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KR20200051687A - 생물학적 제제의 점도를 감소시키기 위한 화합물 - Google Patents

생물학적 제제의 점도를 감소시키기 위한 화합물 Download PDF

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KR20200051687A
KR20200051687A KR1020207009463A KR20207009463A KR20200051687A KR 20200051687 A KR20200051687 A KR 20200051687A KR 1020207009463 A KR1020207009463 A KR 1020207009463A KR 20207009463 A KR20207009463 A KR 20207009463A KR 20200051687 A KR20200051687 A KR 20200051687A
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KR
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thr
antibody
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KR1020207009463A
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English (en)
Inventor
린 추
나탈리 와이. 투상트
동 시아오
페트르 바찰
라메쉬 에스. 카시
안네테 바크
Original Assignee
머크 샤프 앤드 돔 코포레이션
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Publication date
Application filed by 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 filed Critical 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션
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Abstract

본 발명은 화학식 (I)의 PEG화 아미노산 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다:
Figure pct00062

여기서, X, R1, R2, R3A, R3B 및 n은 본원에 정의된 바와 같다. 본 발명은 또한 고농도의 활성 생물학적 성분 (ABI)과 조합하여, 본 발명의 PEG화 아미노산 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 실시양태에서, ABI는 인간 프로그램화된 사멸 수용체 1 (PD-1)에 특이적으로 결합하는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 본 발명은 또한 용액에 본 발명의 화합물을 첨가하는 것을 포함하는, 제약 조성물의 수용액의 점도를 낮추는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 병리학적 질환 또는 상태, 예컨대 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 본 발명의 제약 조성물을 투여함으로써 병리학적 질환 또는 상태, 예컨대 암을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

생물학적 제제의 점도를 감소시키기 위한 화합물
본 발명은 화학식 (I)의 신규 PEG화 아미노산 및 그의 용도에 관한 것이다. 화합물은 고농도의 생물학적 치료제를 포함하는 제제의 점도를 감소시키기 위한 부형제로서 유용하다.
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 9월 5일에 출원된 미국 가출원 번호 62/554,134의 이익을 청구하며, 그 내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 언급
본 출원의 서열 목록은 파일명이 "24494WOPCT-SEQLIST-07AUG2018.TXT"이고, 생성일이 2018년 8월 7일이고, 크기가 33.1 Kb인 ASCII 포맷형 서열 목록으로서 EFS-Web를 통해 전자적으로 제출된 것이다. EFS-Web을 통해 제출된 이러한 서열 목록은 명세서의 일부이고, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
생명공학의 진보는 수많은 치료적 재조합 단백질 및 모노클로날 항체 생성물의 판매를 가능하게 하였다. 상업적으로 사용되는 생물학적 제품은 특히 피하 투여가 바람직한 전달 경로인 경우에 종종 고농도 (50 mg/ml 이상)의 활성 생물학적 성분을 포함하는 액체 제제의 개발을 필요로 한다. 그러나, 이들 제품의 제제화는 충분한 안정성을 제공하고, 잠재적 응집체 형성을 극복하고, 고농도의 단백질 또는 항체와 관련된 높은 점도를 극복하는 것을 포함하여, 여러 이유로 인해 과제로 남아 있다. 문헌 [Shire et al., Challenges in the Development of High Protein Concentration Formulations. J. Pharm. Sci. 93(6): 1390-1402 (2004)]를 참조한다. 매우 점성인 액체 제제는 제조 및 전달에서의 어려움으로 인해 특히 문제가 된다.
제제 성분의 개질을 통하여 제제 점도를 제어하는 여러 방법이 제안되었다. 검토를 위해, 문헌 [Jezek et al. Viscosity of concentrated therapeutic protein compositions, Advanced Drug Delivery Reviews, 63:1101-1117 (2011); Tomar et al., Molecular basis of high viscosity in concentrated antibody solutions; Strategies for high concentration drug product development. MABS 8(2): 216-228 (2116)]을 참조한다. 예를 들면, EP 2 116 265는 점도를 감소시키기 위한 방법으로 제제의 pH를 생리학적 pH 범위 밖으로 개질하는 것 또는 제제 중에 >100 mM의 염을 포함하는 것을 제안한다. 리우 등(Liu et al.) (US 2007/0053900)은 고농도의 항체를 포함하는 제제의 점도를 제어하기 위해, 다른 제제 성분과 조합된 히스티딘 및/또는 아르기닌-HCl의 사용을 제안한다. 카이세바 등(Kaisheva et al.) (US 2003/0138417)은 고농도 항체 제제에서 숙시네이트 또는 히스티딘 완충제 및 폴리소르베이트와 조합하여 다양한 염 또는 아미노산, 특히 프롤린으로부터 선택된 장성 개질제의 용도를 개시하고 있다. 보웬 등(Bowen et al). (WO 2011/139718)은 점도를 감소시키기 위해 생물학적 제제에 특정 화합물 예컨대 특정의 하전된 아미노산의 첨가를 제안한다. 소안 등(Soane et al.) (US 9,605,051)은 고농도 치료 항체 제제와 함께 사용하기 위한 점도 감소 부형제로서의 카페인을 개시하고 있다. 제제 성분을 통하여 생물학적 제제의 용액 점도를 제어하는 추가의 방법은 문헌 [Larson et al., WO 2015/038818, Dauty et al., 및 US Appln. Publication number 2014/0044708]에 개시되어 있다.
생물학적 제제의 점도를 감소시키기 위한 상기 논의된 제안된 제제 성분에도 불구하고, 고농도의 단백질 또는 항체를 포함하는 용액의 점도를 제어할 수 있는 제제 부형제 및 조성물에 대한 필요가 존재한다.
본 발명은 활성 생물학적 성분을 포함하는 제약 제제에서 부형제로서 유용한 화학식 I의 PEG화 아미노산 화합물에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00001
여기서
X는
Figure pct00002
이고;
R1은 H 또는 메틸이고;
R2는 H 또는
Figure pct00003
이고;
R3A 및 R3B는 각각 H이거나, 또는 함께 옥소를 형성하고;
R4A 및 R4B는 각각 H이거나, 또는 함께 옥소를 형성하고;
R5는 H 또는 메틸이고;
각 경우의 n은 독립적으로 1 내지 5이고;
여기서
Figure pct00004
는 화합물의 나머지 부분에 대한 부착 지점을 나타낸다.
화학식 I의 화합물은 활성 생물학적 성분; 즉, 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 치료 단백질을 포함하는 제약 제제의 점도를 낮추는데 유용하다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 활성 생물학적 성분 (ABI) 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다. 구체적 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 1종 이상의 추가의 부형제를 임의로 포함한다. 일부 실시양태에서, ABI는 조성물에 고농도, 예를 들어 약 50 mg/mL 내지 약 250 mg/mL로 존재한다. 구체적 실시양태에서, ABI는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 본 발명은 병리학적 질환 또는 상태의 치료를 필요로 하는 환자에게 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 또는 화학식 I의 화합물 또는 그의 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 조성물을 투여함으로써 병리학적 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 추가로 포함한다.
본 발명의 실시양태, 하위-실시양태, 측면 및 특색은 본원에 추가로 기재되거나 하기 설명, 실시예 및 첨부된 청구범위로부터 명백할 것이다.
본 발명은 화학식 (I)의 신규 PEG화 아미노산 및 그의 용도에 관한 것이다. 하기에 보다 완전히 논의된 바와 같이, 화합물은 고농도의 생물학적 치료제를 포함하는 제제의 점도를 감소시키기 위한 부형제로서 유용하다.
I. 정의 및 약어
본 명세서 및 첨부된 청구범위 전반에 걸쳐 사용되는 바와 같이, 하기 약어가 적용된다:
ABI 활성 생물학적 성분
API 활성 제약 성분
(Boc)2O 디-tert-부틸 디카르보네이트
CDR 달리 나타내지 않는 한, 카바트 넘버링 시스템(Kabat numbering system)을 사용하여 정의된, 이뮤노글로불린 가변 영역 중의 상보성 결정 영역
셀라이트 규조토
CHO 차이니즈 햄스터 난소
CI 신뢰 구간
CTLA4 세포독성 T 림프구 연관 항원 4
DCM 디클로로메탄
DIEA N,N-디이소프로필에틸아민
DMF N,N-디메틸포름아미드
D2O 중수소화수
DTPA 디에틸렌트리아민펜타아세트산
EC50 50% 효능 또는 결합을 유도하는 농도
ELISA 효소-연결 면역흡착 검정
EtOAc 에틸 아세테이트
EtOH 에탄올
FFPE 포르말린-고정, 파라핀-포매
FR 프레임워크 영역
HATU (1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트)
HRP 양고추냉이 퍼옥시다제
HNSCC 두경부 편평 세포 암종
IC50 50% 억제를 유도하는 농도
IgG 이뮤노글로불린 G
IHC 면역조직화학 또는 면역조직화학적
LC-MS 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LCMS로도 약기됨)
mAb 모노클로날 항체
Me 메틸
MeOH 메탄올
MES 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산
NCBI 국립 생물 정보 센터
NMR 핵 자기 공명
NSCLC 비소세포 폐암
PCR 폴리머라제 연쇄 반응
PD-1 프로그램화된 사멸 1 (프로그램화된 세포 사멸-1 및 프로그램화된 사멸 수용체 1로도 공지됨)
PD-L1 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 1
PD-L2 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 2
PEG 폴리에틸렌 글리콜
PS80 폴리소르베이트 80
TEA 트리에틸아민 (Et3N로도 약기됨)
TFA 트리플루오로아세트산
TLC 박층 크로마토그래피
TNBC 삼중 음성 유방암
VH 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역
VK 이뮤노글로불린 카파 경쇄 가변 영역
VL 이뮤노글로불린 경쇄 가변 영역
v/v 부피당 부피
WFI 주사용수
w/v 부피당 중량
본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 특정 기술 과학 용어가 하기에 구체적으로 정의되어 있다. 이 문헌의 다른 곳에서 구체적으로 정의되어 있지 않은 한, 본원에 사용된 모든 다른 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다.
명세서 및 첨부된 특허청구범위 전체에 걸쳐 사용된 단수 형태의 부정관사 ("a," "an,") 및 정관사 ("the")는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 지칭을 포함한다.
"또는"에 대한 언급은 문맥에서 나타난 가능성들 중 하나를 달리 명백하게 지시하지 않는 한, 어느 하나 또는 양쪽의 가능성을 나타낸다. 일부 경우에, "및/또는"이 어느 하나 또는 양쪽의 가능성을 강조하기 위해 사용되었다.
본원에 사용된 "활성 생물학적 성분" (또는 "ABI")은 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 치료 단백질 또는 펩티드인 제약 제제의 활성 성분을 지칭한다. ABI는 환자에게 투여될 때 목적하는 긍정적인 치료 효과를 유도하는데, 예를 들어, 질환 또는 상태를 치료하거나 예방하는데 유용한 생물학적 제약 제제의 성분이고, 치료 효과는 질환 또는 병리학적 상태의 진행을 정지 또는 지연시키고, 질환의 임상 증상의 중증도 또는 지속 시간을 감소시키고, 유사한 비치료 환자에서의 예상 생존기간과 비교하여 환자의 생존기간을 연장하고, 질환 또는 상태의 완전하거나 부분적인 완화를 유도하는 것을 포함할 수 있다. "활성 제약 성분" (또는 "API")은 병리학적 질환 또는 상태를 치료하거나 예방하는데 유용한 제약 제제의 임의의 활성 성분을 지칭하고, 항체 및 그의 항원-결합 단편, 단백질, 소분자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "항체 B"는 고친화도, 인간화, IgG1항-IL23p19 모노클로날 항체이다.
"치료하다" 또는 "치료하는"은 긍정적인 치료 효과를 유도하기 위해 환자에게 본 발명의 조성물을 투여하는 것을 의미한다. 용어는 반드시 모든 질환 또는 장애 증상의 완전한 제거를 나타내는 것은 아니다. 암 또는 면역 상태를 "치료하는"이란, 면역 상태 또는 암성 상태를 갖거나, 또는 암 또는 병원성 감염 (예컨대, 바이러스성, 박테리아성, 진균성 감염) 진단을 받은 또는 그에 취약한 환자에게 본 발명의 조성물을 투여하여 적어도 하나의 긍정적인 치료 효과, 예컨대 예를 들어, 암 세포수 감소, 종양 크기 축소, 말초 기관 내로의 암 세포 침윤 속도 감소, 또는 종양 전이 또는 종양 성장 속도 감소를 달성하는 것을 의미한다. "치료"는 하기: 항종양 면역 반응을 유도/증가시키는 것, 병원체, 독소 및/또는 자기 항원에 대한 면역 반응을 자극시키는 것, 바이러스 감염에 대한 면역 반응을 자극시키는 것, 하나 이상의 종양 마커의 개수를 감소시키는 것, 종양 세포의 성장 또는 생존을 억제시키는 것, 하나 이상의 암성 병변 또는 종양을 제거하거나, 또는 그의 크기를 축소시키는 것, 하나 이상의 종양 마커의 수준을 감소시키는 것, 암의 중증도 또는 지속 기간을 호전시키거나 감소시키는 것, 유사한 비치료 환자에서의 예상 생존 기간과 비교하여 환자의 생존 기간을 연장시키는 것 중 하나 이상의 것을 포함할 수 있다.
"면역 상태" 또는 "면역 장애"는 예컨대, 병리학적 염증, 염증성 장애, 및 자가면역 장애 또는 질환을 포함한다. "면역 상태"는 또한 감염, 지속성 감염, 및 증식성 상태, 예컨대, 면역계에 의한 근절에 저항하는 감염, 종양, 및 암을 비롯한, 암, 종양, 및 혈관신생을 지칭한다. "암성 상태"는 예컨대, 암, 암 세포, 종양, 혈관신생, 및 전암성 상태, 예컨대 이형성증을 포함한다.
암에서의 긍정적인 치료 효과는 다수의 방식으로 측정될 수 있다 (문헌 [W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009)] 참조). 예를 들어, 종양 성장 억제와 관련하여, NCI 표준에 따르면 T/C ≤ 42%가 최소 수준의 항종양 활성이다. T/C < 10%가 높은 항-종양 활성 수준으로 간주되고, 여기서 T/C (%) = 치료된 중앙 종양 부피/대조군의 중앙 종양 부피 x 100이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 제제의 투여에 의해 달성된 치료는 무진행 생존 (PFS), 무질환 생존 (DFS) 또는 전체 생존기간 (OS) 중 임의의 것이다. "종양 진행까지의 시간"으로도 지칭되는 PFS는 치료 동안의 및 치료 후의 암이 성장하지 않는 시간의 길이를 나타내고, 환자가 완전 완화 또는 부분 완화를 경험한 시간의 양뿐만 아니라, 환자가 안정 질환을 경험한 시간의 양을 포함한다. DFS는 치료 동안의 및 치료 후의 환자가 질환 없이 유지되는 시간의 길이를 지칭한다. OS는 치료 경험이 없는 또는 비치료 개체 또는 환자와 비교하여 기대 수명에서의 연장을 지칭한다. 본 발명의 제제, 치료 방법, 및 용도의 실시양태가 모든 환자에서 긍정적인 치료 효과를 달성하는데 효과적이지는 않을 수 있지만, 관련 기술분야에 공지된 임의의 통계 검정, 예컨대, 스튜던츠 t 검정, 카이2-검정, 만(Mann) 및 휘트니(Whitney)에 따른 U-검정, 크루스칼-왈리스(Kruskal-Wallis) 검정 (H-검정), 존키어-터프스트라(Jonckheere-Terpstra)-검정 및 윌콕슨(Wilcoxon)-검정에 의해 결정되는 바와 같이, 통계적으로 유의한 수의 대상체에서는 효과적이어야 한다.
"환자"라는 용어 (대안적으로 본원에서 "대상체" 또는 "개체"로 지칭된다)는 본 발명의 제제로 치료될 수 있는 포유동물 (예컨대, 래트, 마우스, 개, 고양이, 토끼) 및 가장 바람직하게는 인간을 지칭한다. 용어 "환자"는 또한 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 토끼, 고양이, 개 및 다른 포유동물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는, 가축 동물 및 가축을 포함하는 비-인간 동물을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 환자는 성인 환자이다. 다른 실시양태에서, 환자는 소아 환자이다. "치료를 필요로 하는" 환자는 본 발명의 조성물이 치료하도록 의도되는 질환 또는 장애를 앓는 것으로 진단되었거나, 이를 갖는 것으로 의심되거나, 또는 이에 취약한 개체, 또는 장애의 예방이 바람직한 환자이다.
용어 "항체"는 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 항체의 임의의 형태를 지칭한다. 따라서, 이는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 인간화, 완전 인간 항체, 및 키메라 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "모 항체"는 의도된 사용을 위한 항체의 변형, 예컨대 인간 치료 항체로서 사용하기 위한 항체의 인간화 전에 항원에 대한 면역계의 노출에 의해 수득된 항체이다.
일반적으로, 기본 항체 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 쇄를 포함하고, 각각의 쌍은 1개의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 1개의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 일반적으로, 무손상 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 중쇄의 카르복시-말단 부분은 이펙터 기능을 주로 담당하는 불변 영역을 규정할 수 있다. 전형적으로, 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 게다가, 인간 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되고, 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로서 항체의 이소형을 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 전반적으로 문헌 [Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)] 참조.
전형적으로, 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 도메인은 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR) 내에 위치하는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로도 불리는 3개의 초가변 영역을 포함한다. CDR은 통상적으로 프레임워크 영역에 의해 정렬되고, 이는 특이적 에피토프에 대한 결합을 가능하게 한다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 N-말단에서 C-말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 할당은 전반적으로 문헌 [the definitions of Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed.; NIH Publ. number 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901-917 또는 Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883]에 따른다.
명시된 표적 단백질에 "특이적으로 결합하는" 항체는 다른 단백질과 비교하여 그러한 표적에 대해 우선적인 결합을 나타내는 항체이나, 이러한 특이성이 절대적인 결합 특이성을 요구하는 것은 아니다. 항체는 그의 결합에 샘플 내 표적 단백질의 존재가 결정적이며 예를 들어 바람직하지 않은 결과 예컨대 가양성을 일으키지 않는다면, 그의 의도된 표적에 대해 "특이적"인 것으로 간주된다. 본 발명에 유용한 항체 또는 그의 결합 단편은 비-표적 단백질과의 친화도보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게는 적어도 10배 더 큰, 보다 바람직하게는 적어도 20배 더 큰, 가장 바람직하게는 적어도 100배 더 큰 친화도로 표적 단백질에 결합할 것이다. 본원에 사용된 바와 같이, 항체는 항체가 주어진 아미노산 서열, 예를 들어 성숙 인간 PD-1 분자의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에는 결합하지만 그러한 서열이 결여된 단백질에는 결합하지 않는다면, 그러한 서열을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 것으로 언급된다.
"키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 한 부분이 특정한 종 (예를 들어, 인간)으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그에 상동인 한편, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종 (예를 들어, 마우스)으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그에 상동인 항체, 뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 지칭한다.
용어 "제약 유효량" 또는 "치료 유효량"은 질환 또는 상태를 치료하는데 충분한, 환자에게 도입되는 치료 조성물 또는 제제의 양을 의미한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 수준이 환자의 특징, 예컨대, 연령, 체중 등에 따라 달라질 수 있다는 것을 이해할 것이다. 용어 "유효량"은 본 발명의 화합물 (즉, 화학식 I의 화합물)과 함께 사용될 때, 화합물이 없는 동일한 제제와 비교하여 제제 의 점도를 감소시키는데 충분한 화합물의 양을 의미한다. 활성 제약 성분 또는 활성 생물학적 성분의 "유효량"은 세포, 조직, 시스템, 동물 또는 인간에서 목적하는 반응을 도출하는데 충분한 양을 의미한다. 한 실시양태에서, 유효량은 치료될 질환 또는 상태의 증상을 완화시키기 위한 "치료 유효량"이다. 또 다른 실시양태에서, 유효량은 예방되는 질환 또는 상태의 증상의 예방을 위한 "예방 유효량"이다. 활성 화합물 (즉, 활성 성분)이 염으로서 투여되는 경우에, 활성 성분의 양에 대한 언급은 화합물의 유리 산 또는 유리 염기 형태에 대한 것이다. 본 발명의 화합물, 즉, 화학식 I의 화합물을 수식하도록 사용될 때, "유효량"은 예를 들어 허용되는 범위 내에 용액의 점도를 낮추거나 유지하는 목적하는 바의 기능을 수행하는 화합물의 충분한 양이 제제에 존재하는 것을 의미한다.
용어 "약"은, 물질 또는 조성물의 양 (예를 들어, mM 또는 M), 제제 성분의 백분율 (v/v 또는 w/v), 용액/제제의 pH, 또는 방법의 단계를 특징짓는 파라미터의 값 등을 수식할 때, 예를 들어, 물질 또는 조성물의 제조, 특징화 및/또는 사용에 수반되는 전형적인 측정, 취급 및 샘플링 과정을 통해; 이들 절차에서의 의도치 않은 오류를 통해; 조성물을 만들거나 사용하기 위해 또는 절차를 수행하기 위해 사용된 성분의 제조, 원료 또는 순도에서의 차이를 통해; 기타 등등을 통해, 발생할 수 있는 수량 값에서의 변동을 지칭한다. 특정 실시양태에서, "약"은 적절한 단위의 ± 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 또는 5.0의 변동을 의미할 수 있다. 특정 실시양태에서, "약"은 ± 0.1%, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 또는 10% 의 변동을 의미할 수 있다.
용어 "암", "암성", 또는 "악성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는, 포유동물에서의 생리학적 조건을 지칭하거나 기재한다. 암의 예는 암종, 림프종, 백혈병, 모세포종, 및 육종을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 암의 보다 특정한 예로는 편평세포 암종, 골수종, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 신경교종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 위장암 (위장관암), 신암, 난소암, 간암, 림프모구성 백혈병, 림프구성 백혈병, 결장직장암, 자궁내막암, 신장암, 전립선암, 갑상선암, 흑색종, 연골육종, 신경모세포종, 췌장암, 다형성 교모세포종, 자궁경부암, 뇌암, 위암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장 암종, 및 두부경부 암을 포함한다.
"코티아(Chothia)"는 문헌 [Al-Lazikani et al., JMB 273:927-948 (1997)]에 기재된 항체 넘버링 시스템을 의미한다.
본원에 사용된 "카바트(Kabat)"는 문헌 [Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)]에 의해 최초로 보고된 이뮤노글로불린 정렬 및 넘버링 시스템을 의미한다.
용어 "PD-1 결합 단편", "그의 항원 결합 단편", "그의 결합 단편" 또는 "그의 단편"은 항원 (인간 PD-1)에 결합하여 그의 활성을 억제하는 (예컨대, PD-1이 PDL1 및 PDL2에 결합하는 것을 차단하는) 그의 생물학적 활성을 여전히 실질적으로 유지하는 항체의 단편 또는 유도체를 포함한다. 따라서, 용어 "항체 단편" 또는 PD-1 결합 단편은 전장 항체의 부분, 일반적으로는 그의 항원 결합 영역 또는 가변 영역을 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편을 포함한다. 전형적으로, 결합 단편 또는 유도체는 그의 PD-1 억제 활성의 적어도 10%를 유지한다. 일부 실시양태에서, 목적하는 생물학적 효과를 발휘하는데 충분한 친화력을 갖는 임의의 결합 단편이 유용하기는 하지만, 결합 단편 또는 유도체는 그의 PD-1 억제 활성의 적어도 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 100% (또는 그 초과)를 유지한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 비관련 항원과의 친화도보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게는 적어도 10배 더 큰, 보다 바람직하게는 적어도 20배 더 큰, 가장 바람직하게는 적어도 100배 더 큰 친화도로 그의 항원에 결합한다. 한 실시양태에서 예를 들면, 스캐차드 분석(Munsen et al. (1980) Analyt. Biochem. 107:220-239)에 의해 결정시 항체는 약 109 리터/mol 초과의 친화도를 갖는다. 또한, PD-1 결합 단편은 실질적으로 그의 생물학적 활성을 변경시키지 않는 보존적 아미노산 치환을 가지는 변이체를 포함할 수 있는 것으로 의도된다.
"인간 항체"는 인간 이뮤노글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 인간 항체는 마우스, 마우스 세포, 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생산되는 경우 뮤린 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체" 또는 "래트 항체"는 각각 마우스 또는 래트 이뮤노글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다.
"인간화 항체"는 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체 뿐만 아니라 인간 항체로부터의 서열을 함유하는 항체의 형태를 지칭한다. 이러한 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소의 서열을 함유한다. 일반적으로, 인간화 항체는, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것인 적어도 1개 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이다. 인간화 항체는 또한 임의로 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 불변 영역의 적어도 한 부분을 포함할 것이다. 설치류 항체의 인간화 형태는 일반적으로 모 설치류 항체의 동일한 CDR 서열을 포함할 것이지만, 친화도를 증가시키기 위해, 인간화 항체의 안정성을 증가시키기 위해, 또는 다른 이유를 위해 특정 아미노산 치환이 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물에 유용한 항체는 변경된 이펙터 기능을 제공하도록 Fc 영역이 변형된 (또는 차단된) 항체를 또한 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,624,821; WO2003/086310; WO2005/120571; WO2006/0057702; 문헌 [Presta (2006) Adv. Drug Delivery Rev. 58:640-656] 참조. 상기 변형은 면역계의 다양한 반응을 증진 또는 억제시키는데 사용될 수 있고, 가능하게는 진단 및 요법에서의 유익한 효과가 있을 수 있다. Fc 영역의 변경은 아미노산 변이 (치환, 결실 및 삽입), 글리코실화 또는 탈글리코실화, 및 다중 Fc 부가를 포함한다. Fc에 대한 변화는 치료 항체에서의 항체 반감기를 또한 변경시킬 수 있고, 더 긴 반감기는 편의성 증가 및 물질 사용 감소와 함께 투약 빈도 감소를 유도할 것이다. [Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol.116:731 at 734-35] 참조.
"완전 인간 항체"란, 인간 이뮤노글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 완전 인간 항체가 마우스, 마우스 세포, 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생산되는 경우, 이는 뮤린 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체"는 각각 마우스 이뮤노글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 완전 인간 항체는 인간에서, 인간 이뮤노글로불린 배선 서열을 가지는 트랜스제닉 동물에서, 파지 디스플레이에 의해 또는 다른 분자 생물학적 방법에 의해 생산될 수 있다.
"초가변 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기 (예를 들어, 카바트 넘버링 시스템에 의해 측정시 경쇄 가변 도메인의 잔기 24-34 (CDRL1), 50-56 (CDRL2) 및 89-97 (CDRL3) 및 중쇄 가변 도메인의 잔기 31-35 (CDRH1), 50-65 (CDRH2) 및 95-102 (CDRH3) (Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 잔기 (즉, 경쇄 가변 도메인의 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3) 및 중쇄 가변 도메인의 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3) (Chothia 및 Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917)를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 CDR 잔기로서 본원에 정의된 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. CDR 및 FR 잔기는 카바트의 표준 서열 정의에 따라 결정된다 (Kabat et al. (1987) Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda Md.).
"보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 관련 기술분야의 숙련된 기술자에게 공지되어 있고, 일반적으로 생성된 분자의 생물학적 활성을 바꾸지 않으면서 심지어 폴리펩티드의 핵심적 영역에서 만들어질 수 있는 아미노산의 치환을 지칭한다. 그러한 예시적 치환은 바람직하게는 하기 표 1에 제시된 것에 따라 만들어진다:
표 1. 예시적인 보존적 아미노산 치환
Figure pct00005
추가로, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 일반적으로, 폴리펩티드의 비-필수 영역 내의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는다는 것을 인지하고 있다. 예를 들어 문헌 [Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Edition)]을 참조한다.
명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, "~으로 본질적으로 이루어진다" 또는 변형, 예컨대, "~으로 본질적으로 이루어지다" 또는 "~으로 본질적으로 이루어지는"이라는 어구는 임의의 언급된 요소들 또는 요소들 군의 포함, 및 명시된 투여 요법, 방법 또는 조성물의 기본적인 또는 신규 성질을 실질적으로 변화시키지 않는, 언급된 요소들과 성질이 유사하거나, 상이한 다른 요소들의 임의적인 포함을 가리킨다. 비제한적 예로서, 열거된 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지는 결합 화합물은 결합 화합물의 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 1개 이상의 아미노산 잔기의 치환을 포함하는, 1개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
"포함하는" 또는 변형어, 예컨대 "포함하다", "포함한다" 또는 "로 구성된다"는 언어 또는 필요한 함축을 표현하기 위해 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 포괄적인 의미로, 즉 언급된 특색의 존재를 명시하지만 본 발명의 임의의 실시양태의 작용 또는 유용성을 실질적으로 증진시킬 수 있는 추가의 특색의 존재 또는 부가를 배제하지 않도록 사용된다.
"단리된 항체" 및 "단리된 항체 단편"은 정제 상태를 지칭하고, 이러한 문맥에서 명명된 분자에 다른 생물학적 분자, 예컨대 핵산, 단백질, 지질, 탄수화물, 또는 다른 물질, 예컨대 세포 파편 및 성장 배지가 실질적으로 없다는 것을 의미한다. 일반적으로, 용어 "단리된"은 상기 물질, 또는 물, 완충제 또는 염이 본원에 기재된 바와 같은 결합 화합물의 실험적 또는 치료적 용도를 실질적으로 방해하는 양으로 존재하지 않는 한, 이러한 물질의 완전한 부재, 또는 물, 완충제 또는 염의 부재를 지칭하는 것으로 의도되지는 않는다.
본원에 사용된 "모노클로날 항체" 또는 "mAb" 또는 "Mab"는, 실질적으로 동종인 항체의 집단을 지칭하고, 즉, 집단을 구성하는 항체 분자는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일하다. 대조적으로, 통상적인 (폴리클로날) 항체 제제는 전형적으로, 상이한 에피토프에 대해 종종 특이적인 그의 가변 도메인, 특히 그의 CDR에서 상이한 아미노산 서열을 갖는 다수의 상이한 항체를 포함한다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 수득됨에 따른 항체의 특징을 나타내며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256: 495]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나 재조합 DNA 방법에 따라 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조). "모노클로날 항체"는 또한 예를 들어 문헌 [Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 및 Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 또한 문헌 [Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731] 참조.
암으로 진단되었거나 암을 갖는 것으로 의심되는 대상체에 적용할 때 "종양"은 임의의 크기의 악성이거나 잠재적으로 악성인 신생물 또는 조직 덩어리를 지칭하고, 원발성 종양 및 속발성 신생물을 포함한다. 고형 종양은 통상적으로 낭 또는 액체 영역을 함유하지 않는 조직의 비정상적 성장물 또는 덩어리이다. 고형 종양의 상이한 유형은 이들을 형성하는 세포의 유형에 대해 명명된다. 고형 종양의 예는 육종, 암종 및 림프종이다. 백혈병 (혈액암)은 일반적으로 고형 종양을 형성하지 않는다 (National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).
본원에 사용된 "가변 영역" 또는 "V 영역"은 상이한 항체들 간에 서열이 가변적인 IgG 쇄의 절편을 의미한다. 이는 경쇄 내 카바트 잔기 109 및 중쇄 내 113까지 연장된다.
용어 "완충제"는 본 발명의 제제의 용액 pH를 허용가능한 범위 내에서 유지시키거나, 또는 본 발명의 동결건조 제제의 경우, 동결건조 이전에 허용가능한 용액 pH를 제공하는 작용제를 포함한다.
용어 "제약 제제"는 활성 성분이 효과적이도록 하는 그러한 형태이고, 제제가 투여될 대상체에게 독성인 추가적인 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"제약상 허용되는"이란, 사용되는 활성 성분을 유효 용량으로 제공하기 위해 대상체에게 합리적으로 투여될 수 있고, "일반적으로 안전한 것으로 간주되고," 예컨대, 생리적으로 허용되며, 전형적으로 인간에게 투여되었을 때, 알레르기 반응 또는 원치않는 유사 반응, 예컨대, 급성위연동이상항진 등을 일으키지 않는 부형제 (비히클, 첨가제) 및 조성물을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 용어는 미국 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 동물, 보다 특히 인간에 사용하기 위한 또 다른 일반적으로 승인된 약전에 열거된 분자 엔티티 및 조성물을 의미한다.
"안정한 제제"는 저장 시에 그 중의 API가 그의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 본질적으로 유지하는 것이다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 관련 기술분야에서 이용가능하고, 예를 들어 문헌 [Peptide 및 Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) 및 Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 (1993)]에 검토되어 있다. 안정성은 선택된 온도에서 선택된 기간 동안 측정될 수 있다.
"안정한" 제약 항체 제제는 적어도 3개월, 바람직하게는 6개월, 보다 바람직하게는 1년, 보다 더 바람직하게는 최대 2년 동안 냉각된 온도 (2-8℃)에 관찰시 어떤 유의한 변화도 갖지 않는 제약 항체 제제이다. 추가적으로, "안정한" 액체 제제는 25℃ 및 40℃를 비롯한 온도에서 1개월, 3개월, 6개월, 12개월, 및/또는 24개월을 비롯한 기간 동안 목적하는 특색을 나타내는 것을 포함한다. 안정성에 대한 전형적인 허용 기준은 하기와 같다. 전형적으로, SEC-HPLC에 의해 측정 시, 항체 단량체의 최대 약 10%, 바람직하게는 약 5%가 분해된다. 제약 항체 제제가 육안 분석에 의해 투명 내지 유백색이거나, 또는 무색이다. 제제의 농도, pH 및 오스몰랄농도의 변화가 +/-10%를 초과하지 않는다. 전형적으로, 효능은 참조물의 50-150% 범위이다. 전형적으로, 최대 약 10%, 바람직하게는 약 5%의 클리핑이 관찰된다. 전형적으로, 최대 약 10%, 바람직하게는 약 5%의 응집이 형성된다.
색상 및/또는 투명도의 육안 검사시 또는 UV 광 산란, 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 및 동적 광 산란에 의해 측정시, 항체가 응집, 침전 및/또는 변성의 유의한 증가를 보이지 않았다면, 항체는 제약 제제에서 "그의 물리적 안정성을 유지"하는 것이다. 단백질 3차 구조를 결정하는 형광 분광분석법 및 단백질 2차 구조를 결정하는 FTIR 분광분석법에 의해 단백질 입체형태의 변화를 평가할 수 있다.
항체가 유의적인 화학적 변경을 보이지 않았다면, 항체는 제약 제제에서 "그의 화학적 안정성을 유지"하는 것이다. 화학적 안정성은 단백질의 화학적으로 변경된 형태를 검출하고 정량화함으로써 평가될 수 있다. 종종 단백질의 화학 구조를 변경시키는 분해 프로세스로는 가수분해 또는 클리핑 (예컨대, 크기 배제 크로마토그래피 및 SDS-PAGE와 같은 방법에 의해 평가), 산화 (예컨대, 질량 분광분석법 또는 MALDI/TOF/MS와 함께 펩티드 맵핑에 의한 것과 같은 방법에 의해 평가), 탈아미드화 (예컨대, 이온 교환 크로마토그래피, 모세관 등전 포커싱, 펩티드 맵핑, 이소아스파르트산 측정과 같은 방법에 의해 평가), 및 이성질화 (이소아스파르트산 함량 측정, 펩티드 맵핑 등에 의해 평가)를 포함한다.
주어진 시간에서의 항체의 생물학적 활성이 제약 제제가 제조된 시점에 나타난 생물학적 활성의 미리 정해진 범위 내에 있다면, 항체는 제약 제제에서 "그의 생물학적 활성을 유지"하는 것이다. 예를 들어, 항원 결합 검정에 의해 항체의 생물학적 활성을 측정할 수 있다.
본 발명의 한 실시양태는 원래 정의된 바와 같은 또는 임의의 상기 실시양태, 하위-실시양태, 측면, 부류 또는 하위-부류에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이며, 여기서 화합물 또는 그의 염은 실질적으로 순수한 형태이다. 본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은 적합하게는 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 함유하는 생성물 (예를 들어, 상기 화합물 또는 염을 제공하는 반응 혼합물로부터 단리된 생성물)의 적어도 약 60 중량%, 전형적으로 적어도 약 70 중량%, 바람직하게는 적어도 약 80 중량%, 보다 바람직하게는 적어도 약 90 중량% (예를 들어, 약 90 중량% 내지 약 99 중량%), 보다 더 바람직하게는 적어도 약 95 중량% (예를 들어, 약 95 중량% 내지 약 99 중량%, 또는 약 98 중량% 내지 100 중량%), 가장 바람직하게는 적어도 약 99 중량% (예를 들어, 100 중량%)가 상기 화합물 또는 염으로 이루어진다는 것을 의미한다. 화합물 및 염의 순도 수준은 표준 분석 방법, 예컨대 박층 크로마토그래피, 겔 전기영동, 고성능 액체 크로마토그래피 및/또는 질량 분광측정법을 사용하여 결정될 수 있다. 1종 초과의 분석 방법이 사용되고 상기 방법이 결정된 순도 수준에 있어서 실험적으로 유의한 차이를 제공하는 경우에, 최고 순도 수준을 제공하는 방법이 우선한다. 100% 순도의 화합물 또는 염은 표준 분석 방법에 의해 결정시 검출가능한 불순물이 없는 것이다.
1개 이상의 비대칭 중심을 갖고 입체이성질체의 혼합물로서 발생할 수 있는 본 발명의 화합물에 관하여, 달리 명백하게 나타내지 않는 한 실질적으로 순수한 화합물은 입체이성질체의 실질적으로 순수한 혼합물이거나 실질적으로 순수한 개별 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체일 수 있다. 본 발명은 화학식 I의 화합물의 모든 입체이성질체 형태를 포괄한다. 구체적 입체화학이 지정되지 않는 한, 본 발명은 이들 화합물의 모든 이러한 이성질체 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 화학식 I의 화합물에 존재하는 비대칭의 중심은 모두 서로 독립적으로 (R) 배위 또는 (S) 배위를 가질 수 있다. 키랄 탄소에 대한 결합이 본 발명의 구조 화학식에서 직선으로 도시되는 경우에, 키랄 탄소의 (R) 및 (S) 배위 둘 다, 및 이에 따른 거울상이성질체 및 그의 혼합물 둘 다 화학식 내에 포괄되는 것으로 이해된다. 유사하게, 화합물 명칭이 키랄 탄소에 대한 키랄 지정 없이 언급되는 경우에, 키랄 탄소의 (R) 및 (S) 배위 둘 다, 및 이에 따른 개별 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 그의 혼합물이 명칭에 포괄되는 것으로 이해된다. 구체적 입체이성질체 또는 그의 혼합물의 제조는 이러한 입체이성질체 또는 혼합물이 수득되는 실시예에서 확인될 수 있지만, 이는 어떠한 방식으로도 본 발명의 범주 내에 모든 입체이성질체 및 그의 혼합물이 포함되는 것을 제한하지는 않는다.
본 발명은 모든 가능한 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 및 2종 이상의 입체이성질체의 모든 비의 혼합물, 예를 들어 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 모든 비의 혼합물을 포함한다. 따라서, 거울상이성질체는, 좌선성 및 우선성 대장체 둘 다로서의 거울상이성질체적으로 순수한 형태, 라세미체 형태, 및 2종의 거울상이성질체의 모든 비의 혼합물의 형태로 본 발명의 대상이다. 시스/트랜스 이성질현상의 경우에 본 발명은 시스 형태 및 트랜스 형태 둘 다뿐만 아니라 이들 형태의 모든 비의 혼합물을 포함한다. 개별 입체이성질체의 제조는, 원하는 경우에, 통상적인 방법에 의한, 예를 들어 크로마토그래피 또는 결정화에 의한 혼합물의 분리에 의해, 합성을 위한 입체화학적으로 균일한 출발 물질의 사용에 의해, 또는 입체선택적 합성에 의해 수행될 수 있다. 임의로 유도체화는 입체이성질체의 분리 전에 수행될 수 있다. 입체이성질체의 혼합물의 분리는 화학식 I의 화합물의 합성 동안 중간 단계에서 수행될 수 있거나, 또는 최종 라세미 생성물 상에서 수행될 수 있다. 절대 입체화학은, 필요한 경우에, 공지된 배위의 입체생성 중심을 함유하는 시약을 사용하여, 유도체화된 결정질 생성물 또는 결정질 중간체의 X선 결정학에 의해 결정될 수 있다. 이러한 라세미체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체의 특정한 이성질체, 염, 용매화물 (수화물 포함) 또는 용매화 염이 지정되지 않는 한, 본 발명은 모든 이러한 이성질체, 뿐만 아니라, 이러한 라세미체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체의 염, 용매화물 (수화물 포함) 및 용매화된 염 및 그의 혼합물을 포함한다.
"옥소"는 이중 결합에 의해 또 다른 원자에 연결된 산소 원자를 의미하고 "=O"로 나타내어질 수 있다.
임의의 변수 (예를 들어, n)가 임의의 구성성분 또는 화학식 I에서 1회 초과로 나타나는 경우에, 각 경우에 대한 그의 정의는 모든 다른 경우에서의 그의 정의와 독립적이다. 또한, 치환기 및/또는 변수의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용가능하다.
본원에 사용된 파상선
Figure pct00006
는 화합물의 나머지 부분에 대한 부착 지점을 나타낸다.
본 개시내용 전반에 걸쳐 사용된 표준 명명법 하에서, 지정된 측쇄의 말단 부분은 부착 지점을 향하는 인접 관능기 후에 마지막에 기재된다.
본 발명의 화합물을 선택하는데 있어서, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 다양한 치환기, 즉 R1, R2 등이 널리 공지된 화학 구조 연결성 및 안정성의 원리에 따라 선택되어야 한다는 것을 인식할 것이다.
달리 명백하게 언급되지 않는 한, 본원에 인용된 모든 범위는 포괄적이다. 예를 들면, 화학식 I에서, "n은 1 내지 5이다"는 n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다는 것을 의미한다. 또한 본원에 언급된 임의의 범위는 그의 범주 내에 그러한 범위 내의 모든 하위-범위를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서 예를 들어 "n은 1 내지 5이다"는 그의 측면으로서, n이 1 내지 4, n이 1 내지 3, n이 1 또는 2, n이 2 내지 5, n이 2 내지 4, n이 2 또는 3인 것을 포함하도록 의도된다.
"안정한" 화합물은, 제조 및 단리될 수 있고 구조 및 특성이 본원에 기재된 목적 (예를 들어, 대상체에게의 치료적 투여)을 위한 화합물의 사용을 가능하게 하기에 충분한 기간 동안 본질적으로 변화하지 않고 남아있거나 남아있도록 유발될 수 있는 화합물이다. 본 발명의 화합물은 화학식 I에 의해 포괄되는 안정한 화합물로 제한된다.
용어 "화합물"은 화합물을 지칭하고, 특정 실시양태에서, 안정한 범위까지의 그의 임의의 수화물 또는 용매화물을 지칭한다. 수화물은 물과 복합체화된 화합물이고, 용매화물은 유기 용매와 복합체화된 화합물이다.
상기 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 염 형태로 사용될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 화합물이 염을 형성할 수 있는 그러한 경우를 인식할 것이다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 모 화합물에 유사한 유효성을 보유하고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 (예를 들어, 그의 수용자에 대해 독성도 아니고 달리 유해하지도 않은) 염 (내부 염, 예컨대 쯔비터이온 포함)을 지칭한다. 따라서, 본 발명의 한 실시양태는 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 본원에 사용된 용어 "염(들)"은 하기 중 어느 것을 나타낸다: 무기 및/또는 유기 염기로 형성된 산성 염뿐만 아니라 무기 및/또는 유기 산으로 형성된 염기성 염. 본 발명의 화합물의 염은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 본 발명의 화합물을 매질 예컨대 염이 침전되는 매질 또는 수성 매질 중에서 소정량, 예컨대 등가량의 산 또는 염기와 반응시키고, 이어서 동결건조시킴으로써 형성될 수 있다. 이러한 모든 산 염 및 염기 염은 본 발명의 범주 내의 제약상 허용되는 염인 것으로 의도되며, 모든 산 염 및 염기 염은 본 발명의 목적에 상응하는 화합물의 유리 형태와 동등한 것으로 간주된다.
본원에 제시된 바와 같이, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 활성 생물학적 성분, 임의로 1종 이상의 다른 활성 성분 (예를 들면, 제2 ABI 또는 API) 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 담체의 특징은 투여 경로에 좌우될 것이다. "제약상 허용되는"은 제약 조성물의 성분이 서로 상용성이어야 하고, 활성 성분(들)의 유효성을 방해하지 않아야 하며, 그의 수용자에게 유해하지 (예를 들어, 독성이지) 않아야 한다는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은, 억제제 이외에도, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 가용화제 및 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 물질을 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여는 적합하게는 비경구이며, 여기서 조성물은, 예를 들어 문헌 [Remington - The Science 및 Practice of Pharmacy, 21st edition, 2006]의 챕터 39, 41, 42, 44 및 45에 기재된 제제의 제조 및 투여 방법을 포함한, 관련 기술분야에 널리 공지된 제제화 방법을 사용하는 선택된 경로에 의한 투여를 위해 적합하게 제제화된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 병원 세팅에서 정맥내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 투여는 피하이다.
II. 본 발명의 화합물
본 발명의 화합물 (즉, 화학식 I의 화합물)은 활성 생물학적 성분 (즉, 항체 또는 그의 항원 결합 단편)을 포함하는 제약 제제, 특히 고농도의 활성 생물학적 성분을 포함하는 제제에서 제제의 점도를 감소시키기 위한 부형제로서 유용하다. 고농도 ABI 및 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 그를 필요로 하는 환자에게 정맥내 또는 피하 투여를 통해 투여될 수 있다.
본원에 기재된 본 발명의 화합물의 각각의 다양한 실시양태에서, 화학식 I 및 그의 다양한 실시양태에서의 변수를 포함한 각각의 변수는 달리 나타내지 않는 한 다른 변수들로부터 독립적으로 선택된다.
본 발명은 화학식 I의 화합물을 포함한, 본원에 기재된 본 발명의 화합물의 다양한 실시양태 각각, 그의 다양한 실시양태 및 실시예의 화합물에 대하여 달리 나타내지 않는 한, 화합물의 모든 형태 예컨대, 예를 들어 상기 화합물의 임의의 용매화물, 수화물, 입체이성질체 및 호변이성질체 및 그의 임의의 제약상 허용되는 염을 포괄한다. 추가로, 본원에 기재된 실시예에서, 본 발명의 화합물은 염 형태로 도시될 수 있다. 이러한 경우에서, 본 발명의 화합물은 이러한 염의 유리 산 또는 유리 염기 형태 및 상기 유리 산 또는 유리 염기 형태의 임의의 제약상 허용되는 염을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
한 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00007
여기서 X, n, R1, R2, R3A 및 R3B는 화학식 (I)의 화합물에 대해 본원에 정의된 바와 같고 (즉, 발명의 내용란에 정의된 바와 같음); 여기서 화합물은 용액의 전체적 점도를 낮추기 위해 액체 제약 제제에서 부형제로 사용하는데 적합할 수 있다.
본 발명의 제1 실시양태 (실시양태 E1)는 X, n, R1, R2, R3A 및 R3B가 발명의 내용란의 화학식 (I)에 정의된 바와 같은 것인, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제2 실시양태 (실시양태 E2)는 X가
Figure pct00008
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제3 실시양태 (실시양태 E3)는 X가
Figure pct00009
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제4 실시양태 (실시양태 E4)는 X가
Figure pct00010
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제5 실시양태 (실시양태 E5)는 X가
Figure pct00011
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제6 실시양태 (실시양태 E6)는 X가
Figure pct00012
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제7 실시양태 (실시양태 E7)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 H이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제8 실시양태 (실시양태 E8)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 메틸이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제9 실시양태 (실시양태 E9)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 실시양태 E7-E8 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R2가 H이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제10 실시양태 (실시양태 E10)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 실시양태 E7-E8 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R2가
Figure pct00013
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제11 실시양태 (실시양태 E11)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 실시양태 E7-E8 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R2가
Figure pct00014
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
실시양태 E11의 하위-실시양태에서, R2는
Figure pct00015
이다.
실시양태 E11의 추가적 하위-실시양태에서, R2는
Figure pct00016
이다.
실시양태 E11의 또 다른 하위-실시양태에서, R2는
Figure pct00017
이다.
제12 실시양태 (실시양태 E12)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 실시양태 E7-E8 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R2가
Figure pct00018
이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
실시양태 E12의 하위-실시양태에서, R2는
Figure pct00019
이다.
실시양태 E12의 추가적 하위-실시양태에서, R2는
Figure pct00020
이다.
실시양태 E10-E12의 하위-실시양태에서, R2의 n은 1이다. 실시양태 E10-E12의 추가적 하위-실시양태에서, R2의 n은 2이다. 실시양태 E10-E12의 추가의 하위-실시양태에서, R2의 n은 3이다. 실시양태 E10-E12의 또 다른 하위-실시양태에서, R2의 n은 4이다. 실시양태 E10-E12의 추가의 하위-실시양태에서, R2의 n은 5이다. 실시양태 E10-E12의 다른 하위-실시양태에서, R2의 n은 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2이다.
제13 실시양태 (실시양태 E13)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 실시양태 E7-E8 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R2가 실시양태 E9-E12 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R3A 및 R3B가 각각 H이고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
제14 실시양태 (실시양태 E14)는 X가 실시양태 E2-E6 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R1이 실시양태 E7-E8 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R2가 실시양태 E9-E13 중 어느 것에 정의된 바와 같고, R3A 및 R3B가 함께 옥소를 형성하고, 다른 모든 변수는 실시양태 E1에 정의된 바와 같은 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 제15 실시양태 (실시양태 E15)는 하기 구조를 갖거나 그로 이루어진 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00021
Figure pct00022
본 발명의 다른 실시양태는 하기를 포함한다:
(a) 유효량의 활성 생물학적 성분, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
(b) 유효량의 제2 활성 생물학적 성분 또는 활성 제약 성분을 추가로 포함하는 (a)의 제약 조성물.
(c) ABI가 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 (a)의 제약 조성물.
(d) 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, LAG3, BTLA, TIM3, HVEM, GITR, CD27, TIGIT, ILT2, ILT3, ILT4, ILT5, SIRPα, NKG2A, NKG2C, NKG2E, TSLP, IL10, VISTA, VEGF, EGFR, Her2/neu, VEGF 수용체, 다른 성장 인자 수용체, CD20, CD28, CD40, CD-40L, CD70, OX-40, 4-1BB, 및 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 (c)의 제약 조성물.
(e) 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, LAG3, GITR, CD27 및 TIGIT로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 (d)의 제약 조성물.
(f) 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PD-1, PD-L1 또는 PD-L2에 특이적으로 결합하는 것인 (c)의 제약 조성물.
(g) ABI가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙 또는 두르발루맙인 (f)의 제약 조성물.
(h) 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 PD-1에 특이적으로 결합하는 것인 (c)의 제약 조성물.
(i) ABI가 펨브롤리주맙인 (a)의 제약 조성물.
(j) 추가로 제2 ABI를 포함하며, 여기서 제2 ABI가 CTLA4, LAG3, GITR, CD27 및 TIGIT로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편인 (f), (g) 또는 (h)의 제약 조성물.
(k) 질환 또는 다른 병리학적 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 치료 유효량의 ABI을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 다른 병리학적 상태를 치료하는 방법.
(l) 암성 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 치료 유효량의 ABI와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 암성 상태를 치료하는 방법.
(m) 질환 또는 다른 병리학적 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (a), (b), (c), (d), (e), (f), (g), (h), (i) 또는 (j)의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 다른 병리학적 상태를 치료하는 방법.
(n) 암성 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 (d), (e), (f), (g), (h), (i) 또는 (j)의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암성 상태를 치료하는 방법.
(q) 암이 흑색종, 폐암, 두경부 암, 방광암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 림프종, 신암, 중피종, 난소암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암, 타액선암, 전립선암 (예를 들어 호르몬 불응성 전립선 선암종), 췌장암, 결장암, 식도암, 간암, 갑상선암, 교모세포종, 신경교종, 및 다른 신생물성 악성종양으로 이루어진 군으로부터 선택된 (l) 또는 (n)에 제시된 바와 같은 암성 상태를 치료하는 방법.
본 발명은 또한 생물학적 제제 (즉, ABI를 포함하는 제제)의 점도를 낮추는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.
본 발명은 또한 (i) 암을 치료하는데 사용하기 위한; (ii) 암을 치료하기 위한 의약으로서 사용하기 위한, 또는 (iii) 암을 치료하기 위한 의약의 제조 (또는 생산)에 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 하기로부터 선택된 ABI를 포함하는 제약 제제를 추가로 포함한다: (a) 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (b) 항-PDL1 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (c) 항-PDL2 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (d) 항-Her2/Neu 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (e) 항-OX40 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (e) 항-4-1BB 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (f) 항-CTLA4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (g) 항-LAG3 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (h) 항-GITR 항체 또는 그의 항원 결합 단편, (i) 항-CD27 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 및 (j) 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편. 이들 용도에서, 본 발명의 화합물은 임의로 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물 및 염의 실시양태에서, 각각의 실시양태는 하나 이상의 다른 실시양태와 조합될 수 있되, 조합물이 안정한 화합물 또는 염을 제공하고 실시양태의 기재와 일치하는 정도로 조합될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 상기 (a) 내지 (q)로서 제공된 조성물 및 방법의 실시양태가 실시양태의 조합으로부터 유래한 이러한 실시양태를 비롯한, 화합물 및/또는 염의 모든 실시양태를 포함한다는 것이 추가로 이해되어야 한다.
본 발명의 추가의 실시양태는 상기 제시된 제약 조성물, 조합물 및 방법, 및 상기 단락에 기재된 용도를 포함하며, 여기서 그에 사용된 본 발명의 화합물은 상기 기재된 실시양태, 하위-실시양태, 부류 또는 하위-부류 중 하나의 화합물이다. 화합물은 임의로 이들 실시양태에서 제약상 허용되는 염 형태로 사용될 수 있다.
본 발명의 추가의 실시양태는 상기 단락에 제시된 각각의 제약 조성물, 조합물, 방법 및 용도를 포함하며, 여기서 그에 사용된 본 발명의 화합물 또는 그의 염은 실질적으로 순수하다.
III. 본 발명의 조성물
본 발명은 본 발명의 화합물 (즉, 화학식 I의 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 활성 생물학적 성분 (ABI)을 포함하는 안정한 생물학적 제제 (즉, 제약 조성물)를 제공하며, 여기서 ABI는 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 치료 단백질 또는 펩티드이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 치료 유효량의 활성 제약 성분을 포함하는 안정한 제제를 제공한다. 구체적 실시양태에서, API는 소분자이다.
본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, LAG3, BTLA, TIM3, HVEM, GITR, CD27, TIGIT, ILT2, ILT3, ILT4, ILT5, SIRPα, NKG2A, NKG2C, NKG2E, TSLP, IL10, VISTA, VEGF, EGFR, Her2/neu, VEGF 수용체, 다른 성장 인자 수용체, CD20, CD28, CD40, CD-40L, CD70, OX-40, 4-1BB, 및 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택되는 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명의 실시양태에서, ABI의 양은 치료상 허용되는 양이다.
구체적 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 (즉, 화학식 I의 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 활성 생물학적 성분 (PD-1 ABI)으로서 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예를 들어 인간 또는 인간화 항-PD-1 항체)을 포함하는 제약 조성물, 뿐만 아니라 본 발명의 제제를 사용하는 방법에 관한 것이다. 임의의 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 본 발명의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 특정한 실시양태에서, PD-1 ABI는 펨브롤리주맙 (임의의 펨브롤리주맙 바이오시밀러 포함) 및 니볼루맙 (임의의 니볼루맙 바이오시밀러 포함)으로부터 선택되는 항-PD-1 항체이다. 구체적 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 대안적 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 표 2는 예시적인 항-인간 PD-1 항체인 펨브롤리주맙 및 니볼루맙에 대한 아미노산 서열을 제공한다. 본 발명의 제제 및 방법에 유용한 대안적 PD-1 항체 및 항원 결합 단편은 표 3에 제시된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물에 사용하기 위한 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3의 3개의 경쇄 CDR 및/또는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3의 3개의 중쇄 CDR을 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, CDRL1은 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 1의 변이체이고, CDRL2는 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 2의 변이체이고, CDRL3은 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 3의 변이체이다.
한 실시양태에서, CDRH1은 서열식별번호: 6 또는 서열식별번호: 6의 변이체이고, CDRH2는 서열식별번호: 7 또는 서열식별번호: 7의 변이체이고, CDRH3은 서열식별번호: 8 또는 서열식별번호: 8의 변이체이다.
한 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2 및 서열식별번호: 3이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7 및 서열식별번호: 8이다.
본 발명의 대안적 실시양태에서, CDRL1은 서열식별번호: 11 또는 서열식별번호: 11의 변이체이고, CDRL2는 서열식별번호: 12 또는 서열식별번호: 12의 변이체이고, CDRL3은 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 13의 변이체이다.
한 실시양태에서, CDRH1은 서열식별번호: 16 또는 서열식별번호: 16의 변이체이고, CDRH2는 서열식별번호: 17 또는 서열식별번호: 17의 변이체이고, CDRH3은 서열식별번호: 18 또는 서열식별번호: 18의 변이체이다.
한 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2 및 서열식별번호: 3이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7 및 서열식별번호: 8이다.
대안적 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12 및 서열식별번호: 13이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17 및 서열식별번호: 18이다.
본 발명의 추가 실시양태에서, CDRL1은 서열식별번호: 21 또는 서열식별번호: 21의 변이체이고, CDRL2는 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 22의 변이체이고, CDRL3은 서열식별번호: 23 또는 서열식별번호: 23의 변이체이다.
또 다른 실시양태에서, CDRH1은 서열식별번호: 24 또는 서열식별번호: 24의 변이체이고, CDRH2는 서열식별번호: 25 또는 서열식별번호: 25의 변이체이고, CDRH3은 서열식별번호: 26 또는 서열식별번호: 26의 변이체이다.
또 다른 실시양태에서, 3개의 경쇄 CDR은 서열식별번호: 21, 서열식별번호: 22 및 서열식별번호: 23이고, 3개의 중쇄 CDR은 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 25 및 서열식별번호: 26이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서 항-PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 4 또는 서열식별번호: 4의 변이체를 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 9의 변이체를 포함한다. 추가 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 14 또는 서열식별번호: 14의 변이체를 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 19 또는 서열식별번호: 19의 변이체를 포함한다. 추가 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 27 또는 서열식별번호: 27의 변이체를 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 28 또는 서열식별번호: 28의 변이체, 서열식별번호: 29 또는 서열식별번호: 29의 변이체, 또는 서열식별번호: 30 또는 서열식별번호: 30의 변이체를 포함한다. 이러한 실시양태에서, 변이체 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 서열은 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고 참조 서열과 동일하다. 일부 실시양태에서, 치환은 프레임워크 영역 내에 (즉, CDR 바깥쪽에) 위치한다. 일부 실시양태에서, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환은 보존적 치환이다.
본 발명의 제약 조성물의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 4를 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 14를 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 19를 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 본 발명의 제제의 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 28을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 27을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 추가 실시양태에서, 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29를 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 27을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 30을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 27을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 상기 기재된 VL 도메인 또는 VH 도메인 중 1개와 적어도 95%, 90%, 85%, 80%, 75% 또는 50% 서열 상동성을 갖는 VL 도메인 및/또는 VH 도메인을 갖고, PD-1에 대한 특이적 결합을 나타내는 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단백질을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물의 항-인간 PD-1 항체 또는 항원 결합 단백질은 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 아미노산 치환을 갖는 VL 및 VH 도메인을 포함하고, PD-1에 대한 특이적 결합을 나타낸다.
상기 실시양태 중 임의의 것에서, PD-1 ABI는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 전장 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 특정 실시양태에서, PD-1 ABI는 IgM, IgG, IgD, IgA, 및 IgE를 포함한 임의의 부류의 이뮤노글로불린으로부터 선택되는 전장 항-PD-1 항체이다. 바람직하게는, 항체는 IgG 항체이다. IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함한 IgG의 임의의 이소형이 사용될 수 있다. 상이한 불변 도메인이 본원에 제공된 VL 및 VH 영역에 부가될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체 (또는 단편)의 특정한 의도된 용도가 변경된 이펙터 기능을 요구하는 것이라면, IgG1 이외의 중쇄 불변 도메인이 사용될 수 있다. IgG1 항체가 긴 반감기 및 이펙터 기능 예컨대 보체 활성화 및 항체-의존성 세포성 세포독성을 제공하지만, 이러한 활성이 항체의 모든 용도에 바람직하지는 않을 수 있다. 이러한 경우에, 예를 들어 IgG4 불변 도메인이 사용될 수 있다.
본 발명의 실시양태에서, PD-1 ABI는 서열식별번호: 5에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 및 서열식별번호: 10에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 대안적 실시양태에서, PD-1 ABI는 서열식별번호: 15에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 및 서열식별번호: 20에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 추가 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호: 32에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 및 서열식별번호: 31에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 추가의 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호: 33에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 및 서열식별번호: 31에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 추가의 실시양태에서, PD-1 API는 서열식별번호: 34에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄 및 서열식별번호: 31에 제시된 바와 같은 아미노산 잔기의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 항-PD-1 항체이다. 본 발명의 일부 공동-제제에서, PD-1 API는 펨브롤리주맙 또는 펨브롤리주맙 바이오시밀러이다. 본 발명의 일부 공동-제제에서, PD-1 API는 니볼루맙 또는 니볼루맙 바이오시밀러이다.
통상적으로, 본 발명의 제약 조성물의 항-PD-1 항체 및 항원 결합 단편의 아미노산 서열 변이체는 참조 항체 또는 항원 결합 단편의 아미노산 서열 (예를 들어 중쇄, 경쇄, VH, VL, 또는 인간화 서열)과 적어도 75% 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 및 가장 바람직하게는 적어도 95, 98, 또는 99%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가질 것이다. 서열에 관한 동일성 또는 상동성은 본원에서 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하도록 서열을 정렬하고, 필요한 경우, 갭을 도입한 후에 항-PD-1 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되고, 이때 임의의 보존적 치환은 서열 동일성의 일부로 간주되지 않는다. 항체 서열로의 N-말단, C-말단, 또는 내부 확장, 결실, 또는 삽입 중 어느 것도 서열 동일성 또는 상동성에 영향을 미치는 것으로 해석되지 않을 것이다.
서열 동일성은 2개의 서열이 최적으로 정렬된 경우에 2개의 폴리펩티드의 아미노산이 동등한 위치에서 동일한 정도를 지칭한다. 서열 동일성은, 전체 길이의 각각의 참조 서열에 걸쳐 각각의 서열들 간에 최대 매칭되도록 알고리즘의 파라미터를 선택하는 것인 BLAST 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 하기 참고문헌은 서열 분석에 종종 사용되는 BLAST 알고리즘에 관한 것이다: BLAST ALGORITHMS: Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3:266-272; Madden, T.L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7:649-656; Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17:149-163; Hancock, J.M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67-70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., et al., "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565; States, D.J., et al., (1991) Methods 3:66-70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268; Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22:2022-2039; 및 Altschul, S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York.
마찬가지로, 경쇄의 어느 한 부류가 본원의 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 구체적으로, 카파, 람다, 또는 그의 변이체가 본 조성물 및 방법에 유용하다.
표 2. 예시적인 PD-1 항체 서열
Figure pct00023
Figure pct00024
표 3. 본 발명의 조성물에 유용한 추가의 PD-1 항체 및 항원 결합 단편.
Figure pct00025
본 발명의 제약 조성물의 일부 실시양태에서, ABI (예를 들어 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편)는 약 10 mg/mL 내지 약 250 mg/mL의 농도로 존재한다. 추가의 실시양태에서 ABI는 약 25 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 25 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 25 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 또는 약 100 mg/mL 내지 약 200 mg/mL의 농도로 존재한다.
대안적 실시양태에서, ABI는 약 10 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 25 mg/mL, 약 30 mg/mL, 약 40 mg/mL, 약 50 mg/mL, 약 60 mg/mL, 약 70 mg/mL, 약 75 mg/mL, 약 80 mg/mL, 약 90 mg/mL, 약 100 mg/mL, 약 110 mg/mL, 약 120 mg/mL, 약 130 mg/mL, 약 140 mg/mL, 약 150 mg/mL, 약 160 mg/mL, 약 170 mg/mL, 약 180 mg/mL, 약 190 mg/mL, 약 200 mg/mL, 약 210 mg/mL, 약 220 mg/mL, 약 230 mg/mL, 약 240 mg/mL, 또는 약 250 mg/mL의 농도로 존재한다.
본원에 언급된 바와 같이, 화학식 I의 화합물은 용액의 점도를 낮춤으로써 고농도의 ABI가 용액 제제에 이용되도록 하는데 (즉, 동결건조/재구성에 대한 필요 없이 고농도의 ABI를 달성하는데) 유용하다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 수용액이다. 본 발명의 이러한 측면의 실시양태에서, 용액의 점도는 ≤30 mPa.s (밀리파스칼.초 또는 cP (센티포아즈)), mPa-S, ≤29 mPa-S, ≤28 mPa-S, ≤27 mPa-S, ≤26 mPa-S, ≤25 mPa-S, ≤24 mPa-S, ≤23 mPa-S, ≤22 mPa-S, ≤21 mPa-S, ≤20 mPa-S, ≤19 mPa-S, 또는 ≤18 mPa-S이다. 추가 실시양태에서, 용액의 점도는 약 15 mPa-S 내지 약 30 mPa-S, 약 17 mPa-S 내지 약 28 mPa-S, 약 17 mPa-S 내지 약 27 mPa-S, 약 17 mPa-S 내지 약 26 mPa-S, 약 17 mPa-S 내지 약 25 mPa-S, 약 18 mPa-S 내지 약 28 mPa-S, 약 18 mPa-S 내지 약 27 mPa-S, 약 18 mPa-S 내지 약 26 mPa-S, 약 18 mPa-S 내지 약 25 mPa-S, 약 19 mPa-S 내지 약 28 mPa-S, 약 19 mPa-S 내지 약 27 mPa-S, 약 19 mPa-S 내지 약 26 mPa-S, 약 19 mPa-S 내지 약 25 mPa-S, 약 20 mPa-S 내지 약 28 mPa-S, 약 20 mPa-S 내지 약 27 mPa-S, 약 20 mPa-S 내지 약 26 mPa-S, 또는 약 20 mPa-S 내지 약 25 mPa-S이다. 점도는 관련 기술분야에 공지된 임의의 점도계, 예를 들어 mVROC (비스코미터/레오미터-온-어-칩(Viscometer/Rheometer-On-A-Chip), 레오센스, 인크.(RheoSense, Inc.), 캘리포니아주 샌 라몬)를 사용하여 측정될 수 있다.
개발되는 특정한 제제의 필요에 따라, 1종 이상의 추가의 부형제가 본 발명의 제약 조성물에 첨가될 수 있다. 이러한 추가의 부형제는 제약 조성물에의 사용에 안전하고, 제제의 안정성에 유해하게 영향을 미치지 않는다. 본 발명의 제제에 첨가될 수 있는 추가의 부형제의 한 예는 ABI에 대한 환자 면역계의 면역 반응을 증가시키기 위해 첨가될 수 있는 아주반트를 포함한다. 제제에 첨가될 수 있는 다른 부형제는 완충제, 안정화제, 가용화제, 장성 개질제, 킬레이트화제, 보존제, 덱스트란, 덱스트란 술페이트, 덱스트란 T40, 디에탄올아민, 구아니딘, 염화칼슘, 시트르산나트륨, 알부민, 젤라틴, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 지질, 및 헤파린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 통상의 기술자는 제제 중에서의 부형제의 기능, 뿐만 아니라 계획된 투여 방식, 투여량, 및 다른 인자 예컨대 예상되는 저장 시간 및 제제의 온도에 따라, 어느 추가의 부형제가 목적하는 제약 제제에 포함되어야 하는지 용이하게 결정할 수 있다. 통상의 기술자는 추가의 부형제의 양이 달라질 수 있다는 것을 인식하고, 인간 또는 동물에 대한 투여 둘 다에 안전하고 목적하는 기능에 효과적인 적절한 양을 용이하게 결정할 수 있다. 전형적으로, 추가의 부형제는 약 10 내지 약 500 mM의 농도로 존재할 수 있다.
IV. 사용 방법
한 측면에서, 본 발명은 제약 제제에 화학식 I의 화합물을 첨가하는 것을 포함하는, 제약 제제의 점도를 낮추는 방법에 관한 것이며, 여기서 제제는 수용액이다. 본 발명의 실시양태에서, 제약 제제는 ABI를 포함한다. 구체적 실시양태에서, ABI는 50 mg/mL 이상, 75 mg/mL 이상, 100 mg/mL 이상, 125 mg/mL 이상, 150 mg/mL 이상, 175 mg/mL 이상 또는 200 mg/mL 이상의 농도로 존재한다.
따라서, 본 발명은
(a) ABI 및 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 제제를 제공하는 것, 여기서 ABI는 약 50 mg/mL 내지 약 250 mg/mL의 농도로 존재하고, 제제는 수용액임; 및
(b) 용액에 화학식 I의 화합물을 첨가하는 것
을 포함하는, 제약 제제의 점도를 낮추는 방법을 제공하며;
여기서 화합물의 첨가 후 제약 제제의 점도는 ≤30 mPa-S, ≤29 mPa-S, ≤28 mPa-S, ≤27 mPa-S, ≤26 mPa-S, ≤25 mPa-S, ≤24 mPa-S, ≤23 mPa-S, ≤22 mPa-S, ≤21 mPa-S, ≤20 mPa-S, ≤19 mPa-S, 또는 ≤18 mPa-S이다.
용액 중 본 발명의 제약 조성물의 점도는 동일한 부형제를 포함하고 동일한 pH이지만 화학식 I의 화합물이 부재한 제약 조성물보다 더 낮다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 용액 중 본 발명의 제약 조성물의 점도는 아르기닌 또는 그의 제약상 허용되는 염, 히스티딘 또는 그의 제약상 허용되는 염, 페닐알라닌 또는 그의 제약상 허용되는 염, 티로신 또는 그의 제약상 허용되는 염, 또는 리신 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 (즉, 화학식 I의 화합물은 없는) 동일한 조성물보다 더 낮다.
본 발명은 또한 대상체에게 유효량의 (1) ABI (2) 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 (3) 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이며, 여기서 ABI는 암을 치료하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 치료 단백질 또는 펩티드이다. 이러한 방법의 구체적 실시양태에서, 조성물은 정맥내 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 다른 실시양태에서, 조성물은 피하 투여에 의해 대상체에게 투여된다.
본 발명의 방법 중 임의의 것에서, 암은 흑색종, 폐암, 두경부암, 방광암, 유방암, 위장암, 다발성 골수종, 간세포성암, 림프종, 신암, 중피종, 난소암, 식도암, 항문암, 담도암, 결장직장암, 자궁경부암, 갑상선암, 타액선암, 전립선암 (예를 들어 호르몬 불응성 전립선 선암종), 췌장암, 결장암, 식도암, 간암, 갑상선암, 교모세포종, 신경교종, 및 다른 신생물성 악성종양으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다.
대안적 실시양태에서, 폐암은 소세포 폐암이다.
일부 실시양태에서, 림프종은 호지킨 림프종이다.
다른 실시양태에서, 림프종은 비-호지킨 림프종이다. 특정한 실시양태에서, 림프종은 종격 대 B-세포 림프종이다.
일부 실시양태에서, 유방암은 삼중 음성 유방암이다.
추가 실시양태에서, 유방암은 ER+/HER2- 유방암이다.
일부 실시양태에서, 방광암은 요로상피암이다.
일부 실시양태에서, 두경부암은 비인두암이다. 일부 실시양태에서, 암은 갑상선암이다. 다른 실시양태에서, 암은 타액선암이다. 다른 실시양태에서, 암은 두경부 편평 세포 암종이다.
일부 실시양태에서, 암은 높은 수준의 미소위성체 불안정성 (MSI-H)을 갖는 전이성 결장직장암이다.
일부 실시양태에서, 암은 흑색종, 비소세포 폐암, 재발성 또는 불응성 전형적 호지킨 림프종, 종격 대 B-세포 림프종, 두경부 편평 세포 암종, 요로상피암, 식도암, 위암, 자궁경부암, 및 간세포성암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 치료 방법의 다른 실시양태에서, 암은 혈액 악성종양이다. 특정 실시양태에서, 혈액 악성종양은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), EBV-양성 DLBCL, 원발성 종격 대 B-세포 림프종, T-세포/조직구-풍부 대 B-세포 림프종, 여포성 림프종, 호지킨 림프종 (HL), 외투 세포 림프종 (MCL), 다발성 골수종 (MM), 골수 세포 백혈병-1 단백질 (Mcl-1), 골수이형성 증후군 (MDS), 비-호지킨 림프종 (NHL), 또는 소림프구성 림프종 (SLL)이다.
생검 또는 수술 물질 내의 종양-침윤 림프구의 존재와 관련하여 개선된 무질환 생존 및 전체 생존을 나타내는 악성종양, 예를 들어, 흑색종, 결장직장암, 간암, 신장암, 위/식도암, 유방암, 췌장암 및 난소암이 본원에 기재된 방법 및 치료에 포괄된다. 이러한 암 하위유형은 T 림프구에 의한 면역 제어에 감수성인 것으로 알려져 있다. 추가적으로, 본원에 기재된 항체를 사용하여 성장이 억제될 수 있는 불응성 또는 재발성 악성종양이 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 난소암, 신암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 간암, 위암, 식도암 및 흑색종을 포함하여, 시험된 조직 샘플에서의 PD-L1 및/또는 PD-L2의 상승된 발현을 특징으로 하는 암을 갖는 대상체에게 투여된다. 본 발명의 조성물을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 추가의 암은, 예를 들어 카포시 육종, 간암, 비인두암, 림프종, 자궁경부암, 외음부암, 항문암, 음경암 및 구강암과 인과 관계가 있는 것으로 알려져 있는 바이러스 예컨대 인간 면역결핍 바이러스, 간염 바이러스 부류 A, B 및 C, 엡스타인 바르 바이러스, 인간 유두종 바이러스에 의한 지속성 감염과 연관된 것들을 포함한다.
추가의 측면은 감염 또는 감염성 질환을 갖거나, 갖는 것으로 의심되거나, 또는 가질 위험이 있는 환자를 치료하기 위해 본 발명의 제약 조성물을 사용하는 방법을 포함한다. 본 발명의 이러한 측면의 구체적 실시양태에서, 제약 조성물의 ABI는 길항제 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 단편이다. 따라서, 본 발명은 포유동물 대상체에게 유효량의 본 발명의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물 대상체에서 만성 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법의 일부 구체적 실시양태에서, 조성물은 정맥내 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 다른 실시양태에서, 조성물은 피하 투여에 의해 대상체에게 투여된다.
이러한 측면에서, 본 발명의 조성물은 병원체, 독소, 및 자기-항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 단독으로 또는 백신과 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 인간 면역결핍 바이러스, 간염 바이러스 부류 A, B 및 C, 엡스타인 바르 바이러스, 인간 시토메갈로바이러스, 인간 유두종 바이러스, 및 포진 바이러스를 포함하나 이에 제한되지는 않는 인간에게 감염성인 바이러스에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 사용될 수 있다. 길항제 항-PD-1 항체 또는 항체 단편을 포함하는 본 발명의 조성물은 박테리아 또는 진균 기생충, 및 다른 병원체에 의한 감염에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 사용될 수 있다. B형 및 C형 간염 및 HIV에 의한 바이러스 감염은 만성 바이러스 감염인 것으로 간주된다.
본 발명의 조성물은 1종 이상의 "추가의 치료제"와 조합하여 환자에게 투여될 수 있다. 추가의 치료제는 생물요법제 (VEGF, EGFR, Her2/neu, VEGF 수용체, 다른 성장 인자 수용체, CD20, CD40, CD-40L, OX-40, 4-1BB, 및 ICOS에 대한 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않음), 성장 억제제, 면역원성 작용제 (예를 들어, 약독화된 암성 세포, 종양 항원, 항원 제시 세포, 예컨대 종양 유래 항원 또는 핵산으로 펄싱된 수지상 세포, 면역 자극 시토카인 (예를 들어, IL-2, IFNα2, GM-CSF), 및 면역 자극 시토카인 예컨대 비제한적으로 GM-CSF를 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포)일 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 방법의 일부 실시양태에서, 방법은 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 특정한 실시양태에서, 추가의 치료제는 항-LAG3 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-GITR 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항-CD27 항체 또는 그의 항원 결합 단편, ILT2 항체 또는 그의 항원 결합 단편, ILT3 항체 또는 그의 항원 결합 단편, ILT4 항체 또는 그의 항원 결합 단편, ILT5 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 IL-10 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 한 실시양태에서, 추가의 치료제는 IL-12를 발현하는 뉴캐슬병 바이러스 벡터이다. 추가 실시양태에서, 추가의 치료제는 디나시클립이다. 추가 실시양태에서, 추가의 치료제는 STING 효능제이다. 추가 실시양태에서, 추가의 치료제는 디나시클립이다. 추가 실시양태에서, 추가의 치료제는 PARP 억제제이다. 추가 실시양태에서, 추가의 치료제는 디나시클립이다. 추가의 실시양태에서, 추가의 치료제는 MEK 억제제이다. 추가의 실시양태에서, 추가의 치료제는 CXCR2 길항제이다. 추가의 실시양태에서, 추가의 치료제는 나바릭신이다. 추가의 실시양태에서, 추가의 치료제는 올라파립이다. 추가의 실시양태에서, 추가의 치료제는 셀루메티닙이다.
적합한 투여 경로는 예를 들어, 근육내, 피하, 뿐만 아니라, 척수강내, 직접적 뇌실내, 정맥내, 복강내를 포함한 비경구 전달을 포함할 수 있다. 약물은 다양한 통상적인 방식, 예컨대 복강내, 비경구, 동맥내 또는 정맥내 주사로 투여될 수 있다.
추가의 치료제의 투여량을 선택하는 것은 물질의 혈청 또는 조직 교체율, 증상의 수준, 물질의 면역원성, 및 치료되는 개체에서의 표적 세포, 조직 또는 기관의 접근가능성을 포함한 여러 인자에 따라 달라진다. 추가의 치료제의 투여량은 허용되는 수준의 부작용을 제공하는 양이어야 한다. 따라서, 각각의 추가의 치료제 (예를 들어 생물요법제 또는 화학요법제)의 투여량 및 투여 빈도는 부분적으로 특정한 치료제, 치료되는 암의 중증도, 및 환자 특징에 따라 달라질 것이다. 항체, 시토카인 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 것에 대한 지침이 이용가능하다. 예를 들어, 문헌 [Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002)]을 참조한다. 적절한 투여 요법의 결정은, 예를 들어 치료에 영향을 미치는 것으로 관련 기술분야에 공지되거나 의심되는, 또는 치료에 영향을 미칠 것으로 예측되는 파라미터 또는 인자를 사용하여 임상의에 의해 이루어질 수 있고, 예를 들어 환자의 임상 병력 (예를 들어, 선행 요법), 치료될 암의 유형 및 병기 및 조합 요법에서의 치료제 중 1종 이상에 대한 반응의 바이오마커에 따라 달라질 것이다.
다양한 참고문헌이 추가의 치료제에 대한 제약상 허용되는 담체 또는 부형제의 선택을 용이하게 하기 위해 이용가능하다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984); Hardman et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 연속 주입에 의해, 또는 예를 들어, 1일, 주당 1-7회, 1주, 2주, 3주, 매월, 격월 등의 간격의 투여에 의해 투여된다. 바람직한 투여 프로토콜은 유의한 바람직하지 않은 부작용을 피하는 최대 용량 또는 투여 빈도를 수반하는 것이다. 총 매주 용량은 일반적으로 적어도 0.05 μg/kg, 0.2 μg/kg, 0.5 μg/kg, 1 μg/kg, 10 μg/kg, 100 μg/kg, 0.2 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg 체중 또는 그 초과이다. 예를 들어 문헌 [Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52:133-144]을 참조한다. 소분자 치료제, 예를 들어, 펩티드 모방체, 천연 생성물, 또는 유기 화학물질의 바람직한 용량은 몰/kg 기준으로 항체 또는 폴리펩티드에 대한 것과 대략 동일하다.
특정 실시양태에서, 투여는 대상체에게 치료 과정에 걸쳐 1.0, 3.0, 및 10 mg/kg의 상승 용량의 제약 제제, 즉 ABI 및 화학식 I의 화합물을 포함하는 제제를 투여하는 것을 포함할 것이다. 제제는 재구성된 액체 제제일 수 있거나, 또는 이전에 동결건조되지 않은 액체 제제일 수 있다. 시간 과정은 달라질 수 있고, 목적하는 효과를 얻을 수 있는 한, 계속될 수 있다. 특정 실시양태에서, 용량 상승은 최대 약 10mg/kg 용량까지 계속될 것이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 흑색종, 또는 다른 형태의 고형 종양의 조직학적 또는 세포학적 진단을 가질 것이고, 특정 경우에, 대상체는 비-측정가능한 질환을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서 대상체는 다른 화학요법제로 치료되었을 것이며, 다른 실시양태에서는 대상체가 치료 경험이 없을 것이다.
추가의 실시양태에서, 투여 요법은 치료 과정 전체에 걸쳐 본원에 기재된 제약 제제 (즉, ABI 및 화학식 I의 화합물을 포함하는 제제) 중 임의의 것을 1, 3, 또는 10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함할 것이다. 이러한 일정한 투여 요법의 경우, 투여 사이의 간격은 약 14일 (± 2일)일 것이다. 특정 실시양태에서, 투여 사이의 간격은 약 21일 (± 2일)일 것이다.
특정 실시양태에서, 투여 요법은 환자내 용량 상승과 함께, 약 0.005mg/kg 내지 약 10mg/kg의 용량을 투여하는 것을 포함할 것이다. 특정 실시양태에서, 5 mg/kg 또는 10 mg/kg의 용량이 3주마다, 또는 2주마다의 간격으로 투여될 것이다. 추가의 실시양태에서, 흑색종 환자 또는 다른 고형 종양을 갖는 환자의 경우, 3mg/kg의 용량이 3주 간격으로 투여될 것이다. 이들 실시양태에서, 환자는 비-절제가능한 질환을 가져야 하지만; 환자는 이전에 수술을 받았을 수 있다.
특정 실시양태에서, 대상체는 본원에 기재된 제약 제제 중 임의의 것을 30분 IV 주입으로 투여받을 것이다. 상승 용량에 대한 특정 실시양태에서, 투여 간격은 제1 투여와 제2 투여 사이에 약 28일 (±1일)일 것이다. 특정 실시양태에서, 제2 투여와 제3 투여 사이의 간격은 약 14일 (± 2일)일 것이다. 특정 실시양태에서, 투여 간격은 제2 용량 이후의 용량에 대해 약 14일 (± 2일)일 것이다.
피하 투여는 시린지를 사용하여, 또는 다른 주사 장치 (예를 들어, 인젝트-이즈(Inject-ease)® 장치); 주사기 펜; 또는 무바늘 장치 (예를 들어 메디젝터(MediJector) 및 바이오젝터(BioJector)®)를 사용하여 주사함으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 실시양태는 또한 (a) 요법 (예를 들어, 인간 신체의 요법); (b) 약물; (c) 항종양 면역 반응 유도, 또는 그의 증가 유도; (d) 환자에서 1종 이상의 종양 마커의 수 감소; (e) 종양 또는 혈액암의 성장 중단 또는 지연; (f) PD-1-관련 질환의 진행 중단 또는 지연; (g) 암 진행 중단 또는 지연; (h) PD-1-관련 질환의 안정화; (i) 종양 세포의 성장 또는 생존 억제; (j) 1개 이상의 암성 병변 또는 종양 제거, 또는 그의 크기 감소; (k) PD-1-관련 질환의 진행, 발병 또는 중증도 감소; (l) PD-1-관련 질환 예컨대 암의 임상 증상의 중증도 또는 지속기간 감소; (m) 유사한 비치료 환자에서의 예상 생존기간 대비 환자의 생존기간 연장; (n) 암성 상태 또는 다른 PD-1 관련 질환의 완전한 또는 부분적 완화 유도, (o) 암의 치료, 또는 (p) 감염 또는 감염성 질환의 치료에 (i) 사용, (ii) 그를 위한 의약 또는 조성물로서의 사용, 또는 (iii) 그를 위한 의약의 제조에의 사용을 위한, 본원에 기재된 생물학적 제제 중 1종 이상을 포함한다.
본원에 언급된 모든 간행물은 본 발명과 관련하여 사용될 수 있는 방법론 및 물질을 설명 및 개시할 목적으로 참조로 포함된다.
첨부된 도면을 참조하여 본원의 발명의 상이한 실시양태를 기재하는 경우, 본 발명이 그러한 정확한 실시양태로 제한되지 않고, 첨부된 청구범위에서 정의된 바와 같은 본 발명의 범주 또는 취지에서 벗어나지 않으면서 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 그에 다양한 변화 및 변형이 수행될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.
실시예 1
화합물 1 (C1)의 제조: (S)-12-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-산
Figure pct00026
단계 1. (S)-메틸 12-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-오에이트의 제조:
디클로로메탄 (25 ml) 중 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (1-1) (5g, 29.6 mmol) 및 트리에틸 아민 (8.97, 89 mmol)의 용액에, 디클로로메탄 (25 ml) 중 2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)아세틸 클로라이드 (1-2) (5.81 g, 29.6 mmol) (산으로부터 새로 제조됨)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이어서 이를 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 12-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-오에이트 (1-3)를 액체로서 수득하였다.
C14H23N3O6 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 330.35, 실측치 330.2.
1H NMR 400 MHz, DMSO-d6: δ 8.15 (d, J = 10.40 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.58 (t, J = 9.20 Hz, 1H), 3.92 (s, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.50-3.52 (m, 8H), 2.97 (d, J = 9.20 Hz, 2H).
단계 2. (S)-12-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-산의 제조:
MeOH (50.0 mL) 및 물 (10.0 mL) 중 (S)-메틸 12-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-오에이트 (1-3) (4.7 g, 14.2 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.85 g, 21.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 1.5 N HCl을 반응 혼합물에 첨가하고, 이것을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-12-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-산 (C1)을 고체로서 수득하였다.
C13H21N3O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 316.33, 실측치 316.4.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.22 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 4.41 (t, J = 4.80 Hz, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.52-3.54 (m, 8H), 3.26 (s, 3H), 3.16 (q, J = 4.80 Hz, 1H), 2.98 (q, J = 8.40 Hz, 1H).
실시예 2
화합물 2 (C2)의 제조: (S)-12-(3-구아니디노프로필)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-산
Figure pct00027
단계 1. (S)-에틸 12-(3-구아니디노프로필)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-오에이트의 제조:
디클로로메탄 (25 ml) 중 (S)-에틸 2-아미노-5-구아니디노펜타노에이트 (2-1) (5g, 24.72 mmol) 및 트리에틸아민 (10.34 ml, 74.2 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (25 ml) 중 2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)아세틸 클로라이드 (2-2) (4.86 g, 24.72 mmol) (산으로부터 새로 제조됨)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이를 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-에틸 12-(3-구아니디노프로필)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-오에이트 (2-3)를 액체로서 수득하였다.
C15H30N4O6 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 363.42, 실측치 363.2.
1H NMR 400 MHz, DMSO-d6: δ 8.01 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 4.26 (t, J = 8.00 Hz, 1H), 4.14 (q, J = 1.20 Hz, 2H), 4.09-4.10 (m, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.53-3.54 (m, 8H), 3.43 (s, 3H), 1.87-1.84 (m, 2H), 1.46-1.48 (m, 2H), 1.19 (t, J = 9.60 Hz, 3H).
단계 2. (S)-12-(3-구아니디노프로필)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-산의 제조:
메탄올 (50 ml) 및 물 (10 ml) 중 (S)-에틸 12-(3-구아니디노프로필)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-오에이트 (2-3) (4g, 11.04 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.662 g, 16.56 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5N HCl로 중화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-12-(3-구아니디노프로필)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-산 (C2)을 고체로서 수득하였다.
C13H26N4O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 335.19, 실측치 335.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 4.14-4.16 (m, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.60-3.61 (m, 6H), 3.53-3.53 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.11 (t, J = 6.36 Hz, 2H), 1.79-1.81 (m, 1H), 1.66-1.68 (m, 1H), 1.51-1.52 (m, 2H).
실시예 3
화합물 3 (C3)의 제조: (S)-5-구아니디노-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)펜탄산
Figure pct00028
반응식에 사용된 다양한 출발 물질 및 시약은 상업적으로 입수가능하거나 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 제조된다. 화합물 3-2는 문헌 [Seifert et al. J. Med. Chem. 2014, 57, 9870-9888]에 개시된 문헌 프로토콜에 따라 합성하였다.
단계 2. (S)-에틸 5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜타노에이트의 제조:
MeOH (300.0 mL) 중 용액 (S)-에틸 2-아미노-5-구아니디노펜타노에이트 (3-3) (30.0 g, 148 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시) 아세트알데히드 (3-2) (26.2 g, 222 mmol) 및 아세트산 (1.69 ml, 29.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (13.8 g, 222 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-에틸 5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜타노에이트 (3-4)를 수득하였다.
C13H28N4O4 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 305.3, 실측치 305.2.
단계 3. (S)-에틸 5-구아니디노-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)펜타노에이트의 제조:
DMF (100 ml) 중 HATU (25.5 g, 67.1 mmol), 트리에틸아민 (12.47 ml, 89 mmol), (S)-에틸 5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜타노에이트 (3-4) (17.70 g, 58.2 mmol)를 DMF(30ml) 중 2-(2-메톡시에톡시)아세트산 (3-5) (6g, 44.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 디클로로메탄 (5 X 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-에틸 5-구아니디노-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)펜타노에이트 (3-6)를 고체로서 수득하였다.
C18H36N4O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 421.5, 실측치 421.2.
단계 4. (S)-5-구아니디노-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)펜탄산의 제조:
MeOH (40.0 mL) 및 물 (8.0 mL) 중 (S)-에틸 5-구아니디노-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)펜타노에이트 (3-6) (4g, 9.07 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.571 g, 14.27 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5N HCl로 중화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 10% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-5-구아니디노-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)펜탄산 (C3)을 고체로서 수득하였다.
C16H32N4O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 393.44, 실측치 393.4.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 4.33-4.31 (m, 1H), 4.24 (s, 2H), 3.58-3.62 (m, 12H), 3.23 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.09-3.11 (m, 2H), 1.89-1.92 (m, 1H), 1.64-1.67 (m, 1H), 1.47-1.48 (m, 2H).
실시예 4
화합물 4 (C4)의 제조: (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로판산
Figure pct00029
단계 1. (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트의 제조:
메탄올 (150 ml) 중 용액 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (4-1) (15 g, 89 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (4-2) (15.6 g, 133 mmol) 및 아세트산 (1.01 ml, 17.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (8.36 g, 133 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트 (4-3)를 수득하였다.
C12H21N3O4 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 272.3, 실측치 272.2.
단계 2. (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로파노에이트의 제조:
디클로로메탄 (40ml) 중 2-(2-메톡시에톡시)아세트산 (4-4) (4.2g, 31.3 mmol)의 용액에, 디클로로메탄 (60 mL) 중 HATU (17.86 g, 47.0 mmol), 트리에틸아민 (8.80 ml, 62.6 mmol) 및 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트 (4-3) (8.5 g, 31.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 디클로로메탄 (5 X 100 mL)으로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로파노에이트 (4-4)를 고체로서 수득하였다.
C17H29N3O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 388.42, 실측치 388.2.
단계 4. (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로판산의 제조:
MeOH (70.0 mL) 및 물 (15.0 mL) 중 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로파노에이트 (4-5) (7.1 g, 15.21 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (1.08 g, 27.1 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5 N HCl로 중화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 10% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로판산 (C4)을 고체로서 수득하였다.
C16H27N3O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 374.44, 실측치 374.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.49 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 4.35-4.36 (m, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.48-3.50 (m, 12H), 3.29-3.27 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 3.25 (s, 3H).
실시예 5
화합물 5 (C5)의 제조: (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산
Figure pct00030
단계 2. (S)-에틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트의 제조:
MeOH (100.0 mL) 중 용액 (S)-에틸 2-아미노-5-구아니디노펜타노에이트 (5-3) (10.0 g, 49.5 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (5-2) (23.3 g, 198 mmol) 및 아세트산 (0.565 ml, 9.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (4.66 g, 74.2 mmol)를 조금씩 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 디클로로메탄 (5 X 100 mL)으로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-에틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트 (5-4)를 수득하였다.
C18H38N4O6 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 406.28, 실측치 407.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 7.42 (bs, 1H), 7.25 (bs, 1H), 6.85 (bs, 2H), 4.12-4.05 (m, 2H), 3.49-3.47 (m, 4H), 3.43-3.40 (m, 8H), 3.38-3.36 (m, 1H), 3.24 (s, 6H), 3.11-3.09 (m, 2H), 2.80-2.66 (m, 4H), 1.63-1.60 (m, 2H), 1.50-1.43 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 3. (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산의 제조:
MeOH (60.0 mL) 및 물 (10.0 mL) 중 (S)-에틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트 (5-4) (5.4 g, 13.3 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.797 g, 19.9mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 1.5 N HCl을 반응 혼합물에 첨가하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 10% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산 (C5)을 고체로서 수득하였다.
C16H34N4O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 379.4, 실측치 379.0.
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 3.86-3.66 (m, 4H), 3.86-3.76 (m, 1H), 3.62-3.60 (m, 4H), 3.57-3.55 (m, 4H), 3.47-3.39 (m, 4H), 3.29 (s, 6H), 3.17 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.86-1.80 (m, 2H), 1.74-1.62 (m, 2H).
실시예 6
화합물 6 (C6)의 제조: (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산
Figure pct00031
단계 2. (S)-메틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트의 제조:
MeOH (100.0 mL) 중 용액 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (6-3) (10g, 59.1 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (6-2) (27.9 g, 236 mmol) 및 아세트산 (0.67 ml, 11.82 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (5.57 g, 89 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 디클로로메탄 (5 X 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (6-4)를 고체로서 수득하였다.
C17H31N3O6 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 374.44, 실측치 374.2.
단계 3. (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산의 제조:
MeOH (65.0 mL) 및 물 (12.0 mL) 중 (S)-메틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (6-4) (6.5g, 17.30 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (1.03 g, 25.95 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5 N HCl로 중화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 10% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산 (C6)을 고체로서 수득하였다.
C16H29N3O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 360.41, 실측치 360.2.
1H NMR (400 MHz, D2O): 400 MHz, D2O: δ 8.22 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.90 (t, J = 7.20 Hz, 1H), 3.60-3.62 (m, 4H), 3.55-3.56 (m, 4H), 3.50-3.50 (m, 4H), 3.28 (s, 6H), 3.19-3.19 (m, 4H), 3.06-3.07 (m, 2H).
실시예 7
화합물 7 (C7)의 제조: (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로판산 히드로클로라이드
Figure pct00032
단계 2. (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트의 제조:
메탄올 (150 ml) 중 용액 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (7-3)(15 g, 89 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (7-2) (15.6 g, 133 mmol) 및 아세트산 (1.01 ml, 17.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (8.36 g, 133 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트 (7-4)를 수득하였다.
C12H21N3O4 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 272.3, 실측치 272.2.
단계 3. (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로파노에이트의 제조:
디클로로메탄 (40ml) 중 2-(2-메톡시에톡시)아세트산 (7-5) (4.2g, 31.3 mmol)의 용액에, 디클로로메탄 (60ml) 중 HATU (17.86 g, 47.0 mmol), 트리에틸아민 (8.80 ml, 62.6 mmol) 및 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트 (7-4) (8.5 g, 31.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 디클로로메탄 (5 X 100 mL)으로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 5% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로파노에이트 (7-6)를 고체로서 수득하였다.
C17H29N3O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 388.42, 실측치 388.2.
단계 4. (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로판산 히드로클로라이드의 제조:
MeOH (70.0 mL) 및 물 (15.0 mL) 중 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로파노에이트(7-6) (7.1 g, 18.34 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (1.1 g, 27.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5 N HCl을 사용하여 pH 2-3으로 산성화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 역상 크로마토그래피에 의해 물 중 0.1% HCl로 용리시키면서 정제하여 (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-(2-(2-메톡시에톡시)-N-(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아세트아미도)프로판산 히드로클로라이드 (C7)를 고체로서 수득하였다.
C16H27N3O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 374.44, 실측치 374.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.52 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.32 (s, 2H), 4.28-4.29 (m, 1H), 3.54-3.54 (m, 12H), 3.43-3.43 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.25 (s, 3H).
실시예 8
화합물 8 (C8)의 제조: (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산 디히드로클로라이드
Figure pct00033
단계 2. (S)-에틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트의 제조:
MeOH (100.0 mL) 중 용액 (S)-에틸 2-아미노-5-구아니디노펜타노에이트 (8-3) (10.0 g, 49.5 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (8-2) (23.3 g, 198 mmol) 및 아세트산 (0.565 ml, 9.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (4.66 g, 74.2 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 디클로로메탄 (5 X 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-에틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트 (8-4)를 수득하였다.
C18H38N4O6 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 407.28, 실측치 407.4.
1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 7.42 (bs, 1H), 7.25 (bs, 1H), 6.85 (bs, 2H), 4.12-4.05 (m, 2H), 3.49-3.47 (m, 4H), 3.43-3.40 (m, 8H), 3.38-3.36 (m, 1H), 3.24 (s, 6H), 3.11-3.09 (m, 2H), 2.80-2.66 (m, 4H), 1.63-1.60 (m, 2H), 1.50-1.43 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 3. (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산 디히드로클로라이드의 제조:
MeOH (60.0 mL) 및 물 (10.0 mL) 중 (S)-에틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트 (8-4) (5.4 g, 13.3 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.797 g, 19.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 1.5 N HCl을 반응 혼합물에 첨가하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 반응 혼합물을 1.5 N HCl을 사용하여 pH 2-3으로 산성화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 역상 크로마토그래피에 의해 물 중 0.1% HCl로 용리시키면서 정제하여 (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산 디히드로클로라이드 (C8)를 고체로서 수득하였다.
C16H34N4O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 379.25, 실측치 379.0.
1H NMR (400 MHz, D2O): δ 3.86-3.66 (m, 4H), 3.86-3.76 (m, 1H), 3.62-3.60 (m, 4H), 3.57-3.55 (m, 4H), 3.47-3.39 (m, 4H), 3.29 (s, 6H), 3.17 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.86-1.80 (m, 2H), 1.74-1.62 (m, 2H).
실시예 9
화합물 9 (C9)의 제조: (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산 디히드로클로라이드
Figure pct00034
단계 2. (S)-메틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트의 제조:
MeOH (100.0 mL) 중 용액 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (9-3) (10 g, 59.1 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (9-2) (27.9 g, 236 mmol) 및 아세트산 (0.67 ml, 11.82 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (5.57 g, 89 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성물을 디클로로메탄 (5 X 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (9-4)를 고체로서 수득하였다.
C17H31N3O6 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 374.44, 실측치 374.2.
단계 3. (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산 디히드로클로라이드의 제조:
MeOH (65.0 mL) 및 물 (12.0 mL) 중 (S)-메틸 2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (9-4) (6.5g, 17.30 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (1.03 g, 25.95mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5 N HCl을 사용하여 pH 2-3으로 산성화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 역상 크로마토그래피에 의해 물 중 0.1% HCl로 용리시키면서 정제하여 (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산 디히드로클로라이드 (C9)를 고체로서 수득하였다.
C16H29N3O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 360.41, 실측치 360.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.58 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 4.43 (t, J = 4.60 Hz, 1H), 3.79-3.80 (m, 4H), 3.58-3.59 (m, 6H), 3.47-3.48 (m, 6H), 3.39-3.40 (m, 2H), 3.26 (s, 6H).
실시예 10
화합물 10 (C10)의 제조: (S)-6-아미노-2-(2-(2-메톡시에톡시)아세트아미도)헥산산
Figure pct00035
화합물 10-2를 문헌 [Journal of the American Chemical Society,　2015,　vol.　137,　6975 - 6978]에 제시된 프로토콜에 따라 합성하였다.
단계 2. (S)-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-(2-(2-메톡시에톡시)아세트아미도)헥산산의 제조:
디클로로메탄 (50 ml) 중 (S)-2-아미노-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산 (10-2) (9.18 g, 37.3 mmol) 및 트리에틸아민 (11.3 g, 111 mmol)의 용액에, 디클로로메탄 (50 ml) 중 2-(2-메톡시에톡시)아세틸 클로라이드 (10-3) (5.66 g, 37.3 mmol (산으로부터 새로 제조됨)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 15% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-(2-(2-메톡시에톡시)아세트아미도)헥산산 (10-4)을 액체로서 수득하였다.
C16H30N2O7 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 363.41, 실측치 363.2.
단계 3. (S)-6-아미노-2-(2-(2-메톡시에톡시)아세트아미도)헥산산의 제조:
디클로로메탄 (20.0 mL) 중 (S)-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-(2-(2-메톡시에톡시)아세트아미도)헥산산 (10-4) (4g, 11.04 mmol)의 교반 용액에 TFA (8.50 ml, 110mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5 N HCl로 중화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 10% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-6-아미노-2-(2-(2-메톡시에톡시)아세트아미도)헥산산 (C10)을 고체로서 수득하였다.
C11H22N2O5[M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 263.3, 실측치 263.4.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 4.14 (t, J = 5.20 Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.65-3.66 (m, 2H), 3.56-3.57 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 2.89 (t, J = 7.60 Hz, 2H), 1.78-1.78 (m, 1H), 1.64-1.66 (m, 3H), 1.55-1.55 (m, 2H).
실시예 11
화합물 11 (C11)의 제조: (S)-6-아미노-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)헥산산
Figure pct00036
단계 2. (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산의 제조:
MeOH (60.0 mL) 중 (S)-2-아미노-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산 (11-2) (6 g, 24.36 mmol)의 용액에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (11-3) (11.51 g, 97 mmol) 및 아세트산 (0.27 ml, 4.87 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 소듐 시아노보로히드라이드 (4.59 g, 73.1 mmol)를 조금씩 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산 (11-4)을 수득하였다.
C21H42N2O8 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 451.56, 실측치 451.2
단계 3. (S)-6-아미노-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)헥산산의 제조:
디클로로메탄 (15.0 mL) 중 (S)-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)-6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산 (11-4) (3g, 6.6 mmol)의 교반 용액에 TFA (5.06 ml, 66.6mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨으로 중화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 10% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-6-아미노-2-(비스(2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)헥산산 (C11)을 고체로서 수득하였다.
C16H34N2O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 351.45, 실측치 351.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 3.52-3.53 (m, 13H), 3.28 (s, 6H), 3.26-3.28 (m, 4H), 2.91 (t, J = 7.60 Hz, 2H), 1.74-1.76 (m, 2H), 1.58-1.60 (m, 2H), 1.43-1.44 (m, 2H).
실시예 12
화합물 12 (C12)의 제조: (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로판산
Figure pct00037
단계 2. (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트의 제조:
메탄올 (150 ml) 중 용액 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (12-3) (10 g, 59 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (12-2) (10.47 g, 88.7 mmol) 및 아세트산 (1.01 ml, 17.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (5.49 g, 88.7 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트 (12-4)를 수득하였다.
C12H21N3O4 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 272.3, 실측치 272.2.
단계 3. (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로판산의 제조:
MeOH (50.0 mL) 및 물 (10.0 mL) 중 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트 (12-4) (5g, 18.4 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (1.1 g, 27.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로판산 (C12)을 고체로서 수득하였다.
C11H19N3O4 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 258.28, 실측치 258.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 7.54 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 3.49-3.50 (m, 6H), 3.26 (s, 3H), 3.24 (t, J = 7.20 Hz, 1H), 2.76-2.76 (m, 2H), 2.66-2.67 (m, 1H), 2.50-2.52 (m, 1H).
실시예 13
화합물 13 (C13)의 제조: (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-히스티딘
Figure pct00038
단계 1. 메틸 (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-히스티디네이트의 제조:
디클로로메탄 (25 ml) 중 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (13-1) (5g, 29.6 mmol) 및 트리에틸 아민 (8.97, 89mmol)의 용액에 디클로로메탄 (25 ml) 중 2-(2-메톡시에톡시)아세틸 클로라이드 (13-2) (4.49g, 29.6mmol) (산으로부터 새로 제조됨)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이를 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 메틸 (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-히스티디네이트 (13-3)를 액체로서 수득하였다.
C12H19N3O5 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 286.30, 실측치 286.2.
단계 2. (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-히스티딘의 제조:
MeOH (47.0 mL) 및 물 (5.0 mL) 중 메틸 (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-히스티디네이트 (13-3) (4.7 g, 16.4 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (0.98 g, 24.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 1.5 N HCl을 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이를 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-히스티딘 (C13)을 고체로서 수득하였다.
C11H17N3O5 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 272.27, 실측치 272.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.22 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 4.41 (q, J = 4.96 Hz, 1H), 3.93 (d, J = 3.00 Hz, 2H), 3.55-3.57 (m, 4H), 3.25 (s, 3H), 3.13-3.16 (m, 1H), 2.99-3.00 (m, 1H).
실시예 14
화합물 14 (C14)의 제조: (S)-5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜탄산
Figure pct00039
단계 2. (S)-에틸 5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜타노에이트의 제조:
MeOH (300.0 mL) 중 용액 (S)-에틸 2-아미노-5-구아니디노펜타노에이트 (14-3) (30.0 g, 148 mmol)에 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드 (14-2) (26.2 g, 222 mmol) 및 아세트산 (1.69 ml, 29.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (13.8 g, 222 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이를 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 (S)-에틸 5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜타노에이트 (14-4)를 수득하였다.
C13H28N4O4 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 305.3, 실측치 305.2.
단계 3. (S)-5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜탄산의 제조:
MeOH (50.0 mL) 및 물 (5.0 mL) 중 메틸 (S)-에틸 5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜타노에이트 (14-4) (5 g, 16.4 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (0.98 g, 24.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 1.5 N HCl을 반응 혼합물에 첨가하고, 이것을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-5-구아니디노-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)펜탄산 (C14)을 고체로서 수득하였다.
C11H24N4O4 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 277.34, 실측치 277.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 3.55-3.56 (m, 6H), 3.28 (s, 3H), 3.15-3.17 (m, 1H), 3.10 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 2.81-2.82 (m, 1H), 2.68-2.70 (m, 1H), 1.50-1.52 (m, 4H).
실시예 15
화합물 15 (C15)의 제조: (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-아르기닌 디히드로클로라이드
단계 1. 에틸 (2-(2-메톡시에톡시)에틸)-L-아르기니네이트의 제조:
Figure pct00040
디클로로메탄 (25 ml) 및 트리에틸아민 (10.34 ml, 74.2 mmol) 중 (S)-에틸 2-아미노-5-구아니디노펜타노에이트 (15-1) (5g, 24.72 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (25 ml) 중 2-(2-메톡시에톡시)아세틸 클로라이드 (15-2) (3.76 g, 24.72 mmol)(산으로부터 새로 제조됨)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 에틸 (2-(2-메톡시에톡시)에틸)-L-아르기니네이트 (15-3)를 액체로서 수득하였다.
C13H26N4O5 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 319.37, 실측치 319.2.
단계 2. (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-아르기닌 디히드로클로라이드의 제조:
MeOH (61.0 mL) 및 물 (6.0 mL) 중 메틸 에틸 (2-(2-메톡시에톡시)에틸)-L-아르기니네이트 (15-3) (6.1 g, 19.1 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (1.15 g, 28.7 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5 N HCl을 사용하여 pH(2-3)으로 산성화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 역상 크로마토그래피에 의해 물 중 0.1% HCl로 용리시키면서 정제하여 (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-아르기닌 디히드로클로라이드 (C15)를 수득하였다.
C11H22N4O5 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 291.32, 실측치 291.2.
1H NMR 400 MHz, DMSO-d6: δ 9.36 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.67 (s, 4H), 3.89 (t, J = 6.00 Hz, 1H), 3.85 (s, 2H), 3.58-3.59 (m, 2H), 3.44-3.47 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 3.02-3.04 (m, 2H), 1.64-1.65 (m, 2H), 1.56-1.57 (m, 2H).
실시예 16
화합물 16 (C16)의 제조: ((2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-히스티딘
Figure pct00041
단계 1. 메틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-히스티디네이트의 제조:
디클로로메탄 (25 ml) 중 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (16-1) (5g, 29.6 mmol) 및 트리에틸아민 (8.97, 89 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (25 ml) 중 2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일 클로라이드 (16-2) (5.81g, 29.6mmol) (산으로부터 새로 제조됨)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 메틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-히스티디네이트 (16-3)를 액체로서 수득하였다.
C16H27N3O7 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 374.18, 실측치 374.2.
단계 2. ((2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-히스티딘의 제조:
MeOH (50.0 mL) 및 물 (10.0 mL) 중 (S)-메틸 12-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-옥소-2,5,8-트리옥사-11-아자트리데칸-13-오에이트 (16-3) (4.7 g, 14.2 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.85 g, 21.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 1.5 N HCl을 반응 혼합물에 첨가하고, 이것을 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 ((2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-히스티딘 (C16)을 고체로서 수득하였다.
C15H25N3O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 317.33, 실측치 317.17.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.52 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 4.70-4.59 (m, 1H), 3.99-3.97 (m, 2H), 3.54-3.61 (m, 11H), 3.26-3.28 (m, 4H), 3.09-3.07 (m, 2H).
실시예 17
화합물 17 (C17)의 제조: (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-아르기닌
Figure pct00042
단계 1. 에틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-아르기니네이트의 제조:
디클로로메탄 (100 ml) 중 에틸 L-아르기니네이트 (17-1) (9g, 44.5 mmol) 및 트리에틸아민 (10.34 ml, 74.2 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (25 ml) 중 2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일 클로라이드 (17-2) (10.71 g, 44.5 mmol) (산으로부터 새로 제조됨)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 에틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-아르기니네이트 (17-3)를 액체로서 수득하였다.
C17H34N4O7 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 407.24, 실측치 407.2.
단계 2. (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-아르기닌의 제조:
메탄올 (50 ml) 및 물 (10 ml) 중 에틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-아르기니네이트 (17-3) (5 g, 11.19 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.74 g, 18.45 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 1.5N HCl로 중화시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-오일)-L-아르기닌 (C17)을 고체로서 수득하였다.
C15H30N4O7 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 379.21, 실측치 379.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 4.35-4.36 (m, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.58-3.69 (m, 10H), 3.52-3.53 (m, 2H), 3.29-0.00 (m, 3H), 3.14 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 1.86-1.87 (m, 1H), 1.69-1.70 (m, 1H), 1.54-1.56 (m, 2H).
실시예 18
화합물 18 (C18)의 제조: (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일)-L-히스티딘
Figure pct00043
단계 2. 메틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일)-L-히스티디네이트의 제조:
MeOH (50.0 mL) 중 용액 메틸 L-히스티디네이트 (18-1) (6.0 g, 53.2 mmol)에 2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-알 (18-2) (70.97 g, 53.2 mmol) 및 아세트산 (1.69 ml, 29.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (3.34 g, 53.2 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 메틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일)-L-히스티디네이트 (18-3)를 수득하였다.
C16H29N3O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 360.21, 실측치 360.2.
단계 3. (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일)-L-히스티딘의 제조:
MeOH (50.0 mL) 및 물 (5.0 mL) 중 메틸 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일)-L-히스티디네이트 (18-3) (4.5 g, 12.5 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (0.75 g, 18.78 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 1.5 N HCl을 반응 혼합물에 첨가하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일)-L-히스티딘 (C18)을 고체로서 수득하였다.
C15H27N3O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 346.19, 실측치 346.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 4.37 (t, J = 4.00 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.52-3.53 (m, 12H), 3.29 (s, 3H), 3.14 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 1.87-1.88 (m, 1H), 1.69-1.70 (m, 1H), 1.54-1.56 (m, 2H).
실시예 19
화합물 19 (C19)의 제조: (2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)에틸)-L-히스티딘
Figure pct00044
단계 2. 메틸 (2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)에틸)-L-히스티디네이트의 제조:
메탄올 (75 ml) 중 용액 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (19-1) (5 g, 29.6 mmol)에 2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)아세트알데히드 (19-2) (7.1 g, 44.3 mmol) 및 아세트산 (1.01 ml, 17.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 시아노보로히드라이드 (2.79 g, 44.3 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 이어서, 포화 중탄산나트륨을 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 7% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 메틸 (2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)에틸)-L-히스티디네이트 (19-3)를 수득하였다.
C14H25N3O5 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 316.18, 실측치 316.2.
단계 3. (2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)에틸)-L-히스티딘의 제조:
MeOH (50.0 mL) 및 물 (10.0 mL) 중 (S)-메틸 3-(1H-이미다졸-4-일)-2-((2-(2-메톡시에톡시)에틸)아미노)프로파노에이트 (19-3) (3 g, 9.51 mmol)의 교반 용액에 수산화나트륨 (0.57 g, 14.2 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 완료를 TLC에 의해 확인하였다. 조 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하고, 여과물을 다시 농축시켰다. 조 생성물을 먼저 실리카 겔 상 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 5% 암모니아로 용리시키면서 정제하고, 다시 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (2-(2-(2-메톡시에톡시)에톡시)에틸)-L-히스티딘 (C19)을 고체로서 수득하였다.
C13H23N3O5 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 302.16, 실측치 302.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.20 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 3.85 (t, J = 6.40 Hz, 1H), 3.70 (t, J = 4.80 Hz, 2H), 3.59-3.61 (m, 6H), 3.52-3.53 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.16-3.17 (m, 4H).
실시예 20
화합물 20 (C20)의 제조: (S)-2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산
Figure pct00045
단계 1. (S)-에틸 10-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)에틸)-11-(3-구아니디노프로필)-2,2,3,3-테트라메틸-4,7-디옥사-10-아자-3-실라도데칸-12-오에이트의 제조:
MeOH (100 ml) 중 (S)-에틸 2-아미노-5-구아니디노펜타노에이트 (20-1) (10 g, 49.6 mmol)의 교반 용액에 2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)아세트알데히드 (20-2) (43.2 g, 198 mmol) 및 아세트산 (1.0 ml)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 소듐 시아노보로히드라이드 (2.79 g, 44.3 mmol)를 동일한 온도에서 첨가하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. TLC 및 LCMS 분석은 목적 생성물의 형성을 나타내었다. 포화 중탄산나트륨 용액 (50 mL)을 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이어서 이를 농축시켰다. 수성 층을 DCM (5 x 100 mL)으로 역추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1 x150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 60-120 메쉬 상 칼럼 크로마토그래피에 의해 10% MeOH로 용리시키면서 정제하여 (S)-에틸 10-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)에틸)-11-(3-구아니디노프로필)-2,2,3,3-테트라메틸-4,7-디옥사-10-아자-3-실라도데칸-12-오에이트 (20-3)를 액체로서 수득하였다.
C28H62N4O6Si2 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 606.42, 실측치 606.1.
단계 2. (S)-에틸 2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트의 제조:
CH2Cl2 (20 mL) 중 (S)-에틸 10-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)에틸)-11-(3-구아니디노프로필)-2,2,3,3-테트라메틸-4,7-디옥사-10-아자-3-실라도데칸-12-오에이트 (20-3) (5.1g, 8.40 mmol)의 교반 용액에 디옥산 중 HCl (10.5 mL, 42.0 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 (S)-에틸 2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트를 고체로서 수득하였다.
단계 3. (S)-2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산의 제조:
MeOH (50 mL) 중 (S)-에틸 2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜타노에이트 (3.11 g, 8.22 mmol)의 교반 용액에, 물 (10 mL) 및 NaOH (0.493 g, 12.33 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. TLC 및 LCMS 분석은 목적 생성물의 형성을 나타내었다. 반응 혼합물을 농축시키고, 1.5 N HCl로 중화시키고, 농축시켰다. 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 실리카겔 상 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 3-5% 암모니아로 용리시키면서 정제하여 (S)-2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-5-구아니디노펜탄산 (C20)을 고체로서 수득하였다.
C14H30N4O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 351.22, 실측치 351.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 3.82-3.83 (m, 1H), 3.77-3.78 (m, 4H), 3.64-3.65 (m, 4H), 3.55-3.56 (m, 4H), 3.42-3.48 (m, 4H), 3.17 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 1.82-1.84 (m, 4H).
실시예 21
화합물 21 (C21)의 제조: (S)-2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산
Figure pct00046
단계 1. (S)-메틸 11-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-4,7-디옥사-10-아자-3-실라도데칸-12-오에이트의 제조:
MeOH (50 mL) 중 (S)-메틸 2-아미노-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (21-1) (5 g, 29.6 mmol)의 교반 용액에 2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)아세트알데히드 (21-2) (32.3 g, 148 mmol) 및 아세트산 (0.846 mL, 14.78 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 소듐 시아노보로히드라이드 (2.79 g, 44.3 mmol)를 동일한 온도에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. TLC 및 LCMS 분석은 목적 생성물의 형성을 나타내었다. 포화 중탄산나트륨 용액 (50 mL)을 반응 혼합물에 첨가하였으며, 이를 농축시켰다. 수성 층을 CH2Cl2 (5 x 100 mL)로 역추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1 x150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 60-120 메쉬 상 칼럼 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 10% MeOH로 용리시키면서 정제하여 (S)-메틸 11-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-4,7-디옥사-10-아자-3-실라도데칸-12-오에이트 (21-3)를 액체로서 수득하였다.
C28H57N3O6Si2 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 589.38, 실측치 589.2.
단계 2
CH2Cl2 (80 mL) 중 (S)-메틸 11-((1H-이미다졸-4-일)메틸)-10-(2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에톡시)에틸)-2,2,3,3-테트라메틸-4,7-디옥사-10-아자-3-실라도데칸-12-오에이트 3 (8g, 13.94 mmol)의 교반 용액에 디옥산 중 HCl (8.68 g, 69.7 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC 및 LCMS 분석은 목적 생성물의 형성을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 목적 화합물 (S)-메틸 2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 어떠한 정제도 없이 사용하였다.
단계 3
메탄올 (30 mL) 중 (S)-메틸 2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로파노에이트 (3.0 g, 8.69 mmol)의 교반 용액에 NaOH (0.521 g, 13.03 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. TLC 및 LCMS 분석은 목적 생성물의 형성을 나타내었다. 반응 혼합물을 농축시키고, 수층을 1.5 N HCl로 중화시키고, 농축시키고, 잔류물을 메탄올 중에 용해시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피에 의해 메탄올 중 3-5% 암모니아로 용리시키면서 정제하여 생성물을 수득하였으며, 이를 추가로 역상 크로마토그래피에 의해 물로 용리시키면서 정제하여 (S)-2-(비스(2-(2-히드록시에톡시)에틸)아미노)-3-(1H-이미다졸-4-일)프로판산 (C21)을 액체로서 수득하였다.
C14H25N3O6 [M + H]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 332.17, 실측치 332.2.
1H NMR 400 MHz, D2O: δ 8.21 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 3.96 (t, J = 7.12 Hz, 1H), 3.66-3.67 (m, 4H), 3.57-3.59 (m, 4H), 3.50-3.51 (m, 4H), 3.25-3.26 (m, 6H).
실시예 22
화합물 22 (C22)의 제조: [(2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-페닐알라닌
Figure pct00047
(S)-tert-부틸 2-아미노-3-(4-(tert-부톡시)페닐)프로파노에이트 히드로클로라이드 (22-1) (2.75 g, 10.67 mmol) 및 2-(2-메톡시에톡시)아세트산 (22-2) (1.717g, 12.0 mmol)을 50 mL CH2Cl2 중에 현탁시켰다. 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥시드 (T3P) 용액 (EtOAc 중 50%, 13.58 mL, 21.34 mmol)을 첨가하고, 이어서 DIEA (2.79mL, 16mmol)를 직후에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 TFA (8.16 mL, 107 mmol)로 처리하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 고진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 상에서 0-70% 헥산/EtOAc-EtOH(3:1)로 용리시키면서 크로마토그래피하여 (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-페닐알라닌 (C22)을 오일로서 수득하였다.
C14H19NO5 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 282.13, 실측치 282.18.
1H NMR 400 MHz, DMSO-d6: δ 12.71 (s, 1H), 7.76 (d, J = 8.21 Hz, 1H), 7.19-7.31 (m, 5H), 4.53 (m, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.47 (m, 4H), 3.25 (s, 1H), 3.12 (dd, J = 4.81 Hz, 14.10 Hz, 1H), 2.98 (dd, J = 9.19 Hz, 14.20 Hz, 1H)
실시예 23
화합물 23 (C23)의 제조: (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-티로신
Figure pct00048
(S)-tert-부틸 2-아미노-3-(4-(tert-부톡시)페닐)프로파노에이트 히드로클로라이드 (23-1) (3.48g, 10.55mmol) 및 2-(2-메톡시에톡시)아세트산 (23-2) (1.698g, 12.66mmol)을 50 mL CH2Cl2 중에 현탁시켰다. 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥시드 (T3P) 용액 (EtOAc 중 50%, 13.43mL, 21.10mmol)을 첨가하고, 이어서 DIEA (2.76 mL, 15.82mmol)를 직후에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 TFA (8.07 mL, 105mmol)로 처리하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 고진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 상에서 0-70% 헥산/EtOAc-EtOH(3:1)로 용리시키면서 크로마토그래피하여 (2-(2-메톡시에톡시)아세틸)-L-티로신 (C23)을 오일로서 수득하였다. 오일을 실온에서 1주 동안 정치 하에 천천히 고체화시켜 반고체를 수득하였다.
C14H19NO6 [M + 1]+에 대한 LC-MS ESI/APCI 계산치 298.12, 실측치 298.19.
1H NMR 400 MHz, DMSO-d6: δ 12.74 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 7.65 (d, J = 9.37 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.45 Hz, 2H), 6.66 (d, J = 8.62 Hz, 2H), 4.44 (m, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.41-3.56 (m, 4H), 3.26 (s, 1H), 2.99 (dd, J = 5.15 Hz, 14.00 Hz, 1H), 2.86 (dd, J = 8.58 Hz, 13.91 Hz, 1H)
실시예 24
PEG화 부형제를 포함하는 제약 조성물의 점도
펨브롤리주맙 제제는 하기를 포함하였다: 10 mM 히스티딘 완충제, 200 mg/mL 농도의 펨브롤리주맙, 및 200 mM 농도의 시험 부형제 (본 발명의 PEG화 부형제, 본원에 기재된 바와 같음), pH는 pH 5.5로 조정됨. 부형제가 없는 펨브롤리주맙 제제는 pH 5.5의 10 mM 히스티딘 완충제 중 200 mg/mL 펨브롤리주맙으로 이루어졌다. 펨브롤리주맙 제제에서 사용되는 10 mM 히스티딘 완충제는 pH가 5.5로 조정된, 멸균수 중 10 mM L-히스티딘으로 이루어졌다.
항체 B 제제는 하기를 포함하였다: 10 mM 히스티딘 완충제, 177 mg/mL 농도의 항체 B 및 200 mM 농도의 시험 부형제 (본 발명의 PEG화 부형제, 본원에 기재된 바와 같음), pH는 pH 6.0으로 조정됨. 부형제가 없는 항체 B 제제는 pH 6.0의 10 mM 히스티딘 완충제 중 177 mg/mL 항체 B로 이루어졌다. 항체 B에서 사용되는 10 mM 히스티딘 완충제는 pH가 6.0으로 조정된, 멸균수 중 10 mM L-히스티딘으로 이루어졌다.
점도 측정: 모든 점도 측정을 mVROC (비스코미터/레오미터-온-어-칩, 레오센스, 인크., 캘리포니아주 샌 라몬)를 사용하여 수행하였다. 시험 제제를 250 μl 해밀턴 기밀 시린지 내에 넣고, 이어서 이를 mVROC의 시린지 재킷 내부에 넣었다. 점도 측정을 위해 기기로 제제를 칩 내에 적절한 유량으로 주사하였다. 대부분의 측정을 이중으로 수행하였다.
시험 제제의 점도는 하기 표 4에 제공된다. 결과는 시험된 PEG화 부형제 (즉, 화학식 I의 화합물)가 본 발명의 부형제가 없는 동일한 제제 대비 고농도 모노클로날 항체 제제의 점도를 감소시킬 수 있다는 것을 나타낸다. 또한, 10 mM 히스티딘 완충제, 200 mg/mL 펨브롤리주맙, 및 0.2 M 화학식 I의 화합물을 포함하는 모든 시험 제제는 10 mM 히스티딘 완충제, 200 mg/mL 펨브롤리주맙, 0.2 M 아르기닌 또는 히스티딘을 포함하는 시험 제제보다 더 낮은 점도를 가졌으며, 이는 본 발명의 화합물이 전형적으로 산업에서 사용되는 화합물 대비 우월한 점도-저하 능력을 제공한다는 것을 입증한다. 유사하게, 10 mM 히스티딘 완충제, 177 mg/mL 항체 B, 및 0.2 M 화학식 I의 화합물을 포함하는 시험 제제는 화학식 I의 화합물이 없는 동일한 제제보다 더 낮은 점도를 가졌다.
표 4. 시험 제제의 점도
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
SEQUENCE LISTING <110> Merck Sharp & Dohme Corp. Chu, Lin Toussaint, Nathalie Xiao, Dong Vachal, Petr Kashi, Ramesh S. Bak, Annette <120> COMPOUNDS FOR REDUCING THE VISCOSITY OF BIOLOGICAL FORMULATIONS <130> 24494-WO-PCT <150> 62/554,134 <151> 2017-09-05 <160> 34 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Pembrolizumab-Light chain CDR1 <400> 1 Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pembrolizumab-Light chain CDR2 <400> 2 Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pembrolizumab-Light chain CDR3 <400> 3 Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 4 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pembrolizumab-Light chain variable region <400> 4 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 5 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pembrolizumab-Light chain <400> 5 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pembrolizumab-Heavy chain CDR1 <400> 6 Asn Tyr Tyr Met Tyr 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Pembrolizumab-Heavy chain CDR2 <400> 7 Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asn <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Pembrolizumab-Heavy chain CDR3 <400> 8 Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 9 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Pembrolizumab-Heavy chain variable region <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Pembrolizumab-Heavy chain <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr 1 5 <210> 14 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Asn Ser Gly Met His 1 5 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 18 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Asn Asp Asp Tyr 1 <210> 19 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 20 <211> 440 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser 115 120 125 Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys 180 185 190 Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205 Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala 210 215 220 Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 225 230 235 240 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 245 250 255 Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 260 265 270 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 275 280 285 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 290 295 300 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 305 310 315 320 Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 325 330 335 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr 340 345 350 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 355 360 365 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 370 375 380 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 385 390 395 400 Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe 405 410 415 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 420 425 430 Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> hPD-1.08A Light Chain CDR1 <400> 21 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> hPD-1.08A Light Chain CDR2 <400> 22 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> hPD-1.08A Light Chain CDR3 <400> 23 Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 24 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> hPD-1.08A Heavy Chain CDR1 <400> 24 Ser Tyr Tyr Leu Tyr 1 5 <210> 25 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> hPD-1.08A Heavy Chain CDR2 <400> 25 Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> hPD-1.08A Heavy Chain CDR3 <400> 26 Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 27 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> h109A heavy chain variable region <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 28 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> K09A light chain variable region <400> 28 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 29 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> K09A light chain variable region <400> 29 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 30 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> K09A light chain variable region <400> 30 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 31 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> mature 409 heavy chain <400> 31 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 32 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> mature K09A light chain <400> 32 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 33 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> mature K09A light chain <400> 33 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 34 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> mature K09A light chain <400> 34 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro 35 40 45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 85 90 95 Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (32)

  1. 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00054

    여기서
    X는
    Figure pct00055
    이고;
    R1은 H 또는 메틸이고;
    R2는 H 또는
    Figure pct00056
    이고;
    R3A 및 R3B는 각각 H이거나, 또는 함께 옥소를 형성하고;
    R4A 및 R4B는 각각 H이거나, 또는 함께 옥소를 형성하고;
    R5는 H 또는 메틸이고;
    각 경우의 n은 독립적으로 1 내지 5이고;
    여기서
    Figure pct00057
    는 화합물의 나머지 부분에 대한 부착 지점을 나타낸다.
  2. 제1항에 있어서, R2가 H인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항에 있어서, R2가
    Figure pct00058
    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제3항에 있어서, R2가
    Figure pct00059
    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 메틸인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제5항에 있어서, R3A 및 R3B가 H인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. 제5항에 있어서, R3A 및 R3B가 함께 옥소를 형성하는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 각 경우의 n이 독립적으로 1 내지 3인 화합물.
  9. 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00060

    Figure pct00061
  10. 활성 생물학적 성분 (ABI) 및 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 ABI는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 치료 단백질인 제약 조성물.
  11. 제10항에 있어서, ABI가 항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 약 50-250 mg/mL의 농도로 존재하는 것인 제약 조성물.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.0에서의 히스티딘 완충제를 약 5 mM 내지 약 20 mM의 농도로 추가로 포함하는 제약 조성물.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.01 % 내지 약 0.04% w/v 비이온성 계면활성제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트 80인 제약 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 폴리소르베이트 80이 대략 0.02% w/v의 중량비로 존재하는 것인 제약 조성물.
  16. 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  17. 제15항에 있어서, 안정화제가 수크로스인 제약 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 수크로스가 약 6% 내지 약 8% w/v의 중량비로 존재하는 것인 제약 조성물.
  19. 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, ABI가 인간 프로그램화된 사멸 수용체 1 (PD-1)에 특이적으로 결합하는 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 제약 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2 및 서열식별번호:3를 포함하는 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 7 및 서열식별번호: 8을 포함하는 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 것인 제약 조성물.
  21. 제20항에 있어서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역, 및 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 것인 제약 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 항-PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 5에 제시된 바와 같은 아미노산의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 경쇄, 및 서열식별번호: 10에 제시된 바와 같은 아미노산의 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 중쇄를 포함하는 것인 제약 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 항-인간 PD-1 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 펨브롤리주맙인 제약 조성물.
  24. 제11항 및 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 100 - 250 mg/mL의 농도로 존재하고, 10 mM 히스티딘, 7% 수크로스 및 0.02% 폴리소르베이트 80을 포함하는 제약 조성물.
  25. 제10항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 수용액인 제약 조성물.
  26. 제10항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 ABI를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  27. 100 내지 200 mg/mL 펨브롤리주맙, 10 mM 히스티딘 완충제 및 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 수크로스 및 폴리소르베이트 80을 추가로 포함하는 제약 조성물.
  29. (a) 약 50 mg/mL 내지 약 250 mg/mL의 농도의 ABI를 포함하며 수용액인 제약 제제를 제공하는 것; 및
    (b) 용액에 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 첨가하는 것
    을 포함하며;
    여기서 화합물의 첨가 후 제약 제제의 점도가 ≤25 mPa-S인,
    제약 제제의 점도를 낮추는 방법.
  30. 질환 또는 병리학적 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 제10항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 병리학적 상태를 치료하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 제약 조성물이 정맥내 또는 피하 투여에 의해 투여되는 것인 방법.
  32. 수용액에서의 제약 조성물의 점도를 낮추기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도이며, 여기서 제약 조성물은 약 50-250 mg/mL의 농도로 존재하는 활성 생물학적 성분 (ABI)을 포함하는 것인 용도.
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