KR20100022309A - Composition for preventing and treating acne comprising bacteriocin derived from enterococcus faecalis sl-5 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 엔테로코커스 패컬리스 SL-5 유래 박테리오신의 신규한 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 엔테로코커스 패컬리스 SL-5 유래 박테리오신인 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드를 포함하는 여드름 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 우수한 항균활성을 보이는 엔테로코커스 패컬리스 SL-5에 의해 제조되는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명의 폴리펩티드는 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 우수한 항균활성을 보여 이들의 생육을 저해하므로 여드름의 예방 및 치료, 개선용으로 사용할 수 있다. The present invention relates to a novel use of bacteriocin derived from Enterococcus facules SL-5, and more particularly, to prevent and treat acne comprising a polypeptide of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, which is a bacteriocin derived from Enterococcus faculis SL-5. It relates to a composition for. The present invention provides a polypeptide of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 produced by Enterococcus faculis SL-5 exhibiting excellent antibacterial activity against propionibacterium acne, the causative agent of acne. The polypeptide of the present invention shows excellent antimicrobial activity against propionibacterium acne, which is a causative agent of acne, and thus inhibits their growth, and thus can be used for the prevention, treatment and improvement of acne.
Description
본 발명은 엔테로코커스 패컬리스 SL-5 유래 박테리오신의 신규한 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 엔테로코커스 패컬리스 SL-5 유래 박테리오신인 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드를 포함하는 여드름 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a novel use of bacteriocin derived from Enterococcus facules SL-5, and more particularly, to prevent and treat acne comprising a polypeptide of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, which is a bacteriocin derived from Enterococcus faculis SL-5. It relates to a composition for.
일반적으로, 여드름은 혐기성 피부상재균인 프로피오니박테리움 애크니스 균의 리파제(lipase)에 의해 생성된 유리 지방산(free fatty acid)과 각종 저분자 물질들의 자극에 의한 염증 반응이 그 원인으로 알려져 있다. 이러한 여드름을 치료하기 위하여 경구제 또는 외용제 형태의 약제를 사용하였는데, 예를 들면, 항-남성 호르몬제를 사용한 피지생성의 억제제, 스테로이드 호르몬 및 비스테로이드성 소염 진통제의 항염증 작용에 의한 치료제, 레소치놀, 유황, 살리실산, 벤조일퍼옥사이드, 레티노익산이나 이소트레티노인과 같은 항균제 및 각질박리제, 테트라사이클 린, 에리스로마이신, 메크로사이클린 등의 항생물질에 의한 프로피오니박테리움 애크니스 균의 활성억제 방법 등이 있다. 한편, 최근에는 아젤리아산을 이용한 방법도 많이 사용되고 있다.In general, acne is known to be caused by inflammatory reactions caused by the stimulation of free fatty acids and various low molecular substances produced by the lipase of the anaerobic dermatitis propionibacterium acne. Drugs in the form of oral or external preparations have been used for the treatment of acne, for example, anti-inflammatory effects of sebum production inhibitors, steroid hormones and nonsteroidal anti-inflammatory analgesics using anti-male hormones, Antibacterial agents such as sochinol, sulfur, salicylic acid, benzoyl peroxide, retinoic acid or isotretinoin and keratin release agents, antibiotics such as tetracycline, erythromycin, and macrocycline to inhibit the activity of propionibacterium acinis have. On the other hand, recently, a method using azelaic acid has also been used a lot.
그러나, 상기에서 설명한 방법들은 여드름 치료에 어느정도 성과를 거두고 있으나, 사용성면에서 몇 가지 문제점들을 가지고 있다. 즉, 호르몬제의 사용은 표피의 생장억제나 기타 호르몬 남용 부작용이 보고되어 있으며, 레티노익산과 벤조일퍼옥사이드 등의 각질박리제는 각질박리에 따른 피부의 자극성과 접촉성 피부염의 우려가 있으며, 테트라사이클린과 같은 항생물질은 내성균의 출현 및 광과민작용의 가능성이 알려져 있다. 특히, 이소트레티노인은 태아에 최기성 작용이 있음이 알려져있다.However, the methods described above have some results in acne treatment, but have some problems in terms of usability. In other words, the use of hormones has been reported to inhibit the growth of the epidermis and other hormone abuse side effects, keratin release agents such as retinoic acid and benzoyl peroxide may cause skin irritation and contact dermatitis due to exfoliation, tetracycline Such antibiotics are known for the emergence of resistant bacteria and for the possibility of photosensitivity. In particular, isotretinoin is known to have a teratogenic effect on the fetus.
따라서, 여드름 피부에 있어서 인체에 안전하면서도 여드름 치료효과가 우수한 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황이다.Therefore, the necessity of developing a product that is safe for the human body and has excellent acne treatment effect in acne skin is steadily emerging.
한편, 유산균(lactic acid bacteria)은 탄수화물을 혐기적으로 이용하여 젖산을 생산하는 미생물로 자연계에 널리 분포하는 미생물이다. 이 미생물은 중성 및 알칼리성에서 잘 생육하는 부패성 미생물의 생육을 억제하여 동서양을 막론하고 식품의 보존 수단으로 이용되어 왔으며, 특히 우유, 유제품, 육제품, 침채류 및 각종 젓갈류의 가공에 이용되어 왔다. 유산균은 이들의 대사산물인 여러 종류의 유기산 에 의해 pH를 감소시키면서 식품의 보존성을 증진시키는데, 젖산 및 초산과 같은 유기산은 대부분의 미생물에 대하여 살균작용(bactericidal)이 있기 때문이다. 또한 유기산 외에 과산화수소 및 이들이 생산하는 박테리오신이 보존성에 관여한다.On the other hand, lactic acid bacteria (lactic acid bacteria) is a microorganism that produces lactic acid by using carbohydrate anaerobic and is widely distributed in nature. This microorganism has been used as a means of preserving food in both East and West by suppressing the growth of decaying microorganisms that grow well in neutral and alkaline, and especially in the processing of milk, dairy products, meat products, vegetables, and various salted fish. . Lactic acid bacteria improve the preservation of foods by reducing their pH by their various metabolites, organic acids, such as lactic acid and acetic acid, because they have bactericidal action against most microorganisms. In addition to organic acids, hydrogen peroxide and the bacteriocins they produce are involved in preservation.
박테리오신이란 물질은 세균이 생산하는 단백질 또는 단백질계열의 항균물질로 일반적으로 항균 물질 생산 균주 자신과 계통 ·혈통학적으로 유사한 균종으로 제한된 좁은 항균 범위를 나타내며 자신의 유전자로부터 직접 생합성 된다는 점에서 일반 항생 물질과 구분이 되는 천연의 항균성 단백질이다. 박테리오신은 각종 발효 식품 중에 흔히 존재하고 일상 식생활을 통해 섭취하고 있는 유산균에 의해 생산이 되며, 기존의 항생제와는 달리 단백질로 이루어져 있기 때문에 인체에 섭취되는 즉시 소화기관의 단백질 가수분해 효소에 의해 분해됨으로써 인체에 무독성이고 잔류성이 없다는 측면에서 식품의 새로운 생물보존제 또는 발효식품의 생물제어제로 그 효용이 크게 기대되고 있다. 유산균이 생산하는 가장 널리 알려진 박테리오신인 나이신(nisin)은 광범위한 항균 범위 때문에 오래 전부터 상용이 허용되어 왔으며, 미국에서도 1988년 식품의약안전본부(FDA)가 그라스(GRAS, generally recognized as safe) 식품 첨가물로 인정하게 되었다.Bacteriocin is a protein or protein-based antimicrobial substance produced by bacteria. Generally, bacteriocin is a general antibiotic substance because it shows a narrow antimicrobial range limited to strains that are lineage and lineage similar to the antimicrobial strains themselves. It is a natural antimicrobial protein that is distinguished from. Bacteriocin is produced by lactic acid bacteria that are commonly found in various fermented foods and consumed through daily diets. Unlike conventional antibiotics, the bacteriocin is broken down by protein hydrolase of the digestive system as soon as it is ingested by the human body. In view of non-toxicity and non-persistence in human body, it is expected to be useful as a new biopreservative of food or biocontrol agent of fermented food. Nisin, the most widely known bacteriocin produced by lactic acid bacteria, has long been commercially available due to its broad antimicrobial range, and in the United States, the Food and Drug Safety Administration (FDA) in 1988 identified GRAS (Generally Recognized as Safe) food additives. Admitted to.
이에 본 발명자들은 엔테로코커스 패컬리스 SL-5의 항균활성에 대해서 연구하던 중 여드름 관련 세균인 프로피오박테리움 아크네스에 대해서 우수한 항균활성이 있음을 알아내고, 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드가 프로피오박테리움 아크네스에 대해서 우수한 항균활성을 보임을 확인하여 상기 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 및 치료용 조성물을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention, while studying the antimicrobial activity of Enterococcus facules SL-5, and found that there is an excellent antimicrobial activity against the acne-related bacterium propiobacterium acnes, the polypeptide of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 By confirming the excellent antimicrobial activity against Propiobacterium acnes was completed the present invention by developing a composition for preventing and treating acne comprising the polypeptide of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient.
따라서, 본 발명의 목적은 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드의 신규한 용도를 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide novel uses of the polypeptides of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for preventing and treating acne comprising a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는 프로피오니박테리움 애크니스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물을 제 공한다.In order to achieve the another object of the present invention, the present invention provides a composition for antibacterial against Propionibacterium acnes comprising a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient to provide.
본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 도포하는 단계를 포함하는 프로피오니박테리움 애크니스(Propionibacterium acnes)의 생육을 저해하는 방법을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, the present invention inhibits the growth of Propionibacterium acnes comprising the step of applying a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 Provide a way to.
이하 본 발명의 내용을 보다 상세히 설명하기로 한다.Hereinafter, the content of the present invention will be described in more detail.
본 발명의 조성물은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.The composition of the present invention is characterized in that it comprises a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient.
본 발명의 일 실시예에서는 엔테로코커스 패컬리스 SL-5의 항균활성 스펙트럼을 확인하고, 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 항균활성을 보임을 확인하였다.In one embodiment of the present invention, the antimicrobial activity spectrum of Enterococcus facules SL-5 was confirmed, and it was confirmed that the antimicrobial activity against propionibacterium acne is a cause of acne.
아울러, 본 발명의 다른 실시예에서는 항균활성을 보이는 물질을 부분정제하여 N-말단 서열을 확인하고, 이를 이용하여 PCR을 통해 항균활성을 보이는 펩티드를 분리하였다. 그 결과, 서열번호 1 및 서열번호 2의 염기서열을 가지는 폴리펩티드임을 확인하였다.In addition, in another embodiment of the present invention, by partially purifying the material showing antimicrobial activity, the N-terminal sequence was identified, and the peptide showing the antimicrobial activity was separated by PCR. As a result, it was confirmed that the polypeptide having a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2.
본 발명의 펩티드는 당업계에 공지된 화학적 합성(Creighton, Proteins; Structures and Molecular Principles, W. H. Freeman and Co., NY, 1983)에 의해 제조될 수 있다. 대표적인 방법으로서 이들로 한정되는 것은 아니지만 액체 또는 고체상 합성, 단편 응축, F-MOC 또는 T-BOC 화학법이 포함된다(Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams et al., Eds., CRC Press, Boca Raton Florida, 1997; A Practical Approach, Athert on & Sheppard, Eds., IRL Press, Oxford, England, 1989). Peptides of the invention can be prepared by chemical synthesis (Creighton, Proteins; Structures and Molecular Principles, WH Freeman and Co., NY, 1983) known in the art. Representative methods include, but are not limited to, liquid or solid phase synthesis, fragment condensation, F-MOC or T-BOC chemistry (Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams et. al ., Eds., CRC Press, Boca Raton Florida, 1997; A Practical Approach, Athert on & Sheppard, Eds., IRL Press, Oxford, England, 1989).
또한 본 발명의 펩티드는 유전공학적 방법에 의해 제조될 수 있다. 우선, 통상적인 방법에 따라 상기 펩티드를 코딩하는 DNA 서열을 작제한다. DNA 서열은 적절한 프라이머를 사용하여 PCR 증폭함으로써 작제할 수 있다. 다른 방법으로 당업계에 공지된 표준 방법에 의해, 예컨대, 자동 DNA 합성기(Biosearch 또는 Applied Biosystems 사에서 판매하는 것)를 사용하여 DNA 서열을 합성할 수도 있다. 제작된 DNA 서열은 이 DNA 서열에 작동가능하게 연결되어(operatively linked) 그 DNA 서열의 발현을 조절하는 하나 또는 그 이상의 발현 조절 서열(expression control sequence)(예: 프로모터, 인핸서 등)을 포함하는 벡터에 삽입시키고, 이로부터 형성된 재조합 발현 벡터로 숙주세포를 형질전환시킨다. 생성된 형질전환체를 상기 DNA 서열이 발현되도록 하기에 적절한 배지 및 조건 하에서 배양하여, 배양물로부터 상기 DNA 서열에 의해 코딩된 실질적으로 순수한 펩티드를 회수한다. 상기 회수는 당업계에 공지된 방법(예컨대, 크로마토그래피)을 이용하여 수행할 수 있다. 상 기에서 '실질적으로 순수한 펩티드'라 함은 본 발명에 따른 펩티드가 숙주로부터 유래된 어떠한 다른 단백질도 실질적으로 포함하지 않는 것을 의미한다. 본 발명의 펩티드 합성을 위한 유전공학적 방법은 다음의 문헌을 참고할 수 있다: Maniatis et al., Molecular Cloning; A laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory, 1982; Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N.Y., Second(1998) and Third(2000) Edition; Gene Expression Technology, Method in Enzymology, Genetics and Molecular Biology, Method in Enzymology, Guthrie & Fink (eds.), Academic Press, San Diego, Calif, 1991; 및 Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255:12073-12080, 1990.In addition, the peptide of the present invention can be prepared by genetic engineering methods. First, a DNA sequence encoding the peptide is constructed according to a conventional method. DNA sequences can be constructed by PCR amplification using appropriate primers. Alternatively, DNA sequences may be synthesized by standard methods known in the art, such as using automated DNA synthesizers (such as those sold by Biosearch or Applied Biosystems). The constructed DNA sequence is a vector comprising one or more expression control sequences (e.g., promoters, enhancers, etc.) that are operatively linked to this DNA sequence to regulate expression of the DNA sequence. The host cell is transformed with the recombinant expression vector formed therefrom. The resulting transformants are cultured under appropriate media and conditions to allow the DNA sequence to be expressed, to recover substantially pure peptides encoded by the DNA sequences from the culture. The recovery can be carried out using methods known in the art (eg chromatography). By "substantially pure peptide" it is meant that the peptide according to the invention is substantially free of any other protein derived from the host. For genetic engineering methods for peptide synthesis of the present invention, reference may be made to Maniatis et. al ., Molecular Cloning; A laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory, 1982; Sambrook et al ., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, NY, Second (1998) and Third (2000) Edition; Gene Expression Technology, Method in Enzymology, Genetics and Molecular Biology, Method in Enzymology, Guthrie & Fink (eds.), Academic Press, San Diego, Calif, 1991; And Hitzeman et al ., J. Biol. Chem., 255: 12073-12080, 1990.
한편, 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드는 프로피오니박테리움 애크니스의 생육을 저해하므로 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는 프로피오니박테리움 애크니스(Propionibacterium acnes)에 대한 항균용 조성물을 제공한다.On the other hand, since the polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 inhibits the growth of propionibacterium acne, the present invention is a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 It provides a composition for antibacterial to Propionibacterium acnes (Propionibacterium acnes) comprising.
아울러, 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 제품의 형태로 제공될 수 있다. 상기 제품은 화장품 또는 의약품일 수 있다. In addition, the composition of the present invention comprising a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 as an active ingredient may be provided in the form of a product. The product may be a cosmetic or a medicament.
의약품의 경우 본 발명의 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995). For pharmaceuticals, the compositions of the present invention may further contain one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. Pharmaceutically acceptable carriers may further include, for example, carriers for parenteral administration. Carriers for parenteral administration may include water, suitable oils, saline, aqueous glucose and glycols, and the like, and may further include stabilizers and preservatives. Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium hydrogen sulfite, sodium sulfite or ascorbic acid. Suitable preservatives include benzalkonium chloride, methyl- or propyl-paraben and chlorobutanol. Other pharmaceutically acceptable carriers may be referred to those described in the following documents (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 조성물을 포함하는 의약품은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 조성물은 경피 투여될 수 있다. 상기에서 ‘경피 투여'란 본 발명의 조성물을 세포 또는 피부에 투여하여 활성성분이 피부 내로 전달되도록 하는 것을 말하다. 예컨대, 본 발명의 조성물을 주사형 제형으로 제조하여 이를 30 게이지의 가는 주사 바늘로 피부를 가볍게 단자(prick)하는 방법, 또는 피부에 직접적으로 도포하는 방법으로 투여될 수 있다.Medicines comprising the compositions of the invention can be administered to any mammal, including humans. Preferably the composition of the present invention may be administered transdermally. As used herein, 'transdermal administration' refers to the administration of the composition of the present invention to cells or skin so that the active ingredient is delivered into the skin. For example, the composition of the present invention may be prepared into an injectable formulation and administered by lightly pricking the skin with a 30 gauge thin injection needle, or by applying it directly to the skin.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 제형화 할 수 있다. 예를 들어, 비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 크림제, 로션제, 외 용연고제, 오일제, 보습제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be formulated according to the route of administration as described above. For example, formulations for parenteral administration may be formulated by methods known in the art in the form of injections, creams, lotions, external ointments, oils, moisturizers, gels, aerosols and nasal inhalants. These formulations are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour, a prescription generally known in all pharmaceutical chemistries.
본 발명의 폴리펩티드의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다. 상기 용량은 조성물의 투여 경로 및 치료 횟수뿐만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정되는 것이므로, 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이며 바람직하게는 0.001μg/kg체중 내지 10mg/kg체중일 수 있다. 본 발명에 따른 조성물을 포함하는 제품은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다. The total effective amount of a polypeptide of the invention can be administered to a patient in a single dose and can be administered by a fractionated treatment protocol that is administered in multiple doses for long periods of time. The composition of the present invention may vary the content of the active ingredient depending on the extent of the disease. The dose is determined by taking into consideration the various factors such as the age, weight, health condition, sex, severity of the disease, diet and excretion rate, as well as the route of administration and the number of treatments of the composition. Given this, one of ordinary skill in the art will be able to determine the appropriate effective dosage and preferably be 0.001 μg / kg body weight to 10 mg / kg body weight. The product comprising the composition according to the present invention is not particularly limited to its formulation, route of administration and method of administration as long as the effect of the present invention is exhibited.
또한, 화장품의 경우 본 발명의 폴리펩티드는 화장품학 및/또는 피부학적으로 허용 가능한 부형제를 추가로 함유함으로써 당업계에 공지된 방법에 따라 국소 적용에 적합한 모든 형태의 제형으로 제조될 수 있다. 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 본 발명에 따른 화장료 조성물은 용액, 겔, 고체, 에멀전, 현탁액, 마이크로에멀전, 마이크로캡슐, 미세과립구, 이온형 및/또는 비이온형 소낭 분산제, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 스틱의 형태로 제조될 수 있다.In the case of cosmetics, the polypeptides of the invention can also be prepared in any form of formulation suitable for topical application according to methods known in the art by further containing cosmetically and / or dermatologically acceptable excipients. For example, but not limited to, the cosmetic composition according to the invention may be a solution, gel, solid, emulsion, suspension, microemulsion, microcapsules, microgranules, ionic and / or nonionic vesicle dispersants, creams, skins, It may be prepared in the form of a lotion, powder, ointment, spray or stick.
상기 화장품학 및/또는 피부학적으로 허용가능한 부형제로는 피부 연화제, 유화제, 농후제 및 용매를 포함할 수 있다.Such cosmetically and / or dermatologically acceptable excipients may include emollients, emulsifiers, thickening agents and solvents.
상기 피부 연화제는 피부의 연화, 진정, 코팅, 매끄럽게 하거나 또는 촉촉하게 하기 위해 사용한다. 본 발명에서 피부 연화제는 당업계에 공지된 모든 종류를 사용할 수 있으며 예를 들어, 석유 기제, 지방산 에스테르, 알킬 에톡실레이트, 지방산 에스테르 에톡실레이트, 지방 알코올, 폴리실록산 또는 이의 혼합물일 수 있다. 이외에 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 트리에틸렌 글리콜, 경랍, 왁스, 지방산, 지방 알코올 에테르, 글리세라이드, 아세토글리세라이드, 에톡실화 글리세라이드, 폴리하이드록시 알코올의 다른 지방산 에스테르, 라놀린 및 이의 유도체와 같은 통상적인 피부 연화제를 포함한다.The emollients are used to soften, sooth, coat, smooth or moisturize the skin. In the present invention, the emollient may use all kinds known in the art and may be, for example, petroleum based, fatty acid esters, alkyl ethoxylates, fatty acid ester ethoxylates, fatty alcohols, polysiloxanes or mixtures thereof. In addition to propylene glycol, butylene glycol, glycerin, triethylene glycol, mercury, waxes, fatty acids, fatty alcohol ethers, glycerides, acetoglycerides, ethoxylated glycerides, other fatty acid esters of polyhydroxy alcohols, lanolin and derivatives thereof Such conventional emollients.
유화제는 화장료 조성물의 수상과 유상이 혼합되도록 하는 역할을 한다. 본 발명에서 유화제는 1종 이상을 임의로 함유할 수 있으며 비이온성, 음이온성 또는 양이온성을 모두 포함할 수 있다. 상기 유화제의 종류는 에멀전의 형태가 유중수 분산형인지 수중유 분산형인지에 따라 결정할 수 있다. 적합한 유화제의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 솔비탄 트리올레이트, 솔비탄 트리스테아레이트, 글리세롤 모노올레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 글리세롤 모노라우레이트, 솔비탄 세스퀴올레이트, 솔비탄 모노올레이트, 솔비탄 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 스테알릴에테르, 폴리옥시에틸렌솔비톨 밀랍 유도체, PEG 200 디라우레이트, PEG 200 모노스테아레이트, PEG 400 디올레이트, 솔비칸 모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트 및 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노스테아레이트 등이 있다.The emulsifier serves to mix the water phase and the oil phase of the cosmetic composition. In the present invention, the emulsifier may optionally contain one or more, and may include both nonionic, anionic or cationic. The type of the emulsifier may be determined depending on whether the emulsion is in water-in-oil dispersion or oil-in-water dispersion. Examples of suitable emulsifiers include, but are not limited to, sorbitan trioleate, sorbitan tristearate, glycerol monooleate, glycerol monostearate, glycerol monolaurate, sorbitan sesquioleate, sorbitan monooleate, Sorbitan monostearate, polyoxyethylene stearyl ether, polyoxyethylene sorbitol beeswax derivative, PEG 200 dilaurate, PEG 200 monostearate, PEG 400 dioleate, sorbican monopalmitate, polyoxyethylene monostearate and Polyoxyethylene sorbitan monostearate and the like.
농후제는 가교된 카르복시폴리메틸렌 중합체, 에틸 셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 트라칸트검, 카라야검, 산탄검, 벤토나이트, 히드록시에틸 셀룰로오스 및 히드록시프로필 셀룰로오스를 포함한다. Thickeners include crosslinked carboxypolymethylene polymers, ethyl cellulose, polyethylene glycol, tracant gum, karaya gum, xanthan gum, bentonite, hydroxyethyl cellulose and hydroxypropyl cellulose.
용매로는 정제수, 알코올 또는 정제수와 알코올의 혼합물을 사용할 수 있다. As the solvent, purified water, alcohol or a mixture of purified water and alcohol may be used.
기타 임의로 사용할 수 있는 일반적인 화장품 첨가제의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 파라-히드록시벤조에이트 에스테르와 같은 보존제, 부틸 히드록시 톨루엔, 아스코르브산 및 그 유도체 및 토코페롤 및 그 유도체와 같은 항산화제, 글리세롤, 솔비톨, 2-피롤리돈-5-카르복실레이트, 디부틸프탈레이트, 젤라틴, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 습윤제, 아세테이트, 인산염, 시트르산염, 트리에탄올아민 및 카르보네이트와 같은 pH 완충제, 밀랍, 파라핀과 같은 왁스류, 증점제, 활성 증강 제, 착색제 및 향료가 사용될 수 있다.Examples of other optional cosmetic additives that may optionally be used include, but are not limited to, preservatives such as para-hydroxybenzoate esters, butyl hydroxy toluene, ascorbic acid and its derivatives and antioxidants such as tocopherol and its derivatives, glycerol, Wetting agents such as sorbitol, 2-pyrrolidone-5-carboxylate, dibutylphthalate, gelatin, polyethylene glycol, pH buffers such as acetates, phosphates, citrate, triethanolamine and carbonates, waxes such as beeswax, paraffin Types, thickeners, activity enhancers, colorants and flavorings can be used.
한편, 본 발명의 폴리펩티드는 프로피오니박테리움 애크니스의 생육을 저해하므로 본 발명은 서열번호 1 또는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 도포하는 단계를 포함하는 프로피오니박테리움 애크니스(Propionibacterium acnes)의 생육을 저해하는 방법을 제공한다.On the other hand, since the polypeptide of the present invention inhibits the growth of propionibacterium acne, the present invention comprises the step of applying a propionibacterium acne comprising applying a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 It provides a method of inhibiting the growth of propionibacterium acnes).
따라서, 본 발명은 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 우수한 항균활성을 보이는 엔테로코커스 패컬리스 SL-5에 의해 제조되는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명의 폴리펩티드는 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 우수한 항균활성을 보여 이들의 생육을 저해하므로 여드름의 예방 및 치료, 개선용으로 사용할 수 있다. Accordingly, the present invention provides a polypeptide of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 produced by Enterococcus faculis SL-5, which exhibits excellent antibacterial activity against propionibacterium acne, the causative agent of acne. The polypeptide of the present invention shows excellent antimicrobial activity against propionibacterium acne, which is a causative agent of acne, and thus inhibits their growth, and thus can be used for the prevention, treatment and improvement of acne.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.
<< 실시예Example 1> 1>
세포 배양 및 항균 스펙트럼의 확인Confirmation of Cell Culture and Antibacterial Spectrum
<1-1> 세포배양<1-1> Cell Culture
엔테로코커스 패컬리스 SL-5( Enterococcus faecalis SL-5, 16s rRNA sequence가 GenBank Accession No. AY692453로 등록)는 MRS 액체 배지에 접종한 후 37℃, 질소 가스로 치환된 혐기 조건하에 약 16시간 배양하였다. 시험균주로 사용된 프로피오니박테리움 애크니스(Propionibacterium acnes, ATCC 29399는 RCM 브로쓰(reinforced clostridial medium broth, Merck, Darmstadt, Germany)에서, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis , KFRI 179), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus, KCTC 3624) 및 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus, KCTC 1972) 대장균 O157, 리스테리아 모노싸이토게네스, 살모넬라 파라타이피 A, 쉬겔라 플렉스네리는 BHI 브로쓰(brain heart infusion broth)에서 37℃ 온도에서 약 16 시간 배양하였다. Enterococcus Facules SL-5 ( Enterococcus faecalis SL-5, 16s rRNA sequence according to GenBank Accession No. AY692453) was inoculated in MRS liquid medium and incubated for about 16 hours under anaerobic conditions substituted with nitrogen gas at 37 ° C. Propionibacterium acnes ( ATCC 29399) was used as a test strain in RCM broth (reinforced clostridial medium broth, Merck, Darmstadt, Germany), Bacillus subtilis ( Bacillus) subtilis , KFRI 179), Bacillus cereus ( KCTC 3624) and Staphylococcus aureus (KCTC 1972) Escherichia coli O157, Listeria monocytogenes, Salmonella paratypy A, Shigella flexneri Incubated for about 16 hours at 37 ℃ in a BHI broth (brain heart infusion broth).
<1-2> <1-2> 엔테로코커스Enterococcus 패컬리스Facules SLSL -5의 항균활성 스펙트럼 확인-5 antimicrobial activity spectrum
E. faecalis SL-5의 배양액은 원심분리 (9,940 x g, 15 분, 4℃)를 통하여 세포성분을 제거하였으며 이를 통하여 얻어진 배양액의 상등액을 추가로 필터링 (membrane pore size, 0.45㎛)함으로써 남아 있는 세포성분을 완전히 제거하였다. 이렇게 얻어진 상등액 성분을 ‘발효여액’으로 명명하였다. 발효여액의 항균활성 측정은 ‘Spot-on-the-lawn’ 방법 (Van Reenen 등, 2006, Appl . Environ . Microbiol. 72: 7644-7651)으로 측정하였다. 발효여액은 혐기수 (42.3 mM Na2HPO4, 33.1 mM KH2PO4, 0.05% (v/v) Tween 80, 3.2 mM L-cystein·HCl , pH 7.0)에 순차적으로 2배씩 희석하여 사용하였으며, 희석액 10㎕를 시험균주를 포함하는 MRS 아가 플레이트(agar plate)에 점적한 후 37℃에서 배양하여 점적위치를 중심으로 투명대(clear zone)의 생성 유무를 보고 활성을 확인하였다.Cell cultures of E. faecalis SL-5 were removed by centrifugation (9,940 xg, 15 min, 4 ° C), and the remaining cells were further filtered (membrane pore size, 0.45 ㎛). The component was completely removed. The supernatant component thus obtained was named 'fermentation filtrate'. The antimicrobial activity of the fermentation filtrate was measured by the 'spot-on-the-lawn' method (Van Reenen et al . , 2006, Appl . Environ . Microbiol . 72: 7644-7651). The fermentation filtrate was used by diluting it sequentially in anaerobic water (42.3 mM Na 2 HPO 4 , 33.1 mM KH 2 PO 4 , 0.05% (v / v) Tween 80, 3.2 mM L-cystein · HCl, pH 7.0). In addition, 10 μl of the diluted solution was added to an MRS agar plate containing a test strain, and then cultured at 37 ° C. to determine the activity of the clear zone around the drop position.
그 결과, 도 1 및 표 1에서 보듯이, 엔테로코커스 패컬리스 SL-5는 바실러스 세레우스 KCTC 3624, 바실러스 서브틸리스 KFRI 179, 리스테리아 모노싸이토게네스, 프로피오니박테리움 애크니스 ATCC 29399 및 스타필로코커스 아우레우스 KCTC 1927 등의 그람 양성세군들에 대하여 항균활성을 가지고 있는 것으로 나타났으며, 대장균 O157과 쉬겔라 플렉스네리, 살모넬라 파라타이피 A에 대해서는 항균활성이 없음을 알 수 있었다.As a result, as shown in Figure 1 and Table 1, Enterococcus faculis SL-5 is Bacillus cereus KCTC 3624, Bacillus subtilis KFRI 179, Listeria monocytogenes, Propionibacterium acne ATCC 29399 and Staphylo It was shown to have antimicrobial activity against Gram-positive taxa such as Caucasus aureus KCTC 1927, and no antimicrobial activity against Escherichia coli O157, Shigella flexneri and Salmonella paratyp A.
<< 실시예Example 2> 2>
항균활성 물질의 동정Identification of antimicrobial active substances
<2-1> 항균활성 물질의 부분정제<2-1> Partial Purification of Antimicrobial Active Substances
항균활성을 나타내는 물질을 동정하기 위하여 부분정제를 실시하였다. 엔테로코커스 패컬리스 SL-5를 100 ㎖의 MRS 배지에 접종하여 37℃에서 16시간 배양한 후 새로운 2 리터의 MRS 배지에 접종하여 8시간 배양하여 상기 실시예 1에서와 같이 발효여액을 준비하였다.Partial purification was performed to identify substances that exhibit antimicrobial activity. Enterococcus paculis SL-5 was inoculated in 100 ml of MRS medium and incubated for 16 hours at 37 ° C., then inoculated in fresh 2 liters of MRS medium for 8 hours to prepare a fermentation filtrate as in Example 1.
발효여액을 분획하기 위하여 황산 암모늄(ammonium sulfate)를 최종 농도가 70%가 되도록 첨가하여 천천히 녹인 다음 원심분리 (20,000 x g/ 30 분/ 4℃)를 수행하여 침전물을 얻었다. 침전물은 표준완충용액 (50 mM Tris-HCl, pH 7.0)으로 최종부피가 70 ㎖이 되도록 녹인 후 용액 속에 포함된 염류를 제거하기 위하여 투석 튜브(dialysis tubing, MW cut-off of 500 dalton)을 이용하여 48시간 동안 표준완충용액에서 3회에 걸쳐 투석하였다. 투석액을 농축하기 위해 울트라필트레이션(ultrafiltration, MW cut-off of 3,000 dalton)을 수행하였으며 농축액 (7 mg/ml) 중 8 ㎖를 액체크로마토그래피의 일종인 CM SepharoseTM Fast Flow column (GE Healthcare)를 이용하여 분획하였다. 분획은 0 M에서 1 M까지의 NaCl 농도구배(gradient)를 통해 이루어졌으며 프로피오니박테리움 애크니스에 대한 항균활성은 0.5 M NaCl 농도 주위에서 검출되었다. 항균활성을 가지는 분획 중 최대활성을 가지는 분획을 16% SDS-Tricine 겔 전기영동을 통해 분석한 결과 도 2A에서 보듯이 대부분의 단백질은 5 kDa 근처에 분포하는 것을 확인하였다. In order to fractionate the fermentation filtrate, ammonium sulfate was added to a final concentration of 70%, and slowly dissolved, followed by centrifugation (20,000 × g / 30 min / 4 ° C.) to obtain a precipitate. The precipitate was dissolved in a standard buffer solution (50 mM Tris-HCl, pH 7.0) to a final volume of 70 ml, and then used a dialysis tubing (MW cut-off of 500 dalton) to remove salts. Was dialyzed three times in standard buffer solution for 48 hours. Ultrafiltration (MW cut-off of 3,000 dalton) was performed to concentrate the dialysate, and 8 ml of the concentrate (7 mg / ml) was added to the CM Sepharose TM Fast Flow column (GE Healthcare), a type of liquid chromatography. Fractionation. Fractionation was through a gradient of NaCl concentration from 0 M to 1 M and antimicrobial activity against Propionibacterium acne was detected around 0.5 M NaCl concentration. Among the fractions with antimicrobial activity, the fraction with the maximum activity was analyzed by 16% SDS-Tricine gel electrophoresis, and as shown in FIG. 2A, most proteins were found to be distributed near 5 kDa.
<2-2> 항균활성 물질의 동정<2-2> Identification of Antimicrobial Active Substances
약 5 kDa 크기의 단백질이 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 항균활성을 나타내는지 확인하기 위하여 도 2A에 사용된 겔에 대한 복제 겔(duplicate gel)을 이용하여 상기 실시예 <1-2>에서와 같이 활성염색 실험을 수행하였다In Example <1-2> using a duplicate gel for the gel used in Figure 2A to determine whether the protein of about 5 kDa size shows antimicrobial activity against propionibacterium acne The active staining experiment was performed as
그 결과, 도 2B에서 보듯이, 5 kDa 크기의 단백질 부분에서 프로피오니박테리움 애크니스를 저해하는 투명대(clear zone)가 형성됨으로써 해당 단백질이 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 항균활성을 가짐을 알 수 있었다.As a result, as shown in Fig. 2B, a clear zone is formed in the 5 kDa protein portion that inhibits Propionibacterium acne, indicating that the protein has antimicrobial activity against Propionibacterium acne. Could.
<2-3> 항균활성 물질의 서열분석<2-3> Sequence Analysis of Antimicrobial Active Materials
상기 실시예 <2-2>에서의 물질의 아미노산 서열을 결정하기 위해 상기 5 kDa 크기의 단백질 부분을 PVDF 막(polyvinylidene fluoride membrane)으로 이전(transfer)시켰다. PVDF 막 상의 단백질 밴드 중 박테리오신 밴드를 잘라낸 후 자동화 단백질 서열분석기(automatic protein sequence analyzer)를 이용하여 10개의 N-말단 아미노산 서열을 결정하였다.The 5 kDa size protein portion was transferred to a PVDF membrane (polyvinylidene fluoride membrane) to determine the amino acid sequence of the substance in Example <2-2>. The bacteriocin band was cut out of the protein band on the PVDF membrane and 10 N-terminal amino acid sequences were determined using an automatic protein sequence analyzer.
그 결과, 상기 단백질이 N말단으로부터 Met-Gly-Ala-Ile-Ala-Lys-Leu-Val-Ala-Lys의 서열을 가지고 있음을 알 수 있었다.As a result, it was found that the protein had a sequence of Met-Gly-Ala-Ile-Ala-Lys-Leu-Val-Ala-Lys from the N terminus.
결정된 아미노산 서열을 BLAST(Basic Alignment Search Tool)를 이용하여 NCBI(National Center for Biotechnology Information) 단백질 데이터베이스에 존재하는 단백질들과 비교한 결과 enterocin MR10A와 B (Mart등, 2006, Appl . Environ. Microbiol . 72:4245-4249), enterocin L50A (Cintas 등, 1998, J. Bacteriol. 180: 1988-1994) 등과 100%의 동일성을 보였으며 enterocin L50B (Cintas 등, 1998, J. Bacteriol . 180: 1988-1994) 와는 90%의 동일성을 나타냈다. Enterocin MR10A와 B가 enterocin L50의 변이체(variant)로 생각되고 있기 때문에 enterocin L50의 염기서열을 바탕으로 하여 서열번호 6(5’-ATGGGAGCAATCGCAAAATTAGTA-3’) 및 서열번호 7(5’-TTAATGTCTTTTTAGCCATTTTTCAATTTGATCTATTGT-3’)의 PCR 프라이머를 합성한 후 엔테로코커스 패컬리스 SL-5의 전체 DNA를 주형으로 하여 PCR을 수행하였으며 이로부터 287bp로 이루어진 PCR 산물을 얻었다. 해당 PCR 산물은 DNA 염기서열 결정을 통해 전체 염기서열(서열번호 5)을 결정하였다. 결정된 염기서열을 이용하여 enterocin MR10과 enterocin L50을 대상으로 정렬(alignment) 한 결과 enterocin MR10의 open reading frame (ORF)과 100% 동일성을 나타내었다. 이를 통해 밝혀진 엔테로코커스 패컬리스 SL-5의 유전자의 구조는 두 개의 ORF가 연속적으로(tandem) 배열되어 있어, 이를 각각 서열번호 3 및 서열번호 4로 하였다. The determined amino acid sequences were compared with the proteins present in the National Center for Biotechnology Information (NCBI) protein database using the Basic Alignment Search Tool (BLAST). Enterocin MR10A and B (Mart et al . , 2006, Appl . Environ. Microbiol . 72 : 4245-4249), enterocin L50A (Cintas et al., 1998, J. Bacteriol. 180: 1988-1994) and 100% identity and enterocin L50B (Cintas et al., 1998, J. Bacteriol . 180: 1988-1994). And showed 90% identity. Since Enterocin MR10A and B are considered variants of enterocin L50, based on the nucleotide sequence of enterocin L50, SEQ ID NO: 6 (5'-ATGGGAGCAATCGCAAAATTAGTA-3 ') and SEQ ID NO: 7 (5'-TTAATGTCTTTTTAGCCATTTTTCAATTTGATCTATTGT-3') After the PCR primers were synthesized, PCR was performed using the entire DNA of Enterococcus facules SL-5 as a template to obtain a PCR product consisting of 287bp. The PCR product was determined by determining the total base sequence (SEQ ID NO: 5). Using the determined nucleotide sequence, the alignment of enterocin MR10 and enterocin L50 showed 100% identity with open reading frame (ORF) of enterocin MR10. The structure of Enterococcus faculis SL-5 revealed through the two ORFs are arranged in tandem, so that the SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, respectively.
종합하면, 본 발명의 엔테로코커스 패컬리스 SL-5의 박테리오신은 enterocin MR10 또는 L50과 동일하거나 높은 동일성을 나타내지만 여드름원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대한 우수한 항균활성을 가지고 있음을 알 수 있었다.In summary, the bacteriocin of Enterococcus facules SL-5 of the present invention showed the same or higher identity as enterocin MR10 or L50, but it had an excellent antimicrobial activity against propionibacterium acne.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명은 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 우수한 항균활성을 보이는 엔테로코커스 패컬리스 SL-5 및 상기 미생물에 의해 제조되는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 폴리펩티드를 제공한다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드 및 엔테로코커스 패컬리스 SL-5는 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 애크니스에 대해서 우수한 항균활성을 보여 이들의 생육을 저해하므로 여드름의 예방 및 치료, 개선용으로 사용할 수 있다. As described above, the present invention provides Enterococcus faculis SL-5 and the polypeptide of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2 produced by the microorganism showing excellent antibacterial activity against propionibacterium acne, which is a causative agent of acne. do. Therefore, the polypeptide of the present invention and Enterococcus facules SL-5 show excellent antimicrobial activity against propionibacterium acne, which is a causative agent of acne, thus inhibiting their growth and thus can be used for the prevention, treatment and improvement of acne. .
도 1은 엔테로코커스 패컬리스 SL-5의 항균활성을 나타낸 것이다(A : 프로피오니박테리움 애크니스 ATCC 29399; B : 바실러스 서브틸리스 KFRI 179; C : 바실러스 세레우스 KCTC 3624; D : 스타필로코커스 아우레우스 KCTC 1927)Figure 1 shows the antimicrobial activity of Enterococcus facules SL-5 (A: Propionibacterium acne ATCC 29399; B: Bacillus subtilis KFRI 179; C: Bacillus cereus KCTC 3624; D: Staphylococcus Aureus KCTC 1927
도 2는 본 발명의 박테리오신 부분분리 결과(A) 및 이를 복제한 겔의 프로피오니박테리움 애크니스에 대한 항균활성(B)을 나타낸 것이다.Figure 2 shows the antibacterial activity (B) of the bacteriocin partial separation result of the present invention (A) and the propionibacterium acne of the duplicated gel.
<110> CHUNG, Myung-jun <120> Composition for preventing and treating acne comprising bacteriocin derived from Enterococcus faecalis SL-5 <130> NP08-0093 <160> 7 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 44 <212> PRT <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 1 Met Gly Ala Ile Ala Lys Leu Val Ala Lys Phe Gly Trp Pro Ile Val 1 5 10 15 Lys Lys Tyr Tyr Lys Gln Ile Met Gln Phe Ile Gly Glu Gly Trp Ala 20 25 30 Ile Asn Lys Ile Ile Asp Trp Ile Lys Lys His Ile 35 40 <210> 2 <211> 43 <212> PRT <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 2 Met Gly Ala Ile Ala Lys Leu Val Ala Lys Phe Gly Trp Pro Phe Ile 1 5 10 15 Lys Lys Phe Tyr Lys Gln Ile Met Gln Phe Ile Gly Gln Gly Trp Thr 20 25 30 Ile Asp Gln Ile Glu Lys Trp Leu Lys Arg His 35 40 <210> 3 <211> 135 <212> DNA <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 3 atgggagcaa tcgcaaaatt agtagcaaag tttggatggc caattgttaa aaagtattac 60 aaacaaatta tgcaatttat tggagaagga tgggcaatta acaaaattat tgattggatc 120 aaaaaacata tttaa 135 <210> 4 <211> 132 <212> DNA <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 4 atgggagcaa tcgcaaaatt agtagcaaag tttggatggc catttattaa aaaattctac 60 aaacaaatta tgcagtttat cggacaagga tggacaatag atcaaattga aaaatggcta 120 aaaagacatt aa 132 <210> 5 <211> 287 <212> DNA <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 5 atgggagcaa tcgcaaaatt agtagcaaag tttggatggc caattgttaa aaagtattac 60 aaacaaatta tgcaatttat tggagaagga tgggcaatta acaaaattat tgattggatc 120 aaaaaacata tttaaaaata aggatgtgtt aatgtatggg agcaatcgca aaattagtag 180 caaagtttgg atggccattt attaaaaaat tctacaaaca aattatgcag tttatcggac 240 aaggatggac aatagatcaa attgaaaaat ggctaaaaag acattaa 287 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 1 <400> 6 atgggagcaa tcgcaaaatt agta 24 <210> 7 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 2 <400> 7 ttaatgtctt tttagccatt tttcaatttg atctattgt 39 <110> CHUNG, Myung-jun <120> Composition for preventing and treating acne configuring bacteriocin derived from Enterococcus faecalis SL-5 <130> NP08-0093 <160> 7 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 44 <212> PRT <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 1 Met Gly Ala Ile Ala Lys Leu Val Ala Lys Phe Gly Trp Pro Ile Val 1 5 10 15 Lys Lys Tyr Tyr Lys Gln Ile Met Gln Phe Ile Gly Glu Gly Trp Ala 20 25 30 Ile Asn Lys Ile Ile Asp Trp Ile Lys Lys His Ile 35 40 <210> 2 <211> 43 <212> PRT <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 2 Met Gly Ala Ile Ala Lys Leu Val Ala Lys Phe Gly Trp Pro Phe Ile 1 5 10 15 Lys Lys Phe Tyr Lys Gln Ile Met Gln Phe Ile Gly Gln Gly Trp Thr 20 25 30 Ile Asp Gln Ile Glu Lys Trp Leu Lys Arg His 35 40 <210> 3 <211> 135 <212> DNA <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 3 atgggagcaa tcgcaaaatt agtagcaaag tttggatggc caattgttaa aaagtattac 60 aaacaaatta tgcaatttat tggagaagga tgggcaatta acaaaattat tgattggatc 120 aaaaaacata tttaa 135 <210> 4 <211> 132 <212> DNA <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 4 atgggagcaa tcgcaaaatt agtagcaaag tttggatggc catttattaa aaaattctac 60 aaacaaatta tgcagtttat cggacaagga tggacaatag atcaaattga aaaatggcta 120 aaaagacatt aa 132 <210> 5 <211> 287 <212> DNA <213> Enterococcus faecalis SL-5 <400> 5 atgggagcaa tcgcaaaatt agtagcaaag tttggatggc caattgttaa aaagtattac 60 aaacaaatta tgcaatttat tggagaagga tgggcaatta acaaaattat tgattggatc 120 aaaaaacata tttaaaaata aggatgtgtt aatgtatggg agcaatcgca aaattagtag 180 caaagtttgg atggccattt attaaaaaat tctacaaaca aattatgcag tttatcggac 240 aaggatggac aatagatcaa attgaaaaat ggctaaaaag acattaa 287 <210> 6 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 1 <400> 6 atgggagcaa tcgcaaaatt agta 24 <210> 7 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 2 <400> 7 ttaatgtctt tttagccatt tttcaatttg atctattgt 39
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