및 층판(lamellar)상으로 서서히 변화하여 간다. 이들 제형에서, 또한 비타민 E TPGS는 계면활성제로서 또는 유화제로서 사용되어질 수 있다. 또한 이는 용매, 결합제, 및 충전제로서 작용하는 수많은 다른 부형제를 포함하는 복잡한 제형에서 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에서 비타민 E TPGS는 유화제 및 보조제로서 뿐만 아니라, 오일의 변형을 억제하기 위해서, 즉 오일의 변형으로 고약한 냄새가 나는 것을 예방하는 데에도 존재할 수 있다.

오일 성분

본 발명의 오일 성분은 식물성 오일, 합성 오일, 트리아세틴과 같은 오일 치환물, 무기 오일 또는 중간 사슬 트리글리세라이드(MCT)오일, 즉 카르보히드레이트 사슬이 8-10개의 탄소원자를 갖는 트리글리세라이드 오일일 수 있다. 바람직한 오일 성분은 MCT 오일이다.

MCT 오일은 식물성 오일보다 많은 장점을 갖고 있는데, 이러한 장점은 1) 낮은 산화 가능성; 2) 식물성 오일보다 높지만 물과 비슷하여 안정한 미세유화액을 용이하게 얻게 하는 약 0.94 - 0.95의 비중; 3) 식물성 오일보다 덜 친수성을 갖기 때문에 물에 용해되는 약제의 농도를 더 높게 달성할 수 있는 것; 및 4) 실질적으로 점도를 증가시키지 않고 조성물에서 오일상의 더 높은 농도를 달성할 수 있도록 하는 낮은 점도를 포함한다(15).

MCT 오일은 상업적으로 구입가능하다. 본 발명에서 사용할 수 있는 MCT 오일의 예로는, 이것으로 한정하지 않지만, TCR^TM(trade name of Societe Industrielle des Oleagineaux, France, for a mixture of triglycerides wherein about 95% of the fatty acid chains have 8 or 10 carbons) 및 MIGLYOL 812^TM(trade name of Dynamit Nobel, Sweden, for a mixed triester of glycerine and of caprylic and capric acids)를 포함한다. 이소프로필 미리스테이트도 본 발명의 제형에서 사용될 수 있는 상업적으로 구입 가능한 또 다른 오일이다.

본 발명에서 사용할 수 있는 식물성 오일의 예로는, 이것으로 한정하지 않지만, 두유, 목화종자유, 올리브유, 참깨유 및 피마자유를 포함한다. 본 발명에서 사용할 수 있는 무기 오일의 예로는, 이것으로 한정하지 않지만, 천연 탄화수소류 또는 이들 합성 유사체를 포함한다. 올레산 및 리놀레산과 같은 유지방산(Oily fatty acids)류, 올레일 알콜과 같은 지방 알콜류, 소르비탄 모노올레이이트 및 소수성 슈크로스 에스테르와 같은 지방 에스테르류가 오일 성분으로서 사용될 수 있지만, 이들은 본 명세서에서 언급되는 기타 오일만큼은 바람직하지는 않다. 본 발명에서 사용할 수 있는 다른 지질의 예로는, 이것으로 한정하지 않지만, 합성 및 반-합성 모노-, 디- 및/또는 트리글리세라이드, 천연적, 합성적 또는 반합성적 트리글리세라이드의 용매 또는 열적 분별(fractionation)에 의하여 제조된 트리글리세라이드, 및 인터에스테르피케이션(interesterification) 및/또는 직접 또는 랜덤 재배열에 의하여 제조된 트리글리세라이드를 포함한다.

유화제

본 발명의 제형은 하나 이상의 유화제를 함유한다. 바람직한 유화제 또는 계면활성제는 비이온성 지방친화성 용매 또는 비이온성 양쪽친화성 용매이다: 이러한 유화제는 트윈 40, 트윈 80 등과 같은 트윈(Tween)일 수 있다. 그러나 미세유화액 예비농축물을 형성할 수 있는 어떤 계면활성제도 사용될 수 있다. 몇 가지 예들은 하기에 나타내었다.

계면활성제 성분은 양쪽친화성, 친수성 또는 지방친화성 계면활성제, 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 특히 바람직한 것은 비이온성 친수성 및 비이온성 지방친화성 계면활성제이다. 계면활성제 성분으로서 사용하기에 적당한 친수성 계면활성제의 예로는 천연 또는 수소화 식물성 오일 및 에틸렌 글리콜의 반응 생성물이다. 이러한 생성물은 공지의 방법, 예를 들면, 천연 또는 수소화 피마자유 또는 이의 분류물(fractions)과 에틸렌 옥사이드와의 반응에 의하여, 생성물로부터 자유 폴리에틸렌글리콜 성분의 임의적 제거와 함께 얻어질 수 있다. 또한 적합한 것은 상표명 크레모포르(Cremophor^TM)로 시판 중에 있는 다양한 텐사이드(tensides) 또는 계면활성제이다. 특히 적합한 것은 크레모포르 RH 40(Cremophor^TMRH 40) 크레모포르 EL(Cremophor^TM EL)이다. 또한 이러한 분류에서 사용하기에 적합한 것은 상표명 닉콜(Nikkol^TM)로 시판 중에 있는 다양한 텐사이드이다.

다른 예로는 폴리옥시에틸렌-소르비탄-지방산 에스테르, 예를 들면 모노- 및 트리라우릴, 팔미틸, 스테아릴 및 올레일 에스테르, 예를 들면 다음을 포함하는 트윈류가 있다: 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄모노라우레이트(Tween^TM 20), 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄모노팔미테이트(Tween^TM40), 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄트리스테아레이트(Tween^TM 60), 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄트리올레에이트(Tween^TM 80), 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄트리스테아레이트(Tween^TM 65), 폴리옥시에틸렌(4) 소르비탄트리올레에이트(Tween^TM 84), 폴리옥시에틸렌(4) 소르비탄모노라우레이트(Tween^TM 21), 폴리옥시에틸렌(4) 소르비탄모노스테아레이트(Tween^TM 61), 및 폴리옥시에틸렌(5) 소르비탄모노올레에이트(Tween^TM 81). 이 부류 중에서 본 발명의 조성물에서 사용하기에 특히 바람직한 생성물은 트윈 40 및 트윈 80, 폴리올시에틸렌 스테아린산 에스테르와 같은 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 잘 알려지고 상표명 폴록사머(Poloxamer^TM)로서 시판 중에 있는 형태의 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블록 공중합체, 디옥틸숙신네이트, 디옥틸소듐술포숙신네이트, 디-2-에틸헥실-숙신네이트 또는 쇼듐 라우릴 술포네이드, 및 포스포리피드(phospholipids), 특히 레시틴이다. 본 발명의 조성물에서 사용하기에 특히 바람직한 레시틴은 한정하지 않지만, 대두 레시틴이다. 다른 적합한 생성물은 크레모포르, 니콜, 글리콜화 천연 또는 수소화 식물성 오일, 및 카프릴-카프르산 디에스테르를 포함한다. 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트, 프로필렌 글리콜 디라우레이트, 프로필렌 글리콜 히드록시스테아레이트, 프로필렌 글리콜 이소스테아레이트, 프로필렌 글리콜 라우레이트, 프로필렌 글리콜 리시놀레에이트, 프로필렌 글리콜 스테아레이트와 같은 프로필렌 글리콜 모노- 및 디 지방산 에스테르가 또한 적합하다.

본 발명의 제형은 추가로 약제학적으로 허용가능한 계면활성제, 콜로이드, 현탁액, 벌킹제, 부형제, 캐리어, 텐사이드 또는 코텐사이드(cotenside)를 함유할 수 있다.

B. 본 발명의 바람직한 제형

본 발명의 바람직한 양태는 충분한 약제 생체이용효율 및/또는 감소된 독성을 제공하는 안정한 미세유화액 예비농축물에 있다. 이러한 제형은 약제 생체이용효율을 증가시키고 시클로스포린 및 이의 유사체의 투여와 관련하여 부작용을 감소시킬 수 있는 우수한 효능을 가질 수 있다. 미세유화액 제형은 더욱 작은 입자로 약제의 전달을 제공할 것이다. 더욱 작은 입자로 약제의 단위 투여에 의한 전달은 증가된 표면적을 제공하여 아마도 더 높은 흡수 및 더 좋은 생체이용효율을 제공하게 될 것이다. 미세유화액은 당해 분야에서 공지되어 있다. 그러나 본 제형의 성분들을 사용하는 미세유화액은 에탄올, 비타민 E TPGS, 오일 성분, 및 ISAtx247과 유사한 활성 성분에 대한 예전의 공지 제형의 범위를 벗어난 유화제의 현명한 선택에 의하여 형성된다. 5% 미만의 에탄올, 50 %를 초과하는 비타민 E TPGS를 함유하는 이러한 조성물은 실온에서 고상의 미세유화액 예비농축물을 형성하며, 이는 본 발명의 제형의 덜 바람직한 태양이다.

본 발명의 조성물에서 성분들의 상대적 비율은 물론, 관심을 갖는 특정의 조성물 형태, 즉 그것이 "미세유화액 예비농축물", 미세유화액, 정상적인 유화액, 용액 등에 따라 상당하게 변할 것이다. 또한 이러한 상대적 비율은 조성물 내의 성분들의 특정 함수에 따라, 예를 들면 "미세유화액 예비농축물"의 계면활성제 성분의 경우에, 계면활성제 단독으로 또는 공용매(co-solvent)와 함께 사용하느냐에 따라 변할 것이다. 이러한 상대적 비율은 또한 사용된 특정 성분들 및 생성물의 원하는 물리적 특성에 따라 변할 것이다. 어떤 특정한 예에서 작용가능한 비율의 결정은 일반적으로 숙련가의 능력범위 내에 있을 것이다. 따라서 하기에 나타낸 모든 비율과 상대적 질량 범위는 단지 바람직하거나 개별적인 발명의 설명의 예시를 위한 것으로 이해되어야 하고 본 발명을 이의 가장 넓은 범위내로 한정하는 것으로 이해되지 말아야 할 것이다. 본 발명의 미세유화액은 미세유화액 예비농축물일 수 있다. 본 발명의 바람직한 제형은 다음과 같다:

제형 1

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS :

c) MCT 오일;

d) 트윈 40; 및

e) 에탄올

이들 성분비 = 0.5 - 1: 4: 2: 2: 1.

제형 2

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS;

c) MCT 오일;

d) 트윈 80; 및

e) 에탄올

이들 성분비 = 0.5 - 1: 2: 4: 2: 1.

제형 3

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) MCT 오일;

c) 트윈 80;

d) 트리아세틴 ; 및

e) 에탄올

이들 성분비 = 0.5 - 1: 5: 3: 1: 1.

제형 4

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 트윈 80 ;

c) 비타민 E TPGS ;

d) 에탄올; 및

e) 이소프로필 미리스테이트

이들 성분비 = 0.5 - 1: 2: 1: 1: 6.

제형 5

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS;

c) MCT 오일;

d) 트윈 40; 및

e) 에탄올

이들 성분비 = 0.5 - 1: 4: 2: 2: 1(이러한 제형은 수성 매질과 추가로 혼합되어 투명한 안정 미세유화액 용액을 형성함)

이러한 수성 매질은 이들에 한정하지 않으면서, 물, 사과 쥬스와 같은 과일 쥬스, 차, 우유 및 코코아를 포함할 수 있다. 유용한 과일 쥬스는 포도 쥬스는 제외하고, 바람직하게는 사과 쥬스이다. 이러한 제형은 약 10 내지 약 100 부의 수성 매질에 대하여 약 1 부의 제형의 비율로 수성 매질내에 용해되는 것이 바람직하다.

본 발명의 약제학적 제형은 충분한 생체이용효율을 이용하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, ISAtx247의 생체이용효율은 30% 이상, 더욱 바람직하게는 40%을 초과한다. 이러한 약제학적 제형은 경구 투여를 위한 형태, 예컨대 미세유화액, 또는 미세유화액 예비농축물이 바람직하다. 수성 매질은 환자들이 용이하게 경구 제형을 소비하도록 환자의 입맛에 맞는 것이 바람직하다.

면역억제가 필요한 환자에게 유효량을 투여하였을 때, 본 발명의 제형은 면역억제를 발생시킬 것이다. 바람직하게는, 투여되는 약제학적 제형의 양은 1일당 대상자의 체중(kg)당 약 0.1 내지 10 mg, 더욱 바람직하게는 약 0.5 내지 3 mg이다. 제형은 하루에 한 번 또는 두 번 투여하는 것이 바람직하다.

적당하게 투여하였을 때, 본 발명의 제형은 예를 들면, 기관 거부 또는 이식편대숙주 질병을 예방하거나, 질병 및 상태, 특히 자기면역 및 염증 질병 및 상태를 치료하는 것을 포함하는 면역억제를 위하여 사용될 수 있다. 본 발명에서 고려되고 있는 자기면역 및 염증 질병은, 한정하는 것은 아니지만, 하시모토 갑상선염, 악성 빈열, 아디손 질병, 건선, 당뇨, 류마티스성 관절염, 조직 낭창홍반, 피부근염, 쇼그린 증후군, 낭창홍반, 다경화증, 위근무력증, 라이터 증후군, 관절염(예를 들면, 류마티스성 관절염, 만성 경과 관절염 및 변형 관절염) 및 류머티즘성 질병, 자기면역의 혈액장애(용혈성 빈혈, 형성불능성 빈혈, 순적혈구 빈혈 및 특발성 혈소판감소증), 다발연골염, 경질섬유종, 전신성혈관염(Wegener granulomatosis), 만성활성간염, 건선, 스티브-존슨 증상(Steven-Johnson syndrome), 특발성 장흡수부전증,(자기면역)염증 장질병(괘양성 재장염과 Crohn 질병의 포함), 내분비선 안염, 그래브 질병, 유사육종증, 주담즙 경변증, 초생 당뇨병(당뇨병 제1형), 포도막염(전방 및 후방), 각결막염과 초생 각결막염, 간질성 폐섬유증, 건선성 관절염, 사구체 신염을 포함한다.

본 발명의 제형은 또한 말라리아, 콕시디오이디즈진균증(coccidiomycosis ) 및 주혈흡충증과 같은 기생충 구충제성(anti-parasitic) 또는 항원생동물성(anti-protozal) 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. 또한 이들은 종양내의 항종양제 내성을 취소하거나 폐지하기 위한 약제로서 사용될 수 있다.

또한 본 발명은 비경구적으로(예를 들면, 파하 또는 근육내로) 투여되는 제형에 관한 것이다. 이러한 제형은 다음 성분들을 함유한다:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS;

c) MCT 오일;

d) 트윈 40; 및

e) 에탄올.

바람직하게는 이러한 제형은 투여 전에 살균되어진다.

C. 방법학

본 발명자들은 시클로스포린 유사체 ISAtx247의 안정한 제형을 제조할 수 있다는 것을 밝혀내었다. 본 발명의 제형은 다음 방법에 의하여 제조될 수 있다. 그러나 당해분야의 숙련가는 이들 단계의 어떤 순서도 가능하다는 것을 알 것이다. 또한 다음에서 사용되는 성분들의 양은 상술한 바와 같으며 후술하는 방법은 하나 이상의 단계들로 쉽게 전환시킬 수 있거나 공정을 완전히 역으로 바꿀 수 있다.

어떻게 미세유화액 예비농축물을 수성 용액에 가하여 미세유화액을 형성하는지에 관하여 제형 5만이 상세히 기술하지만, 어떤 미세유화액 예비농축물 제형도 수성 매질과 혼합하여 미세유화액으로 전환시킬 수 있을 것이다. 바람직하게는, 이러한 농축물은 10-100 부의 매질에 대하여 1 부의 예비농축물의 비율로 수성 매질과 혼합된다. 더욱 바람직하게는 수성 매질은 사과 쥬스이다.

제형 1

우선, MCT 오일을 트윈 40에 가하여 실온(20 - 25 ℃)에서 혼합물을 형성한다. 이어서, 에탄올을 MCT 오일과 트윈 40의 혼합물에 가한다. 그런 다음, 비타민 E TPGS를 혼합물에 가한다. 얻어진 혼합물을 투명할 때까지 30-35 ℃에서 교반하면서 배양(incubation)시킨다. 이어서 ISAtx247의 적당량을 가한다. 마지막으로 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 성분들을 30 - 35 ℃에서 혼합한다.

제형 2

우선, MCT 오일을 트윈 80에 가하여 실온(20 - 25 ℃)에서 혼합물을 형성한다. 이어서, 에탄올을 MCT 오일과 트윈 80의 혼합물에 가한다. 그런 다음, 비타민 E TPGS를 혼합물에 가한다. 얻어진 혼합물을 투명할 때까지 30 - 35 ℃에서 교반하면서 배양시킨다. 이어서 ISAtx247의 적당량을 가한다. 마지막으로 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 성분들을 30 - 35 ℃에서 혼합한다.

제형 3

우선, MCT 오일을 트윈 80에 가하여 실온(20 - 25 ℃)에서 혼합물을 형성한다. 이어서, 에탄올을 MCT 오일과 트윈 80의 혼합물에 가한다. 그런 다음, 트리아세틴을 혼합물에 가한다. 얻어진 혼합물을 투명할 때까지 30 - 35 ℃에서 교반하면서 배양시킨다. 이어서 ISAtx247의 적당량을 가한다. 마지막으로 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 성분들을 30 - 35 ℃에서 혼합한다.

제형 4

우선, MCT 오일을 트윈 80에 가하여 실온(20 - 25 ℃)에서 혼합한다. 이어서, 이소프로필 미리스테이트 및 에탄올을 실온(20 - 25 ℃)에서 혼합물에 가한다. 이어서 ISAtx247의 적당량을 가한다. 마지막으로 ISAtx247이 실온(20 - 25 ℃)에서 완전히 용해될 때까지 성분들을 혼합한다.

제형 5

우선, MCT 오일을 트윈 40에 가하여 실온(20 - 25 ℃)에서 혼합물을 형성한다. 이어서, 에탄올을 MCT 오일과 트윈 40의 혼합물에 가한다. 그런 다음, 비타민 E TPGS를 혼합물에 가한다. 얻어진 혼합물을 투명할 때까지 30 - 35 ℃에서 교반하면서 배양시킨다. 이어서 ISAtx247의 적당량을 가한다. 마지막으로 ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 성분들을 30 - 35 ℃에서 혼합한다. 그런 다음 얻어진 예비농축물을 수성 매질과 혼합한다. 이러한 예비농축물은 약 10 내지 약 100 부의 수성 매질에 대하여 약 1 부의 예비농축물의 비율로 수성 매질과 혼합되는 것이 바람직하다.

바람직한 방법학에서, 상기 제형의 각각은 ISAtx247를 에탄올에 우선 용해시켜 제조된다. 나머지 성분들은 어떤 순서에 의해서도 첨가될 수 있다.

본 발명의 실시예의 개시

하기 실시예에서, 다음의 약어는 다음의 의미를 갖는다. 만일 약어가 정의되어 있지 않으면, 이는 일반적으로 받아들여지는 의미를 갖는다:

w/w = 중량 대 중량 nm = 나노메타

NF = 국가 처방집 T_max = 최대 농도의 시간

NF/NP = 국가 처방집/국가 약전 C_max =최대 농도

USP = 미국 약전 AUC = 곡선하의 면적

mg = 밀리그램 LCMS = 액체 크로마토그라피-질량분광계

ml = 밀리리터 MCT = 중간 사슬 트리글리세라이드

kg = 킬로그램 PK = 약물동역학

ng = 나노그램 PS = 돼지 가죽(pig skin)

2개의 약제 생성물, 경구 용액 및 연질 젤라틴 캡슐이 출원인인 이소테크니카 회사에 의하여 개발되어졌다. 이들 2개의 약제 생성물은 성분으로서 계면활성제, 에탄올, 지방친화성 및/또는 양성기호성 용매를 함유한다. 각각의 제형은 하기에 기술한다.

실시예 1: ISAtx247 경구 용액의 제조

다음의 성분들로 ISAtx247 약제 생성물-경구 용액을 제조하였다: ISAtx247, d-알파 토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙신네이트(비타민 E TPGS) NF, 중간 사슬 트리글리세라이드(MCT) 오일 USP, 트윈-40 NF, 및 95% 에탄올 USP

ISAtx247 경구 용액의 조성물
성분(시험 표준)	단위 및/또는% 제형강도:50mg/ml	배취(batch)당 정량(kg)
성분(시험 표준)	단위 및/또는% 제형강도:50mg/ml	Lot#39120228	Lot#30010532	Lot#30040517
d-알파 토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙신네이트(비타민 E TPGS) NF	42.24%	0.16205	0.544	0.768
중간 사슬트리글리세라이드(MCT) 오일 USP	21.12%	0.08102	0.272	0.384
트윈-40 NF	21.12%	0.08102	0.272	0.384
95% 에탄올 USP	10.56%	0.04051	0.316	0.192
ISAtx247	4.95%	0.01900	0.0637	0.090
합계	99.99%	0.38360	1.286	1.818

비타민 E TPGS를 뜨거운 박스 내에서 용해시키고 액체 분배기로 옮겼다. 각각의 TPGS 용기의 따뜻한 내용물을 적어도 1 분 동안 혼합하여 시각적으로 균질한 액체가 되도록 하였다. 각각의 통내의 내용물의 온도가 35 ℃이상일 때, 37.5 ℃± 2.5 ℃의 요구 온도에서 그로엔 용기(Groen vessel)를 준비하였다.

성분 비타민 E TPGS, MCT 오일, 트윈 40 및 95% 에탄올의 요구량을 계량하여 적당한 식별 표시가 있는 개별 용기에 넣어두었다. 비타민 E TPGS를 순간적으로 그로엔 용기에 옮겨놓았다. 이어서 MCT 오일, 트윈 40, 및 에탄올을 예비-계량된 비타민 E TPGS를 함유하는 용기내로 단계적 분량으로 옮겨 넣었다. 용기를 확실하게 밀봉하여 에탄올의 증발을 막고 37.5 ℃± 2.5 ℃의 온도에서 15-20분 동안 혼합한 다음, 에탄올을 첨가하였다.

최상부 및 최하부 시료를 살균 유리 1회용 피펫을 사용하여 관찰하였다. 피펫의 내용물이 눈으로 보이면 투명하고 균질한 것으로 기대하였다.

약간의 소용돌이가 일어나도록 혼합기를 설정하였다. 혼합하는 동안에 에탄올의 증발을 줄이기 위하여 용기를 덮어놓았다. ISAtx247을 연속적으로 혼합되는 블렌드에 첨가하였다. 이어서 용기를 봉하였다. 분말이 완전히 용해될 때까지 혼합물을 30분 동안 매번 체크하였다.

실시예 2: ISAtx247 젤라틴 캡슐의 제조

본 발명은 또한 연질 젤라틴 캡슐에 관한 것이다. 이러한 캡슐은 젤라틴, 글리세린, 물 및 소르비톨을 함유하는 젤라틴 형 2D PS (NF/NP) 캡슐에 들어있는 경구 용액과 동일한 비의약 성분과 ISAtx247를 함유한다.

이러한 ISAtx247 젤라틴 캡슐은 ISAtx247, 비타민 E TPGS NF, 중간 사슬 트리글리세라이드(MCT) 오일 USP, 트윈-40 NF, 및 95% 에탄올 USP를 함유하는 ISAtx247 경구 용액(50 mg/ml)을 젤라틴 형 2D PS (NF/NP) 캡슐에 집어넣어 제조되었다. 젤라틴 형 2D PS (NF/NP) 캡슐은 젤라틴 NF(돼지 가죽), 글리세린 USP, 정제수 USP, 및 76% 특수 소르비톨을 사용하여 제조되었다.

실시예 3: 안정성/유효기간 측정

하기 표는 병형태(30 ℃에서 저장) 및 연질-겔 캡슐 형태(실온에서 저장)에서의 제형 1에 대하여, 잘 알려진 LCMS 기술에 의하여 측정된 안정성 자료를 보여준다. 이러한 제형은 정상적인 저장 조건하에서 안정하다.

ISAtx247 농도(mg/ml)
	0 개월	6 개월	24 개월
병형태	57.1 ± 0.5	56.7 ± 0.7	58.0 ± 0.6

연질-겔 캡슐	41.1 ± 0.6	42.4 ± 1.0	41.4 ± 0.9^*

* 연질-겔 캡슐은 18 개월 측정

실시예 4: 약물동역학 (PK) 프로파일의 비교

하기의 표시된 제형을 스파귀 도레이(Sprague Dawley) 쥐에게 경구 가베지(oral gavage)에 의하여 투여하고 ISAtx247의 혈중 농도는 일정한 시간 간격으로 검사하여 농도 대 시간 곡선(즉, 약물동역학 프로파일)을 작성하였다. 본 명세서에서 개시된 다양한 ISAtx247 제형의 PK 프로파일의 비교 결과를 하기에 나타내었다. 표 3에서 보여주는 바와 같이, 그룹 번호 2는 쥐 모델에서 양호한 생체이용효율을 보여주는 반면에, 이들 결과는 실제로 개 또는 인간 모델(표 4 참고)에서는 변할 것이다.

다양한 ISAtx247 제형의 PK 프로파일
투여경로	그룹	T_max	C_max	반감기	AUC	그룹 1에 대한생체이용효율
경구	1	2	49	7.3	559	+0
경구	2	4	75	6.1	1150	+106
경구	3	4	36	18.1	491	-12
경구	4	4	68	7.4	885	+58
경구	5	2	104	7.1	1298	+132
경구	6	4	57	7.1	750	+34

T_max : ISAtx247의 최대 혈중 농도에 도달하는 시간(hrs)

C_max : ISAtx247의 최대 혈중 농도(ng/ml)

반감기 : ISAtx247의 최대 혈중 농도의 절반에 도달하는 시간(hrs)

AUC : 곡선하부의 면적(약제의 생체이용효율과 관계됨)

그룹 1:

VitE-TPGS/ MCT 오일/ 트윈 40/에탄올: 4/2/2/1 (w/w/w/w/w). (상기 제형 1에 개시됨).

그룹 2:

VitE-TPGS/ MCT 오일/ 트윈 80/ 에탄올 : 2/4/2/1 (w/w/w/w/w). (상기 제형 2에 개시됨).

그룹 3:

MCT 오일/ 트윈 80/ 트리아세틴/ 에탄올: 5/3/1/1 (w/w/w/w/w). (상기 제형 3에 개시됨).

그룹 4:

트윈 80/ VitE-TPGS/ 에탄올/ 이소프로필 미리스테이트 : 2/1/1/6 (w/w/w/w/w). (상기 제형 4에 개시됨).

그룹 5 (비교 실시예):

Vit E/ 프로필렌 글리콜/ 마이신(Maisine)/ 크레모포르 RH 40 에탄올 : 3/1.2/5/6.2/2 (w/w/w/w/w).

그룹 6:

여기서는 미세유화액을 형성하기 위하여 사과 쥬스에 1:65로 희석시킨 제형(상기 제형 5에 개시됨).

실시예 5: 미세유화액의 제조

미세유화액 제형을 위하여 제형 성분들의 100 비율을 넘은 변경을 시험하였다(485 및 900 nm에서 각각 0.1 및 0.01 미만 흡수도로 정의). 시험된 제형은 다음 성분들의 비율을 포함한다:

5-10% ISAtx247;

0-50 % 비타민 E-TPGS;

0-50 % 트윈 40 및/또는 트윈 80;

0-50 % MCT 오일;

5-15 % 에탄올.

20% 미만의 시험 제형으로서 미세유화액을 제조하였다. 미세유화액 제형은 상대적으로 비타민 E-TPGS 또는 에탄올 중의 어느 하나의 비율에 독립적이다. 그러나 50%를 초과하는 비타민 E-TPGS, 및 5% 미만의 에탄올의 비율을 갖는 제형은 실온에서 동결되는 예비농축물이고, 이는 덜 바람직하다. 도 1은 트윈 40 및 MCT 오일에 대한 부형제 비율의 함수로서 미세유화액 예비농축물의 제형에 대한 표를 나타낸다.

실시예 6: 개(dogs)에서의 약물동역학 (PK) 프로파일의 비교

도 2는 비글 도그(Beagle dogs)내의 네오랄(Neoral^R )과 비교하여 ISAtx247 미세유화액에 대한 약물동역학(PK) 프로파일의 비교결과를 제공하는 그래프를 보여준다. 이러한 자료는 하기에 표로 만들었다. 하기의 표시된 제형을 비글 도그(n=6)에게 경구 가베지(oral gavage)에 의하여 투여하고 ISAtx247의 혈중 농도는 일정한 시간 간격으로 검사하여 농도 대 시간 곡선(즉, 약물동역학 프로파일)을 작성하였다. 특히, 개에게는 경구 가베지에 의하여 2ml의 각각의 제형(100mg/ml)을 투여하였다. 투여 후, 혈액을 T= 0, 0.5, 1, 2.5, 5, 7.5, 12 및 24 시간에서 채취하여 액체 크로마토그라피-질량 분광계(LCMS)에 의하여 분석하였다.

결과의 요약
투여경로	그룹	T_max	C_max	AUC
경구	1	2 H	1439 ± 378	8290
경구	2	2 H	2158 ± 677	11460

T_max : ISAtx247의 최대 혈중 농도에 도달하는 시간(hrs)

C_max : ISAtx247의 최대 혈중 농도(ng/ml)

AUC : 곡선하부의 면적(약제의 생체이용효율과 관계됨)

그룹 1:

VitE-TPGS/ MCT 오일/ 트윈 40/에탄올: 4/2/2/1 (w/w/w/w/w).

그룹 2:

네오랄(Neoral^R )

비록 이들 자료는 네오랄에 비교하여, ISAtx247 제형의 생체이용효율이 약간 낮다는 것을 보여주고 있지만, 이는 산딤문(Sandimmune^R : 자료는 미표시함)에 의하여 제공되는 생체이용효율보다 실제로 더 크다. 네오랄은 약 40 % 생체이용효율이 있는 것으로 일반적으로 알려져 있다.

이러한 자료는 본 발명의 제형이 시클로스포린의 다른 제형과 비교할 만한 생체이용효율을 가질 수 있으면서 시클로스포린의 투여와 관련하여 부작용을 줄일 수 있다는 것을 보여준다.

실시예 7: ISAtx247 및 시클로스포린 A의 약물동역학 및 독성역학(Toxicokinetic) 성질

ISAtx247(45-50% E-이성체 및 50-55% Z-이성체) 및 시클로스포린 A의 약물동역학 및 독성역학 인자는 토끼 모델에서 시험되었다. 또한 토끼는 시클로스포린 A 신장독성에 대한 모델로서 사용될 수 있지만, 쥐보다는 훨씬 덜 사용되었다. 연구에 의하면, 토끼에 투여된 시클로스포린 A는 다른 동물 모델에서 예전에 보고된 것보다 낮은 투여량에서 뿐만 아니라, 인간에게 투여하는 치료범위의 적어도 상한 수준 내에서도 구조적 및 기능적 변화를 일으킨다는 것을 발견하였다(Thliveris et al., 1991,1994). 또한, 간질성 섬유증 및 동맥질병의 발견은, 세관내의 세포학적 변화 외에도, 토끼가 신장독성을 연구하는데 더욱 적당한 모델임을 암시하고 있는데, 그 이유는 이들의 구조적 실체가 인간에서 관찰되는 신장독성의 검증서이기 때문이다. ISAtx247은 다음 계획에 따라 처음 7일 동안은 정맥내(i.v.)로, 추가의 23일 동안은 피하내(s.c.)로 투여되었다.

(토끼 모델에서 ISAtx247의 약물동역학 및 독성역학 성질의 조사를 위한 투여 계획)

처리군	1-7일:정맥내투여(mg/kg)	8-30일:피하내투여(mg/kg)	동물의 수
처리군	1-7일:정맥내투여(mg/kg)	8-30일:피하내투여(mg/kg)	수컷	암컷
1. 대조 부형제	0	0	4	4
2. 시클로스포린 A 대조	10	10	6	6
3. 저-투여	5	5	0	2
4. 중-투여	10	10	4	4
5. 고-투여	15	15	4	4

병원체 자유(free; 즉, 병원체가 없는) 토끼(SPF)는 관찰되는 어떤 신장 변화가 ISAtx247의 효과에 기인한 것이지 병원체에 기인한 것이 아니라는 것을 확인하는데 사용되었다. 1일과 7일에서, 약 투여 전 및 투여 후 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 18, 및 24시간에서 혈액시료를 체취하여, 약물동역학 프로파일을 발생시켰다. 다른 평가 인자는 임상적 관찰, 체중, 음식소비, 혈액학, 임상화학, 총 병리학, 및 선택된 조직/기관의 조직병리학 조사를 포함하였다.

혈액시료를 고성능 액체크로마토그라피와 짝을 이루는 질량분광계(LCMS)로 분석하였다. 하기 표 6는 10mg/kg의 시클로스포린 A 또는 ISAtx247을 투여한 토끼에서 평균 약물동역학 인자를 요약한 것이다.

(10mg/kg/day의 시클로스포린 A 또는 ISAtx247을 정맥내로 투여한 수컷 토끼에서 평균 약물동역학 인자, 결과는 평균± SD로 표현함)

측정 인자	시클로스포린 A		ISAtx247
	1일	7일	1일	7일
t_max(hrs)	0.5	0.5	0.5	0.5
C_max(μg/L)	1954±320	2171±612	1915±149	1959±470
t^1/2(hrs)	7.4±2.8	9.0±4.0	7.4±1.7	9.2±1.1
AUC(μg · hr/L)	6697±1717	6685±1247	5659±1309	5697±1373

10mg/kg/day의 시클로스포린 A 또는 ISAtx247을 정맥내로 투여한 수컷 토끼에서 평균 약물동역학 인자 간에 통계적으로 특이할 만한 차이는 없었다. 동일한 양으로 ISAtx247을 투여한 암컷 토끼에서 약물동역학 인자는 수컷 토끼에서 관찰되는 것과 특이할 만한 차이는 없었고, 다만 7일에서의 최고 농도에서는 제외한다.

특별한 변화는 대조 부형제, 시클로스포린 A, 또는 ISAtx247를 투여한 토끼의 혈액학 인자에서 발견되지는 않았다. 하기의 표 7에서 보는 바와 같이, 연구과정동안에 다양한 군에서 크레아티닌 수준에서 차이가 별견되었다. 이러한 차이는 시클로스포린 A가 대조 부형제 또는 ISAtx247중 어느 하나보다 신장에서 상당히 큰 음성 효과를 갖는 것을 가리켰다. 10mg/kg/day의 시클로스포린 A와 비교하여, 50% 더 높은 투여량, 즉 15mg/kg/day에서 조차도, ISAtx247은 혈청 크레아티닌 수준에서 어떤 특별한 증가를 야기하지 않았다는 것을 주지하여야 한다.

(30일 동안 부형제, 시클로스포린 A, 또는 ISAtx247을 투여한 수컷 토끼에서 기준상에서 혈청 크레아티닌 수준의 변화율)

처리군	15일	30일
부형제	+6%	-3%
시클로스포린 A(10mg/kg)	+22%	+33%
ISAtx247(10mg/kg)	+1%	+10%
ISAtx247(15mg/kg)	-19%	-11%

대조 부형제, 10mg/kg의 시클로스포린 A, 5mg/kg의 ISAtx247, 또는 10mg/kg의 ISAtx247을 투여한 모든 토끼에서 기관을 조사한 결과, 특이한 이상은 나타나지 않았다. 이는 신장에 대하여 특히 사실이며, 여기서 시클로스포린 A-치료 동물(Thliveris et al., 1991,1994)에서 일반적으로 보여지는 동물 긴질성 섬유증의 증거는 없었다. 15mg/kg의 ISAtx247을 투여한 수컷 토끼에서 정자발생의 감소가 감지되었다. 15mg/kg의 ISAtx247을 투여하여 조사를 종결한 3마리의 암컷 토끼에서 어떤 변화도 감지되지 않았다.

비록 본 발명의 바람직한 양태만을 특정하여 개시하였고 상기에 기술하였지만, 본 발명의 다양한 변형과 변화가 상기의 기술 관점에서 본 발명의 본질과 의도하는 범위를 벗어나지 않고 첨부한 청구범위의 범위 내에서 가능하다는 것을 이해하여야 할 것이다.

상술한 모든 문헌은 본 명세서에서 전체적으로 참고로 통합되었다.

Claims

다음 성분들을 함유하는 미세유화액 예비농축물(preconcentrate):

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS ;

c) MCT 오일 ;

d) 트윈 40 및 트윈 80으로 구성된 군으로부터 선택된 유화제 ; 및

e) 에탄올
제1항에 있어서, 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247 ; 0 중량% 초과 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS ; 0 중량% 초과 내지 약 50 중량%의 MCT 오일 ; 0 중량% 초과 내지 약 50 중량 %의 유화제 ; 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하면서, 상기 제형이 실온에서 액상 미세유화액 예비농축물의 상태인 미세유화액 예비농축물.
제2항에 있어서, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1 : 4: 2: 2: 1인 미세유화액 예비농축물.
ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 유화제, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하면서, 제형이 실온에서 액상인 제1항의 미세유화액 예비농축물을 제조하는 방법.
다음 성분들을 함유하는 약제학적 제형:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS ;

c) MCT 오일 ;

d) 트윈 40 ; 및

e) 에탄올
제5항에 있어서, 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247 ; 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS ; 약 5 중량% 내지 약 20 중량%의 MCT 오일 ; 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 40 ; 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하는 약제학적 제형.
제6항에 있어서, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1 : 4: 2: 2: 1인 약제학적 제형.
ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 40, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 제5항의 약제학적 제형의 제조 방법.
다음 성분들을 함유하는 약제학적 제형:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS ;

c) MCT 오일 ;

d) 트윈 80 ; 및

e) 에탄올
제9항에 있어서, 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247 ; 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS ; 약 5 중량% 내지 약 20 중량%의 MCT 오일 ; 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 80 ; 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하는 약제학적 제형.
제10항에 있어서, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1 : 2: 4: 2: 1인 약제학적 제형.
ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 80, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 제9항의 약제학적 제형의 제조 방법.
다음 성분들을 함유하는 약제학적 제형:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) MCT 오일 ;

c) 트윈 80 ;

d) 트리아세틴 ; 및

e) 에탄올.
제13항에 있어서, 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247 ; 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 트리아세틴 ; 약 5 중량% 내지 약 50 중량%의 MCT 오일 ; 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 80 ; 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하는 약제학적 제형.
제14항에 있어서, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1 : 5: 3: 1: 1인 약제학적 제형.
ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 80, 에탄올, 트리아세틴, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 제13항의 약제학적 제형의 제조 방법.
다음 성분들을 함유하는 약제학적 제형:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 트윈 80 ;

c) 비타민 E TPGS ;

d) 에탄올 ; 및

e) 이소프로필 미리스테이트.
제17항에 있어서, 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247 ; 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS ; 약 5 중량% 내지 약 55 중량%의 이소프로필 미리스테이트 ; 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 80 ; 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하는 약제학적 제형.
제18항에 있어서, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1 : 2: 1: 1: 6인 약제학적 제형.
ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 이소프로필 미리스테이트, 트윈 80, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합하는 과정을 포함하는 제17항의 약제학적 제형의 제조 방법.
다음 성분들을 함유하는 약제학적 제형 예비농축물로서, 수성 매질과 혼합되었을 때 예비농축물은 투명한 안정 미세유화액 용액인 약제학적 제형 예비농축물:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS ;

c) MCT 오일 ;

d) 트윈 40 ; 및

e) 에탄올.
제21항에 있어서, 상기의 약제학적 제형은 약 5 중량% 내지 약 10 중량%의 ISAtx247 ; 약 20 중량% 내지 약 50 중량%의 비타민 E TPGS ; 약 5 중량% 내지 약 20 중량%의 MCT 오일 ; 약 5 중량% 내지 약 50 중량 %의 트윈 40 ; 및 약 5 중량% 내지 약 15중량%의 에탄올을 함유하는 약제학적 제형 예비농축물.
제22항에 있어서, a: b: c: d: e의 중량비가 약 0.5 - 1 : 4: 2: 2: 1인 약제학적 제형 예비농축물.
다음 성분들을 함유하는 미세유화액 예비농축물로서, 약 10 내지 약 100 부의 수성 매질에 대하여 약 1 부의 예비농축물의 비율로 수성 매질과 혼합되었을 때 예비농축물은 투명한 안정 미세유화액 용액인 미세유화액 예비농축물:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS ;

c) MCT 오일 ;

d) 트윈 40 ; 및

e) 에탄올.
제21항에 있어서, 상기의 수성 매질이 물, 과일 쥬스(포도 쥬스는 제외함), 차, 우유 및 코코아로 구성된 군으로부터 선택되는 약제학적 제형.
제25항에 있어서, 상기의 과일 쥬스가 사과 쥬스인 약제학적 제형.
ISAtx247이 완전히 용해될 때까지 MCT 오일, 트윈 40, 에탄올, 비타민 E TPGS, 및 적당량의 ISAtx247을 혼합한 다음, 얻어진 제형을 미세유화액 예비농축물 용액이 형성될 때까지 수성 매질내로 혼합하는 과정을 포함하는 제21항의 약제학적 제형의 제조 방법.
다음 성분들을 함유하는 약제학적 제형으로서, 이러한 약제학적 제형이 피하 또는 근육내 투여에 적합한 약제학적 제형:

a) ISAtx247의 약제학적 유효량 ;

b) 비타민 E TPGS ;

c) MCT 오일 ;

d) 트윈 40 ; 및

e) 에탄올.
제1항, 제5항, 제9항, 제13항 또는 제17항에 있어서, 상기의 약제학적 제형이 유화액 또는 미세유화액인 약제학적 제형.
제5항, 제9항, 제13항 또는 제17항에 있어서, 상기의 약제학적 제형이 유화액 또는 미세유화액 예비농축물인 약제학적 제형.
제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항, 제21항 또는 제28항에 있어서, 상기의 ISAtx247의 생체이용효율(bioavailability)이 약 30%을 초과하는 약제학적 제형.
제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항 또는 제21항에 있어서, 상기의 약제학적 제형이 경구투여용인 약제학적 제형.
제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항, 제21항 또는 제28항에 있어서, 상기의 약제학적 제형이 보호 콜로이드, 현탁액 안정제 또는 벌크제와 같은 생체적합성 (biocompatible)중합체, 부형제, 결합제 및 캐리어를 추가로 함유하는 약제학적 제형.
제33항에 있어서, 상기의 생체적합성 중합체가 폴리옥시에틸렌 글리콜화 천연 또는 수소화 식물성 오일, 크레모포르(Cremophor^TM), 닉콜(Nikkol^TM), 트윈, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 불록 공중합체, 레시틴, 프로필렌 글리콜 모노- 및 디- 지방산 에스테르 및 프로필렌 글리콜 카프릴릭-카프르산 디에스테르로 구성된 군으로부터 선택되는 약제학적 제형.
제34항에 있어서, 상기의 트윈이 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄트리올레에이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄트리스테아레이트, 폴리옥시에틸렌(4) 소르비탄모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌(4) 소르비탄모노스테아레이트, 및 폴리옥시에틸렌(5) 소르비탄모노올레에이트로 구성된 군으로부터 선택되는 약제학적 제형.
면역억제가 필요한 대상자에게 제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항, 제21항 또는 제28항의 약제학적 제형의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 면역억제를 발생시키는 방법.
제36항에 있어서, 약제학적 제형의 투여량은 1일당 상기 대상자의 체중(kg)당 약 0.5 내지 3 mg인 방법.
제36항에 있어서, 약제학적 제형이 1일당 한 번 투여하는 방법.
제36항에 있어서, 약제학적 제형이 1일당 두 번 투여하는 방법.
제36항에 있어서, 약제학적 제형이 상기의 대상자의 염증이거나 자기면역 질병 또는 상태를 치료하는데 사용되는 방법.
제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항, 제21항 또는 제28항의 약제학적 제형을 제조하여 ISAtx247의 면역억제 효과를 증가시키는 방법.
제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항, 제21항 또는 제28항에 있어서, 상기의 예비농축물이, 약 10 내지 약 100 부의 수성 매질에 대하여 약 1 부의 비율로 수성 매질과 혼합되어지는 약제학적 제형.
제42항에 있어서, 상기의 수성 매질이 물, 과일 쥬스(포도 쥬스는 제외함), 차, 우유 및 코코아로 구성된 군으로부터 선택되는 약제학적 제형.
제43항에 있어서, 상기의 과일 쥬스가 사과 쥬스인 약제학적 제형.
제32항에 있어서, 상기의 경구 제형이 연질 젤라틴 캡슐내에 캡슐화되어 있는 약제학적 제형.
면역억제가 필요한 대상자에게 투여하였을 때 면역억제를 발생시키는 약제를 제조하는데 사용되는 제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항, 제21항 또는 제28항의 약제학적 제형의 용도.
제36항에 있어서, 상기의 약제는 1일당 상기 대상자의 체중(kg)당 약 0.5 내지 3 mg의 약제학적 제형의 투여가 적합한 용도.
제36항에 있어서, 상기의 약제가 1일당 한 번 투여하는 용도.
제36항에 있어서, 상기의 약제가 1일당 두 번 투여하는 용도.
제36항에 있어서, 상기의 약제가 상기의 대상자의 염증이거나 자기면역 질병 또는 상태를 치료하는데 사용되는 용도.
ISAtx247의 면역억제 효과를 증가시키기 위한 약제를 제조하는데 제1항, 제5항, 제9항, 제13항, 제17항, 제21항 또는 제28항의 약제학적 제형을 사용하는 용도.