RU2421227C2 - Композиция носителя для транспорта нуклеиновой кислоты - Google Patents
Композиция носителя для транспорта нуклеиновой кислоты Download PDFInfo
- Publication number
- RU2421227C2 RU2421227C2 RU2008119498/15A RU2008119498A RU2421227C2 RU 2421227 C2 RU2421227 C2 RU 2421227C2 RU 2008119498/15 A RU2008119498/15 A RU 2008119498/15A RU 2008119498 A RU2008119498 A RU 2008119498A RU 2421227 C2 RU2421227 C2 RU 2421227C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- carrier composition
- composition
- cells
- oil
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 121
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 115
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 115
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 114
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 claims abstract description 56
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 12
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000001294 propane Substances 0.000 claims abstract description 8
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 74
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 21
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 20
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 18
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 18
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 17
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 11
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 11
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 11
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 10
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 6
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 6
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 101000601378 Rattus norvegicus Neprilysin Proteins 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 4
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 3
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 150000003842 bromide salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 3
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 3
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 2
- KWVJHCQQUFDPLU-YEUCEMRASA-N 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KWVJHCQQUFDPLU-YEUCEMRASA-N 0.000 description 2
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100297347 Caenorhabditis elegans pgl-3 gene Proteins 0.000 description 2
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 235000019502 Orange oil Nutrition 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 2
- OTBHHUPVCYLGQO-UHFFFAOYSA-N bis(3-aminopropyl)amine Chemical compound NCCCNCCCN OTBHHUPVCYLGQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 2
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 2
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000010502 orange oil Substances 0.000 description 2
- 229960004692 perflenapent Drugs 0.000 description 2
- 229960004624 perflexane Drugs 0.000 description 2
- WTWWXOGTJWMJHI-UHFFFAOYSA-N perflubron Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)Br WTWWXOGTJWMJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001217 perflubron Drugs 0.000 description 2
- ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N perfluorohexane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NJCBUSHGCBERSK-UHFFFAOYSA-N perfluoropentane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F NJCBUSHGCBERSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RVZRBWKZFJCCIB-UHFFFAOYSA-N perfluorotributylamine Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)N(C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F RVZRBWKZFJCCIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 2
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001631 vena cava inferior Anatomy 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 1
- ALPJKZVNZHHJHL-UHFFFAOYSA-N 2,3,3a,3b,4,5,6,7,7a,7b,8,9,10,11,11a,11b-hexadecahydro-1h-cyclopenta[l]phenanthrene Chemical group C12CCCCC2C2CCCC2C2C1CCCC2 ALPJKZVNZHHJHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USIFBQFEYZQLGM-JDVCJPALSA-N 3,4-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]butyl-dimethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CCN(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC USIFBQFEYZQLGM-JDVCJPALSA-N 0.000 description 1
- SBAJRGRUGUQKAF-UHFFFAOYSA-N 3-(2-cyanoethylamino)propanenitrile Chemical compound N#CCCNCCC#N SBAJRGRUGUQKAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCGCVHFFAFSSCW-RTFZCPRASA-N 3-aminopropanoic acid (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimethyl-17-[(2R)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol 2-(2-hydroxyethylamino)ethanol Chemical compound NCCC(O)=O.OCCNCCO.C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 BCGCVHFFAFSSCW-RTFZCPRASA-N 0.000 description 1
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UMIRFFGMJKDLGJ-OAHLLOKOSA-N CCCCCCCCCCCCN[C@H](CCC(=O)N)C(=O)O Chemical compound CCCCCCCCCCCCN[C@H](CCC(=O)N)C(=O)O UMIRFFGMJKDLGJ-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 240000003538 Chamaemelum nobile Species 0.000 description 1
- 235000007866 Chamaemelum nobile Nutrition 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000001293 FEMA 3089 Substances 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019501 Lemon oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N Monoamide-Oxalic acid Natural products NC(=O)C(O)=O SOWBFZRMHSNYGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 235000011203 Origanum Nutrition 0.000 description 1
- 240000000783 Origanum majorana Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001014642 Rasta Species 0.000 description 1
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- UIRKNQLZZXALBI-MSVGPLKSSA-N Squalamine Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](NCCCNCCCCN)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CC[C@H](C(C)C)OS(O)(=O)=O)[C@@]2(C)CC1 UIRKNQLZZXALBI-MSVGPLKSSA-N 0.000 description 1
- UIRKNQLZZXALBI-UHFFFAOYSA-N Squalamine Natural products OC1CC2CC(NCCCNCCCCN)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(C(C)C)OS(O)(=O)=O)C1(C)CC2 UIRKNQLZZXALBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- BLQSPZHGZHJLGB-CLFAGFIQSA-N [3-chloro-2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CCl)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC BLQSPZHGZHJLGB-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- 210000003489 abdominal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- VJLOFJZWUDZJBX-UHFFFAOYSA-N bis(2-hydroxyethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].OCC[NH2+]CCO VJLOFJZWUDZJBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- MSZJEPVVQWJCIF-UHFFFAOYSA-N butylazanide Chemical compound CCCC[NH-] MSZJEPVVQWJCIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010495 camellia oil Substances 0.000 description 1
- 239000010624 camphor oil Substances 0.000 description 1
- 229960000411 camphor oil Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000010627 cedar oil Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 235000019480 chamomile oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000010628 chamomile oil Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000010630 cinnamon oil Substances 0.000 description 1
- 239000001926 citrus aurantium l. subsp. bergamia wright et arn. oil Substances 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 229940117173 croton oil Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRWMGCFJVKDVMD-UHFFFAOYSA-M didodecyl(dimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCC XRWMGCFJVKDVMD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- JGENYNHRIOHZOP-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCOP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C JGENYNHRIOHZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010642 eucalyptus oil Substances 0.000 description 1
- 229940044949 eucalyptus oil Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000010643 fennel seed oil Substances 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000001760 fusel oil Substances 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 239000010649 ginger oil Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008173 hydrogenated soybean oil Substances 0.000 description 1
- 239000008172 hydrogenated vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003983 inhalation anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 239000000171 lavandula angustifolia l. flower oil Substances 0.000 description 1
- 239000010501 lemon oil Substances 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000001525 mentha piperita l. herb oil Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 229940060184 oil ingredients Drugs 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000004798 organs belonging to the digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019477 peppermint oil Nutrition 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010665 pine oil Substances 0.000 description 1
- 239000010734 process oil Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical group CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 235000019719 rose oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000010666 rose oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 1
- 229950001248 squalamine Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000005856 steroid saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N tetrafluoromethane Chemical compound FC(F)(F)F TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000010497 wheat germ oil Substances 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты содержит (А) катионный липид со стероидным скелетом и (В) катионный липид типа соли четвертичного аммония. Компонент (А) представляет собой 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин и/или иодид 3β-[N',N',N'-триметиламиноэтан]холестерина, компонент (В) является, по меньшей мере, одним членом, выбранным из группы, состоящей из соли бромида диметилдиоктадециламмония, диолеоилтриметиламмонийпропана и гидрохлорида N-(1-(2,3-бис(олеоилокси) пропил))-N,N,N-триметиламмония. Компонент (В) содержится в композиции в пропорции от 10 до 200 вес.ч. на 100 вес.ч. компонента (А). Композиция носителя предназначена для доставки нуклеиновой кислоты в клетку. Композиция носителя характеризуется низкой токсичностью, эффективно доставляет нуклеиновые кислоты в клетки, защищая кислоту от деградации. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл.
Description
Уровень техники
Настоящее изобретение относится к низко-токсичной и высоко-безопасной композиции носителя для доставки нуклеиновой кислоты, композиции носителя, которая при использовании для введения нуклеиновой кислоты, такой как siРНК, в клетки животных или в организм, способна эффективно доставить нуклеиновую кислоту в клетки, в то же время, защищая нуклеиновую кислоту от деградации; и к композиции для доставки нуклеиновой кислоты.
Предпосылки создания изобретения
По последним данным биотехнологии было показано, что различные нуклеиновые кислоты проявляют биоактивные функции в клетках. Например, известно, что siРНК (малые интерферирующие РНК) вызывают деградацию мРНК генов-мишеней в клетках и ингибируют, таким образом, экспрессию генов-мишеней (РНК интерференция). Ингибирование экспрессии генов-мишеней при помощи РНК интерференции используется для облегчения или лечения симптомов заболевания, вызванного аномальной экспрессией специфических генов или генных кластеров, и, таким образом, ожидается разработка siРНК в качестве терапевтических агентов. Однако для того, чтобы использовать нуклеиновые кислоты, такие как siРНК, в качестве терапевтических агентов, важно, чтобы такие нуклеиновые кислоты проявляли свои функции в клетках-мишенях. Для этой цели необходимо, чтобы была создана технология эффективной доставки нуклеиновых кислот в клетки-мишени.
Известные технологии доставки экзогенных молекул нуклеиновой кислоты или генов в клетки включают лечение трудноизлечимых заболеваний у человека с использованием различных вирусов, включая ретровирусы, аденовирусы, герпесвирусы и т.д. Однако такие способы лечения подразумевают трудности из-за проблем с инфицирующей способностью, иммунореактивностью, продуктивностью и т.п. Таким образом, разрабатываются невирусные носители, которые не имеют проблем, вызванных вирусами и которые способны доставлять молекулы нуклеиновой кислоты в клетки.
Например, в Патентном документе 1 сообщалось о катионном липиде, имеющем специфическую структуру, как о доставляющем носителе невирусной нуклеиновой кислоты, который обеспечивает доставку нуклеиновых кислот, таких как siРНК, в клетки. Однако катионный липид, о котором сообщалось в Патентном документе 1, имеет недостаток в том, что проявляет токсичность при введении в культивируемые клетки или в организмы. Патентный документ 2 сообщает о композиции носителя, содержащей амфифильное соединение и поликатионы в качестве относительно низко-токсичного носителя, который может доставлять siРНК в клетки. Однако композиция, описанная в Патентном документе 2, также имеет проблемы, состоящие в ее токсичности для клеток при введении в них достаточного количества siРНК.
На фоне известного уровня техники является желательной разработка низко-токсичной композиции носителя для доставки нуклеиновой кислоты, которая может эффективно доставлять нуклеиновые кислоты, такие как siРНК, в клетки.
Патентный документ 1
Публикация нерассмотренной японской патентной заявки № 2002-529439
Патентный документ 2
Публикация нерассмотренной японской патентной заявки № 2005-508394
Сущность изобретения
Проблемы, которые решает изобретение
Целью настоящего изобретения является решить вышеупомянутые проблемы известного уровня техники. В частности, целью настоящего изобретения является получение композиции носителя, доставляющей нуклеиновые кислоты, с низкой токсичностью и высокой безопасностью, композиции носителя, при использовании которой для введения нуклеиновой кислоты, такой как siРНК, в клетки животных или в организм, способной эффективно доставить нуклеиновые кислоты в клетки, в то же время, защищая нуклеиновую кислоту от деградации; и композиции для доставки нуклеиновой кислоты, содержащей композицию носителя и нуклеиновую кислоту.
Средства решения проблем
Авторы настоящего изобретения провели обширные исследования, чтобы решить вышеупомянутые проблемы, и обнаружили, что композиция, содержащая (А) катионный липид со стероидным скелетом (стероидным ядром) в сочетании с (В) катионным липидом типа соли четвертичного аммония, пригодна в качестве носителя, доставляющего нуклеиновую кислоту, поскольку она обладает низкой токсичностью и способна эффективно доставлять нуклеиновые кислоты, в то же время, защищая нуклеиновые кислоты от деградации. Настоящее изобретение было осуществлено при помощи дальнейших исследований, основанных на этих открытиях.
Настоящее изобретение обеспечивает следующие пункты:
Пункт 1. Композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты, содержащая (А) катионный липид со стероидным скелетом (стероидным ядром) и (В) катионный липид типа соли четвертичного аммония.
Пункт 2. Композиция носителя по п.1, дополнительно содержащая (С) вещество на масляной основе.
Пункт 3. Композиция носителя по п.1, где компонент (А) представляет собой 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин и/или иодид 3β-[N',N',N'-триметиламиноэтан]холестерина.
Пункт 4. Композиция носителя по п.1, где компонент (В) является по крайней мере одним членом, выбранным из группы, состоящей из соли бромида диметилдиоктадециламмония, диолеоилтриметиламмонийпропана и гидрохлорида N-[1-(2,3-бис(олеоилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмония.
Пункт 5. Композиция носителя по п.1, где компонент (В) содержится в пропорции от 10 до 200 весовых частей на 100 весовых частей компонента (А).
Пункт 6. Композиция носителя по п.1, которая является композицией носителя для доставки siРНК.
Пункт 7. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты, содержащая композицию носителя по любому из пп.1-5 и нуклеиновую кислоту.
Пункт 8. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.7, где нуклеиновой кислотой является siРНК.
Пункт 9. Способ введения нуклеиновой кислоты, включающий приведение композиции для доставки нуклеиновой кислоты по п.7 в контакт с клеткой для введения нуклеиновой кислоты в клетку.
Пункт 10. Применение (А) катионного липида со стероидным скелетом в сочетании с (В) катионным липидом типа соли четвертичного аммония для получения композиции носителя для доставки нуклеиновой кислоты.
Краткое описание чертежей
Фиг.1 показывает результаты микроскопического исследования флуоресцентных изображений, полученных от нуклеиновой кислоты клеток после лечения с использованием каждого из тестируемых образцов;
Фиг.2 показывает таблицы, иллюстрирующие результаты измерения активности люциферазы клеток после лечения с использованием каждого из тестируемых образцов;
Фиг.3 показывает результаты измерения активности неприлизина (NEP) в легких крыс;
Фиг.4 показывает результаты измерения количества живых клеток после лечения с использованием каждого из тестируемых образцов; и
Фиг.5 показывает результаты окрашивания срезов тканей легкого крыс гематоксилином и эозином, на которых ядра, рибосомы и т.д. окрашены гематоксилином от синего до голубого, и цитоплазма, мембраны и красные кровяные клетки окрашены эозином красным.
Результаты изобретения
Композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению обеспечивают следующие замечательные результаты.
(1) Нуклеиновые кислоты могут эффективно доставляться в клетки таким образом, что они могут эффективно проявлять свои функции в клетках.
(2) Деградация нуклеиновых кислот может быть подавлена в организмах и в культуральной среде.
(3) Переносчик и композиция обладают низкой токсичностью и высокой безопасностью.
Вследствие этого, композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты пригодны для лечения различных заболеваний при помощи введения нуклеиновой кислоты и, в частности, для лечения трудноизлечимых заболеваний, которые трудно вылечить при помощи низкомолекулярных соединений.
Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению обладает также тем преимуществом, что она может быть лиофилизована, и таким образом, может храниться в лиофилизованном состоянии.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения
Ниже настоящее изобретение описано подробно.
Композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты
Композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению содержит (А) катионный липид со стероидным скелетом (стероидным ядром) и (В) катионный липид типа соли четвертичного аммония.
Композиция носителя по настоящему изобретению используется в качестве носителя для доставки (введения) нуклеиновых кислот в клетки.
Нуклеиновые кислоты, которые могут быть использованы с композицией носителя по настоящему изобретению, не имеют ограничений по виду и структуре при условии, что их нужно доставлять в клетки. Примеры таких нуклеиновых кислот включают siРНК, мРНК, тРНК, рРНК, кДНК, miРНК (микро РНК), рибозимы, антисмысловые олигонуклеотиды, ложные олигонуклеотиды, ДНК плазмиды, пептид-нуклеиновые кислоты, олигонуклеотиды, формирующие триплексы (TFO), гены и т.д. В частности, композиция носителя по настоящему изобретению используется для доставки siРНК в клетки. Нуклеиновые кислоты, доставляемые композицией носителя по данному изобретению, могут быть получены из людей, животных, растений, бактерий, вирусов и т.д., или химически синтезированы. Кроме того, такие нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными, двухцепочечными или трехцепочечными и не имеют ограничений по молекулярной массе. Кроме того, по настоящему изобретению также могут применяться нуклеиновые кислоты, модифицированные при помощи химических веществ, ферментов или пептидов. По настоящему изобретению такие нуклеиновые кислоты могут быть использованы отдельно или в сочетании.
Катионный липид со стероидным скелетом (здесь и далее иногда именуемый как «компонент (А)»), используемый в композиции носителя по настоящему изобретению, является липидом, который является катионным и имеет стероидный скелет (пергидроциклопентафенантреновое кольцо; С17Н28). Катионный липид со стероидным скелетом для использования по настоящему изобретению не имеет ограничений при условии, что он является фармацевтически приемлемым. Конкретные примеры таких липидов включают 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин (DC-Chol), иодид 3β-[N',N',N'-триметиламиноэтан]холестерина (TC-Chol), бис(гуинидин)-трен-холестерин (BGTC), N-холестерилоксикарбонил-3,7-диазанонан-1,9-диамин, β-аланин-диэтаноламин-холестерин, N4-сперминхолестерилкарбамат (GL-67), N[N4-3-аминопропилспермидин]холестерил карбамат (GL-78), N4-сперминхолестерилкарбоксиамид (GL-90), N1,N8-бис(аргининкарбоксиамид)-N4-спермидинхолестерилкарбамат (GL-95), N-[N1,N4,N8-трис(3-аминопропил)спермидин]холестерилкарбамат (GL-96) и подобные производные холестерина (катионные липиды с холестериновым скелетом); скваламин, 3α,7α,12α-трис(3-аминопропокси)-5β-холан-24-(N,N-бис(3-аминопропил)амин), 3α,7α,12α-трис(3-аминопропокси)-5β-холан-24-(N-(N-(3-аминопропил))-3-аминопропил)амин, 3α,7α,12α-трис(3-азидопропокси)-5β-холан-24-(N,N-бис(2-цианоэтил)амин)), 3α,7α,12α-трис(3-азидопропокси)-5β-холан-24-(N-(бензилоксикарбонил)-N-(3-гидроксипропил)амин) и подобные катионные липиды, с которыми связываются стероиды; колоколообразные сперминовые конъюгаты и подобные катионные липиды, с которыми связывается холевая кислота; катионные липиды, с которыми связывается стерольный гликозид; катионные липиды с которыми связывается стероидный сапонин; и т.д.
Такие простые катионные липиды со стероидным скелетом могут быть использованы отдельно или в сочетании.
Предпочтительные примеры катионных липидов со стероидным скелетом включают производные холестерина (катионные липиды с холестериновым скелетом), и более предпочтительные их примеры включают 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин и иодид 3β-[N',N',N'-триметиламиноэтан]холестерина (TC-Chol).
Катионный липид типа соли четвертичного аммония для использования в настоящем изобретении (здесь и далее иногда именуемый как «компонент (В)») не имеет ограничений при условии, что он является фармацевтически приемлемым. Его конкретные примеры включают бромид диметилдиоктадециламмония (DDAB), 1,2-димиристоил-3-триметиламмонийпропан, 1,2-диолеоил-3-триметиламмонийпропан (DOTAP), 1,2-диолеоил-3-триметиламмонийпропанметилсульфат, 1,2-дипалмитоил-3-триметиламмонийпропан, 1,2-дистеароил-3-триметиламмонийпропан, гидрохлорид N-(1-(2,3-бис(олеоилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмония (DOTMA), бромид димиристоилоксипропилдиметилгидроксиэтиламмония (DMRIE), бромид диолеоилоксипропилдиметилгидроксиэтиламмония (DORIE), бромид диметилдидодециламмония, гидрохлорид N-(α-триметиламмониоацетил)дидодецил-D-глютамина, гидрохлорид N-(α-триметиламмониоацетил)-О,O'-бис-(1Н,1Н,2Н,2Н-перфтордецил)-L-глютамина, гидрохлорид О,O'-дидодеканоил-N-(α-триметиламмониоацетил)диэтаноламина, бромид метилаллилдидодециламмония, гидрохлорид N-{p-(ω-триметиламмониобутилокси)бензоил}-дидодецил-L-глютамина, бромид 9-(ω-триметиламмониобутил)-3,6-бис(додеканоил)карбазола, гидрохлорид диметилдиоктадециламмония, бромид N-ω-триметиламмониодеканоил-дигексадецил-D-глютамина, бромид N-{p-(ω-триметиламмониогексилокси)-бензоил}-дитетрадецил-L-глютамина, бромидная соль p-(ω-триметиламмониодецилокси)-p'-октилоксиазобензола (MC-1-0810), бромидная соль p-{ω-(β-гидроксиэтил)диметил-аммонио-децилокси}-p'-октилоксиазобензола (МС-3-0810), бромидная соль О,О',O''-тридодеканоил-N-(ω-триметил-аммониодеканоил)трис(гидроксиметил)аминометана (ТС-1-12), 1,2-дилаурил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-димиристоил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-дипальмитоил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-дистеароил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-диолеоилглицеро-3-этилфосфохолин, 1-пальмитоил-2-ореоил-глицеро-3-этилфосфохолин и т.д. Такие катионные липиды типа соли четвертичного аммония могут быть использованы отдельно или в сочетании.
Среди таких катионных липидов типа солей четвертичного аммония предпочтительными являются бромид диметилдиоктадециламмония (DDAB), диолеилтриметиламмонийпропан (DOTAR), гидрохлорид N-(1-(2,3-бис(олеоилокси)пропил))-N,N,N-триметиламмония (DOTMA), гидрохлорид O,O'-дидодеканоил-N-(α-триметиламмониоацетил)диэтаноламина (DC-6-12, n=12; и DC-6-14, n=14), бромидная соль p-{ω-(β-гидроксиэтил)диметиламмонио-децилокси}-p'-октилоксиазобензола (МС-3-0810) и бромид O,O',O''-тридодеканоил-N-(ω-триметил-аммониодеканоил)трис(гидроксиметил)аминометана (ТС-1-12); и особенно предпочтительными являются бромид диметилдиоктадециламмония (DDAB), диолеоилтриметиламмонийпропан (DOTAR) и гидрохлорид N-(1-(2,3-бис(олеоилокси)пропил))-N,N,N-триметиламмония (DOTMA).
В композиции носителя по настоящему изобретению пропорция компонента (А) к компоненту (В) не имеет ограничений, и, с точки зрения улучшения эффективности доставки нуклеиновой кислоты в клетки, пропорция компонента (В) может быть, например, от 10 до 200 весовых частей, предпочтительно от 30 до 150 весовых частей и более предпочтительно от 75 до 125 весовых частей на 100 весовых частей компонента (А). Общая доля компонентов (А) и (В) от общего количества композиции носителя по настоящему изобретению может составлять, например, от 10 до 100 вес.%, предпочтительно от 20 до 80 вес.% и более предпочтительно от 40 до 70 вес.%.
Композиция носителя по настоящему изобретению может содержать вещество на масляной основе (здесь и далее иногда именуемый как «компонент (С)»), в дополнение к компонентам (А) и (В). Когда добавляют вещество на масляной основе, его свойства дают возможность регулировать эффективность введения нуклеиновой кислоты при помощи композиции, доставляющей нуклеиновую кислоту. Например, когда вещество на масляной основе добавлено, чтобы довести композицию носителя до конкретной плотности, степень контакта композиции носителя с клетками может регулироваться, улучшая таким образом эффективность их введения in vitro. С другой стороны, например, когда добавлено температурно-чувствительное вещество на масляной основе, ядро композиции носителя может быть дезинтегрировано при заданных температурных условиях, чтобы индуцировать флуктуации на поверхности клетки, тем самым, улучшая эффективность введения нуклеиновой кислоты. Кроме того, с другой стороны, например, когда добавляют вещество на масляной основе, которое обладает деструктивной способностью под воздействием внешних стимулов, ядро композиции носителя может быть дезинтегрировано при помощи внешнего стимула, чтобы индуцировать флуктуации на поверхности клетки, тем самым, улучшая эффективность введения нуклеиновой кислоты.
Примеры веществ на масляной основе, которые могут быть добавлены к композиции носителя по настоящему изобретению, включают перфторуглерод, перфторпентан, бромид перфтороктила, перфторгексан, перфтортрибутиламин, соевое масло, рафинированное соевое масло, гидрогенизированное соевое масло, неомыленное соевое масло, сквален, касторовое масло, гвоздичное масло, сорбитантриолеат, скипидарное масло, сафлоровое масло, жирную кислоту сафлорового масла, масляную кислоту, пальмовое масло, рапсовое масло, сивушное масло, оливковое масло, льняное масло, кунжутное масло, хлорофилловое масло, кротоновое масло, бергамотовое масло, кедровое масло, апельсиновое масло, фенхелевое масло, эвкалиптовое масло, кукурузное масло, лавандовое масло, майорановое масло, лимонное масло, хлопковое масло, кокосовое масло, масло яичного желтка, розовое масло, сосновое масло, миндальное масло, арахисовое масло, масло камелии, белое камфорное масло, масло ромашки, коричное масло, масло перечной мяты, этерифицированное кукурузное масло, имбирное масло, эфирное масло римской ромашки, эфирное масло из растения, кудрявомятное масло, подсолнечное масло, масло какао, масло зародышей пшеницы, оксидноцинковое масло, твердые масла, гидрогенизированные растительные масла, светлый жидкий парафин, жидкий парафин, триглицериды среднецепочечных жирных кислот, молочное масло, полутвердое апельсиновое масло, полиоксиэтиленовое касторовое масло, полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло 10, полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло 100, полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло 20, полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло 40, полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло 5, полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло 50, полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло 60, полиоксил 35 касторовое масло, технологические масла и т.д. Среди таких веществ на масляной основе перфторпентан является температурно-чувствительным и характеризуется кипением и переходом в газообразное состояние при 29,5˚С. Кроме того, перфторгексан, бромид перфтороктила и перфтортрибутиламин обладают деструктивной способностью под воздействием внешних стимулов и характеризуются способностью вызывать кавитацию в ядре композиции носителя и дезинтегрировать его, при получении внешнего стимула, такого как ультразвуковое излучение.
Когда содержится вещество на масляной основе, его доля не имеет ограничений при условии, что эффекты настоящего изобретения не нарушаются, и может составлять, например, от 0,1 до 50 весовых частей, предпочтительно от 1 до 30 весовых частей, более предпочтительно от 5 до 20 весовых частей на 100 частей по общему весу компонентов (А) и (В).
Носитель, доставляющий нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению, кроме того, может содержать мембранно-фузогенный липид (вспомогательный липид), при необходимости. Композиция носителя по настоящему изобретению, когда содержит такой расплавляющий мембрану липид, имеет дополнительно улучшенную эффективность доставки нуклеиновой кислоты в клетки. Примеры таких расплавляющих мембрану липидов включают диолеоилфосфатидилэтаноламин, диолеоилфосфатидилхолин, трансфосфатидилфосфатидилэтаноламин, 1,2-бис-(10,12-трикосадиноил)-фосфоэтаноламин, 1,2-диэлаидоилфосфоэтаноламин, 1,2-дигексадецилфосфоэтаноламин, 1,2-дигексаноилфосфоэтаноламин, 1,2-дилауроилфосфоэтаноламин, 1,2 -дилинолеоилфосфоэтаноламин, 1,2-димиристоилфосфоэтаноламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин, 1,2-дипальмитолеоилфосфоэтаноламин, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин, 1,2-дифитаноилфосфоэтаноламин, 1,2-дистеароилфосфоэтаноламин, 1-пальмитоил-2-олеоилфосфоэтаноламин, 1-пальмитоил-2-(10,12-трикосадиноил)фосфоэтаноламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-капроиламин, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-капроиламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N,N-диметил, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N,N-диметил, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-додеканоил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-додеканоил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-додеканиламин, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-додеканиламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-глутарил, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-глутарил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-лактозу, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-[4(р-малеимидметил)циклогексан]-карбоксилат, дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-[4(р-малеимидметил)циклогексан]-карбоксилат, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-[4(р-малеимидфенил)бутиламид], 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-[4(р-малеимидфенил)бутират], 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-метил, дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-метил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-[3-(2-пиридилдитио)пропионат], 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-[3-(2-пиридилдитио)пропионат], 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-(сукцинил), 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-(сукцинил) и т.д. Среди таких липидов диолеоилфосфатидилэтаноламин может быть успешно использован в носителе, доставляющем нуклеиновую кислоту по настоящему изобретению.
Когда содержится такой расплавляющий мембрану липид, его доля не имеет ограничений при условии, что эффекты настоящего изобретения не нарушаются, и может составлять, например, от 1 до 500 весовых частей, предпочтительно от 10 до 250 весовых частей и более предпочтительно от 25 до 100 весовых частей на 100 частей по общему весу компонентов (А) и (В).
Композиция носителя по настоящему изобретению может содержать различные добавки, такие как изотонирующие агенты, инертные наполнители, разбавители, загустители, стабилизаторы, буферы, консерванты и т.д., в соответствии с требованиями. Количество таких добавок для добавления может быть подходяще выбрано в зависимости от формы использования композиции носителя.
Композиция носителя по настоящему изобретению может быть получена смешиванием компонентов (А) и (В) и, необязательно, других компонентов.
Композиция для доставки нуклеиновую кислоту
Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению включает композицию носителя, описанную выше, и нуклеиновую кислоту. В этой композиции нуклеиновая кислота формирует комплекс с компонентом(ами) композиции носителя посредством ионных и/или гидрофобных связей таким образом, что композиция для доставки нуклеиновой кислоты обладает улучшенной доставкой нуклеиновой кислоты в клетки.
Композицию для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению получают смешиванием композиции носителя с нуклеиновой кислотой или смешиванием нуклеиновой кислоты с компонентами композиции носителя в любом порядке.
В композиции для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению пропорция нуклеиновой кислоты к композиции носителя варьирует в зависимости от типов нуклеиновой кислоты и носителя для доставки нуклеиновой кислоты, типа клетки, как мишени доставки нуклеиновой кислоты и т.д., и доля нуклеиновой кислоты может составлять, например, от 0,1 до 300 весовых частей, предпочтительно от 1 до 100 весовых частей и более предпочтительно от 2,5 до 50 весовых частей на 100 частей по общему весу компонентов (А) и (В).
Кроме того, общее количество компонентов (А) и (В) в композиции для доставки нуклеиновой кислоты может составлять, например, от 10 до 90 вес.%, предпочтительно от 30 до 80 вес.% и более предпочтительно от 50 до 70 вес.% от общего веса композиции.
Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может содержать различные добавки, такие как изотонирующие агенты, инертные наполнители, разбавители, загустители, стабилизаторы, буферы, консерванты и т.д., в соответствии с формой использования. Количество таких добавок может быть подходяще выбрано в зависимости от формы использования композиции для доставки нуклеиновой кислоты.
В настоящем изобретении примеры клеток, к которым могут доставляться нуклеиновые кислоты, включают культивируемые клетки, клетки, выделенные из организмов (включая устойчивые клеточные линии), клетки in vivo и т.д.
Форма использования композиции для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению не имеет ограничений при условии, что композиция может прийти в контакт с клетками-мишенями для введения нуклеиновой кислоты. Когда нуклеиновая кислота доставляется в клетки in vivo, примеры форм использования композиции включают прямую инъекцию в ткани; инъекцию под кожу или в вену, мышцу, брюшную полость, глаз, пищеварительный орган, зуб и т.д.; введение при помощи вдыхания в полость носа, ротовую полость, легкие и т.д.; пероральное введение; трансдермальное введение; и трансмукозальное введение через слизистую ротовой полости, вагинальную слизистую, слизистую глаза или слизистую матки; и т.п. С другой стороны, когда нуклеиновую кислоту вводят в культивируемые клетки или клетки, выделенные из организма, композиция для доставки нуклеиновой кислоты может быть, например, предварительно добавлена в среду для культивирования клеток. Нуклеиновая кислота может также быть доставлена в культивируемые клетки или клетки, выделенные из организма, в присутствии сыворотки крови.
Наиболее предпочтительный вариант осуществления изобретения
Настоящее изобретение детально описано выше со ссылками на примеры и т.п., которые не предполагают ограничение объема изобретения.
Пример 1
Была приготовлена композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты, имеющая следующую формулу.
| Бромид диметилдиоктадециламмония | 0,9 мкг |
| 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин | 0,9 мкг |
| Диолеоилфосфатидилэтаноламин | 0,9 мкг |
| Глицерин | 40,5 мкг |
| Дистиллированная вода | 2 мкл |
| OPTI-MEM среда (производство Invitrogen Corporation) | соответствующее количество |
| Общее количество | 50 мкл |
Пример 2
Сначала был приготовлен раствор, который содержит нуклеиновую кислоту, имеющий следующий состав.
| SiРНК | 2 пмоля |
| OPTI-MEM среда (производства Invitrogen Corporation) | соответствующее количество |
| Общее количество | 50 мкл |
Затем 50 мкл композиции носителя из примера 1 смешали с 50 мкл раствора, содержащего нуклеиновую кислоту, и смесь инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре так, чтобы получить композицию для доставки нуклеиновой кислоты.
Пример 3
Была приготовлена композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты, имеющая следующую формулу.
| Бромид диметилдиоктадециламмония | 0,5 мг |
| 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин | 0,5 мг |
| Диолеоилфосфатидилэтаноламин | 0,5 мкг |
| Сахароза | 88,9мг |
| Дистиллированная вода | соответствующее количество |
| Общее количество | 1,0 мл |
Пример 4
Была приготовлена композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты, имеющая следующую формулу.
| Бромид диметилдиоктадециламмония | 0,5 мг |
| 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин | 0,5 мг |
| Диолеоилфосфатидилэтаноламин | 0,5 мкг |
| Дистиллированная вода | соответствующее количество |
| Общее количество | 1,0 мл |
Тестовый пример 1
Чтобы оценить способность композиции для доставки нуклеиновой кислоты из примера 2 доставлять siРНК в клетки, были проведены следующие тесты с использованием клеток А549 (клеточный штамм, выделенный из рака легкого человека; Dainippon Pharmaceutical Co.Ltd.) в качестве модельных клеток. В этом тесте использовали флуоресцентно-меченную GL3-siРНК (siРНК, связывающая светящуюся люциферазу; Dharmacon Corporation, Боулдер-Сити, CO, США; Последовательность: 5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAdTdT; Антисенс: 5'-UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTdT).
Сначала, клетки А549, концентрация которых была доведена до 1,2 × 105 клеток/мл средой DMEM (Dulbecco-Minimum Essentian Medium), были посажены в 24-луночные планшеты в количестве 6,0 × 104 клеток на лунку. Затем в каждую лунку добавили 500 мкл по одному каждого из тестовых образцов, показанных в таблице 1, и инкубировали при 37˚С в 5% СО2 в течение 24 часов. Флуоресцентные изображения, полученные от нуклеиновой кислоты, в клетках наблюдались при помощи флуоресцентного микроскопа (флуоресцентный микроскоп Olympus IX 71; Olympus, Токио, Япония) так, чтобы оценить способность каждого тестового образца доставлять siРНК в клетки.
| Таблица 1 | ||
| Тестовый образец | Формула | |
| № | Данные на Фиг.1 | |
| 1 | Композиция носителя + siРНК | Композиция для доставки нуклеиновой кислоты из примера 2 |
| 2 | LFA2000 + siРНК | Среда OPTI-MEM, содержащая LFA2000 (Липофектамин2000; производство Invitrogen Corporation) (1,0 мг/мл) и siРНК (20 пмоль/мл) |
| 3 | NeoPhectin + siРНК | Среда OPTI-MEM, содержащая NeoPhectin (производство NoePharm) (1,0 мг/мл) и siРНК (20 пмоль/мл) |
| 4 | siРНК | Среда OPTI-MEM, содержащая siРНК (20 пмоль/мл) |
Результаты показаны на Фиг.1. Когда добавлена только siРНК, не наблюдается флуоресценция в клетках. В отличии от этого, когда добавляют композицию для доставки нуклеиновой кислоты из примера 2 или хорошо известный носитель для доставки клетки (например, LFA 2000 или NeoPhectin) вместе с siРНК, в клетках наблюдалась флуоресценция. В особенности, когда была использована композиция для доставки нуклеиновой кислоты из примера 2, в клетках наблюдалась сильная флуоресценция. Эти результаты подтвердили, что композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению проявляет отличную способность доставлять нуклеиновую кислоту.
Тестовый пример 2
Чтобы оценить подавление гена-мишени на белковом уровне, в клетки была временно введена плазмида, кодирующая ген люциферазы, и затем к клеткам была добавлена композиция для доставки нуклеиновой кислоты из примера 2 так, чтобы оценить количество экспрессии люциферазы. В тесте использовали GL3-siРНК (siРНК, связывающая светящуюся люциферазу; Dharmacon Corporation, Боулдер-Сити, CO, США; Последовательность: 5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAdTdT; Антисенс: 5'-UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTdT).
Конкретнее, 10 мг pGL3 люциферазы или Renilla люциферазы (Promega, Медисо, Висконсин, США) было добавлено к 15 × 106 клеток А549 (клеточный штамм, выделенный из рака легкого человека; Dainippon Pharmaceutical Co.Ltd.), и клетки были электропорированы с использованием нуклеофектора (Amaxa Inc., Гайтерсбург, Мериленд, США). Клетки, в которые была введена pGL3 люцифераза или Renilla люцифераза, были доведены до 1,2 × 105 клеток/мл средой DMEM (Dulbecco-Minimum Essentian Medium), которая является бессывороточной или содержит 10% фетальной бычьей сыворотки по объему, и впоследствии были посажены в 24-луночные планшеты в количестве 6,0 × 104 клеток на лунку. Затем в каждую лунку добавили 500 мкл по одному каждого из тестовых образцов, показанных в таблице 2, и инкубировали при 37˚С в 5% СО2 в течение 24 часов. Клетки в лунках были лизированы путем конвенционного процесса, чтобы приготовить клеточные лизаты, и клеточные лизаты были оценены на люциферазную активность с использованием двух-люциферазной генераторной аналитической системы (Promega, Медисо, Висконсин, США). Активности люциферазы были оценены при помощи подсчета отношения светящейся люциферазы к активностям Renilla люциферазы (относительная активность: %)
| Таблица 2 | ||
| Тестовый образец | Формула | |
| № | Данные на Фиг.2 | |
| 1 | Композиция носителя + siРНК | Композиция для доставки нуклеиновой кислоты из примера 2 |
| 2 | LFA2000 + siРНК | Среда OPTI-MEM, содержащая LFA2000 (Липофектамин2000; производство Invitrogen Corporation) (1,0 мг/мл) и siРНК (20 пмоль/мл) |
| 3 | NeoPhectin + siРНК | Среда OPTI-MEM, содержащая NeoPhectin (производство NoePharm) (1,0 мг/мл) и siРНК (20 пмоль/мл) |
| 4 | siРНК | Среда OPTI-MEM, содержащая siРНК (20 пмоль/мл) |
| 5 | LFA2000 | Среда OPTI-MEM, содержащая LFA2000 (Липофектамин2000; производство Invitrogen Corporation) (1,0 мг/мл) |
| 6 | NeoPhectin | Среда OPTI-MEM, содержащая NeoPhectin (производство NoePharm) (1,0 мг/мл) |
| 7 | Композиция носителя | Среда OPTI-MEM, содержащая композицию носителя из примера 1 (50% по объему) |
| 8 | Контроль | Среда OPTI-MEM |
Результаты приведены в таблице 2. Результаты подтвердили, что использование композиции для доставки нуклеиновой кислоты из примера 2 способствовало высокоэффективной доставке siРНК в клетки и экспрессии функции siРНК в клетках, независимо от присутствия или отсутствия сыворотки в среде.
Тестовый пример 3
В этом тесте композиция носителя из примера 3 оценивалась на способность доставлять siРНК в клетки ткани легкого и на функциональность siРНК в клетках с использованием крысиного неприлизина (siРНК, связывающая крысиный неприлизин (NM_012608); RNA-TEC NV Corporation, Бельгия; Последовательность: 5'-GCUCCAAAGCCGAAGAAGAdTdT, Антисенс: 5'-UCUUCUUCGGCUUUGGAGCdTdT).
Композиция для доставки нуклеиновой кислоты была приготовлена при помощи смешивания композиции носителя из примера 3 с siРНК в отношении 1:1 по весу. Затем 0,4 мл тестового раствора, который был приготовлен при помощи разбавления композиции для доставки нуклеиновой кислоты соответствующим переносчиком (8,89 вес./объем % раствора сахарозы), было введено через легкие самцам SD крыс, весившим 250-320 г, в то время, как они были анестезированы ингаляционным анастезионным агентом изофлюраном (производство Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.), с использованием IА-1B Ингаляционного устройства (PENNCENTURY, Филадельфия, Пенсильвания, США). Тестовый раствор был приготовлен при помощи разбавления композиции для доставки нуклеиновой кислоты так, как предназначено, чтобы доза siРНК составила от 0,04 до 1,2 мг/кг (на крысу). Через 24 часа после пульмонального введения каждую крысу анастезировали эфиром и фиксировали в лежачем положении. Была проведена срединная лапаротомия, и крыс умертвили при помощи кровопускания через брюшную нижнюю полую вену. Легкие были впоследствии удалены из крысы и промыты физиологическим раствором, охлажденным льдом. Используя удаленные легкие, было измерено количество экспрессии siРНК модельного гена-мишени, NEP (нейтральная эндопептидаза) и количество экспрессии siРНК гена домашнего хозяйства, GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа). Кроме того, была измерена активность крысиного неприлизина (NEP) в удаленных легких. Методы измерения и результаты подробно описаны ниже. В качестве контроля был аналогичным образом проведен тест при помощи введения крысам только носителя (8,89 вес./объем % раствора сахарозы) при тех же условиях. Для сравнения тест также провели с использованием siРНК (Takara, Япония; Последовательность: 5'-GAACGGCAUCAAGGUGAACTT, Антисенс: 5'-GUUCACCUUGAUGCCGUUCTT), связывающей EGFP (улучшенный зеленый флуоресцентный белок) вместо крысиного неприлизина.
Способ и результаты определения количества NEP siРНК и GAPDH мРНК
Общая РНК была изолирована из доли удаленного легкого и была очищена, используя RNeasy Mini Kit (QIAGEN, Германия). Было проведено превращение мРНК в кДНК, используя SuperScript III First-Strand систему синтеза для RT-PCR (Invitrogen, Калифорния, США). Количество мРНК для модельного гена-мишени NEP (нейтральная эндопептидаза) было количественно измерено при помощи PCR в реальном времени, используя готовую кДНК. Аналогичным образом было количественно измерено количество мРНК для гена домашнего хозяйства GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа). Подавление экспрессии мРНК неприлизина оценивали при помощи подсчета отношения мРНК NEP к мРНК GAPDH.
Результат подтвердил, что экспрессия мРНК неприлизина в легких существенно подавлялась при помощи siРНК неприлизина в дозе 0,08 мг/кг. Поскольку эта доза ниже, чем те, о которых сообщалось ранее, в качестве обеспечивающих эффекты РНК интерференции in vivo, было показано, что эффективная доставка siРНК в клетки ткани легкого может достигаться при помощи использования композиции носителя из примера 3.
Способ и результаты измерения активности крысиного неприлизина (NEP)
Часть удаленных легких была гомогенизирована, и была измерена активность крысиного неприлизина в гомогенате. Активность крысиного неприлизина (NEP) определили при помощи измерения того, сколько субстрата NEP, DAGNPG (N-дансил-D-Ala-Gly-р-нитро-Phe-Gly: SIGMA) было гидролизовано за данный период в присутствии или отсутствие специфического ингибитора NEP, фосфорамидона (SIGMA), и оценки различий в количествах гидролизата в присутствии и отсутствие ингибитора. Гомогенат легкого крысы использовался в количестве 50 мкл; субстрат DAGNPG в концентрации 1 мМ; и ингибитор, фосфорамидон, где он присутствовал, был добавлен до концентрации 10 мМ так, чтобы реакции проводились в общем объеме 100 мкл. Реакции проводились при 37˚С в течение 10 минут и были остановлены при помощи инкубации при 90˚С в течение 10 минут. Активность NEP была определена при помощи измерения количеств итогового гидролизата DAG (дансил-D-Ala-Gly). Количество полученного гидролизата было определено при помощи измерения флуоресценции гидролизата: возбуждение производилось при 360 нм и испускание флуоресценции измерялось при 535 нм.
Результаты в случае дозы siРНК 0,4 мг/кг показаны на Фиг.3. Результаты показывают, что активность NEP в легких была существенно подавлена при помощи NF-siРНК в дозе 0,4 мг/кг. Соответственно, вышеупомянутые результаты подтвердили, что эффективная доставка siРНК в клетки ткани легкого может быть достигнута при помощи использования композиции носителя из примера 3.
Тестовый пример 4
Композиция носителя из примера 1 была оценена на цитотоксичность, используя систему анализа пролиферации Premix WST-1 (Takara, Сига, Япония). Конкретнее, клетки А549 (клеточный штамм, выделенный из рака легкого человека; Dainippon Pharmaceutical Co.Ltd.), концентрация которых была доведена до 1×105 клеток/мл средой DMEM (Dulbecco-Minimum Essentian Medium), были посажены в 96-луночные планшеты в количестве 104 клеток на лунку. По одному каждого из тестовых образцов, например, композиции носителя из примера 1, LFA2000 (Липофектамин2000; производство Invitrogen), и NeoPhectin (производство NoePharm Corporation) затем было добавлено в каждую лунку в концентрации от 2 до 20 мкг/мл. Затем было добавлено 10 мкл раствора Premix WST-1 в каждую лунку, и клетки инкубировались при 37˚С в течение 1 часа. Затем был изменен коэффициент поглощения каждой лунки при 450 нм, используя спектрофотометр для прочтения микропланшетов (Tecan, Майендорф, Швейцария). В качестве контроля в лунки была добавлена среда вместо тестовых образцов, и измерение было проведено аналогичным образом. Коэффициент поглощения при 450 нм отображает коэффициент поглощения формазанового красителя, который образуется из WST-1 при помощи редуктазы. Поскольку существует линейная зависимость между этим коэффициентом поглощения и живыми клетками, была подготовлена калибровочная кривая между количеством посаженных клеток и коэффициентом поглощения. Количество клеток в каждом тестовом образце было определено, основываясь на калибровочную кривую.
Результаты показаны на Фиг.4. Результаты подтвердили, что количество клеток практически не уменьшилось с добавлением композиции носителя из примера 1, и, следовательно, композиция носителя обладает слабой токсичностью и является высокобезопасной.
Тестовый пример 5
Самцам SD крыс (SLC, Токио, Япония), весившим 250-320 г, ввели через легкие тестовый раствор, приготовленный при помощи разбавления 500 мкг композиции носителя из примера 4 с дистиллированной водой до 0,4 мл, используя 1A-IC устройство, производства Penncentury Corporation. Каждую крысу после введения вернули в клетку и содержали в нормальных условиях. Через двадцать четыре часа после пульмонального введения 50 мг/кг (1 мл/кг) крысе был внутрибрюшинно введен пентобарбитан (Нембутал, производство Dainippon Pharmaceutical Co. Ltd.), и крыса под действием анестезии была впоследствии зафиксирована в лежачем положении. Была проведена срединная лапаротомия, и крыс умертвили при помощи кровопускания через брюшную нижнюю полую вену. Легкие были впоследствии удалены из крысы и промыты физиологическим раствором, охлажденным льдом. Были приготовлены срезы из ткани удаленного легкого, и срезы исследовали микроскопически при помощи окрашивания гематоксилином и эозином так, чтобы оценить токсичность композиции носителя для ткани легкого. Для сравнения были проведены тесты при тех же условиях, как описано выше, используя LFA2000 (Липофектамин2000; производство Invitrogen) или NeoPhectin (производство NoePharm Corporation) вместо композиции носителя из примера 4. Поскольку крысы были убиты при помощи введения 500 мкг LFA2000, тест проводили с дозой LFA2000, замененной на 250 мкг.
Результаты показаны на Фиг.5. У крыс, которым местно вводили LFA2000 и NeoPhectin в легкие, случилось воспаление, и наблюдались местные отеки. В отличие от этого, подтвердилось, что такие воспалительные симптомы были снижены у крыс, которым была введена композиция носителя из примера 4. Результаты подтвердили, что композиция носителя из примера 4 обладает низкой токсичностью даже после местного пульмонального введения и является высокобезопасной.
Claims (10)
1. Композиция носителя для доставки нуклеиновой кислоты, содержащая (А) катионный липид со стероидным скелетом и (В) катионный липид типа соли четвертичного аммония.
2. Композиция носителя по п.1, дополнительно содержащая (С) вещество на масляной основе.
3. Композиция носителя по п.1, где компонент (А) представляет собой 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)карбамоил]холестерин и/или иодид 3β-[N',N',N'-триметиламиноэтан]холестерина.
4. Композиция носителя по п.1, где компонент (В) является по крайней мере одним членом, выбранным из группы, состоящей из соли бромида диметилдиоктадециламмония, диолеоилтриметиламмонийпропана и гидрохлорида N-[1-(2,3-бис(олеоилокси)пропил)]-N,N,N-триметиламмония.
5. Композиция носителя по п.1, где компонент (В) содержится в пропорции от 10 до 200 вес.ч. на 100 вес.ч. компонента (А).
6. Композиция носителя по п.1, где композиция носителя является композицией носителя для доставки siPHK.
7. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты, содержащая композицию носителя по любому из пп.1-5 и нуклеиновую кислоту.
8. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.7, где нуклеиновой кислотой является siPHK.
9. Способ введения нуклеиновой кислоты, включающий приведение композиции для доставки нуклеиновой кислоты по п.7 в контакт с клеткой для введения нуклеиновой кислоты в клетку.
10. Применение (А) катионного липида со стероидным скелетом в сочетании с (В) катионным липидом типа соли четвертичного аммония для получения композиции носителя для доставки нуклеиновой кислоты.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2005303497 | 2005-10-18 | ||
| JP2005-303497 | 2005-10-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008119498A RU2008119498A (ru) | 2009-11-27 |
| RU2421227C2 true RU2421227C2 (ru) | 2011-06-20 |
Family
ID=37962449
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008119498/15A RU2421227C2 (ru) | 2005-10-18 | 2006-10-17 | Композиция носителя для транспорта нуклеиновой кислоты |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8030075B2 (ru) |
| EP (1) | EP1946761B8 (ru) |
| JP (1) | JP5046952B2 (ru) |
| KR (1) | KR101324065B1 (ru) |
| CN (2) | CN101291678B (ru) |
| AR (1) | AR057553A1 (ru) |
| AU (1) | AU2006305318B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0617449A2 (ru) |
| CA (1) | CA2624840A1 (ru) |
| CY (1) | CY1114586T1 (ru) |
| DK (1) | DK1946761T3 (ru) |
| ES (1) | ES2412029T3 (ru) |
| MY (1) | MY149502A (ru) |
| PL (1) | PL1946761T3 (ru) |
| PT (1) | PT1946761E (ru) |
| RU (1) | RU2421227C2 (ru) |
| SI (1) | SI1946761T1 (ru) |
| TW (1) | TW200800235A (ru) |
| WO (1) | WO2007046356A1 (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW200800235A (en) * | 2005-10-18 | 2008-01-01 | Otsuka Pharma Co Ltd | Carrier composition for nucleic acid transport |
| CN102905763B (zh) | 2009-12-23 | 2015-06-17 | 诺华股份有限公司 | 脂质、脂质组合物和使用它们的方法 |
| US8633029B2 (en) | 2010-03-15 | 2014-01-21 | Yamaguchi University | Agent for improving gene transfer efficiency to mammalian cells |
| CN104428005B (zh) * | 2012-05-23 | 2019-05-10 | 俄亥俄州立大学 | 用于反义寡核苷酸递送的脂质纳米颗粒组合物 |
| WO2015154002A1 (en) * | 2014-04-04 | 2015-10-08 | Ohio State Innovation Foundation | Oligonucleotide lipid nanoparticle compositions, methods of making and methods of using the same |
| EP3329011B1 (en) * | 2015-07-30 | 2019-12-18 | Arcis Biotechnology Holdings Limited | Method and composition |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993005162A1 (en) * | 1991-08-28 | 1993-03-18 | The University Of Tennessee Research Corporation | Method for delivering nucleic acids into cells |
| RU2123492C1 (ru) * | 1993-02-19 | 1998-12-20 | Ниппон Синяку Ко., Лтд | Производные глицерина, средство для доставки физиологически активного вещества и фармацевтическая композиция |
| WO1999031132A1 (en) * | 1997-12-12 | 1999-06-24 | The University Of Queensland | NOVEL SURFACE PROTEIN OF $i(NEISSERIA MENINGITIDIS) |
| WO2000027795A1 (en) * | 1998-11-12 | 2000-05-18 | Invitrogen Corporation | Transfection reagents |
| WO2004004758A1 (en) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Lipoxen Technologies Limited | Method to enhance an immune response of nucleic acid vaccination |
| WO2004033620A2 (en) * | 2001-11-02 | 2004-04-22 | Insert Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for therapeutic use of rna interference |
| RU2250782C2 (ru) * | 1999-06-29 | 2005-04-27 | Петер СЕГЕ | Способ получения биоконъюгатов на основе поликатионов, пригодных для транспортировки в организм различных видов активных веществ |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030092180A1 (en) | 2001-08-27 | 2003-05-15 | David Lewis | Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo |
| US5965542A (en) * | 1997-03-18 | 1999-10-12 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Use of temperature to control the size of cationic liposome/plasmid DNA complexes |
| DE60126801T2 (de) * | 2000-10-25 | 2007-12-06 | The University Of British Columbia, Vancouver | Lipidformulierungen zur zielgerichteten abgabe |
| CA2437555A1 (en) * | 2001-02-01 | 2002-08-08 | Yiyu Zou | Stabilised polymeric aerosols for pulmonary gene delivery |
| US20030096414A1 (en) * | 2001-03-27 | 2003-05-22 | Invitrogen Corporation | Culture medium for cell growth and transfection |
| US7713942B2 (en) * | 2001-04-04 | 2010-05-11 | Nordic Vaccine Technology A/S | Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides |
| ES2559828T3 (es) * | 2003-07-16 | 2016-02-16 | Protiva Biotherapeutics Inc. | ARN de interferencia encapsulado en lípidos |
| JP2008520209A (ja) | 2004-11-17 | 2008-06-19 | ユニヴァーシティ・オブ・メリーランド，バルチモア | ｓｉＲＮＡの有効なキャリアとしての高度に枝分かれしたＨＫペプチド |
| US20070087045A1 (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Industrial Technology Research Institute | Lipid carrier and method of preparing the same |
| TW200800235A (en) * | 2005-10-18 | 2008-01-01 | Otsuka Pharma Co Ltd | Carrier composition for nucleic acid transport |
-
2006
- 2006-10-16 TW TW095138027A patent/TW200800235A/zh not_active IP Right Cessation
- 2006-10-17 DK DK06811872.8T patent/DK1946761T3/da active
- 2006-10-17 BR BRPI0617449-3A patent/BRPI0617449A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-10-17 AR ARP060104512A patent/AR057553A1/es unknown
- 2006-10-17 PL PL06811872T patent/PL1946761T3/pl unknown
- 2006-10-17 US US12/083,727 patent/US8030075B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-17 KR KR1020087011745A patent/KR101324065B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-17 RU RU2008119498/15A patent/RU2421227C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-10-17 MY MYPI20081086A patent/MY149502A/en unknown
- 2006-10-17 CA CA002624840A patent/CA2624840A1/en not_active Abandoned
- 2006-10-17 EP EP06811872.8A patent/EP1946761B8/en not_active Not-in-force
- 2006-10-17 PT PT68118728T patent/PT1946761E/pt unknown
- 2006-10-17 SI SI200631574T patent/SI1946761T1/sl unknown
- 2006-10-17 JP JP2007540975A patent/JP5046952B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-17 CN CN2006800389545A patent/CN101291678B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-17 ES ES06811872T patent/ES2412029T3/es active Active
- 2006-10-17 CN CN201110461144.3A patent/CN102512689B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-10-17 WO PCT/JP2006/320617 patent/WO2007046356A1/ja active Application Filing
- 2006-10-17 AU AU2006305318A patent/AU2006305318B2/en not_active Ceased
-
2013
- 2013-06-11 CY CY20131100464T patent/CY1114586T1/el unknown
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993005162A1 (en) * | 1991-08-28 | 1993-03-18 | The University Of Tennessee Research Corporation | Method for delivering nucleic acids into cells |
| RU2123492C1 (ru) * | 1993-02-19 | 1998-12-20 | Ниппон Синяку Ко., Лтд | Производные глицерина, средство для доставки физиологически активного вещества и фармацевтическая композиция |
| WO1999031132A1 (en) * | 1997-12-12 | 1999-06-24 | The University Of Queensland | NOVEL SURFACE PROTEIN OF $i(NEISSERIA MENINGITIDIS) |
| WO2000027795A1 (en) * | 1998-11-12 | 2000-05-18 | Invitrogen Corporation | Transfection reagents |
| RU2250782C2 (ru) * | 1999-06-29 | 2005-04-27 | Петер СЕГЕ | Способ получения биоконъюгатов на основе поликатионов, пригодных для транспортировки в организм различных видов активных веществ |
| WO2004033620A2 (en) * | 2001-11-02 | 2004-04-22 | Insert Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for therapeutic use of rna interference |
| WO2004004758A1 (en) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | Lipoxen Technologies Limited | Method to enhance an immune response of nucleic acid vaccination |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2624840A1 (en) | 2007-04-26 |
| BRPI0617449A2 (pt) | 2011-07-26 |
| AU2006305318A1 (en) | 2007-04-26 |
| CN102512689B (zh) | 2014-08-20 |
| EP1946761A1 (en) | 2008-07-23 |
| HK1171689A1 (en) | 2013-04-05 |
| PL1946761T3 (pl) | 2013-08-30 |
| WO2007046356A1 (ja) | 2007-04-26 |
| DK1946761T3 (da) | 2013-04-15 |
| US8030075B2 (en) | 2011-10-04 |
| JP5046952B2 (ja) | 2012-10-10 |
| AU2006305318B2 (en) | 2011-08-25 |
| MY149502A (en) | 2013-09-13 |
| CN101291678B (zh) | 2012-03-28 |
| PT1946761E (pt) | 2013-05-27 |
| EP1946761B1 (en) | 2013-04-03 |
| SI1946761T1 (sl) | 2013-06-28 |
| EP1946761A4 (en) | 2012-01-25 |
| CN101291678A (zh) | 2008-10-22 |
| KR101324065B1 (ko) | 2013-10-31 |
| ES2412029T3 (es) | 2013-07-09 |
| CN102512689A (zh) | 2012-06-27 |
| EP1946761B8 (en) | 2013-05-22 |
| JPWO2007046356A1 (ja) | 2009-04-23 |
| US20090258923A1 (en) | 2009-10-15 |
| KR20080059648A (ko) | 2008-06-30 |
| RU2008119498A (ru) | 2009-11-27 |
| TW200800235A (en) | 2008-01-01 |
| TWI376225B (ru) | 2012-11-11 |
| HK1119956A1 (en) | 2009-03-20 |
| AR057553A1 (es) | 2007-12-05 |
| CY1114586T1 (el) | 2016-10-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102537540B1 (ko) | 만노스를 포함하는 지질 나노입자 또는 이의 용도 | |
| RU2421227C2 (ru) | Композиция носителя для транспорта нуклеиновой кислоты | |
| CN101163796B (zh) | 阳离子脂质及应用方法 | |
| RU2476229C2 (ru) | Композиция носителя для своевременной доставки нуклеиновых кислот | |
| RU2465009C2 (ru) | Комплекс нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты | |
| WO2010101226A1 (ja) | 核酸複合体、及び核酸送達用組成物 | |
| CN120754262A (zh) | 一种核酸递送载体及其制备方法和应用 | |
| HK1119956B (en) | Carrier composition for nucleic acid transport | |
| HK1171689B (en) | Carrier composition for nucleic acid transport | |
| HK1139041B (en) | Prompt nucleic acid delivery carrier composition |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20161018 |