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WO1994018944A1 - Compositions a usage pharmaceutique et cosmetique a base d'albumine vegetale, preparations contenant de telles compositions et procede de preparation - Google Patents

Compositions a usage pharmaceutique et cosmetique a base d'albumine vegetale, preparations contenant de telles compositions et procede de preparation Download PDF

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Publication number
WO1994018944A1
WO1994018944A1 PCT/FR1994/000195 FR9400195W WO9418944A1 WO 1994018944 A1 WO1994018944 A1 WO 1994018944A1 FR 9400195 W FR9400195 W FR 9400195W WO 9418944 A1 WO9418944 A1 WO 9418944A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
albumin
preparation
protein
seeds
cosmetic
Prior art date
Application number
PCT/FR1994/000195
Other languages
English (en)
Inventor
Eric Perrier
Roland Allard
Original Assignee
Coletica
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Coletica filed Critical Coletica
Priority to EP94907606A priority Critical patent/EP0686028A1/fr
Publication of WO1994018944A1 publication Critical patent/WO1994018944A1/fr

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/645—Proteins of vegetable origin; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • compositions for pharmaceutical and cosmetic use based on vegetable albumin preparations containing such compositions and preparation process •
  • the present invention relates to compositions for pharmaceutical and especially dermatological use, and cosmetic for topical application, containing as active ingredient alone, or in combination with at least one other active ingredient, albumin, preparations containing such compositions, which suitably formulated are intended for topical application, a process for making such preparations, as well as the use of said albumin to prepare the above compositions.
  • Albumin is a natural protein fraction defined as a fraction of soluble proteins, in their native state, in non-saline aqueous solution at pH between 4 and 7.
  • albumin means such a protein fraction particularly taken in the pure state or taken as a fraction enriched with soluble proteins in a mixture of other vegetable proteins, the soluble proteins then representing a content at least equal to 25% by dry weight of the total proteins.
  • albumin of animal origin and in particular that extracted from bovine or equine serum, has been used for a very long time because its properties, which are as follows, allow it to have many applications:
  • compositions comprising albumin of plant origin lead to cosmetic effects far superior to those obtained with albumin of animal origin.
  • vegetable albumin behaves in formulation like albumin of animal origin and in particular like that of bovine serum.
  • compositions containing vegetable albumin By an appropriate formulation of compositions containing vegetable albumin, according to the invention, it has been found that the spectrum of properties of vegetable albumin was at least as wide as that of bovine serum albumin, and that certain activities were strongly reinforced.
  • Plant albumin is generally a complex protein mixture, consisting of functional proteins found in seeds, and is a protein fraction defined according to the classification of OSBORNE (OSBORNE TB and CAMPBELL CF., J. Am Chem. Soc, 20, 348-362 (1898)). If vegetable proteins and in particular cereal proteins (wheat, barley, corn 7) are widely used in human food, as in bread-making and in other cooking food industries, their applications to other areas are less important.
  • OSBORNE OSBORNE TB and CAMPBELL CF.
  • compositions for dermatological or cosmetic use are described, in the form of an emulsion, comprising at least one active principle and, as emulsifying agent, a protein fraction of animal origin. or vegetable.
  • the protein fraction is completely extracted in this case, and used as such, as an emulsifier.
  • active principle is meant according to the invention that the substantially pure vegetable albumin, or any fraction enriched in said albumin, alone or in combination with another active principle, improves, in the short and long term, the state skin tissue.
  • the albumin contained in the compositions of the invention is obtained essentially from seeds chosen from seeds of legumes, oil seeds and cereal seeds.
  • the relative albumin content is even more important for the choice of the plant to be carried out.
  • albumin is directly extracted from seeds chosen from legume seeds, oil seeds and cereal seeds or it is obtained from protein extracts concentrated in plant albumin, having a content in total protein at least equal to 50%.
  • the concentrated protein extract is a protein isolate whose total protein content is between 70 and 98%.
  • the seeds are crushed and the main starch fractions are eliminated.
  • the protein extract is then purified and then dried, in order to facilitate the storage and handling of the intermediate products.
  • compositions are in the form of solutions, and in particular aqueous solutions, in which the albumin concentration is at least equal to 2.5% by dry weight.
  • compositions of the invention they are in solid form, and their dry matter represents a high proportion by weight, at least equal to 90%.
  • Another subject of the invention is a pharmaceutical, in particular dermatological, or cosmetic preparation incorporating a composition of the invention and a pharmaceutically or cosmetologically acceptable carrier, intended for topical application.
  • a preparation of the invention when formulated in an appropriate manner, can constitute either a care cream with an albumin content of between 0.05% and 5% of the dry weight of said preparation, or a lotion or a milk for the face and / or. for the body, with an albumin content of between 0.05% and 5% of the dry weight of the said preparation, i.e. a solution or serum with immediate skin tightening effect with an albumin content of between 5 and 30% of the dry weight of said preparation.
  • the present invention also relates to a process for preparing a pharmaceutical or cosmetic preparation, containing vegetable albumin, this process comprising the following steps:
  • the albumin is concentrated by ultrafiltration on a membrane, to a dry matter concentration of between 2 and 70% of the dry weight,
  • the vegetable albumin obtained, in aqueous solution, is incorporated into a pharmaceutically or cosmetologically acceptable support.
  • the albumin obtained is prepared in a stabilized form by the addition of stabilization auxiliaries, such as alcohols (methanol, ethanol, etc.), polyols, short-chain fatty acids or their salts (caprylate of sodium), sodium acetyltryptophan, then heating and filtration.
  • stabilization auxiliaries such as alcohols (methanol, ethanol, etc.), polyols, short-chain fatty acids or their salts (caprylate of sodium), sodium acetyltryptophan, then heating and filtration.
  • stabilization auxiliaries such as alcohols (methanol, ethanol, etc.), polyols, short-chain fatty acids or their salts (caprylate of sodium), sodium acetyltryptophan, then heating and filtration.
  • preservatives such as paraben derivatives, phenoxyethanol, or different types of glycol.
  • the concentrated albumin can be dried by any known non-denaturing drying process, but in particular by atomization at low temperature or by lyophilization, and this in order to facilitate the handling and storage of the albumin.
  • the albumin in solid form thus obtained is advantageously sterilized by ethylene oxide or by ⁇ or radiation.
  • the albumin in solid form is dissolved beforehand in a small volume of water or aqueous solution.
  • compositions of the invention can, when they are formulated in an appropriate manner, constitute pharmaceutical or cosmetic preparations and in particular preparations of the oil-in-water or water-in-oil emulsion type, lotions, serums.
  • the single FIGURE illustrates the cosmetic effects of a preparation of the invention, by representing the deformation curves obtained by aspiration of skins treated with a solution with skin tightening effect.
  • EXAMPLE 1 This example illustrates each of the stages of the preparation of a composition of the invention in solid form, from peas. 1) Preparation of the isolate from pea seeds
  • Pea (Pisum sativum) is essentially made up of soluble and insoluble fibers, starch rich in amylose and amylopectin, and proteins. After a first hulling step where the external fibers of the seed are removed mechanically, the grains are coarsely crushed and the starch, which constitutes the main compound, is removed mechanically by difference in density.
  • the minor fraction containing a significant protein content is purified a second time so as to almost completely eliminate the residual starch. It is then adjusted to a minimum protein content of 88% and is called pea protein isolate. It is also available commercially under this name.
  • albumin fraction represents approximately 13 to 14% of the total proteins of the two varieties of peas most commonly tested, ie Century and Trapper.
  • EXAMPLE 2 This example presents a variant of the preparation of an albumin-containing composition from pea isolate from Example 1.
  • a) Dissolving 10 kg of the pea isolate in an amount of demineralized water between 50 and 1000 liters with vigorous stirring. The greater the amount of water used, the more optimal the extraction.
  • HCI strong acid
  • H 2 SO 4 .J or weak sorbic acid, acetic acid, lactic acid, etc.
  • NaOH , KOH.J or weak sorbate, acetate or lactate of Na or K
  • EXAMPLE 3 This example illustrates the preparation of a composition of the invention in liquid form.
  • Example 1 or 2 The same operating protocol as in Example 1 or 2 is followed, but the product is not dried and it is stored in liquid form, and corresponds to a concentration of dry matter of between 2 and 70% but preferably close to 20%.
  • the product is then stabilized by the addition of stabilization aids, such as those mentioned above, and protected against any microbial attack by the addition of preservatives such as paraben derivatives, phenoxyethanol ... It can then be heated 10 hours at 60 ° C, then filtered again to be presented in liquid form, stable, without cloudiness.
  • EXAMPLE 4 This example illustrates another process for preparing a composition of the invention from a pea isolate. a) Dissolving 10 Kg of the pea isolate in 100 liters of demineralized water with vigorous stirring. b) Extraction of the proteins in phosphate buffer pH7, 1 M NaCl. c) Precipitation of the proteins by addition of ammonium sulfate at 70% saturation, and centrifugation with elimination of the supernatant. d) Redissolution of proteins in pH7 phosphate buffer, 0.2M NaCl. e) Dialysis against permuted water: the globulins precipitate. f) Centrifugation and recovery of the supernatant.
  • Patomization at low temperature or freeze-drying Sterilization by ethylene oxide or by beta or gamma radiation.
  • EXAMPLE 6 In the same way as in Example 3, the composition obtained in Examples 4 and 5 up to step g) is not dried and is stored in liquid form to correspond to a concentration of dry matter. between 2 and 70% but preferably close to 20%. The product is then stabilized by the addition of stabilization aids, and preservatives.
  • EXAMPLE 7 This example illustrates the preparation of compositions according to the invention, from soya.
  • the basic material used to extract albumin is a soy protein isolate (SAMPROSOY, SOUSSANA) titrating 92% by weight, protein, or a soy concentrate (PROTOSOL 550, SOUSSANA) titrating 75% by weight, protein.
  • the optimal extraction pH determined is close to 8.
  • albumin is carried out at a pH between 6 and 7, in order to be able to incorporate said albumin in most cosmetic preparations whose pHs are mainly between 5 and 7.
  • the extraction step makes it possible to collect a fraction having a concentration close to 10% of albumin.
  • the albumin fraction is pure, free of all traces of polysaccharides. Introduced at concentrations of between 0.05 and 30% in formulations of gels or emulsions, the albumin obtained gives homogeneous cosmetic preparations, with a very white appearance which is particularly advantageous in this field of applications.
  • EXAMPLE 8 This example illustrates the preparation of compositions according to the invention from rice.
  • CNP Protein Concentrate "CNP) grading 70-80% protein is used as the base material to extract albumin.
  • the amount of albumin extracted is very low when the extraction is carried out at a pH below 9.
  • rice albumin is preferably extracted at a pH at least equal to 9, then once purified, it can be advantageously incorporated into depilatory preparations whose pH is higher than that of most other cosmetic preparations.
  • EXAMPLE 9 This example illustrates the preparation of compositions according to the invention from lupine or faba bean.
  • the concentrate (50% protein) or the lupine or faba bean protein isolate are used as basic materials for the extraction of vegetable albumin.
  • the albumin fraction represents approximately 20% of the total proteins.
  • the albumin is extracted and then purified by one of the operating protocols described in examples 1 or 4 and their variants. This pH is not identical for all concentrates and isolates of lupine or faba beans, and must be adapted as appropriate.
  • the albumin thus extracted from lupine or faba beans has the same general characteristics as those of albumin extracted from peas.
  • the dry lyophilized extract is very hygroscopic, and has a characteristic color which ranges from a pale beige hue to a more intense yellow color.
  • EXAMPLE 10 This example presents the last step of the process of the invention to obtain cosmetic or pharmaceutical preparations.
  • the albumin fractions extracted from seeds of different plant species can easily be incorporated into all types of cosmetic or pharmaceutical formulations of the aqueous gel type, Oil in Water (O / W) or Water in Oil (W / O) emulsions, to obtain preparations according to the invention.
  • vegetable albumin is incorporated into the aqueous phase of the emulsions where it dissolves very easily. If the dry form is used, it is preferable to dissolve the albumin beforehand in a small amount of water, then add it at moderate temperature, preferably at the end of the formulation.
  • Aloe Vera gel (2/912800) Aloe Vera gel 2.00 Dragoco
  • the last formulation example illustrates a cosmetic preparation of the invention which, suitably formulated, constitutes a solution with skin tightening effect.
  • Ethyl diglycol Ethyl diglycol 10.00 a Caustic soda (10%) Caustic soda (10%) 0.10
  • bovine albumin in cosmetology consists in incorporating it in concentrations close to 5-10% (by dry weight), in ampoules of a few milliliters, sometimes called "burst vials".
  • concentrations close to 5-10% (by dry weight) in ampoules of a few milliliters, sometimes called "burst vials".
  • the use of such a serum generally makes it possible to obtain, for a few hours, a very marked tightening effect on the fine lines of the face.
  • an in vivo test was carried out on ten volunteers, in order to measure the elasticity of the skin after application of a cosmetic preparation containing 10% by dry weight of vegetable albumin or bovine albumin.
  • the elasticity of the human epidermis is evaluated in vivo on volunteers, by aspiration of a tiny area inside a sensor subjected to depression.
  • the following parameters of the deformation curve are used: elasticity, plasticity, extensibility, hysteresis, tone. After three aspirations, the following parameters of the deformation curve are used: skin fatigue, flexibility, extensibility, hysteresis, firmness.
  • Subjects 10 subjects aged 22 to 57 years, with various skin types, capable of following the given treatment indications.
  • the measurements are taken before the application and then 30 minutes, 2 hours, 4 hours and 6 hours after the application.
  • the sensor kept perfectly vertical by a guide is placed in contact with the skin and subjected to its own weight.
  • the vacuum exerted is fixed at 300 mbar for 2 seconds.
  • the rest interval between two aspirations is 1 second.
  • OA corresponds to the elastic and reversible part of the deformation.
  • AB represents the visco-elastic deformation of the skin. This deformation is not completely reversible.
  • OB corresponds to the total extensibility of the skin integrating elastic extensibilities and visco elastic.
  • BC corresponds to the restoring forces of the skin and can be translated by the term "tone".
  • OB - BC represents hysteresis or residual deformation.
  • O'D represents extensibility after three aspirations.
  • the BD value corresponds to the increase in extensibility under the effect of successive aspirations and represents the phenomenon of skin fatigue. The more important it is, the more the skin is sagged.
  • O'D represents the residual deformation after three pulls. Flexibility is determined from these two parameters.
  • the BC / OA ratio corresponds to the firmness, li is generally less than 1.
  • Comparisons of means obtained from a small number of subjects may not be statistically significant.
  • Type A subject
  • the total extensibility increases, the hysteresis decreases.
  • the skin is more elastic and more supple, reflecting a positive effect of the product.
  • This behavior corresponds to a "stiffness", to greater elasticity and tone.
  • the residual deformation is greater.
  • Table 2 shows the experimental strain values expressed in mm.
  • Table 3 presents the percentages of variation compared to the initial state.
  • AB bovine albumin
  • AV vegetable albumin
  • Vegetable albumin also causes a decrease in skin fatigue compared to To, which is positive because there is no sagging of the skin.
  • Bovine albumin causes a decrease in extensibility on the 1st run and hysteresis in the 3rd run, but skin fatigue increases.
  • the product is tensor by immediate effect but the skin relaxes during successive pulls.
  • bovine albumin has no significant activity on any of the parameters of the deformation curve.
  • Vegetable albumin only acts significantly on the extensibilities of the 1st and 3rd prints. The tightening effect is maintained since the skin is less stretchy.
  • bovine albumin acts only on flexibility by increasing it. There has been no more tightening effect since T30 min.
  • Vegetable albumin as well as 2 hours after application, only acts on the 1st and 3rd draw stretch. The skin is tight but the product does not act on the other parameters.
  • the film-forming effect of vegetable albumin was evaluated by drying a thin film of a 20% albumin solution in the open air or in an oven at 45 ° C; the results were compared with the films obtained from other vegetable proteins (soya, wheat. or animal proteins (collagen, bovine albumin.).
  • the film-forming capacities of vegetable albumin are, except collagen, superior or equal to all the other proteins tested.
  • the incorporation of very small amounts of vegetable albumin in the cosmetic preparations given in Example 7 makes it possible to obtain a very significant cosmetic effect, since it is still detectable when a concentration of vegetable albumin 0.1% is used.
  • vegetable albumin Used in the 0.5% tensor serum, vegetable albumin makes it possible to obtain a net tensor effect, and also makes it possible to obtain a "mirror effect" which can be used in formulations for preparing the skin with different stages of makeup.
  • vegetable albumin is a versatile ingredient which is very rich in various essential amino acids, and which can make it possible to bring to cosmetic preparations which contain it, an important tightening effect, as well as a very interesting stability and texture. .

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Abstract

Composition à usage pharmaceutique et notamment dermatologique, ou cosmétique, incorporant une fraction protéique qui comprend, à titre de principe actif seul ou en combinaison avec au moins un autre principe actif, de l'albumine, caractérisée en ce que l'albumine est d'origine végétale et se présente dans ladite composition sous la forme de protéines solubles dans leur état natif, en phase aqueuse non saline, à pH compris entre 4 et 7, la teneur en dites protéines solubles étant d'au moins 25 % en poids sec de la fraction protéique.

Description

Compositions à usage pharmaceutique et cosmétique à base d'albumine végétale, préparations contenant de telles compositions et procédé de préparation • La présente invention concerne des compositions à usage pharmaceutique et notamment dermatologique, et cosmétique pour application topique, contenant à titre de principe actif seul, ou en combinaison avec au moins un autre principe actif, de l'albumine, des préparations contenant de telles compositions, qui formulées de manière appropriée sont destinées à une application topique, un procédé pour fabriquer de telles préparations, ainsi que l'utilisation de ladite albumine pour préparer les compositions précitées.
L'albumine est une fraction protéique naturelle définie comme une fraction de protéines solubles, dans leur état natif, en solution aqueuse non saline à pH compris entre 4 et 7. Selon l'invention, on entend par "albumine" une telle fraction protéique particulièrement prise à l'état pur ou encore, prise à l'état de fraction enrichie en protéines solubles dans un mélange d'autres protéines végétales, les protéines solubles représentant alors une teneur au moins égale à 25% en poids sec des protéines totales. En dermatologie et cosmétologie, l'albumine d'origine animale, et en particulier celle extraite de sérum de bovins ou d'équidés, est utilisée depuis très longtemps car ses propriétés, qui sont les suivantes, lui permettent de nombreuses applications :
- diminution immédiate mais non durable du réseau micro- dépressionnaire cutané,
- obtention d'un "effet tenseur" cutané,
- bon pouvoir hydratant sur les couches superficielles de l'épiderme,
- action sur la régénération cellulaire, - très grand confort à l'utilisation,
- molécules naturelles et biodégradables disponibles en grande quantité.
Ces propriétés sont exploitées dans de nombreuses préparations -pharmaceutiques ou cosmétiques, parmi lesquelles les principales sont les suivantes : - en ampoules dans lesquelles l'albumine animale est fortement concentrée (5 à 30% d'une solution d'albumine à 30%) et est utilisée pour son "effet tenseur" cutané immédiat,
- dans des formules où l'albumine animale en concentration assez élevée (2 à 10% d'une solution d'albumine à 30%) est utilisée pour son action de dynamisant cellulaire,
- dans des formules du type émulsion huile dans l'eau, dans lesquelles l'albumine animale en faible concentration (1 à 5% d'une solution d'albumine à 30%) est utilisée pour l'effet de confort qu'elle apporte.
En vue d'obtenir de nouveaux principes actifs d'origines largement diversifiées, les recherches dans le domaine cosmétique s'orientent de plus en plus vers des extraits végétaux extrêmement bien caractérisés. La présente invention a précisément découvert que des compositions comprenant de l'albumine d'origine végétale conduisent à des effets cosmétiques largement supérieurs à ceux obtenus avec l'albumine d'origine animale. De façon très inattendue, l'albumine végétale se comporte en formulation comme l'albumine d'origine animale et en particulier comme celle du sérum bovin.
Ce comportement est particulièrement surprenant car les structures physicochimiques des albumines animales et végétales, s'agissant aussi bien des masses moléculaires, que des acides aminés constitutifs, des structures spatiales, des points isoélectriques..., ainsi que leurs fonctions respectives sont très différentes.
Par une formulation appropriée de compositions contenant de l'albumine végétale, selon l'invention, on s'est aperçu que le spectre des propriétés de l'albumine végétale était au moins aussi large que celui de l'albumine de sérum de bovins, et que certaines activités étaient fortement renforcées.
L'albumine végétale est en général un mélange protéique complexe, constitué par les protéines fonctionnelles que l'on retrouve dans les graines, et est une fraction protéique définie selon la classification de OSBORNE (OSBORNE T.B. et CAMPBELL CF., J. Am Chem. Soc, 20, 348-362 (1898)). Si les protéines végétales et en particulier les protéines de céréales (blé, orge, maïs...) sont largement utilisées dans l'alimentation humaine, comme dans la panification et dans d'autres industries alimentaires de cuisson, leurs applications à d'autres domaines sont moins importantes.
Néanmoins, elles existent et notamment dans le domaine cosmétique et pharmaceutique. Ainsi, selon WO-A-91 /151 17, sont décrites des compositions à usage dermatologique ou cosmétique, sous forme d'émulsion, comprenant au moins un principe actif et, à titre d'agent émulsifiant, une fraction protéique d'origine animale ou végétale. La fraction protéique est extraite en totalité dans ce cas, et utilisée comme telle, comme émulsifiant.
Selon la présente invention, on part d'une fraction protéique de laquelle on isole une partie de ladite fraction, à savoir l'albumine, et seule cette partie, non dénaturée, est utilisée pour être incorporée, à titre de principe actif, dans une composition selon l'invention.
Par "principe actif", on entend selon l'invention que l'albumine végétale substantiellement pure, ou toute fraction enrichie en dite albumine, seule ou en association avec un autre principe actif, améliore, à court et à long terme, l'état des tissus cutanés.
L'albumine contenue dans les compositions de l'invention est obtenue essentiellement à partir de graines choisies parmi les graines de légumineuses, les graines d'oléagineux et les graines de céréales.
Si le taux de protéines des différentes graines végétales est essentiel, la teneur relative en albumine est encore plus importante pour le choix du végétal, à effectuer.
Le tableau I suivant montre, pour différentes espèces végétales, leur teneur en protéines totales et la teneur en albumine des protéines totales. TABLEAU 1
Source de protéines Teneur en protéines * Teneur en Albumine *
% % de protéines
Céréales 10 - 15 10-15
Oléagineux ≈ 25 20-40
Légumineuses = 25 15-35
* valeurs moyennes
Ce tableau montre que l'espèce des légumineuses fait partie des espèces les plus concentrées en albumine. Pour des raisons pratiques, c'est elle que l'on utilisera au cours des essais expérimentaux développés plus loin.
Selon l'invention, l'albumine est directement extraite de graines choisies parmi les graines de légumineuses, les graines d'oléagineux et les graines de céréales ou bien elle est obtenue à partir d'extraits protéiques concentrés en albumine de végétaux, ayant une teneur en protéines totales au moins égale à 50%.
Avantageusement, l'extrait protéique concentré est un isolât protéique dont la teneur en protéines totales est comprise entre 70 et 98%.
Ces extraits sont disponibles dans le commerce ou préparés préalablement à l'extraction de l'albumine à partir des graines.
Pour cela, après élimination des écorces et des germes, les graines sont broyées et les principales fractions en amidon sont éliminées. L'extrait protéique est alors purifié puis séché, afin de faciliter le stockage et la manutention des produits intermédiaires.
Selon l'invention, les compositions se présentent sous la forme de solutions, et en particulier de solutions aqueuses, dans lesquelles la concentration en albumine est au moins égale à 2,5 % en poids sec. Selon une autre présentation des compositions de l'invention, elles sont sous forme solide, et leur matière sèche représente une proportion pondérale élevée, au moins égale à 90%.
Un autre objet de l'invention est une préparation pharmaceutique, notamment dermatologique, ou cosmétique incorporant une composition de l'invention et un support pharmaceutiquement ou cosmétologiquement acceptable, destinée à une application topique.
Une préparation de l'invention, quand elle est formulée de manière appropriée, peut constituer soit une crème de soin avec une teneur en albumine comprise entre 0,05 % et 5 % du poids sec de ladite préparation, soit une lotion ou un lait pour le visage et/ou. pour le corps, avec une teneur en albumine comprise entre 0,05 % et 5 % du poids sec de ladite préparation, soit une solution ou sérum à effet tenseur cutané immédiat avec une teneur en albumine comprise entre 5 et 30 % du poids sec de ladite préparation.
La présente invention concerne aussi un procédé pour préparer une préparation pharmaceutique ou cosmétique, contenant de l'albumine végétale, ce procédé comprenant les étapes suivantes :
- par extraction en phase aqueuse à partir d'un extrait végétal protéique concentré, puis centrifugation, on sépare la fraction albumine,
- on concentre l'albumine par ultrafiltration sur membrane, jusqu'à une concentration en matière sèche comprise entre 2 et 70% du poids sec,
- on incorpore l'albumine végétale obtenue, en solution aqueuse, à un support pharmaceutiquement ou cosmétologiquement acceptable.
Avantageusement, l'albumine obtenue est préparée sous forme stabilisée par l'addition d'auxiliaires de stabilisation, tels que des alcools (méthanol, éthanol,...), des polyols, des acides gras à chaînes courtes ou leurs sels (caprylate de sodium), de l'acétyltryptophane de sodium, puis chauffage et filtration. Elles est avantageusement protégée contre toute attaque microbienne par l'addition de conservateurs tels que les dérivés de parabènes, le phénoxyéthanol, ou différents types de glycol.
Après l'étape de concentration, l'albumine concentrée peut être séchée par tout procédé de séchage connu non dénaturant, mais en particulier par atomisation à basse température ou par lyophilisation, et ceci dans un souci de faciliter la manutention et le stockage de l'albumine.
L'albumine sous forme solide ainsi obtenue est avantageusement stérilisée par l'oxyde d'éthylène ou par rayonnements β ou . Pour permettre son incorporation en vue d'obtenir une préparation de l'invention, l'albumine sous forme solide est préalablement dissoute dans un faible volume d'eau ou solution aqueuse.
Les compositions de l'invention peuvent, quand elles sont formulées de manière appropriée, constituer des préparations pharmaceutiques ou cosmétiques et notamment des préparations du type émulsion huile dans l'eau ou eau dans l'huile, des lotions, des sérums.
Par application topique de telles préparations, un effet tenseur cutané immédiat est produit, cet effet étant largement supérieur à celui obtenu avec l'albumine bovine utilisée dans des conditions similaires.
On observe aussi les effets suivants :
- effet filmogène aussi important que celui obtenu avec l'albumine bovine, - effet hydratant, - effet "miroir" permettant une bonne préparation de la peau aux différentes étapes du maquillage,
- effet substantif élevé, lié à la présence de protéines de masses moléculaires importantes dans la fraction albumine, ainsi qu'à une teneur non négligeable en acides aminés soufrés, l'effet substantif d'un produit étant défini par son taux de rétention sur la zone d'application.
Dans les exemples qui vont suivre, chacune des étapes du procédé pour obtenir une préparation de l'invention est détaillée, puis différentes applications de compositions de l'invention sont présentées et les effets et avantages de préparations contenant de telles compositions mis en évidence.
La Figure unique illustre les effets cosmétiques d'une préparation de l'invention, en représentant les courbes de déformation obtenues par aspiration de peaux traitées par une solution à effet tenseur cutané.
EXEMPLE 1 : Cet exemple illustre chacune des étapes de la préparation d'une composition de l'invention sous forme solide, à partir de pois. 1 ) Préparation de l'isolât à partir de graines de pois
Le Pois (Pisum sativum) est essentiellement constitué de fibres solubles et insolubles, d'amidon riche en amylose et en amylopectine, et de protéines. Après une première étape de décorticage où les fibres externes de la graine sont enlevées mécaniquement, les grains sont concassés grossièrement et l'amidon, qui constitue le principal composé, est éliminé mécaniquement par différence de densité.
La fraction mineure contenant une teneur importante en protéines est purifiée une seconde fois de manière à éliminer presque totalement l'amidon résiduel. Elle est alors ajustée à une teneur minimale de 88 % en protéines et est appelée isolât protéique de pois. Elle est également accessible dans le commerce sous cette appellation.
•" Dans cet isolât de pois, la fraction albumine représente environ 13 à 14 % des protéines totales des deux variétés de pois testées le plus couramment, c'est-à-dire Century et Trapper.
2) Préparation d'un composition contenant de l'albumine à partir d'isolat de pois L'isolât de pois obtenu en 1 ) est traité comme suit: a) Dissolution de 10 Kg de l'isolât de pois dans 100 litres d'eau déminéralisée sous agitation vigoureuse. b) Ajustement du pH (entre 4,7 et 5,3) à l'aide de l'acide chlorhydrique 6N et de la soude 6N. Ces valeurs de pH ont été préalablement déterminées comme étant les valeurs auxquelles la solubilité de la fraction protéique soluble de pois est maximale. c) Agitation maintenue pendant 18 heures à 4°C pour l'obtention d'un mélange très homogène. d) Centrifugation à 4000 g pendant 20 minutes sur une centrifugeuse travaillant en discontinu. Récupération du surnageant. e) Ultrafiltration sur membranes possédant un seuil de coupure de 10.000 D. Concentration de la matière sèche jusqu'à une valeur de 20%. f) Lyophilisation puis stérilisation par rayons gamma. 3) Caractérisation de la fraction albumine ainsi purifiée Suivant les techniques d'analyse utilisées, la fraction albumine du pois permet d'isoler plus ou moins de constituants différents ; ainsi, après une extraction des albumines dans des conditions non dénaturantes: - deux constituants principaux peuvent être mis en évidence par ultracentrifugation,
- le passage sur colonne Sephadex G-150 permet d'isoler trois composés, ayant les masses moléculaires suivantes : 78.000, 47.000 et 26.000 daltons, - une électrophorèse sur gel à pH 10 permet de révéler six composés majeurs et plusieurs composés mineurs,
- une électrophorèse sur gel de polyacrylamide-SDS ne permet de révéler que deux constituants majeurs avec des poids moléculaires de 25.000 et 1 5.000 D.
Les analyses physico-chimiques sur de l'albumine végétale peuvent donner les résultats ci-après :
Résultats donnés en g pour 100 g de produit : Matière sèche 92
Matières minérales totales 9
Azote total (N) 1 1
Protéines totales (Nx6,25 *) 70.6
Sucres (dosage à l'anthrone) 12.4 pH à 3 % 4.5 - 7.5
* facteur de conversion de l'azote total en protéines totales, obtenu à partir de la quantité d'aminoacides constitutifs des protéines ayant un radical portant des groupements aminés.
Une analyse des acides aminés de cette fraction albumine a été réalisée sur station SYSTEM 6300 (BECKMAN). Les résultats sont les suivants : Acides Nombre * Acides Nombre * aminés de résidus aminés de résidus
Asp 110 . 09 Leu 29 . 74
Thr 67 . 30 Tyr 13 . 83
Ser 36. 26 Phe 14 . 68
Glu 169 . 82 Lys 90 . 34
Gly 118.43 His 20. 39
Ala 172 . 51 Arg 38 . 27
Val 48 . 26 Cys 2 . 32
Met 3 . 31 Pro 39 . 13
Ile 25. 3 Trp nd
* A m i i Tri -_α_m_m_Ω _o /'α/Aw inrtîr ιa ri a nn/e
(en nombre de résidus pour 1000 résidus totaux)
EXEMPLE 2 : Cet exemple présente une variante de la préparation d'une composition contenant de l'albumine à partir d'isolat de pois, de l'exemple 1. a) Dissolution de 10 Kg de l'isolât de pois dans une quantité d'eau déminéralisée comprise entre 50 et 1000 litres sous agitation vigoureuse. Plus la quantité d'eau mise en oeuvre est importante, plus l'extraction est optimale. b) Ajustement du pH, à l'aide de tout autre acide fort (HCI, H2SO4.J ou faible (acide sorbique, acide acétique, acide lactique..) et à l'aide de toute autre base forte (NaOH, KOH.J ou faible (sorbate, acétate ou lactate de Na ou de K), ou encore à l'aide de tampons phosphate, citrate ou acétate (à une molarité préférentiellement inférieure à 1 M), entre 4,7 et 5,3. Ces valeurs de pH ont été préalablement déterminées comme étant les valeurs auxquelles la fraction protéique soluble de pois est maximale. c) Agitation maintenue pendant une durée pouvant aller de 1 à
24 heures à une température comprise préférentiellement entre 4°C et 30°C pour l'obtention d'un mélange très homogène mais non dégradé. d) Centrifugation à haute vitesse à l'aide de centrifugeuse travaillant en continu ou en discontinu. Récupération du surnageant. e) Ultrafiltration sur membranes possédant un seuil de coupure compris entre 2.000 et 100.000 D, mais préférentiellement compris entre 5.000 et 20.000 D. Concentration de la matière sèche jusqu'à une valeur comprise entre 2 et 70 % mais préférentiellement voisine de 20 %. f) Séchage par tout type de procédé non dénaturant, comme l'atomisation à basse température ou la lyophilisation. Stérilisation par oxyde d'éthylène ou par rayonnements bêta ou gamma.
EXEMPLE 3 : Cet exemple illustre la préparation d'une composition de l'invention sous forme liquide.
Le même protocole opératoire que l'exemple 1 ou 2 est suivi mais le produit n'est pas séché et il est conservé sous forme liquide, et correspond à une concentration en matière sèche comprise entre 2 et 70% mais préférentiellement voisine de 20 %. Le produit est alors stabilisé par l'ajout d'auxiliaires de stabilisation, tels que ceux cités précédemment, et protégé contre toute attaque microbienne par l'ajout de conservateurs tels que les dérivés de parabènes, le phenoxyethanol... Il peut être ensuite chauffé 10 heures à 60°C, puis filtré à nouveau pour être présenté sous forme liquide, stable, sans trouble.
EXEMPLE 4 : Cet exemple illustre un autre procédé de préparation d'une composition de l'invention à partir d'un isolât de pois. a) Dissolution de 10 Kg de l'isolât de pois dans 100 litres d'eau déminéralisée sous agitation vigoureuse. b) Extraction des protéines en tampon phosphate pH7, NaCI 1 M. c) Précipitation des protéines par addition de sulfate d'ammonium à 70% de saturation, et centrifugation avec élimination du surnageant. d) Redissolution des protéines en tampon phosphate pH7, NaCI 0,2M. e) Dialyse contre de l'eau permutée : les globulines précipitent. f) Centrifugation et récupération du surnageant. g) Ultrafiltration sur membranes possédant un seuil de coupure de 10.000 D. Concentration de la matière sèche jusqu'à une valeur de 20 %. h) Lyophilisation, puis stérilisation par rayons gamma. EXEMPLE 5 : Cet exemple présente une variante du procédé de préparation de l'exemple 4.
a) Dissolution de 10 Kg de l'isolât de pois dans une quantité d'eau déminéralisée comprise entre 50 et 1000 litres sous agitation vigoureuse. Plus la quantité d'eau mise en oeuvre est importante, plus l'extraction est optimale. b) Extraction à l'aide de toute autre solution tampon : tampons phosphate, citrate ou acétate ou aconitate ou succinique ou borate, et à l'aide d'une concentration en sel comprise entre 0,1 et 3M. c) Précipitation des protéines, par addition de sulfate d'ammonium à une concentration au moins supérieure à 50% de saturation, ou par tout autre agent de précipitation des protéines y compris les sotvants organiques. Centrifugation et élimination du surnageant. d) Redissolution des protéines dans tout tampon ou tout milieu salin solubilisant préférentiellement la fraction albumine ainsi que, dans une moindre mesure les globulines. e) Elimination des sels par dialyse ou par diafiltration afin de faire précipiter les globulines non solubles dans l'eau permutée. f) Centrifugation et récupération du surnageant. g) Ultrafiltration sur membranes possédant un seuil de coupure compris entre -2.000 et 100.000 D, mais préférentiellement voisin de 5.000 à 20.000 D. Concentration de la matière sèche jusqu'à une valeur comprise entre 2 et 70 % mais préférentiellement voisine de 20 %. h) Séchage par tout type de procédé non dénaturant, comme
Patomisation à basse température ou la lyophilisation. Stérilisation par oxyde d'éthylène ou par rayonnements bêta ou gamma.
EXEMPLE 6 : De la même manière que dans l'Exemple 3, la composition obtenue dans les Exemples 4 et 5 jusqu'à l'étape g) n'est pas séchée et est conservée sous forme liquide pour correspondre à une concentration en matière sèche comprise entre 2 et 70 % mais préférentiellement voisine de 20 %. Le produit est alors stabilisé par l'ajout d'auxiliaires de stabilisation, et de conservateurs. EXEMPLE 7 : Cet exemple illustre la préparation de compositions selon l'invention, à partir de soja.
Le matériau de base utilisé pour extraire l'albumine est un isolât protéique de soja (SAMPROSOY, SOUSSANA) titrant 92% en poids, en protéine, ou un concentrât de soja (PROTOSOL 550, SOUSSANA) titrant 75% en poids, en protéine.
Le pH d'extraction optimal déterminé est voisin de 8.
Cependant, l'extraction de l'albumine est effectuée à un pH compris entre 6 et 7, afin de pouvoir incorporer ladite albumine dans la plupart des préparations cosmétiques dont les pH sont majoritairement compris entre 5 et 7.
L'étape d'extraction permet de recueillir une fraction ayant une concentration voisine de 10% en albumine. Après purification, la fraction albumine est pure, débarassée de toute trace de polysaccharides. Introduite à des concentrations comprises entre 0,05 et 30% dans des formulations de gels ou d'émulsions, l'albumine obtenue donne des préparations cosmétiques homogènes, d'un aspect très blanc particulièrement intéressant dans ce domaine d'applications.
L'absence de polysaccharides et d'autres oses permet d'éviter la réaction dite de Mailland, bien connue de l'homme de l'art, qui cause le brunissement de préparations au cours de longues étapes de chauffage
(comme par exemple, dans les tests de vieillissement artificiels des formulations cosmétiques).
EXEMPLE 8 : Cet exemple illustre ia préparation de compositions selon l'invention à partir de riz.
Un extrait protéique de riz ("Protéine de Riz", REMY; "Rice
Protein Concentrate" CNP) titrant 70-80% en protéines est utilisé comme matériau de base pour extraire l'albumine. La quantité d'albumine extraite est très faible lorsque l'extraction est réalisée à un pH inférieur à 9.
Aussi, l'albumine de riz est préférentiellement extraite à un pH au moins égal à 9, puis une fois purifiée, elle peut être avantageusement incorporée dans des préparations dépilatoires dont le pH est plus élevé que celui de la plupart des autres préparations cosmétiques. EXEMPLE 9 : Cet exemple illustre la préparation de compositions selon l'invention à partir de lupin ou de féverole.
Le concentrât (50% de protéines) ou l'isolât protéique de lupin ou de féverole sont dans ce cas utilisés comme matériaux de base pour l'extraction de l'albumine végétale.
Dans ces extraits protéiques de lupin ou de féverole, la fraction albumine représente environ 20 % des protéines totales.
Après avoir déterminé le pH optimal d'extraction, c'est-à-dire le pH pour lequel les quantités de protéines solubilisées sont maximales, l'albumine est extraite puis purifiée par un des protocoles opératoires décrit dans les exemples 1 ou 4 et leurs variantes. Ce pH n'est pas identique pour tout concentrât et tout isolât de lupin ou de féverole, et doit être adapté suivant les cas.
L'albumine ainsi extraite de lupin ou de féverole possède les mêmes caractéristiques générales que celles de l'albumine extraite de pois.
L'extrait sec lyophilisé est très hygroscopique, et possède une couleur caractéristique qui va d'une teinte beige pâle à une couleur jaune plus soutenue.
EXEMPLE 10 : Cet exemple présente la dernière étape du procédé de l'invention pour obtenir des préparations cosmétiques ou pharmaceutiques.
Les fractions albumines extraites de graines de différentes espèces végétales, peuvent facilement être incorporées dans tous les types de formulations cosmétiques ou pharmaceutiques du type gel aqueux, émulsions Huile dans Eau (H/E) ou Eau dans Huile (E/H), pour obtenir des préparations selon l'invention. Dans tous les cas, l'albumine végétale est incorporée dans la phase aqueuse des émulsions où elle se dissout très facilement. Si la forme sèche est utilisée, on préférera dissoudre préalablement l'albumine dans une faible quantité d'eau, puis l'additionner à température modérée, préférentiellement en fin de formulation.
1 ) L'exemple de formulation suivant illustre une préparation cosmétique de l'invention qui formulée de manière appropriée, constitue une crème de soin. INGREDIENTS NOM CTFA* % FOURNISSEUR
A/ Carbopol 940 Carbomer 0,50 Goodrich
Propylene glycol Propylene glycol 2,00
Glycerin Glycerin 8,00
Distilled water Water 58,10
B/ Dragil (2/027011) Glycol stéarate 8,00 Dragoco
Liquid Pcl (2/066210) Cetearyl octanoate (and) 3,00 Dragoco Isopropyl myristate
Solid Pcl (2/066220) Stearyl heptanoate 2,00 Dragoco
Dragosantol (2/012681) Bisabolol 0,30 Dragoco
CI Bactericid MB (2/012582) Butylène glycol (and) 0,50 Dragoco
Ethylparaben (and) Methylparaben (and) Propylparaben
Dragocid forte Ethoxydiglycol (and) 0,50 Dragoco
(2/027045)
Diisopropyl adipate (and) Methylparaben (and) Dehydroacetic acid (and) Sorbic acid
D/ Caustic soda (10%) Caustic soda (10%) 1,80
E/ Biobranil watersoluble Water (and) 2,00 Dragoco (2/012600) Wheat bran lipids (and)
Propylene glycol (and)
Ethoxydiglycol (and)
PEG-40 Castor oil (and)
Tocopherol
Aloe Vera gel (2/912800) Aloe Vera gel 2,00 Dragoco
F/ Composition de Pea extract 0,50 Demanderesse l'invention (ETIVAL) obtenue selon l'Exemple 1 Water 10,00
G/ Coviox T 50 Tocopherol 0,30 Henkel
H/ Perfume (NP 3164) 0,50 Dragoco selon la nomenclature de The Cosmetic, Toiletry and Flagrance Association (CTFA).
2) L'exemple de formulation suivant illustre une préparation cosmétique de l'invention qui, formulée de manière appropriée, constitue une lotion démaquillante pour le visage.
INGREDIENTS NOM CTFA % FOURNISSEUR
A/ Propylene glycol Propylene glycol 2,00
Glycerin Glycerin 4,00
Composition de Pea extract 0,50 Demanderesse l'invention (ETIVAL) obtenue selon l'Exemple 1
Distilled water Water 88,35
Tween 80 Polysorbate 80 2,00 I.C.I.
Tego betain L7 Cocamidopropyl betaine 2,00 Goldschmidt
B/ Bactericid MB (2/012582) Butylène glycol (and) 1 ,00 Dragoco
Ethylparaben (and) Methylparaben (and) Propylparaben
C/ Perfiime 0,15
3) Le dernier exemple de formulation illustre une préparation cosmétique de l'invention qui, formulée de manière appropriée, constitue une solution à effet tenseur cutané.
INGREDIENTS NOM CTFA % FOURNISSEUR
A/ Jaguar C 162 Hydroxypropyl Guar 1,50 Rhône Poulenc hydroxypropyltri- Meyhall amonium chloride
Distilled water water 39,30
Composition de Pea extract 0,50 Demanderesse l'invention (ETIVAL) obtenue selon l'Exemple 1
Glycerin Glycerin 20,00
B/ Dragosantol (2/012681) Bisabolol 0,20 Dragoco
Pèrfume (0/214550) 0,40 Dragoco
Neo PCL watersoluble Nonoxynol-12 (and) 6,00 Dragoco
(2/966212) PEG-5 octanoate (and) water
Propylene glycol Propylene glycol 15,00
Ethyl diglycol Ethyl diglycol 10,00 a Caustic soda (10%) Caustic soda (10%) 0,10
D/ Ext. sp. almond Propylene glycol (and) 2,00 Dragoco (2/033130) Almond extract
Ext. sp. avocado Water (and) 2,00 Dragoco
(2/0325599) Avocado extract
Ajidew N 50 Sodium PCA 3,00 Ajinomoto
EXEMPLE 11 : Evaluation de l'effet tenseur immédiat de la préparation obtenue ci-dessus, par mesure de l'élasticité in vivo.
Une des utilisations les plus importantes d'albumine bovine en cosmétologie consiste à l'incorporer à des concentrations voisines de 5- 10 % (en poids sec), dans des ampoules de quelques millilitres, quelquefois appelées "ampoules coup d'éclat". L'utilisation d'un tel sérum permet en général d'obtenir pendant quelques heures, un effet tenseur très marqué sur les ridules du visage. Afin de déterminer si de telles propriétés pouvaient être obtenues avec l'albumine végétale extraite selon l'exemple 1 , on a réalisé un test in vivo sur dix volontaires, afin de mesurer l'élasticité de la peau après application d'une préparation cosmétique contenant 10 % en poids sec d^albumine végétale ou d'albumine bovine.
1 - PROTOCOLE a - Principe
L'élasticité de l'épiderme humain est évaluée in vivo sur volontaires, par aspiration d'une zone infime à l'intérieur d'un capteur soumis à dépression.
Après une seule aspiration, les paramètres de la courbe de déformation suivants sont exploités: élasticité, plasticité, extensibilité, hystérèse, tonicité. Après trois aspirations, les paramètres de la courbe de déformation suivants sont exploités: fatigue cutanée, souplesse, extensibilité, hystérèse, fermeté.
b - Conditions expérimentales Sujets : 10 sujets âgés de 22 à 57 ans, à types de peau divers, capables de suivre les indications de traitement données.
Critères d'exclusion. Femmes enceintes, femmes allaitant, fumeurs, peaux couperosées, peaux présentant des dermites ou eczémas de contact. Installation des sujets. Dans une pièce calme à température constante de 25° C, équipée de fauteuils de relaxation. Application : Le produit, préparé selon l'Exemple 1 , est appliqué une fois sur la face externe de l'avant bras sur des zones délimitées de 2 cm x 2 cm à raison de 3 mg/cm^.
2 - MESURES
Les mesures sont effectuées avant l'application puis 30 minutes, 2 heures, 4 heures et 6 heures après l'application.
Le capteur maintenu parfaitement vertical par un guide est placé au contact de la peau et soumis à son propre poids.
Pour la face externe de l'avant bras la dépression exercée est fixée à 300 mbars pendant 2 secondes.
L'intervalle de repos entre deux aspirations est de 1 seconde.
Nombre de répétitions de l'aspiration : 3 Les courbes de déformation obtenues sont représentées sur la figure qui représente la déformation en mm en fonction du temps en seconde.
3 - PARAMETRES ETUDIES (cf. Fig)
OA correspond à la partie élastique et réversible de la déformation.
AB représente la déformation visco-élastique de la peau. Cette déformation n'est pas totalement réversible. OB correspond à l'extensibilité totale de la peau intégrant extensibilités élastique et visco élastique.
BC correspond aux forces de rappel de la peau et peut être traduite par le terme de "tonicité".
OB - BC représente l'hystérèse ou la déformation résiduelle. O'D représente l'extensibilité après trois aspirations.
La valeur BD correspond à l'augmentation de l'extensibilité sous l'effet des aspirations successives et représente le phénomène de fatigue cutanée. Plus elle est importante plus la peau est relâchée.
O'D' représente la déformation résiduelle après trois tractions. La souplesse est déterminée à partir de ces deux paramètres. Le rapport BC/OA correspond à la fermeté, li est généralement inférieur à 1.
4 - INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
Les comparaisons de moyennes obtenues sur un petit nombre de sujets peuvent ne pas être statistiquement significatives.
Il se dégage cependant certaines tendances qu'il est possible de définir en examinant le comportement de chaque sujet. L'interprétation portera principalement sur trois paramètres: l'extensibilité totale et l'hystérèse déterminées après une aspiration, la souplesse déterminée après trois aspirations.
On dégagera ainsi quatre types de comportement:
Sujet de type A:
L'extensibilité totale augmente, l'hystérèse diminue. La peau est plus élastique et plus souple traduisant un effet positif du produit.
Mais si la souplesse diminue ou se trouve égale à zéro, le traitement n'a pas agi sur le phénomène de fatigue cutanée et son effet n'est positif que sur une déformation brutale et unique.
Sujet de type B
L'extensibilité totale augmente et l'hystérèse augmente après une aspiration. La peau est devenue plus extensible mais la déformation résiduelle est plus importante par suite de forces de rappel moindres ou par une diminution de la zone élastique.
Ceci traduit un relâchement plus ou moins important et correspond généralement à une augmentation du phénomène de fatigue cutanée. C'est le comportement typique de peaux vieillies.
Il n'y a donc pas d'effet positif du traitement sauf s'il s'agit d'épidermes desséchés et raidis qui vont acquérir de ce fait un plus grande extensibilité, améliorant ainsi la sensation de confort. Sujet de type C
L'extensibilité diminue et l'hystérèse diminue après une seule aspiration.
Ce comportement correspond à une "raideur", à une élasticité et à une tonicité plus importantes.
Le phénomène de fatigue cutanée doit également diminuer.
Sujet de type D
L'extensibilité diminue et l'hystérèse augmente. Dans ce cas, on observe une augmentation de la raideur qui n'est pas accompagnée d'une augmentation de la tonicité.
La déformation résiduelle est plus importante.
Donc il y a manque d'élasticité. L'effet du produit peut être uniquement un effet tenseur.
5 - INTERPRÉTATION GLOBALE DES RÉSULTATS
Comme indiqué précédemment, les comparaisons de moyennes obtenues sur un petit nombre de sujets pouvant ne pas être statistiquement significatives, on expanse les tendances observées en faisant intervenir le nombre de sujets ayant réagi selon cette tendance (n).
On obtiendra une différence corrigée Δc:
Δc = (M21 - Mo) x n
6 - RESULTATS
Echantillons : Les essais ont porté sur les produits suivants: - Albumine bovine: Lyophilisât lot 203003 en solution à 10 % dans l'eau distillée: solution transparente jaune pH : 6,90 - Albumine végétale Lyophilisât lot 160492 en solution à 10 % dans l'eau distillée: solution opaque jaune-beige. Un dépôt crémeux se forme rapidement. Cette solution sera agitée avant l'application afin de l'homogénéiser. pH : 4,95.
0,15 % de parahydroxybenzoate de méthyle sodé est ajouté à chaque solution; les valeurs de pH sont alors les suivantes: - Albumine bovine : 7,6 - Albumine végétale : 5,15. Application :
Chaque solution est appliquée une fois sur la face externe de l'avant bras des sujets.
Résultats : lis sont rassemblés dans les tableaux 2 et 3 suivants.
Le Tableau 2 présente les valeurs expérimentales de déformation exprimées en mm. Le Tableau 3 présente les pourcentages de variation par rapport à l'état initial.
Dans les Tableaux 2 et 3, AB est l'albumine bovine, AV est l'albumine végétale.
Figure imgf000024_0001
Discussion :
Si l'on ne considère que les résultats significatifs obtenus pour chaque produit on constate que:
- 30 minutes après l'application, l'albumine végétale montre un effet tenseur complet :
- l'élasticité diminue,
- les extensibilités 1er et 3ème tirages diminuent,
- la fermeté augmente.
L'albumine végétale provoque de plus une diminution de fatigue cutanée par rapport à To, ce qui est positif car il n'y a pas de relâchement de la peau.
L'albumine bovine entraîne une diminution de l'extensibilité 1 er tirage et de l'hystérèse 3ème tirage mais la fatigue cutanée augmente. Le produit est tenseur par effet immédiat mais la peau se relâche au cours des tractions successives.
2 heures après l'application, l'albumine bovine n'a d'activité significative sur aucun des paramètres de la courbe de déformation.
L'albumine végétale n'agit significativement que sur les extensibilités du 1er et du 3ème tirages. L'effet tenseur se maintient puisque la peau est moins extensible.
4 heures après l'application, l'albumine bovine n'agit que sur la souplesse en l'augmentant. H n'y a plus d'effet tenseur depuis T30 min.
L'albumine végétale, de même que 2 heures après l'application, n'agit que sur les extensibilités 1er et 3ème tirage. La peau est tendue mais le produit n'agit pas sur les autres paramètres.
6 heures après l'application, l'albumine végétale n'a plus d'action significative quel que soit le paramètre considéré.
7 - CONCLUSION
Dans les conditions expérimentales décrites, les résultats obtenus permettent de classer les deux produits, de la façon suivante, pour leur effet tenseur :
1er : Albumine végétale 2ème : Albumine bovine EXEMPLE 12 : Evaluation d'autres effets cosmétiques
L'évaluation de l'effet filmogène de l'albumine végétale a été réalisée en faisant sécher à l'air libre ou dans une étuve à 45 °C, un fin film d'une solution d'albumine à 20% ; les résultats ont été comparés avec les films obtenus à partir d'autres protéines végétales (soja, blé.J ou animales (collagène, albumine bovine..). Les capacités filmogènes de l'albumine végétale sont, exception faite du collagène, supérieures ou égales à toutes les autres protéines testées. L'incorporation de très faibles quantités d'albumine végétale dans les préparations cosmétiques données dans l'exemple 7, permet d'obtenir un effet cosmétique très important, puisque encore détectable lorsqu'une concentration en albumine végétale de 0,1 % est utilisée.
Utilisée dans le sérum tenseur à 0,5 %, l'albumine végétale permet d'obtenir un effet tenseur net, et permet également d'obtenir un "effet miroir" qui peut être mis à profit dans les formulations de préparation de la peau aux différentes étapes du maquillage.
En conclusion, l'albumine végétale est un ingrédient polyvalent qui est très riche en différents acides aminés indispensables, et qui peut permettre d'apporter aux préparations cosmétiques qui le contiennent, un effet tenseur important, ainsi qu'une stabilité et une texture très intéressantes.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composition à usage pharmaceutique et notamment dermatologique, ou cosmétique, incorporant une fraction protéique qui comprend, à titre de principe actif seul ou en combinaison avec au moins un autre principe actif, de l'albumine, caractérisée en ce que l'albumine est d'origine végétale et se présente dans ladite composition sous la forme de protéines solubles dans leur état natif, en phase aqueuse non saline, à pH compris entre 4 et 7, la teneur en dites protéines solubles étant d'au mojns 25 % en poids sec de la fraction protéique.
2. Composition selon la revendication 1 , caractérisée en ce que ladite albumine est obtenue à partir de graines choisies parmi les graines de légumineuses, les graines d'oléagineux et les graines de céréales.
3. Composition selon la revendication 1 , caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme solide ou liquide.
4. Préparation pharmaceutique et notamment dermatologique, ou cosmétique, destinée à une application topique, caractérisée en ce qu'elle incorpore une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, et un support pharmaceutiquement ou cosmétologiquement acceptable .
5. Préparation cosmétique selon la revendication 4, caractérisée en ce que, formulée avec un support cosmétologiquement acceptable, elle constitue une crème de soin dont la teneur en albumine est comprise entre 0,05 % et 5 % en poids sec de ladite préparation.
6. Préparation cosmétique selon la revendication 4, caractérisée en ce que, formulée avec un support cosmétologiquement acceptable, elle constitue une lotion ou un lait pour le visage et/ou le corps, dont la teneur en albumine est comprise entre 0,05 % et 5 % en poids sec de ladite préparation.
7. Préparation cosmétique selon la revendication 4, caractérisée en ce que, formulée avec un support cosmétologiquement acceptable, elle constitue une solution à effet tenseur cutané immédiat dont la teneur en albumine est comprise entre 5 % et 30 % en poids sec de ladite préparation.
8. Procédé pour préparer une préparation selon la revendication 4, caractérisé en ce que : - par extraction en phase aqueuse à partir de graines directement ou à partir d'un extrait protéique végétal concentré, puis centrifugation, on sépare une fraction albumine,
- on concentre l'albumine par ultrafiltration sur membrane, jusqu'à une concentration en matière sèche comprise entre 2 et 70 % du poids sec,
- on incorpore l'albumine obtenue, en solution aqueuse, à un support pharmaceutiquement ou cosmétologiquement acceptable.
9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la fraction albumine est séparée par extraction directement à partir de graines choisies parmi les graines de légumineuses, les graines d'oléagineux et les graines de céréales.
10. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la fraction albumine est séparée par extraction à partir d'un extrait protéique végétal concentré ayant une teneur en protéines au moins égale à 50% et de préférence une teneur en protéines comprise entre 70 et 98%.
11. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que, après concentration de l'albumine par ultrafiltration, on prépare une solution stable par ajout d'auxiliaires choisis parmi les alcools comme le méthanol et l'éthanol, des polyols, des acides gras à chaînes courtes ou leurs sels comme le caprylate de sodium et l'acétyltryptophane de sodium, puis chauffage et filtration.
12. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'albumine concentrée est séchée par lyophilisation ou atomisation à basse température.
13. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'albumine séchée est stérilisée par l'oxyde d'éthylène ou par des rayonnements β ou y .
14. Procédé selon la revendication 12 ou 13, caractérisé en ce qu'avant l'incorporation dans la préparation, l'albumine séchée est dissoute dans un faible volume d'eau.
15. Utilisation d'une albumine végétale, à l'état pur ou enrichi, comme principe actif, pour obtenir des préparations pharmaceutiques, et notamment dermatologiques, ou cosmétiques, notamment à usage topique.
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