[go: up one dir, main page]

TWI886314B - 抑制ｌｐａ表現之組合物及方法 - Google Patents

抑制ｌｐａ表現之組合物及方法 Download PDF

Info

Publication number
TWI886314B
TWI886314B TW110128888A TW110128888A TWI886314B TW I886314 B TWI886314 B TW I886314B TW 110128888 A TW110128888 A TW 110128888A TW 110128888 A TW110128888 A TW 110128888A TW I886314 B TWI886314 B TW I886314B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
lpa
oligonucleotide
galnac
nucleotides
seq
Prior art date
Application number
TW110128888A
Other languages
English (en)
Other versions
TW202220673A (zh
Inventor
馬克 艾布蘭
包柏 戴爾 布朗
亨立克 Ｔ 杜迪克
韓雯
安東 杜拉諾
Original Assignee
美商戴瑟納製藥股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商戴瑟納製藥股份有限公司 filed Critical 美商戴瑟納製藥股份有限公司
Publication of TW202220673A publication Critical patent/TW202220673A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI886314B publication Critical patent/TWI886314B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/312—Phosphonates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C12N2310/3533—Halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本文提供抑制脂蛋白元(a) (LPA)表現之寡核苷酸。亦提供包括該等寡核苷酸之組合物及其用途，特別是關於治療與LPA表現相關之疾病、病症及/或疾患之用途。

Description

抑制LPA表現之組合物及方法
本揭示案係關於抑制脂蛋白元(a) (「LPA」)表現之寡核苷酸及其用途，特別是關於治療與LPA表現相關之疾病、病症及/或疾患之用途。
脂蛋白(a) (Lp(a))係一種異質性低密度脂蛋白(LDL)樣顆粒，其含有脂質核心及脂蛋白元B (apoB-100)，該apoB-100具有獨特成分脂蛋白元(a) (apo(a))，其經由二硫鍵連結至apoB-100。apo(a)基因(LPA)主要在肝臟中表現，且表現限於人類及非人類靈長類動物。人類中之Lp(a)水準受遺傳限定，且不隨飲食、運動或其他生活方式之改變而顯著改變。LPA之長度端視於所存在之Kringle KIV2結構域數目而變化，且其表現與所存在之結構域數目呈負相關。正常Lp(a)水準範圍為0.1-25 mg/dl，美國約25%之群體之Lp(a)水準為30 mg/dl或更高。多項研究中對Lp(a)水準之分析已暗示高Lp(a)水準為心血管疾病、中風及其他相關病症(包括動脈粥樣硬化性狹窄)之獨立風險因素。另外，全基因體關聯分析亦已暗示LPA為諸如動脈粥樣硬化性狹窄等疾病之遺傳風險因素。當使用治療性脂蛋白析離術降低高脂血症患者中之Lp(a)及LDL水準時，已觀察到心血管事件顯著減少。
因此，業內需要關於該等及其他LPA相關疾病之治療劑及治療。
本揭示案之實施例係關於用於治療與LPA表現相關之疾病、病症及/或疾患之組合物及方法。本揭示案部分地基於選擇性地抑制及/或降低肝臟中之LPA表現的寡核苷酸之發現及開發。因此，鑑別LPA mRNA內之靶序列，且生成結合至該等靶序列且抑制LPA mRNA表現之RNAi寡核苷酸。如本文所證明，該等RNAi寡核苷酸抑制猴及人類肝臟中之LPA表現。不受理論束縛，本文所闡述之RNAi寡核苷酸可用於治療與LPA表現相關之疾病、病症或疾患(例如心臟代謝疾病、動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH)。
因此，在一些實施例中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在前述或相關實施例中之任一者中，有義股之長度為15至50個核苷酸。在一些實施例中，有義股之長度為18至36個核苷酸。
在前述或相關態樣中之任一者中，反義股之長度為15至30個核苷酸。
在前述或相關態樣中之任一者中，反義股之長度為22個核苷酸且其中反義股與有義股形成長度為至少19個核苷酸、視情況長度為至少20個核苷酸之雙鏈體區。
在前述或相關態樣中之任一者中，互補區之長度為至少19個鄰接核苷酸，視情況長度為至少20個核苷酸。
在前述或相關態樣中之任一者中，有義股之3’端包含如S1-L-S2所示之莖環，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3-5個核苷酸之環。
在一些態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為15至50個核苷酸之有義股以及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在其他態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為15至50個核苷酸之有義股及長度為15至30個核苷酸之反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在其他態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為15至50個核苷酸之有義股以及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為19個鄰接核苷酸，視情況長度為20個核苷酸。
在其他態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為18至36個核苷酸之有義股以及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為19個鄰接核苷酸，視情況長度為20個核苷酸。
在其他態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為18至36個核苷酸之有義股及長度為22個核苷酸之反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為19個鄰接核苷酸，視情況長度為20個核苷酸。
在一些態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為18至36個核苷酸之有義股及長度為22個核苷酸之反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該有義股之3’端包含如S1-L-S2所示之莖環，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3-5個核苷酸之環，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為19個鄰接核苷酸，視情況長度為20個核苷酸。
在其他態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為36個核苷酸之有義股及長度為22個核苷酸之反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該有義股之3’端包含如S1-L-S2所示之莖環，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3-5個核苷酸之環，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為19個鄰接核苷酸，視情況長度為20個核苷酸。
在其他態樣中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含長度為36個核苷酸之有義股及長度為22個核苷酸之反義股，其中該有義股與該反義股形成長度為至少19個核苷酸、視情況長度為20個核苷酸之雙鏈體區，其中該有義股之3’端包含如S1-L-S2所示之莖環，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為3-5個核苷酸之環，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為19個鄰接核苷酸，視情況長度為20個核苷酸。
在前述或相關態樣中之任一者中，L為三環或四環。在一些實施例中，L為四環。在一些實施例中，四環包含序列5’-GAAA-3’。
在前述或相關實施例中之任一者中，S1及S2之長度為1-10個核苷酸且具有相同長度。在一些實施例中，S1及S2之長度為1個核苷酸、2個核苷酸、3個核苷酸、4個核苷酸、5個核苷酸、6個核苷酸、7個核苷酸、8個核苷酸、9個核苷酸或10個核苷酸。在一些實施例中，S1及S2之長度為6個核苷酸。在一些實施例中，莖環包含序列5’-GCAGCCGAAAGGCUGC-3’ (SEQ ID NO: 1197)。
在前述或相關實施例中之任一者中，反義股包含長度為一或多個核苷酸之3’懸突序列。在一些實施例中，3’懸突序列之長度為2個核苷酸，視情況其中3’懸突序列為GG。
在前述或相關實施例中之任一者中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸包含2′-修飾。在一些實施例中，2′-修飾為選自以下之修飾：2′-胺基乙基、2′-氟、2′-O-甲基、2′-O-甲氧基乙基及2′-去氧-2′-氟-β-d-阿拉伯糖核酸。在一些實施例中，構成寡核苷酸之所有核苷酸均經修飾，視情況其中該修飾為選自2’-氟及2’-O-甲基之2’-修飾。
在前述或相關實施例中之任一者中，寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，該至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
在前述或相關實施例中之任一者中，反義股之5′-核苷酸之糖的4′-碳包含磷酸酯類似物。在一些實施例中，磷酸酯類似物為氧基甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯，視情況其中磷酸酯類似物為包含5’-甲氧基膦酸酯-4’-氧基之4’-磷酸酯類似物。
在前述或相關實施例中之任一者中，寡核苷酸之至少一個核苷酸與一或多種靶向配位體結合。在一些實施例中，每一靶向配位體包含碳水化合物、胺基糖、膽固醇、多肽或脂質。在一些實施例中，每一靶向配位體包含N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)部分。在一些實施例中，GalNAc部分為單價GalNAc部分、雙價GalNAc部分、三價GalNAc部分或四價GalNAc部分。在一些實施例中，莖環之L中的至多4個核苷酸各自與單價GalNAc部分結合。
在前述或相關實施例中之任一者中，有義股包含以下中之任一者之核苷酸序列：SEQ ID NO: 388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402及403。
在前述或相關實施例中之任一者中，反義股包含以下中之任一者之核苷酸序列：SEQ ID NO: 788、789、790、791、792、793、794、795、796、797、798、799、800、801、802及803。
在前述或相關實施例中之任一者中，有義股及反義股包含選自由以下組成之群之核苷酸序列： (a)  分別SEQ ID NO: 393及793； (b)  分別SEQ ID NO: 388及788； (c)  分別SEQ ID NO: 389及789； (d)  分別SEQ ID NO: 390及790； (e)  分別SEQ ID NO: 391及791； (f)   分別SEQ ID NO: 392及792； (g)  分別SEQ ID NO: 394及794； (h)  分別SEQ ID NO: 395及795； (i)   分別SEQ ID NO: 396及796； (j)   分別SEQ ID NO: 397及797； (k)  分別SEQ ID NO: 398及798； (l)   分別SEQ ID NO: 399及799； (m) 分別SEQ ID NO: 400及800； (n)  分別SEQ ID NO: 401及801； (o)  分別SEQ ID NO: 402及802；及 (p)  分別SEQ ID NO: 403及803。
在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 393中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 793中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 388中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 788中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 389中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 789中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 390中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 790中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 391中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 791中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 392中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 792中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 394中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 794中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 395中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 795中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 396中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 796中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 397中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 797中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 398中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 798中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 399中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 799中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 400中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 800中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 401中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 801中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 402中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 802中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 403中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 803中所示之核苷酸序列。
在一些實施例中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中構成該有義股及反義股之所有核苷酸均經修飾，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在其他實施例中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中構成該有義股及反義股之所有核苷酸均經修飾，其中該反義股之5′-核苷酸之糖的4′-碳包含磷酸酯類似物，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在其他實施例中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中構成該有義股及反義股之所有核苷酸均經修飾，其中該反義股之5′-核苷酸之糖的4′-碳包含磷酸酯類似物，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在一些實施例中，本揭示案提供用於降低LPA表現之RNAi寡核苷酸，該寡核苷酸包含有義股及反義股，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中構成該有義股及該反義股之所有核苷酸均經修飾，其中該反義股及該有義股包含一或多個經2′-氟及2′-O-甲基修飾之核苷酸及至少一個硫代磷酸酯鍵聯，其中該反義股之5′-核苷酸之糖的4′-碳包含磷酸酯類似物，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在一些實施例中，本揭示案提供治療患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如前述技術方案中之任一者之RNAi寡核苷酸或其醫藥組合物，藉此治療該個體。
在其他實施例中，本揭示案提供醫藥組合物，其包含本文所闡述之RNAi寡核苷酸以及醫藥學上可接受之載劑、遞送劑或賦形劑。
在其他實施例中，本揭示案提供向個體遞送寡核苷酸之方法，該方法包括向該個體投與本文所闡述之醫藥組合物。
在另一實施例中，本揭示案提供降低細胞、細胞群體或個體中之LPA表現之方法，該方法包括以下步驟： i.     使該細胞或該細胞群體與本文所闡述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物接觸；或 ii.    向該個體投與本文所闡述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物。在一些實施例中，降低LPA表現包含降低LPA mRNA之量或水準、LPA蛋白之量或水準或二者均降低。在一些實施例中，個體患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患。在一些實施例中，與LPA表現相關之疾病、病症或疾患為心臟代謝疾病，視情況為動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH。在一些實施例中，RNAi寡核苷酸或醫藥組合物與第二組合物或治療劑組合投與。
在另一態樣中，本揭示案提供治療患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中該有義股與該反義股形成雙鏈體區，其中該反義股包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之LPA mRNA靶序列的互補區，且其中該互補區之長度為至少15個鄰接核苷酸。
在另一態樣中，本揭示案提供治療患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之包含選自 表 5中所示之列的有義股及反義股之RNAi寡核苷酸或其醫藥組合物，藉此治療該個體。
在其他實施例中，本揭示案提供治療患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之包含有義股及反義股之RNAi寡核苷酸，其中該有義股及反義股包含選自由以下組成之群之核苷酸序列： (a)  分別SEQ ID NO: 393及793； (b)  分別SEQ ID NO: 388及788； (c)  分別SEQ ID NO: 389及789； (d)  分別SEQ ID NO: 390及790； (e)  分別SEQ ID NO: 391及791； (f)   分別SEQ ID NO: 392及792； (g)  分別SEQ ID NO: 394及794； (h)  分別SEQ ID NO: 395及795； (i)   分別SEQ ID NO: 396及796； (j)   分別SEQ ID NO: 397及797； (k)  分別SEQ ID NO: 398及798； (l)   分別SEQ ID NO: 399及799； (m) 分別SEQ ID NO: 400及800； (n)  分別SEQ ID NO: 401及801； (o)  分別SEQ ID NO: 402及802；及 (p)  分別SEQ ID NO: 403及803。
在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 393中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 793中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 388中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 788中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 389中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 789中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 390中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 790中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 391中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 791中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 392中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 792中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 394中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 794中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 395中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 795中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 396中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 796中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 397中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 797中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 398中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 798中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 399中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 799中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 400中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 800中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 401中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 801中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 402中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 802中所示之核苷酸序列。在一些實施例中，有義股包含如SEQ ID NO: 403中所示之核苷酸序列，其中反義股包含如SEQ ID NO: 803中所示之核苷酸序列。
在一些實施例中，與LPA表現相關之疾病、病症或疾患為心臟代謝疾病，視情況為動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH。
在一些實施例中，本揭示案提供本文所闡述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物之用途，其用於製造用以治療與LPA表現相關之疾病、病症或疾患、視情況用以治療心臟代謝疾病、視情況動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH之藥劑。
在一些實施例中，本揭示案提供本文所闡述之RNAi寡核苷酸或醫藥組合物之用途，其用於或適用於治療與LPA表現相關之疾病、病症或疾患，視情況用於治療心臟代謝疾病、視情況動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH。
在其他實施例中，本揭示案提供套組，其包含本文所闡述之RNAi寡核苷酸、視情況選用之醫藥學上可接受之載劑及包裝插頁，該包裝插頁包含關於向患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體進行投與之說明書。
在前述或相關實施例中之任一者中，與LPA表現相關之疾病、病症或疾患為心臟代謝疾病，視情況為動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH。
序列表之參考
序列表以ASCII格式之文本檔案形式與說明書一起提交，檔案名稱為DRNA_C002USP2_ST25.txt，其創建日期為2020年9月3日且大小為239千位元組。序列表之電子格式中之資訊係說明書之一部分，且在此係以全文引用的方式併入本文中。 I.    定義
如本文所用，「約」在應用於一或多個所關注之值時，係指與所述參考值相似之值。在某些實施例中，除非另有說明或自上下文另外明顯可見，否則「約」係指在任一方向(大於或小於)上處於所述參考值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小以內之值的範圍(此數值將超過可能值之100%之情形除外)。
如本文所用，「投與(administer、administering、administration)」及諸如此類係指以藥理學上有用之方式(例如，以治療個體之疾患)向個體提供物質(例如寡核苷酸)。
如本文所用，術語「脂蛋白元(a)」及縮寫形式「apo(a)」係指脂蛋白元(a)多肽，其係結合脂質以形成脂蛋白之脂蛋白元類多肽之成員。Apo(a)係由人類LPA基因編碼之多晶型糖蛋白。LPA mRNA及apo(a)多肽主要在肝臟中表現。脂蛋白(a) (縮寫為Lp(a))係一類在肝臟中形成之脂蛋白，且包含共價拴系至apo(a)之脂蛋白元(apo) B-100 (Apo-B100)之單一拷貝。在人類中，apo(a)包括至少10種KIV重複序列亞型(由各自1個KIV 1拷貝、多個KIV 2拷貝及KIV 3-KIV 10各自1個拷貝構成)、KV及非活性蛋白酶樣結構域。apo(a)之存在使Lp(a)區別於所有其他脂蛋白類別(Marcovina等人，(1995) Clin Chem. 41(2):246-55)。出於本揭示案之目的，「脂蛋白元(a)」或「apo(a)」係指來自任何脊椎動物或哺乳動物之apo(a)多肽，包括(但不限於)人類、小鼠、靈長類動物、猴、牛、雞、齧齒類動物、大鼠、豬、綿羊及天竺鼠。「Apo(a)」亦指維持天然apo(a)之至少一種活體內或活體外活性的天然apo(a)之片段及變異體。Apo(a)涵蓋全長、未經加工之Apo(a)前體形式以及源自轉譯後加工之成熟形式。人類LPA mRNA轉錄本之例示性序列可公開獲得(GenBank登錄號NM_005577.3)且揭示於本文中(SEQ ID NO: 1)。食蟹猴LPA mRNA之例示性序列可公開獲得(GenBank登錄號XM_015448517.1)且揭示於本文中(SEQ ID NO: 2)。
如本文所用，「去唾液酸糖蛋白受體」或「ASGPR」係指由48 kDa主要亞單元(ASGPR-1)及40 kDa次要亞單元(ASGPR-2)形成之二分C型凝集素。ASGPR主要在肝細胞之血竇表面上表現，且在結合含有末端半乳糖或GalNAc殘基之循環糖蛋白(去唾液酸糖蛋白)、使其內化及後續清除中起主要作用。
如本文所用，「減弱(attenuate、attenuating、attenuation)」及諸如此類係指降低或有效地停止。作為非限制性實例，本文之一或多種治療可降低或有效地停止個體之心臟代謝疾病之發作或進展，包括動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH。此減弱可藉由(例如)個體之以下情形來例示：包括動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH在內之心臟代謝疾病之一或多個態樣(例如症狀、組織特徵以及細胞活性、發炎活性或免疫活性等)之減少、偵測不到包括動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH在內之心臟代謝疾病之一或多個態樣之進展(惡化)或偵測不到包括動脈粥樣硬化、異常血脂症、NAFLD及NASH在內之心臟代謝疾病之態樣，而該等不利情形原本預期可能發生。
如本文所用，「互補」係指兩個核苷酸之間的結構關係(例如在兩個相對核酸上或在單一核酸股之相對區域上)，其允許該兩個核苷酸彼此形成鹼基對。舉例而言，與相對核酸之嘧啶核苷酸互補的一個核酸之嘌呤核苷酸可藉由彼此形成氫鍵而一起鹼基配對。在一些實施例中，互補核苷酸可按沃森-克里克(Watson-Crick)方式或按任何容許形成穩定雙鏈體之其他方式鹼基配對。在一些實施例中，如本文所闡述，兩個核酸可具有彼此互補以形成互補區之多個核苷酸之區域。
如本文所用，「去氧核糖核苷酸」係指與核糖核苷酸相比，在戊糖之2′位由氫代替羥基之核苷酸。經修飾之去氧核糖核苷酸係對除2′位以外之原子具有一或多個修飾或取代之去氧核糖核苷酸，該(等)修飾或取代包括糖、磷酸基或鹼基內部或本身之修飾或取代。
如本文所用，「雙股寡核苷酸(double-stranded oligonucleotide或ds oligonucleotide)」係指實質上呈雙鏈體形式之寡核苷酸。在一些實施例中，雙股寡核苷酸之雙鏈體區之互補鹼基配對在共價分離之核酸股之反向平行核苷酸序列之間形成。在一些實施例中，雙股寡核苷酸之雙鏈體區之互補鹼基配對在共價連接之核酸股之反向平行核苷酸序列之間形成。在一些實施例中，雙股寡核苷酸之雙鏈體區之互補鹼基配對由摺疊(例如經由髮夾)之單一核酸股形成，以提供一起鹼基配對之互補反向平行核苷酸序列。在一些實施例中，雙股寡核苷酸包含兩個彼此完全形成雙鏈體之共價分離之核酸股。然而，在一些實施例中，雙股寡核苷酸包含兩個部分形成雙鏈體之共價分離之核酸股(例如在一端或兩端具有懸突)。在一些實施例中，雙股寡核苷酸包含部分互補之反向平行核苷酸序列，且因此可能具有一或多個錯配，該(等)錯配可包括內部錯配或末端錯配。
如本文所用，關於核酸(例如寡核苷酸)之「雙鏈體」係指經由兩個反向平行之核苷酸序列之互補鹼基配對而形成之結構。
如本文所用，「賦形劑」係指可包括在組合物中之非治療劑，例如以提供或有助於期望稠度或穩定效應。
如本文所用，「肝細胞(hepatocyte或hepatocytes)」係指肝臟實質組織之細胞。該等細胞約佔肝臟質量之70%-85%，且製造血清白蛋白、FBN及凝血因子之凝血酶原群(因子3及因子4除外)。肝細胞譜系細胞之標誌物包括(但不限於)轉甲狀腺素(Ttr)、麩醯胺酸合成酶(Glul)、肝細胞核因子1a (Hnf1a)及肝細胞核因子4a (Hnf4a)。成熟肝細胞之標誌物可包括(但不限於)細胞色素P450 (Cyp3a11)、富馬醯乙醯乙酸水解酶(Fah)、葡萄糖6-磷酸(G6p)、白蛋白(Alb)及OC2-2F8。例如，參見Huch等人(2013) Nature494:247-250。
如本文所用，「肝毒劑」係指本身對肝臟具有毒性或可經加工以形成對肝臟具有毒性之代謝物之化合物、病毒或其他物質。肝毒劑可包括(但不限於)四氯化碳(CCl 4)、乙醯胺酚(對乙醯胺基酚)、氯乙烯、砷、氯仿、非類固醇消炎藥(諸如阿斯匹林(aspirin)及苯丁唑吡酮)。
如本文所用，「不穩定連接體」係指可裂解(例如由酸性pH)之連接體。「相當穩定之連接體」係指無法裂解之連接體。
如本文所用，「肝臟發炎」或「肝炎」係指肝臟變得腫脹、功能障礙及/或疼痛之身體狀況，尤其是由於損傷或感染引起，如可能由暴露於肝毒劑引起。症狀可包括黃疸(皮膚或眼睛變黃)、疲勞、虛弱、噁心、嘔吐、食慾減退及體重減輕。肝臟發炎若不進行治療，則可進展為纖維化、硬化、肝臟衰竭或肝癌。
如本文所用，「肝臟纖維化(liver fibrosis或fibrosis of the liver)」係指細胞外基質蛋白在肝臟中之過度累積，該等蛋白可包括膠原(I、III及IV)、FBN、粗纖維調節素、彈性蛋白、層黏蛋白、玻尿酸及由發炎及肝臟細胞死亡產生之蛋白多糖。肝臟纖維化若不進行治療，則可進展為硬化、肝臟衰竭或肝癌。
如本文所用，「環」係指核酸(例如寡核苷酸)之未配對區，其兩側為彼此充分互補之兩個反向平行核酸區，使得在適當雜交條件下(例如於磷酸鹽緩衝液中、於細胞中)，該兩個位於未配對區兩側之反向平行區雜交以形成雙鏈體(稱為「莖」)。
如本文所用，「經修飾之核苷酸間鍵聯」係指與包含磷酸二酯鍵之參考核苷酸間鍵聯相比具有一或多個化學修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為非天然鍵聯。通常，經修飾之核苷酸間鍵聯為存在該經修飾之核苷酸間鍵聯之核酸賦予一或多種合意性質。舉例而言，經修飾之核苷酸可改良熱穩定性、抗降解性、核酸酶抗性、溶解度、生物利用度、生物活性、降低之免疫原性等。
如本文所用，「經修飾之核苷酸」係指與選自以下之相應參考核苷酸相比具有一或多個化學修飾之核苷酸：腺嘌呤核糖核苷酸、鳥嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤去氧核糖核苷酸、鳥嘌呤去氧核糖核苷酸、胞嘧啶去氧核糖核苷酸及胸苷去氧核糖核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸為非天然核苷酸。在一些實施例中，經修飾之核苷酸在其糖、核鹼基及/或磷酸基中具有一或多個化學修飾。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有一或多個與相應參考核苷酸結合之化學部分。通常，經修飾之核苷酸為存在該經修飾之核苷酸之核酸賦予一或多種合意性質。舉例而言，經修飾之核苷酸可改良熱穩定性、抗降解性、核酸酶抗性、溶解度、生物利用度、生物活性、降低之免疫原性等。
如本文所用，「缺口四環結構」係指以分開之有義股(随从股)及反義股(引導股)為特徵之RNAi寡核苷酸之結構，其中有義股具有與反義股互補之區，且其中至少一條股(通常有義股)具有四環，其經構形以穩定在該至少一條股內形成之毗鄰莖區。
如本文所用，「寡核苷酸」係指短核酸(例如長度少於約100個核苷酸)。寡核苷酸可為單股(ss)或雙股。寡核苷酸可具有雙鏈體區或可不具有雙鏈體區。作為一組非限制性實例，寡核苷酸可為(但不限於)小干擾RNA (siRNA)、微小RNA (miRNA)、短髮夾RNA (shRNA)、dicer受質干擾RNA (dsiRNA)、反義寡核苷酸、短siRNA或單股siRNA。在一些實施例中，雙股寡核苷酸為RNAi寡核苷酸。
如本文所用，「懸突」係指末端非鹼基配對核苷酸，其由延伸超過互補股末端之一條股或一個區產生，該一條股或一個區與該互補股形成雙鏈體。在一些實施例中，懸突包含一或多個自雙股寡核苷酸之5′末端或3′末端雙鏈體區延伸之未配對核苷酸。在某些實施例中，懸突為雙股寡核苷酸之反義股或有義股上之3′或5′懸突。
如本文所用，「磷酸酯類似物」係指模擬磷酸基之靜電及/或空間性質之化學部分。在一些實施例中，磷酸酯類似物定位於寡核苷酸之5′末端核苷酸處，代替常常易於酶促去除之5′-磷酸酯。在一些實施例中，5′磷酸酯類似物含有磷酸酶抗性鍵聯。磷酸酯類似物之實例包括(但不限於) 5′膦酸酯，諸如5′亞甲基膦酸酯(5′-MP)及5′-(E)-乙烯基膦酸酯(5′-VP)。在一些實施例中，寡核苷酸在5′末端核苷酸之糖的4′-碳位置處具有磷酸酯類似物(稱為「4′-磷酸酯類似物」)。4′-磷酸酯類似物之實例為氧基甲基膦酸酯，其中氧基甲基之氧原子結合至糖部分(例如在其4′-碳處)或其類似物。例如，參見美國臨時專利申請案第62/383,207號(2016年9月2日提出申請)及第62/393,401號(2016年9月12日提出申請)。已開發出針對寡核苷酸之5′端之其他修飾(例如，參見國際專利申請案第WO 2011/133871號；美國專利第8,927,513號；及Prakash等人(2015) Nucleic Acids Res.43:2993-3011)。
如本文所用，基因(例如LPA)之「表現減少」係指與適當參考(例如參考細胞、細胞群體、樣品或個體)相比，由該基因編碼之RNA轉錄本(例如LPA mRNA)或蛋白質之量或水準降低及/或該基因在細胞、細胞群體、樣品或個體中之活性量或水準降低。舉例而言，與未經雙股寡核苷酸處理之細胞相比，使細胞與本文之寡核苷酸(例如包含反義股之寡核苷酸，該反義股具有與包含LPA mRNA之核苷酸序列互補之核苷酸序列)接觸之行為可使得LPA mRNA、apo(a)蛋白及/或apo(a)活性之量或水準降低(例如經由利用RNAi路徑使LPA mRNA不活化及/或降解)。類似地，且如本文所用，「降低表現」係指使基因(例如LPA)之表現降低之行為。如本文所用，「LPA表現降低」係指與適當參考(例如參考細胞、細胞群體、樣品或個體)相比，細胞、細胞群體、樣品或個體中LPA mRNA、 apo(a)蛋白及/或apo(a)活性之量或水準降低。
如本文所用，「互補區」係指核酸(例如雙股寡核苷酸)之如下核苷酸序列：其與反向平行核苷酸序列充分互補，以允許該兩個核苷酸序列在適當雜交條件下(例如於磷酸鹽緩衝液中、於細胞中等)雜交。在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含具有與mRNA靶序列互補之區之靶向序列。
如本文所用，「核糖核苷酸」係指以核糖作為其戊糖之核苷酸，其在2′位含有羥基。經修飾之核糖核苷酸係對除2′位以外之原子具有一或多個修飾或取代之核糖核苷酸，該(等)修飾或取代包括核糖、磷酸基或鹼基內部或本身之修飾或取代。
如本文所用，「RNAi寡核苷酸」係指(a)具有有義股(随从股)及反義股(引導股)之雙股寡核苷酸，其中Argonaute 2 (Ago2)內核酸酶利用該反義股或該反義股之一部分裂解靶mRNA (例如LPA mRNA)，或(b)具有單一反義股之單股寡核苷酸，其中Ago2內核酸酶利用該反義股(或該反義股之一部分)裂解靶mRNA (例如LPA mRNA)。
如本文所用，「股」係指經由核苷酸間鍵聯(例如磷酸二酯鍵聯或硫代磷酸酯鍵聯)連接在一起之單一鄰接核苷酸序列。在一些實施例中，股具有兩個游離端(例如5′端及3′端)。
如本文所用，「個體」意指任何哺乳動物，包括小鼠、兔及人類。在一個實施例中，個體為人類或NHP。此外，「個體(individual)」或「患者」可與「個體(subject)」互換使用。
如本文所用，「合成」係指如下核酸或其他分子：人工合成(例如使用機器(例如固態核酸合成器))，或原本不源自通常產生該分子之天然來源(例如細胞或生物體)。
如本文所用，「靶向配位體」係指選擇性地結合至所關注組織或細胞之同源分子(例如受體)且能與另一物質結合以達成將該另一物質靶向所關注組織或細胞之目的之分子(例如碳水化合物、胺基糖、膽固醇、多肽或脂質)。舉例而言，在一些實施例中，出於將寡核苷酸靶向所關注之特定組織或細胞之目的，可將靶向配位體與該寡核苷酸結合。在一些實施例中，靶向配位體選擇性地結合至細胞表面受體。因此，在一些實施例中，靶向配位體在與寡核苷酸結合時經由選擇性結合至在細胞表面上表現之受體而促進該寡核苷酸遞送至特定細胞中，且由該細胞對包含該寡核苷酸、靶向配位體及受體之複合物進行胞內體內化。在一些實施例中，靶向配位體經由連接體與寡核苷酸結合，該連接體在細胞內化之後或在細胞內化期間裂解，使得該寡核苷酸在細胞中自靶向配位體釋放。
如本文所用，「四環」係指增加由側接核苷酸序列之雜交而形成的毗鄰雙鏈體之穩定性之環。穩定性之增加可根據毗鄰莖雙鏈體之解鏈溫度(T m)增加而偵測到，該解鏈溫度高於由隨機選擇之核苷酸序列組成的一組長度相當之環所平均預期之毗鄰莖雙鏈體之T m。舉例而言，四環可賦予包含長度為至少2個鹼基對(bp)之雙鏈體之髮夾在10 mM NaHPO 4中至少約50℃、至少約55℃、至少約56℃、至少約58℃、至少約60℃、至少約65℃或至少約75℃之T m。在一些實施例中，四環可藉由堆疊相互作用穩定毗鄰莖雙鏈體中之鹼基對。另外，四環中核苷酸間之相互作用包括(但不限於)非沃森-克里克鹼基配對、堆疊相互作用、氫鍵結及接觸相互作用(Cheong等人(1990) Nature 346:680-82；Heus及Pardi (1991) Science 253:191-94)。在一些實施例中，四環包含3至6個核苷酸或由3至6個核苷酸組成，且通常為4至5個核苷酸。在某些實施例中，四環包含3、4、5或6個核苷酸或由3、4、5或6個核苷酸組成，該等核苷酸可經修飾或可不經修飾(例如其可或與靶向部分結合或可不結合)。在一個實施例中，四環由4個核苷酸組成。任何核苷酸均可用於四環中，且可如Cornish-Bowden (1985) Nucleic Acids Res.13:3021-3030中所闡述使用此等核苷酸之標準IUPAC-IUB符號。舉例而言，字母「N」可用於意指任何鹼基均可位於該位置，字母「R」可用於顯示A (腺嘌呤)或G (鳥嘌呤)可位於該位置，且「B」可用於顯示C (胞嘧啶)、G (鳥嘌呤)、T (胸腺嘧啶)或U (尿嘧啶)可位於該位置。四環之實例包括UNCG四環家族(例如UUCG)、GNRA四環家族(例如GAAA)及CUUG四環(Woese等人(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA87:8467-8471；Antao等人(1991) Nucleic Acids Res.19:5901-5905)。DNA四環之實例包括d(GNNA)四環家族(例如d(GTTA)、d(GNRA)四環家族、d(GNAB)四環家族、d(CNNG)四環家族及d(TNCG)四環家族(例如d(TTCG))。例如，參見Nakano等人(2002) Biochem.41:4281-14292；Shinji等人(2000) Nippon Kagakkai Koen Yokoshu78:731。在一些實施例中，四環含於缺口四環結構內。
如本文所用，「治療(treat或treating)」係指出於就現有疾患(例如疾病、病症)而言改善有需要之個體之健康及/或福祉或者預防或降低發生疾患之可能性之目的而向該個體提供照護之行為，例如藉由向該個體投與治療劑(例如本文之寡核苷酸)來實施。在一些實施例中，治療涉及降低個體所經歷之疾患(例如疾病、病症)之至少一種徵象、症狀或促成因素之頻率或嚴重程度。 II.   LPA表現之寡核苷酸抑制劑
本揭示案尤其提供抑制LPA表現之寡核苷酸。在一些實施例中，本文中抑制LPA表現之寡核苷酸靶向LPA mRNA。 i.     LPA靶序列
在一些實施例中，寡核苷酸靶向包含LPA mRNA之靶序列。在一些實施例中，寡核苷酸或其一部分、片段或股(例如雙股寡核苷酸之反義股或引導股)結合或退火至包含LPA mRNA之靶序列，藉此抑制LPA表現。在一些實施例中，出於抑制活體內LPA表現之目的，使寡核苷酸靶向LPA靶序列。在一些實施例中，靶向LPA靶序列之寡核苷酸抑制LPA表現之量或程度與該寡核苷酸之效能相關。在一些實施例中，靶向LPA靶序列之寡核苷酸抑制LPA表現之量或程度與該寡核苷酸治療患有與LPA之表現相關的疾病、病症或疾患之個體或患者之治療益處之量或程度相關。
經由檢查並分析編碼apo(a)之LPA mRNA (包括多種不同物種(例如人類、食蟹猴及恆河猴；例如，參見 實例 1)之mRNA)之核苷酸序列，且作為活體外及活體內測試之結果(例如，參見 實例 2及 實例 3)，已發現，LPA mRNA之某些核苷酸序列較其他核苷酸序列更易於基於寡核苷酸抑制LPA表現，且因此可用作本文寡核苷酸之靶序列。在一些實施例中，本文(例如 表 5中)所闡述之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)之有義股包含LPA靶序列。在一些實施例中，本文(例如 表 5中)所闡述之雙股寡核苷酸之有義股之一部分或區域包含LPA靶序列。在一些實施例中，LPA靶序列包含SEQ ID NO: 4-387中之任一者之序列或由其組成。 ii.    LPA靶向序列
在一些實施例中，本文之寡核苷酸具有與LPA mRNA互補之區(例如在LPA mRNA之靶序列內)，以達成靶向細胞中之LPA mRNA並抑制LPA表現之目的。在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含LPA靶向序列(例如雙股寡核苷酸之反義股或引導股)，該靶向序列具有藉由互補(沃森-克里克)鹼基配對結合或退火至LPA靶序列之互補區。靶向序列或互補區通常具有適宜長度及鹼基含量，以使寡核苷酸(或其股)能夠結合或退火至LPA mRNA，以達成抑制其表現之目的。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為至少約12個、至少約13個、至少約14個、至少約15個、至少約16個、至少約17個、至少約18個、至少約19個、至少約20個、至少約21個、至少約22個、至少約23個、至少約24個、至少約25個、至少約26個、至少約27個、至少約28個、至少約29個或至少約30個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為約12至約30個(例如12至30個、12至22個、15至25個、17至21個、18至27個、19至27個或15至30個)核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為約12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為18個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為20個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為21個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為22個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為23個核苷酸。在一些實施例中，靶向序列或互補區之長度為24個核苷酸。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含與LPA靶序列完全互補之靶向序列或互補區(例如雙股寡核苷酸之反義股或引導股)。在一些實施例中，靶向序列或互補區與LPA靶序列部分互補。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之序列完全互補之靶向序列或互補區。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之序列部分互補之靶向序列或互補區。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含與包含LPA mRNA之鄰接核苷酸序列互補之靶向序列或互補區，其中該鄰接核苷酸序列之長度為約12至約30個核苷酸(例如長度為12至30個、12至28個、12至26個、12至24個、12至20個、12至18個、12至16個、14至22個、16至20個、18至20個或18至19個核苷酸)。在一些實施例中，寡核苷酸包含與包含LPA mRNA之鄰接核苷酸序列互補之靶向序列或互補區，其中該鄰接核苷酸序列之長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與包含LPA mRNA之鄰接核苷酸序列互補之靶向序列或互補區，其中該鄰接核苷酸序列之長度為19個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與包含LPA mRNA之鄰接核苷酸序列互補之靶向序列或互補區，其中該鄰接核苷酸序列之長度為20個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸包含與SEQ ID NO: 4-387中之任一者之鄰接核苷酸序列互補之靶向序列或互補區，視情況其中該鄰接核苷酸序列之長度為19個核苷酸。
在一些實施例中，寡核苷酸之靶向序列或互補區與如SEQ ID NO: 4-387中之任一者所示序列之鄰接核苷酸互補，且跨越反義股之整個長度。在一些實施例中，寡核苷酸之互補區與如SEQ ID NO: 4-387中之任一者所示序列之鄰接核苷酸互補，且跨越反義股之整個長度之一部分。在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含互補區(例如在雙股寡核苷酸之反義股上)，該互補區至少部分(例如完全)與跨越如SEQ ID NO: 4-387中之任一者所示序列之核苷酸1-20之鄰接核苷酸段互補。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含與相應LPA靶序列具有一或多個鹼基對(bp)錯配之靶向序列或互補區。在一些實施例中，靶向序列或互補區可與相應LPA靶序列具有至多約1個、至多約2個、至多約3個、至多約4個、至多約5個等錯配，前提係靶向序列或互補區在適當雜交條件下結合或退火至LPA mRNA之能力及/或寡核苷酸降低或抑制LPA表現之能力得以維持。或者，在一些實施例中，靶向序列或互補區包含不超過1個、不超過2個、不超過3個、不超過4個或不超過5個與相應LPA靶序列之錯配，前提係靶向序列或互補區在適當雜交條件下結合或退火至LPA mRNA之能力及/或寡核苷酸降低或抑制LPA表現之能力得以維持。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有1個錯配之靶向序列或互補區。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有2個錯配之靶向序列或互補區。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有3個錯配之靶向序列或互補區。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有4個錯配之靶向序列或互補區。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有5個錯配之靶向序列或互補區。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有一個以上錯配(例如2、3、4、5或更多個錯配)之靶向序列或互補區，其中至少2個(例如全部)錯配連續定位(例如連續2、3、4、5或更多個錯配)，或其中該等錯配散佈在整個靶向序列或互補區之任何位置。在一些實施例中，寡核苷酸包含與相應靶序列具有一個以上錯配(例如2、3、4、5或更多個錯配)之靶向序列或互補區，其中至少2個(例如全部)錯配連續定位(例如連續2、3、4、5或更多個錯配)，或其中至少一或多個非錯配鹼基對位於該等錯配之間或其組合。 iii.   寡核苷酸類型
多種寡核苷酸類型及/或結構可用於在本文之方法中靶向LPA mRNA，包括(但不限於) RNAi寡核苷酸、反義寡核苷酸、miRNA等。考慮本文或別處所闡述之任何寡核苷酸類型用作併入本文LPA mRNA靶向序列之框架，以達成抑制LPA表現之目的。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸藉由在涉及Dicer之上游或下游與RNA干擾(RNAi)路徑接合而抑制LPA表現。舉例而言，已開發出每一股之大小為約19-25個核苷酸且具有至少一個具有1至5個核苷酸之3′懸突之RNAi寡核苷酸(例如，參見美國專利第8,372,968號)。亦已開發出更長之寡核苷酸，其由Dicer加工以生成活性RNAi產物(例如，參見美國專利第8,883,996號)。進一步工作產生延伸之雙股寡核苷酸，其中至少一條股之至少一端延伸超出雙鏈體靶向區，包括其中一條股包括熱力學穩定之四環結構之結構(例如，參見美國專利第8,513,207號及第8,927,705號，以及國際專利申請公開案第WO 2010/033225號)。此等結構可包括單股延伸物(在分子之一側或兩側上)以及雙股延伸物。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸在涉及Dicer (例如Dicer裂解)之下游與RNAi路徑接合。在一些實施例中，寡核苷酸在有義股之3′端具有懸突(例如長度為1、2或3個核苷酸)。在一些實施例中，寡核苷酸(例如siRNA)包含與靶mRNA (例如LPA mRNA)反義之21核苷酸引導股以及互補随从股，其中該兩股退火以形成19-bp雙鏈體及在任一或兩個3′端之2核苷酸懸突。亦考慮更長之寡核苷酸設計，包括引導股為23個核苷酸且随从股為21個核苷酸之寡核苷酸，其中在該分子之右側存在平端(随从股之3′端/引導股之5′端)且在該分子之左側存在兩個核苷酸之3′-引導股懸突(随从股之5′端/引導股之3′端)。在此等分子中，存在21 bp雙鏈體區。例如，參見美國專利第9,012,138號；第9,012,621號及第9,193,753號。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，該兩股之長度範圍均為約17至26個(例如17至26個、20至25個或21至23個)核苷酸。在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含有義股及反義股，該兩股之長度範圍均為約19至22個核苷酸。在一些實施例中，有義股與反義股等長。在一些實施例中，寡核苷酸包含有義股及反義股，使得在有義股或反義股上存在3′-懸突或在有義股及反義股二者上均存在3′-懸突。在一些實施例中，對於有義股及反義股之長度範圍均為約21-23個核苷酸之寡核苷酸而言，有義股、反義股或有義股及反義股二者上之3′懸突之長度為1或2個核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸具有22個核苷酸之引導股及20個核苷酸之随从股，其中在該分子之右側存在平端(随从股之3′端/引導股之5′端)且在該分子之左側存在2個核苷酸之3′-引導股懸突(随从股之5′端/引導股之3′端)。在此等分子中，存在20 bp雙鏈體區。
與本文組合物及方法一起使用之其他寡核苷酸設計包括：16-mer siRNA (例如，參見Nucleic Acids in Chemistry and Biology, Blackburn (編輯)，Royal Society of Chemistry, 2006)；shRNA (例如具有19 bp或更短之莖；例如，參見Moore等人(2010) Methods Mol. Biol. 629:141-58)；平端siRNA (例如，長度為19 bp；例如，參見Kraynack及Baker (2006) RNA12:163-76)；不對稱siRNA (aiRNA；例如，參見Sun等人(2008) Nat. Biotechnol .26:1379-82)；不對稱更短雙鏈體siRNA (例如，參見Chang等人(2009) Mol. Ther. 17:725-32)；叉形siRNA (例如，參見Hohjoh (2004) FEBS Lett. 557:193-198)；單股siRNA (Elsner (2012) Nat. Biotechnol .30:1063)；啞鈴形環狀siRNA (例如，參見Abe等人(2007) J. Am. Chem. Soc .129:15108-09)；及小的內部分段干擾RNA (siRNA；例如，參見Bramsen等人(2007) Nucleic Acids Res .35:5886-97)。可在一些實施例中用於降低或抑制LPA表現之寡核苷酸結構之其他非限制性實例為微小RNA (miRNA)、短髮夾RNA (shRNA)及短siRNA (例如，參見Hamilton等人(2002) EMBO J.21:4671-79；亦參見美國專利申請公開案第2009/0099115號)。
此外，在一些實施例中，本文中用於降低或抑制LPA表現之寡核苷酸為單股(ss)。此等結構可包括(但不限於)單股RNAi分子。最近之努力已證明單股RNAi分子之活性(例如，參見Matsui等人(2016) Mol. Ther.24:946-955)。然而，在一些實施例中，本文之寡核苷酸為反義寡核苷酸(ASO)。反義寡核苷酸為具有如下核鹼基序列之單股寡核苷酸：當以5′至3′方向書寫或繪示時，包含特定核酸之靶向區段之反向互補序列，且經適當修飾(例如作為間隔體(gapmer))以誘導細胞中RNA酶H介導之對其靶RNA之裂解或(例如作為混合體(mixmer))以抑制細胞中靶mRNA之轉譯。用於本文之ASO可以此項技術中已知之任何適宜方式進行修飾，包括(例如)如美國專利第9,567,587號中所示(包括(例如)長度、核鹼基(嘧啶、嘌呤)之糖部分及核鹼基之雜環部分之改變)。此外，几十年來，ASO一直用於降低特定靶基因之表現(例如，參見Bennett等人(2017) Annu. Rev. Pharmacol.57:81-105)。 iv.   雙股寡核苷酸
本揭示案提供用於靶向LPA mRNA並抑制LPA表現(例如經由RNAi路徑)之雙股(ds)寡核苷酸，其包含有義股(在本文中亦稱為随从股)及反義股(在本文中亦稱為引導股)。在一些實施例中，有義股及反義股為分開之股且不共價連接。在一些實施例中，有義股及反義股共價連接。
在一些實施例中，有義股具有第一區(R1)及第二區(R2)，其中R2包含第一亞區(S1)、四環(L)或三環(triL)及第二亞區(S2)，其中L或triL位於S1與S2之間，且其中S1及S2形成第二雙鏈體(D2)。D2可具有各種長度。在一些實施例中，D2之長度為約1-6 bp。在一些實施例中，D2之長度為2-6 bp、3-6 bp、4-6 bp、5-6 bp、1-5 bp、2-5 bp、3-5 bp或4-5 bp。在一些實施例中，D2之長度為1、2、3、4、5或6 bp。在一些實施例中，D2之長度為6 bp。
在一些實施例中，有義股之R1與反義股形成第一雙鏈體(D1)。在一些實施例中，D1之長度為至少約15個(例如至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個或至少21個)核苷酸。在一些實施例中，D1之長度範圍為約12至30個核苷酸(例如長度為12至30個、12至27個、15至22個、18至22個、18至25個、18至27個、18至30個或21至30個核苷酸)。在一些實施例中，D1之長度為至少12個核苷酸(例如長度為至少12個、至少15個、至少20個、至少25個或至少30個核苷酸)。在一些實施例中，D1之長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。在一些實施例中，D1之長度為20個核苷酸。在一些實施例中，包含有義股及反義股之D1不跨越有義股及/或反義股之整個長度。在一些實施例中，包含有義股及反義股之D1跨越有義股或反義股或該二者之整個長度。在某些實施例中，包含有義股及反義股之D1跨越有義股及反義股二者之整個長度。
在一些實施例中，如 表 3中所安排，本文之雙股寡核苷酸包含具有SEQ ID NO: 388-403中之任一者之序列之有義股及包含選自SEQ ID NO: 788-803之互補序列之反義股。在一些實施例中，有義股包含SEQ ID NO: 393之序列且反義股包含SEQ ID NO: 793之序列。
應瞭解，在一些實施例中，在描述寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)或其他核酸之結構時，可參考序列表中所呈現之序列。在此等實施例中，當與指定序列進行比較時，實際寡核苷酸或其他核酸可具有一或多個替代核苷酸(例如DNA核苷酸之RNA對應體或RNA核苷酸之DNA對應體)及/或一或多個經修飾之核苷酸及/或一或多個經修飾之核苷酸間鍵聯及/或一或多個其他修飾，同時保持與該指定序列基本上相同或相似之互補性質。
在一些實施例中，本文之雙股寡核苷酸包含25核苷酸有義股及27核苷酸反義股，其在由Dicer酶作用時，產生併入至成熟RISC中之反義股。在一些實施例中，雙股寡核苷酸之有義股長於27個核苷酸(例如28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個核苷酸)。在一些實施例中，雙股寡核苷酸之有義股長於25個核苷酸(例如26、27、28、29或30個核苷酸)。
在一些實施例中，本文之雙股寡核苷酸之一個5′端之熱力學穩定性不及另一5′端。在一些實施例中，提供不對稱雙股寡核苷酸，其包含在有義股之3′端的平端及在反義股之3′端的3′-懸突。在一些實施例中，反義股上之3′-懸突之長度為約1-8個核苷酸(例如長度為1、2、3、4、5、6、7或8個核苷酸)。通常，用於RNAi之雙股寡核苷酸在反義股(引導股)之3′端具有兩個核苷酸之懸突。然而，可能存在其他懸突。在一些實施例中，懸突為3′-懸突，其包含1至6個核苷酸之長度，視情況為1至5、1至4、1至3、1至2、2至6、2至5、2至4、2至3、3至6、3至5、3至4、4至6、4至5、5至6個核苷酸，或1、2、3、4、5或6個核苷酸。然而，在一些實施例中，懸突為5′-懸突，其包含1至6個核苷酸之長度，視情況為1至5、1至4、1至3、1至2、2至6、2至5、2至4、2至3、3至6、3至5、3至4、4至6、4至5、5至6個核苷酸，或1、2、3、4、5或6個核苷酸。
在一些實施例中，反義股之3′端上之兩個末端核苷酸經修飾。在一些實施例中，反義股之3′端上之該兩個末端核苷酸與靶mRNA (例如LPA mRNA)互補。在一些實施例中，反義股之3′端上之該兩個末端核苷酸不與靶mRNA互補。在一些實施例中，缺口四環結構中寡核苷酸之每一3′端上之兩個末端核苷酸為GG。通常，雙股寡核苷酸之每一3′端上之兩個末端GG核苷酸中之一者或兩者不與靶mRNA互補。
在一些實施例中，在有義股與反義股之間存在一或多個(例如1、2、3、4或5個)錯配。若在有義股與反義股之間存在一個以上錯配，則其可連續定位(例如連續2個、3個或更多個)，或散佈於整個互補區中。在一些實施例中，有義股之3′端含有一或多個錯配。在一個實施例中，在有義股之3′端併入兩個錯配。在一些實施例中，鹼基錯配或寡核苷酸有義股3′端區段之去穩定改良或增加雙股寡核苷酸之效能。 a.    反義股
在一些實施例中，本文所揭示之用於靶向LPA mRNA並抑制LPA表現之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)包含反義股，該反義股包含如SEQ ID NO: 404-803中之任一者所示之序列或由其組成。在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含反義股，該反義股包含如SEQ ID NO: 404-803中之任一者所示序列之至少約12個(例如至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)鄰接核苷酸或由其組成。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)包含長度為至多約40個核苷酸(例如長度為至多40個、至多35個、至多30個、至多27個、至多25個、至多21個、至多19個、至多17個或至多12個核苷酸)之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸可具有長度為至少約12個核苷酸(例如長度為至少12個、至少15個、至少19個、至少21個、至少22個、至少25個、至少27個、至少30個、至少35個或至少38個核苷酸)之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸可具有長度範圍為約12至約40個(例如12至40個、12至36個、12至32個、12至28個、15至40個、15至36個、15至32個、15至28個、17至22個、17至25個、19至27個、19至30個、20至40個、22至40個、25至40個或32至40個)核苷酸之反義股。在一些實施例中，寡核苷酸可具有長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個核苷酸之反義股。
在一些實施例中，寡核苷酸之反義股稱為「引導股」。舉例而言，反義股與RNA誘導之沈默複合物(RISC)接合且結合至Argonaute蛋白(諸如Ago2)，或與一或多種類似因子接合或結合，並引導靶基因之沈默，該反義股稱為引導股。在一些實施例中，與引導股互補之有義股稱為「随从股」。 b.    有義股
在一些實施例中，本文用於靶向LPA mRNA並抑制LPA表現之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)包含如SEQ ID NO: 4-403中之任一者所示之有義股序列或由其組成。在一些實施例中，寡核苷酸具有有義股，該有義股包含如SEQ ID NO: 4-403中之任一者所示序列之至少約12個(例如至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個或至少23個)鄰接核苷酸或由其組成。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)包含長度為至多約40個核苷酸(例如長度為至多40個、至多36個、至多30個、至多27個、至多25個、至多21個、至多19個、至多17個或至多12個核苷酸)之有義股(或随从股)。在一些實施例中，寡核苷酸可具有長度為至少約12個核苷酸(例如長度為至少12個、至少15個、至少19個、至少21個、至少25個、至少27個、至少30個、至少36個或至少38個核苷酸)之有義股。在一些實施例中，寡核苷酸可具有長度範圍為約12至約40個(例如12至40個、12至36個、12至32個、12至28個、15至40個、15至36個、15至32個、15至28個、17至21個、17至25個、19至27個、19至30個、20至40個、22至40個、25至40個或32至40個)核苷酸之有義股。在一些實施例中，寡核苷酸可具有長度為12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個核苷酸之有義股。
在一些實施例中，有義股在其3′端包含莖環結構。在一些實施例中，有義股在其5′端包含莖環結構。在一些實施例中，莖為長度為2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14 bp之雙鏈體。在一些實施例中，莖環為寡核苷酸提供保護免於降解(例如酶促降解)並促進或改良靶向及/或遞送至靶細胞、組織或器官(例如肝臟)，或兩者。舉例而言，在一些實施例中，莖環之環為包含一或多個促進、改良或增加靶向至靶mRNA (例如LPA mRNA)之修飾之核苷酸提供對靶基因表現(例如LPA表現)之抑制及/或至靶細胞、組織或器官(例如肝臟)之遞送或兩者。在一些實施例中，莖環本身或針對莖環之修飾不會實質上影響寡核苷酸之固有基因表現抑制活性，但促進、改良或增加寡核苷酸之穩定性(例如提供保護免於降解)及/或至靶細胞、組織或器官(例如肝臟)之遞送。在某些實施例中，寡核苷酸包含有義股，該有義股包含(例如在其3′端)如 S1-L-S2所示之莖環，其中S1與S2互補，且其中L在S1與S2之間形成長度為至多約10個核苷酸之單股環(例如長度為3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸)。在一些實施例中，環(L)之長度為4個核苷酸。 圖 10繪示此一寡核苷酸之非限制性實例。在一些實施例中，具有如上文所闡述之結構S1-L-S2之莖環之環(L)為四環(例如在缺口四環結構內)。在一些實施例中，四環包含核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸、經修飾之核苷酸、遞送配位體及其組合。 v.    寡核苷酸修飾 a.    糖修飾
在一些實施例中，經修飾之糖(本文中亦稱為糖類似物)包括經修飾之去氧核糖或核糖部分，其中，例如，一或多個修飾發生在糖之2′、3′、4′及/或5′碳位置處。在一些實施例中，經修飾之糖亦可包括非天然替代性碳結構，諸如存在於以下各項中之彼等非天然替代性碳結構：鎖核酸(「LNA」；例如，參見Koshkin等人(1998) Tetrahedon 54:3607-30)、解鎖核酸(「UNA」；例如，參見Snead等人(2013) Mol. Ther-Nucl. Acids 2:e103)及橋接核酸(「BNA」；例如，參見Imanishi及Obika (2002) Chem Commun. (Camb) 21:1653-59)。
在一些實施例中，糖中之核苷酸修飾包含2′-修飾。在一些實施例中，2′-修飾可為2′-O-炔丙基、2′-O-丙胺、2′-胺基、2′-乙基、2′-氟 (2′-F)、2′-胺基乙基(EA)、2′-O-甲基(2′-OMe)、2′-O-甲氧基乙基(2′-MOE)、2′-O-[2-(甲基胺基)-2-側氧基乙基] (2′-O-NMA)或2′-去氧-2′-氟-β-d-阿拉伯糖核酸(2′-FANA)。在一些實施例中，修飾為2′-F、2′-OMe或2′-MOE。在一些實施例中，糖中之修飾包含對糖環之修飾，其可包含對糖環之一或多個碳之修飾。舉例而言，核苷酸之糖之修飾可包含糖之2′-氧連接至該糖之1′-碳或4′-碳，或2′-氧經由伸乙基或亞甲基橋連接至1′-碳或4′-碳。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有缺少2′-碳至3′-碳鍵之無環糖。在一些實施例中，經修飾之核苷酸具有硫醇基，例如，在糖之4′位。
在一些實施例中，本文所闡述之寡核苷酸包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如至少1個、至少5個、至少10個、至少15個、至少20個、至少25個、至少30個、至少35個、至少40個、至少45個、至少50個、至少55個、至少60個或更多個)。在一些實施例中，寡核苷酸之有義股包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如至少1個、至少5個、至少10個、至少15個、至少20個、至少25個、至少30個、至少35個或更多個)。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股包含至少約1個經修飾之核苷酸(例如至少1個、至少5個、至少10個、至少15個、至少20個或更多個)。
在一些實施例中，寡核苷酸之有義股之所有核苷酸均經修飾。在一些實施例中，寡核苷酸之反義股之所有核苷酸均經修飾。在一些實施例中，寡核苷酸之所有核苷酸(亦即，有義股及反義股二者)均經修飾。在一些實施例中，經修飾之核苷酸包含2′-修飾(例如2′-F或2′-OMe、2′-MOE及2′-去氧-2′-氟-β-d-阿拉伯糖核酸)。在一些實施例中，經修飾之核苷酸包含2′-修飾(例如2′-F或2′-OMe)。
本揭示案提供具有不同修飾模式之寡核苷酸。在一些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含具有如 表 3及 表 4(以及 圖 10)中任一項所示修飾模式之有義股序列及具有如 表 3及 表 4(以及 圖 10)中任一項所示修飾模式之反義股。在一些實施例中，對於該等寡核苷酸，有義股之8位、9位、10位或11位中之一或多者經2′-F基團修飾。在其他實施例中，對於該等寡核苷酸，有義股中1-7位及12-20位之每一核苷酸之糖部分經2′-OMe修飾。
在一些實施例中，反義股具有3個在糖部分之2′位經2′-F修飾之核苷酸。在一些實施例中，反義股之2位、5位及14位處之糖部分以及視情況1位、3位、7位及10位處中之至多3個核苷酸經2′-F修飾。在其他實施例中，反義股之2位、5位及14位之每一位置處之糖部分經2′-F修飾。在其他實施例中，反義股之1位、2位、5位及14位之每一位置處之糖部分經2′-F修飾。在其他實施例中，反義股之1位、2位、3位、5位、7位及14位之每一位置處之糖部分經2′-F修飾。在另一實施例中，反義股之1位、2位、3位、5位、10位及14位之每一位置處之糖部分經2′-F修飾。在另一實施例中，反義股之2位、3位、5位、7位、10位及14位之每一位置處之糖部分經2′-F修飾。 b.    5′末端磷酸酯
在一些實施例中，RNAi寡核苷酸之5′末端磷酸基增強與Ago2之相互作用。然而，包含5′-磷酸基之寡核苷酸可易於經由磷酸酶或其他酶降解，此可限制其活體內生物利用度。在一些實施例中，本文之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)包括對此降解具有抗性之5′磷酸酯類似物。在一些實施例中，磷酸酯類似物為氧基甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二醯基膦酸酯或其組合。在某些實施例中，寡核苷酸股之3′端連接至模擬天然5′-磷酸基之靜電及空間性質之化學部分(「磷酸酯模擬物」)。
在一些實施例中，寡核苷酸在糖之4′-碳位置處具有磷酸酯類似物(稱為「4′-磷酸酯類似物」)。例如，參見國際專利申請公開案第WO 2018/045317號。在一些實施例中，本文之寡核苷酸在5′末端核苷酸處包含4′-磷酸酯類似物。在一些實施例中，磷酸酯類似物為氧基甲基膦酸酯，其中氧基甲基之氧原子結合至糖部分(例如在其4′-碳處)或其類似物。在其他實施例中，4′-磷酸酯類似物為硫甲基膦酸酯或胺基甲基膦酸酯，其中硫甲基之硫原子或胺基甲基之氮原子結合至糖部分或其類似物之4′-碳。在某些實施例中，4′-磷酸酯類似物為氧基甲基膦酸酯。在一些實施例中，氧基甲基膦酸酯由式-O-CH 2-PO(OH) 2或-O-CH 2-PO(OR) 2表示，其中R獨立地選自H、CH 3、烷基、CH 2CH 2CN、CH 2OCOC(CH 3) 3、CH 2OCH 2CH 2Si (CH 3) 3或保護基團。在某些實施例中，烷基為CH 2CH 3。更通常地，R獨立地選自H、CH 3或CH 2CH 3。 c.    經修飾之核苷內鍵聯
在一些實施例中，寡核苷酸包含經修飾之核苷間鍵聯。在一些實施例中，磷酸酯修飾或取代產生包含至少約1個(例如至少1個、至少2個、至少3個或至少5個)經修飾之核苷酸間鍵聯之寡核苷酸。在一些實施例中，本文所揭示之任一寡核苷酸包含約1至約10個(例如1至10個、2至8個、4至6個、3至10個、5至10個、1至5個、1至3個或1至2個)經修飾之核苷酸間鍵聯。在一些實施例中，本文所揭示之任一寡核苷酸 包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個經修飾之核苷酸間鍵聯。
經修飾之核苷酸間鍵聯可為二硫代磷酸酯鍵聯、硫代磷酸酯鍵聯、磷酸三酯鍵聯、硫羰基烷基膦酸酯鍵聯、硫羰基烷基磷酸三酯鍵聯、亞磷醯胺鍵聯、膦酸酯鍵聯或硼代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，如本文所揭示之任一寡核苷酸之至少一個經修飾之核苷酸間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。
在一些實施例中，本文所闡述之寡核苷酸在有義股之1位與2位之間、反義股之1位與2位之間、反義股之2位與3位之間、反義股之3位與4位之間、反義股之20位與21位之間及反義股之21位與22位之間中的一或多者處具有硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，本文所闡述之寡核苷酸在有義股之1位與2位之間、反義股之1位與2位之間、反義股之2位與3位之間、反義股之20位與21位之間及反義股之21位與22位之間的每一者處具有硫代磷酸酯鍵聯。 d.    鹼基修飾
在一些實施例中，本文之寡核苷酸具有一或多個經修飾之核鹼基。在一些實施例中，經修飾之核鹼基(在本文中亦稱為鹼基類似物)在核苷酸糖部分之1′位連接。在某些實施例中，經修飾之核鹼基為含氮鹼基。在某些實施例中，經修飾之核鹼基不含氮原子。例如，參見美國專利申請公開案第2008/0274462號。在一些實施例中，經修飾之核苷酸包含通用鹼基。然而，在某些實施例中，經修飾之核苷酸不含核鹼基(無鹼基)。
在一些實施例中，通用鹼基係位於經修飾之核苷酸中之核苷酸糖部分之1′位或核苷酸糖部分取代中之等同位置之雜環部分，其當存在於雙鏈體中時，可與一種以上類型之鹼基相對定位，而不實質上改變雙鏈體之結構。在一些實施例中，與同靶核酸完全互補之參考單股核酸(例如寡核苷酸)相比，含有通用鹼基之單股核酸與靶核酸所形成之雙鏈體之T m低於由互補核酸所形成之雙鏈體之T m。然而，在一些實施例中，與其中通用鹼基已經鹼基置換以生成單一錯配之參考單股核酸相比，含有通用鹼基之單股核酸與靶核酸所形成之雙鏈體之T m高於由包含錯配鹼基之核酸所形成之雙鏈體之T m。
通用結合核苷酸之非限制性實例包括(但不限於)肌苷、1-β-D-呋喃核糖基-5-硝基吲哚及/或1-β-D-呋喃核糖基-3-硝基吡咯(參見美國專利申請公開案第2007/0254362號；Van Aerschot等人(1995) Nucleic Acids Res .23:4363-70；Loakes等人(1995) Nucleic Acids Res .23:2361-66；及Loakes及Brown (1994) Nucleic Acids Res .22:4039-43)。 e.    可逆修飾
雖然可對寡核苷酸作出某些修飾以保護其在到達靶細胞之前免受活體內環境影響，但在寡核苷酸到達靶細胞之胞質液後，該等修飾可降低寡核苷酸之效能或活性。可進行可逆修飾，使得分子在細胞外保持合意性質，接著在進入細胞之胞質環境後將該等修飾去除。可逆修飾可(例如)藉由胞內酶之作用或藉由細胞內部之化學條件(例如經由胞內麩胱甘肽還原)來去除。
在一些實施例中，可逆修飾之核苷酸包含麩胱甘肽敏感性部分。通常，核酸分子已經環狀二硫化物部分化學修飾，以遮蔽由核苷酸間二磷酸酯鍵聯產生之負電荷並改良細胞攝取及核酸酶抗性。參見美國專利申請公開案第2011/0294869號、國際專利申請公開案第WO 2014/088920號及第WO 2015/188197號，以及Meade等人(2014) Nat. Biotechnol. 32:1256-63。核苷酸間二磷酸酯鍵聯之此可逆修飾經設計以由胞質液之還原環境(例如麩胱甘肽)胞內裂解。早期實例包括據報導能在細胞內部裂解之中和性磷酸三酯修飾(參見Dellinger等人(2003) J. Am. Chem. Soc. 125:940-50)。
在一些實施例中，此一可逆修飾容許在活體內投與期間進行保護(例如穿過血液及/或細胞之溶酶體/胞內體區室)，此時寡核苷酸將暴露於核酸酶及其他嚴苛環境條件(例如pH)。當釋放至麩胱甘肽水準高於細胞外間隙之細胞胞質液中時，修飾逆轉，且產生裂解之寡核苷酸。與使用不可逆化學修飾之可用選擇相比，使用可逆麩胱甘肽敏感性部分可將空間上較大之化學基團引入至所關注之寡核苷酸中。此乃因該等較大之化學基團將在胞質液中被去除，且因此不會干擾寡核苷酸在細胞胞質液內之生物活性。因此，該等較大之化學基團可經工程化以賦予核苷酸或寡核苷酸各種優點，諸如核酸酶抗性、親脂性、電荷、熱穩定性、特異性及降低之免疫原性。在一些實施例中，麩胱甘肽敏感性部分之結構可經工程化以改變其釋放之動力學。
在一些實施例中，麩胱甘肽敏感性部分連接至核苷酸之糖。在一些實施例中，麩胱甘肽敏感性部分連接至經修飾之核苷酸之糖的2′-碳。在一些實施例中，麩胱甘肽敏感性部分位於糖之5′-碳處，特別是當經修飾之核苷酸為寡核苷酸之5′末端核苷酸時。在一些實施例中，麩胱甘肽敏感性部分位於糖之3′-碳處，特別是當經修飾之核苷酸為寡核苷酸之3′末端核苷酸時。在一些實施例中，麩胱甘肽敏感性部分包含磺醯基。例如，參見美國臨時專利申請案第62/378,635號，其於2016年8月23日提出申請，標題為 Compositions Comprising Reversibly Modified Oligonucleotides and Uses Thereof。 vi.   靶向配位體
在一些實施例中，期望本揭示案之寡核苷酸靶向一或多種細胞或一或多種器官。此一策略可有助於避免在其他器官中之不合意效應，或避免寡核苷酸過度損失至將不受益於該寡核苷酸之細胞、組織或器官中。因此，在一些實施例中，本文所揭示之寡核苷酸經修飾以促進靶向及/或遞送至組織、細胞或器官(例如以促進寡核苷酸遞送至肝臟)。在某些實施例中，本文所揭示之寡核苷酸經修飾以促進寡核苷酸遞送至肝臟之肝細胞。在一些實施例中，寡核苷酸包含至少一個與一或多個靶向配位體結合之核苷酸(例如1、2、3、4、5、6或更多個核苷酸)。
在一些實施例中，靶向配位體包含碳水化合物、胺基糖、膽固醇、肽、多肽、蛋白質或蛋白質之一部分(例如抗體或抗體片段)或脂質。在一些實施例中，靶向配位體為適配體。舉例而言，靶向配位體可為用於靶向腫瘤血管系統或神經膠質瘤細胞之RGD肽、靶向腫瘤血管系統或基質之CREKA肽、靶向CNS血管系統上表現之運鐵蛋白受體之運鐵蛋白、乳鐵蛋白或適配體或靶向神經膠質瘤細胞上之EGFR之抗EGFR抗體。在某些實施例中，靶向配位體為一或多個GalNAc部分。
在一些實施例中，寡核苷酸之1或多個(例如1、2、3、4、5或6個)核苷酸各自與單獨之靶向配位體結合。在一些實施例中，寡核苷酸之2至4個核苷酸各自與單獨之靶向配位體結合。在一些實施例中，靶向配位體與有義股或反義股之任一端之2至4個核苷酸結合(例如靶向配位體與有義股或反義股之5′或3′端上之2至4個核苷酸懸突或延伸物結合)，使得靶向配位體類似牙刷之刷毛且寡核苷酸類似牙刷。舉例而言，寡核苷酸可在有義股之5′或3′端包含莖環，且莖環之1、2、3或4個核苷酸可與靶向配位體個別地結合。在一些實施例中，本揭示案所提供之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)在有義股之3′端包含莖環，其中莖環之環包含三環或四環，且其中分別構成三環或四環之3或4個核苷酸與靶向配位體個別地結合。
GalNAc為ASGPR之高親和力配位體，其主要在肝細胞之血竇表面上表現，且在結合含有末端半乳糖或GalNAc殘基之循環糖蛋白(去唾液酸糖蛋白)、使其內化及後續清除中起主要作用。GalNAc部分與本揭示案之寡核苷酸之結合(間接或直接)可用於將該等寡核苷酸靶向至在細胞上表現之ASGPR。在一些實施例中，本揭示案之寡核苷酸與至少一或多個GalNAc部分結合，其中該等GalNAc部分將該寡核苷酸靶向至在人類肝臟細胞(例如人類肝細胞)上表現之ASGPR。在一些實施例中，GalNAc部分將寡核苷酸靶向至肝臟。
在一些實施例中，本揭示案之寡核苷酸直接或間接地與單價GalNAc結合。在一些實施例中，寡核苷酸直接或間接地與一個以上單價GalNAc結合(亦即，與2、3或4個單價GalNAc部分結合，且通常與3或4個單價GalNAc部分結合)。在一些實施例中，寡核苷酸與一或多個雙價GalNAc、三價GalNAc或四價GalNAc部分結合。
在一些實施例中，寡核苷酸之1或多個(例如1、2、3、4、5或6個)核苷酸各自與GalNAc部分結合。在一些實施例中，四環之2至4個核苷酸各自與單獨之GalNAc結合。在一些實施例中，三環之1至3個核苷酸各自與單獨之GalNAc結合。在一些實施例中，靶向配位體與有義股或反義股之任一端之2至4個核苷酸結合(例如配位體與有義股或反義股之5′或3′端上之2至4個核苷酸懸突或延伸物結合)，使得GalNAc部分類似牙刷之刷毛且寡核苷酸類似牙刷。在一些實施例中，GalNAc部分與有義股之核苷酸結合。舉例而言，4個GalNAc部分可與有義股四環中之核苷酸結合，其中每一GalNAc部分與1個核苷酸結合。
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含與鳥嘌呤核苷酸連接之單價GalNAc，稱為[ademG-GalNAc]或2′-胺基二乙氧基甲醇-鳥嘌呤-GalNAc，如下所繪示：
在一些實施例中，本文之寡核苷酸包含與腺嘌呤核苷酸連接之單價GalNAc，稱為[ademA-GalNAc]或2′-胺基二乙氧基甲醇-腺嘌呤-GalNAc，如下所繪示：
下文顯示此結合之實例，其中顯示包含5′至3′核苷酸序列GAAA (L =連接體，X =雜原子)莖連接點之環。此一環可存在於(例如) 表 5中所列示之有義股之27-30位且如 圖 3中所示。在化學式中， 用於描述與寡核苷酸股之連接點。
可使用適當方法或化學(例如點擊化學)將靶向配位體連接至核苷酸。在一些實施例中，使用點擊連接體使靶向配位體與核苷酸結合。在一些實施例中，使用基於縮醛之連接體使靶向配位體與本文所闡述之任一寡核苷酸之核苷酸結合。基於縮醛之連接體揭示於(例如)國際專利申請公開案第WO 2016/100401號中。在一些實施例中，連接體為不穩定連接體。然而，在其他實施例中，連接體係穩定的。下文顯示包含5′至3′核苷酸GAAA之環之實例，其中使用縮醛連接體將GalNAc部分連接至該環之核苷酸。此一環可存在於(例如) 表 3 或表 4中所列示之任一有義股之27-30位且如 圖 10中所示。在化學式中， 為與寡核苷酸股之連接點。
如所提及，可使用各種適當方法或化學合成技術(例如點擊化學)將靶向配位體連接至核苷酸。在一些實施例中，使用點擊連接體使靶向配位體與核苷酸結合。在一些實施例中，使用基於縮醛之連接體使靶向配位體與本文所闡述之任一寡核苷酸之核苷酸結合。基於縮醛之連接體揭示於(例如)國際專利申請公開案第WO 2016/100401號中。在一些實施例中，連接體為不穩定連接體。然而，在其他實施例中，連接體為穩定連接體。
在一些實施例中，在靶向配位體(例如GalNAc部分)與雙股寡核苷酸之間提供雙鏈體延伸物(例如長度為至多3、4、5或6 bp)。在一些實施例中，本文之寡核苷酸不具有與其結合之GalNAc。 III.  調配物
已開發出各種調配物以促進寡核苷酸之使用。舉例而言，可使用使降解最小化、促進遞送及/或攝取或為調配物中之寡核苷酸提供另一有益性質之調配物將寡核苷酸遞送至個體或細胞環境。在一些實施例中，將寡核苷酸調配於緩衝溶液(諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液)、脂質體、膠束結構及殼體中。
可使用寡核苷酸與陽離子脂質之調配物以促進寡核苷酸轉染至細胞中。舉例而言，可使用陽離子脂質(諸如lipofectin)、陽離子甘油衍生物及多陽離子分子(例如多離胺酸)。適宜脂質包括Oligofectamine、Lipofectamine (Life Technologies)、NC388 (Ribozyme Pharmaceuticals, Inc., Boulder, Colo.)或FuGene 6 (Roche)，所有該等脂質均可根據製造商說明書使用。
因此，在一些實施例中，調配物包含脂質奈米顆粒。在一些實施例中，賦形劑包含脂質體、脂質、脂質複合物、微球、微粒、奈米球或奈米顆粒，或可以其他方式調配以供向有需要之個體的細胞、組織、器官或身體投與(例如，參見Remington: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY，第22版，Pharmaceutical Press, 2013)。
在一些實施例中，本文之調配物包含賦形劑。在一些實施例中，賦形劑賦予組合物改良之穩定性、改良之吸收、改良之溶解度及/或活性成分之治療增強。在一些實施例中，賦形劑為緩衝劑(例如檸檬酸鈉、磷酸鈉、tris鹼或氫氧化鈉)或媒劑(例如緩衝溶液、石蠟脂、二甲亞碸或礦物油)。在一些實施例中，將寡核苷酸凍乾以延長其儲放壽命，且隨後在使用前製成溶液(例如投與給個體)。因此，包含本文所闡述之任一寡核苷酸之組合物中之賦形劑可為凍乾保護劑(例如甘露醇、乳糖、聚乙二醇或聚乙烯吡咯啶酮)或塌陷溫度調節劑(例如聚葡萄糖、Ficoll™或明膠)。
在一些實施例中，醫藥組合物經調配以與其預期投與途徑相容。投與途徑之實例包括非經腸(例如靜脈內、肌內、腹膜內、皮內、皮下)、經口(例如吸入)、經皮(例如局部)、經黏膜及經直腸投與。
適於注射使用之醫藥組合物包括無菌水溶液(倘若可溶於水)或分散液，及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。對於靜脈內投與，適宜載劑包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。載劑可為含有(例如)水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及諸如此類)及其適宜混合物之溶劑或分散介質。在許多情形中，較佳在組合物中包括等滲劑，例如糖、多元醇(諸如甘露醇、山梨醇)、氯化鈉。無菌可注射溶液可藉由將所需量之寡核苷酸與上文所列舉之一種成分或多種成分之組合一起按需要併入所選溶劑中，之後過濾滅菌來製備。
在一些實施例中，組合物可含有至少約0.1%或更多之治療劑，儘管活性成分之百分比可為總組合物之重量或體積之約1%至約80%或更多。製備此等醫藥調配物之熟習此項技術者將考慮諸如溶解度、生物利用度、生物半衰期、投與途徑、產品儲放壽命以及其他藥理學考慮因素等因素，且因此，可能期望多種劑量及治療方案。
即使若干個實施例係關於本文之任一寡核苷酸之肝臟靶向遞送，亦考慮對其他組織之靶向。 IV.  使用方法 i.     降低細胞中之LPA表現
本揭示案提供使有效量之本文之任一寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)接觸或遞送至細胞或細胞群體以達成降低LPA表現之目的之方法。在一些實施例中，藉由量測細胞中LPA mRNA、apo(a)蛋白或apo(a)活性之量或水準之降低來測定LPA表現之降低。該等方法可包括本文所闡述之步驟，且該等步驟可(但不一定)按所闡述之順序進行。然而，亦可想象其他順序。此外，個別或多個步驟可在時間上並行及/或重疊及/或個別地或以多次重複之步驟進行。此外，該等方法可包括額外未指定之步驟。
本文之方法可用於任何適當之細胞類型。在一些實施例中，細胞係表現mRNA之任何細胞(例如肝細胞、巨噬細胞、單核球源性細胞、前列腺癌細胞、腦細胞、內分泌組織、骨髓、淋巴結、肺、膽囊、肝臟、十二指腸、小腸、胰臟、腎臟、胃腸道、膀胱、脂肪及軟組織及皮膚)。在一些實施例中，細胞係自個體獲得之原代細胞。在一些實施例中，原代細胞經歷有限次數之傳代，使得細胞實質上維持天然表型性質。在一些實施例中，寡核苷酸所遞送之細胞為離體或活體外的(亦即，可遞送至培養中之細胞或遞送至細胞所駐留之生物體)。
在一些實施例中，使用此項技術中已知之核酸遞送方法將本文之寡核苷酸遞送至細胞或細胞群體，該遞送方法包括(但不限於)注射含有寡核苷酸之溶液、藉由覆蓋有寡核苷酸之顆粒轟擊、使細胞或細胞群體暴露於含有寡核苷酸之溶液或在寡核苷酸存在下使細胞膜電穿孔。可使用此項技術中已知之將寡核苷酸遞送至細胞之其他方法，諸如脂質介導之載劑轉運、化學品介導之轉運及陽離子脂質體轉染(諸如磷酸鈣)及其他方法。
在一些實施例中，藉由評估細胞或細胞群體中與LPA表現相關之一或多種分子、性質或特徵之分析或技術(例如使用LPA表現生物標誌物)或藉由評估直接指示細胞或細胞群體中之LPA表現之分子(例如LPA mRNA或apo(a)蛋白)之分析或技術來測定LPA表現之降低。在一些實施例中，本文之寡核苷酸降低LPA表現之程度係藉由將與該寡核苷酸接觸之細胞或細胞群體中之LPA表現與對照細胞或細胞群體(例如未與該寡核苷酸接觸或與對照寡核苷酸接觸之細胞或細胞群體)進行比較來評估。在一些實施例中，預先確定對照細胞或細胞群體中LPA表現之對照量或水準，使得不需要在實施分析或技術之每個實例中量測對照量或水準。預先確定之水準或值可採取多種形式。在一些實施例中，預先確定之水準或值可為單一截止值，諸如中值或平均值。
在一些實施例中，使本文之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)接觸或遞送至細胞或細胞群體使得LPA表現降低。在一些實施例中，LPA表現之降低係相對於未與寡核苷酸接觸或與對照寡核苷酸接觸之細胞或細胞群體中之LPA表現之對照量或水準。在一些實施例中，相對於LPA表現之對照量或水準，LPA表現之降低為約1%或更低、約5%或更低、約10%或更低、約15%或更低、約20%或更低、約25%或更低、約30%或更低、約35%或更低、約40%或更低、約45%或更低、約50%或更低、約55%或更低、約60%或更低、約70%或更低、約80%或更低或約90%或更低。在一些實施例中，LPA表現之對照量或水準係尚未與本文之寡核苷酸接觸之細胞或細胞群體中的LPA mRNA及/或apo(a)蛋白之量或水準。在一些實施例中，根據本文方法將寡核苷酸遞送至細胞或細胞群體之效應係在任何有限時期或時間量(例如分鐘、小時、天、週、月)後評價。舉例而言，在一些實施例中，在使寡核苷酸接觸或遞送至細胞或細胞群體後至少約4小時、約8小時、約12小時、約18小時、約24小時；或至少約1天、約2天、約3天、約4天、約5天、約6天、約7天、約8天、約9天、約10天、約11天、約12天、約13天、約14天、約21天、約28天、約35天、約42天、約49天、約56天、約63天、約70天、約77天或約84天或更長時間測定細胞或細胞群體中之LPA表現。在一些實施例中，在使寡核苷酸接觸或遞送至細胞或細胞群體後至少約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月或約6個月或更長時間測定細胞或細胞群體中之 LPA表現。
在一些實施例中，寡核苷酸係以轉殖基因之形式遞送，該轉殖基因經工程化以在細胞中表現該寡核苷酸或包含該寡核苷酸之股(例如其有義股及反義股)。在一些實施例中，使用經工程化以表現本文所揭示之任一寡核苷酸之轉殖基因來遞送寡核苷酸。可使用病毒載體(例如腺病毒、反轉錄病毒、牛痘病毒、痘病毒、腺相關病毒或單純疱疹病毒)或非病毒載體(例如質體或合成mRNA)來遞送轉殖基因。在一些實施例中，可將轉殖基因直接注射至個體中。 ii.    醫療用途
本揭示案亦提供用於或適用於治療將受益於降低LPA表現之個體(例如患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之人類)之寡核苷酸。在一些實施例中，本揭示案提供用於或適用於治療患有與LPA之表現相關的疾病、病症或疾患之個體之寡核苷酸。本揭示案亦提供用於或適用於製造用於治療與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之藥劑或醫藥組合物之寡核苷酸。在一些實施例中，所用或適用之寡核苷酸靶向LPA mRNA並降低LPA表現(例如經由RNAi路徑)。在一些實施例中，所用或適用之寡核苷酸靶向LPA mRNA並降低LPA mRNA、apo(a)蛋白及/或apo (a)活性之量或水準。
另外，在本文方法之一些實施例中，選擇患有或易患與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體用本文之寡核苷酸(例如雙股寡核苷酸)進行治療。在一些實施例中，該方法包括選擇具有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之標誌物(例如生物標誌物)或易於具有該標誌物(諸如(但不限於) LPA mRNA、apo(a)蛋白、脂蛋白(a)或其組合)之個體。同樣，且如下文所詳述，本揭示案所提供方法之一些實施例包括諸如以下等步驟：量測或獲得LPA表現標誌物(例如脂蛋白(a))之基線值，且接著將此獲得值與一或多個其他基線值或在向個體投與寡核苷酸後所獲得之值進行比較，以評價治療之有效性。 iii.   治療方法
本揭示案亦提供利用本文之寡核苷酸治療患有、疑似患有或處於發生與LPA表現相關之疾病、病症或疾患風險下之個體之方法。在一些實施例中，本揭示案提供使用本文之寡核苷酸治療或減弱與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之發作或進展之方法。在其他實施例中，本揭示案提供使用本文之寡核苷酸在患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體中達成一或多種治療益處之方法。在本文方法之一些實施例中，藉由投與治療有效量之本文之任一或多種寡核苷酸治療個體。在一些實施例中，治療包含降低LPA表現。在一些實施例中，對個體進行治療性治療。在一些實施例中，對個體進行預防性治療。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中之LPA表現降低，藉此治療該個體。在一些實施例中，個體中LPA mRNA之量或水準降低。在一些實施例中，個體中apo(a)蛋白之量或水準降低。在一些實施例中，個體中脂蛋白(a)之量或水準降低。在一些實施例中，個體中apo(a)活性之量或水準降低。在一些實施例中，個體中甘油三酯(TG) (例如一或多種TG或總TG)之量或水準降低。在一些實施例中，個體中膽固醇(例如總膽固醇、LDL膽固醇及/或HDL膽固醇)之量或水準降低。在一些實施例中，個體中低密度脂蛋白(LDL)膽固醇之量或水準降低。在一些實施例中，個體中OxPL之量或活性降低或改變。在一些實施例中，個體中LDL-C之量或活性降低或改變。在一些實施例中，個體中apoB-100之量或活性降低或改變。在一些實施例中，個體中以下各項之任一組合降低或改變：LPA表現、LPA mRNA之量或水準、apo(a)蛋白之量或水準、apo(a)活性之量或水準、TG之量或水準、膽固醇之量或水準、OxPL之量或活性、LDL-C之量或活性及/或apoB-100之量或活性。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中之LPA表現與在投與該寡核苷酸或醫藥組合物之前的LPA表現相比降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，與未接受該寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如參考或對照個體)中之LPA表現相比，該個體中之LPA表現降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中LPA mRNA之量或水準與在投與該寡核苷酸或醫藥組合物之前LPA mRNA之量或水準相比降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，與未接受該寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如參考或對照個體)中之LPA mRNA之量或水準相比，該個體中之LPA mRNA之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中apo(a)蛋白之量或水準與在投與該寡核苷酸或醫藥組合物之前apo(a)蛋白之量或水準相比降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，與未接受該寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如參考或對照個體)中之apo(a)蛋白之量或水準相比，該個體中之apo(a)蛋白之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中apo(a)活性之量或水準與在投與該寡核苷酸或醫藥組合物之前apo(a)活性之量或水準相比降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，與未接受該寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如參考或對照個體)中之apo(a)活性之量或水準相比，該個體中之apo(a)活性之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中脂蛋白(a)之量或水準與在投與該寡核苷酸或醫藥組合物之前脂蛋白(a)之量或水準相比降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，與未接受該寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如參考或對照個體)中之脂蛋白(a)之量或水準相比，該個體中之脂蛋白(a)之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。
脂蛋白(a)水準在成人中之範圍較寬，其中血漿水準範圍為＜0.1 mg/dL至＞200 mg/dL，因此在個體中展現出高達三個數量級之差異(Schmidt等人，(2016) J Lipid Res. 57(8):1339-1359)。在美國及加拿大，脂蛋白(a)水準＜30 mg/dl視為最佳的(Anderson等人，(2016) Can J Cardiol 32:1263-82)。歐洲動脈粥樣硬化學會(European Atherosclerosis Society, EAS)已提議＜50 mg/dL為最佳，且在德國及英國，脂蛋白(a)水準＞60 mg/dl用作析離術補償之截止值(Tsimikas (2017) J Am Coll Cardiol. 69(6):692-711)。在一些實施例中，經選擇用於治療或用本文之寡核苷酸治療之個體經鑑別或確定具有約30 mg/dL或更大之脂蛋白(a)之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或用本文之寡核苷酸治療之個體經鑑別或確定具有＞30 mg/dL之脂蛋白(a)之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或用本文之寡核苷酸治療之個體經鑑別或確定具有約50 mg/dL或更大之脂蛋白(a)之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或用本文之寡核苷酸治療之個體經鑑別或確定具有約60 mg/dL或更大之脂蛋白(a)之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或用本文之寡核苷酸治療之個體經鑑別或確定具有在30 mg/dL至300 mg/dL範圍內之脂蛋白(a)之量或水準。
通常，人類患者之正常或合意TG範圍為＜150 mg/dL血液，其中＜100 mg/dL視為理想的。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有≥150 mg/dL之TG量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在150 mg/dL至199 mg/dL範圍內之TG量或水準，其視為臨界性高TG水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在200 mg/dL至499 mg/dL範圍內之TG量或水準，其視為高TG水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在500 mg/dL或更高(亦即≥500 mg/dL)範圍內之TG量或水準，其視為極高TG水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有≥150 mg/dL、≥200 mg/dL或≥ 500 mg/dL之TG量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有200 mg/dL至499 mg/dL或500 mg/dL或更高之TG量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有≥200 mg/dL之TG量或水準。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中膽固醇(例如總膽固醇、LDL膽固醇及/或HDL膽固醇)之量或水準與在投與該寡核苷酸或醫藥組合物之前膽固醇之量或水準相比降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，與未接受該寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如參考或對照個體)中之膽固醇之量或水準相比，該個體中之膽固醇之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。
通常，成人患者之正常或合意膽固醇範圍(總膽固醇)為＜200 mg/dL血液。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有≥200 mg/dL之膽固醇之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在200 mg/dL至239 mg/dL範圍內之膽固醇之量或水準，其視為臨界性高膽固醇水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在240 mg/dL及更高(亦即≥240 mg/dL)範圍內之膽固醇之量或水準，其視為高膽固醇水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有200 mg/dL至239 mg/dL或240 mg/dL或更高之膽固醇之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有≥200 mg/dL或≥240 mg/dL或更高之膽固醇之量或水準。
在本文方法之一些實施例中，將本文之寡核苷酸或包含該寡核苷酸之醫藥組合物投與給患有與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之個體，使得該個體中LDL膽固醇之量或水準與在投與該寡核苷酸或醫藥組合物之前LDL膽固醇之量或水準相比降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。在一些實施例中，與未接受該寡核苷酸或醫藥組合物或接受對照寡核苷酸、醫藥組合物或治療之個體(例如參考或對照個體)中之LDL膽固醇之量或水準相比，該個體中之LDL膽固醇之量或水準降低至少約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約99%或大於99%。
通常，成人患者之正常或合意LDL膽固醇範圍為＜100 mg/dL血液。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有≥100 mg/dL之膽固醇之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在100 mg/dL至129 mg/dL範圍內之LDL膽固醇之量或水準，其視為在最佳以上。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在130 mg/dL至159 mg/dL範圍內之LDL膽固醇之量或水準，其視為臨界性高水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在160 mg/dL至189 mg/dL範圍內之LDL膽固醇之量或水準，其視為高LDL膽固醇水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有在190 mg/dL及更高(亦即≥190 mg/dL)範圍內之LDL膽固醇之量或水準，其視為極高LDL膽固醇水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有≥100 mg/dL、≥130 mg/dL、≥160 mg/dL或≥190 mg/dL或更高、較佳≥160 mg/dL或≥190 mg/dL或更高之LDL膽固醇之量或水準。在一些實施例中，經選擇用於治療或被治療之患者經鑑別或確定具有100 mg/dL至129 mg/dL、130 mg/dL至159 mg/dL、160 mg/dL至189 mg/dL或190 mg/dL及更高之LDL膽固醇之量或水準。
用於測定個體或來自個體之樣品中的LPA表現、LPA mRNA之量或水準、apo(a)蛋白之量或水準、apo(a)活性之量或水準、脂蛋白(a)之量或水準及/或OxPL、LDL-C、apoB-100、TG及/或LDL膽固醇之量或水準之適宜方法為此項技術中所已知。此外，本文所陳述之實例闡釋用於測定LPA表現之例示性方法。
在一些實施例中，在自個體獲得或分離之細胞(例如肝細胞)、細胞群體或群組(例如類器官)、器官(例如肝臟)、血液或其一部分(例如血漿)、組織(例如肝臟組織)、樣品(例如肝臟生檢樣品)或任何其他生物材料中，LPA表現、LPA mRNA、apo(a)蛋白、apo(a)活性、OxPL、LDL-C、apoB-100、TG、LDL膽固醇或其任何組合之量或水準降低。在一些實施例中，在自個體獲得或分離之一種以上類型之細胞(例如肝細胞及一或多種其他類型之細胞)、一種以上細胞群組、一種以上器官(例如肝臟及一或多種其他器官)、一種以上血液部分(例如血漿及一或多種其他血液部分)、一種以上類型之組織(例如肝臟組織及一或多種其他類型之組織)、一種以上類型之樣品(例如肝臟生檢樣品及一或多種其他類型之生檢樣品)中，LPA表現、LPA mRNA、apo(a)蛋白、apo(a)活性、OxPL、LDL-C、apoB-100、TG、LDL膽固醇或其任何組合之量或水準降低。
與LPA表現相關之疾病、病症或疾患之實例包括(但不限於)伯格氏病(Berger's disease)、外周動脈疾病、冠狀動脈疾病、代謝症候群、急性冠狀動脈症候群、主動脈瓣狹窄、主動脈瓣反流、主動脈剝離、視網膜動脈阻塞、腦血管疾病、腸系膜缺血、腸系膜上動脈阻塞、腎動脈狹窄、穩定/不穩定性心絞痛、急性冠狀動脈症候群、異型合子或同型合子家族性高膽固醇血症、高脫輔基β-脂蛋白血症、腦血管動脈粥樣硬化、腦血管疾病及靜脈血栓形成或其組合。
由於其高特異性，本文之寡核苷酸特異性地靶向細胞、組織或器官(例如肝臟)之靶基因之mRNA。在預防疾病中，靶基因可為起始或維持疾病所需之基因，或為已鑑別為與感染疾病之較高風險相關之基因。在治療疾病中，可使寡核苷酸與展現疾病或負責介導疾病之細胞或組織接觸。舉例而言，可使與野生型(亦即天然)或突變基因(同與LPA表現相關之病症或疾患相關)之全部或一部分實質上一致之寡核苷酸與所關注之細胞或組織類型(諸如肝細胞或其他肝臟細胞)接觸或引入其中。
在一些實施例中，靶基因可為來自任何哺乳動物(諸如人類)之靶基因。根據本文所闡述之方法，可使任何基因沈默。
本文所闡述之方法通常涉及向個體投與治療有效量的本文之寡核苷酸，亦即，能夠產生合意治療結果之量。治療上可接受之量可為可治療性地治療疾病或病症之量。用於任一個體之適當劑量將取決於某些因素，包括個體之體型、體表面積、年齡、欲投與之特定組合物、組合物中之活性成分、投與時間及投與途徑、一般健康狀況及同時投與之其他藥物。
在一些實施例中，以下列方式向個體投與本文之任一組合物：經腸(例如經口、藉由胃飼管、藉由十二指腸飼管、經由胃造口術或經直腸)、非經腸(例如皮下注射、靜脈內注射或輸注、動脈內注射或輸注、骨內輸注、肌內注射、腦內注射、腦室內注射、鞘內)、局部(例如皮上、吸入、經由滴眼劑或經黏膜)或藉由直接注射至靶器官(例如個體之肝臟)中。通常，靜脈內或皮下投與本文之寡核苷酸。
作為一組非限制性實例，本文之寡核苷酸通常將按季度(每三個月一次)、雙月(每兩個月一次)、月或週投與。舉例而言，寡核苷酸可每週投與，或每隔兩週或三週投與。或者，寡核苷酸可每天投與。在一些實施例中，向個體投與一或多個負荷劑量之寡核苷酸，之後投與一或多個維持劑量之寡核苷酸。
在一些實施例中，欲治療之個體為人類或非人類靈長類動物或其他哺乳動物個體。其他例示性個體包括家養動物，諸如狗及貓；家畜，諸如馬、牛、豬、綿羊、山羊及雞；以及諸如小鼠、大鼠、天竺鼠及倉鼠等動物。 V.   套組
在一些實施例中，本揭示案提供套組，其包含本文之寡核苷酸及使用說明書。在一些實施例中，套組包含本文之寡核苷酸及含有該套組及/或其任何組分之使用說明書之包裝插頁。在一些實施例中，套組在適宜容器中包含本文之寡核苷酸、一或多種對照及此項技術中所熟知之各種緩衝液、試劑、酶及其他標準成分。在一些實施例中，容器包含至少一個小瓶、孔、試管、燒瓶、瓶、注射器或其他容器器件，寡核苷酸放置在該等容器中且在一些情況下經適當等分。在提供額外組分之一些實施例中，套組含有放置此組分之額外容器。套組亦可包括用於將寡核苷酸及任何其他試劑封閉限制容納以進行商業銷售之器件。此等容器可包括其中保留期望小瓶之注射或吹塑成型塑膠容器。容器及/或套組可包括帶有使用說明書及/或警告之標籤。
在一些實施例中，套組包含本文之寡核苷酸及醫藥學上可接受之載劑或包含該寡核苷酸之醫藥組合物，以及關於治療有需要個體之與LPA表現相關之疾病、病症或疾患或延遲其進展之說明書。 實例
儘管已參考以下實例中所陳述之具體實施例闡述本揭示案，但熟習此項技術者應理解，可在不背離本揭示案之真實精神及範圍之情形下作出各種改變且可替代等效內容。此外，以下實例係以闡釋性方式提供，且不意欲以任何方式限制本揭示案之範圍。另外，針對本揭示案之目標、精神及範圍，可進行修飾以適應於情形、材料、物質組成、製程、一或多個製程步驟。所有此等修飾均意欲在本揭示案之範圍內。利用此項技術中所熟知之標準技術或下文所具體闡述之技術。 實例 1 ：雙股 RNAi 寡核苷酸之製備 寡核苷酸合成及純化
前述實例中所闡述之雙股RNAi寡核苷酸係使用本文所闡述之方法化學合成的。通常，使用如針對19-23mer siRNA所闡述之固相寡核苷酸合成方法(例如，參見Scaringe等人(1990) Nucleic Acids Res .18:5433-41及Usman等人(1987) J. Am. Chem. Soc. 109:7845-45；亦參見美國專利第5,804,683號；第5,831,071號；第5,998,203號；第6,008,400號；第6,111,086號；第6,117,657號；第6,353,098號；第6,362,323號；第6,437,117號及第6,469,158號)合成雙股RNAi寡核苷酸。
根據標準方法(Integrated DNA Technologies; Coralville, IA)合成個別RNA股並進行HPLC純化。舉例而言，使用固相亞磷醯胺化學來合成RNA寡核苷酸，使用標準技術(Damha及Olgivie (1993) Methods Mol. Biol. 20:81-114；Wincott等人(1995) Nucleic Acids Res. 23:2677-84)去保護且在NAP-5管柱(Amersham Pharmacia Biotech; Piscataway, NJ)上去鹽。使用離子交換高效液相層析(IE-HPLC)，在Amersham Source 15Q管柱(1.0 cm×25 cm；Amersham Pharmacia Biotech)上使用15 min分步線性梯度純化寡聚物。梯度自90:10緩衝液A:B至52:48緩衝液A:B變化，其中緩衝液A為100 mM Tris pH 8.5且緩衝液B為100 mM Tris pH 8.5、1 M NaCl。在260 nm下監測樣品，且收集對應於全長寡核苷酸種類之峰，合併，在NAP-5管柱上去鹽並凍乾。
藉由毛細管電泳(CE)，在Beckman PACE 5000 (Beckman Coulter, Inc.; Fullerton, CA)上測定每一寡聚物之純度。CE毛細管具有100 μm內徑且含有單股DNA 100R凝膠(Beckman-Coulter)。通常，將約0.6奈莫耳寡核苷酸注射至毛細管中，在444 V/cm之電場中電泳且藉由260 nm UV吸光度偵測。變性Tris-硼酸鹽-7 M-脲電泳緩衝液購自Beckman-Coulter。如藉由CE所評價，獲得至少90%純之寡核糖核苷酸，其用於下文所闡述之實驗中。在Voyager DE™生物光譜測定工作站(Applied Biosystems; Foster City, CA)上，遵循製造商之推薦方案藉由基質輔助雷射脫附離子化飛行時間(MALDI-TOF)質譜驗證化合物屬性(identity)。獲得所有寡聚物之相對分子質量，通常在預期分子質量之0.2%內。 雙鏈體之製備
將單股RNA寡聚物重新懸浮(例如以100 μM濃度)於由100 mM乙酸鉀、30 mM HEPES (pH 7.5)組成之雙鏈體緩衝液中。將互補有義股及反義股以等莫耳量混合，以產生(例如) 50 μM雙鏈體之最終溶液。將樣品在RNA緩衝液(IDT)中加熱至100℃後持續5′，且在使用之前將其冷卻至室溫。將雙股RNA寡核苷酸儲存在-20℃下。單股RNA寡聚物凍乾儲存或儲存在-80℃之無核酸酶水中。 實例 2 ： RNAi 寡核苷酸對活體外 LPA 表現之抑制LPA mRNA 靶序列鑑別
為鑑別 LPA表現之RNAi寡核苷酸抑制劑，使用基於電腦之演算法計算鑑別適用於分析RNAi路徑對LPA表現之抑制之LPA mRNA靶序列。演算法提供RNAi寡核苷酸引導股(反義股)序列，其各自具有與人類LPA mRNA (例如SEQ ID NO: 1； 表 1)之適宜LPA靶序列互補之區。由演算法鑑別之一些引導股序列亦與猴LPA mRNA (SEQ ID NO: 2； 表 1)之相應LPA靶序列互補。生成RNAi寡核苷酸(格式化為DsiRNA寡核苷酸)( 表 2)，其各自具有獨特之引導股，該引導股具有與由演算法鑑別之LPA靶序列互補之區。 表 2中所提供之DsiRNA之随从股(有義股)包含由演算法鑑別之獨特的人類LPA mRNA靶序列。 表 1：人類及NHP (猴) mRNA之序列
物種 GenBank 參考序列號 SEQ ID NO:
人類(Hs) NM_005577.3 1
食蟹猴(Mf) XM_015448517.1 2
恆河猴 XM_028847001.1 3
表 2：在細胞中評估之靶向人類LPA mRNA及對照之DsiRNA
DsiRNA 随从股( 有義股) SEQ ID NO: 引導股 ( 反義股) SEQ ID NO: 靶序列 SEQ ID NO:
LPA-125 CUGAGCAAAGCCAUGUGGUACAGGA 4 UCCUGUACCACAUGGCUUUGCUCAGGU 404 CUGAGCAAAGCCAUGUGGU 804
LPA-128 AGCAAAGCCAUGUGGUCCAAGAUTG 5 CAAUCUUGGACCACAUGGCUUUGCUCA 405 AGCAAAGCCAUGUGGUCCA 805
LPA-132 AAGCCAUGUGGUCCAGGAUAGCUAC 6 GUAGCUAUCCUGGACCACAUGGCUUUG 406 AAGCCAUGUGGUCCAGGAU 806
LPA-133 AGCCAUGUGGUCCAGGAUUACUACC 7 GGUAGUAAUCCUGGACCACAUGGCUUU 407 AGCCAUGUGGUCCAGGAUU 807
LPA-134 GCCAUGUGGUCCAGGAUUGAUACCA 8 UGGUAUCAAUCCUGGACCACAUGGCUU 408 GCCAUGUGGUCCAGGAUUG 808
LPA-135 CCAUGUGGUCCAGGAUUGCAACCAT 9 AUGGUUGCAAUCCUGGACCACAUGGCU 409 CCAUGUGGUCCAGGAUUGC 809
LPA-136 CAUGUGGUCCAGGAUUGCUACCATG 10 CAUGGUAGCAAUCCUGGACCACAUGGC 410 CAUGUGGUCCAGGAUUGCU 810
LPA-137 AUGUGGUCCAGGAUUGCUAACAUGG 11 CCAUGUUAGCAAUCCUGGACCACAUGG 411 AUGUGGUCCAGGAUUGCUA 811
LPA-138 UGUGGUCCAGGAUUGCUACAAUGGT 12 ACCAUUGUAGCAAUCCUGGACCACAUG 412 UGUGGUCCAGGAUUGCUAC 812
LPA-160 GGUGAUGGACAGAGUUAUCAAGGCA 13 UGCCUUGAUAACUCUGUCCAUCACCAU 413 GGUGAUGGACAGAGUUAUC 813
LPA-190 UCCACCACUGUCACAGGAAAGACCT 14 AGGUCUUUCCUGUGACAGUGGUGGAGU 414 UCCACCACUGUCACAGGAA 814
LPA-191 CCACCACUGUCACAGGAAGAACCTG 15 CAGGUUCUUCCUGUGACAGUGGUGGAG 415 CCACCACUGUCACAGGAAG 815
LPA-197 CUGUCACAGGAAGGACCUGACAAGC 16 GCUUGUCAGGUCCUUCCUGUGACAGUG 416 CUGUCACAGGAAGGACCUG 816
LPA-205 GGAAGGACCUGCCAAGCUUAGUCAT 17 AUGACUAAGCUUGGCAGGUCCUUCCUG 417 GGAAGGACCUGCCAAGCUU 817
LPA-206 GAAGGACCUGCCAAGCUUGAUCATC 18 GAUGAUCAAGCUUGGCAGGUCCUUCCU 418 GAAGGACCUGCCAAGCUUG 818
LPA-208 AGGACCUGCCAAGCUUGGUAAUCTA 19 UAGAUUACCAAGCUUGGCAGGUCCUUC 419 AGGACCUGCCAAGCUUGGU 819
LPA-209 GGACCUGCCAAGCUUGGUCAUCUAT 20 AUAGAUGACCAAGCUUGGCAGGUCCUU 420 GGACCUGCCAAGCUUGGUC 820
LPA-210 GACCUGCCAAGCUUGGUCAACUATG 21 CAUAGUUGACCAAGCUUGGCAGGUCCU 421 GACCUGCCAAGCUUGGUCA 821
LPA-211 ACCUGCCAAGCUUGGUCAUAUAUGA 22 UCAUAUAUGACCAAGCUUGGCAGGUCC 422 ACCUGCCAAGCUUGGUCAU 822
LPA-212 CCUGCCAAGCUUGGUCAUCAAUGAC 23 GUCAUUGAUGACCAAGCUUGGCAGGUC 423 CCUGCCAAGCUUGGUCAUC 823
LPA-219 AGCUUGGUCAUCUAUGACAACACAT 24 AUGUGUUGUCAUAGAUGACCAAGCUUG 424 AGCUUGGUCAUCUAUGACA 824
LPA-225 GUCAUCUAUGACACCACAUAAACAT 25 AUGUUUAUGUGGUGUCAUAGAUGACCA 425 GUCAUCUAUGACACCACAU 825
LPA-258 CACAGAAAACUACCCAAAUACUGGC 26 GCCAGUAUUUGGGUAGUUUUCUGUGGU 426 CACAGAAAACUACCCAAAU 826
LPA-261 AGAAAACUACCCAAAUGCUAGCUTG 27 CAAGCUAGCAUUUGGGUAGUUUUCUGU 427 AGAAAACUACCCAAAUGCU 827
LPA-263 AAAACUACCCAAAUGCUGGAUUGAT 28 AUCAAUCCAGCAUUUGGGUAGUUUUCU 428 AAAACUACCCAAAUGCUGG 828
LPA-269 ACCCAAAUGCUGGCUUGAUAAUGAA 29 UUCAUUAUCAAGCCAGCAUUUGGGUAG 429 ACCCAAAUGCUGGCUUGAU 829
LPA-270 CCCAAAUGCUGGCUUGAUCAUGAAC 30 GUUCAUGAUCAAGCCAGCAUUUGGGUA 430 CCCAAAUGCUGGCUUGAUC 830
LPA-291 GAACUACUGCAGGAAUCCAAAUGCT 31 AGCAUUUGGAUUCCUGCAGUAGUUCAU 431 GAACUACUGCAGGAAUCCA 831
LPA-295 UACUGCAGGAAUCCAGAUGAUGUGG 32 CCACAUCAUCUGGAUUCCUGCAGUAGU 432 UACUGCAGGAAUCCAGAUG 832
LPA-296 ACUGCAGGAAUCCAGAUGCAGUGGC 33 GCCACUGCAUCUGGAUUCCUGCAGUAG 433 ACUGCAGGAAUCCAGAUGC 833
LPA-298 UGCAGGAAUCCAGAUGCUGAGGCAG 34 CUGCCUCAGCAUCUGGAUUCCUGCAGU 434 UGCAGGAAUCCAGAUGCUG 834
LPA-355 AGGUGGGAGUACUGCAACCAGACGC 35 GCGUCUGGUUGCAGUACUCCCACCUGA 435 AGGUGGGAGUACUGCAACC 835
LPA-380 AAUGCUCAGACGCAGAAGGAACUGC 36 GCAGUUCCUUCUGCGUCUGAGCAUUGC 436 AAUGCUCAGACGCAGAAGG 836
LPA-417 GACUGUUACCCCGGUUCCAAGCCTA 37 UAGGCUUGGAACCGGGGUAACAGUCGG 437 GACUGUUACCCCGGUUCCA 837
LPA-418 ACUGUUACCCCGGUUCCAAACCUAG 38 CUAGGUUUGGAACCGGGGUAACAGUCG 438 ACUGUUACCCCGGUUCCAA 838
LPA-419 CUGUUACCCCGGUUCCAAGACUAGA 39 UCUAGUCUUGGAACCGGGGUAACAGUC 439 CUGUUACCCCGGUUCCAAG 839
LPA-420 UGUUACCCCGGUUCCAAGCAUAGAG 40 CUCUAUGCUUGGAACCGGGGUAACAGU 440 UGUUACCCCGGUUCCAAGC 840
LPA-421 GUUACCCCGGUUCCAAGCCAAGAGG 41 CCUCUUGGCUUGGAACCGGGGUAACAG 441 GUUACCCCGGUUCCAAGCC 841
LPA-422 UUACCCCGGUUCCAAGCCUAGAGGC 42 GCCUCUAGGCUUGGAACCGGGGUAACA 442 UUACCCCGGUUCCAAGCCU 842
LPA-423 UACCCCGGUUCCAAGCCUAAAGGCT 43 AGCCUUUAGGCUUGGAACCGGGGUAAC 443 UACCCCGGUUCCAAGCCUA 843
LPA-492 GUGCUACCAUGGUAAUGGAAAGAGT 44 ACUCUUUCCAUUACCAUGGUAGCACUC 444 GUGCUACCAUGGUAAUGGA 844
LPA-493 UGCUACCAUGGUAAUGGACAGAGTT 45 AACUCUGUCCAUUACCAUGGUAGCACU 445 UGCUACCAUGGUAAUGGAC 845
LPA-494 GCUACCAUGGUAAUGGACAAAGUTA 46 UAACUUUGUCCAUUACCAUGGUAGCAC 446 GCUACCAUGGUAAUGGACA 846
LPA-495 CUACCAUGGUAAUGGACAGAGUUAT 47 AUAACUCUGUCCAUUACCAUGGUAGCA 447 CUACCAUGGUAAUGGACAG 847
LPA-496 UACCAUGGUAAUGGACAGAAUUATC 48 GAUAAUUCUGUCCAUUACCAUGGUAGC 448 UACCAUGGUAAUGGACAGA 848
LPA-497 ACCAUGGUAAUGGACAGAGAUAUCG 49 CGAUAUCUCUGUCCAUUACCAUGGUAG 449 ACCAUGGUAAUGGACAGAG 849
LPA-498 CCAUGGUAAUGGACAGAGUAAUCGA 50 UCGAUUACUCUGUCCAUUACCAUGGUA 450 CCAUGGUAAUGGACAGAGU 850
LPA-499 CAUGGUAAUGGACAGAGUUAUCGAG 51 CUCGAUAACUCUGUCCAUUACCAUGGU 451 CAUGGUAAUGGACAGAGUU 851
LPA-500 AUGGUAAUGGACAGAGUUAACGAGG 52 CCUCGUUAACUCUGUCCAUUACCAUGG 452 AUGGUAAUGGACAGAGUUA 852
LPA-501 UGGUAAUGGACAGAGUUAUAGAGGC 53 GCCUCUAUAACUCUGUCCAUUACCAUG 453 UGGUAAUGGACAGAGUUAU 853
LPA-502 GGUAAUGGACAGAGUUAUCAAGGCA 54 UGCCUUGAUAACUCUGUCCAUUACCAU 454 GGUAAUGGACAGAGUUAUC 854
LPA-503 GUAAUGGACAGAGUUAUCGAGGCAC 55 GUGCCUCGAUAACUCUGUCCAUUACCA 455 GUAAUGGACAGAGUUAUCG 855
LPA-523 GGCACAUACUCCACCACUGACACAG 56 CUGUGUCAGUGGUGGAGUAUGUGCCUC 456 GGCACAUACUCCACCACUG 856
LPA-563 CUUGGUCAUCUAUGACACCACACTC 57 GAGUGUGGUGUCAUAGAUGACCAAGCU 457 CUUGGUCAUCUAUGACACC 857
LPA-567 GUCAUCUAUGACACCACACACGCAT 58 AUGCGUGUGUGGUGUCAUAGAUGACCA 458 GUCAUCUAUGACACCACAC 858
LPA-568 UCAUCUAUGACACCACACUAGCATA 59 UAUGCUAGUGUGGUGUCAUAGAUGACC 459 UCAUCUAUGACACCACACU 859
LPA-569 CAUCUAUGACACCACACUCACAUAG 60 CUAUGUGAGUGUGGUGUCAUAGAUGAC 460 CAUCUAUGACACCACACUC 860
LPA-1208 GCACAUACUCCACCACUGUAACUGG 61 CCAGUUACAGUGGUGGAGUAUGUGCCU 461 GCACAUACUCCACCACUGU 861
LPA-2715 AGCCCCUUAUUGUUAUACGAGGGAT 62 AUCCCUCGUAUAACAAUAAGGGGCUGC 462 AGCCCCUUAUUGUUAUACG 862
LPA-2716 GCCCCUUAUUGUUAUACGAAGGATC 63 GAUCCUUCGUAUAACAAUAAGGGGCUG 463 GCCCCUUAUUGUUAUACGA 863
LPA-2827 CCAAGCCUAGAGGCUCCUUAUGAAC 64 GUUCAUAAGGAGCCUCUAGGCUUGGAA 464 CCAAGCCUAGAGGCUCCUU 864
LPA-2837 AGGCUCCUUCUGAACAAGCACCAAC 65 GUUGGUGCUUGUUCAGAAGGAGCCUCU 465 AGGCUCCUUCUGAACAAGC 865
LPA-2900 AUGGACAGAGUUAUCAAGGAACATA 66 UAUGUUCCUUGAUAACUCUGUCCAUUU 466 AUGGACAGAGUUAUCAAGG 866
LPA-2901 UGGACAGAGUUAUCAAGGCACAUAC 67 GUAUGUGCCUUGAUAACUCUGUCCAUU 467 UGGACAGAGUUAUCAAGGC 867
LPA-2902 GGACAGAGUUAUCAAGGCAAAUACT 68 AGUAUUUGCCUUGAUAACUCUGUCCAU 468 GGACAGAGUUAUCAAGGCA 868
LPA-2903 GACAGAGUUAUCAAGGCACAUACTT 69 AAGUAUGUGCCUUGAUAACUCUGUCCA 469 GACAGAGUUAUCAAGGCAC 869
LPA-2904 ACAGAGUUAUCAAGGCACAAACUTC 70 GAAGUUUGUGCCUUGAUAACUCUGUCC 470 ACAGAGUUAUCAAGGCACA 870
LPA-2905 CAGAGUUAUCAAGGCACAUACUUCA 71 UGAAGUAUGUGCCUUGAUAACUCUGUC 471 CAGAGUUAUCAAGGCACAU 871
LPA-3004 UACCCAAAUGCUGGCUUGAACAAGA 72 UCUUGUUCAAGCCAGCAUUUGGGUAGU 472 UACCCAAAUGCUGGCUUGA 872
LPA-3007 CCAAAUGCUGGCUUGAUCAAGAACT 73 AGUUCUUGAUCAAGCCAGCAUUUGGGU 473 CCAAAUGCUGGCUUGAUCA 873
LPA-3023 UCAAGAACUACUGCCGAAAACCAGA 74 UCUGGUUUUCGGCAGUAGUUCUUGAUC 474 UCAAGAACUACUGCCGAAA 874
LPA-3024 CAAGAACUACUGCCGAAAUACAGAT 75 AUCUGUAUUUCGGCAGUAGUUCUUGAU 475 CAAGAACUACUGCCGAAAU 875
LPA-3025 AAGAACUACUGCCGAAAUCAAGATC 76 GAUCUUGAUUUCGGCAGUAGUUCUUGA 476 AAGAACUACUGCCGAAAUC 876
LPA-3027 GAACUACUGCCGAAAUCCAAAUCCT 77 AGGAUUUGGAUUUCGGCAGUAGUUCUU 477 GAACUACUGCCGAAAUCCA 877
LPA-3030 CUACUGCCGAAAUCCAGAUACUGTG 78 CACAGUAUCUGGAUUUCGGCAGUAGUU 478 CUACUGCCGAAAUCCAGAU 878
LPA-3051 UGUGGCAGCCCCUUGGUGUAAUACA 79 UGUAUUACACCAAGGGGCUGCCACAGG 479 UGUGGCAGCCCCUUGGUGU 879
LPA-3052 GUGGCAGCCCCUUGGUGUUAUACAA 80 UUGUAUAACACCAAGGGGCUGCCACAG 480 GUGGCAGCCCCUUGGUGUU 880
LPA-3053 UGGCAGCCCCUUGGUGUUAAACAAC 81 GUUGUUUAACACCAAGGGGCUGCCACA 481 UGGCAGCCCCUUGGUGUUA 881
LPA-3054 GGCAGCCCCUUGGUGUUAUACAACA 82 UGUUGUAUAACACCAAGGGGCUGCCAC 482 GGCAGCCCCUUGGUGUUAU 882
LPA-3055 GCAGCCCCUUGGUGUUAUAAAACAG 83 CUGUUUUAUAACACCAAGGGGCUGCCA 483 GCAGCCCCUUGGUGUUAUA 883
LPA-3056 CAGCCCCUUGGUGUUAUACAACAGA 84 UCUGUUGUAUAACACCAAGGGGCUGCC 484 CAGCCCCUUGGUGUUAUAC 884
LPA-3057 AGCCCCUUGGUGUUAUACAACAGAT 85 AUCUGUUGUAUAACACCAAGGGGCUGC 485 AGCCCCUUGGUGUUAUACA 885
LPA-3058 GCCCCUUGGUGUUAUACAAAAGATC 86 GAUCUUUUGUAUAACACCAAGGGGCUG 486 GCCCCUUGGUGUUAUACAA 886
LPA-3059 CCCCUUGGUGUUAUACAACAGAUCC 87 GGAUCUGUUGUAUAACACCAAGGGGCU 487 CCCCUUGGUGUUAUACAAC 887
LPA-3092 GGUGGGAGUACUGCAACCUAACACG 88 CGUGUUAGGUUGCAGUACUCCCACCUG 488 GGUGGGAGUACUGCAACCU 888
LPA-3093 GUGGGAGUACUGCAACCUGACACGA 89 UCGUGUCAGGUUGCAGUACUCCCACCU 489 GUGGGAGUACUGCAACCUG 889
LPA-3096 GGAGUACUGCAACCUGACAAGAUGC 90 GCAUCUUGUCAGGUUGCAGUACUCCCA 490 GGAGUACUGCAACCUGACA 890
LPA-3097 GAGUACUGCAACCUGACACAAUGCT 91 AGCAUUGUGUCAGGUUGCAGUACUCCC 491 GAGUACUGCAACCUGACAC 891
LPA-3099 GUACUGCAACCUGACACGAAGCUCA 92 UGAGCUUCGUGUCAGGUUGCAGUACUC 492 GUACUGCAACCUGACACGA 892
LPA-3100 UACUGCAACCUGACACGAUACUCAG 93 CUGAGUAUCGUGUCAGGUUGCAGUACU 493 UACUGCAACCUGACACGAU 893
LPA-3101 ACUGCAACCUGACACGAUGAUCAGA 94 UCUGAUCAUCGUGUCAGGUUGCAGUAC 494 ACUGCAACCUGACACGAUG 894
LPA-3102 CUGCAACCUGACACGAUGCACAGAT 95 AUCUGUGCAUCGUGUCAGGUUGCAGUA 495 CUGCAACCUGACACGAUGC 895
LPA-3103 UGCAACCUGACACGAUGCUAAGATG 96 CAUCUUAGCAUCGUGUCAGGUUGCAGU 496 UGCAACCUGACACGAUGCU 896
LPA-3105 CAACCUGACACGAUGCUCAAAUGCA 97 UGCAUUUGAGCAUCGUGUCAGGUUGCA 497 CAACCUGACACGAUGCUCA 897
LPA-3107 ACCUGACACGAUGCUCAGAAGCAGA 98 UCUGCUUCUGAGCAUCGUGUCAGGUUG 498 ACCUGACACGAUGCUCAGA 898
LPA-3108 CCUGACACGAUGCUCAGAUACAGAA 99 UUCUGUAUCUGAGCAUCGUGUCAGGUU 499 CCUGACACGAUGCUCAGAU 899
LPA-3109 CUGACACGAUGCUCAGAUGAAGAAT 100 AUUCUUCAUCUGAGCAUCGUGUCAGGU 500 CUGACACGAUGCUCAGAUG 900
LPA-3110 UGACACGAUGCUCAGAUGCAGAATG 101 CAUUCUGCAUCUGAGCAUCGUGUCAGG 501 UGACACGAUGCUCAGAUGC 901
LPA-3111 GACACGAUGCUCAGAUGCAAAAUGG 102 CCAUUUUGCAUCUGAGCAUCGUGUCAG 502 GACACGAUGCUCAGAUGCA 902
LPA-3112 ACACGAUGCUCAGAUGCAGAAUGGA 103 UCCAUUCUGCAUCUGAGCAUCGUGUCA 503 ACACGAUGCUCAGAUGCAG 903
LPA-3113 CACGAUGCUCAGAUGCAGAAUGGAC 104 GUCCAUUCUGCAUCUGAGCAUCGUGUC 504 CACGAUGCUCAGAUGCAGA 904
LPA-3229 UGCUACUACCAUUAUGGACAGAGTT 105 AACUCUGUCCAUAAUGGUAGUAGCAGU 505 UGCUACUACCAUUAUGGAC 905
LPA-3230 GCUACUACCAUUAUGGACAAAGUTA 106 UAACUUUGUCCAUAAUGGUAGUAGCAG 506 GCUACUACCAUUAUGGACA 906
LPA-3231 CUACUACCAUUAUGGACAGAGUUAC 107 GUAACUCUGUCCAUAAUGGUAGUAGCA 507 CUACUACCAUUAUGGACAG 907
LPA-3232 UACUACCAUUAUGGACAGAAUUACC 108 GGUAAUUCUGUCCAUAAUGGUAGUAGC 508 UACUACCAUUAUGGACAGA 908
LPA-3233 ACUACCAUUAUGGACAGAGAUACCG 109 CGGUAUCUCUGUCCAUAAUGGUAGUAG 509 ACUACCAUUAUGGACAGAG 909
LPA-3234 CUACCAUUAUGGACAGAGUAACCGA 110 UCGGUUACUCUGUCCAUAAUGGUAGUA 510 CUACCAUUAUGGACAGAGU 910
LPA-3235 UACCAUUAUGGACAGAGUUACCGAG 111 CUCGGUAACUCUGUCCAUAAUGGUAGU 511 UACCAUUAUGGACAGAGUU 911
LPA-3236 ACCAUUAUGGACAGAGUUAACGAGG 112 CCUCGUUAACUCUGUCCAUAAUGGUAG 512 ACCAUUAUGGACAGAGUUA 912
LPA-3257 GAGGCACAUACUCCACCACAGUCAC 113 GUGACUGUGGUGGAGUAUGUGCCUCGG 513 GAGGCACAUACUCCACCAC 913
LPA-3267 CUCCACCACUGUCACAGGAAGAACT 114 AGUUCUUCCUGUGACAGUGGUGGAGUA 514 CUCCACCACUGUCACAGGA 914
LPA-3280 ACAGGAAGAACUUGCCAAGAUUGGT 115 ACCAAUCUUGGCAAGUUCUUCCUGUGA 515 ACAGGAAGAACUUGCCAAG 915
LPA-3281 CAGGAAGAACUUGCCAAGCAUGGTC 116 GACCAUGCUUGGCAAGUUCUUCCUGUG 516 CAGGAAGAACUUGCCAAGC 916
LPA-3282 AGGAAGAACUUGCCAAGCUAGGUCA 117 UGACCUAGCUUGGCAAGUUCUUCCUGU 517 AGGAAGAACUUGCCAAGCU 917
LPA-3283 GGAAGAACUUGCCAAGCUUAGUCAT 118 AUGACUAAGCUUGGCAAGUUCUUCCUG 518 GGAAGAACUUGCCAAGCUU 918
LPA-3284 GAAGAACUUGCCAAGCUUGAUCATC 119 GAUGAUCAAGCUUGGCAAGUUCUUCCU 519 GAAGAACUUGCCAAGCUUG 919
LPA-3285 AAGAACUUGCCAAGCUUGGACAUCT 120 AGAUGUCCAAGCUUGGCAAGUUCUUCC 520 AAGAACUUGCCAAGCUUGG 920
LPA-3286 AGAACUUGCCAAGCUUGGUAAUCTA 121 UAGAUUACCAAGCUUGGCAAGUUCUUC 521 AGAACUUGCCAAGCUUGGU 921
LPA-3287 GAACUUGCCAAGCUUGGUCAUCUAT 122 AUAGAUGACCAAGCUUGGCAAGUUCUU 522 GAACUUGCCAAGCUUGGUC 922
LPA-3288 AACUUGCCAAGCUUGGUCAACUATG 123 CAUAGUUGACCAAGCUUGGCAAGUUCU 523 AACUUGCCAAGCUUGGUCA 923
LPA-3289 ACUUGCCAAGCUUGGUCAUAUAUGA 124 UCAUAUAUGACCAAGCUUGGCAAGUUC 524 ACUUGCCAAGCUUGGUCAU 924
LPA-3290 CUUGCCAAGCUUGGUCAUCAAUGAC 125 GUCAUUGAUGACCAAGCUUGGCAAGUU 525 CUUGCCAAGCUUGGUCAUC 925
LPA-3291 UUGCCAAGCUUGGUCAUCUAUGACA 126 UGUCAUAGAUGACCAAGCUUGGCAAGU 526 UUGCCAAGCUUGGUCAUCU 926
LPA-3292 UGCCAAGCUUGGUCAUCUAAGACAC 127 GUGUCUUAGAUGACCAAGCUUGGCAAG 527 UGCCAAGCUUGGUCAUCUA 927
LPA-3298 GCUUGGUCAUCUAUGACACAACACC 128 GGUGUUGUGUCAUAGAUGACCAAGCUU 528 GCUUGGUCAUCUAUGACAC 928
LPA-3300 UUGGUCAUCUAUGACACCAAACCAG 129 CUGGUUUGGUGUCAUAGAUGACCAAGC 529 UUGGUCAUCUAUGACACCA 929
LPA-3301 UGGUCAUCUAUGACACCACACCAGC 130 GCUGGUGUGGUGUCAUAGAUGACCAAG 530 UGGUCAUCUAUGACACCAC 930
LPA-3303 GUCAUCUAUGACACCACACAAGCAT 131 AUGCUUGUGUGGUGUCAUAGAUGACCA 531 GUCAUCUAUGACACCACAC 931
LPA-3305 CAUCUAUGACACCACACCAACAUAG 132 CUAUGUUGGUGUGGUGUCAUAGAUGAC 532 CAUCUAUGACACCACACCA 932
LPA-3306 AUCUAUGACACCACACCAGAAUAGT 133 ACUAUUCUGGUGUGGUGUCAUAGAUGA 533 AUCUAUGACACCACACCAG 933
LPA-3308 CUAUGACACCACACCAGCAAAGUCG 134 CGACUUUGCUGGUGUGGUGUCAUAGAU 534 CUAUGACACCACACCAGCA 934
LPA-3329 GUCGGACCCCAGAAAACUAACCAAA 135 UUUGGUUAGUUUUCUGGGGUCCGACUA 535 GUCGGACCCCAGAAAACUA 935
LPA-3330 UCGGACCCCAGAAAACUACACAAAT 136 AUUUGUGUAGUUUUCUGGGGUCCGACU 536 UCGGACCCCAGAAAACUAC 936
LPA-3340 GAAAACUACCCAAAUGCUGACCUGA 137 UCAGGUCAGCAUUUGGGUAGUUUUCUG 537 GAAAACUACCCAAAUGCUG 937
LPA-3391 GCUGAGAUUCGCCCUUGGUAUUACA 138 UGUAAUACCAAGGGCGAAUCUCAGCAU 538 GCUGAGAUUCGCCCUUGGU 938
LPA-3392 CUGAGAUUCGCCCUUGGUGAUACAC 139 GUGUAUCACCAAGGGCGAAUCUCAGCA 539 CUGAGAUUCGCCCUUGGUG 939
LPA-3394 GAGAUUCGCCCUUGGUGUUACACCA 140 UGGUGUAACACCAAGGGCGAAUCUCAG 540 GAGAUUCGCCCUUGGUGUU 940
LPA-3395 AGAUUCGCCCUUGGUGUUAAACCAT 141 AUGGUUUAACACCAAGGGCGAAUCUCA 541 AGAUUCGCCCUUGGUGUUA 941
LPA-3398 UUCGCCCUUGGUGUUACACAAUGGA 142 UCCAUUGUGUAACACCAAGGGCGAAUC 542 UUCGCCCUUGGUGUUACAC 942
LPA-3404 CUUGGUGUUACACCAUGGAACCCAG 143 CUGGGUUCCAUGGUGUAACACCAAGGG 543 CUUGGUGUUACACCAUGGA 943
LPA-3405 UUGGUGUUACACCAUGGAUACCAGT 144 ACUGGUAUCCAUGGUGUAACACCAAGG 544 UUGGUGUUACACCAUGGAU 944
LPA-3406 UGGUGUUACACCAUGGAUCACAGTG 145 CACUGUGAUCCAUGGUGUAACACCAAG 545 UGGUGUUACACCAUGGAUC 945
LPA-3407 GGUGUUACACCAUGGAUCCAAGUGT 146 ACACUUGGAUCCAUGGUGUAACACCAA 546 GGUGUUACACCAUGGAUCC 946
LPA-3409 UGUUACACCAUGGAUCCCAAUGUCA 147 UGACAUUGGGAUCCAUGGUGUAACACC 547 UGUUACACCAUGGAUCCCA 947
LPA-3472 GAAUCAAGUGUCCUUGCAAAUCUCA 148 UGAGAUUUGCAAGGACACUUGAUUCUG 548 GAAUCAAGUGUCCUUGCAA 948
LPA-3473 AAUCAAGUGUCCUUGCAACACUCAC 149 GUGAGUGUUGCAAGGACACUUGAUUCU 549 AAUCAAGUGUCCUUGCAAC 949
LPA-3474 AUCAAGUGUCCUUGCAACUAUCACG 150 CGUGAUAGUUGCAAGGACACUUGAUUC 550 AUCAAGUGUCCUUGCAACU 950
LPA-3584 AUGGACAGAGUUAUCGAGGAUCATT 151 AAUGAUCCUCGAUAACUCUGUCCAUCA 551 AUGGACAGAGUUAUCGAGG 951
LPA-3585 UGGACAGAGUUAUCGAGGCACAUTC 152 GAAUGUGCCUCGAUAACUCUGUCCAUC 552 UGGACAGAGUUAUCGAGGC 952
LPA-3655 ACACCACACUGGCAUCAGAAGACAA 153 UUGUCUUCUGAUGCCAGUGUGGUGUCA 553 ACACCACACUGGCAUCAGA 953
LPA-3747 UUGGUGUUAUACCAUGGAUACCAAT 154 AUUGGUAUCCAUGGUAUAACACCAAGG 554 UUGGUGUUAUACCAUGGAU 954
LPA-3748 UGGUGUUAUACCAUGGAUCACAATG 155 CAUUGUGAUCCAUGGUAUAACACCAAG 555 UGGUGUUAUACCAUGGAUC 955
LPA-3749 GGUGUUAUACCAUGGAUCCAAAUGT 156 ACAUUUGGAUCCAUGGUAUAACACCAA 556 GGUGUUAUACCAUGGAUCC 956
LPA-3750 GUGUUAUACCAUGGAUCCCAAUGTC 157 GACAUUGGGAUCCAUGGUAUAACACCA 557 GUGUUAUACCAUGGAUCCC 957
LPA-3773 UCAGAUGGGAGUACUGCAAACUGAC 158 GUCAGUUUGCAGUACUCCCAUCUGACA 558 UCAGAUGGGAGUACUGCAA 958
LPA-3776 GAUGGGAGUACUGCAACCUAACACA 159 UGUGUUAGGUUGCAGUACUCCCAUCUG 559 GAUGGGAGUACUGCAACCU 959
LPA-3777 AUGGGAGUACUGCAACCUGACACAA 160 UUGUGUCAGGUUGCAGUACUCCCAUCU 560 AUGGGAGUACUGCAACCUG 960
LPA-3778 UGGGAGUACUGCAACCUGAAACAAT 161 AUUGUUUCAGGUUGCAGUACUCCCAUC 561 UGGGAGUACUGCAACCUGA 961
LPA-3779 GGGAGUACUGCAACCUGACACAATG 162 CAUUGUGUCAGGUUGCAGUACUCCCAU 562 GGGAGUACUGCAACCUGAC 962
LPA-3840 GGCUGUUUCUGAACAAGCAACAACG 163 CGUUGUUGCUUGUUCAGAAACAGCCGU 563 GGCUGUUUCUGAACAAGCA 963
LPA-3844 GUUUCUGAACAAGCACCAAAGGAGC 164 GCUCCUUUGGUGCUUGUUCAGAAACAG 564 GUUUCUGAACAAGCACCAA 964
LPA-3927 CUCCACCACUGUUACAGGAAGGACA 165 UGUCCUUCCUGUAACAGUGGUGGAGAA 565 CUCCACCACUGUUACAGGA 965
LPA-3928 UCCACCACUGUUACAGGAAAGACAT 166 AUGUCUUUCCUGUAACAGUGGUGGAGA 566 UCCACCACUGUUACAGGAA 966
LPA-3929 CCACCACUGUUACAGGAAGAACATG 167 CAUGUUCUUCCUGUAACAGUGGUGGAG 567 CCACCACUGUUACAGGAAG 967
LPA-3972 GACACCACACUGGCAUCAGAGAACC 168 GGUUCUCUGAUGCCAGUGUGGUGUCAU 568 GACACCACACUGGCAUCAG 968
LPA-3973 ACACCACACUGGCAUCAGAAAACCA 169 UGGUUUUCUGAUGCCAGUGUGGUGUCA 569 ACACCACACUGGCAUCAGA 969
LPA-3999 AGAAUACUACCCAAAUGGUAGCCTG 170 CAGGCUACCAUUUGGGUAGUAUUCUGU 570 AGAAUACUACCCAAAUGGU 970
LPA-4000 GAAUACUACCCAAAUGGUGACCUGA 171 UCAGGUCACCAUUUGGGUAGUAUUCUG 571 GAAUACUACCCAAAUGGUG 971
LPA-4001 AAUACUACCCAAAUGGUGGACUGAC 172 GUCAGUCCACCAUUUGGGUAGUAUUCU 572 AAUACUACCCAAAUGGUGG 972
LPA-4185 UCCUUCUGAAGAAGCACCAACUGAA 173 UUCAGUUGGUGCUUCUUCAGAAGGAAG 573 UCCUUCUGAAGAAGCACCA 973
LPA-4186 CCUUCUGAAGAAGCACCAAAUGAAA 174 UUUCAUUUGGUGCUUCUUCAGAAGGAA 574 CCUUCUGAAGAAGCACCAA 974
LPA-4187 CUUCUGAAGAAGCACCAACAGAAAA 175 UUUUCUGUUGGUGCUUCUUCAGAAGGA 575 CUUCUGAAGAAGCACCAAC 975
LPA-4188 UUCUGAAGAAGCACCAACUAAAAAC 176 GUUUUUAGUUGGUGCUUCUUCAGAAGG 576 UUCUGAAGAAGCACCAACU 976
LPA-4189 UCUGAAGAAGCACCAACUGAAAACA 177 UGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAGAAG 577 UCUGAAGAAGCACCAACUG 977
LPA-4190 CUGAAGAAGCACCAACUGAAAACAG 178 CUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAGAA 578 CUGAAGAAGCACCAACUGA 978
LPA-4191 UGAAGAAGCACCAACUGAAAACAGC 179 GCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAGA 579 UGAAGAAGCACCAACUGAA 979
LPA-4192 GAAGAAGCACCAACUGAAAACAGCA 180 UGCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAG 580 GAAGAAGCACCAACUGAAA 980
LPA-4193 AAGAAGCACCAACUGAAAAAAGCAC 181 GUGCUUUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCA 581 AAGAAGCACCAACUGAAAA 981
LPA-4194 AGAAGCACCAACUGAAAACAGCACT 182 AGUGCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUC 582 AGAAGCACCAACUGAAAAC 982
LPA-4195 GAAGCACCAACUGAAAACAACACTG 183 CAGUGUUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUU 583 GAAGCACCAACUGAAAACA 983
LPA-4196 AAGCACCAACUGAAAACAGAACUGG 184 CCAGUUCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCU 584 AAGCACCAACUGAAAACAG 984
LPA-4239 AGGUGAUGGACAGAGUUAUAGAGGC 185 GCCUCUAUAACUCUGUCCAUCACCUCG 585 AGGUGAUGGACAGAGUUAU 985
LPA-4269 CUCCACCACUAUCACAGGAAGAACA 186 UGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGGAGAG 586 CUCCACCACUAUCACAGGA 986
LPA-4270 UCCACCACUAUCACAGGAAAAACAT 187 AUGUUUUUCCUGUGAUAGUGGUGGAGA 587 UCCACCACUAUCACAGGAA 987
LPA-4271 CCACCACUAUCACAGGAAGAACATG 188 CAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGGAG 588 CCACCACUAUCACAGGAAG 988
LPA-4272 CACCACUAUCACAGGAAGAACAUGT 189 ACAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGGA 589 CACCACUAUCACAGGAAGA 989
LPA-4273 ACCACUAUCACAGGAAGAAAAUGTC 190 GACAUUUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGG 590 ACCACUAUCACAGGAAGAA 990
LPA-4274 CCACUAUCACAGGAAGAACAUGUCA 191 UGACAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUG 591 CCACUAUCACAGGAAGAAC 991
LPA-4275 CACUAUCACAGGAAGAACAAGUCAG 192 CUGACUUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGU 592 CACUAUCACAGGAAGAACA 992
LPA-4276 ACUAUCACAGGAAGAACAUAUCAGT 193 ACUGAUAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGG 593 ACUAUCACAGGAAGAACAU 993
LPA-4277 CUAUCACAGGAAGAACAUGACAGTC 194 GACUGUCAUGUUCUUCCUGUGAUAGUG 594 CUAUCACAGGAAGAACAUG 994
LPA-4278 UAUCACAGGAAGAACAUGUAAGUCT 195 AGACUUACAUGUUCUUCCUGUGAUAGU 595 UAUCACAGGAAGAACAUGU 995
LPA-4279 AUCACAGGAAGAACAUGUCAGUCTT 196 AAGACUGACAUGUUCUUCCUGUGAUAG 596 AUCACAGGAAGAACAUGUC 996
LPA-4280 UCACAGGAAGAACAUGUCAAUCUTG 197 CAAGAUUGACAUGUUCUUCCUGUGAUA 597 UCACAGGAAGAACAUGUCA 997
LPA-4281 CACAGGAAGAACAUGUCAGACUUGG 198 CCAAGUCUGACAUGUUCUUCCUGUGAU 598 CACAGGAAGAACAUGUCAG 998
LPA-4282 ACAGGAAGAACAUGUCAGUAUUGGT 199 ACCAAUACUGACAUGUUCUUCCUGUGA 599 ACAGGAAGAACAUGUCAGU 999
LPA-4285 GGAAGAACAUGUCAGUCUUAGUCGT 200 ACGACUAAGACUGACAUGUUCUUCCUG 600 GGAAGAACAUGUCAGUCUU 1000
LPA-4286 GAAGAACAUGUCAGUCUUGAUCGTC 201 GACGAUCAAGACUGACAUGUUCUUCCU 601 GAAGAACAUGUCAGUCUUG 1001
LPA-4287 AAGAACAUGUCAGUCUUGGACGUCT 202 AGACGUCCAAGACUGACAUGUUCUUCC 602 AAGAACAUGUCAGUCUUGG 1002
LPA-4288 AGAACAUGUCAGUCUUGGUAGUCTA 203 UAGACUACCAAGACUGACAUGUUCUUC 603 AGAACAUGUCAGUCUUGGU 1003
LPA-4325 GGCAUCGGAGGAUCCCAUUAUACTA 204 UAGUAUAAUGGGAUCCUCCGAUGCCAA 604 GGCAUCGGAGGAUCCCAUU 1004
LPA-4346 ACUAUCCAAAUGCUGGCCUAACCAG 205 CUGGUUAGGCCAGCAUUUGGAUAGUAU 605 ACUAUCCAAAUGCUGGCCU 1005
LPA-4517 GCACAGAGGCUCCUUCUGAACAAGC 206 GCUUGUUCAGAAGGAGCCUCUGUGCUU 606 GCACAGAGGCUCCUUCUGA 1006
LPA-4527 UCCUUCUGAACAAGCACCAACUGAG 207 CUCAGUUGGUGCUUGUUCAGAAGGAGC 607 UCCUUCUGAACAAGCACCA 1007
LPA-4528 CCUUCUGAACAAGCACCACAUGAGA 208 UCUCAUGUGGUGCUUGUUCAGAAGGAG 608 CCUUCUGAACAAGCACCAC 1008
LPA-4529 CUUCUGAACAAGCACCACCAGAGAA 209 UUCUCUGGUGGUGCUUGUUCAGAAGGA 609 CUUCUGAACAAGCACCACC 1009
LPA-4530 UUCUGAACAAGCACCACCUAAGAAA 210 UUUCUUAGGUGGUGCUUGUUCAGAAGG 610 UUCUGAACAAGCACCACCU 1010
LPA-4531 UCUGAACAAGCACCACCUGAGAAAA 211 UUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCAGAAG 611 UCUGAACAAGCACCACCUG 1011
LPA-4532 CUGAACAAGCACCACCUGAAAAAAG 212 CUUUUUUCAGGUGGUGCUUGUUCAGAA 612 CUGAACAAGCACCACCUGA 1012
LPA-4533 UGAACAAGCACCACCUGAGAAAAGC 213 GCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCAGA 613 UGAACAAGCACCACCUGAG 1013
LPA-4534 GAACAAGCACCACCUGAGAAAAGCC 214 GGCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCAG 614 GAACAAGCACCACCUGAGA 1014
LPA-4535 AACAAGCACCACCUGAGAAAAGCCC 215 GGGCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCA 615 AACAAGCACCACCUGAGAA 1015
LPA-4537 CAAGCACCACCUGAGAAAAACCCTG 216 CAGGGUUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUU 616 CAAGCACCACCUGAGAAAA 1016
LPA-4538 AAGCACCACCUGAGAAAAGACCUGT 217 ACAGGUCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGU 617 AAGCACCACCUGAGAAAAG 1017
LPA-4539 AGCACCACCUGAGAAAAGCACUGTG 218 CACAGUGCUUUUCUCAGGUGGUGCUUG 618 AGCACCACCUGAGAAAAGC 1018
LPA-4547 CUGAGAAAAGCCCUGUGGUACAGGA 219 UCCUGUACCACAGGGCUUUUCUCAGGU 619 CUGAGAAAAGCCCUGUGGU 1019
LPA-4556 GCCCUGUGGUCCAGGAUUGAUACCA 220 UGGUAUCAAUCCUGGACCACAGGGCUU 620 GCCCUGUGGUCCAGGAUUG 1020
LPA-4559 CUGUGGUCCAGGAUUGCUAACAUGG 221 CCAUGUUAGCAAUCCUGGACCACAGGG 621 CUGUGGUCCAGGAUUGCUA 1021
LPA-4611 CUCCACCACUGUCACAGGAAGGACC 222 GGUCCUUCCUGUGACAGUGGUGGAGGA 622 CUCCACCACUGUCACAGGA 1022
LPA-4612 UCCACCACUGUCACAGGAAAGACCT 223 AGGUCUUUCCUGUGACAGUGGUGGAGG 623 UCCACCACUGUCACAGGAA 1023
LPA-4642 UCUUGGUCAUCUAUGAUACAACACT 224 AGUGUUGUAUCAUAGAUGACCAAGAUU 624 UCUUGGUCAUCUAUGAUAC 1024
LPA-4643 CUUGGUCAUCUAUGAUACCACACTG 225 CAGUGUGGUAUCAUAGAUGACCAAGAU 625 CUUGGUCAUCUAUGAUACC 1025
LPA-4644 UUGGUCAUCUAUGAUACCAAACUGG 226 CCAGUUUGGUAUCAUAGAUGACCAAGA 626 UUGGUCAUCUAUGAUACCA 1026
LPA-4645 UGGUCAUCUAUGAUACCACACUGGC 227 GCCAGUGUGGUAUCAUAGAUGACCAAG 627 UGGUCAUCUAUGAUACCAC 1027
LPA-4646 GGUCAUCUAUGAUACCACAAUGGCA 228 UGCCAUUGUGGUAUCAUAGAUGACCAA 628 GGUCAUCUAUGAUACCACA 1028
LPA-4647 GUCAUCUAUGAUACCACACAGGCAT 229 AUGCCUGUGUGGUAUCAUAGAUGACCA 629 GUCAUCUAUGAUACCACAC 1029
LPA-4648 UCAUCUAUGAUACCACACUAGCATC 230 GAUGCUAGUGUGGUAUCAUAGAUGACC 630 UCAUCUAUGAUACCACACU 1030
LPA-4649 CAUCUAUGAUACCACACUGACAUCA 231 UGAUGUCAGUGUGGUAUCAUAGAUGAC 631 CAUCUAUGAUACCACACUG 1031
LPA-4650 AUCUAUGAUACCACACUGGAAUCAG 232 CUGAUUCCAGUGUGGUAUCAUAGAUGA 632 AUCUAUGAUACCACACUGG 1032
LPA-4651 UCUAUGAUACCACACUGGCAUCAGA 233 UCUGAUGCCAGUGUGGUAUCAUAGAUG 633 UCUAUGAUACCACACUGGC 1033
LPA-4652 CUAUGAUACCACACUGGCAACAGAG 234 CUCUGUUGCCAGUGUGGUAUCAUAGAU 634 CUAUGAUACCACACUGGCA 1034
LPA-4655 UGAUACCACACUGGCAUCAAAGGAC 235 GUCCUUUGAUGCCAGUGUGGUAUCAUA 635 UGAUACCACACUGGCAUCA 1035
LPA-4657 AUACCACACUGGCAUCAGAAGACCC 236 GGGUCUUCUGAUGCCAGUGUGGUAUCA 636 AUACCACACUGGCAUCAGA 1036
LPA-4673 AGAGGACCCCAGAAAACUAACCAAA 237 UUUGGUUAGUUUUCUGGGGUCCUCUGA 637 AGAGGACCCCAGAAAACUA 1037
LPA-4674 GAGGACCCCAGAAAACUACACAAAT 238 AUUUGUGUAGUUUUCUGGGGUCCUCUG 638 GAGGACCCCAGAAAACUAC 1038
LPA-4712 AGAACUACUGCAGGAAUCCAGAUTC 239 GAAUCUGGAUUCCUGCAGUAGUUCUCG 639 AGAACUACUGCAGGAAUCC 1039
LPA-4715 ACUACUGCAGGAAUCCAGAAUCUGG 240 CCAGAUUCUGGAUUCCUGCAGUAGUUC 640 ACUACUGCAGGAAUCCAGA 1040
LPA-4717 UACUGCAGGAAUCCAGAUUAUGGGA 241 UCCCAUAAUCUGGAUUCCUGCAGUAGU 641 UACUGCAGGAAUCCAGAUU 1041
LPA-4718 ACUGCAGGAAUCCAGAUUCAGGGAA 242 UUCCCUGAAUCUGGAUUCCUGCAGUAG 642 ACUGCAGGAAUCCAGAUUC 1042
LPA-4719 CUGCAGGAAUCCAGAUUCUAGGAAA 243 UUUCCUAGAAUCUGGAUUCCUGCAGUA 643 CUGCAGGAAUCCAGAUUCU 1043
LPA-4720 UGCAGGAAUCCAGAUUCUGAGAAAC 244 GUUUCUCAGAAUCUGGAUUCCUGCAGU 644 UGCAGGAAUCCAGAUUCUG 1044
LPA-4721 GCAGGAAUCCAGAUUCUGGAAAACA 245 UGUUUUCCAGAAUCUGGAUUCCUGCAG 645 GCAGGAAUCCAGAUUCUGG 1045
LPA-4724 GGAAUCCAGAUUCUGGGAAACAACC 246 GGUUGUUUCCCAGAAUCUGGAUUCCUG 646 GGAAUCCAGAUUCUGGGAA 1046
LPA-4738 GGGAAACAACCCUGGUGUUACACAA 247 UUGUGUAACACCAGGGUUGUUUCCCAG 647 GGGAAACAACCCUGGUGUU 1047
LPA-4739 GGAAACAACCCUGGUGUUAAACAAC 248 GUUGUUUAACACCAGGGUUGUUUCCCA 648 GGAAACAACCCUGGUGUUA 1048
LPA-4771 UGUGUGAGGUGGGAGUACUACAATC 249 GAUUGUAGUACUCCCACCUCACACACG 649 UGUGUGAGGUGGGAGUACU 1049
LPA-4772 GUGUGAGGUGGGAGUACUGAAAUCT 250 AGAUUUCAGUACUCCCACCUCACACAC 650 GUGUGAGGUGGGAGUACUG 1050
LPA-4774 GUGAGGUGGGAGUACUGCAAUCUGA 251 UCAGAUUGCAGUACUCCCACCUCACAC 651 GUGAGGUGGGAGUACUGCA 1051
LPA-4775 UGAGGUGGGAGUACUGCAAACUGAC 252 GUCAGUUUGCAGUACUCCCACCUCACA 652 UGAGGUGGGAGUACUGCAA 1052
LPA-4795 CUGACACAAUGCUCAGAAAAAGAAT 253 AUUCUUUUUCUGAGCAUUGUGUCAGAU 653 CUGACACAAUGCUCAGAAA 1053
LPA-4796 UGACACAAUGCUCAGAAACAGAATC 254 GAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGUCAGA 654 UGACACAAUGCUCAGAAAC 1054
LPA-4797 GACACAAUGCUCAGAAACAAAAUCA 255 UGAUUUUGUUUCUGAGCAUUGUGUCAG 655 GACACAAUGCUCAGAAACA 1055
LPA-4798 ACACAAUGCUCAGAAACAGAAUCAG 256 CUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGUCA 656 ACACAAUGCUCAGAAACAG 1056
LPA-4799 CACAAUGCUCAGAAACAGAAUCAGG 257 CCUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGUC 657 CACAAUGCUCAGAAACAGA 1057
LPA-4800 ACAAUGCUCAGAAACAGAAACAGGT 258 ACCUGUUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGU 658 ACAAUGCUCAGAAACAGAA 1058
LPA-4801 CAAUGCUCAGAAACAGAAUAAGGTG 259 CACCUUAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUG 659 CAAUGCUCAGAAACAGAAU 1059
LPA-4802 AAUGCUCAGAAACAGAAUCAGGUGT 260 ACACCUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUGU 660 AAUGCUCAGAAACAGAAUC 1060
LPA-4803 AUGCUCAGAAACAGAAUCAAGUGTC 261 GACACUUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUG 661 AUGCUCAGAAACAGAAUCA 1061
LPA-4804 UGCUCAGAAACAGAAUCAGAUGUCC 262 GGACAUCUGAUUCUGUUUCUGAGCAUU 662 UGCUCAGAAACAGAAUCAG 1062
LPA-4806 CUCAGAAACAGAAUCAGGUAUCCTA 263 UAGGAUACCUGAUUCUGUUUCUGAGCA 663 CUCAGAAACAGAAUCAGGU 1063
LPA-4808 CAGAAACAGAAUCAGGUGUACUAGA 264 UCUAGUACACCUGAUUCUGUUUCUGAG 664 CAGAAACAGAAUCAGGUGU 1064
LPA-4809 AGAAACAGAAUCAGGUGUCAUAGAG 265 CUCUAUGACACCUGAUUCUGUUUCUGA 665 AGAAACAGAAUCAGGUGUC 1065
LPA-4810 GAAACAGAAUCAGGUGUCCAAGAGA 266 UCUCUUGGACACCUGAUUCUGUUUCUG 666 GAAACAGAAUCAGGUGUCC 1066
LPA-4811 AAACAGAAUCAGGUGUCCUAGAGAC 267 GUCUCUAGGACACCUGAUUCUGUUUCU 667 AAACAGAAUCAGGUGUCCU 1067
LPA-4812 AACAGAAUCAGGUGUCCUAAAGACT 268 AGUCUUUAGGACACCUGAUUCUGUUUC 668 AACAGAAUCAGGUGUCCUA 1068
LPA-4814 CAGAAUCAGGUGUCCUAGAAACUCC 269 GGAGUUUCUAGGACACCUGAUUCUGUU 669 CAGAAUCAGGUGUCCUAGA 1069
LPA-4816 GAAUCAGGUGUCCUAGAGAAUCCCA 270 UGGGAUUCUCUAGGACACCUGAUUCUG 670 GAAUCAGGUGUCCUAGAGA 1070
LPA-4818 AUCAGGUGUCCUAGAGACUACCACT 271 AGUGGUAGUCUCUAGGACACCUGAUUC 671 AUCAGGUGUCCUAGAGACU 1071
LPA-4822 GGUGUCCUAGAGACUCCCAAUGUTG 272 CAACAUUGGGAGUCUCUAGGACACCUG 672 GGUGUCCUAGAGACUCCCA 1072
LPA-4827 CCUAGAGACUCCCACUGUUAUUCCA 273 UGGAAUAACAGUGGGAGUCUCUAGGAC 673 CCUAGAGACUCCCACUGUU 1073
LPA-4828 CUAGAGACUCCCACUGUUGAUCCAG 274 CUGGAUCAACAGUGGGAGUCUCUAGGA 674 CUAGAGACUCCCACUGUUG 1074
LPA-4829 UAGAGACUCCCACUGUUGUACCAGT 275 ACUGGUACAACAGUGGGAGUCUCUAGG 675 UAGAGACUCCCACUGUUGU 1075
LPA-4830 AGAGACUCCCACUGUUGUUACAGTT 276 AACUGUAACAACAGUGGGAGUCUCUAG 676 AGAGACUCCCACUGUUGUU 1076
LPA-4831 GAGACUCCCACUGUUGUUCAAGUTC 277 GAACUUGAACAACAGUGGGAGUCUCUA 677 GAGACUCCCACUGUUGUUC 1077
LPA-4832 AGACUCCCACUGUUGUUCCAGUUCC 278 GGAACUGGAACAACAGUGGGAGUCUCU 678 AGACUCCCACUGUUGUUCC 1078
LPA-4867 GCUCAUUCUGAAGCAGCACAAACTG 279 CAGUUUGUGCUGCUUCAGAAUGAGCCU 679 GCUCAUUCUGAAGCAGCAC 1079
LPA-4868 CUCAUUCUGAAGCAGCACCAACUGA 280 UCAGUUGGUGCUGCUUCAGAAUGAGCC 680 CUCAUUCUGAAGCAGCACC 1080
LPA-4869 UCAUUCUGAAGCAGCACCAACUGAG 281 CUCAGUUGGUGCUGCUUCAGAAUGAGC 681 UCAUUCUGAAGCAGCACCA 1081
LPA-4870 CAUUCUGAAGCAGCACCAAAUGAGC 282 GCUCAUUUGGUGCUGCUUCAGAAUGAG 682 CAUUCUGAAGCAGCACCAA 1082
LPA-4871 AUUCUGAAGCAGCACCAACAGAGCA 283 UGCUCUGUUGGUGCUGCUUCAGAAUGA 683 AUUCUGAAGCAGCACCAAC 1083
LPA-4872 UUCUGAAGCAGCACCAACUAAGCAA 284 UUGCUUAGUUGGUGCUGCUUCAGAAUG 684 UUCUGAAGCAGCACCAACU 1084
LPA-4873 UCUGAAGCAGCACCAACUGAGCAAA 285 UUUGCUCAGUUGGUGCUGCUUCAGAAU 685 UCUGAAGCAGCACCAACUG 1085
LPA-4874 CUGAAGCAGCACCAACUGAACAAAC 286 GUUUGUUCAGUUGGUGCUGCUUCAGAA 686 CUGAAGCAGCACCAACUGA 1086
LPA-4875 UGAAGCAGCACCAACUGAGAAAACC 287 GGUUUUCUCAGUUGGUGCUGCUUCAGA 687 UGAAGCAGCACCAACUGAG 1087
LPA-4876 GAAGCAGCACCAACUGAGCAAACCC 288 GGGUUUGCUCAGUUGGUGCUGCUUCAG 688 GAAGCAGCACCAACUGAGC 1088
LPA-4877 AAGCAGCACCAACUGAGCAAACCCC 289 GGGGUUUGCUCAGUUGGUGCUGCUUCA 689 AAGCAGCACCAACUGAGCA 1089
LPA-4912 CAGUGCUACCAUGGUAAUGACCAGA 290 UCUGGUCAUUACCAUGGUAGCACUGCC 690 CAGUGCUACCAUGGUAAUG 1090
LPA-4913 AGUGCUACCAUGGUAAUGGACAGAG 291 CUCUGUCCAUUACCAUGGUAGCACUGC 691 AGUGCUACCAUGGUAAUGG 1091
LPA-4948 ACAUUCUCCACCACUGUCAAAGGAA 292 UUCCUUUGACAGUGGUGGAGAAUGUGC 692 ACAUUCUCCACCACUGUCA 1092
LPA-4959 CACUGUCACAGGAAGGACAAGUCAA 293 UUGACUUGUCCUUCCUGUGACAGUGGU 693 CACUGUCACAGGAAGGACA 1093
LPA-4960 ACUGUCACAGGAAGGACAUAUCAAT 294 AUUGAUAUGUCCUUCCUGUGACAGUGG 694 ACUGUCACAGGAAGGACAU 1094
LPA-4961 CUGUCACAGGAAGGACAUGACAATC 295 GAUUGUCAUGUCCUUCCUGUGACAGUG 695 CUGUCACAGGAAGGACAUG 1095
LPA-4962 UGUCACAGGAAGGACAUGUAAAUCT 296 AGAUUUACAUGUCCUUCCUGUGACAGU 696 UGUCACAGGAAGGACAUGU 1096
LPA-4963 GUCACAGGAAGGACAUGUCAAUCTT 297 AAGAUUGACAUGUCCUUCCUGUGACAG 697 GUCACAGGAAGGACAUGUC 1097
LPA-4964 UCACAGGAAGGACAUGUCAAUCUTG 298 CAAGAUUGACAUGUCCUUCCUGUGACA 698 UCACAGGAAGGACAUGUCA 1098
LPA-4966 ACAGGAAGGACAUGUCAAUAUUGGT 299 ACCAAUAUUGACAUGUCCUUCCUGUGA 699 ACAGGAAGGACAUGUCAAU 1099
LPA-4967 CAGGAAGGACAUGUCAAUCAUGGTC 300 GACCAUGAUUGACAUGUCCUUCCUGUG 700 CAGGAAGGACAUGUCAAUC 1100
LPA-4968 AGGAAGGACAUGUCAAUCUAGGUCA 301 UGACCUAGAUUGACAUGUCCUUCCUGU 701 AGGAAGGACAUGUCAAUCU 1101
LPA-4969 GGAAGGACAUGUCAAUCUUAGUCAT 302 AUGACUAAGAUUGACAUGUCCUUCCUG 702 GGAAGGACAUGUCAAUCUU 1102
LPA-4970 GAAGGACAUGUCAAUCUUGAUCATC 303 GAUGAUCAAGAUUGACAUGUCCUUCCU 703 GAAGGACAUGUCAAUCUUG 1103
LPA-4971 AAGGACAUGUCAAUCUUGGACAUCC 304 GGAUGUCCAAGAUUGACAUGUCCUUCC 704 AAGGACAUGUCAAUCUUGG 1104
LPA-4972 AGGACAUGUCAAUCUUGGUAAUCCA 305 UGGAUUACCAAGAUUGACAUGUCCUUC 705 AGGACAUGUCAAUCUUGGU 1105
LPA-4973 GGACAUGUCAAUCUUGGUCAUCCAT 306 AUGGAUGACCAAGAUUGACAUGUCCUU 706 GGACAUGUCAAUCUUGGUC 1106
LPA-4974 GACAUGUCAAUCUUGGUCAACCATG 307 CAUGGUUGACCAAGAUUGACAUGUCCU 707 GACAUGUCAAUCUUGGUCA 1107
LPA-4975 ACAUGUCAAUCUUGGUCAUACAUGA 308 UCAUGUAUGACCAAGAUUGACAUGUCC 708 ACAUGUCAAUCUUGGUCAU 1108
LPA-4976 CAUGUCAAUCUUGGUCAUCAAUGAC 309 GUCAUUGAUGACCAAGAUUGACAUGUC 709 CAUGUCAAUCUUGGUCAUC 1109
LPA-4977 AUGUCAAUCUUGGUCAUCCAUGACA 310 UGUCAUGGAUGACCAAGAUUGACAUGU 710 AUGUCAAUCUUGGUCAUCC 1110
LPA-4978 UGUCAAUCUUGGUCAUCCAAGACAC 311 GUGUCUUGGAUGACCAAGAUUGACAUG 711 UGUCAAUCUUGGUCAUCCA 1111
LPA-4979 GUCAAUCUUGGUCAUCCAUAACACC 312 GGUGUUAUGGAUGACCAAGAUUGACAU 712 GUCAAUCUUGGUCAUCCAU 1112
LPA-4980 UCAAUCUUGGUCAUCCAUGACACCA 313 UGGUGUCAUGGAUGACCAAGAUUGACA 713 UCAAUCUUGGUCAUCCAUG 1113
LPA-4981 CAAUCUUGGUCAUCCAUGAAACCAC 314 GUGGUUUCAUGGAUGACCAAGAUUGAC 714 CAAUCUUGGUCAUCCAUGA 1114
LPA-4982 AAUCUUGGUCAUCCAUGACACCACA 315 UGUGGUGUCAUGGAUGACCAAGAUUGA 715 AAUCUUGGUCAUCCAUGAC 1115
LPA-4983 AUCUUGGUCAUCCAUGACAACACAC 316 GUGUGUUGUCAUGGAUGACCAAGAUUG 716 AUCUUGGUCAUCCAUGACA 1116
LPA-5048 UGACAAUGAACUACUGCAGAAAUCC 317 GGAUUUCUGCAGUAGUUCAUUGUCAGG 717 UGACAAUGAACUACUGCAG 1117
LPA-5049 GACAAUGAACUACUGCAGGAAUCCA 318 UGGAUUCCUGCAGUAGUUCAUUGUCAG 718 GACAAUGAACUACUGCAGG 1118
LPA-5050 ACAAUGAACUACUGCAGGAAUCCAG 319 CUGGAUUCCUGCAGUAGUUCAUUGUCA 719 ACAAUGAACUACUGCAGGA 1119
LPA-5051 CAAUGAACUACUGCAGGAAACCAGA 320 UCUGGUUUCCUGCAGUAGUUCAUUGUC 720 CAAUGAACUACUGCAGGAA 1120
LPA-5052 AAUGAACUACUGCAGGAAUACAGAT 321 AUCUGUAUUCCUGCAGUAGUUCAUUGU 721 AAUGAACUACUGCAGGAAU 1121
LPA-5053 AUGAACUACUGCAGGAAUCAAGATG 322 CAUCUUGAUUCCUGCAGUAGUUCAUUG 722 AUGAACUACUGCAGGAAUC 1122
LPA-5054 UGAACUACUGCAGGAAUCCAGAUGC 323 GCAUCUGGAUUCCUGCAGUAGUUCAUU 723 UGAACUACUGCAGGAAUCC 1123
LPA-5058 CUACUGCAGGAAUCCAGAUACCGAT 324 AUCGGUAUCUGGAUUCCUGCAGUAGUU 724 CUACUGCAGGAAUCCAGAU 1124
LPA-5084 CAGGCCCUUGGUGUUUUACAAUGGA 325 UCCAUUGUAAAACACCAAGGGCCUGUA 725 CAGGCCCUUGGUGUUUUAC 1125
LPA-5090 CUUGGUGUUUUACCAUGGAACCCAG 326 CUGGGUUCCAUGGUAAAACACCAAGGG 726 CUUGGUGUUUUACCAUGGA 1126
LPA-5091 UUGGUGUUUUACCAUGGACACCAGC 327 GCUGGUGUCCAUGGUAAAACACCAAGG 727 UUGGUGUUUUACCAUGGAC 1127
LPA-5092 UGGUGUUUUACCAUGGACCACAGCA 328 UGCUGUGGUCCAUGGUAAAACACCAAG 728 UGGUGUUUUACCAUGGACC 1128
LPA-5093 GGUGUUUUACCAUGGACCCAAGCAT 329 AUGCUUGGGUCCAUGGUAAAACACCAA 729 GGUGUUUUACCAUGGACCC 1129
LPA-5094 GUGUUUUACCAUGGACCCCAGCATC 330 GAUGCUGGGGUCCAUGGUAAAACACCA 730 GUGUUUUACCAUGGACCCC 1130
LPA-5096 GUUUUACCAUGGACCCCAGAAUCAG 331 CUGAUUCUGGGGUCCAUGGUAAAACAC 731 GUUUUACCAUGGACCCCAG 1131
LPA-5124 GGAGUACUGCAACCUGACGAGAUGC 332 GCAUCUCGUCAGGUUGCAGUACUCCCA 732 GGAGUACUGCAACCUGACG 1132
LPA-5125 GAGUACUGCAACCUGACGCAAUGCT 333 AGCAUUGCGUCAGGUUGCAGUACUCCC 733 GAGUACUGCAACCUGACGC 1133
LPA-5127 GUACUGCAACCUGACGCGAAGCUCA 334 UGAGCUUCGCGUCAGGUUGCAGUACUC 734 GUACUGCAACCUGACGCGA 1134
LPA-5128 UACUGCAACCUGACGCGAUACUCAG 335 CUGAGUAUCGCGUCAGGUUGCAGUACU 735 UACUGCAACCUGACGCGAU 1135
LPA-5131 UGCAACCUGACGCGAUGCUAAGACA 336 UGUCUUAGCAUCGCGUCAGGUUGCAGU 736 UGCAACCUGACGCGAUGCU 1136
LPA-5136 CCUGACGCGAUGCUCAGACACAGAA 337 UUCUGUGUCUGAGCAUCGCGUCAGGUU 737 CCUGACGCGAUGCUCAGAC 1137
LPA-5137 CUGACGCGAUGCUCAGACAAAGAAG 338 CUUCUUUGUCUGAGCAUCGCGUCAGGU 738 CUGACGCGAUGCUCAGACA 1138
LPA-5144 GAUGCUCAGACACAGAAGGAACUGT 339 ACAGUUCCUUCUGUGUCUGAGCAUCGC 739 GAUGCUCAGACACAGAAGG 1139
LPA-5145 AUGCUCAGACACAGAAGGGACUGTG 340 CACAGUCCCUUCUGUGUCUGAGCAUCG 740 AUGCUCAGACACAGAAGGG 1140
LPA-5151 AGACACAGAAGGGACUGUGAUCGCT 341 AGCGAUCACAGUCCCUUCUGUGUCUGA 741 AGACACAGAAGGGACUGUG 1141
LPA-5467 GCAUCCUCUUCAUUUGAUUAUGGGA 342 UCCCAUAAUCAAAUGAAGAGGAUGCAC 742 GCAUCCUCUUCAUUUGAUU 1142
LPA-5468 CAUCCUCUUCAUUUGAUUGAGGGAA 343 UUCCCUCAAUCAAAUGAAGAGGAUGCA 743 CAUCCUCUUCAUUUGAUUG 1143
LPA-5469 AUCCUCUUCAUUUGAUUGUAGGAAG 344 CUUCCUACAAUCAAAUGAAGAGGAUGC 744 AUCCUCUUCAUUUGAUUGU 1144
LPA-5470 UCCUCUUCAUUUGAUUGUGAGAAGC 345 GCUUCUCACAAUCAAAUGAAGAGGAUG 745 UCCUCUUCAUUUGAUUGUG 1145
LPA-5471 CCUCUUCAUUUGAUUGUGGAAAGCC 346 GGCUUUCCACAAUCAAAUGAAGAGGAU 746 CCUCUUCAUUUGAUUGUGG 1146
LPA-5474 CUUCAUUUGAUUGUGGGAAACCUCA 347 UGAGGUUUCCCACAAUCAAAUGAAGAG 747 CUUCAUUUGAUUGUGGGAA 1147
LPA-5475 UUCAUUUGAUUGUGGGAAGACUCAA 348 UUGAGUCUUCCCACAAUCAAAUGAAGA 748 UUCAUUUGAUUGUGGGAAG 1148
LPA-5476 UCAUUUGAUUGUGGGAAGCAUCAAG 349 CUUGAUGCUUCCCACAAUCAAAUGAAG 749 UCAUUUGAUUGUGGGAAGC 1149
LPA-5477 CAUUUGAUUGUGGGAAGCCACAAGT 350 ACUUGUGGCUUCCCACAAUCAAAUGAA 750 CAUUUGAUUGUGGGAAGCC 1150
LPA-5478 AUUUGAUUGUGGGAAGCCUAAAGTG 351 CACUUUAGGCUUCCCACAAUCAAAUGA 751 AUUUGAUUGUGGGAAGCCU 1151
LPA-5486 GUGGGAAGCCUCAAGUGGAACCGAA 352 UUCGGUUCCACUUGAGGCUUCCCACAA 752 GUGGGAAGCCUCAAGUGGA 1152
LPA-5509 AAGAAAUGUCCUGGAAGCAAUGUAG 353 CUACAUUGCUUCCAGGACAUUUCUUCG 753 AAGAAAUGUCCUGGAAGCA 1153
LPA-5510 AGAAAUGUCCUGGAAGCAUAGUAGG 354 CCUACUAUGCUUCCAGGACAUUUCUUC 754 AGAAAUGUCCUGGAAGCAU 1154
LPA-5511 GAAAUGUCCUGGAAGCAUUAUAGGG 355 CCCUAUAAUGCUUCCAGGACAUUUCUU 755 GAAAUGUCCUGGAAGCAUU 1155
LPA-5513 AAUGUCCUGGAAGCAUUGUAGGGGG 356 CCCCCUACAAUGCUUCCAGGACAUUUC 756 AAUGUCCUGGAAGCAUUGU 1156
LPA-5514 AUGUCCUGGAAGCAUUGUAAGGGGG 357 CCCCCUUACAAUGCUUCCAGGACAUUU 757 AUGUCCUGGAAGCAUUGUA 1157
LPA-5581 AGAACAAGGUUUGGAAAGCACUUCT 358 AGAAGUGCUUUCCAAACCUUGUUCUGA 758 AGAACAAGGUUUGGAAAGC 1158
LPA-5582 GAACAAGGUUUGGAAAGCAAUUCTG 359 CAGAAUUGCUUUCCAAACCUUGUUCUG 759 GAACAAGGUUUGGAAAGCA 1159
LPA-5583 AACAAGGUUUGGAAAGCACAUCUGT 360 ACAGAUGUGCUUUCCAAACCUUGUUCU 760 AACAAGGUUUGGAAAGCAC 1160
LPA-5584 ACAAGGUUUGGAAAGCACUACUGTG 361 CACAGUAGUGCUUUCCAAACCUUGUUC 761 ACAAGGUUUGGAAAGCACU 1161
LPA-5585 CAAGGUUUGGAAAGCACUUAUGUGG 362 CCACAUAAGUGCUUUCCAAACCUUGUU 762 CAAGGUUUGGAAAGCACUU 1162
LPA-5586 AAGGUUUGGAAAGCACUUCAGUGGA 363 UCCACUGAAGUGCUUUCCAAACCUUGU 763 AAGGUUUGGAAAGCACUUC 1163
LPA-5587 AGGUUUGGAAAGCACUUCUAUGGAG 364 CUCCAUAGAAGUGCUUUCCAAACCUUG 764 AGGUUUGGAAAGCACUUCU 1164
LPA-5592 UGGAAAGCACUUCUGUGGAAGCACC 365 GGUGCUUCCACAGAAGUGCUUUCCAAA 765 UGGAAAGCACUUCUGUGGA 1165
LPA-5606 GUGGAGGCACCUUAAUAUCACCAGA 366 UCUGGUGAUAUUAAGGUGCCUCCACAG 766 GUGGAGGCACCUUAAUAUC 1166
LPA-5616 CUUAAUAUCCCCAGAGUGGAUGCTG 367 CAGCAUCCACUCUGGGGAUAUUAAGGU 767 CUUAAUAUCCCCAGAGUGG 1167
LPA-5618 UAAUAUCCCCAGAGUGGGUACUGAC 368 GUCAGUACCCACUCUGGGGAUAUUAAG 768 UAAUAUCCCCAGAGUGGGU 1168
LPA-5628 AGAGUGGGUGCUGACUGCUACUCAC 369 GUGAGUAGCAGUCAGCACCCACUCUGG 769 AGAGUGGGUGCUGACUGCU 1169
LPA-5685 CAAGGUCAUCCUGGGUGCAAACCAA 370 UUGGUUUGCACCCAGGAUGACCUUGUA 770 CAAGGUCAUCCUGGGUGCA 1170
LPA-5694 CCUGGGUGCACACCAAGAAAUGAAC 371 GUUCAUUUCUUGGUGUGCACCCAGGAU 771 CCUGGGUGCACACCAAGAA 1171
LPA-5699 GUGCACACCAAGAAGUGAAACUCGA 372 UCGAGUUUCACUUCUUGGUGUGCACCC 772 GUGCACACCAAGAAGUGAA 1172
LPA-5775 AGCAGAUAUUGCCUUGCUAAAGCTA 373 UAGCUUUAGCAAGGCAAUAUCUGCUUG 773 AGCAGAUAUUGCCUUGCUA 1173
LPA-5776 GCAGAUAUUGCCUUGCUAAAGCUAA 374 UUAGCUUUAGCAAGGCAAUAUCUGCUU 774 GCAGAUAUUGCCUUGCUAA 1174
LPA-5777 CAGAUAUUGCCUUGCUAAAACUAAG 375 CUUAGUUUUAGCAAGGCAAUAUCUGCU 775 CAGAUAUUGCCUUGCUAAA 1175
LPA-5778 AGAUAUUGCCUUGCUAAAGAUAAGC 376 GCUUAUCUUUAGCAAGGCAAUAUCUGC 776 AGAUAUUGCCUUGCUAAAG 1176
LPA-5779 GAUAUUGCCUUGCUAAAGCAAAGCA 377 UGCUUUGCUUUAGCAAGGCAAUAUCUG 777 GAUAUUGCCUUGCUAAAGC 1177
LPA-5780 AUAUUGCCUUGCUAAAGCUAAGCAG 378 CUGCUUAGCUUUAGCAAGGCAAUAUCU 778 AUAUUGCCUUGCUAAAGCU 1178
LPA-5781 UAUUGCCUUGCUAAAGCUAAGCAGG 379 CCUGCUUAGCUUUAGCAAGGCAAUAUC 779 UAUUGCCUUGCUAAAGCUA 1179
LPA-5813 UCAUCACUGACAAAGUAAUACCAGC 380 GCUGGUAUUACUUUGUCAGUGAUGACG 780 UCAUCACUGACAAAGUAAU 1180
LPA-5873 GGACUGAAUGUUACAUCACAGGCTG 381 CAGCCUGUGAUGUAACAUUCAGUCCUG 781 GGACUGAAUGUUACAUCAC 1181
LPA-5874 GACUGAAUGUUACAUCACUAGCUGG 382 CCAGCUAGUGAUGUAACAUUCAGUCCU 782 GACUGAAUGUUACAUCACU 1182
LPA-5875 ACUGAAUGUUACAUCACUGACUGGG 383 CCCAGUCAGUGAUGUAACAUUCAGUCC 783 ACUGAAUGUUACAUCACUG 1183
LPA-5876 CUGAAUGUUACAUCACUGGAUGGGG 384 CCCCAUCCAGUGAUGUAACAUUCAGUC 784 CUGAAUGUUACAUCACUGG 1184
LPA-5877 UGAAUGUUACAUCACUGGCAGGGGA 385 UCCCCUGCCAGUGAUGUAACAUUCAGU 785 UGAAUGUUACAUCACUGGC 1185
LPA-5879 AAUGUUACAUCACUGGCUGAGGAGA 386 UCUCCUCAGCCAGUGAUGUAACAUUCA 786 AAUGUUACAUCACUGGCUG 1186
LPA-5902 GAAACCCAAGGUACCUUUGAGACTG 387 CAGUCUCAAAGGUACCUUGGGUUUCUC 787 GAAACCCAAGGUACCUUUG 1187
對照 随从股( 有義股) SEQ ID NO: 引導股( 反義股) SEQ ID NO: 靶序列 SEQ ID NO:
GalXC-LPA-3675 GACAACAGAAUAUUAUCCAAGCAGCCGAAAGGCUGC 1188 UUGGAUAAUAUUCUGUUGUCGG 1189 GACAACAGAAUAUUAUCCA 1190
NC1 CGUUAAUCGCGUAUAAUACGCGUAT 1191 AUACGCGUAUUAUACGCGAUUAACGAC 1192 不適用   
NC5 CAUAUUGCGCGUAUAGUCGCGUUAG 1193 CUAACGCGACUAUACGCGCAAUAUGGU 1194 不適用   
NC7 GGCGCGUAUAGUCGCGCGUAUAGTC 1195 GACUAUACGCGCGACUAUACGCGCCUC 1196 不適用   
基於細胞之活體外分析
使用基於細胞之活體外分析測定 表 2中所列示之每一DsiRNA抑制LPA表現之能力。簡言之，在多孔細胞培養板之單獨孔中，用表2中所列示之每一DsiRNA以0.5 nM轉染穩定表現人類LPA基因之人類胚腎293 (HEK293)或HepG2細胞。在轉染後，使細胞維持24小時，且接著使用基於TAQMAN®之qPCR分析測定轉染細胞中剩餘LPA mRNA之量。使用兩種qPCR分析(3′分析及5′分析)來測定如使用與6-羧基螢光黃(6-FAM)結合之PCR探針所量測之LPA mRNA水準。
評估 表 2中所列示之DsiRNA抑制LPA表現之能力的基於HEK293及HepG2細胞之分析之結果分別示於 圖 1 至圖 4及 圖 5中。使用經GalNAc結合之LPA寡核苷酸(GalXC-LPA-3675 SEQ ID NO: 1188及1189)轉染之細胞作為陽性對照。通常認為導致DsiRNA轉染細胞中與模擬轉染細胞相比保留少於或等於約15%-20% LPA mRNA之DsiRNA包含提供適宜量之靶mRNA表現減弱或降低以供進一步評估之序列。在 圖 1 至圖 5中，顯示相對於時間匹配之對照細胞，經如所指示之DsiRNA轉染之細胞中剩餘的LPA mRNA之百分比(3′分析=圓形；5′分析=三角形)。
為進一步評估DsiRNA命中，使用基於細胞之活體外分析，在兩種不同的DsiRNA濃度下對 表 2中所列示之DsiRNA亞組進行測試，以測定其抑制LPA表現之能力( 圖 6及 圖 7)。簡言之，在多孔細胞培養板之單獨孔中，用0.1 nM及0.5 nM之DsiRNA轉染穩定表現人類LPA基因之HEK293細胞。在轉染後，使細胞維持24小時，且接著使用基於TAQMAN®之qPCR分析測定轉染細胞中剩餘LPA mRNA之量。使用兩種qPCR分析(3′分析及5′分析)來測定如使用與六氯-螢光黃(HEX)結合之PCR探針所量測之LPA mRNA水準。使用未轉染細胞(UT)、模擬轉染細胞(Mock)及經對照寡核苷酸(NC1，SEQ ID NO: 1191及1192；NC5，SEQ ID NO: 1193及1194；及NC7，SEQ ID NO: 1195及1196)轉染之細胞作為陰性對照。如 圖 6及 圖 7中所示，經所指示DsiRNA轉染之HEK293細胞中剩餘的LPA mRNA之百分比為來自3’分析及5’分析之LPA mRNA水準之平均值，且以時間匹配之模擬轉染對照HEK293細胞作正規化。
總之，該等結果顯示，經設計以靶向人類LPA mRNA之DsiRNA抑制細胞中之LPA表現，如藉由相對於對照細胞，DsiRNA轉染細胞中LPA mRNA之量減少所確定。該等結果證明，包含DsiRNA之核苷酸序列可用於生成抑制LPA表現之RNAi寡核苷酸。此外，該等結果證明，多個LPA mRNA靶序列適用於RNAi介導之LPA表現抑制。 實例 3 ： RNAi 寡核苷酸對活體內 LPA 表現之抑制
在 實例 2中所闡述之基於細胞之分析中篩選之DsiRNA中，選擇14種DsiRNA之核苷酸序列用於在活體內進一步評估。簡言之，使用該14種所選DsiRNA之核苷酸序列生成14種相應之雙股RNAi寡核苷酸，該等寡核苷酸構成具有36-mer随从股及22-mer引導股之缺口四環GalNAc結合之結構(在本文中稱為「GalNAc結合之LPA寡核苷酸」)( 表 3)。此外，構成GalNAc結合之LPA寡核苷酸之随从股及引導股之核苷酸序列具有獨特的經修飾之核苷酸及硫代磷酸酯鍵聯模式(例如，參見 圖 10，GalNAc結合之LPA寡核苷酸之通用結構及化學修飾模式(M1、M2及M3)之示意圖)。構成四環之三個腺苷核苷酸各自與GalNAc部分 (CAS編號：14131-60-3)結合。 表 3：在小鼠中評估之GalNAc結合之LPA寡核苷酸
寡核苷酸 DP 編號 SEQ ID NO ( 有義 ) SEQ ID NO ( 反義 )
LPA-0190-M1 DP15791P:DP15790G 388 788
LPA-0501-M1 DP15634P:DP15633G 389 789
LPA-3100-M1 DP15639P:DP15638G 390 790
LPA-3286-M1 DP15643P:DP15642G 391 791
LPA-3288-M1 DP15645P:DP15644G 392 792
LPA-3291-M1 DP15647P:DP15646G 393 793
LPA-3584-M1 DP15651P:DP15650G 394 794
LPA-3585-M1 DP15653P:DP15652G 395 795
LPA-4645-M1 DP15657P:DP15656G 396 796
LPA-4717-M1 DP15801P:DP15800G 397 797
LPA-5510-M1 DP15815P:DP15814G 398 798
LPA-3750-M1 DP13346P:DP13385G 399 799
LPA-2900-M2 DP13351P:DP14623G 400 800
LPA-3675-M2 DP13346P:DP14624G 401 801
LPA-2900-M3 DP13351P:DP13387G 402 802
LPA-3675-M3 DP13346P:DP13385G 403 803
小鼠研究
在HDI小鼠模型中評估 表 3中所列示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸，其中HDI小鼠經工程化以在肝細胞中瞬時表現人類LPA mRNA。使用GalNAc結合之LPA寡核苷酸LPA-3675-M2作為基準對照。簡言之，利用所指示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸以0.5 mg/kg之劑量水準( 圖 8)或以0.25 mg/kg、0.5 mg/kg及1 mg/kg之劑量水準( 圖 9)皮下治療6-8週齡雌性CD-1小鼠(n = 5)。三天後(72 h)，向小鼠流體動力注射(HDI)編碼在遍在巨細胞病毒(CMV)啟動子序列控制下之全人類LPA基因之DNA質體。在引入DNA質體後一天，收集來自小鼠之肝臟樣品。相對於僅用等體積之PBS治療之小鼠，使源自該等小鼠之總RNA經受LPA mRNA之qRT-PCR分析。使用質體上所包括之NeoR基因針對轉染效率對值作正規化。
如 圖 8中所示，所指示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸抑制LPA表現，如藉由相對於用PBS治療之小鼠，來自寡核苷酸治療之HDI小鼠之肝臟樣品中LPA mRNA之量減少所確定。為進一步評估GalNAc結合之LPA寡核苷酸抑制LPA表現之能力，測試各自具有不同化學修飾模式(M2及M3)之兩種GalNAc結合之LPA寡核苷酸序列(LPA-2900及LPA-3675)在三種不同濃度(0.25 mg/kg、0.5 mg/kg及1.0 mg/kg)下抑制LPA在上述HDI小鼠中表現之能力。如 圖 9中所示，所指示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸以劑量依賴性方式抑制LPA在HDI小鼠中之表現。
總之，該等結果顯示，經設計以靶向人類LPA mRNA之GalNAc結合之LPA寡核苷酸抑制小鼠中之LPA表現，如藉由相對於用PBS治療之對照小鼠，HDI小鼠肝臟中LPA mRNA之量減少所確定。基於該等結果，選擇在HDI小鼠中評估之14種GalNAc結合之LPA寡核苷酸中之10種用於評估其在非人類靈長類動物(NHP)中抑制LPA表現之能力。 表 4中所列示之10種GalNAc結合之LPA寡核苷酸包含具有如 圖 10中所描述之模式M1、M2或M3之化學修飾之核苷酸。 表 4：在NHP中評估之GalNAc結合之LPA寡核苷酸
寡核苷酸 DP 編號 SEQ ID NO ( 有義 ) SEQ ID NO ( 反義 )
LPA-0190-M1 DP15791P:DP15790G 388 788
LPA-3100-M1 DP15639P:DP15638G 390 790
LPA-3288-M1 DP15645P:DP15644G 392 792
LPA-3291-M1 DP15647P:DP15646G 393 793
LPA-3585-M1 DP15653P:DP15652G 395 795
LPA-4645-M1 DP15657P:DP15656G 396 796
LPA-4717-M1 DP15801P:DP15800G 397 797
LPA-5510-M1 DP15815P:DP15814G 398 798
LPA-2900-M2 DP13351P:DP14623G 400 800
LPA-3675-M3 DP13346P:DP13385G 403 803
非人類靈長類動物 (NHP) 研究
在食蟹猴(食蟹獼猴( Macaca fascicularis))中評估 表 4中所列示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸。在本研究中，對猴進行分組，使得其平均體重(約5.4 kg)在對照組與實驗組之間相當。每一隊列含有兩個雄性及三個雌性個體。在研究第0天皮下投與GalNAc結合之LPA寡核苷酸。在研究第-8天、第-5天及第0天以及在投藥後每週收集血液樣品。在研究第28天、第56天及第84天收集超聲引導下之芯針肝臟生檢。在每一時間點，使源自肝臟生檢樣品之總RNA經受qRT-PCR分析，以量測寡核苷酸治療之猴相對於用相當體積之PBS治療之猴中之LPA mRNA。為使數據正規化，相對於兩個參考基因(PPIB及18S rRNA)之幾何平均值進行量測。如 圖 11A(第28天)、 圖 11B(第56天)及 圖 11C(第84天)中所示，利用 表 4中所列示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸治療NHP抑制肝臟中之LPA表現，如藉由相對於用PBS治療之NHP，來自寡核苷酸治療之NHP之肝臟樣品中LPA mRNA之量減少所確定。亦對所治療NHP之肝臟樣品中之血纖維蛋白溶酶原(PLG) mRNA之量進行測定，且示於 圖 11D中。在同一項NHP研究中，亦藉由用ELISA量測來自所治療NHP之apo(a)蛋白血清來測定對LPA表現之抑制。如 圖 12中所示，與用PBS治療之NHP相比，在用GalNAc結合之LPA寡核苷酸治療之NHP中觀察到血清apo(a)蛋白之顯著減少。對來自三個投藥前樣品之值進行平均且設定為100%，且將數據報告為與投藥前平均值相比之相對值。總之，該等結果證明，利用GalNAc結合之LPA寡核苷酸治療NHP使肝臟中LPA mRNA之量減少且使血清中apo(a)蛋白之量減少。
總之，該等結果顯示，經設計以靶向人類LPA mRNA之GalNAc結合之LPA寡核苷酸抑制活體內LPA表現(如藉由所治療動物之LPA mRNA及apo(a)蛋白之量減少所確定)。 序列表
以下核酸及/或胺基酸序列在上文揭示內容中提及，且在下文中提供以供參考。 表 5 ：LPA寡核苷酸序列(未經修飾)
寡核苷酸 序列 ( 有義股) SEQ ID NO: 序列 ( 反義股) SEQ ID NO:
LPA-125 CUGAGCAAAGCCAUGUGGUACAGGA 4 UCCUGUACCACAUGGCUUUGCUCAGGU 404
LPA-128 AGCAAAGCCAUGUGGUCCAAGAUTG 5 CAAUCUUGGACCACAUGGCUUUGCUCA 405
LPA-132 AAGCCAUGUGGUCCAGGAUAGCUAC 6 GUAGCUAUCCUGGACCACAUGGCUUUG 406
LPA-133 AGCCAUGUGGUCCAGGAUUACUACC 7 GGUAGUAAUCCUGGACCACAUGGCUUU 407
LPA-134 GCCAUGUGGUCCAGGAUUGAUACCA 8 UGGUAUCAAUCCUGGACCACAUGGCUU 408
LPA-135 CCAUGUGGUCCAGGAUUGCAACCAT 9 AUGGUUGCAAUCCUGGACCACAUGGCU 409
LPA-136 CAUGUGGUCCAGGAUUGCUACCATG 10 CAUGGUAGCAAUCCUGGACCACAUGGC 410
LPA-137 AUGUGGUCCAGGAUUGCUAACAUGG 11 CCAUGUUAGCAAUCCUGGACCACAUGG 411
LPA-138 UGUGGUCCAGGAUUGCUACAAUGGT 12 ACCAUUGUAGCAAUCCUGGACCACAUG 412
LPA-160 GGUGAUGGACAGAGUUAUCAAGGCA 13 UGCCUUGAUAACUCUGUCCAUCACCAU 413
LPA-190 UCCACCACUGUCACAGGAAAGACCT 14 AGGUCUUUCCUGUGACAGUGGUGGAGU 414
LPA-191 CCACCACUGUCACAGGAAGAACCTG 15 CAGGUUCUUCCUGUGACAGUGGUGGAG 415
LPA-197 CUGUCACAGGAAGGACCUGACAAGC 16 GCUUGUCAGGUCCUUCCUGUGACAGUG 416
LPA-205 GGAAGGACCUGCCAAGCUUAGUCAT 17 AUGACUAAGCUUGGCAGGUCCUUCCUG 417
LPA-206 GAAGGACCUGCCAAGCUUGAUCATC 18 GAUGAUCAAGCUUGGCAGGUCCUUCCU 418
LPA-208 AGGACCUGCCAAGCUUGGUAAUCTA 19 UAGAUUACCAAGCUUGGCAGGUCCUUC 419
LPA-209 GGACCUGCCAAGCUUGGUCAUCUAT 20 AUAGAUGACCAAGCUUGGCAGGUCCUU 420
LPA-210 GACCUGCCAAGCUUGGUCAACUATG 21 CAUAGUUGACCAAGCUUGGCAGGUCCU 421
LPA-211 ACCUGCCAAGCUUGGUCAUAUAUGA 22 UCAUAUAUGACCAAGCUUGGCAGGUCC 422
LPA-212 CCUGCCAAGCUUGGUCAUCAAUGAC 23 GUCAUUGAUGACCAAGCUUGGCAGGUC 423
LPA-219 AGCUUGGUCAUCUAUGACAACACAT 24 AUGUGUUGUCAUAGAUGACCAAGCUUG 424
LPA-225 GUCAUCUAUGACACCACAUAAACAT 25 AUGUUUAUGUGGUGUCAUAGAUGACCA 425
LPA-258 CACAGAAAACUACCCAAAUACUGGC 26 GCCAGUAUUUGGGUAGUUUUCUGUGGU 426
LPA-261 AGAAAACUACCCAAAUGCUAGCUTG 27 CAAGCUAGCAUUUGGGUAGUUUUCUGU 427
LPA-263 AAAACUACCCAAAUGCUGGAUUGAT 28 AUCAAUCCAGCAUUUGGGUAGUUUUCU 428
LPA-269 ACCCAAAUGCUGGCUUGAUAAUGAA 29 UUCAUUAUCAAGCCAGCAUUUGGGUAG 429
LPA-270 CCCAAAUGCUGGCUUGAUCAUGAAC 30 GUUCAUGAUCAAGCCAGCAUUUGGGUA 430
LPA-291 GAACUACUGCAGGAAUCCAAAUGCT 31 AGCAUUUGGAUUCCUGCAGUAGUUCAU 431
LPA-295 UACUGCAGGAAUCCAGAUGAUGUGG 32 CCACAUCAUCUGGAUUCCUGCAGUAGU 432
LPA-296 ACUGCAGGAAUCCAGAUGCAGUGGC 33 GCCACUGCAUCUGGAUUCCUGCAGUAG 433
LPA-298 UGCAGGAAUCCAGAUGCUGAGGCAG 34 CUGCCUCAGCAUCUGGAUUCCUGCAGU 434
LPA-355 AGGUGGGAGUACUGCAACCAGACGC 35 GCGUCUGGUUGCAGUACUCCCACCUGA 435
LPA-380 AAUGCUCAGACGCAGAAGGAACUGC 36 GCAGUUCCUUCUGCGUCUGAGCAUUGC 436
LPA-417 GACUGUUACCCCGGUUCCAAGCCTA 37 UAGGCUUGGAACCGGGGUAACAGUCGG 437
LPA-418 ACUGUUACCCCGGUUCCAAACCUAG 38 CUAGGUUUGGAACCGGGGUAACAGUCG 438
LPA-419 CUGUUACCCCGGUUCCAAGACUAGA 39 UCUAGUCUUGGAACCGGGGUAACAGUC 439
LPA-420 UGUUACCCCGGUUCCAAGCAUAGAG 40 CUCUAUGCUUGGAACCGGGGUAACAGU 440
LPA-421 GUUACCCCGGUUCCAAGCCAAGAGG 41 CCUCUUGGCUUGGAACCGGGGUAACAG 441
LPA-422 UUACCCCGGUUCCAAGCCUAGAGGC 42 GCCUCUAGGCUUGGAACCGGGGUAACA 442
LPA-423 UACCCCGGUUCCAAGCCUAAAGGCT 43 AGCCUUUAGGCUUGGAACCGGGGUAAC 443
LPA-492 GUGCUACCAUGGUAAUGGAAAGAGT 44 ACUCUUUCCAUUACCAUGGUAGCACUC 444
LPA-493 UGCUACCAUGGUAAUGGACAGAGTT 45 AACUCUGUCCAUUACCAUGGUAGCACU 445
LPA-494 GCUACCAUGGUAAUGGACAAAGUTA 46 UAACUUUGUCCAUUACCAUGGUAGCAC 446
LPA-495 CUACCAUGGUAAUGGACAGAGUUAT 47 AUAACUCUGUCCAUUACCAUGGUAGCA 447
LPA-496 UACCAUGGUAAUGGACAGAAUUATC 48 GAUAAUUCUGUCCAUUACCAUGGUAGC 448
LPA-497 ACCAUGGUAAUGGACAGAGAUAUCG 49 CGAUAUCUCUGUCCAUUACCAUGGUAG 449
LPA-498 CCAUGGUAAUGGACAGAGUAAUCGA 50 UCGAUUACUCUGUCCAUUACCAUGGUA 450
LPA-499 CAUGGUAAUGGACAGAGUUAUCGAG 51 CUCGAUAACUCUGUCCAUUACCAUGGU 451
LPA-500 AUGGUAAUGGACAGAGUUAACGAGG 52 CCUCGUUAACUCUGUCCAUUACCAUGG 452
LPA-501 UGGUAAUGGACAGAGUUAUAGAGGC 53 GCCUCUAUAACUCUGUCCAUUACCAUG 453
LPA-502 GGUAAUGGACAGAGUUAUCAAGGCA 54 UGCCUUGAUAACUCUGUCCAUUACCAU 454
LPA-503 GUAAUGGACAGAGUUAUCGAGGCAC 55 GUGCCUCGAUAACUCUGUCCAUUACCA 455
LPA-523 GGCACAUACUCCACCACUGACACAG 56 CUGUGUCAGUGGUGGAGUAUGUGCCUC 456
LPA-563 CUUGGUCAUCUAUGACACCACACTC 57 GAGUGUGGUGUCAUAGAUGACCAAGCU 457
LPA-567 GUCAUCUAUGACACCACACACGCAT 58 AUGCGUGUGUGGUGUCAUAGAUGACCA 458
LPA-568 UCAUCUAUGACACCACACUAGCATA 59 UAUGCUAGUGUGGUGUCAUAGAUGACC 459
LPA-569 CAUCUAUGACACCACACUCACAUAG 60 CUAUGUGAGUGUGGUGUCAUAGAUGAC 460
LPA-1208 GCACAUACUCCACCACUGUAACUGG 61 CCAGUUACAGUGGUGGAGUAUGUGCCU 461
LPA-2715 AGCCCCUUAUUGUUAUACGAGGGAT 62 AUCCCUCGUAUAACAAUAAGGGGCUGC 462
LPA-2716 GCCCCUUAUUGUUAUACGAAGGATC 63 GAUCCUUCGUAUAACAAUAAGGGGCUG 463
LPA-2827 CCAAGCCUAGAGGCUCCUUAUGAAC 64 GUUCAUAAGGAGCCUCUAGGCUUGGAA 464
LPA-2837 AGGCUCCUUCUGAACAAGCACCAAC 65 GUUGGUGCUUGUUCAGAAGGAGCCUCU 465
LPA-2900 AUGGACAGAGUUAUCAAGGAACATA 66 UAUGUUCCUUGAUAACUCUGUCCAUUU 466
LPA-2901 UGGACAGAGUUAUCAAGGCACAUAC 67 GUAUGUGCCUUGAUAACUCUGUCCAUU 467
LPA-2902 GGACAGAGUUAUCAAGGCAAAUACT 68 AGUAUUUGCCUUGAUAACUCUGUCCAU 468
LPA-2903 GACAGAGUUAUCAAGGCACAUACTT 69 AAGUAUGUGCCUUGAUAACUCUGUCCA 469
LPA-2904 ACAGAGUUAUCAAGGCACAAACUTC 70 GAAGUUUGUGCCUUGAUAACUCUGUCC 470
LPA-2905 CAGAGUUAUCAAGGCACAUACUUCA 71 UGAAGUAUGUGCCUUGAUAACUCUGUC 471
LPA-3004 UACCCAAAUGCUGGCUUGAACAAGA 72 UCUUGUUCAAGCCAGCAUUUGGGUAGU 472
LPA-3007 CCAAAUGCUGGCUUGAUCAAGAACT 73 AGUUCUUGAUCAAGCCAGCAUUUGGGU 473
LPA-3023 UCAAGAACUACUGCCGAAAACCAGA 74 UCUGGUUUUCGGCAGUAGUUCUUGAUC 474
LPA-3024 CAAGAACUACUGCCGAAAUACAGAT 75 AUCUGUAUUUCGGCAGUAGUUCUUGAU 475
LPA-3025 AAGAACUACUGCCGAAAUCAAGATC 76 GAUCUUGAUUUCGGCAGUAGUUCUUGA 476
LPA-3027 GAACUACUGCCGAAAUCCAAAUCCT 77 AGGAUUUGGAUUUCGGCAGUAGUUCUU 477
LPA-3030 CUACUGCCGAAAUCCAGAUACUGTG 78 CACAGUAUCUGGAUUUCGGCAGUAGUU 478
LPA-3051 UGUGGCAGCCCCUUGGUGUAAUACA 79 UGUAUUACACCAAGGGGCUGCCACAGG 479
LPA-3052 GUGGCAGCCCCUUGGUGUUAUACAA 80 UUGUAUAACACCAAGGGGCUGCCACAG 480
LPA-3053 UGGCAGCCCCUUGGUGUUAAACAAC 81 GUUGUUUAACACCAAGGGGCUGCCACA 481
LPA-3054 GGCAGCCCCUUGGUGUUAUACAACA 82 UGUUGUAUAACACCAAGGGGCUGCCAC 482
LPA-3055 GCAGCCCCUUGGUGUUAUAAAACAG 83 CUGUUUUAUAACACCAAGGGGCUGCCA 483
LPA-3056 CAGCCCCUUGGUGUUAUACAACAGA 84 UCUGUUGUAUAACACCAAGGGGCUGCC 484
LPA-3057 AGCCCCUUGGUGUUAUACAACAGAT 85 AUCUGUUGUAUAACACCAAGGGGCUGC 485
LPA-3058 GCCCCUUGGUGUUAUACAAAAGATC 86 GAUCUUUUGUAUAACACCAAGGGGCUG 486
LPA-3059 CCCCUUGGUGUUAUACAACAGAUCC 87 GGAUCUGUUGUAUAACACCAAGGGGCU 487
LPA-3092 GGUGGGAGUACUGCAACCUAACACG 88 CGUGUUAGGUUGCAGUACUCCCACCUG 488
LPA-3093 GUGGGAGUACUGCAACCUGACACGA 89 UCGUGUCAGGUUGCAGUACUCCCACCU 489
LPA-3096 GGAGUACUGCAACCUGACAAGAUGC 90 GCAUCUUGUCAGGUUGCAGUACUCCCA 490
LPA-3097 GAGUACUGCAACCUGACACAAUGCT 91 AGCAUUGUGUCAGGUUGCAGUACUCCC 491
LPA-3099 GUACUGCAACCUGACACGAAGCUCA 92 UGAGCUUCGUGUCAGGUUGCAGUACUC 492
LPA-3100 UACUGCAACCUGACACGAUACUCAG 93 CUGAGUAUCGUGUCAGGUUGCAGUACU 493
LPA-3101 ACUGCAACCUGACACGAUGAUCAGA 94 UCUGAUCAUCGUGUCAGGUUGCAGUAC 494
LPA-3102 CUGCAACCUGACACGAUGCACAGAT 95 AUCUGUGCAUCGUGUCAGGUUGCAGUA 495
LPA-3103 UGCAACCUGACACGAUGCUAAGATG 96 CAUCUUAGCAUCGUGUCAGGUUGCAGU 496
LPA-3105 CAACCUGACACGAUGCUCAAAUGCA 97 UGCAUUUGAGCAUCGUGUCAGGUUGCA 497
LPA-3107 ACCUGACACGAUGCUCAGAAGCAGA 98 UCUGCUUCUGAGCAUCGUGUCAGGUUG 498
LPA-3108 CCUGACACGAUGCUCAGAUACAGAA 99 UUCUGUAUCUGAGCAUCGUGUCAGGUU 499
LPA-3109 CUGACACGAUGCUCAGAUGAAGAAT 100 AUUCUUCAUCUGAGCAUCGUGUCAGGU 500
LPA-3110 UGACACGAUGCUCAGAUGCAGAATG 101 CAUUCUGCAUCUGAGCAUCGUGUCAGG 501
LPA-3111 GACACGAUGCUCAGAUGCAAAAUGG 102 CCAUUUUGCAUCUGAGCAUCGUGUCAG 502
LPA-3112 ACACGAUGCUCAGAUGCAGAAUGGA 103 UCCAUUCUGCAUCUGAGCAUCGUGUCA 503
LPA-3113 CACGAUGCUCAGAUGCAGAAUGGAC 104 GUCCAUUCUGCAUCUGAGCAUCGUGUC 504
LPA-3229 UGCUACUACCAUUAUGGACAGAGTT 105 AACUCUGUCCAUAAUGGUAGUAGCAGU 505
LPA-3230 GCUACUACCAUUAUGGACAAAGUTA 106 UAACUUUGUCCAUAAUGGUAGUAGCAG 506
LPA-3231 CUACUACCAUUAUGGACAGAGUUAC 107 GUAACUCUGUCCAUAAUGGUAGUAGCA 507
LPA-3232 UACUACCAUUAUGGACAGAAUUACC 108 GGUAAUUCUGUCCAUAAUGGUAGUAGC 508
LPA-3233 ACUACCAUUAUGGACAGAGAUACCG 109 CGGUAUCUCUGUCCAUAAUGGUAGUAG 509
LPA-3234 CUACCAUUAUGGACAGAGUAACCGA 110 UCGGUUACUCUGUCCAUAAUGGUAGUA 510
LPA-3235 UACCAUUAUGGACAGAGUUACCGAG 111 CUCGGUAACUCUGUCCAUAAUGGUAGU 511
LPA-3236 ACCAUUAUGGACAGAGUUAACGAGG 112 CCUCGUUAACUCUGUCCAUAAUGGUAG 512
LPA-3257 GAGGCACAUACUCCACCACAGUCAC 113 GUGACUGUGGUGGAGUAUGUGCCUCGG 513
LPA-3267 CUCCACCACUGUCACAGGAAGAACT 114 AGUUCUUCCUGUGACAGUGGUGGAGUA 514
LPA-3280 ACAGGAAGAACUUGCCAAGAUUGGT 115 ACCAAUCUUGGCAAGUUCUUCCUGUGA 515
LPA-3281 CAGGAAGAACUUGCCAAGCAUGGTC 116 GACCAUGCUUGGCAAGUUCUUCCUGUG 516
LPA-3282 AGGAAGAACUUGCCAAGCUAGGUCA 117 UGACCUAGCUUGGCAAGUUCUUCCUGU 517
LPA-3283 GGAAGAACUUGCCAAGCUUAGUCAT 118 AUGACUAAGCUUGGCAAGUUCUUCCUG 518
LPA-3284 GAAGAACUUGCCAAGCUUGAUCATC 119 GAUGAUCAAGCUUGGCAAGUUCUUCCU 519
LPA-3285 AAGAACUUGCCAAGCUUGGACAUCT 120 AGAUGUCCAAGCUUGGCAAGUUCUUCC 520
LPA-3286 AGAACUUGCCAAGCUUGGUAAUCTA 121 UAGAUUACCAAGCUUGGCAAGUUCUUC 521
LPA-3287 GAACUUGCCAAGCUUGGUCAUCUAT 122 AUAGAUGACCAAGCUUGGCAAGUUCUU 522
LPA-3288 AACUUGCCAAGCUUGGUCAACUATG 123 CAUAGUUGACCAAGCUUGGCAAGUUCU 523
LPA-3289 ACUUGCCAAGCUUGGUCAUAUAUGA 124 UCAUAUAUGACCAAGCUUGGCAAGUUC 524
LPA-3290 CUUGCCAAGCUUGGUCAUCAAUGAC 125 GUCAUUGAUGACCAAGCUUGGCAAGUU 525
LPA-3291 UUGCCAAGCUUGGUCAUCUAUGACA 126 UGUCAUAGAUGACCAAGCUUGGCAAGU 526
LPA-3292 UGCCAAGCUUGGUCAUCUAAGACAC 127 GUGUCUUAGAUGACCAAGCUUGGCAAG 527
LPA-3298 GCUUGGUCAUCUAUGACACAACACC 128 GGUGUUGUGUCAUAGAUGACCAAGCUU 528
LPA-3300 UUGGUCAUCUAUGACACCAAACCAG 129 CUGGUUUGGUGUCAUAGAUGACCAAGC 529
LPA-3301 UGGUCAUCUAUGACACCACACCAGC 130 GCUGGUGUGGUGUCAUAGAUGACCAAG 530
LPA-3303 GUCAUCUAUGACACCACACAAGCAT 131 AUGCUUGUGUGGUGUCAUAGAUGACCA 531
LPA-3305 CAUCUAUGACACCACACCAACAUAG 132 CUAUGUUGGUGUGGUGUCAUAGAUGAC 532
LPA-3306 AUCUAUGACACCACACCAGAAUAGT 133 ACUAUUCUGGUGUGGUGUCAUAGAUGA 533
LPA-3308 CUAUGACACCACACCAGCAAAGUCG 134 CGACUUUGCUGGUGUGGUGUCAUAGAU 534
LPA-3329 GUCGGACCCCAGAAAACUAACCAAA 135 UUUGGUUAGUUUUCUGGGGUCCGACUA 535
LPA-3330 UCGGACCCCAGAAAACUACACAAAT 136 AUUUGUGUAGUUUUCUGGGGUCCGACU 536
LPA-3340 GAAAACUACCCAAAUGCUGACCUGA 137 UCAGGUCAGCAUUUGGGUAGUUUUCUG 537
LPA-3391 GCUGAGAUUCGCCCUUGGUAUUACA 138 UGUAAUACCAAGGGCGAAUCUCAGCAU 538
LPA-3392 CUGAGAUUCGCCCUUGGUGAUACAC 139 GUGUAUCACCAAGGGCGAAUCUCAGCA 539
LPA-3394 GAGAUUCGCCCUUGGUGUUACACCA 140 UGGUGUAACACCAAGGGCGAAUCUCAG 540
LPA-3395 AGAUUCGCCCUUGGUGUUAAACCAT 141 AUGGUUUAACACCAAGGGCGAAUCUCA 541
LPA-3398 UUCGCCCUUGGUGUUACACAAUGGA 142 UCCAUUGUGUAACACCAAGGGCGAAUC 542
LPA-3404 CUUGGUGUUACACCAUGGAACCCAG 143 CUGGGUUCCAUGGUGUAACACCAAGGG 543
LPA-3405 UUGGUGUUACACCAUGGAUACCAGT 144 ACUGGUAUCCAUGGUGUAACACCAAGG 544
LPA-3406 UGGUGUUACACCAUGGAUCACAGTG 145 CACUGUGAUCCAUGGUGUAACACCAAG 545
LPA-3407 GGUGUUACACCAUGGAUCCAAGUGT 146 ACACUUGGAUCCAUGGUGUAACACCAA 546
LPA-3409 UGUUACACCAUGGAUCCCAAUGUCA 147 UGACAUUGGGAUCCAUGGUGUAACACC 547
LPA-3472 GAAUCAAGUGUCCUUGCAAAUCUCA 148 UGAGAUUUGCAAGGACACUUGAUUCUG 548
LPA-3473 AAUCAAGUGUCCUUGCAACACUCAC 149 GUGAGUGUUGCAAGGACACUUGAUUCU 549
LPA-3474 AUCAAGUGUCCUUGCAACUAUCACG 150 CGUGAUAGUUGCAAGGACACUUGAUUC 550
LPA-3584 AUGGACAGAGUUAUCGAGGAUCATT 151 AAUGAUCCUCGAUAACUCUGUCCAUCA 551
LPA-3585 UGGACAGAGUUAUCGAGGCACAUTC 152 GAAUGUGCCUCGAUAACUCUGUCCAUC 552
LPA-3655 ACACCACACUGGCAUCAGAAGACAA 153 UUGUCUUCUGAUGCCAGUGUGGUGUCA 553
LPA-3747 UUGGUGUUAUACCAUGGAUACCAAT 154 AUUGGUAUCCAUGGUAUAACACCAAGG 554
LPA-3748 UGGUGUUAUACCAUGGAUCACAATG 155 CAUUGUGAUCCAUGGUAUAACACCAAG 555
LPA-3749 GGUGUUAUACCAUGGAUCCAAAUGT 156 ACAUUUGGAUCCAUGGUAUAACACCAA 556
LPA-3750 GUGUUAUACCAUGGAUCCCAAUGTC 157 GACAUUGGGAUCCAUGGUAUAACACCA 557
LPA-3773 UCAGAUGGGAGUACUGCAAACUGAC 158 GUCAGUUUGCAGUACUCCCAUCUGACA 558
LPA-3776 GAUGGGAGUACUGCAACCUAACACA 159 UGUGUUAGGUUGCAGUACUCCCAUCUG 559
LPA-3777 AUGGGAGUACUGCAACCUGACACAA 160 UUGUGUCAGGUUGCAGUACUCCCAUCU 560
LPA-3778 UGGGAGUACUGCAACCUGAAACAAT 161 AUUGUUUCAGGUUGCAGUACUCCCAUC 561
LPA-3779 GGGAGUACUGCAACCUGACACAATG 162 CAUUGUGUCAGGUUGCAGUACUCCCAU 562
LPA-3840 GGCUGUUUCUGAACAAGCAACAACG 163 CGUUGUUGCUUGUUCAGAAACAGCCGU 563
LPA-3844 GUUUCUGAACAAGCACCAAAGGAGC 164 GCUCCUUUGGUGCUUGUUCAGAAACAG 564
LPA-3927 CUCCACCACUGUUACAGGAAGGACA 165 UGUCCUUCCUGUAACAGUGGUGGAGAA 565
LPA-3928 UCCACCACUGUUACAGGAAAGACAT 166 AUGUCUUUCCUGUAACAGUGGUGGAGA 566
LPA-3929 CCACCACUGUUACAGGAAGAACATG 167 CAUGUUCUUCCUGUAACAGUGGUGGAG 567
LPA-3972 GACACCACACUGGCAUCAGAGAACC 168 GGUUCUCUGAUGCCAGUGUGGUGUCAU 568
LPA-3973 ACACCACACUGGCAUCAGAAAACCA 169 UGGUUUUCUGAUGCCAGUGUGGUGUCA 569
LPA-3999 AGAAUACUACCCAAAUGGUAGCCTG 170 CAGGCUACCAUUUGGGUAGUAUUCUGU 570
LPA-4000 GAAUACUACCCAAAUGGUGACCUGA 171 UCAGGUCACCAUUUGGGUAGUAUUCUG 571
LPA-4001 AAUACUACCCAAAUGGUGGACUGAC 172 GUCAGUCCACCAUUUGGGUAGUAUUCU 572
LPA-4185 UCCUUCUGAAGAAGCACCAACUGAA 173 UUCAGUUGGUGCUUCUUCAGAAGGAAG 573
LPA-4186 CCUUCUGAAGAAGCACCAAAUGAAA 174 UUUCAUUUGGUGCUUCUUCAGAAGGAA 574
LPA-4187 CUUCUGAAGAAGCACCAACAGAAAA 175 UUUUCUGUUGGUGCUUCUUCAGAAGGA 575
LPA-4188 UUCUGAAGAAGCACCAACUAAAAAC 176 GUUUUUAGUUGGUGCUUCUUCAGAAGG 576
LPA-4189 UCUGAAGAAGCACCAACUGAAAACA 177 UGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAGAAG 577
LPA-4190 CUGAAGAAGCACCAACUGAAAACAG 178 CUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAGAA 578
LPA-4191 UGAAGAAGCACCAACUGAAAACAGC 179 GCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAGA 579
LPA-4192 GAAGAAGCACCAACUGAAAACAGCA 180 UGCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCAG 580
LPA-4193 AAGAAGCACCAACUGAAAAAAGCAC 181 GUGCUUUUUUCAGUUGGUGCUUCUUCA 581
LPA-4194 AGAAGCACCAACUGAAAACAGCACT 182 AGUGCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUUC 582
LPA-4195 GAAGCACCAACUGAAAACAACACTG 183 CAGUGUUGUUUUCAGUUGGUGCUUCUU 583
LPA-4196 AAGCACCAACUGAAAACAGAACUGG 184 CCAGUUCUGUUUUCAGUUGGUGCUUCU 584
LPA-4239 AGGUGAUGGACAGAGUUAUAGAGGC 185 GCCUCUAUAACUCUGUCCAUCACCUCG 585
LPA-4269 CUCCACCACUAUCACAGGAAGAACA 186 UGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGGAGAG 586
LPA-4270 UCCACCACUAUCACAGGAAAAACAT 187 AUGUUUUUCCUGUGAUAGUGGUGGAGA 587
LPA-4271 CCACCACUAUCACAGGAAGAACATG 188 CAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGGAG 588
LPA-4272 CACCACUAUCACAGGAAGAACAUGT 189 ACAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGGA 589
LPA-4273 ACCACUAUCACAGGAAGAAAAUGTC 190 GACAUUUUCUUCCUGUGAUAGUGGUGG 590
LPA-4274 CCACUAUCACAGGAAGAACAUGUCA 191 UGACAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGUG 591
LPA-4275 CACUAUCACAGGAAGAACAAGUCAG 192 CUGACUUGUUCUUCCUGUGAUAGUGGU 592
LPA-4276 ACUAUCACAGGAAGAACAUAUCAGT 193 ACUGAUAUGUUCUUCCUGUGAUAGUGG 593
LPA-4277 CUAUCACAGGAAGAACAUGACAGTC 194 GACUGUCAUGUUCUUCCUGUGAUAGUG 594
LPA-4278 UAUCACAGGAAGAACAUGUAAGUCT 195 AGACUUACAUGUUCUUCCUGUGAUAGU 595
LPA-4279 AUCACAGGAAGAACAUGUCAGUCTT 196 AAGACUGACAUGUUCUUCCUGUGAUAG 596
LPA-4280 UCACAGGAAGAACAUGUCAAUCUTG 197 CAAGAUUGACAUGUUCUUCCUGUGAUA 597
LPA-4281 CACAGGAAGAACAUGUCAGACUUGG 198 CCAAGUCUGACAUGUUCUUCCUGUGAU 598
LPA-4282 ACAGGAAGAACAUGUCAGUAUUGGT 199 ACCAAUACUGACAUGUUCUUCCUGUGA 599
LPA-4285 GGAAGAACAUGUCAGUCUUAGUCGT 200 ACGACUAAGACUGACAUGUUCUUCCUG 600
LPA-4286 GAAGAACAUGUCAGUCUUGAUCGTC 201 GACGAUCAAGACUGACAUGUUCUUCCU 601
LPA-4287 AAGAACAUGUCAGUCUUGGACGUCT 202 AGACGUCCAAGACUGACAUGUUCUUCC 602
LPA-4288 AGAACAUGUCAGUCUUGGUAGUCTA 203 UAGACUACCAAGACUGACAUGUUCUUC 603
LPA-4325 GGCAUCGGAGGAUCCCAUUAUACTA 204 UAGUAUAAUGGGAUCCUCCGAUGCCAA 604
LPA-4346 ACUAUCCAAAUGCUGGCCUAACCAG 205 CUGGUUAGGCCAGCAUUUGGAUAGUAU 605
LPA-4517 GCACAGAGGCUCCUUCUGAACAAGC 206 GCUUGUUCAGAAGGAGCCUCUGUGCUU 606
LPA-4527 UCCUUCUGAACAAGCACCAACUGAG 207 CUCAGUUGGUGCUUGUUCAGAAGGAGC 607
LPA-4528 CCUUCUGAACAAGCACCACAUGAGA 208 UCUCAUGUGGUGCUUGUUCAGAAGGAG 608
LPA-4529 CUUCUGAACAAGCACCACCAGAGAA 209 UUCUCUGGUGGUGCUUGUUCAGAAGGA 609
LPA-4530 UUCUGAACAAGCACCACCUAAGAAA 210 UUUCUUAGGUGGUGCUUGUUCAGAAGG 610
LPA-4531 UCUGAACAAGCACCACCUGAGAAAA 211 UUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCAGAAG 611
LPA-4532 CUGAACAAGCACCACCUGAAAAAAG 212 CUUUUUUCAGGUGGUGCUUGUUCAGAA 612
LPA-4533 UGAACAAGCACCACCUGAGAAAAGC 213 GCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCAGA 613
LPA-4534 GAACAAGCACCACCUGAGAAAAGCC 214 GGCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCAG 614
LPA-4535 AACAAGCACCACCUGAGAAAAGCCC 215 GGGCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUUCA 615
LPA-4537 CAAGCACCACCUGAGAAAAACCCTG 216 CAGGGUUUUUCUCAGGUGGUGCUUGUU 616
LPA-4538 AAGCACCACCUGAGAAAAGACCUGT 217 ACAGGUCUUUUCUCAGGUGGUGCUUGU 617
LPA-4539 AGCACCACCUGAGAAAAGCACUGTG 218 CACAGUGCUUUUCUCAGGUGGUGCUUG 618
LPA-4547 CUGAGAAAAGCCCUGUGGUACAGGA 219 UCCUGUACCACAGGGCUUUUCUCAGGU 619
LPA-4556 GCCCUGUGGUCCAGGAUUGAUACCA 220 UGGUAUCAAUCCUGGACCACAGGGCUU 620
LPA-4559 CUGUGGUCCAGGAUUGCUAACAUGG 221 CCAUGUUAGCAAUCCUGGACCACAGGG 621
LPA-4611 CUCCACCACUGUCACAGGAAGGACC 222 GGUCCUUCCUGUGACAGUGGUGGAGGA 622
LPA-4612 UCCACCACUGUCACAGGAAAGACCT 223 AGGUCUUUCCUGUGACAGUGGUGGAGG 623
LPA-4642 UCUUGGUCAUCUAUGAUACAACACT 224 AGUGUUGUAUCAUAGAUGACCAAGAUU 624
LPA-4643 CUUGGUCAUCUAUGAUACCACACTG 225 CAGUGUGGUAUCAUAGAUGACCAAGAU 625
LPA-4644 UUGGUCAUCUAUGAUACCAAACUGG 226 CCAGUUUGGUAUCAUAGAUGACCAAGA 626
LPA-4645 UGGUCAUCUAUGAUACCACACUGGC 227 GCCAGUGUGGUAUCAUAGAUGACCAAG 627
LPA-4646 GGUCAUCUAUGAUACCACAAUGGCA 228 UGCCAUUGUGGUAUCAUAGAUGACCAA 628
LPA-4647 GUCAUCUAUGAUACCACACAGGCAT 229 AUGCCUGUGUGGUAUCAUAGAUGACCA 629
LPA-4648 UCAUCUAUGAUACCACACUAGCATC 230 GAUGCUAGUGUGGUAUCAUAGAUGACC 630
LPA-4649 CAUCUAUGAUACCACACUGACAUCA 231 UGAUGUCAGUGUGGUAUCAUAGAUGAC 631
LPA-4650 AUCUAUGAUACCACACUGGAAUCAG 232 CUGAUUCCAGUGUGGUAUCAUAGAUGA 632
LPA-4651 UCUAUGAUACCACACUGGCAUCAGA 233 UCUGAUGCCAGUGUGGUAUCAUAGAUG 633
LPA-4652 CUAUGAUACCACACUGGCAACAGAG 234 CUCUGUUGCCAGUGUGGUAUCAUAGAU 634
LPA-4655 UGAUACCACACUGGCAUCAAAGGAC 235 GUCCUUUGAUGCCAGUGUGGUAUCAUA 635
LPA-4657 AUACCACACUGGCAUCAGAAGACCC 236 GGGUCUUCUGAUGCCAGUGUGGUAUCA 636
LPA-4673 AGAGGACCCCAGAAAACUAACCAAA 237 UUUGGUUAGUUUUCUGGGGUCCUCUGA 637
LPA-4674 GAGGACCCCAGAAAACUACACAAAT 238 AUUUGUGUAGUUUUCUGGGGUCCUCUG 638
LPA-4712 AGAACUACUGCAGGAAUCCAGAUTC 239 GAAUCUGGAUUCCUGCAGUAGUUCUCG 639
LPA-4715 ACUACUGCAGGAAUCCAGAAUCUGG 240 CCAGAUUCUGGAUUCCUGCAGUAGUUC 640
LPA-4717 UACUGCAGGAAUCCAGAUUAUGGGA 241 UCCCAUAAUCUGGAUUCCUGCAGUAGU 641
LPA-4718 ACUGCAGGAAUCCAGAUUCAGGGAA 242 UUCCCUGAAUCUGGAUUCCUGCAGUAG 642
LPA-4719 CUGCAGGAAUCCAGAUUCUAGGAAA 243 UUUCCUAGAAUCUGGAUUCCUGCAGUA 643
LPA-4720 UGCAGGAAUCCAGAUUCUGAGAAAC 244 GUUUCUCAGAAUCUGGAUUCCUGCAGU 644
LPA-4721 GCAGGAAUCCAGAUUCUGGAAAACA 245 UGUUUUCCAGAAUCUGGAUUCCUGCAG 645
LPA-4724 GGAAUCCAGAUUCUGGGAAACAACC 246 GGUUGUUUCCCAGAAUCUGGAUUCCUG 646
LPA-4738 GGGAAACAACCCUGGUGUUACACAA 247 UUGUGUAACACCAGGGUUGUUUCCCAG 647
LPA-4739 GGAAACAACCCUGGUGUUAAACAAC 248 GUUGUUUAACACCAGGGUUGUUUCCCA 648
LPA-4771 UGUGUGAGGUGGGAGUACUACAATC 249 GAUUGUAGUACUCCCACCUCACACACG 649
LPA-4772 GUGUGAGGUGGGAGUACUGAAAUCT 250 AGAUUUCAGUACUCCCACCUCACACAC 650
LPA-4774 GUGAGGUGGGAGUACUGCAAUCUGA 251 UCAGAUUGCAGUACUCCCACCUCACAC 651
LPA-4775 UGAGGUGGGAGUACUGCAAACUGAC 252 GUCAGUUUGCAGUACUCCCACCUCACA 652
LPA-4795 CUGACACAAUGCUCAGAAAAAGAAT 253 AUUCUUUUUCUGAGCAUUGUGUCAGAU 653
LPA-4796 UGACACAAUGCUCAGAAACAGAATC 254 GAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGUCAGA 654
LPA-4797 GACACAAUGCUCAGAAACAAAAUCA 255 UGAUUUUGUUUCUGAGCAUUGUGUCAG 655
LPA-4798 ACACAAUGCUCAGAAACAGAAUCAG 256 CUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGUCA 656
LPA-4799 CACAAUGCUCAGAAACAGAAUCAGG 257 CCUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGUC 657
LPA-4800 ACAAUGCUCAGAAACAGAAACAGGT 258 ACCUGUUUCUGUUUCUGAGCAUUGUGU 658
LPA-4801 CAAUGCUCAGAAACAGAAUAAGGTG 259 CACCUUAUUCUGUUUCUGAGCAUUGUG 659
LPA-4802 AAUGCUCAGAAACAGAAUCAGGUGT 260 ACACCUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUGU 660
LPA-4803 AUGCUCAGAAACAGAAUCAAGUGTC 261 GACACUUGAUUCUGUUUCUGAGCAUUG 661
LPA-4804 UGCUCAGAAACAGAAUCAGAUGUCC 262 GGACAUCUGAUUCUGUUUCUGAGCAUU 662
LPA-4806 CUCAGAAACAGAAUCAGGUAUCCTA 263 UAGGAUACCUGAUUCUGUUUCUGAGCA 663
LPA-4808 CAGAAACAGAAUCAGGUGUACUAGA 264 UCUAGUACACCUGAUUCUGUUUCUGAG 664
LPA-4809 AGAAACAGAAUCAGGUGUCAUAGAG 265 CUCUAUGACACCUGAUUCUGUUUCUGA 665
LPA-4810 GAAACAGAAUCAGGUGUCCAAGAGA 266 UCUCUUGGACACCUGAUUCUGUUUCUG 666
LPA-4811 AAACAGAAUCAGGUGUCCUAGAGAC 267 GUCUCUAGGACACCUGAUUCUGUUUCU 667
LPA-4812 AACAGAAUCAGGUGUCCUAAAGACT 268 AGUCUUUAGGACACCUGAUUCUGUUUC 668
LPA-4814 CAGAAUCAGGUGUCCUAGAAACUCC 269 GGAGUUUCUAGGACACCUGAUUCUGUU 669
LPA-4816 GAAUCAGGUGUCCUAGAGAAUCCCA 270 UGGGAUUCUCUAGGACACCUGAUUCUG 670
LPA-4818 AUCAGGUGUCCUAGAGACUACCACT 271 AGUGGUAGUCUCUAGGACACCUGAUUC 671
LPA-4822 GGUGUCCUAGAGACUCCCAAUGUTG 272 CAACAUUGGGAGUCUCUAGGACACCUG 672
LPA-4827 CCUAGAGACUCCCACUGUUAUUCCA 273 UGGAAUAACAGUGGGAGUCUCUAGGAC 673
LPA-4828 CUAGAGACUCCCACUGUUGAUCCAG 274 CUGGAUCAACAGUGGGAGUCUCUAGGA 674
LPA-4829 UAGAGACUCCCACUGUUGUACCAGT 275 ACUGGUACAACAGUGGGAGUCUCUAGG 675
LPA-4830 AGAGACUCCCACUGUUGUUACAGTT 276 AACUGUAACAACAGUGGGAGUCUCUAG 676
LPA-4831 GAGACUCCCACUGUUGUUCAAGUTC 277 GAACUUGAACAACAGUGGGAGUCUCUA 677
LPA-4832 AGACUCCCACUGUUGUUCCAGUUCC 278 GGAACUGGAACAACAGUGGGAGUCUCU 678
LPA-4867 GCUCAUUCUGAAGCAGCACAAACTG 279 CAGUUUGUGCUGCUUCAGAAUGAGCCU 679
LPA-4868 CUCAUUCUGAAGCAGCACCAACUGA 280 UCAGUUGGUGCUGCUUCAGAAUGAGCC 680
LPA-4869 UCAUUCUGAAGCAGCACCAACUGAG 281 CUCAGUUGGUGCUGCUUCAGAAUGAGC 681
LPA-4870 CAUUCUGAAGCAGCACCAAAUGAGC 282 GCUCAUUUGGUGCUGCUUCAGAAUGAG 682
LPA-4871 AUUCUGAAGCAGCACCAACAGAGCA 283 UGCUCUGUUGGUGCUGCUUCAGAAUGA 683
LPA-4872 UUCUGAAGCAGCACCAACUAAGCAA 284 UUGCUUAGUUGGUGCUGCUUCAGAAUG 684
LPA-4873 UCUGAAGCAGCACCAACUGAGCAAA 285 UUUGCUCAGUUGGUGCUGCUUCAGAAU 685
LPA-4874 CUGAAGCAGCACCAACUGAACAAAC 286 GUUUGUUCAGUUGGUGCUGCUUCAGAA 686
LPA-4875 UGAAGCAGCACCAACUGAGAAAACC 287 GGUUUUCUCAGUUGGUGCUGCUUCAGA 687
LPA-4876 GAAGCAGCACCAACUGAGCAAACCC 288 GGGUUUGCUCAGUUGGUGCUGCUUCAG 688
LPA-4877 AAGCAGCACCAACUGAGCAAACCCC 289 GGGGUUUGCUCAGUUGGUGCUGCUUCA 689
LPA-4912 CAGUGCUACCAUGGUAAUGACCAGA 290 UCUGGUCAUUACCAUGGUAGCACUGCC 690
LPA-4913 AGUGCUACCAUGGUAAUGGACAGAG 291 CUCUGUCCAUUACCAUGGUAGCACUGC 691
LPA-4948 ACAUUCUCCACCACUGUCAAAGGAA 292 UUCCUUUGACAGUGGUGGAGAAUGUGC 692
LPA-4959 CACUGUCACAGGAAGGACAAGUCAA 293 UUGACUUGUCCUUCCUGUGACAGUGGU 693
LPA-4960 ACUGUCACAGGAAGGACAUAUCAAT 294 AUUGAUAUGUCCUUCCUGUGACAGUGG 694
LPA-4961 CUGUCACAGGAAGGACAUGACAATC 295 GAUUGUCAUGUCCUUCCUGUGACAGUG 695
LPA-4962 UGUCACAGGAAGGACAUGUAAAUCT 296 AGAUUUACAUGUCCUUCCUGUGACAGU 696
LPA-4963 GUCACAGGAAGGACAUGUCAAUCTT 297 AAGAUUGACAUGUCCUUCCUGUGACAG 697
LPA-4964 UCACAGGAAGGACAUGUCAAUCUTG 298 CAAGAUUGACAUGUCCUUCCUGUGACA 698
LPA-4966 ACAGGAAGGACAUGUCAAUAUUGGT 299 ACCAAUAUUGACAUGUCCUUCCUGUGA 699
LPA-4967 CAGGAAGGACAUGUCAAUCAUGGTC 300 GACCAUGAUUGACAUGUCCUUCCUGUG 700
LPA-4968 AGGAAGGACAUGUCAAUCUAGGUCA 301 UGACCUAGAUUGACAUGUCCUUCCUGU 701
LPA-4969 GGAAGGACAUGUCAAUCUUAGUCAT 302 AUGACUAAGAUUGACAUGUCCUUCCUG 702
LPA-4970 GAAGGACAUGUCAAUCUUGAUCATC 303 GAUGAUCAAGAUUGACAUGUCCUUCCU 703
LPA-4971 AAGGACAUGUCAAUCUUGGACAUCC 304 GGAUGUCCAAGAUUGACAUGUCCUUCC 704
LPA-4972 AGGACAUGUCAAUCUUGGUAAUCCA 305 UGGAUUACCAAGAUUGACAUGUCCUUC 705
LPA-4973 GGACAUGUCAAUCUUGGUCAUCCAT 306 AUGGAUGACCAAGAUUGACAUGUCCUU 706
LPA-4974 GACAUGUCAAUCUUGGUCAACCATG 307 CAUGGUUGACCAAGAUUGACAUGUCCU 707
LPA-4975 ACAUGUCAAUCUUGGUCAUACAUGA 308 UCAUGUAUGACCAAGAUUGACAUGUCC 708
LPA-4976 CAUGUCAAUCUUGGUCAUCAAUGAC 309 GUCAUUGAUGACCAAGAUUGACAUGUC 709
LPA-4977 AUGUCAAUCUUGGUCAUCCAUGACA 310 UGUCAUGGAUGACCAAGAUUGACAUGU 710
LPA-4978 UGUCAAUCUUGGUCAUCCAAGACAC 311 GUGUCUUGGAUGACCAAGAUUGACAUG 711
LPA-4979 GUCAAUCUUGGUCAUCCAUAACACC 312 GGUGUUAUGGAUGACCAAGAUUGACAU 712
LPA-4980 UCAAUCUUGGUCAUCCAUGACACCA 313 UGGUGUCAUGGAUGACCAAGAUUGACA 713
LPA-4981 CAAUCUUGGUCAUCCAUGAAACCAC 314 GUGGUUUCAUGGAUGACCAAGAUUGAC 714
LPA-4982 AAUCUUGGUCAUCCAUGACACCACA 315 UGUGGUGUCAUGGAUGACCAAGAUUGA 715
LPA-4983 AUCUUGGUCAUCCAUGACAACACAC 316 GUGUGUUGUCAUGGAUGACCAAGAUUG 716
LPA-5048 UGACAAUGAACUACUGCAGAAAUCC 317 GGAUUUCUGCAGUAGUUCAUUGUCAGG 717
LPA-5049 GACAAUGAACUACUGCAGGAAUCCA 318 UGGAUUCCUGCAGUAGUUCAUUGUCAG 718
LPA-5050 ACAAUGAACUACUGCAGGAAUCCAG 319 CUGGAUUCCUGCAGUAGUUCAUUGUCA 719
LPA-5051 CAAUGAACUACUGCAGGAAACCAGA 320 UCUGGUUUCCUGCAGUAGUUCAUUGUC 720
LPA-5052 AAUGAACUACUGCAGGAAUACAGAT 321 AUCUGUAUUCCUGCAGUAGUUCAUUGU 721
LPA-5053 AUGAACUACUGCAGGAAUCAAGATG 322 CAUCUUGAUUCCUGCAGUAGUUCAUUG 722
LPA-5054 UGAACUACUGCAGGAAUCCAGAUGC 323 GCAUCUGGAUUCCUGCAGUAGUUCAUU 723
LPA-5058 CUACUGCAGGAAUCCAGAUACCGAT 324 AUCGGUAUCUGGAUUCCUGCAGUAGUU 724
LPA-5084 CAGGCCCUUGGUGUUUUACAAUGGA 325 UCCAUUGUAAAACACCAAGGGCCUGUA 725
LPA-5090 CUUGGUGUUUUACCAUGGAACCCAG 326 CUGGGUUCCAUGGUAAAACACCAAGGG 726
LPA-5091 UUGGUGUUUUACCAUGGACACCAGC 327 GCUGGUGUCCAUGGUAAAACACCAAGG 727
LPA-5092 UGGUGUUUUACCAUGGACCACAGCA 328 UGCUGUGGUCCAUGGUAAAACACCAAG 728
LPA-5093 GGUGUUUUACCAUGGACCCAAGCAT 329 AUGCUUGGGUCCAUGGUAAAACACCAA 729
LPA-5094 GUGUUUUACCAUGGACCCCAGCATC 330 GAUGCUGGGGUCCAUGGUAAAACACCA 730
LPA-5096 GUUUUACCAUGGACCCCAGAAUCAG 331 CUGAUUCUGGGGUCCAUGGUAAAACAC 731
LPA-5124 GGAGUACUGCAACCUGACGAGAUGC 332 GCAUCUCGUCAGGUUGCAGUACUCCCA 732
LPA-5125 GAGUACUGCAACCUGACGCAAUGCT 333 AGCAUUGCGUCAGGUUGCAGUACUCCC 733
LPA-5127 GUACUGCAACCUGACGCGAAGCUCA 334 UGAGCUUCGCGUCAGGUUGCAGUACUC 734
LPA-5128 UACUGCAACCUGACGCGAUACUCAG 335 CUGAGUAUCGCGUCAGGUUGCAGUACU 735
LPA-5131 UGCAACCUGACGCGAUGCUAAGACA 336 UGUCUUAGCAUCGCGUCAGGUUGCAGU 736
LPA-5136 CCUGACGCGAUGCUCAGACACAGAA 337 UUCUGUGUCUGAGCAUCGCGUCAGGUU 737
LPA-5137 CUGACGCGAUGCUCAGACAAAGAAG 338 CUUCUUUGUCUGAGCAUCGCGUCAGGU 738
LPA-5144 GAUGCUCAGACACAGAAGGAACUGT 339 ACAGUUCCUUCUGUGUCUGAGCAUCGC 739
LPA-5145 AUGCUCAGACACAGAAGGGACUGTG 340 CACAGUCCCUUCUGUGUCUGAGCAUCG 740
LPA-5151 AGACACAGAAGGGACUGUGAUCGCT 341 AGCGAUCACAGUCCCUUCUGUGUCUGA 741
LPA-5467 GCAUCCUCUUCAUUUGAUUAUGGGA 342 UCCCAUAAUCAAAUGAAGAGGAUGCAC 742
LPA-5468 CAUCCUCUUCAUUUGAUUGAGGGAA 343 UUCCCUCAAUCAAAUGAAGAGGAUGCA 743
LPA-5469 AUCCUCUUCAUUUGAUUGUAGGAAG 344 CUUCCUACAAUCAAAUGAAGAGGAUGC 744
LPA-5470 UCCUCUUCAUUUGAUUGUGAGAAGC 345 GCUUCUCACAAUCAAAUGAAGAGGAUG 745
LPA-5471 CCUCUUCAUUUGAUUGUGGAAAGCC 346 GGCUUUCCACAAUCAAAUGAAGAGGAU 746
LPA-5474 CUUCAUUUGAUUGUGGGAAACCUCA 347 UGAGGUUUCCCACAAUCAAAUGAAGAG 747
LPA-5475 UUCAUUUGAUUGUGGGAAGACUCAA 348 UUGAGUCUUCCCACAAUCAAAUGAAGA 748
LPA-5476 UCAUUUGAUUGUGGGAAGCAUCAAG 349 CUUGAUGCUUCCCACAAUCAAAUGAAG 749
LPA-5477 CAUUUGAUUGUGGGAAGCCACAAGT 350 ACUUGUGGCUUCCCACAAUCAAAUGAA 750
LPA-5478 AUUUGAUUGUGGGAAGCCUAAAGTG 351 CACUUUAGGCUUCCCACAAUCAAAUGA 751
LPA-5486 GUGGGAAGCCUCAAGUGGAACCGAA 352 UUCGGUUCCACUUGAGGCUUCCCACAA 752
LPA-5509 AAGAAAUGUCCUGGAAGCAAUGUAG 353 CUACAUUGCUUCCAGGACAUUUCUUCG 753
LPA-5510 AGAAAUGUCCUGGAAGCAUAGUAGG 354 CCUACUAUGCUUCCAGGACAUUUCUUC 754
LPA-5511 GAAAUGUCCUGGAAGCAUUAUAGGG 355 CCCUAUAAUGCUUCCAGGACAUUUCUU 755
LPA-5513 AAUGUCCUGGAAGCAUUGUAGGGGG 356 CCCCCUACAAUGCUUCCAGGACAUUUC 756
LPA-5514 AUGUCCUGGAAGCAUUGUAAGGGGG 357 CCCCCUUACAAUGCUUCCAGGACAUUU 757
LPA-5581 AGAACAAGGUUUGGAAAGCACUUCT 358 AGAAGUGCUUUCCAAACCUUGUUCUGA 758
LPA-5582 GAACAAGGUUUGGAAAGCAAUUCTG 359 CAGAAUUGCUUUCCAAACCUUGUUCUG 759
LPA-5583 AACAAGGUUUGGAAAGCACAUCUGT 360 ACAGAUGUGCUUUCCAAACCUUGUUCU 760
LPA-5584 ACAAGGUUUGGAAAGCACUACUGTG 361 CACAGUAGUGCUUUCCAAACCUUGUUC 761
LPA-5585 CAAGGUUUGGAAAGCACUUAUGUGG 362 CCACAUAAGUGCUUUCCAAACCUUGUU 762
LPA-5586 AAGGUUUGGAAAGCACUUCAGUGGA 363 UCCACUGAAGUGCUUUCCAAACCUUGU 763
LPA-5587 AGGUUUGGAAAGCACUUCUAUGGAG 364 CUCCAUAGAAGUGCUUUCCAAACCUUG 764
LPA-5592 UGGAAAGCACUUCUGUGGAAGCACC 365 GGUGCUUCCACAGAAGUGCUUUCCAAA 765
LPA-5606 GUGGAGGCACCUUAAUAUCACCAGA 366 UCUGGUGAUAUUAAGGUGCCUCCACAG 766
LPA-5616 CUUAAUAUCCCCAGAGUGGAUGCTG 367 CAGCAUCCACUCUGGGGAUAUUAAGGU 767
LPA-5618 UAAUAUCCCCAGAGUGGGUACUGAC 368 GUCAGUACCCACUCUGGGGAUAUUAAG 768
LPA-5628 AGAGUGGGUGCUGACUGCUACUCAC 369 GUGAGUAGCAGUCAGCACCCACUCUGG 769
LPA-5685 CAAGGUCAUCCUGGGUGCAAACCAA 370 UUGGUUUGCACCCAGGAUGACCUUGUA 770
LPA-5694 CCUGGGUGCACACCAAGAAAUGAAC 371 GUUCAUUUCUUGGUGUGCACCCAGGAU 771
LPA-5699 GUGCACACCAAGAAGUGAAACUCGA 372 UCGAGUUUCACUUCUUGGUGUGCACCC 772
LPA-5775 AGCAGAUAUUGCCUUGCUAAAGCTA 373 UAGCUUUAGCAAGGCAAUAUCUGCUUG 773
LPA-5776 GCAGAUAUUGCCUUGCUAAAGCUAA 374 UUAGCUUUAGCAAGGCAAUAUCUGCUU 774
LPA-5777 CAGAUAUUGCCUUGCUAAAACUAAG 375 CUUAGUUUUAGCAAGGCAAUAUCUGCU 775
LPA-5778 AGAUAUUGCCUUGCUAAAGAUAAGC 376 GCUUAUCUUUAGCAAGGCAAUAUCUGC 776
LPA-5779 GAUAUUGCCUUGCUAAAGCAAAGCA 377 UGCUUUGCUUUAGCAAGGCAAUAUCUG 777
LPA-5780 AUAUUGCCUUGCUAAAGCUAAGCAG 378 CUGCUUAGCUUUAGCAAGGCAAUAUCU 778
LPA-5781 UAUUGCCUUGCUAAAGCUAAGCAGG 379 CCUGCUUAGCUUUAGCAAGGCAAUAUC 779
LPA-5813 UCAUCACUGACAAAGUAAUACCAGC 380 GCUGGUAUUACUUUGUCAGUGAUGACG 780
LPA-5873 GGACUGAAUGUUACAUCACAGGCTG 381 CAGCCUGUGAUGUAACAUUCAGUCCUG 781
LPA-5874 GACUGAAUGUUACAUCACUAGCUGG 382 CCAGCUAGUGAUGUAACAUUCAGUCCU 782
LPA-5875 ACUGAAUGUUACAUCACUGACUGGG 383 CCCAGUCAGUGAUGUAACAUUCAGUCC 783
LPA-5876 CUGAAUGUUACAUCACUGGAUGGGG 384 CCCCAUCCAGUGAUGUAACAUUCAGUC 784
LPA-5877 UGAAUGUUACAUCACUGGCAGGGGA 385 UCCCCUGCCAGUGAUGUAACAUUCAGU 785
LPA-5879 AAUGUUACAUCACUGGCUGAGGAGA 386 UCUCCUCAGCCAGUGAUGUAACAUUCA 786
LPA-5902 GAAACCCAAGGUACCUUUGAGACTG 387 CAGUCUCAAAGGUACCUUGGGUUUCUC 787
LPA-0190-M1 UCCACCACUGUCACAGGAAAGCAGCCGAAAGGCUGC 388 UUUCCUGUGACAGUGGUGGAGG 788
LPA-0501-M1 UGGUAAUGGACAGAGUUAUAGCAGCCGAAAGGCUGC 389 UAUAACUCUGUCCAUUACCAGG 789
LPA-3100-M1 UACUGCAACCUGACACGAUAGCAGCCGAAAGGCUGC 390 UAUCGUGUCAGGUUGCAGUAGG 790
LPA-3286-M1 AGAACUUGCCAAGCUUGGUAGCAGCCGAAAGGCUGC 391 UACCAAGCUUGGCAAGUUCUGG 791
LPA-3288-M1 AACUUGCCAAGCUUGGUCAAGCAGCCGAAAGGCUGC 392 UUGACCAAGCUUGGCAAGUUGG 792
LPA-3291-M1 UUGCCAAGCUUGGUCAUCUAGCAGCCGAAAGGCUGC 393 UAGAUGACCAAGCUUGGCAAGG 793
LPA-3584-M1 AUGGACAGAGUUAUCGAGGAGCAGCCGAAAGGCUGC 394 UCCUCGAUAACUCUGUCCAUGG 794
LPA-3585-M1 UGGACAGAGUUAUCGAGGCAGCAGCCGAAAGGCUGC 395 UGCCUCGAUAACUCUGUCCAGG 795
LPA-4645-M1 UGGUCAUCUAUGAUACCACAGCAGCCGAAAGGCUGC 396 UGUGGUAUCAUAGAUGACCAGG 796
LPA-4717-M1 UACUGCAGGAAUCCAGAUUAGCAGCCGAAAGGCUGC 397 UAAUCUGGAUUCCUGCAGUAGG 797
LPA-5510-M1 AGAAAUGUCCUGGAAGCAUAGCAGCCGAAAGGCUGC 398 UAUGCUUCCAGGACAUUUCUGG 798
LPA-3750-M1 GACAACAGAAUAUUAUCCAAGCAGCCGAAAGGCUGC 399 UUGGAUAAUAUUCUGUUGUCGG 799
LPA-2900-M2 AUGGACAGAGUUAUCAAGGAGCAGCCGAAAGGCUGC 400 UCCUUGAUAACUCUGUCCAUGG 800
LPA-3675-M2 GACAACAGAAUAUUAUCCAAGCAGCCGAAAGGCUGC 401 UUGGAUAAUAUUCUGUUGUCGG 801
LPA-2900-M3 AUGGACAGAGUUAUCAAGGAGCAGCCGAAAGGCUGC 402 UCCUUGAUAACUCUGUCCAUGG 802
LPA-3675-M3 GACAACAGAAUAUUAUCCAAGCAGCCGAAAGGCUGC 403 UUGGAUAAUAUUCUGUUGUCGG 803
人類(Hs)：NM_005577.3  (SEQ ID NO: 1)
食蟹猴(Mf)：XM_015448517.1  (SEQ ID NO: 2)
恆河猴：XM_028847001.1       (SEQ ID NO: 3)
表6. LPA寡核苷酸序列(經修飾)
寡核苷酸 序列 ( 有義股 ) SEQ ID NO: 序列 ( 反義股 ) SEQ ID NO:
LPA-0190-M1 [mUs][mC][mC][mA][mC][mC][mA][fC][fU][fG][fU][mC][mA][mC][mA][mG][mG][mA][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 388 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fUs][fUs][fC][fC][mU][fG][mU][mG][fA][mC][mA][mG][fU][mG][mG][mU][mG][mG][mAs][mGs][mG] 788
LPA-0501-M1 [mUs][mG][mG][mU][mA][mA][mU][fG][fG][fA][fC][mA][mG][mA][mG][mU][mU][mA][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 389 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fAs][fUs][fA][fA][mC][fU][mC][mU][fG][mU][mC][mC][fA][mU][mU][mA][mC][mC][mAs][mGs][mG] 789
LPA-3100-M1 [mUs][mA][mC][mU][mG][mC][mA][fA][fC][fC][fU][mG][mA][mC][mA][mC][mG][mA][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 390 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fAs][fUs][fC][fG][mU][fG][mU][mC][fA][mG][mG][mU][fU][mG][mC][mA][mG][mU][mAs][mGs][mG] 790
LPA-3286-M1 [mAs][mG][mA][mA][mC][mU][mU][fG][fC][fC][fA][mA][mG][mC][mU][mU][mG][mG][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 391 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fAs][fCs][fC][fA][mA][fG][mC][mU][fU][mG][mG][mC][fA][mA][mG][mU][mU][mC][mUs][mGs][mG] 791
LPA-3288-M1 [mAs][mA][mC][mU][mU][mG][mC][fC][fA][fA][fG][mC][mU][mU][mG][mG][mU][mC][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 392 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fUs][fGs][fA][fC][mC][fA][mA][mG][fC][mU][mU][mG][fG][mC][mA][mA][mG][mU][mUs][mGs][mG] 792
LPA-3291-M1 [mUs][mU][mG][mC][mC][mA][mA][fG][fC][fU][fU][mG][mG][mU][mC][mA][mU][mC][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 393 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fAs][fGs][fA][fU][mG][fA][mC][mC][fA][mA][mG][mC][fU][mU][mG][mG][mC][mA][mAs][mGs][mG] 793
LPA-3584-M1 [mAs][mU][mG][mG][mA][mC][mA][fG][fA][fG][fU][mU][mA][mU][mC][mG][mA][mG][mG][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 394 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fCs][fCs][fU][fC][mG][fA][mU][mA][fA][mC][mU][mC][fU][mG][mU][mC][mC][mA][mUs][mGs][mG] 794
LPA-3585-M1 [mUs][mG][mG][mA][mC][mA][mG][fA][fG][fU][fU][mA][mU][mC][mG][mA][mG][mG][mC][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 395 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fGs][fCs][fC][fU][mC][fG][mA][mU][fA][mA][mC][mU][fC][mU][mG][mU][mC][mC][mAs][mGs][mG] 795
LPA-4645-M1 [mUs][mG][mG][mU][mC][mA][mU][fC][fU][fA][fU][mG][mA][mU][mA][mC][mC][mA][mC][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 396 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fGs][fUs][fG][fG][mU][fA][mU][mC][fA][mU][mA][mG][fA][mU][mG][mA][mC][mC][mAs][mGs][mG] 796
LPA-4717-M1 [mUs][mA][mC][mU][mG][mC][mA][fG][fG][fA][fA][mU][mC][mC][mA][mG][mA][mU][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 397 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fAs][fAs][fU][fC][mU][fG][mG][mA][fU][mU][mC][mC][fU][mG][mC][mA][mG][mU][mAs][mGs][mG] 797
LPA-5510-M1 [mAs][mG][mA][mA][mA][mU][mG][fU][fC][fC][fU][mG][mG][mA][mA][mG][mC][mA][mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 398 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fAs][fUs][fG][fC][mU][fU][mC][mC][fA][mG][mG][mA][fC][mA][mU][mU][mU][mC][mUs][mGs][mG] 798
LPA-3750-M1 [mGs][mA][mC][mA][mA][mC][mA][fG][fA][fA][fU][mA][mU][mU][mA][mU][mC][mC][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 399 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fUs][fGs][fG][fA][mU][fA][mA][mU][fA][mU][mU][mC][fU][mG][mU][mU][mG][mU][mCs][mGs][mG] 799
LPA-2900-M2 [mAs][mU][mG][mG][mA][mC][mA][fG][fA][fG][fU][mU][mA][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 400 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fCs][fC][fU][fU][mG][fA][mU][mA][fA][mC][mU][mC][fU][mG][mU][mC][mC][mA][mUs][mGs][mG] 800
LPA-3675-M2 [mGs][mA][mC][mA][mA][mC][mA][fG][fA][fA][fU][mA][mU][mU][mA][mU][mC][mC][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 401 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fUs][fG][fG][fA][mU][fA][mA][mU][fA][mU][mU][mC][fU][mG][mU][mU][mG][mU][mCs][mGs][mG] 801
LPA-2900-M3 [mAs][mU][mG][mG][mA][mC][mA][fG][fA][fG][fU][mU][mA][mU][mC][mA][mA][mG][mG][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 402 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fCs][fC][mU][fU][mG][fA][mU][mA][fA][mC][mU][mC][fU][mG][mU][mC][mC][mA][mUs][mGs][mG] 802
LPA-3675-M3 [mGs][mA][mC][mA][mA][mC][mA][fG][fA][fA][fU][mA][mU][mU][mA][mU][mC][mC][mA][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] 403 [甲基膦酸酯-4O-mUs][fUs][fG][mG][fA][mU][fA][mA][mU][fA][mU][mU][mC][fU][mG][mU][mU][mG][mU][mCs][mGs][mG] 803
表6中之修飾： mC、mA、mG、mU=2’-OMe核糖核苷；fA、fC、fG、fU=2’-F核糖核苷；s=硫代磷酸酯；甲基膦酸酯-4O-mUs = ； ademA-GalNAc =連接至腺嘌呤核苷酸之GalNAc： 。
圖 1 至圖 4提供圖表，該等圖表繪示相對於模擬處理之對照細胞中LPA mRNA之百分比(%)，經所指示之DsiRNA轉染之HEK293-LPA細胞中LPA mRNA之%。 圖 5提供圖表，該圖表繪示相對於模擬處理之對照細胞中LPA mRNA之百分比(%)，經所指示之DsiRNA轉染之HepG2-LPA細胞中LPA mRNA之%。 圖 6 至圖 7提供圖表，該等圖表繪示相對於模擬處理之對照細胞中LPA mRNA之百分比(%)，經所指示之DsiRNA轉染之HEK293-LPA細胞中LPA mRNA之%。 圖 8 至圖 9提供圖表，該等圖表繪示相對於用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)治療之小鼠，用所指示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸治療的小鼠肝臟樣品中LPA mRNA之百分比(%)。 圖 10提供示意圖，該示意圖繪示通用N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)結合之LPA寡核苷酸之結構及化學修飾模式。 圖 11A 至圖 11C提供圖表，該等圖表繪示相對於用PBS治療之非人類靈長類動物(NHP)，用所指示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸治療的NHP在治療後第28天( 圖 11A)、第56天( 圖 11B)及第84天( 圖 11C)之肝臟樣品中的LPA mRNA之百分比(%)。 圖 11D提供圖表，該圖表繪示相對於用PBS治療之NHP，用所指示之GalNAc結合之LPA寡核苷酸治療的NHP在第28天之肝臟樣品中的PLG mRNA之百分比(%)。 圖 12提供圖表，該圖表繪示相對於用PBS治療之NHP，用所指示之GalNAc結合之 LPA寡核苷酸治療的NHP之血清中apo(a)蛋白隨時間之平均百分比(%)。
Figure 110128888-A0305-15-0001-1
Figure 110128888-A0305-15-0002-3
Figure 110128888-A0305-15-0003-4
Figure 110128888-A0305-15-0004-5
Figure 110128888-A0305-15-0005-6
Figure 110128888-A0305-15-0006-7
Figure 110128888-A0305-15-0007-8
Figure 110128888-A0305-15-0008-9
Figure 110128888-A0305-15-0009-10
Figure 110128888-A0305-15-0010-11
Figure 110128888-A0305-15-0011-12
Figure 110128888-A0305-15-0012-13
Figure 110128888-A0305-15-0013-14
Figure 110128888-A0305-15-0014-15
Figure 110128888-A0305-15-0015-16
Figure 110128888-A0305-15-0016-17
Figure 110128888-A0305-15-0017-18
Figure 110128888-A0305-15-0018-19
Figure 110128888-A0305-15-0019-20
Figure 110128888-A0305-15-0020-21
Figure 110128888-A0305-15-0021-22
Figure 110128888-A0305-15-0022-23
Figure 110128888-A0305-15-0023-24
Figure 110128888-A0305-15-0024-25
Figure 110128888-A0305-15-0025-26
Figure 110128888-A0305-15-0026-27
Figure 110128888-A0305-15-0027-28
Figure 110128888-A0305-15-0028-29
Figure 110128888-A0305-15-0029-30
Figure 110128888-A0305-15-0030-31
Figure 110128888-A0305-15-0031-32
Figure 110128888-A0305-15-0032-33
Figure 110128888-A0305-15-0033-34
Figure 110128888-A0305-15-0034-36
Figure 110128888-A0305-15-0035-37
Figure 110128888-A0305-15-0036-38
Figure 110128888-A0305-15-0037-39
Figure 110128888-A0305-15-0038-40
Figure 110128888-A0305-15-0039-41
Figure 110128888-A0305-15-0040-42
Figure 110128888-A0305-15-0041-43
Figure 110128888-A0305-15-0042-44
Figure 110128888-A0305-15-0043-45
Figure 110128888-A0305-15-0044-46
Figure 110128888-A0305-15-0045-47
Figure 110128888-A0305-15-0046-48
Figure 110128888-A0305-15-0047-49
Figure 110128888-A0305-15-0048-50
Figure 110128888-A0305-15-0049-51
Figure 110128888-A0305-15-0050-52
Figure 110128888-A0305-15-0051-53
Figure 110128888-A0305-15-0052-54
Figure 110128888-A0305-15-0053-55
Figure 110128888-A0305-15-0054-56
Figure 110128888-A0305-15-0055-57
Figure 110128888-A0305-15-0056-59
Figure 110128888-A0305-15-0057-60
Figure 110128888-A0305-15-0058-61
Figure 110128888-A0305-15-0059-62
Figure 110128888-A0305-15-0060-63
Figure 110128888-A0305-15-0061-64
Figure 110128888-A0305-15-0062-65
Figure 110128888-A0305-15-0063-66
Figure 110128888-A0305-15-0064-67
Figure 110128888-A0305-15-0065-68
Figure 110128888-A0305-15-0066-69
Figure 110128888-A0305-15-0067-70
Figure 110128888-A0305-15-0068-71
Figure 110128888-A0305-15-0069-72
Figure 110128888-A0305-15-0070-74
Figure 110128888-A0305-15-0071-75
Figure 110128888-A0305-15-0072-76
Figure 110128888-A0305-15-0073-77
Figure 110128888-A0305-15-0074-78
Figure 110128888-A0305-15-0075-79
Figure 110128888-A0305-15-0076-80
Figure 110128888-A0305-15-0077-81
Figure 110128888-A0305-15-0078-82
Figure 110128888-A0305-15-0079-83
Figure 110128888-A0305-15-0080-84
Figure 110128888-A0305-15-0081-85
Figure 110128888-A0305-15-0082-86
Figure 110128888-A0305-15-0083-87
Figure 110128888-A0305-15-0084-88
Figure 110128888-A0305-15-0085-89
Figure 110128888-A0305-15-0086-90
Figure 110128888-A0305-15-0087-91
Figure 110128888-A0305-15-0088-92
Figure 110128888-A0305-15-0089-93
Figure 110128888-A0305-15-0090-94
Figure 110128888-A0305-15-0091-95
Figure 110128888-A0305-15-0092-96
Figure 110128888-A0305-15-0093-97
Figure 110128888-A0305-15-0094-98
Figure 110128888-A0305-15-0095-99
Figure 110128888-A0305-15-0096-100
Figure 110128888-A0305-15-0097-101
Figure 110128888-A0305-15-0098-102
Figure 110128888-A0305-15-0099-103
Figure 110128888-A0305-15-0100-104
Figure 110128888-A0305-15-0101-105
Figure 110128888-A0305-15-0102-106
Figure 110128888-A0305-15-0103-108
Figure 110128888-A0305-15-0104-109
Figure 110128888-A0305-15-0105-110
Figure 110128888-A0305-15-0106-111
Figure 110128888-A0305-15-0107-112
Figure 110128888-A0305-15-0108-113
Figure 110128888-A0305-15-0109-114
Figure 110128888-A0305-15-0110-115
Figure 110128888-A0305-15-0111-116
Figure 110128888-A0305-15-0112-117
Figure 110128888-A0305-15-0113-118
Figure 110128888-A0305-15-0114-119
Figure 110128888-A0305-15-0115-120
Figure 110128888-A0305-15-0116-121
Figure 110128888-A0305-15-0117-122
Figure 110128888-A0305-15-0118-123
Figure 110128888-A0305-15-0119-124
Figure 110128888-A0305-15-0120-125
Figure 110128888-A0305-15-0121-126
Figure 110128888-A0305-15-0122-127
Figure 110128888-A0305-15-0123-128
Figure 110128888-A0305-15-0124-129
Figure 110128888-A0305-15-0125-130
Figure 110128888-A0305-15-0126-131
Figure 110128888-A0305-15-0127-132
Figure 110128888-A0305-15-0128-133
Figure 110128888-A0305-15-0129-134
Figure 110128888-A0305-15-0130-135
Figure 110128888-A0305-15-0131-136
Figure 110128888-A0305-15-0132-137
Figure 110128888-A0305-15-0133-138
Figure 110128888-A0305-15-0134-139
Figure 110128888-A0305-15-0135-140
Figure 110128888-A0305-15-0136-141
Figure 110128888-A0305-15-0137-142
Figure 110128888-A0305-15-0138-143
Figure 110128888-A0305-15-0139-144
Figure 110128888-A0305-15-0140-145
Figure 110128888-A0305-15-0141-146
Figure 110128888-A0305-15-0142-147
Figure 110128888-A0305-15-0143-148
Figure 110128888-A0305-15-0144-149
Figure 110128888-A0305-15-0145-150
Figure 110128888-A0305-15-0146-152
Figure 110128888-A0305-15-0147-153
Figure 110128888-A0305-15-0148-154
Figure 110128888-A0305-15-0149-155
Figure 110128888-A0305-15-0150-156
Figure 110128888-A0305-15-0151-158
Figure 110128888-A0305-15-0152-159
Figure 110128888-A0305-15-0153-160
Figure 110128888-A0305-15-0154-161
Figure 110128888-A0305-15-0155-162
Figure 110128888-A0305-15-0156-163
Figure 110128888-A0305-15-0157-164
Figure 110128888-A0305-15-0158-165
Figure 110128888-A0305-15-0159-166
Figure 110128888-A0305-15-0160-167
Figure 110128888-A0305-15-0161-168
Figure 110128888-A0305-15-0162-169
Figure 110128888-A0305-15-0163-171
Figure 110128888-A0305-15-0164-172
Figure 110128888-A0305-15-0165-173
Figure 110128888-A0305-15-0166-174
Figure 110128888-A0305-15-0167-175
Figure 110128888-A0305-15-0168-176
Figure 110128888-A0305-15-0169-177
Figure 110128888-A0305-15-0170-178
Figure 110128888-A0305-15-0171-179
Figure 110128888-A0305-15-0172-180
Figure 110128888-A0305-15-0173-181
Figure 110128888-A0305-15-0174-183
Figure 110128888-A0305-15-0175-184
Figure 110128888-A0305-15-0176-185
Figure 110128888-A0305-15-0177-186
Figure 110128888-A0305-15-0178-187
Figure 110128888-A0305-15-0179-188
Figure 110128888-A0305-15-0180-189
Figure 110128888-A0305-15-0181-190
Figure 110128888-A0305-15-0182-191
Figure 110128888-A0305-15-0183-192
Figure 110128888-A0305-15-0184-193
Figure 110128888-A0305-15-0185-194
Figure 110128888-A0305-15-0186-195
Figure 110128888-A0305-15-0187-196
Figure 110128888-A0305-15-0188-197
Figure 110128888-A0305-15-0189-198
Figure 110128888-A0305-15-0190-199
Figure 110128888-A0305-15-0191-200
Figure 110128888-A0305-15-0192-201
Figure 110128888-A0305-15-0193-202
Figure 110128888-A0305-15-0194-204
Figure 110128888-A0305-15-0195-205
Figure 110128888-A0305-15-0196-206
Figure 110128888-A0305-15-0197-207
Figure 110128888-A0305-15-0198-208
Figure 110128888-A0305-15-0199-209
Figure 110128888-A0305-15-0200-210
Figure 110128888-A0305-15-0201-211
Figure 110128888-A0305-15-0202-212
Figure 110128888-A0305-15-0203-213
Figure 110128888-A0305-15-0204-214
Figure 110128888-A0305-15-0205-215
Figure 110128888-A0305-15-0206-216
Figure 110128888-A0305-15-0207-217
Figure 110128888-A0305-15-0208-218
Figure 110128888-A0305-15-0209-219
Figure 110128888-A0305-15-0210-220
Figure 110128888-A0305-15-0211-221
Figure 110128888-A0305-15-0212-222
Figure 110128888-A0305-15-0213-223
Figure 110128888-A0305-15-0214-224
Figure 110128888-A0305-15-0215-225
Figure 110128888-A0305-15-0216-226
Figure 110128888-A0305-15-0217-227
Figure 110128888-A0305-15-0218-228
Figure 110128888-A0305-15-0219-229
Figure 110128888-A0305-15-0220-230
Figure 110128888-A0305-15-0221-231
Figure 110128888-A0305-15-0222-232
Figure 110128888-A0305-15-0223-234
Figure 110128888-A0305-15-0224-235
Figure 110128888-A0305-15-0225-236
Figure 110128888-A0305-15-0226-237
Figure 110128888-A0305-15-0227-238
Figure 110128888-A0305-15-0228-239
Figure 110128888-A0305-15-0229-240
Figure 110128888-A0305-15-0230-241
Figure 110128888-A0305-15-0231-242
Figure 110128888-A0305-15-0232-243
Figure 110128888-A0305-15-0233-244
Figure 110128888-A0305-15-0234-245
Figure 110128888-A0305-15-0235-246
Figure 110128888-A0305-15-0236-247
Figure 110128888-A0305-15-0237-248
Figure 110128888-A0305-15-0238-249
Figure 110128888-A0305-15-0239-250
Figure 110128888-A0305-15-0240-251
Figure 110128888-A0305-15-0241-252
Figure 110128888-A0305-15-0242-253
Figure 110128888-A0305-15-0243-254
Figure 110128888-A0305-15-0244-255
Figure 110128888-A0305-15-0245-256
Figure 110128888-A0305-15-0246-257
Figure 110128888-A0305-15-0247-258
Figure 110128888-A0305-15-0248-259
Figure 110128888-A0305-15-0249-260
Figure 110128888-A0305-15-0250-261
Figure 110128888-A0305-15-0251-262
Figure 110128888-A0305-15-0252-263
Figure 110128888-A0305-15-0253-264
Figure 110128888-A0305-15-0254-265
Figure 110128888-A0305-15-0255-266
Figure 110128888-A0305-15-0256-267
Figure 110128888-A0305-15-0257-268
Figure 110128888-A0305-15-0258-269
Figure 110128888-A0305-15-0259-270
Figure 110128888-A0305-15-0260-271
Figure 110128888-A0305-15-0261-272
Figure 110128888-A0305-15-0262-273
Figure 110128888-A0305-15-0263-274
Figure 110128888-A0305-15-0264-275
Figure 110128888-A0305-15-0265-276
Figure 110128888-A0305-15-0266-277
Figure 110128888-A0305-15-0267-278
Figure 110128888-A0305-15-0268-280
Figure 110128888-A0305-15-0269-281
Figure 110128888-A0305-15-0270-282
Figure 110128888-A0305-15-0271-283
Figure 110128888-A0305-15-0272-284
Figure 110128888-A0305-15-0273-285
Figure 110128888-A0305-15-0274-286
Figure 110128888-A0305-15-0275-287
Figure 110128888-A0305-15-0276-288
Figure 110128888-A0305-15-0277-289
Figure 110128888-A0305-15-0278-290
Figure 110128888-A0305-15-0279-291
Figure 110128888-A0305-15-0280-292
Figure 110128888-A0305-15-0281-293
Figure 110128888-A0305-15-0282-294
Figure 110128888-A0305-15-0283-295
Figure 110128888-A0305-15-0284-296
Figure 110128888-A0305-15-0285-297
Figure 110128888-A0305-15-0286-298
Figure 110128888-A0305-15-0287-299
Figure 110128888-A0305-15-0288-300
Figure 110128888-A0305-15-0289-301
Figure 110128888-A0305-15-0290-302
Figure 110128888-A0305-15-0291-303
Figure 110128888-A0305-15-0292-304
Figure 110128888-A0305-15-0293-305
Figure 110128888-A0305-15-0294-306
Figure 110128888-A0305-15-0295-307
Figure 110128888-A0305-15-0296-308
Figure 110128888-A0305-15-0297-309
Figure 110128888-A0305-15-0298-310
Figure 110128888-A0305-15-0299-311
Figure 110128888-A0305-15-0300-312

Claims (13)

  1. 一種RNAi寡核苷酸，其包含與反義股形成雙鏈體區之有義股，其中： 該有義股為： 5’[mUs][mU][mG][mC][mC][mA][mA][fG][fC][fU][fU][mG][mG][mU][mC][mA][mU][mC] [mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] (SEQ ID NO:393)；及 該反義股為： 5’[MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fGs][fA][fU][mG][fA][mC][mC][fA][mA][mG][mC][fU] [mU][mG][mG][mC][mA][mAs][mGs][mG] (SEQ ID NO:793)， 其中： mUs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2′-O-甲基尿苷； mU表示2′-O-甲基尿苷； mG表示2′-O-甲基鳥苷； mC表示2'-O-甲基胞苷； mA表示2'-O-甲基腺苷； fG表示2'-F鳥苷； fC表示2'-F胞苷； fU表示2'-F尿苷； ademA-GalNAc 表示2′-胺基二乙氧基甲醇-鳥嘌呤-GalNAc； MePhosphonate-4O-mUs表示： ； fAs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2'-F 腺苷； fGs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2'-F 鳥苷； fA表示2'-F 腺苷； mAs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2′-O-甲基腺苷；及 mGs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2′-O-甲基鳥苷。
  2. 一種醫藥組合物，其包含RNAi寡核苷酸，其中該RNAi寡核苷酸包含有義股與反義股形成雙鏈體區之有義股，其中： 該有義股為： 5’[mUs][mU][mG][mC][mC][mA][mA][fG][fC][fU][fU][mG][mG][mU][mC][mA][mU][mC] [mU][mA][mG][mC][mA][mG][mC][mC][mG][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][ademA-GalNAc][mG][mG][mC][mU][mG][mC] (SEQ ID NO:393)；及 該反義股為： 5’[MePhosphonate-4O-mUs][fAs][fGs][fA][fU][mG][fA][mC][mC][fA][mA][mG][mC][fU] [mU][mG][mG][mC][mA][mAs][mGs][mG] (SEQ ID NO:793)， 其中： mUs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2′-O-甲基尿苷； mU表示2′-O-甲基尿苷； mG表示2′-O-甲基鳥苷； mC表示2'-O-甲基胞苷； mA表示2'-O-甲基腺苷； fG表示2'-F鳥苷； fC表示2'-F胞苷； fU表示2'-F尿苷； ademA-GalNAc 表示2′-胺基二乙氧基甲醇-鳥嘌呤-GalNAc； MePhosphonate-4O-mUs表示： ； fAs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2'-F 腺苷； fGs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2'-F 鳥苷； fA表示2'-F 腺苷； mAs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2′-O-甲基腺苷；及 mGs表示具有3'-硫代磷酸酯鍵聯之2′-O-甲基鳥苷。
  3. 如請求項2之醫藥組合物，其進一步包含適用於靜脈內投與之載劑。
  4. 如請求項3之醫藥組合物，其中該載劑包含水。
  5. 如請求項3之醫藥組合物，其中該載劑包含磷酸鹽緩衝鹽水。
  6. 一種如請求項1之RNAi寡核苷酸或如請求項2至5中任一項之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於減少個體中脂蛋白元(a) (LPA)基因表現之藥物。
  7. 如請求項6之用途，其中降低該 LPA基因表現包含降低LPA mRNA之量或水準、LPA蛋白之量或水準或二者均降低。
  8. 如請求項6或7之用途，其中該個體罹患心臟代謝疾病、動脈粥樣硬化、異常血脂症、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)或非酒精性肝炎(NASH)。
  9. 一種如請求項1之RNAi寡核苷酸或如請求項2至5之醫藥組合物之用途，其係用於製備用於治療罹患心臟代謝疾病、動脈粥樣硬化、異常血脂症、非酒精性脂肪肝病 (NAFLD)或非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)之個體的藥物。
  10. 如請求項6、7及9中任一項之用途，其中該RNAi寡核苷酸或該醫藥組合物與第二組合物或治療劑組合投與。
  11. 一種用於降低細胞或細胞群體中 LPA基因表現之體外方法，該方法包含使該細胞或該細胞群體與如請求項1之RNAi寡核苷酸或如請求項2至5中任一項之醫藥組合物接觸。
  12. 如請求項11之體外方法，其中降低該 LPA基因表現包含降低 LPAmRNA之量或水準、LPA蛋白之量或水準或二者均降低。
  13. 如請求項8之用途，其中該RNAi寡核苷酸或該醫藥組合物係與第二組合物或治療劑組合投與。
TW110128888A 2020-08-05 2021-08-05 抑制ｌｐａ表現之組合物及方法 TWI886314B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063061676P 2020-08-05 2020-08-05
US63/061,676 2020-08-05
US202063074779P 2020-09-04 2020-09-04
US63/074,779 2020-09-04

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202220673A TW202220673A (zh) 2022-06-01
TWI886314B true TWI886314B (zh) 2025-06-11

Family

ID=77519885

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110128888A TWI886314B (zh) 2020-08-05 2021-08-05 抑制ｌｐａ表現之組合物及方法

Country Status (12)

Country Link
US (2) US12435336B2 (zh)
EP (1) EP4192954A1 (zh)
JP (2) JP7476422B2 (zh)
KR (2) KR20250077604A (zh)
CN (1) CN116323943A (zh)
AU (1) AU2021320550A1 (zh)
BR (1) BR112023001957A2 (zh)
CA (1) CA3185348A1 (zh)
IL (1) IL300338A (zh)
MX (1) MX2023001538A (zh)
TW (1) TWI886314B (zh)
WO (1) WO2022032288A1 (zh)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20250077604A (ko) 2020-08-05 2025-05-30 다이서나 파마수이티컬, 인크. Lpa 발현을 저해하기 위한 조성물 및 방법
TW202340465A (zh) * 2021-12-16 2023-10-16 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司 靶向ｌｐａ的ｓｉｒｎａ及綴合物
CN114703184B (zh) * 2022-03-11 2024-06-18 厦门甘宝利生物医药有限公司 Lpa抑制剂及其用途
KR20250005108A (ko) * 2022-04-15 2025-01-09 다이서나 파마수이티컬, 인크. Scap 활성을 조절하기 위한 조성물 및 방법
CN120076811A (zh) * 2022-08-11 2025-05-30 靖因药业有限公司 用于抑制Lp(a)的表达的多核酸分子、药物组合物及其用途
CN115851723B (zh) * 2022-10-24 2023-10-03 厦门甘宝利生物医药有限公司 一种抑制lpa基因表达的rna抑制剂及其应用
EP4622983A1 (en) 2022-11-23 2025-10-01 Eli Lilly and Company Method of synthesizing 4'-phosphate analog nucleotide phosphoramidite
CN120265639A (zh) 2022-11-23 2025-07-04 伊莱利利公司 合成靶向配体缀合的核苷酸亚磷酰胺的方法
WO2024137622A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Eli Lilly And Company Oligonucleotide fragments and methods of making rnai agents using the same
KR20250130686A (ko) 2023-01-13 2025-09-02 일라이 릴리 앤드 캄파니 치료 올리고뉴클레오티드-함유 제약 조성물 및 그를 사용한 투여 요법
WO2024197065A2 (en) * 2023-03-20 2024-09-26 Verve Therapeutics, Inc. In vivo nickase-based editing of the lpa gene for treatment of cardiovascular disease
CN118685405A (zh) * 2023-06-20 2024-09-24 施能康医药科技(苏州)有限公司 靶向脂蛋白a的核酸及其用途
US20250215044A1 (en) 2023-09-21 2025-07-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and Methods for Inhibiting LPA
WO2025082058A1 (zh) * 2023-10-16 2025-04-24 润佳(上海)医药技术有限公司 一种抑制LPA基因表达的dsRNA及其用途
WO2025087442A1 (zh) * 2023-10-27 2025-05-01 北京安龙生物医药有限公司 靶向脂蛋白a的寡核苷酸及其用途
CN120020252A (zh) * 2023-11-17 2025-05-20 纳肽得(青岛)生物医药有限公司 抑制LPA表达的siRNA及其用途
WO2025117709A2 (en) * 2023-11-29 2025-06-05 Sanegene Bio Usa Inc. Small interfering rna targeting lp(a) and uses thereof
WO2025119212A1 (zh) * 2023-12-05 2025-06-12 广东东阳光药业股份有限公司 一种新型的双链siRNA、其缀合物及其用途
WO2025170868A1 (en) * 2024-02-05 2025-08-14 Sirius Therapeutics, Inc. Polynucleic acid molecules for inhibiting expression of lp(a) or apoc3, pharmaceutical compositions, and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017059223A2 (en) * 2015-10-01 2017-04-06 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression of lpa
WO2019092283A1 (en) * 2017-11-13 2019-05-16 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acids for inhibiting expression of lpa in a cell
WO2019118638A2 (en) * 2017-12-12 2019-06-20 Amgen Inc. Rnai constructs for inhibiting pnpla3 expression and methods of use thereof

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6469158B1 (en) 1992-05-14 2002-10-22 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Synthesis, deprotection, analysis and purification of RNA and ribozymes
US5804683A (en) 1992-05-14 1998-09-08 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Deprotection of RNA with alkylamine
US5977343A (en) 1992-05-14 1999-11-02 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Synthesis, deprotection, analysis and purification of RNA and ribozymes
ATE227342T1 (de) 1993-09-02 2002-11-15 Ribozyme Pharm Inc Enzymatische nukleiksaüre die nicht-nukleotide enthaltet
US5889136A (en) 1995-06-09 1999-03-30 The Regents Of The University Of Colorado Orthoester protecting groups in RNA synthesis
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
US6111086A (en) 1998-02-27 2000-08-29 Scaringe; Stephen A. Orthoester protecting groups
IL151928A0 (en) 2000-03-30 2003-04-10 Whitehead Biomedical Inst Rna sequence-specific mediators of rna interference
CZ302719B6 (cs) 2000-12-01 2011-09-21 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Izolovaná molekula dvouretezcové RNA, zpusob její výroby a její použití
US20050159378A1 (en) 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2002347981A1 (en) 2001-11-07 2003-05-19 Applera Corporation Universal nucleotides for nucleic acid analysis
US20070265220A1 (en) 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
WO2007030167A1 (en) 2005-09-02 2007-03-15 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules
DK2341943T3 (en) 2008-09-22 2019-02-25 Dicerna Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS AND METHODS OF SPECIFIC INHIBITION OF DSRNA REPRINT WITH MODIFICATIONS
WO2010039543A2 (en) 2008-09-23 2010-04-08 Traversa Therapeutics, Inc. Self delivering bio-labile phosphate protected pro-oligos for oligonucleotide based therapeutics and mediating rna interference
US20100249214A1 (en) 2009-02-11 2010-09-30 Dicerna Pharmaceuticals Multiplex dicer substrate rna interference molecules having joining sequences
EP2379083B1 (en) 2008-12-18 2017-08-16 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Extended dicer substrate agents and methods for the specific inhibition of gene expression
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
WO2011133871A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5'-end derivatives
BR112014009790A2 (pt) 2011-10-25 2018-05-15 Isis Pharmaceuticals Inc composto para modulação antisense da expressão de gccr, seu uso e composição
KR20150090917A (ko) 2012-12-06 2015-08-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 디술피드-차폐 전구약물 조성물 및 방법
EP3152308A4 (en) 2014-06-06 2017-12-27 Solstice Biologics, Ltd. Polynucleotide constructs having bioreversible and non-bioreversible groups
DK3234132T3 (da) 2014-12-15 2019-08-26 Dicerna Pharmaceuticals Inc Ligand-modificerede dobbeltstrengede nukleinsyrer
CN110072530A (zh) 2016-09-02 2019-07-30 迪克纳制药公司 4′-磷酸酯类似物和包含其的寡核苷酸
US20230078200A1 (en) 2019-12-09 2023-03-16 Amgen Inc. RNAi CONSTRUCTS AND METHODS FOR INHIBITING LPA EXPRESSION
KR20250077604A (ko) 2020-08-05 2025-05-30 다이서나 파마수이티컬, 인크. Lpa 발현을 저해하기 위한 조성물 및 방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017059223A2 (en) * 2015-10-01 2017-04-06 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression of lpa
WO2019092283A1 (en) * 2017-11-13 2019-05-16 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acids for inhibiting expression of lpa in a cell
WO2019118638A2 (en) * 2017-12-12 2019-06-20 Amgen Inc. Rnai constructs for inhibiting pnpla3 expression and methods of use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
期刊 Yu, Rosie Z et al. Disposition and Pharmacokinetics of a GalNAc3-Conjugated Antisense Oligonucleotide Targeting Human Lipoprotein (a) in Monkeys. Nucleic acid therapeutics vol. 26 Mary Ann Liebert, Inc. 2016 372-380 *

Also Published As

Publication number Publication date
IL300338A (en) 2023-04-01
US12252691B2 (en) 2025-03-18
US12435336B2 (en) 2025-10-07
MX2023001538A (es) 2023-03-08
KR20250077604A (ko) 2025-05-30
US20240344063A1 (en) 2024-10-17
KR102812602B1 (ko) 2025-05-28
JP7476422B2 (ja) 2024-04-30
AU2021320550A1 (en) 2023-02-16
WO2022032288A1 (en) 2022-02-10
CN116323943A (zh) 2023-06-23
BR112023001957A2 (pt) 2023-04-25
EP4192954A1 (en) 2023-06-14
JP2023536974A (ja) 2023-08-30
KR20230043912A (ko) 2023-03-31
US20240401053A1 (en) 2024-12-05
CA3185348A1 (en) 2022-02-10
JP2024081668A (ja) 2024-06-18
TW202220673A (zh) 2022-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI886314B (zh) 抑制ｌｐａ表現之組合物及方法
TWI870563B (zh) 用於抑制angptl3表現之組合物及方法
US20250092403A1 (en) Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk)
TWI857290B (zh) 用於調節ｐｎｐｌａ３表現之組合物及方法
TWI868755B (zh) 抑制跨膜絲胺酸蛋白酶６（ｔｍｐｒｓｓ６）表現的組成物及方法
US20230374522A1 (en) Compositions and methods for modulating scap activity
TW202530410A (zh) 用於抑制angptl3表現之組合物及方法
TW202330920A (zh) 用於調節ａｐｏｃ３表現之組合物及方法
EA050095B1 (ru) Композиции и способы ингибирования экспрессии angptl3
EA047953B1 (ru) Композиции для ингибирования экспрессии lpa и способы на их основе