SE468231B - Foerfarande foer att paavisa smaacelligt lungcarcinomantigen och anvaendning av antikroppar mot fukosylsialosylgangliotetraos foer framstaellning av komposition foer behandling eller in vivo/ diagnos - Google Patents
Foerfarande foer att paavisa smaacelligt lungcarcinomantigen och anvaendning av antikroppar mot fukosylsialosylgangliotetraos foer framstaellning av komposition foer behandling eller in vivo/ diagnosInfo
- Publication number
- SE468231B SE468231B SE8402702A SE8402702A SE468231B SE 468231 B SE468231 B SE 468231B SE 8402702 A SE8402702 A SE 8402702A SE 8402702 A SE8402702 A SE 8402702A SE 468231 B SE468231 B SE 468231B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- methanol
- fuk
- antigen
- tissue
- chloroform
- Prior art date
Links
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims 2
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims abstract 4
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- FWIXNTNLTPUNRL-BBKMPEOTSA-N n-[(2s,3r,4r,5r,6r)-2-[(2r,3r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3r,4r,5r)-1,2,4,5-tetrahydroxy-6-oxohexan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-3-yl]acetami Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)C)[C@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)[C@H](O)[C@H]1O FWIXNTNLTPUNRL-BBKMPEOTSA-N 0.000 claims description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims 1
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 abstract description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 abstract description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 abstract 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 abstract 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 29
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 27
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol;hydrate Chemical compound O.OC.ClC(Cl)Cl SIHHLZPXQLFPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 3
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 239000005367 kimax Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 244000309715 mini pig Species 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- UZVUSORDFOESJG-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-3-methyl-6-propan-2-ylphenol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C(Br)=C1O UZVUSORDFOESJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007630 basic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical class 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/0491—Sugars, nucleosides, nucleotides, oligonucleotides, nucleic acids, e.g. DNA, RNA, nucleic acid aptamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K40/17—Monocytes; Macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/20—Cellular immunotherapy characterised by the effect or the function of the cells
- A61K40/24—Antigen-presenting cells [APC]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
- A61K40/41—Vertebrate antigens
- A61K40/42—Cancer antigens
- A61K40/4256—Tumor associated carbohydrates
- A61K40/4258—Gangliosides, e.g. GM2, GD2 or GD3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6006—Cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
- A61K2039/622—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier non-covalent binding
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2474/00—Immunochemical assays or immunoassays characterised by detection mode or means of detection
- G01N2474/20—Immunohistochemistry assay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/813—Cancer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
468 231 kemiska strukturen Fucu-2Ga1ß-3GalNAcB-4(NeuAcu-3)Galß- 4610-Cer eller IV2FuII3(heuAcGgOse4Cer, med kortbeteck- ningen Fuk-GM1 (IUPAC-IUB Lipid Document, 1977). Denna gangliosid isolerades först från oxhjärna (Ghidoni et 5 al., J. Neurochem. 27, 511-515, 1976) men hállpunkter för dess förekomst i andra'däggdjursorgan som fettväv, mjâlte och testis har också förekommit. Hakomori och medarbetarex (Baumann et al., Cancer Res. 39, 2637-2643, 1979) fann i ratthepatom en gangliosid, som man preliminärt identifi- 10 erade som Fuk-GM1. Ett definitivt fastläggande av struk- turen för gangliosiden gjordes av Svennerholm och med- arbetare pà gangliosider, isolerade fran nervvävnad hos gris :Fvedman et a1.,_'eu1~. J. aiochem. 116, 553-564, ' 1981), vilka_ccksà demonstrerade att kronisk klorokinin- 15 toxikation hos gris gav upphov till ökad lysosomal in- lagring av.Fuk-GH1 i nervvävnad CKlinghardt et al., J.
Neurochem. 37, 897-908, 1981) men ocksa i flera inre or- gan (Fredman et al., Biochem. J. EÜ1, 581-S88, 1982).
Trots detta har vi ej kunnat visa förekomst av denna 20 gangliosid i normal human lungvävnad, ej heller i carci- nom fràn ett flertal organ hos avlidna patienter. Hos = patienter med smàcellscarcinom har vi också överraskande funnit att tumörantigenet i form av Fuk-GM1 gangliosid avsöndras till blodserum. Med denna av oss utarbetade 25 metoden har tumörantigenet ej kunnat påvisas hos personer utan tecken till cancer, ej heller hos patienter med and- ra former av cancer än anaplastiskt smàcellscarcinom. '~ . n inom ramen för föreliggande uppfinning har otarbetats 30 förfarande för isolering av den tumörassocierade glykoli- piden, fukosylsialosylgangliotetraosylceramid med kort- beteokningen gangliosid Fuk-GN1, i ren form fran human tumörvävnad och från djurvävnad. Genom ett speciellt för- farande har den renade gangliosiden fatt en ökad immuno- 35 gen aktivitet och använts för framställning av mono- klonala antikroppar. Inom ramen för föreliggande uppfin- 10 15 20 25 30 :lu- m = 468 231 ning har utarbetats förfarande för pàvisande och bestäm- ning av nämnda antigen i vävnader, oellutstryk och 'kroppsvåtskor. Samtliga förfaranden för diagnostiskt bruk grundar sig pa att antigenet påvisas genom bindning till de_speoifika monoklonala antikropparna framställda mot det rena gangliosidantigenet Fuk-GM1.
Som exempel på vävnader, celler och vätskor, där bestäm- ningen kan ske, kan nämnas operations- eller autopsimate- rial av lungvâvnad, levervävnad, hjärnvävnad och lik- nande, celler erhållna genom biopsi av lungvävnad'eller annat organ, där teoken till dottersvulst kan misstänkas, genom sköljning av luftrör, genom upphostning eller genom punktion av lungsäok eller bukhàla, biologiska vätskor' såsom blod, plasma, serum, lymfvätska, ryggmärgsvätska, urin, saliv eller liknande.
Det antigen som användes enligt föreliggande uppfinning benämnas fukosylsialosylgangliotetraos och har följande struktur: Fuod-2GalB-3GalNAoB-4(NeuAca-3)Galß-4Glc eller ' i (NeuGoo-3) 2 Neuaecneaeensgoseß, uuPAc-iua' Lipia oaeumenfi, 3 IV Fuoll 1977). Inom ramen för föreliggande uppfinning faller även. detektion av antigen, som modifierats genom att den terminala glukos (Glc)-molekylen avlägsnats eller att sialinsyran substituerats till GaINAc-molekylen i stället för till den inre galaktosmolekylen.
Det antigen som använts för att framställa de monoklonala antikroppar som avses i föreliggande sammanhang har framställts av antigen bundet till en lipidgrupp (ceramid=acylsfingosin) men skall avse också bindning till varje annan förening. V Antigenet som användes enligt uppfinningen kan framstäl- las ur tumörvävnad, som erhållits vid obduktion av patienter, vilka avlidit av smàoellscaroinom i lunga.
Koncentrationen av antigenet i lungtumörvävnad är som 463 251 Q 4 10 15 20 regel ringa, speciellt om patienten undergàtt cytostatisk behandling, och isoleringen av antigenet blir därvid mödosam. Man har funnit att det finnes ett annat biolog- iskt utgangsmaterial för isolering av tumörantigenet. Om en viss miniatyrstam av gris utfodras med klorokin i' kosten under 3-6 månader bildas höga konoentrationer av antigenet i grisens centrala nervsystem, speciellt i de dorsaia-rotganglierna. Ur hjärna"och"ganglier kan'det humana lungtumörassocierade antigenet framställas med relativ lätthet och man är inte hänvisad till obduktions- material med alla praktiska och etiska svàrigheter'som sådant material kan medföra.
Man har tidigare funnit att gangliosider, dvs. glykolipi- der i vilka ingar bunden sialinsyra, har svag immunogen aktivitet pch att det därför varit svart att framställa antikroppar med hög aktivitet och specificitet mot dem.
Genom att adsorbera den renframställda gangliosiden Fuk- GN1 till ett bakteriemembran med känd hög immunogen akti- vitet har ett flertal monoklonala antikroppar med hög specificitet och aktivitet kunnat framställas. p 10 15 20 25 30 5 I 463 251 Exempel 1.
FRAHSTÄLLNING AV FUKOSYESIALOSYLGANGLIOTETRAOSANTIGEN I.
FORM AV GANGLIOSID FUK-GM1 FRÅN NINIATYRGRIS, TYP GÖTTINGEN ëlereßinës&§ndlin9=ax_gris~- Miniatyrgris, typ Göttingen, sattes, när den uppnatt en vikt av 20-30 kg, pà en kost i vilken det vanliga fodret försatts med 30 g klorokindifosfat/kg torrfoder? Först blandades de olika ingredienserna med varandra under tillsats av vatten, varefter fodret pelleterades och torkades. Grisarna utfodrades med detta foder under ca 2 '_mànaders tid. Djuren avlivades genom sövning och blod-_ tappning under narkosen. Nervsystemet uttogs i sin hel- het, inkluderande retina och speciellt de dorsala spinal- ganglierna. Hjärna+retina, dorsalganglier och ryggmärg upparbetades separat, da dorsalganglierna har mer än 20 ggr så mycket Fuk-GN1/g vävnad som hjärna, vilken i sin tur har 3-5 ggr högre koncentration än ryggmärg. f -š§§aa5§i2n;šx_Qan9liesis_irën_xäxna9 Vävnaden homogeniserades under tillsats av vatten. Till 1 volym vävnad (1 kg vävnad motsvarar 1 liter vävnad) sat- tes 3 volymer vatten. Efter homogenisering i en knivhomo- genišator vid en hastighet av 1500 varv/min under 3 min tillsattes under omröring 10 volymer metanoä och 5 volym- ~- ' er kloroform. Ett klart extrakt avskiljdes genom centri- fugering. Till vävnadsklumpen sattes 4 volymer vatten och vävnaden homogeniserades anyo och 10 volymer metanol och 15 volymer kloroform tillsattes under blandning. Ett klart extrakt avskiljdes genom centrifugering. Till de samman- slagna extrakten sattes'vatten för att ge ett slutligt volymförhàllande kloroform-metanol-vatten av 4:8:S,ó. 468 231 UI 10 15 20 25 30 Efter blandning i separationskärl avskiljdes'den uppkomna övre fasen. Till den undre fasen sattes pà nytt en lika stor=voIym metanol och efter blandning 0;7_volymer vatten. Efter försiktig tlandning lämnades separations- kärlet tills tva skarpa vätskefaser uppstod. Den övre fasen tillvaratogs och kombinerades med den första. De sammanslagna överfaserna försattes med 0,1 volym isobuta4 nol för att hindra stötkokning och därefter indunstades extraktet i rotationsindunstare pà vattenbad med en tem- peratur av 50 grader Celsius. Återstoden försattes med 0,5 volymer metanol per volym ursprunglig vävnad ooh 0,5 volymer 1,0 M kaliumhydroxid ooh fick stà över natten vid rumstemperatur. Darefter tillsattes 1,0 M saltsyra ii vatten under kraftig omblandning till pH 6-7, och dialys mot destillerat vatten utfördes under tva dygn. h Isolering av en monosialogangliosidfraktion genom jon- ësxëarkremaåearaiii _________________________________ __ Det dialyserade orena gangliosidextraktet indunstades och áterlöstes i 1 ml kloroform-metanol~vatten (ó0:30:4,5) per g ursprunglig vävnad. Spherosil-DEAÉ-dextran i ace? tatform paokades i en pelare med 20 mm.inre diameter i samma lösningsmedel-7 minst 1 ml jonbytare för varje 5 g av nervvävnad. (Pelaren bör optimalt ej rymma mer än 50 -ml jonbytare). Det rena gangliosidextraktet pàsattes långsamt och pelaren eluerades efteråt med 10 bäddvolymer av kloroformmetanol-vatten (60:30:4,5). Därefter eluera~ des monosialogangliosidfraktionen med 10 bäddvolymer av 0,02 H kaliumaoetat i metanol.-Monosialogangliosídfrak- tionen indunstades och avsaltades genom dialys mot des- tillerat vatten. 10 15 20 as 30 468 231 För kromatografin användes 1 g Latrobead för varje gram ursprunglig mängd nervvävnad, dock minst 25 g. Gelen upp- slammades i kloroform-metanol (volymförhàllande 4:1) och fylldes pà en glaspelare försedd med sintrad glas- platta och med en diameter pà 15%20 mm beroende pa mång- den gel. Gangliosidfraktionen löstes i 10 ml kloroform- metanol-vatten (volvmförhàllande ó5:25:4) och applie oerades på pelaren.'Pelaren eluerades först med 15 volym- er kloroform-metanol~vatten (65:25:4) för varje gram gel (vikt/volym) som samlades i en fraktion. Elueringen fort- satte; därefter med klorøfnrm-metanol-2,5 M ammbniàk (volymförhàllandaÄ&Dšé0:9) och 5 ml fraktioner uppsam-_ lades pà fraktionssamlare. Elueringen följdes genom att testa 10 pl.av fraktionerna med högupplösande tunnskikts~ kromatografi (HPTLC) med samma lösningsmedel som användes för pelarkromatografin, nämligen kloroformmetanol-2,5 N ammoniak (óO:4D:9) och gangliosiderna visualiserades med resorcinolreagens. De fraktioner som innehöll Fuk-GM1 sammanfördes ooh indunstades till torrhet.
Slutlig rening av Fuk-GM1 skedde genom preparativ tunnf skiktskromatografi, 5 pfl gangliosid sattes på en tunn- skiktsplatte-(20x20 cm, 0,25 mm, Merck AG, Darmstadt, FRG), som kromatograferades under 1 timme med kloroform- metanol-2,5 H ammoniak vid 21 grader Celsius. Efter av- slutad kromatografi sprayades plattan med D,D1% brom- tymolblatt i vatten och Fuk-GM1-bandet skrapades ut.
Gangïiosiden eluerades fràn gelen med kloroform-metanol- vatten i volymförhàllandet 30:6D:2D, försattes med 1 droppe 0,1 M KQH löst 1 metanol och indunsfiades till torrhet. Gangliosiden upplöstes i en liten volym kloro- formmetanol i volymförhàllandet 2:1 ooh förvarades i tätt 'rör (Kimax-rör med teflonskruvlock) i mörker vid +4 grader Celsius. 468 251 8 10 15 20 25, 30 w' nfl Exempel 2.
ANVÄNDNING AV RENFRANSTÄLLD GANGLIOSID FUK-GM1 FÖR FRAN- STÄLLNING AV NONOKLONALA ANTIKROPPAR'MOT FUKOSYLSIQLO- SYLGANGLIOTETRAOSANTIGEN.
Den renframsrällda gangliosiden Fuk-GM1 fran exampe1 1 adsorberades till syratvättade Salmonella Minnesota bak- terier före immunisering enligt den princip som finns beskriven av Young, N.N. och medarbetare (J. Exp. Hed. 150, ions-1019, 1979).
Balb/o möss, 6-8 veckor gamla, immuniserades intravenöst med 5 pg gangliosid Fuk-GM1 adsorberat till 50 pg syra- tvättade Salmonella Minnesota bakterier uppslammade i 100 pl fosfatbuffrad fysiologisk koksaltlösning, pH 7,4. En ny immunisering utfördes efter två veckor med samma dos av immunogen under identiskt samma förhållanden (boostar- dos).
Tre dagar efter boosterdosen isoleradeš mjältceller fràn de immuniserade mössen och fusionerades med Sp 2/0 mye- lomoeller. be uppkomna oellhybriderna förökades, under- söktes och klonades enligt det protokoll som utarbetats av'd@ st. Groth, s.F. & seheidegfiep, o. ca. immunol.
Methods 1-21, 1980). Kulturmedium samlades fràn varje mikrotiterkropp med växande cellhybrider, för att under- söka om mediet innehöll antikropp riktad mot Fuk-GM1. Be- stämníngen utfördes i ett ELISA-system på följande sätt.
Fuk-GM1 löstes i metanol och 50 pmol sattes till varje enskild kopp.i en polyvinylmikrotíterplatta. Sedan' metanolen avdunstat sattes till koppen 100 pl cellhybrid- kulturmedium spätt med en lika stor volym 0,01 H fosfat- buffrad fysiologisk koksaltlösning (0,14 M), pH 7,5.
Inkubationen skedde under 17 timmar. Därefter sattes till 'ä- 10 15 20 25 30 _35 9 _ 468 231 koppen 100 pl av peroxidas (HRP)-konjugerad-kanin-anti- mus-immunoglobulin spätt 1 pà 200 i den ovannämnda fos- ïatbujferten, nu försatt med 1% bovint serumalbumin.
Efter inkubation under 4 timmar, sattes sedan 100 pl enzymsubstrat till koppen (0,1% ortofenyldiamin i oitrat- buffert, pH 4,5 med max H_,_o¿'>. efter s min reaktion av- lästes absorbansen vid 450 nm i en Titertek mikrotiter-' SCBTIHEI* .
'Hybriderna bedömdes som positiva, om absorbansen var mer än dubbelt så stor som medelvärdet för blankproven. Od- lingsmedium från-positiva hybrider sparades för fortsatt undersökning (se nedan), medan de positiva hybriderna frystes i flytande kväve.
Kulturmedium frän de hybrider som var positiva mot Fuk- GM1 undersöktes för korsreaktivitet mot humana lymfooy- ter. Humana lymfocyter (HuLy-c) ísolerades genom gra- dientoentrifugering fràn fem blodgivare med olika ABH- blodgrupper och cellerna poolades. ELISA-test utfördes mot de immobiliserade cellerna. Hybrider, som bildade antikroppar, vilka korsreagerade med HüLy~o, uteslöts .frán vidare undersökning.
De Fuk-GN1-positiva, HuLy-o-negativa hybriderna klonades genom begränsad utspädning_och_förökades.'Isotypen av varje klon bestämdes genom Mancini-teknik med användning av išotyp-specifika antimus~immunoglobuliner.
Reaktiviteten av de Fuk-GM1 positiva, HuLy-o-negativa klonerna undersöktes i en dubbel antikroppfastfas (solid _phase)-radioimmunitetsbestämning. Fuk-GM1 ooh ett stort antal neutrala glykolipider ooh gangliosider löstes i metanol ooh pipetterades ned i kopparna pà en mikrotiter- platta och metanol avdunstades. 468 251 i 1" i 10 15 20 25 30 Efter inkubation med de monoklonala antikropparna mot Fuk-GM1 bestämdes bunden antikropp_med 125I-märkt anti-_ ' mus-immdnoglobulin. h Speoifioiteten hos de monoklonala antikropparna bestämdes ß också genom tunnskiktskromatografisk immunoidentifikation av gangliosidantigen. Den totala gangliosidfraktionen,'" j * -isolerad fràn ett flertal olika vävnader, separerades pa "high performance" tunnskiktsplattor (HPTLC) av alumi- nium och plattorna inkuberades med kulturmediet fràn de positiva hybriderna spätt med TRlSbuffrad fysiologisk koksaltlösning (pH 7]B) innehållande 1% bovint serumal-g bumin. Bunden monoklonal antikropp pavisades med 125I*i märkt antimus-immunoglobulin, som exponerades mot rönt-' genfilm under 12-24 timmar. ' .
Pe monoklonala antikroppar som undersökts har samtliga reagerat negativt mot neutrala glykolipider. Vissa anti- kroppar har visat svag reaktion mot enstaka andra gang- liosider än Fuk~GM1, medan flertalet icke har visat nagon reaktivitet mot andra gangliosider än Éuk-GM1. I de följf ande exemplen har endast använts monoklonala antikroppar med exklusiv specificitet.för Fuk-GM1..
Exempel 3.
PÅVISANDE AV FUKOSYLSIALOSYLGANGLIOSYLTETRAOSANTIGEN I SHÅCÉLLIGA ANAPLASTISKA LUNGCARCINOM..
I stort sett samma principförfarande användes för iso- _ lering av tumörantigenet som i exempel 1, men metoden har anpassats till de små vävnadsmängder som användes för analys. Till ca 0,1 g vävnad sattes 0,5 ml vatten och :lg vävnaden homogeniserades i en konisk homogenisator med l teflonpistill i isbad. Efter avslutad homogenisering tillsattes 1,6 ml metanol och 0,8 ml kloroform.-Efter 10 15 20 25 30 468 231 ll blandning centrifugerades röret vid 800xG i 10 min. Det klara centrifugatet överfördes i ett litet Kimaxrör med teflonpropp. Fällningen i röret uppslammades i 0,5 ml vatten och därefter tillsattes metanol och kloroform i samma volym som vid den första extraktionen. Blandning och centrifugering utfördes som förut. De tva extrakten. kombinerades och vatten tillsattes för att ge ett volym- förhàllande-klorcform-metanol-vatten~av"41ßr5;6.-Centri-' fugering gjordes vid 100xG i 5 min. överfasen-överfördes till en liten inslipad bundkolv och till underfasen sattes 0,5 ml kloroform och 1,0 ml metanol. Efter öland- ning tillsattes 0,7 ml vatten och efter förnyad blandning skedde centrifugering vid 100xG i 5 min. överfasen över- fördes till den inslipade rundkolven och 0,1 volymer iso- butanol tillsattes. Därefter skedde indunstning till torrhet och tillsats av 0,1 M Na0H i metanol. Röret fick sta minst 1 timme vid rumstemperatur.
Efter avslutad transesterifiering tillsattes 4 ml kloro- form och 1 ml metanol och innehållet hälldes pà en liten pelare med 1 g Sephadex G 25 packad i kloroform-metano1- vatten (volymförhàllande b0:30:4,5). Pálaren eluerades med 15 ml Kloroform-metanol-vatten (60:30:4,5). Eluatet fick därpå rinna på en pelare packad med 1 g DEAE- Sepharos (Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Sverige) i acetatform. Efter tvättning av pelaren med 10 ml meta- nol eluerades monosialogangliosiderna med 10 ml 0,02 M kaliümaoetat i metanol. Efter indunstning och àterlös- ning i kloroform-metanol-vatten (volymförhallande 65:25:4) separerades de enkla monosialogangliosiderna fràn Fuk-GM1 genom eluering med 15 kolonnvolymer 65:25:4 lvikt/volym), varefter Fuk-GM1-fraktionen eluerades med 10 volymer klorcfcrm-metanol-vatten (volymförhàllande 50:40:10). 468 251 10 15 20 25 30 12 En alikvot av den renade Fuk-GM1-fraktionen av vävnad upplöstes i metanol och 50 pl extrakt sattes till en av kopperna i en polivinylmikrotiterplatta. Till andra kopp-_ är i plattan sattes scanqandrösningar om 1 ti11 25 pmol ren Fuk-GM1 i metanol. Lösningsmedlet bringades att äv- dunsta under en ström av kvävgas. Till okända prov_och~ standagder_sattes 10-lQQ pg_mpnokIogal antikropph som var specifik för'Fuk-Gfil och var framställd enligt Exempel 2, löst i fosfatbuffrad fysiologisk koksaltlösning, pH 7,4, 'jämte 1% bovint serumalbumin (PBS). Proven inkuberades under 1 timme vid rumstemperatur, varefter koppen'tvätt-.- ades 3 ggr med PBS-lösning. Därefter tillsattes 1251: märkt antimus-immunoglobulin, som fick reagera under 3 ' timmar. Efter förnyad tvättning med PBS klipptes stan-' darder och prov ur mikrotiterplattan ooh räknades i en X -räknare. Konoentrationen av fukosylsialosylganglio- tetraosyllipidantigen i de okända proven beräknades fràn standardkurvan för rent Fuk-GM1.
Under de undersökta förhållandena har Fuk-GM1 påvisats i '19 fall av 20 smacellslungoaroinom. Det har ej påvisats i andra former av lungoaroinom (skivepitél, storoells- oaroinom eller adenooaroinom), ej heller i adenooaroinom fràn mammar-, ventrikel-, kolorektal-, urinblàse- eller livmodervävnad. Spärmängder av antigenet har pavisats i normal och oenoeromvandlad pankreasvävnad.
\ .Exempel 4.
PÅVISANDE AV FUKOSYLÉIALOSYLGANGLiOTETRÅOSANTIGEN I BLOD-g senum FRÅN PATIENTER men SMÅCELLIGT ANAPLAsT1sKT Luma- cARc1Non. ' ' 1 ml blodserum spätt med 0,5 ml fysiologiskt koksalt droppades ned i 4 ml metanol i ett litet Kimaxrör under kontinuerlig blandning. Därefter tillsattes 2 ml kloro-. 10 15 20 . 25 30 1 13 _ 468 2331 form och provet blandades omsorgsfullt och centrifugera- des vid 800xG under 10 minuter. Det klara oentrifugatet överfördes till en liten rundkolv och indunstades till torrhet. Det löstes i 5 ml kloroform och sattes pä'1 g kiselgelpelare §Kiselgel 60, 230-400 mesh, Merck AG,' Darmstadt, FRG); Pelaren eluerades med 10 ml kloroform' och 15 ml kloroform-metanol-vatten (volymförhàllande * ó5:25:4) och därefter eluerades gangliosidantigenet ut med 10 mltkloroform-metanol-vatten (50:40:10). Det sista leluatet sattes långsamt pa en pelare med 1 g DEAE- Sepharos, som därefter eluerades med 10 ml metanolfl Komplexa monosialogahgliosider eluerades därefter med 10 ml 0,02 M kaloiumacetat i metanol. Saltet avlägsnades_" genom dialys mot destillerat vatten och gangliosidfrak- tionen löstes i metanol.
. Konoentrationen av Fuk-GM1 bestämdes med en dubbel fast- fasantikroppsmetod, vid vilken gangliosiden adsorberades till den fasta fasen och antigenet pavisades med mono- klonal antikropp och antimusimmunoglobulin. 20 pmol ren Fuk-GM1 och prover av komplex monosialogangliosidfraktion av serum löstes-i.metanol och seriespädningar av dessa (1/2 - 1/2048) pipetterades i kopparna på polyvinylmikro- ' titerplattor (Flow Laboratories art. nr 77-173-05) och indunstades. Kopparna blockerades med 20 pl + 1% bovint serumalbumin (BSA) i fosfatbuffrad fysiologisk koksalt- lösning (PBS) ooh därefter tillsattes 50 pl av monoklonal antikropp mot antigenet, spådd i 1% BSA i PBS. Efter inkubation under 4 timmar tvättades kopparna med 200 pl Pas. ' gEfter tvättningen mättes fixerad monoklonsl antikropp 125 I genom tillsats av antimusimmunoglobulin märkt med eller med peroxidas eller B-galaktosidas. Mätning av- koncentrationen av den andra antikroppen skedde i gamma- räknare eller efter tillsats av enzymsubstrat (ortofenyl- 14 468 231 diamin, se Exempel 2, eller metylumbel1iferyl-B-ga1aktos- id i citratbuffert, pH 4,2 och läsning av fluorescensen efter BÖ min i spektrofluorimeter). Koncentrationen ev íukosylsíalosylganglictetéaoeantigen i blodserum beräk- 5 nades från standavdproven av Fuk-GH1. Under de ovan she- cificerade förhållandena pàvisadés antigenet i serum_en- dest fràn petienter med säkerstälïd diagnos av smàóelle-' 0811092* . qr
Claims (1)
1. 0 15 20 25 468 231 15 P A T E N T K R A V Diagnostiskt förfarande in vitro för att hos en patient påvisa smàcelligt lungkarcinom och metastaser därav, k ä n n e t e c k n a t därav att eventuell förekomst av fukosylsialosylgangliotetraos (IV2FucII3NeuAc(NeuGc)GgOse4)-antigen/hapten påvisas i ett prov från patienten, vilken förekomst tas som indikation på att patienten har smàcelligt lungkarcinom eller att innehåller metastaser därav. Diagnostiskt förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav att antigenet/haptenet be- stämmes immunkemiskt med hjälp av en antikroppj företrä- desvis monoklonal, riktad mot fukosylsialosylgangliote- traos. Diagnostiskt förfarande enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t därav att den immunkemiska bestämningen sker på cellulär nivå i histologiska preparat. Användning av en antikropp, företrädesvis monoklonal, specifikt riktad mot fukosylsialosylgangliotetraos för tillverkning av en komposition för behandling och diagnostisering in vivo av smàcelligt lungkarcinom.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8402702A SE468231B (sv) | 1984-05-18 | 1984-05-18 | Foerfarande foer att paavisa smaacelligt lungcarcinomantigen och anvaendning av antikroppar mot fukosylsialosylgangliotetraos foer framstaellning av komposition foer behandling eller in vivo/ diagnos |
| DE8585850172T DE3582191D1 (de) | 1984-05-18 | 1985-05-15 | Verwendung eines spezifischen karzinomassoziierenden antigens (hapten), fucosylsialosylgangliotetrose (fuc-gm1) in diagnostischen und therapeutischen verfahren betreffend den menschlichen lungenkrebs (carcinomas von kleinen zellen). |
| EP85850172A EP0162825B1 (en) | 1984-05-18 | 1985-05-15 | The use of a specific carcinom associated antigen (hapten), fucosylsialosylgangliotetraose (fuc-gm1) in diagnostic or therapeutic procedures related to human lung cancer (small cell carcinomas) |
| AT85850172T ATE61734T1 (de) | 1984-05-18 | 1985-05-15 | Verwendung eines spezifischen karzinomassoziierenden antigens (hapten), fucosylsialosylgangliotetrose (fuc-gm1) in diagnostischen und therapeutischen verfahren betreffend den menschlichen lungenkrebs (carcinomas von kleinen zellen). |
| JP60105729A JPS6193A (ja) | 1984-05-18 | 1985-05-17 | 特異性がん関連抗原、フコシルシアロシルガングリオテトラオースおよびヒトの肺がんに関連する診断または治療処置におけるその使用 |
| US07/123,377 US4888275A (en) | 1984-05-18 | 1987-11-20 | Diagnosing and monitoring cancer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8402702A SE468231B (sv) | 1984-05-18 | 1984-05-18 | Foerfarande foer att paavisa smaacelligt lungcarcinomantigen och anvaendning av antikroppar mot fukosylsialosylgangliotetraos foer framstaellning av komposition foer behandling eller in vivo/ diagnos |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8402702D0 SE8402702D0 (sv) | 1984-05-18 |
| SE8402702L SE8402702L (sv) | 1985-11-19 |
| SE468231B true SE468231B (sv) | 1992-11-23 |
Family
ID=20355939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8402702A SE468231B (sv) | 1984-05-18 | 1984-05-18 | Foerfarande foer att paavisa smaacelligt lungcarcinomantigen och anvaendning av antikroppar mot fukosylsialosylgangliotetraos foer framstaellning av komposition foer behandling eller in vivo/ diagnos |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4888275A (sv) |
| EP (1) | EP0162825B1 (sv) |
| JP (1) | JPS6193A (sv) |
| AT (1) | ATE61734T1 (sv) |
| DE (1) | DE3582191D1 (sv) |
| SE (1) | SE468231B (sv) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57194876A (en) * | 1981-05-21 | 1982-11-30 | Seiko Seiki Co Ltd | Controlling method of grinding machine |
| WO1987002777A1 (en) * | 1985-10-24 | 1987-05-07 | Research Corporation Limited | Biochemical reagent |
| US5091178A (en) * | 1986-02-21 | 1992-02-25 | Oncogen | Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies |
| US5242824A (en) * | 1988-12-22 | 1993-09-07 | Oncogen | Monoclonal antibody to human carcinomas |
| DE4006308A1 (de) * | 1990-02-28 | 1991-08-29 | Sandoz Ag | Verwendung des monoklonalen antikoerpers br 55.2 gegen kleinzelliges lungenkarzinom |
| AU6102494A (en) * | 1993-02-05 | 1994-08-29 | Epigen, Inc. | Human carcinoma antigen (hca), hca antibodies, hca immunoassays, methods of imaging and therapy |
| EP2239582A1 (en) * | 2009-04-09 | 2010-10-13 | Nederlandse Organisatie voor toegepast -natuurwetenschappelijk onderzoek TNO | Assay system for determining binding to hydrophobic drugs |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3202894A1 (de) * | 1982-01-29 | 1983-08-11 | Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd., Tokyo | Verfahren zur bestimmung von tumor-assoziierten glykoprotein enthaltenden verbindungen, anwendung des verfahrens zur krebsdiagnose und kit fuer die anwendung des verfahrens |
| WO1983004311A1 (en) * | 1982-06-03 | 1983-12-08 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Process for preparing fucose antigen and antibody for distinguishing it, measurement of tumor-associated sugar chain utilizing the same, and kit for the measurement |
| ES526622A0 (es) * | 1982-10-08 | 1985-11-01 | Otsuka Pharma Co Ltd | Procedimiento de producir antigenos y sus intermedios |
| EP0118365B1 (en) * | 1983-03-04 | 1990-08-29 | Health Research, Inc. | Monoclonal antibodies to human breast carcinoma cells and their use in diagnosis and therapy |
| US4569788A (en) * | 1983-05-18 | 1986-02-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies against non small cell lung cancer |
| JPS6057254A (ja) * | 1983-09-09 | 1985-04-03 | Dainabotsuto Kk | 免疫学的測定法による糖脂質の定量方法 |
-
1984
- 1984-05-18 SE SE8402702A patent/SE468231B/sv not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-05-15 AT AT85850172T patent/ATE61734T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-05-15 EP EP85850172A patent/EP0162825B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-05-15 DE DE8585850172T patent/DE3582191D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-05-17 JP JP60105729A patent/JPS6193A/ja active Pending
-
1987
- 1987-11-20 US US07/123,377 patent/US4888275A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3582191D1 (de) | 1991-04-25 |
| US4888275A (en) | 1989-12-19 |
| SE8402702D0 (sv) | 1984-05-18 |
| EP0162825A2 (en) | 1985-11-27 |
| JPS6193A (ja) | 1986-01-06 |
| ATE61734T1 (de) | 1991-04-15 |
| EP0162825A3 (en) | 1987-10-07 |
| EP0162825B1 (en) | 1991-03-20 |
| SE8402702L (sv) | 1985-11-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fredman et al. | Monoclonal antibody A2B5 reacts with many gangliosides in neuronal tissue | |
| Lemieux et al. | Artificial antigens. Antibody preparations for the localization of Lewis determinants in tissues | |
| US5240833A (en) | Method for the production of monoclonal antibodies directed to tumor-associated gangliosides and fucogangliosides | |
| Ratcliffe et al. | Synthesis of the T [β-D-Gal-(1→ 3)-α-D-GalNAc]-antigenic determinant in a form useful for the preparation of an effective artificial antigen and the corresponding immunoadsorbent | |
| Marcus et al. | Localization of glycosphingolipids in human tissues by immunofluorescence | |
| JPS62190074A (ja) | ヒトの癌に付随したジフコガングリオシドを規定するハイブリド−マ抗体 | |
| EP0381310A1 (en) | Monoclonal antibodies directed to tumor-associated gangliosides and fucogangliosides and method for production thereof | |
| Westman et al. | Identification of the molecular and genetic basis of PX2, a glycosphingolipid blood group antigen lacking on globoside-deficient erythrocytes | |
| NO853397L (no) | Nye monoklonale antistoffer til glykokonjugater, fremgangsmaate til fremstilling derav og anvendelser av antistoffene. | |
| EP0173663B1 (en) | The use of a specific tumor associated antigen, sialosyllactotetraose, in diagnostic or therapeutic procedures related to cancer deseases | |
| NO830404L (no) | Paavisning av maligne tumor-celler. | |
| Knowles et al. | Monoclonal anti‐Type 2 H: an antibody detecting a precursor of the A and B blood group antigens | |
| SE468231B (sv) | Foerfarande foer att paavisa smaacelligt lungcarcinomantigen och anvaendning av antikroppar mot fukosylsialosylgangliotetraos foer framstaellning av komposition foer behandling eller in vivo/ diagnos | |
| JPS6057254A (ja) | 免疫学的測定法による糖脂質の定量方法 | |
| CN100458445C (zh) | 一种用于血型测定的灵敏度控制物制备方法、由该方法制得的改造细胞及其该灵敏度控制物的应用、进行灵敏度控制的方法以及试剂盒 | |
| PT92235B (pt) | Processo para a preparacao de um anticorpo monoclonal anti-fucosilceramida e de agentes de diagnostico que o contem | |
| WO1992019633A1 (en) | Sulfated glycolipids, containing a galactose-3-0-sulfate moiety, and specific catchers therefor for use in the prophylaxis or therapy of prediabetes, diabetes and/or associated complications in an individual | |
| DE69008178T2 (de) | Analyse von vitamin b12. | |
| Kundu et al. | Aminopropyl silica gel as a solid support for preparation of glycolipid immunoadsorbent and purification of antibodies. | |
| JP3286845B2 (ja) | Ｇｍ２特異的抗体の製造方法 | |
| Judd et al. | An Anti‐B Reagent Prepared from the α‐D‐Galactopyranosyl‐Binding Isolectins from Bandeiraea Simplicifolia Seeds | |
| EP0293940B1 (en) | Monoclonal antibody and method for preparation of hybridoma producing said antibody | |
| CN118620016B (zh) | 一种仿刺参海参皂苷半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用 | |
| EP0386140A1 (en) | Factors associated with essential hypertension | |
| EP0051593A1 (en) | Isolation of carbohydrates from cell tissue |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 8402702-8 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8402702-8 Format of ref document f/p: F |