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WO1992005433A1 - Colonnes capillaires presentant une charge positive permanente utilisees en electrophorese capillaire - Google Patents

Colonnes capillaires presentant une charge positive permanente utilisees en electrophorese capillaire Download PDF

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Publication number
WO1992005433A1
WO1992005433A1 PCT/FR1991/000734 FR9100734W WO9205433A1 WO 1992005433 A1 WO1992005433 A1 WO 1992005433A1 FR 9100734 W FR9100734 W FR 9100734W WO 9205433 A1 WO9205433 A1 WO 9205433A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
capillary column
positive charge
polymeric
capillary
quaternary ammonium
Prior art date
Application number
PCT/FR1991/000734
Other languages
English (en)
Inventor
Robert Kerr
Louis Jung
Original Assignee
Robert Kerr
Louis Jung
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Robert Kerr, Louis Jung filed Critical Robert Kerr
Publication of WO1992005433A1 publication Critical patent/WO1992005433A1/fr

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Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44752—Controlling the zeta potential, e.g. by wall coatings

Definitions

  • the subject of the present invention is the preparation and / or the use of capillary columns having a permanent positive charge used in capillary electrophoresis making it possible to separate negatively charged, positively charged compounds or neutral compounds for analytical purposes or for the preparation of compounds pure.
  • This permanent positive charge is fixed inside the capillary column by a covalent bond.
  • This covalent bond results from the combination between the wall of the capillary column and a polymeric or non-polymeric compound of bifunctional structure, one of the functions having a permanent positive charge of quaternary ammonium nature, the other function being a very reactive group. reacting with the hydroxyls of the column or with the inner wall of the chemically modified capillary column.
  • the acrylate-based columns lead to ionic bonds with the cations and strong adsorption.
  • the capillary columns of this invention are of two types; type 1 has a siloxane - Si-O-Si- covalent bond, type 2 has a silicon-carbon covalent bond --Si-
  • the active group at the surface is a quaternary tetraalkyl ammonium salt.
  • the advantages of type 1 and type 2 columns are: relatively easy column handling; the surface created inside the column has great resistance to caustic solutions as well as to mineral acids. No adsorption of any chemical is observed. The electroosmosis flow rate is very high depending on the conditions, and the analysis time is very short.
  • the object of the invention is to have several types of capillary columns usable in capillary electrophoresis whose structure is identical for all: these capillary columns having a permanent positive charge fixed to the interior surface of the capillary column on a chain organic linked by a covalent bond.
  • the capillary column is made of glass or quartz or fused silica or a polymer derivative or similar materials; it is used in capillary electrophoresis.
  • This capillary column has a permanent positive charge, in the form of quaternary ammonium, fixed to the interior surface by a covalent bond, resulting from the combination between the wall of the capillary column and a polymeric or non-polymeric compound of bifunctional structure, l one of the functions having a permanent positive charge of quaternary ammonium nature, the other function being intended to form the covalent bond with the wall of the capillary column, the covalent bond can be in the form of siloxane -Si-O-Si- resulting from the combination d '' a group consisting of a silicon atom and one, two or three halogen substituents, such as chlorine or bromine, or a group consisting of a silicon atom and one, two or three alkoxy or acyloxy substituents reacting with the hydroxyl groups
  • the covalent bond can also be in the form of a silicon-carbon bond -Si- - resulting from the combination at the level of the wall of the capillary column of a vinyl group and of silicon hydride -SiH groups previously formed by the transformation of silanol -SiOH into silicon halides -SiX, X being a halide of the chlorine or bromine type followed by a reduction in silicon hydride -SiH.
  • the capillary column having a permanent positive charge may be due to the combination between a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more quaternary ammonium salts and one or more alkoxysilanes, reacting with the internal wall of the capillary column and leading to fixation in the form of a covalent bond.
  • the capillary column having a permanent positive charge may also be due to the combination between a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more quaternary ammonium salts and one or more vinyl groups, reacting with the internal wall of the capillary column and leading to fixation in the form of a covalent bond.
  • the capillary column can also be due to the combination between a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more primary, secondary or tertiary amines and one or more alkoxysilanes, reacting with the internal wall of the capillary column and leading to fixation under form of covalent bond, the amines being transformed into quaternary ammonium by the action of alkyl halides either before fixation on the inner wall of the capillary column or in situ after fixation.
  • a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more primary, secondary or tertiary amines and one or more alkoxysilanes
  • the permanent positive charge may also be due to the combination between a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more primary, secondary or tertiary amines and one or more vinyl groups, reacting with the internal wall of the capillary column and leading to a fixation in the form of a covalent bond, the amines being transformed into quaternary ammonium by action of alkyl halides either before attachment to the inner wall of the capillary column or in situ after attachment.
  • a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more primary, secondary or tertiary amines and one or more vinyl groups
  • the permanent positive charge may also be due to the combination of a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more nitrile groups and one or more alkoxysilane groups, reacting with the internal wall of the capillary column and leading to fixation in the form of covalent bond, the nitrile groups being transformed into quaternary ammonium by reduction of the nitrile into primary amine, itself transformed into quaternary ammonium by reaction of alkyl halides either before the fixation on the interior wall of the capillary column or in situ after fixation.
  • a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more nitrile groups and one or more alkoxysilane groups
  • the capillary column exhibiting this permanent positive charge may also be due to the combination between a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more nitrile groups and one or more halosilane groups, for which the halogen atom may be chlorine or bromine reacting with the interior wall of the capillary column and leading to a fixation in the form of a covalent bond, the nitrile groups being transformed into quaternary ammonium by reduction of the nitrile into primary amine, itself transformed into quaternary ammonium by reaction of halides alkyl either before attachment to the inner wall of the capillary column or in situ after attachment.
  • the halogen atom may be chlorine or bromine reacting with the interior wall of the capillary column and leading to a fixation in the form of a covalent bond
  • the nitrile groups being transformed into quaternary ammonium by reduction of the nitrile into primary amine, itself transformed into quaternary ammonium by reaction of halides alkyl
  • the permanent positive charge may also be due to the combination between a polymeric or non-polymeric bifunctional substance comprising one or more epoxy groups and one or more alkoxysilane groups, reacting with the internal wall of the capillary column and leading to fixation in the form of covalent bond, the epoxy groups being transformed into quaternary ammonium by reaction at first with a primary amine or a secondary amine leading to an amino alcohol transformed into quaternary ammonium by reaction of alkyl halides either before fixing on the wall inside of the capillary column is in situ after fixation.
  • the bifunctional substance comprising one or more quaternary ammonium salts and one or more alkoxysilanes is selected from the following compounds, n-octadecyldimethyl- [3- (tri-methoxysilyl) -propyl] ammonium chloride, n-tetradecyldimethyl chloride (3 -trimethoxy silylpropyl) ammonium, N- (trimethoxysilyloctyl) trimethyl- ammonium chloride, N- (3 -trimethoxypropyl-N-methyl-N, N-diallylammonium chloride, N-trimethoxysilylpropyl-N, N, N-trimethylammonium chloride, N-trimethoxysilylpropyl-tri-n-butyl-ammonium chloride, the preferred compound being N- (trimethoxysilyloctyl) t ⁇ imethylammonium.
  • the bifunctional substance comprising one or more quaternary ammonium salts and one or more vinyl groups is selected from the following compounds, hexallyl-ethylenediammonium iodide, octallyl-diethylene-triammonium iodide, decallyl-triethylene iodide - tetrammonium, dodecallyl-tetraethylenepentammonium iodide, tetradecallyl-pentaethylenehexammonium iodide, the preferred compound being tetradecaallyl-pentaethylenehexammonium hexabromide
  • the bifunctional substance comprising one or more primary, secondary or tertiary amines and one or more alkoxysilanes is selected from the following compounds, 4-Aminobutyldimethylmethoxysilane, 4-Aminobutyltriethoxysilane, (aminoethylaminoethyl) phenethyltrimethoxysilane, N-2-aminoethyl) -3-aminopropyl N- (2-aminoethyl-3-aminopropyl) -trimethoxysilane, N- (2-aminoethyl-3-aminopropyl) -tris- (2-ethylhexoxy) silane,
  • the bifunctional substance comprising one or more primary, secondary or tertiary amines and one or more vinyls is selected from the following compounds, N-allyl-ethylenediamine, N, N-diallyl-ethylenediamine, N, N, N-triallyl-ethylenediamine, N , N, N, N tetrallylethylenediamine, N-allyldiethylenetriamine, N, N-diallyldiethylenetriamine, N, N, N-triallyldiethylenetriamine, N, N, N, N-tetrallyldiethylenetriamine, N, N, N, N, N-pental lyldiethylenetriamine, N, N, N, N, N , N-hexallyldiethylenetriamine, N, N, N, N, N, N-hexallyl-pentaethylenehexamine, the preferred compound being N, N, N, N, N, N-hexallylpentaethylenehexamine.
  • the bifunctional substance comprising one or more nitrile groups and one or more alkoxysilanes is selected from the following compounds, 3- (cyanoethoxy) -3, 3-dimethyl- 1-propenyltrimethoxysilane, 2-cyanoethyltriethoxysilane, 2-cyanoethyltrimethoxysilane, (cyanomethylphenyl) trimethoxysilane, 3-cyanopropyldimethylmethoxylsilane,
  • the bifunctional substance comprising one or more nitrile groups and one or more halosilanes is selected from the following compounds, (3-cyanobutyl) trichlorosilane, 2-cyanoethylmethyldichlorosilane, 2-cyanoethyltrichlorosilane, 3-cyanopropyldimethylchlorosilane,
  • the bifunctional substance comprising one or more epoxy groups and one or more alkoxysilane groups is selected from the following compounds, (3-glycidoxypropyl) bis (trimethylsiloxy) methylsilane, 3-glycidoxypropyldimethylethoxysilane, (3-glycidoxypropyl) methyldiethoxysilane, 3-glycidoxyisylane, 3-glycidoxypropylene -glycidoxypropyl) trimethoxysilane, the preferred compound being 3-glycidoxypropyldimethylethoxysilane.
  • Method B involving a bifunctional substance comprising an amines-alkoxysilanes group.
  • Additional treatment with an aqueous 0.1M camphosulfonic acid solution can be carried out in order to obtain a counterion. Thanks to this preparation of the column, several hundred electrophoretic analyzes were carried out.
  • Additional treatment with an aqueous 0.1 M camphosulfonic acid solution can be carried out in order to obtain a counterion. Thanks to this preparation, several hundred electrophoretic analyzes can be carried out.
  • Figure 4 Mount the cassette containing the capillary column of untreated fused silica on the capillary electrophoresis device. Connect the device to ensure rinsing of the column with 0.1M hydrochloric acid. Rinsing is ensured for 15 minutes. Rinse again with distilled water for 10 minutes and then with 0.1M sodium hydroxide for 10 minutes. Then rinse for 10 minutes with distilled water. Pass a 25% (v / v) aqueous solution of 3-cyanopropyldimethylmethoxysilane through the column. Rinse again with distilled water.
  • Additional treatment with an aqueous 0.1M camphosulfonic acid solution can be carried out in order to obtain a counterion. Thanks to this preparation, several hundred electrophoretic analyzes can be carried out.
  • FIG. 6 A separation of the various acid substances of multiple charges produced with one of the columns treated is presented in FIG. 6.
  • the separated substances are shown in Figure 6. It should be noted that all of these compounds cannot in any case be separated simultaneously with an otherwise treated or untreated column. Above all, the set of acids with multiple charges such as sulfo-5-salicylic acid, trimesic acid, phthalic acid, isophthalic acid, 5-hydroxy isophthalic acid, and amino acid. 5 isophthalic cannot be separated from the other acids, which have only one group loaded during the same test, when using another type of column.
  • Figure 1 Method A involving a bifunctional substance comprising a quaternary ammonium-alkoxysilane group
  • Figure 2 Method B involving a bifunctional substance comprising an amines-alkoxysilane group

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Abstract

Les parois intérieures de tubes capillaires ayant de fines parois, ainsi qu'un petit diamètre sont recouvertes d'un revêtement présentant une charge positive permanente utilisée en électrophorèse capillaire et préparé par une réaction chimique entre la surface intérieure du tube capillaire et une substance bifonctionnelle. Le premier groupement chimique d'une substance bifonctionnelle est capable de former une liaison convalente avec la surface intérieure des parois du tube capillaire; le deuxième groupement contient une ou plusieurs charges positives qui sont stables et permanentes et qui peuvent être sous forme d'ammonium quaternaire. La charge positive, permanente et stable, dans le revêtement de la surface intérieure du tube capillaire a deux effets; il inverse la direction du débit électro-osmose en même temps qu'il augmente sa valeur par rapport aux tubes capillaires non traités ou aux revêtements non chargés ou chargés négativement. La présence de ce revêtement permet la séparation simultanée de plusieurs substances chimiques qui ne peuvent pas être réalisées autrement. D'autre part, il permet une réduction substantielle de l'adsorption des substances aux parois intérieures du tube capillaire par un mécanisme différent aux autres types de revêtements qui permettent une amélioration des caractéristiques de séparation.

Description

Colonnes capillaires présentant une charge positive permanente utilisées en electrophorèse capillaire.
La présente invention a pour objet la préparation et/ou l'emploi de colonnes capillaires présentant une charge positive permanente utilisées en electrophorèse capillaire permettant de séparer des composés chargés négativement, chargés positivement ou des composés neutres dans un but analytique ou pour la préparation de composés purs. Cette charge positive permanente est fixée à l'intérieur de la colonne capillaire par une liaison covalente. Cette liaison covalente résulte de la combinaison entre la paroi de la colonne capillaire et un composé polymérique ou non-polymérique de structure bifonctionnelle, l'une des fonction présentant une charge positive permanente de nature ammonium quaternaire, l'autre fonction étant un groupement très réactif réagissant avec les hydroxyles de la colonne ou avec la paroi intérieure de la colonne capillaire modifiée chimiquement.
Actuellement les colonnes capillaires utilisées dans l'électrophorèse capillaire sont de plusieur types. Les colonnes en Silice fondue non traités présentant des groupements actifs au niveau de surface du type silanols (-SiOH), silyl éthers (-Si-O-Si-). Les désavantages sont nombreux. Des nombreuses classes chimiques ne peuvent pas être séparées convenablement. L'analyse peut être réalisée seulement si le composé à analyser est neutre ou possède une charge négative faible. Les cations principalement les aminés sont adsorbés à la surface et ne peuvent être analysés, uniquement dans des conditions spéciales. Le débit d'élεctroosmose est trop élevé pour la réalisation de focalisation isoélectrique. Le débit d'électroosmose est trop faible et ne permet pas l'analyse des anions possédant des charges multiples. Beaucoup d'interactions entre les parois de la colonne et les électrolytes sont observées.
Les colonnes traitées du type acrylamides présentent les desavantages suivants : la détérioration de la couche acrylamide est possible en dehors de la gamme de pH de 2 à 7,5. Les acrylamides sont instables en présence d'une tension très élevée. La forte inhibition de débit électroosmose entraine un temps d'analyse très long de l'ordre de 30 à 90 minutes.
Les colonnes à base d'acrylates conduisent à des liaisons ioniques avec les cations et une forte adsorption.
Les colonnes à base de poly(éthylènenéimine) conduisent également à de fortes adsoprtions.
Les colonnes capillaires de cette invention sont de deux types ; le type 1 présente une liaison covalente siloxane - Si-O-Si-, le type 2 présente une liaison covalente silicium-carbone -Si-
Figure imgf000004_0001
Le groupement actif au niveau de la surface est un sel de tétraalkyl ammonium quaternaire. Les avantages des colonnes de type 1 et de type 2 sont : un traitement des colonnes relativement facile à réaliser ; la surface créée à l'intérieur de la colonne possède une grande résistance aux solutions caustiques aussi bien qu'aux acides minéraux. Aucune adsorption de n'importe quelle substance chimique n'est observée. Le débit de l'électroosmose très élevé suivant les conditions, et le temps d'analyse est très court.
Toute substance chimique et quelque soit la nature de la charge peut être analysée : les anions à charges multiples, à charge fractionelle peuvent être analysés. Les avantages des colonnes du type 2 sont identiques aux précédentes.
De ce fait le but de l'invention est de disposer de plusieurs types de colonnes capillaires utilisables en electrophorèse capillaire dont la structure est identique pour toutes : ces colonnes capillaires présentant une charge positive permanente fixée à la surface intérieure de la colonne capillaire sur une chaine organique liée par une liaison covalente.
La colonne capillaire est en verre ou en quartz ou en silice fondue ou en dérivé polymérique ou en matériaux similaires ; elle est utilisée en electrophorèse capillaire. Cette colonne capillaire présente une charge positive permanente, sous forme d'ammonium quaternaire, fixée à la surface intérieure par une liaison covalente, résultant de la combinaison entre la paroi de la colonne capillaire et un composé polymérique ou non-polymérique de structure bifonctionnelle, l'une des fonctions présentant une charge positive permanente de nature ammonium quaternaire, l'autre fonction étant destinée à former la liaison covalente avec la paroi de la colonne capillaire, la liaison covalente peut être sous forme de siloxane -Si-O-Si- résultant de la combinaison d'un groupement constituée d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants halogènes, tel le chlore ou le brome, soit d'un groupement constitué d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants alkoxy ou acyloxy réagissant avec les groupements hydroxyles de la surface intérieure du capillaire. La liaison covalente peut aussi être sous forme de liaison silicium-carbone -Si-
Figure imgf000005_0001
- résultant de la combinaison au niveau de la paroi de la colonne capillaire d'un groupement vinylique et de groupements d'hydrure de silicium -SiH préalablement formés par la transformation de silanol -SiOH en halogénures de silicium -SiX, X étant un halogénure du type chlore ou brome suivies d'une réduction en hydrure de silicium -SiH.
La colonne capillaire présentant une charge positive permanente peut être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente.
La colonne capillaire présentant une charge positive permanente peut aussi être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs groupes vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente.
La colonne capillaire peut aussi être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les aminés étant transformées en ammonium quaternaire par action d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La charge positive permanente peut aussi être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs groupes vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les aminés étant transformées en ammonium quaternaire par action d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La charge positive permanente peut également être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant transformés en ammonium quaternaire par réduction du nitrile en aminé primaire, elle-même transformée en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La colonne capillaire présentant cette charge positive permanente peut encore être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes halosilanes, pour lequel l'atome d'halogène peut être le chlore ou le brome réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant transformés en ammonium quaternaire par réduction du nitrile en aminé primaire, elle-même transformée en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La charge positive permanente peut encore être due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes époxy et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes époxy étant transformés en ammonium quaternaire par réaction dans un premier temps avec une aminé primaire ou une aminé secondaire conduisant à un amino-alcool transformé en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
La substance bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, chlorure de n-octadecyldiméthyl-[3-(tri-méthoxysilyl)- propyl]ammonium, chlorure de n-tétradecyldimethyl(3-triméthoxy silylpropyl)ammonium, chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl)triméthyl- ammonium , chlorure de N-(3 -triméthoxypropyl-N-méthyl-N , N-diallylammonium, chlorure de N-triméthoxysilylpropyl-N,N, N-triméthylammonium, chlorure de N-triméthoxysilylpropyl-tri-n-butyl- ammonium, le composé préférentiel étant le chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl)tτiméthylammonium.
La substance bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs groupes vinyliques est sélectionnée parmi les composés suivants, l'iodure de hexallyl-éthylènediammonium, l'iodure de octallyl-diethylene-triammonium, l'iodure de decallyl-triéthylène- tétrammonium, l'iodure de dodécallyl-tétraéthylènepentammonium, l'iodure de tétradécallyl-pentaéthylènehexammonium, le composé préférentiel étant le hexabromure de tétradecaallyl-pentaéthylènehexammonium
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieures aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, 4-Aminobutyldiméthylméthoxysilane,4-Aminobutyltriéthoxysilane, (aminoéthylaminoéthyl) phenethyltriméthoxysilane, N-2-aminoéthyl)-3-aminopropylmé thyldiméthoxysilane,N-(2-aminoethyl-3-aminopropyl)-triméthoxysilane, N-(2-aminoethyl-3-aminopropyl)-tris-(2-éthylhexoxy) silane,
N-(2-aminohexyl-3-aminopropyl) triméthoxysilane, 4-aminophényltrimétho xysilane, 3-(1-aminopropoxy)-3,3-diméthyl-1-propényltriméthoxysilane,3- aminopropyl-tris (methoxyethoxyethoxy) silane, 3-aminopropyl-diméthyleth oxysilane,3-aminopropylméthyldiéthoxysilane, 3-aminopropyltriéthoxysilane,3-aminopropyltriméthoxysilane,3-aminopropyltris (tτiméthylsilyloxy) silane, J-aminoundecyltriméthoxysilane,3-[2-N-benzylaminoethylamino propyl]trimethoxysilane,Bis-(2-hydroxyethyl)-3-aminopropyltriethoxysila ne, Bis[3-(triéthoxysilyl)propyl]amine, Bis[3-(triméthoxysilyl) propyl] éthylenediamine, (cyclohexylaminométhyl) méthyldiéthoxysilane,
(cyclohexylaminométhyl) diméthyléthoxysilane, (N,N-diéthyl-3-amino- propyl) trimethoxysilane, dimethylméthoxysilylpropyldiéthylènetriamine, diméthylméthoxysilylpropylpentaéthylènehexamine, N-méthylamino- propyltriméthoxysilane, méthyl [2-(3-triméthoxysilylpropylarnino) éthylamino]-3-propionate,N-phénylaminopropyltriméthoxysilane, 3-(N-styryl méthyl-2-aminoéthylamino) propyltriméthoxysilane, N-([3-(triéthoxysilyI) propyl]-2,4-dintrophénylamine, N-[3-(triéthoxysilyl) propyl]-4,5-dihydroimi dazole, triméthoxysilylpropyldiéthylènetriamine, N-(3-triméthoxysilyl propyl) pyrrole, le composé préférentiel étant le diméthylméthoxysilylpro- pylpentaéthylènehéxamine.
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieures aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs vinyliques est sélectionnée parmi les composés suivants, N-allyl-éthylènediamine, N,N-diallyl-éthylènediamine,N,N,N-triallyl-éthylènediamine,N,N,N,N tétrallyléthylènediamine, N-allyldiéthylènetriamine,N,N-diallyldiéthylènetriamine,N,N,N-triallyldiéthylènetriamine, N,N,N,N-tétrallyldiéthylènetriamine, N,N,N,N,N-pental lyldiéthylènetriamine, N,N,N,N,N,N-hexallyldiéthylènetriamine, N,N,N,N,N,N- hexallyl-pentaéthylènehexamine, le composé préférentiel étant le N,N,N,N,N,N-hexallylpentaéthylènehexamine.
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, 3-(cyanoéthoxy)-3 ,3-dimethyl- 1-propényltriméthoxysilane, 2-cyanoéthyltriéthoxysilane, 2-cyanoéthyltriméthoxysilane, (cyanométhyl- phènethyl) triméthoxysilane, 3-cyanopropyldiméthylméthoxylsilane,
3-cyanopropyltriéthoxysilane le composé préférentiel étant le bromure de
3-cyanopropyldiméthylméthoxysilane
La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs halosilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, (3-cyanobutyl) trichlorosilane, 2-cyanoéthylméthyldichlorosilane, 2-cyanoéthyltrichlorosilane, 3-cyanopropyldimethylchlorosilane,
3-cyanopropylmethyldichlorosilane, 3-cyanopropyltrichlorosilane, le composé préférentiel étant le 3-cyanopropyldiméthylchlorosilane dérivés. La substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes époxy et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, (3-glycidoxypropyl) bis (triméthylsiloxy) méthylsilane, 3-glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane, (3-glycidoxypropyl) méthyldiéthoxysilane, 3-glycidoxypropylméthyldiisopropenoxysilane, (3-glycidoxypropyl) triméthoxysilane, le composé préférentiel étant le 3-glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane.
Préparation de la Colonne Capillaire
L'ensemble de ces traitements concerne la face intérieure des colonnes capillaires.
Méthode A mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement ammonium quaternaire-alkoxysilanes. figure 1
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par de l'acide chlorhydrique 0.1M. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes. Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution aqueuse à 25% (v/v) de chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl) triméthylammonium. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique 0,1M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion. Méthode B mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement amines-alkoxysilanes.figure 2
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par de l'acide chlorhydrique 0,1M. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes. Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution aqueuse à 25% (v/v) de diméthylméthoxysilylpropylpentaéthylènehéxamine. Rincer à nouveau par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution méthanoiique à 25% (v/v) d'iodure de méthyle durant une période de l'ordre de 10 minutes. Ensuite laver la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique à 0,1M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion. Grâce à cette préparation de la colonne, plusieurs centaines d'analyses électrophorétiques ont été réalisées.
Méthode C mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement époxy-alkoxysilanes figure 3
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par l'acide chlorhydrique 0,1M. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes. Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solu.tion aqueuse à 25% (v/v) de 3-glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane. Rincer à nouveau par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution de tetrahydrofurane à 25% (v/v) de diéthylènetriamine durant environ de 30 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée suivie par un rinçage par du méthanol. Faire passer à travers la colonne une solution méthanoiique à 25% (v/v) de l'iodure de méthyle durant environ 10 minutes. Laver ensuite la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée pendant 10 minutes.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique à 0,1 M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion. Grâce à cette préparation, plu sieurs centaines d'analyses électrophorétiques peuvent être réalisées.
Méthode D mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement nitriles-alkoxysilanes figure 4 Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par l'acide chlorhydrique 0,1M. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes. Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution aqueuse à 25% (v/v) de 3-cyanopropyldiméthylméthoxysilane. Rincer à nouveau par de l'eau distillée. Faire passer à travers la colonne une solution de tétrahydrofurane anhydre à 1% (P/v) d'hydrure de lithium aluminium de durant environ 60 minutes. Ringer ensuite par une solution de tétrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée pendant 5 minutes suivie par un rinçage par du méthanol pendant 10 minutes. Faire passer à travers la colonne une solution méthanoiique à 25% (v/v) de l'iodure de méthyle durant environ 10 minutes. Laver ensuite la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
Un traitement supplémentaire par une solution aqueuse d'acide camphosulfonique à 0,1M peut être réalisé afin d'obtenir un contre-ion. Grâce à cette préparation, plusieurs centaines d'analyses électrophorétiques peuvent être réalisées.
Méthode E mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement ammonium quaternaire vinylique figure 5
Monter la cassette qui contient la colonne capillaire de silice fondue non-traitée sur l'appareil d'électrophorèse capillaire. Brancher l'appareil afin d'assurer le rinçage de la colonne par l'acide chlorhydrique 0,1M. Le rinçage est assuré pendant 15 minutes. Rincer à nouveau par de l'eau distillée durant 10 minutes puis par de la soude 0,1M pendant 10 minutes. Rincer ensuite pendant 10 minutes par de l'eau distillée. Ringer à nouveau par une solution de tétrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ. Faire passer à travers la colonne la chlorure de thionyle pendant 2 à 3 heures. Rinβer ensuite par une solution de tétrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ. Faire passer à travers la colonne une solution de tétrahydrofurane anhydre à 1% (P/v) du hydrure de lithium aluminium durant environ 60 minutes. Ringer ensuite par une solution de tétrahydrofurane anhydre pendant 5 minutes environ. Faire passer une solution de isopropanol anhydre à 0,1 g% d'acide chloroplatinique et 10% de N-allyle-éthylènediamine pendant 1 heure. Ringer à nouveau par de l'isopropanol suivies par du méthanol pendant 10 minutes pour chacune. Faire passer à travers la colonne une solution méthanoiique à 25% (v/v) de l'iodure de méthvle de l'ordre de 10 minutes. Laver ensuite la colonne au moyen du méthanol pendant 5 minutes environ. Rincer à nouveau par de l'eau distillée.
RESULTATS
Grâce à ce type de préparation, plusieurs centaines d'analyses électrophorétiques ont été réalisées avec la même colonne.
Grâce a ce type de colonne nous avons pu séparer des substances chimiques de faible poids moléculaire et de structure chimique voisine.
Des substances présentes dans un sérum humain et dans les urines humaines ont pu être séparées sans interférences de la part des constituants normaux de sérum ou des urines.
Une séparation des divers substances acides de charges multiples réalisées avec l'un des colonnes traitées est présentée dans la figure 6 . Les substances séparées sont indiquées sur la figure 6 . Il faut remarquer que toutes ces composés ne peuvent pas être séparés simultanément dans aucun cas avec une colonne traitée autrement ou non-traitée. Surtout, l'ensemble des acide de charges multiples tel que l'acide sulfo-5-salicylique, l'acide trimesique, l'acide phthalique, l'acide isophthalique, l'acide hydroxy-5 isophthalique, et l'acide amino-5 isophthalique ne peuvent pas être séparés des autres acides, qui ne possèdent qu'un groupement chargé au cours du même essai, lors de l'emploi d'autre type de colonne .
Les conditions employés pour cette séparation sont marquées dans la figure 6.
D'autres acides ont été séparés du mélange acide oxalique, acide maléique, acide succinique, acide fumarique, acide citrique, acide D-tartarique. figure 7 Le exemple décrits ci-devant montrent les étendus de cette invention ; de nombreuses colonnes capillaires chargés positivement d'une manière permanente ont été réalisées et permettent cette excellente séparation indiquée ci-devant.
Figure imgf000012_0001
Revêtement final
Figure 1 : Méthode A mettant en jeu une substance bifonctionnelle comprenant un groupement ammonium quaternaire-alkoxysilane
Figure imgf000013_0001
Revêtement final
Figure 2 : Méthode B mettant en jeu une substance bifonctionelle comprenant un groupement amines-alkoxysilane
Figure imgf000014_0001
Revêtement final
Figure 3: Méthode C mettant en jeu une substance bifonctionelle comprenant un groupement époxy-alkoxysilane n
Figure imgf000015_0001
Revêtement final
Figure 4 : Méthode D mettant enjeu une substance bifonctionelle comprenant un groupement
nitrile-alkoxysilane
Figure imgf000016_0001
Revêtement Final
Figure 5 : Méthode E mettant en jeu une substance bifonctionelle comprenant un groupement amine-vinylique Identification des Pics
1. l 'acide sulfo-5 salicylique 2. l 'acide salicylique
3. l 'acide trimesique
4. l 'acide toluene-4 sulfonique 5. l 'acide nitro-5 isophthalique
Dimensions de la Colonne 6. l 'acide phthalique
7. l 'acide nitro-2 benzoique
75 μm ID x 365 μm OD x 67 cm 8. l 'acide isophthalique
9. l 'acide nitro-3 benzoique
Tampon 10. l 'acide hydroxy-5 isophthaylique
11. l 'acide amino-5 isophthaylique
95 mM de l'acide acétique 12. l 'acide amino-4 salicylique
50 mM de la sel sodique de acide acétique 13. l 'acide benzoique
dans l'eau 14. l 'acide anthracene-9 carboxylique
15. l 'acide nitro-4 phenylacetique
Autres Conditions 16. l 'acide naphthalene-2 acetique
17. l 'acide hydroxy-4 benzoique
200 nm détection UV 18. l 'acide sulfanilique
Detector vers l'anode 19. l 'acide diméthoxy-3,4 benzolique 20KV 28 μa 20. l 'acide dihydroxy-2,3 benzolique Injection par pression 2 seconds 21. l 'acide amino-4 benzoique
Concentration des Pics
22.2 to 22.4 μg/ml
de chaque composé
Figure imgf000017_0001
Figure 6 : Electrophoregramme de diverses substances
acidiques Identification des Pics
1. l'acide oxalique
2. l'acide maleique
3. l'acide succinique
4. l'acide fumarique
5. l'acide citrique
6. l'acide tartarique-D
Concentration des Pics
222 to 244 μg/ml
de chaque composé
Dimensions de la Colonne
75 μm ID x 365 μm OD x 67 cm
Tampon
10 mM de l'acide trifluoroacétique 20 mM Sodium Trifiuoroacetate dans l'eau
Autres Conditions
200 nm détection UV
Detector vers l'anode
20KV 42 μa
Injection par pression 2 seconds
Figure imgf000018_0001
Figure 7 : Electrophoregramme de diverses substances acidiques

Claims

REVENDICATIONS
1 . Colonne capillaire en verre ou en quartz ou en silice fondue ou en dérivé polymérique ou en matériaux similaires, utilisée en electrophorèse capillaire, présentant une charge positive permanente, sous forme d'ammonium quaternaire, fixée à la surface intérieure par une liaison covalente, résultant de la combinaison entre la paroi de la colonne capillaire et un composé polymérique ou non-polymérique de structure bifonctionnelle, l'une des fonctions présentant une charge positive permanente de nature ammonium quaternaire, l'autre fonction étant destinée à former la liaison covalente avec la paroi de la colonne capillaire, en ce que la liaison covalente peut être sous forme de siloxane
-Si-O-Si- résultant de la combinaison d'un groupement constituée d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants halogènes, tel le chlore ou le brome, soit d'un groupement constitué d'un atome de silicium et d'un, de deux ou de trois substituants alkoxy ou acyloxy réagissant avec les groupements hydroxyles de la surface intérieure du capillaire, en ce que la liaison covalente peut être obtenu soit sous forme de liaison silicium-carbone -Si- résultant de la combinaison au niveau
Figure imgf000019_0001
de la paroi de la colonne capillaire d'un groupement vinylique et de groupements d'hydrure de silicium -SiH préalablement formés par la transformation de silanol -SiOH en halogénures de silicium -SiX, X étant un halogénure du type chlore ou brome suivies d'une réduction en hydrure de silicium -SiH.
2. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la revendication 1 due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non polymérique comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes. réagissant avec la paroi intérieure de la jolonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente.
3. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la revendication 1 due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs groupes vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente.
4. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la revendication 1 due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les aminés étant transformées en ammonium quaternaire par action d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
5. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la revendication 1 due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs groupes vinyliques, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les aminés étant transformées en ammonium quaternaire par action d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
6. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la revendication 1 due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant transformés en ammonium quaternaire par réduction du nitrile en aminé primaire, elle-même transformée en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
7 . Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la revendication 1 due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs groupes halosilanes, pour lequel l'atome d'halogène peut être le chlore ou le brome réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes nitriles étant transformés en ammonium quaternaire par réduction du nitrile en aminé primaire, elle-même transformée en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
8. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon la revendication 1 due à la combinaison entre une substance bifonctionnelle polymérique ou non-polymérique comprenant un ou plusieurs groupes époxy et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes, réagissant avec la paroi intérieure de la colonne capillaire et conduisant à une fixation sous forme de liaison covalente, les groupes époxy étant transformés en ammonium quaternaire par réaction dans un premier temps avec une aminé primaire ou une aminé secondaire conduisant à un amino-alcool transformé en ammonium quaternaire par réaction d'halogénures d'alkyle soit avant la fixation sur la paroi intérieure de la colonne capillaire soit in situ après fixation.
9. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 à 2 caratérisées en ce que la substance bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, chlorure de n-octadecyldiméthyl-[3-(triméthoxy- silyl)propyl] ammonium, chlorure de n-tétradecyldimethyl(3-triméthoxy silylpropyl) ammonium, chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl)
triméthylammonium, chlorure de N-(3-triméthoxypropyl-N-méthyl-N, N-diallylammonium, chlorure de N-triméthoxysilylpropyl-N,N,
N-triméthylammonium, chlorure de N-triméthoxysilylpropyl-tri-n- butylammonium, le composé préférentiel étant le chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl) triméthylammonium.
10 . Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 et 3 caratérisées en ce que la substance bifonctionnelle comprenant un ou plusieurs sels d'ammonium quaternaire et un ou plusieurs groupes vinyliques est sélectionnée parmi les composés suivants, l'iodure de hexallyl-éthylènediammonium, l'iodure de octallyl-diethylene- triammonium, l'iodure de decallyl-triéthylènetétrammoniu m, l'iodure de dodécallyl- tétraéthylènepentammoniumj'iodure de tétradécallyl- pentaéthylène- hexammonium, le composé préférentiel étant le hexabromure de tétradecaallyl-pentaéthylènehexammonium
11. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 et 4 caratérisées en ce que la substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieures aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, 4-Aminobutyldiméthylméthoxysilane,4-Aminobutyltriéthoxysilane,(aminoéthyl- aminoéthyl)phenethyltriméthoxysilane, N-2-aminoéthyl)-3-aminopropyl méthyldiméthoxysilane, N-(2-aminoethyl-3-aminopropyl)-triméthoxy- silane, N-(2-aminoethyl-3-aminopropyl)-tris-(2-éthylhexoxy)silane, N-(2-aminohexyl-3-aminopropyl) triméthoxysilane, 4-aminophényltrimet hoxysilane,3-(1-aminopropoxy)-3,3-diméthyl- 1-propényltriméthoxy- silane,3-aminopropyl-tris(methoxyethoxyethoxy)silane, 3-aminopropyl- dimethylethoxysilane,3-aminopropylméthyldiéthoxysilane, 3-aminopro- pyltriéthoxysilane, 3-aminopropyltriméthoxysilane, 3-aminopro- pyltris(triméthylsilyloxy)silane, J-aminoundecyltriméthoxysilane, 3-[2-N-benzylaminoethylaminopropyl]trimethoxysilane, Bis-(2-hydroxye thyl)-3-aminopropyltriethoxysilane, Bis[3-(triéthoxysilyl)propyl] aminé, Bis[3-(triméthoxysilyl)propyl]ethylenediamine, (cyclohexylaminométhyl) méthyldiéthoxysilane, (cyclohexylaminométhyl) diméthyléthoxysilane, (N,N-diéthyl-3-aminopropyl) trimethoxysilane, dimethylméthoxysilylprop yldiéthylènetriamine, diméthylméthoxysilylpropylpentaéthylènehexa- mine, N-méthylaminopropyltriméthoxysilane, methyl[2- (3-triméthoxy- silylpropylamino)éthylamino]-3-propionate, N-phénylaminopropyl- triméthoxysilane, 3-(N-styrylméthyl-2-aminoéthylamino) propyltri- méthoxysilane, N-([3-(triéthoxysilyl)propyl]-2,4-dintrophénylamine, N-[3-(triéthoxysilyl)propyl]-4,5-dihydroimidazole,triméthoxysilyl- propyldiéthylènetriamine, N-(3-triméthoxysilylpropyl) pyrrole, le composé préférentiel étant le diméthylméthoxysilylpropylpentaéthylènehéxamine
12. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 et 5 caratérisées en ce que la substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieures aminés primaires, secondaires ou tertiaires et un ou plusieurs vinyliques est sélectionnée parmi les composés suivants, N-allyl-éthylènediamine , N,N-diallyl-éthylènediamine,N,N,N-triallyl-éthylènediamine,N,N,
N,N-tétrallyléthylènediamine,N-allyldiéthylènetriamine,
N,N-diallyldiéthylènetriamine,N,N,N-triallyldiéthylènetriamine, N,N,N, N-tétrallyldiéthylènetriamine, N,N,N,N,N-pentallyldiéthylènetriamine, N,N,N,N,N,N-hexallyldiéthylènetriamine,N,N,N,N,N,N-hexallyl-pentaéthylènehexamine, le composé préférentiel étant le N,N,N,N,N,N-hexallylpentaéthylènehexamine.
13. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 et 6 caratérisées en ce que la substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, 3-(cyanoéthoxy)-3,3-dimethyl-1 -propényltriméthoxysilane,
2-cyanoéthyltriéthoxysilane, 2-cyanoéthyltriméthoxysilane, (cyano- méthylphènethyl) triméthoxysilane, 3-cyanopropyldiméthylméthoxy- silane, 3-cyanopropyltriéthoxysilane le composé préférentiel étant le
3-cyanopropyldiméthylméthoxysilane
14. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 et 7 caratérisées en ce que la substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes nitriles et un ou plusieurs halosilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, (3-cyanobutyl)trichlorosilane, 2-cyanoéthylméthyldichlorosilane, 2-cyanoéthyltrichlorosilane, 3-cyanopropyldimethylchlorosilane, 3-cyanopropylmethyldichlorosilane, 3-cyanopropyltrichlorosilane, le composé préférentiel étant le 3-cyanopropyldiméthylchlorosilane and related substances.
15. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 et 8 caratérisées en ce que la substance bifonctionnelle comprenant une ou plusieurs groupes époxy et un ou plusieurs groupes alkoxysilanes est sélectionnée parmi les composés suivants, (3-glycidoxypropyl)bis(triméthylsiloxy)
méthylsilane, 3-glycidoxypropyldiméthyléthoxysilane, (3-glycidoxypropyl) méthyldiéthoxysilane, 3-glycidoxypropylméthyldiisopropenoxysilane, (3-glycidoxypropyl) triméthoxysilane, le composé préférentiel étant le 3-glycidoxypropyldiméthylethoxysilane.
16. Colonne capillaire présentant une charge positive permanente selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, en ce que la préparation du revêtement intérieur de la colonne capillaire est réalisée selon les étapes suivantes : lavages successifs par l'acide chlorhydrique, par de l'eau, par de la soude, par de l'eau , puis traitement par la substance bifonctionnelle qui par exemple et d'une manière non limitative peut être le chlorure de N-(triméthoxysilyloctyl) triméthylammonium ; puis lavage à l'eau suivie éventuellement par un traitement par de l'acide camphosulfonique.
17. Colonnes capillaires selon l'une quelconque des revendications 1 à 16 caractérisées en ce qu'elles permettent de séparer des composés chargés négativement, chargés positivement ou des composés neutres dans un but analytique ou pour la préparation de composés purs.
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