PT1802277E

PT1802277E - Composição lipossomal contendo um ingrediente activo para relaxar a musculatura lisa, produção desta composição e a sua aplicação terapêutica

Info

Publication number: PT1802277E
Application number: PT05802312T
Authority: PT
Inventors: Hermann Katinger; Karola Vorauer-Uhl; Andreas Wagner
Original assignee: Polymun Scient Immunbio Forsch
Priority date: 2004-10-18
Filing date: 2005-10-14
Publication date: 2010-04-01
Also published as: NZ554183A; DK1802277T3; CA2583332C; CN101043874A; EP1802277B1; JP2008516911A; SI1802277T1; EP1802277A1; KR20070069164A; US20090324698A1; CA2583332A1; ATE454884T1; KR101289917B1; PL1802277T3; JP5688199B2; EA011391B1; DE502005008880D1; AU2005296719B2; AU2005296719A1; EA200700892A1

Description

ΡΕ1802277 1

DESCRIÇÃO

COMPOSIÇÃO LIPOSSOMAL CONTENDO UM INGREDIENTE ACTIVO PARA RELAXAR A MUSCULATURA LISA, PRODUÇÃO DESTA COMPOSIÇÃO E A SUA APLICAÇÃO TERAPÊUTICA DOMÍNIO técnico A presente invenção diz respeito a composições farmacêuticas baseadas em substâncias activas em lipos-somas, de aplicação tópica, que aumentam a circulação de tecidos, particularmente na area genital, assim como a produção destas composições e a sua aplicação.

CONTEXTO DA INVENÇÃO

Os lipossomas são conhecidos como meio para a libertação controlada de substâncias activas farmacêuticas (ver, e.g. revisão por Ulrich, Biosci Rep. 2002; 22(2): 129-50), ou WO 96/14083 para "SOD" em lipossomas. Também é conhecida, entre as peritos da área, a formulação de anestésicos locais em lipossomas aplicados topicamente; por exemplo US-4937078 descreve lipossomas que contêm bloquea-dores de canais de sódio habituais, tais como Tetracaina, Lidocaina etc. Além disso são conhecidos compostos químicos, que promovem a circulação nos tecidos e se tornaram conecidos sobretudo através do seu emprego para a 2 ΡΕ1802277 regularização de distúrbios de erecçao e impotência (ver e.g. WO 94/28902 e EP 0967214 Al)

Assim descreve, por exemplo US 20040014761_A1 o tratamento de distúrbios da função sexual feminina através da aplicação tópica de um composto baseado num material veiculador e um inibidor da fosfodiesterase como substância activa. Concretamente está revelado para a substância activa tadalafil, como um possível material veiculador, uma mistura lipossomal de diferentes óleos vegetais, fosfolípidos de ovo e glicerina.

Por sua vez em W003/059320 Al está revelado uma composição à base de lidocaína e um anestésico local que pode ser utilizado para o tratamento de distúrbios anorrectais. Esta composição pode eventualmente conter também sildenafil.

BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Enquanto os preparados de substâncias activas com base em pirazolopirimidonas e pirazolopirimidinonas existem como fórmulas aplicáveis perorai ou intranasal, é objectivo da presente invenção, providenciar uma composição para aplicação tópica eficaz destas substâncias de preferência directamente na zona genital, particularmente uma formulação que permita uma dose no total mais baixa, mas contudo uma dose local suficientemente elevada desta substância activa, na zona dos orgãos sexuais femininos ou masculinos . 3 ΡΕ1802277

Este objectivo será atingido de acordo com a invenção através da preparação de um sistema lipossomal para administração tópica particularmente transdérmica e/ou transmucosal de substâncias activas, que causam um relaxamento da músculatura lisa, especialmente a dos vasos sanguíneos aferentes aos orgãos sexuais. Este efeito pode ser provocado, por exemplo através da indução de uma libertação de iões cálcio.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Numa primeira forma de realização a invenção diz respeito a uma formulção, em que a substância activa de preferência do grupo das prostaglandinas, adenilatoci-clases, cAMP, AMP, ATP, NO-sintetases, monóxido de azoto (NO), compostos-NO, nitrato, guanilato ciclases, cGMP, GMP, GTP e fosfodiesterases, especialmente sildenafil, tadalafil e vardenafil, se encontra encerrada em lipossoma e/ou ligada a lipossomas.

Através da formulação lipossomal, de acordo com a invenção consegue-se não só um depósito de substância activa temporário no tecido adjacente, do qual é continuamente libertada substância, mas também se consegue uma melhor biodisponibilidade e uma semi-vida mais longa em comparação com a aplicação sistémica.

Através do efeito relaxante nos músculos lisos, 4 ΡΕ1802277 consegue-se um reforço da circulação da tecido exterior tratado, por exemplo dos orgãos sexuais, e, por conseguinte um aumento da sensibilidade nas actividades sexuais.

Substâncias activas ou substâncias eficazes no sentido da presente invenção são sobretudo substâncias que intervêm no ciclo cAMP ou cGMP e provocam uma distribuição de iões Ca. A estas pertencem por exemplo substâncias como papaverina, fentolamina, que estimulam a via do cAMP; monóxido de azoto (NO), que exerce uma função de transmissão e activa a guanilato ciclase, que por sua vez forma cGMP; dadores de NO; nitroglicerina; minoxidil; L-arginina; Linsidomina (é produzida no corpo através da NO-sintetase através da conversão de arginina a citrulina); molsidomina; inibidores da fosfodiesterase como por exemplo sildenafil ou citrato de sildenafil, que intervem na via do cGMP, em que está implicado um receptor PDE5; prostaglandinas como por exemplo alprostadil (PGE-1), dinoprostona (PGE-2), que intervêm no ciclo cAMP.

Quando em seguida se mencionar sildenafil, também se quer dizer tadalafil, vardenafil assim como os seus sais ácidos, por exemplo citrato de sildenafil e vardenafil-HCl 3H2O)(tri-hidrato de cloridrato de vardenafil), desde que não resulte outra coisa no contexto.

Para a produção e carregamento dos lipossomas com a substância activa,manifestou-se particularmente vantajoso o procedimento à escala revelado na WO 02/36257 para o 5 ΡΕ1802277 encapsulamento de substâncias activas, devido à sua elevada eficiência e ao mesmo tempo condições cuidadosas do procedimento. Com este procedimento são tipicamente produzidos lipossomas unilamelares com uma membrana lipidica dupla, cuja declarada boa capacidade de penetração na pele já foi reconhecida e provada em trabalhos anteriores. Também podem ser utilizados outro procedimentos conhecidos no estado da técnica para a produção e carregamento de lipossomas.

Através de carregamento activo de substâncias nos lipossomas é possível obter uma densidade máxima de carregamento. Este processo pode ser subdividido em duas categorias principais: carregamendo da membrana e carregamento da fase aquosa intralipossomal. Substância activas que contêm grupos protonáveis, por exemplo grupos amino, podem ser encerrados em lipossomas através de carregamento conduzido por gradiente -H+ e aí mantidos no estado protonado. Para este tipo de carregamento activo a característica principal é o coeficiente de distribuição entre a membrana do lipossoma e o meio do lipossoma. Descobriu-se que o coeficiente de distribuição entre octanol e tampão fornece uma boa indicação da difusão transmembranar de uma substância e por conseguinte, é relevante para o carregamento com subtância activa e respectivamente para o perfil de libertação.

Baseado neste modelo teórico, foram produzidos lipossomas com composições lipídicas diferentes com fosfo-lípidos de cadeia longa e baixas concentrações de glice- 6 ΡΕ1802277 rina, num tampão de carregamento apropriado, preferencialmente num tampão de sulfato de amónia ou acido cítrico/car-bonato de sódio. Após a produção dos lipossomas em tampão de sulfato de amonio ou citrato o meio envolvente é modificado ou seja trocado ou diluído, eventualmente neutralizado ou alcalinizado, e assim é criado um gradiente de H+ entre o tampão intralipossomal e o meio extrali-possomal. Após a adição de uma substância activa no meio extralipossomal, a substância activa migra migra, graças a este gradiente de H+ para dentro dos lipossomas, é aí protonado e mantem-se estável dentro dos lipossomas.

Pela utilização desta técnica a extensão do carregamento, ou a capacidade de carregamento, em primeira linha, determinada pela relação das concentrações de H+ dentro e fora dos lipossomas. Nas experências realizadas conseguiram atingir-se valores semlhantes aos conhecidos da literatura sobre lipossomas activamente carregados, com relações substância activa/lípido no intervalo de 200-400 nmol de substância activa por pmol de lípido. Um aumento da concentração de substância activa no meio de carregamento não conduziu a um aumento da capacidade de carregamento. O carregamento activo anteriormente descrito é um processo de três fases, que consiste em formação de vesículas, adição de substância activa e alcalinização. Era por isso um outro objectivo da invenção o estabelecimento de um procedimento de produção de uma só fase , que pudesse ser realizado com utilização do módulo de correntes cru- 7 ΡΕ1802277 zadas revelado na WO 02/36257. Para este fim a substância activa foi dissolvida numa fase aquosa rica em H+ ,por exemplo solução de sulfato de amónio ou uma solução de ácido cítrico, foi incluída em lipossomas através de uma técnica de injecção de correntes cruzadas, imediatamente a seguir, a fase aquosa externa (=extralipossomal) remanescente foi diluída com tampão de diluição (e.g. glucose 5% no caso de um sistema de sulfato de amónio ou ácido cítrico/carbonato de sódio pH 9,0-9,5 no caso do sistema citrato, respectivamente. Descobriu-se que a qualidade dos lipossomas activamente carregados pode ser melhorada especialmente no que diz respeito à capacidade de penetração na pele já somente através de variação, especialmente reduzindo o conteúdo em colesterol da membrana vesicular.

Se necessário ou desejado, a capacidade de carregamento pode ser aumentada, aumentando o tamanho médio dos lipossomas de cerca de 150-200 nm (como utilizado na maior parte das experiências aqui decritas) para 300 a 500 nm. Adicionalmente, ainda é possível aumentar a eficiência do procedimento ou seja a quantidade de substância activa inclusa nos lipossomas por ml de suspensão, através do aumento da concentração de lípido ou durante a produção ou durante a subsequente filtração das vesículas.

Se é usado sildenafil como substância activa, é preferível usar o sistema de solução sulfato de amónio/glu-cose para o carregamento activo porque sildenafil é pouco ou nada solúvel em tampão citrato. NH3, que se encontra em ΡΕ1802277 equilíbrio reversível com sulfato de amónio no meio intralipossomal, tende a migrar, através da membrana, para fora dos lipossomas e a deixar um H+ .Por sua vez, silde-nafil, migra para dentro do lipossoma, recebe o ião hidrogénio H+, tornando-se assim mais hidrofílico e permanece assim dentro da membrana, sildenafil pode deste modo, ser carregado eficientemente em lipossomas. Isto também se aplica, de modo semelhante, às alternativas do sildenafil, nomeadamente tadalafil e vardenafil.

Para averiguar a melhor formulação de lipossomas, no que diz respeito à flexibilidade da membrana e carac-terísticas de penetração da pele a ela associadas, foram preparadas e testadas diferentes suspensões de lipossomas com diferentes composições lipídicas. Para isso foram utilizados em primeira linha fosfolípidos, eventualmente em combinação com colesterol. No entanto também se encontra no âmbito da invenção, substituir ou complementar fosfolípidos com outros lípidos, por exemplo com glicolípidos, cerebró-sidos, sulfatidos ou galactósidos. Representantes típicos dos lípidos que a utilizar são, por exemplo, fosfatidileta-nolamina, fosfatidilcolina, fosfatidilcolina, fosfatidilse-rina, fosfatidilinositol, fosfatidilglicerol, cardiolipina, esfingomielina, plasmalogénio, gliceroglicolípidos, cerami-da, glicoesfingolípidos, glicoesfingolípidos neutros.

Uma possibilidade para melhorar a fluidez da membrana, que é importante para aplicações transdermais, consiste em reduzir a transição de fase da membrana de 9 ΡΕ1802277 dupla camada do lipossoma, que é principlalmente determinada pelo comprimento das cadeias acilo dos fosfolipidos, pela quantidade de colesterol e pelo grau de saturação dos fosfolipidos. Por esta razão, numa forma de realização do procedimento DPPC, um fosfolipido com um comprimento de cadeia acil de 16 átomos de carbono, foi substituído por DMPC (comprimento de cadeia de 14 átomos de carbono), o que diminui a temperatura de fusão de cerca de 45°C para 31°C.

Uma segunda possibilidade de diminuir a rigidez da membrana e aumentar a fluidez, consiste em reduzir a percentagem de colesterol. Partindo de uma relação molar de DPPC: colesterol de 55:45 %(como descrito na literatura para carregamento de lipossomas), a quantidade de colesterol foi reduzida gardualmente a 38 ou 30% respectiva-mente, relativamente ao conteúdo lipídico total. Foi observada uma ligeira redução de carregamento com a substância activa, em comparação com resultados com um teor mais elevado em colesterol. No entanto estes lipossomas mostraram características de penetração da pele melhoradas e permaneceram estáveis durante semanas sem perda significativa de substância activa.

Ao contrário de resultados de trabalhos anteriores também puderam ser produzidos com estabilidade lipossomas sem colesterol e carregados com sucesso com substância activa, de modo que, de acordo com a invenção, o teor de colesterol se encontra no intervalo de 0-50 Mol% em relação ao conteúdo lipídico total. 10 ΡΕ1802277

Uma terceira possibilidade de tornar as membranas lipossomais mais flexíveis consiste em substituir os lípidos saturados DPPC ou DMPC por fosfatidilcolina de ovo de galinha (E-PC), uma mistura lipídica natural com fosfo-lípidos insaturados. Para além de problemas de estabilidade por utilização destes lípidos naturais, também era necessário produzir os lipossomas sob atmosfera de azoto. Apesar disso estas vesículas nem produziram bons resultados no que diz respeito ao tamanho das vesículas e homogeneidade, nem melhoria nas características de penetração da pele.

Encontra-se ainda no âmbito da presente invenção utilizar também sistemas funcionalmente equivalentes para a formação de gradientes de H+ que são conhecidos dos peritos da matéria. "Funcionalmente equivalente", neste contexto significa a capacidade de formar gradientes H+ sobre a membrana lipídica de dupla camada de lipossomas, sem destruir a integridade da membrana, de modo que a substância activa inclusa, particularmente protonada, permaneça estável-no sentido dos critérios de estabilidade aqui revelados-nos lipossomas.

Para o emprego de uma composição lipossomal de sildenafil como terapêutico de aplicação tópica os lipossomas são preferivelmente misturados num hidrogel, que é mais facilmente aplicável na pele do que na forma de suspensão. Também se encontra no entanto no âmbito desta 11 ΡΕ1802277 invenção outras formas galénicas para produzir e aplicar topicamente lipossomas de sidenafil particularmente fórmulas na forma de soluções, loções, emulsões, tinturas, pulverizações, pomadas ou cremes. Outras possibilidades são conhecidas dos entendidos na matéria, assim como os aditivos farmacêuticos, necessários e autorizados para a produção das diferentes fórmulas galénicas.

Em experiências anteriores, deu bom resultado por exemplo Carbopol 981 NF (Fa. Noveon), um hidrogel que pode ser usado em muito baixas concentrações. Está autorizado para utilização farmacêutica, relativamente barato para adquirir e disponível em grandes quantidades.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Fig 1 mostra uma apresentação gráfica da quantidade inclusa de Sildenafil em lipossomas DPPC/colesterol em relação com o tamanho das vesículas.

Para melhor ilustração a invenção vai ser explicada em mais pormenor com base nos seguintes exemplos.

Exemplo 1: Produção de lipossomas de sildenafil

Os lipossomas são de preferência produzidos segundo o procedimento conhecido Crossflow (WO 02/36257) utilizando uma fase aquosa apropriada para a substância activa desejada, em que opcionalmente, pelo menos uma parte 12 ΡΕ1802277 da substância activa se apresenta nesta fase aquosa e é inclusa no interior dos lipossomas durante a formação destes. Através da diluição seguinte da suspensão de lipossomas por meio de um tampão de diluição neutro ou alcalino, que de preferência também contem substância activa, é criado um gradiente H+ entre a face interior e a face exterior dos lipossomas, que não só transporta rapida e eficientemente substância activa protonável adicional para os lipossomas, como também retem a substância activa já inclusa, durante a formação dos lipossomas.

Como alternativa pode também escolher-se um procedimento no qual num primeiro passo são produzidos lipossomas preenchidos com tampão sem substância activa e a substância activa é carregada nos lipossomas, activamente através de um gradiente de H+,subsequentemente à formação dos lipossomas, como anteriormente descrito. Este procedimento permite controlar a qualidade da suspensão dos lipossomas antes do carregamento com substância activa.

Ambas as técnicas são bem reprodutíveis e permitem a inclusão de qualquer substância em lipossomas. Para além disso, são realizáveis sob condições declarada-mente moderadas e permitem prescindir da utilização de soluções prejudiciais assim como da utilização de tensões de corte para a formação de vesículas.

Para elém disso é possível com este método de Cross-Flow, preparar todos os reagentes na forma estéril ou 13 ΡΕ1802277 sem germes e efectuar a produção e carregamento dos lipossomas em condições assépticas, de modo que resulte no final um produto estéril ou livre de germes na fora de lipossomas carregados de substância activa.

Produção de lipossomas (de acordo com WO 02/36257) em pormenor: A mistura lipídica é dissolvida em 96% de etanol e consoante a escolha de lipido ou composição lipidica a uma temperatura no intervalo de 25 a 60 °C, por exemplo no caso de lipossomas DPPC a uma temperatura de 50 a 55°C, sob agitação. As soluções tampão são de preferência temperadas à mesma temperatura, por exemplo 55°C. Enquanto a fase aquosa, polar (tampão) é bombeada através do módulo de correntes cruzadas por meio de uma bomba, por exemplo uma bomba peristáltica, a solução etanol/lipido é injectada, simultâneamente,na fase polar a uma pressão arbitrária pré-seleccionada.

Experiências preliminares mostraram que, para a formação do gradiente de H+ que permite o carregamento activo, diferentes sistemas tampão são apropriados dependendo das diferentes substâncias activas utilizadas. Por exemplo no caso da utilização de citrato de sildenafil como substância activa mostrou-se inconveniente um sistema tampão de ácido cítrico (intralipossomal) e um tampão equimolar, neutro ou ligeiramente básico, como p.ex ácido cítrico/carbonato de Na pH 7,5-8,0 (extralipossomal), ja 14 ΡΕ1802277 que o citrato de sildenafil é muito pouco ou nada solúvel em sistemas tampão deste tipo. Em contrapartida, citrato de sildenafil dissolve-se muito bem em água, razão pela qual é preferível, para o carregamento activo desta substância, gradientes de sulfato de amónio.

Com este método os lipossomas são por isso formados preferivelmente na presença de um tampão de sulfato de amónio (de preferência 125 mmol ). Após a formação das vesículas, a fase aquosa que ficou no exterior dos lipossomas, neste caso a solução de sulfato de amónio, é modificada, por exemplo diluída por meio de um tampão de diluição, ou substituída por solução de glucose 5% por meio de diafiltração, através da qual pequenas moléculas anfifílicas como sildenafil podem ser carregadas para dentro dos lipossomas e ai são protonadas, enquanto em direcção contrária NH3 sai dos lipossomas. a)variante de dois passos:

Carregamento externo de lipossomas com sildenafil por meio de um gradiente H+. As melhores taxas de inclusão foram atingidas sob as seguintes condições. Os lípidos (relação molar DPPC: colesterol=55:45; em conjunto 13 a 15 μΜ por ml de fase aquosa) são dissolvidas em etanol e esta solução é injectada em solução de sulfato de amónia 125 mM. Após a formação espontânea de vesículas a solução de sulfato de amónio exterior remanescente foi substituída por solução de glucose a 5% citrato de sildenafil é adicionado. 15 ΡΕ1802277

Deste modo forma-se um gradiente de H+ entre o interior e o exterior das vesículas lipídicas. Valores de pH inferiores a 2,5 são menos apropriados devido ao estabelecimento de problemas de hidrólise, do mesmo modo valores de pH acima de 5,5 também não são preferidos, devido aos gradientes de H+ cada vez mais fracos. Uma solução aquosa de sulfato de amónia 125 mM tem tipicamente um valor de pH no intervalo de cerca de 5-5,5.

Após a remoção do sildenafil não-incluso por meio de fitração gel, foram determinados os conteúdo de substância activa e de lípido por meio de rpHPLC. 0 tamanho e a distribuição dos lipossomas foram determinadas por meio de espectroscopia de correlação fotónica.

Dependendo do tamanho das vesículas, foi possível obter com este procedimento de carregamento activo, taxas de inclusão (apresentadas como relação de sildenafil/lí-pido) de 160 a 230 nmol de sildenafil por pmol de lípido total (=DPPC + colesterol). Isto corresponde a valores de 1000-1500pg de substância activa por ml de suspensão lipossomal.

Para atingir um aumento da quantidade de sildenafil inclusa nos lipossomas, foi aumentado o centeúdo de sildenafil na solução de glucose. Mostrou-se no entanto, que um excesso de substância activa não conseguiu melhorar a proporção substância activa/lípido. A quantidade efectiva carregada por carregamento externo activo através de um 16 ΡΕ1802277 gradiente de H+ ,parece por isso depender em primeira linha do gradiente e menos da concentração de substância activa preadicionada. b)variante de um passo

Os lipidos (DPPC:colesterol=55:45 Mol%) foram dissolvidos em etanol e a solução injectada numa solução de sildenafil/sulfato de amónio (pH 3,5-4,5), subsequentemente, imediatamente após a formação espontânea de vesículas que se seguiu, foi adicionada solução de glucose 5 % (pH 7), contendo citrato de sildenafil adicional, com a finalidade de diluir e alcalinizar a mistura reaccional ou seja a suspensão de lipossomas resultante. Através da formação deste gradiente de H+ ,imediatamente a seguir à formação das vesículas o Sildenafil é não só incluído nos lipossomas num só passo, mas também aí retido de forma estável. A quantidade de sildenafil incluído deste modo nos lipossomas era - dependendo do valor de pH ou gradiente de H+ respectivamente- igualmente num intervalo de cerca de 160 a 230 nmol de sildenafil por pmol de lípido total (DPPC + colesterina).

De modo análogo foram também carregadas em lipossomas as substâncias activas tadalafil e vardenafil.

Para efeitos de comparação foram produzidos sob condições de procedimento semelhantes prostaglandina EI incorporada em lipossomas. Para efeitos desta aplicação ver Exemplo 2. 17 ΡΕ1802277

Exemplo 2: Aplicação de substância activa incorporada em lipossomas A. Sildenafil, Tadalafil, Vardenafil em lipossomas

Como composição farmacêutica para a utilização em ensaios humanos foi escolhida uma formulação de 0,5 mg da correspondente substância (calculada como substância activa sem sais) em lipossomas por 1 ml de hidrogel carbopol 981 NF e utilizado por voluntários numa quantidade de 0,5 a 1,5 ml por aplicação, em que sildenafil e vardenafil foram utilizados na forma dos seus sais ácidos (citrato de sildenafil e tri-hidrato de cloridrato de vardenafil res-pectivamente) O gel foi usado por voluntários macho por aplicação no pénis, por voluntários fêmea através de aplicação vaginal ou clitoral.

Resultados: a)homens:

Passado pouco tempo ou seja dentro de poucos minutos após a aplicação do preparado, os voluntários sentiram uma sensação agradavelmente quente, e uma excitação sexual aumentada. Consequentemente fez-se sentir uma erecção mais rápida e mais forte e uma rigidez do pénis 18 ΡΕ1802277 mais persistente em comparação com os habituais efeitos sem aplicação do preparado. Neste caso efeitos semelhantes foram atingidos com os três preparados de substâncias activas. b)mulheres:

Imediatamente após a aplicação vaginal/clitoral do gel lipossomal da substância activa, estabelece-se o efeito que causa uma aumento da circulação,através do qual resulta uma sensação de aquecimento e como consequência foi observada uma maior produção de secreção vaginal. Além disso as voluntárias referem ligeiras contrações da musculatura vaginal (como no orgasmo), uma sensação aumentada na relação sexual e uma sensação mais forte de orgasmo.

Através da aplicação do preparado lipossomal de substância activa não só se consegue uma estimulação sexual e um aumento da sensação de prazer, como também uma estimulação acelerada e assim se consegue atingir o orgasmo mais rapidamente.

Duração do efeito após aplicação única: o efeito estabelece-se imediatamente após a aplicação do preparado, pela qual as sensações anteriormente descritas persistem até 3,5 horas. Todos os três preparados exibem um nítido efeito ; não foi relatado pelas voluntárias uma diferenção substancial perceptível entre os três preparados diferentes de substâncias activas. 19 ΡΕ1802277

Ao contrário dos resultados do estudo Pfizer em mulheres (ver New York Times, 28 de Fevereiro 2004, "Pfizer Gives Up Testing Viagra on women") os preparados lipossomais de substância activa relacionados com a invenção, por aplicação externa, parecem ser claramente eficazes em todo o caso, também em mulheres. Podem por isso ser empregados para o tratamento terapêutico de distúrbios sexuais da mulher ("female sexual dysfuntion", FSD), como por exemplo para a terapia de distúrbios de excitação da mulher ("female sexual arousal disorder", FSAD). B. Prostaglandina EI em Lipossomas mulheres também após a aplicação de Prostaglandina EI lipossomal. A dose aplicada era neste caso, com 0,1 mg-0,5 mg por lml de gel, ligeiramente abaixo da dose de sildenafil, taladafilo e vardenafil.

Lisboa, 26 de Março de 2010

Claims

ΡΕ1802277 1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica para aplicação tópica com uma substância activa inclusa em lipossomas, que exerce, directa ou indirectamente um efeito relaxante sobre a musculatura lisa, caracerizada por os lipossomas conterem uma proporção molar de colesterol no intervalo de 0 a 50%, de preferência de 30 a 45%, em relação à quantidade global de lipidos assim como, no seu interior apresentarem um meio aquoso com um valor de pH no intervalo de 2,5 a 5,5 e neste apresentarem pelo menos uma substância activa protonada do grupo das prostaglandinas, das adenilatociclases, cAMP, AMP, ATP, NO-sintetases, monóxido de azoto (NO), compostos de NO, nitratos, guanilato ciclases, cGMP,GMP, GTP e fosfodiésterases, numa concentração de pelo menos 100 nmol por pmol de lipido e por um meio aquoso estar presente com valor de pH neutro ou alcalino no exterior dos lipossomas.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por, no interior dos lipossomas estar presente um meio aquoso com um valor de pH no intervalo de 5,0 a 5,5 e, no exterior dos lipossomas, estar presente um meio aquoso com um valor de pH no intervalo de 7 a 8.
3. Composição, de acordo com a reividicação 1 ou 2, caracterizada por a substância activa ser selec-cionada de entre o grupo sildenafil, tadalafil e varde-nafil, assim como os seus sais ácidos. 2 ΡΕ1802277
4. Composição, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por a substância activa ser citrato de sildenafil e o meio aquoso no interior dos lipossomas ser um sistema tampão de sulfato de amónio.
5. Composição, de acordo com uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada por o meio aquoso no interior dos lipossomas ser um sistema tampão de sulfato de amónio e o meio no exterior dos lipossomas ser uma solução de glucose a 5%.
6. Composição, de acordo com uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por o meio aquoso no interior dos lipossomas ser um sistema tampão citrato e o meio no exterior dos lipossomas ser um tampão ácido cítrico/car- bonato de sódio.
7. Composição, de acordo com uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada por os lipossomas conterem fosfolipidos com um comprimento de cadeia acilo de pelo menos 14, de preferência de pelo menos 16 átomos de carbono.
8. Composição, de acordo com uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada por os lipossomas apresentarem um tamanho médio no intervalo de 150 a 500 nm e conterem substância activa numa concentração de 150 a 400 nmol por pmole de lípido. 3 ΡΕ1802277
9. Composição, de acordo com uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada por se apresentar sobre a forma de suspensão, loção, emulsão, tintura, pulverização, gel, creme ou pomada, de preferência sob a forma asséptica.
10. Procedimento de preparação de uma composição farmacêutica definida nas reivindicações 1 a 19, caracte-rizado por, lipossomas, com um meio aquoso no seu interior, serem produzidos espontânemente por injecção de uma fase lipidica etanólica contendo uma proporção molar de colesterol de 0 a 50%, de preferência de 30 a 45%, em relação à quantidade global de lipido, numa fase aquosa com um valor de pH no intervalo de 2,5 a 5,5, após o que a fase aquosa é modificada, nomeadamente diluída, trocada, neutralizada ou alcalinizada, de modo a que se constitua um gradiente H+, entre o interior e o exterior dos lipossomas, por uma substância activa protonável do grupo que consiste em prostaglandinas, adenilatociclases, cAMP, AMP, ATP, N0-sintetases, monóxido e azoto (NO), compostos de NO, nitratos, guanilato-ciclases, cGMP, GMP, GTP e fosfodiésterases, a) ser inicialmente introduzida na fase aquosa e ser absorvia para dentro dos lipossomas no decurso da formação espontânea de lipossomas e/ou b) ser adicionada somente após a formação das vesículas à fase aquosa modificada e migrar para o interior dos lipossomas ao longo do gadiente de H+, 4 ΡΕ1802277 pelo qual são formados lipossomas que contêm a substância activa numa concentração de pelo menos 100, em particular de 150 a 400 nmol por ymol de lípido.
11. Procedimento de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por a modificação da fase aquosa ser efectuada imediatamente após a formação dos lipossomas por diluição com um tampão neutro ou alcalino, pelo que é atingido um pH de 7 a 8.
12. Procedimento de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por a fase aquosa apresentar um pH de 3,5-4,5 antes da modificação e conter sulfato de amónio e a modificação ser levada a cabo por diluição da fase aquosa com uma solução de glucose a 5%.
13. Procedimento de acordo com uma das reivindicações 10 a 12, caracterizado em que a composição farmacêutica ser preparada como uma suspensão, loção, emulsão, tintura, pulverização, gel, creme ou pomada, de preferência na forma asséptica.
14. Composição farmacêutica de acordo com uma das reivindicações 1 a 9 para uso como um medicamento para aplicações externas, em particular tópicas, transdermais e/transmucosais, na zona genital. 5 ΡΕ1802277
15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 14, para uso na profilaxia e/ou terapia de disfunção erectil masculina, no tratamento da disfunção sexual feminina, em particular no tratamento de perturbações na excitação feminina (FSAD, female sexual arousal disorder) ou para aumento da sensação de prazer sexual. Lisboa, 26 de Março de 2010