[go: up one dir, main page]

WO1996029399A1 - Oligonucleotides antisens pour inhiber le role de l'helicobacter pylori - Google Patents

Oligonucleotides antisens pour inhiber le role de l'helicobacter pylori Download PDF

Info

Publication number
WO1996029399A1
WO1996029399A1 PCT/FR1996/000407 FR9600407W WO9629399A1 WO 1996029399 A1 WO1996029399 A1 WO 1996029399A1 FR 9600407 W FR9600407 W FR 9600407W WO 9629399 A1 WO9629399 A1 WO 9629399A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
oligonucleotide according
oligonucleotide
modified
seq
oligonucleotides
Prior art date
Application number
PCT/FR1996/000407
Other languages
English (en)
Inventor
Eduardo Pirotzky
Soudhir Colote
Original Assignee
Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques (S.C.R.A.S.)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques (S.C.R.A.S.) filed Critical Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques (S.C.R.A.S.)
Priority to AU51497/96A priority Critical patent/AU5149796A/en
Priority to US08/930,371 priority patent/US5977340A/en
Priority to EP96908152A priority patent/EP0815217A1/fr
Publication of WO1996029399A1 publication Critical patent/WO1996029399A1/fr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/337—Chemical structure of the base in alpha-anomeric form

Definitions

  • the present invention relates to antisense oligonucleotides which selectively hybridize with one or more genes necessary for the action of Helicobacter pylori (H pylori), pharmaceutical compositions containing them and their use as inhibitors of Helicobacter pylori.
  • H pylori Helicobacter pylori
  • H pylori is a microaerophilic bacterium, gram negative, colonizing the intercellular junctions and interstices of the human gastric mucosa and establishing a chronic infection with many diverse clinical manifestations such as atrophic gastritis, peptic and duodenal ulcer , gastric atrophy and gastric carcinoma.
  • the numerous clinical isolates have made it possible to classify H pylori into two groups based on the presence or absence of vacuolating cytotoxin. In vitro experiments have shown that the virulent nature of the bacterium could be linked to its mobility and the presence of vacuolating cytotoxin.
  • cytotoxin is closely related to the presence of an immuno-dominant CagA antigen exposed on the surface.
  • inhibiting the mobility of the bacterium and / or the expression of the cytotoxic factor could prevent the manifestation of clinical symptoms.
  • One way to inhibit these factors is to use antisense oligonucleotides to block the expression of gene coding for the immuno-dominant antigen associated with cytotoxicity CagA and / or flagellin (flaA and flaB) and / or vacuolating cytotoxin (vacA).
  • the antisense strategy is a therapeutic approach aiming at the selective modulation of the expression of genes by a highly selective association of a sequence of nucleotides (oligonucleotides) with its additional sequence on RNA or DNA, and consequently l inhibition of the synthesis of the corresponding protein.
  • oligonucleotides complementary to the transcripts are called “antisense” oligonucleotides.
  • Oligonucleotides having the same sequence as Transcripts are called “sense” oligonucleotides. Initially, these compounds were logically intended to inhibit the formation of a gene product by the suppression of the corresponding messenger RNA, via the hydrolysis mechanism catalyzed by RNAse H. Soon, it appeared that the mechanism of action of these antisense oligonucleotides was not that simple.
  • These oligonucleotides can interact with a number of cellular targets that do not include nucleic acid. These oligonucleotides can interact with the gene, to form triple helix structures and inhibit the formation of transcripts.
  • Oligonucleotides can interact with the intron-exon junctions of pre-messenger RNA, thereby interfering with the correct splicing of the transcript. Oligonucleotides can hybridize with messenger RNA in the cytoplasm, forming an RNA-DNA complex, which is rapidly degraded by the RNAse H enzyme, or preventing the ribosome complex from slipping onto the messenger RNA and thereby blocking the translation. Oligonucleotides and, more particularly, modified oligonucleotides, can interact with a number of cellular products such as proteins. These interactions can be sequence-specific (for example: transcription factors) or non-sequence-specific (for example: growth factors).
  • Oligonucleotides are very often used as a probe for example for the detection or isolation of polynucleotide and / or as a primer for the transcription and / or replication of target sequences (INNIS NA and its collaborators, PCR Protocols: A guide to methods and applications, 1990, Acadrop Press, Inc. San Diego. California).
  • oligonucleotides have been used in studies on Helicobacter pylori (WO-A-93/18150), and more particularly on vacuolating cytotoxin vacA (PHADNIS S. et al.) Infection and immunity, vol 62. No. 5, 1994, pp. 1557-1565) or the CagA antigen (TUMMURU M. and his collaborators.
  • the invention relates to antisense oligonucleotides which selectively hybridize with one or more genes necessary for the action of Helicobacter pylori in order to inhibit the role of Helicobacter pylori.
  • the invention relates more particularly to antisense oligonucleotides which selectively hybridize with the coding of the genes for the immuno-dominant antigen associated with the cytotoxicity CagA and / or flagellin (flaA and flaB) and / or the vacuolating cytotoxin (vacA).
  • the oligonucleotides preferably comprise 8 to 35 units. Very preferably, the oligonucleotide comprises from 10 to 25 units.
  • oligonucleotide represents an oligonucleotide consisting of bases, phosphodiester bonds and sugars well known to those skilled in the art.
  • oligonucleotides also represents oligonucleotides whose backbone has been modified either over the entire length of the oligonucleotide, or in the 5 ′ and / or 3 ′ position.
  • oligonucleotides are sensitive to enzymes, the nucleases which cut them into nucleotides; the oligonucleotides become resistant to nucleases by modification, for example, of the chemical nature of the sugar itself or the phosphate-sugar chain: thus, the phosphodiester chain can be replaced, for example, by a phosphorothioate, phosphorodithioate, methylphosphonate chain , phosphoramidate, phosphoethyltriester, butylamidate, piperazidate or morpholidate.
  • oligonucleotide modifications can be made along the entire length of the oligonucleotide or at its 5 'and / or 3' ends, to make the oligonucleotides more resistant to a biological environment.
  • the phosphate bonds between the nucleotides can also be replaced by amide bonds (peptide nucleic acids).
  • the transmembrane passage of the oligonucleotide can be promoted by making the latter more hydrophobic: this can be obtained, for example, by attaching hydrophobic substituents such as cholesterol or aromatic groups, or a polymer.
  • Modified bases can be incorporated partially or over the entire length of the oligonucleotide.
  • oligonucleotide also represents a nucleotide whose backbone is modified according to any of the methods described above or of any other method well known to those skilled in the art.
  • the subject of the invention is the oligonucleotides of the sequences SEQ ID No. 1 to SEQ ID No. 24 respectively; the oligonucleotides of the sequences SEQ ID No 13-24 are oligonucleotides in which all the phosphodiester bonds have been modified into phosphorothioate. Their complementary sequences or sense oligonucleotides according to the invention may also be used.
  • the invention also relates to antisense oligonucleotides comprising at least one fragment of one of the sequences selected from the sequences SEQ ID No. 1 to SEQ ID No. 24.
  • the oligonucleotides of the invention can be synthesized by any of the known methods of chemical synthesis of the oligonucleotides. Antisense oligonucleotides are most advantageously prepared using any commercially available automatic nucleic acid synthesizer. One of these methods for synthesizing oligonucleotides is the beta-cyanoethyl phosphoramidate method described by S. L. Beaucage & his collaborators (Tet. Let. 22 (1981), 1859-1862).
  • a subject of the invention is also pharmaceutical compositions containing, as active principle, at least one antisense oligonucleotide according to the invention, mixed with a pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier, according to the mode of administration chosen.
  • the composition can be administered by topical or systemic or local treatment; it can take the form of a liquid for an injection, liposome, sustained-release formulation or in the form of a gel, ointment for local application or in any other acceptable form depending on the mode of administration chosen.
  • the invention relates to the use of oligonucleotides according to the invention, for the preparation of medicaments for inhibiting the role of Helicobacter pylori.
  • the invention relates more particularly to the use of oligonucleotides according to the invention, for the preparation of medicaments for the treatment of atrophic gastric, peptic or duodenal ulcer, gastric atrophy or gastric carcinoma.
  • oligonucleotides The inhibitory role of oligonucleotides is determined by the study of the antibacterial power on strains Hel 'Helicobacter pylori.
  • this study includes a study of the bacteriostatic power in an agar medium containing the oligonucleotides.
  • Bacteriostasis is defined by the concentration of oligonucleotide leaving none or less than 5 colonies ⁇ 'Helicobacter pylori after 3 days of incubation at 37 ° C in a microaerophilic atmosphere.
  • the strains tested are as follows: a reference type ⁇ 'Helicobacter pylori (CIP 10 3995) sensitive to Metronidazole, and a strain C resistant to Metronidazole.
  • the culture medium used is Columbia Agar supplemented with 10% horse blood, freshly prepared.
  • Each oligonucleotide is incorporated into the medium maintained under supercooling at 45 ° C., so as to obtain final concentrations in the agars of 1, 10 and 20 ⁇ M.
  • the agars are poured into sterile 45 mm diameter petri dishes in a volume of 10 ml.
  • the agars are dried for 18 hours at laboratory temperature.
  • the ic'Helicobacter pylori strains are suspended in Brucella broth and the concentration adjusted to level 3 on the Mac Farland scale.
  • the boxes are immediately placed in an oven at 37 ° C in a microaerophilic atmosphere (Generbag-BioMérieux system).
  • Reading is carried out after 3 days of incubation.
  • Each box showing bacteriostasis is replicated with a sterile velvet disc on an agar box without oligonucleotide.
  • the bactericide is judged on the absence of subculture.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

La présente invention concerne des oligonucléotides antisens qui hybrident sélectivement avec un ou plusieurs gènes nécessaires à l'action de l'Helicobacter pylori (H pylori), en particulier avec l'antigène immuno-dominant associé à la cytotoxicité CagA, la flagelline (flaA et flaB) ou la cytotoxine vacuolante (vacA). L'invention concerne aussi des compositions pharmaceutiques contenant ces antisens et leur utilisation dans le traitement de gastrique atrophique, d'ulcère peptique et duodénal, d'atrophie gastrique ou de carcinome gastrique.

Description

Oligonucleotides antisens pour inhiber le rôle de Y Helicobacter pvlori
La présente invention concerne des oligonucleotides antisens qui hybrident sélectivement avec un ou plusieurs gènes nécessaires à l'action de l'Helicobacter pylori {H pylori), des compositions pharmaceutiques les contenant et leur utilisation en tant qu'inhibiteurs de l'Helicobacter pylori.
L'Helicobacter pylori {H pylori) est un bactérium microaérophilique, gram négatif, colonisant les jonctions et interstices intercellulaires de la muqueuse gastrique humaine et établissant une infection chronique avec de nombreuses manifestations cliniques diverses telles que la gastrite atrophique, l'ulcère peptique et duodenal, l'atrophie gastrique et le carcinome gastrique. Les nombreux isolats cliniques ont permis la classification du H pylori en deux groupes basés sur la présence ou l'absence de cytotoxine vacuolante. Des expérimentations in vitro ont démontré que le caractère virulent du bactérium pourrait être lié à sa mobilité et à la présence de cytotoxine vacuolante. De même, l'expression de cytotoxine est en relation étroite avec la présence d'un antigène CagA immuno-dominant exposé en surface. Ainsi, l'inhibition de la mobilité du bactérium et/ou l'expression du facteur cytotoxique pourrait prévenir la manifestation des symptômes cliniques. L'une des manières d'inhiber ces facteurs consiste à utiliser des oligonucleotides antisens pour bloquer l'expression du codage des gènes pour l'antigène immuno-dominant associé à la cytotoxicité CagA et/ou la flagelline (flaA et flaB) et/ou la cytotoxine vacuolante (vacA).
La stratégie antisens est une approche thérapeutique ayant pour but la modulation sélective de l'expression des gènes par une association hautement sélective d'un enchaînement de nucléotides (oligonucleotides) avec sa séquence supplémentaire sur l'ARN ou l'ADN, et par conséquent l'inhibition de la synthèse de la protéine correspondante.
Les oligonucleotides complémentaires aux produits de transcription sont appelés oligonucleotides "antisens". Les oligonucleotides ayant la même séquence que les produits de transcription sont nommés oligonucleotides "sens". Initialement, ces composés étaient logiquement destinés à inhiber la formation d'un produit du gène par la suppression de l'ARN messager correspondant, via le mécanisme d'hydrolyse catalysé par la RNAse H. Bientôt, il est apparu que le mécanisme d'action de ces oligonucleotides antisens n'était pas si simple. Ces oligonucleotides peuvent interagir avec un certain nombre de cibles cellulaires ne comprenant pas d'acide nucléique. Ces oligonucleotides peuvent interagir avec le gène, pour former des structures en triple hélice et inhiber la formation des produits de transcription. Les oligonucleotides peuvent interagir avec les jonctions intron-exon de l'ARN pre-messager, interférant ainsi avec l'épissage correct du produit de transcription. Les oligonucleotides peuvent s'hybrider avec l'ARN messager dans le cytoplasme, en formant un complexe ARN-ADN, qui est rapidement dégradé par l'enzyme ARNase H ou en empêchant le complexe ribosome de se glisser sur l'ARN messager et bloquant ainsi la traduction. Les oligonucleotides et, plus particulièrement, les oligonucleotides modifiés, peuvent interagir avec un nombre de produits cellulaires tels que les protéines. Ces interactions peuvent être séquence-spécifiques (par exemple : facteurs de transcription) ou non-séquence-spécifiques (par exemple : facteurs de croissance).
Les oligonucleotides sont très souvent utilisés comme sonde par exemple pour la détection ou l'isolation de polynucléotide et/ou comme amorce pour la transcription et/ou la réplication de séquences cibles (INNIS N.A. et ses collaborateurs, PCR Protocols : A guide to methods and applications, 1990, Académi Press, Inc. San Diego. California). C'est ainsi que des oligonucleotides ont été utilisés lors d'études sur l'Helicobacter pylori (WO-A-93/18150), et plus particulièrement sur la cytotoxine vacuolante vacA (PHADNIS S. et ses collaborateurs. Infection and immunity, vol. 62. No. 5, 1994, pp. 1557- 1565) ou l'antigène CagA (TUMMURU M. et ses collaborateurs. Infection and Immunity, vol. 61 , Nos. 5, 3, Washington US, pp. 1799- 1809 et COVACCI A. et ses collaborateurs. Proceedings of the national academy of sciences of USA. vol. 90, No. 12. 1993, Washington US. pp. 5791-5795) via la PCR (Polymerase Chain Reaction). Ces oligonucleotides n'ont jamais été utilisés à des fins thérapeutiques dans le domaine de l'Helicobacter pylori ; par ailleurs la détermination du pouvoir antibactérien n'a jamais été suggéré.
L'invention concerne des oligonucleotides antisens qui hybrident sélectivement avec un ou plusieurs gènes nécessaires à l'action de l'Helicobacter pylori afin d'inhiber le rôle de l'Helicobacter pylori. L'invention concerne plus particulièrement des oligonucleotides antisens qui hybrident sélectivement avec le codage des gènes pour l'antigène immuno-dominant associés à la cytotoxicité CagA et/ou la flagelline (flaA et flaB) et/ou la cytotoxine vacuolante (vacA). Les oligonucleotides comprennent de préférence 8 à 35 unités. De manière très préférentielle, l'oligonucléotide comprend de 10 à 25 unités.
Le terme "oligonucléotide" représente un oligonucléotide constitué de bases, de liaisons phosphodiester et de sucres bien connus par l'homme du métier. Le terme oligonucleotides représente également des oligonucleotides dont le squelette a été modifié soit sur toute la longueur de l'oligonucléotide, soit en position 5' et / ou en position 3'. En effet, les oligonucleotides sont sensibles à des enzymes, les nucléases qui les découpent en nucléotides ; les oligonucleotides deviennent résistants aux nucléases par modification, par exemple, de la nature chimique du sucre lui-même ou l'enchaînement phosphate-sucre : ainsi, l'enchaînement phosphodiester peut être remplacé, par exemple, par un enchaînement phosphorothioate, phosphorodithioate, méthylphosphonate, phosphoramidate, phosphoéthyltriester, butylamidate, piperazidate ou morpholidate. D'autres types de modifications peuvent être apportés sur toute la longueur de l'oligonucléotide ou à ses extrémités 5' et / ou 3', pour rendre les oligonucleotides plus résistants à un environnement biologique. Les liaisons phosphate entre les nucléotides peuvent être aussi remplacées par des liaisons amide (acides nucléiques peptidiques). Par ailleurs, le passage transmembranaire de l'oligonucléotide peut être favorisé en rendant ce dernier plus hydrophobe : ceci peut être obtenu, par exemple, en attachant des substituants hydrophobes tels que le cholestérol ou des groupements aromatiques, ou un polymère. Des bases modifiées peuvent être incorporées partiellement ou sur toute la longueur de l'oligonucléotide. Les nucléotides modifiés conformationnellement résistants aux nucléases ou avec des propriétés améliorées d'absorption intracellulaire ou d'hybridation peuvent être incorporées partiellement ou sur toute la longueur de l'oligonucléotide. Ainsi, l'expression "oligonucléotide" représente également un nucléotide dont le squelette est modifié selon l'une quelconque des méthodes décrites ci-dessus ou de toute autre méthode bien connue de l'homme du métier.
Plus particulièrement, l'invention a pour objet les oligonucleotides des séquences SEQ ID No. 1 à SEQ ID No. 24 respectivement ; les oligonucleotides des séquences SEQ ID No 13-24 sont des oligonucleotides dont toutes les liaisons phosphodiester ont été modifiées en phosphorothioate. Leurs séquences complémentaires ou les oligonucleotides sens selon l'invention, peuvent aussi être utilisées. L'invention concerne également des oligonucleotides antisens comprenant au moins un fragment de l'une des séquences sélectionnées parmi les séquences SEQ ID No. 1 à SEQ ID No. 24.
Les oligonucleotides de l'invention peuvent être synthétisés par l'une quelconque des méthodes connues de synthèse chimique des oligonucleotides. Les oligonucleotides antisens sont très avantageusement préparés en utilisant n'importe quel synthétiseur automatique d'acide nucléique commercialisé. L'une de ces méthodes de synthèse des oligonucleotides est la méthode des beta-cyanoéthyl phosphoramidate décrite par S. L. Beaucage & ses collaborateurs (Tet. Let. 22 (1981), 1859- 1862).
L'invention a également pour objet des compositions pharmaceutiques contenant, à titre de principe actif, au moins un oligonucléotide antisens selon l'invention, mélangé avec un excipient et/ou support pharmaceutiquement acceptable, selon le mode d'administration choisi. La composition peut être administrée au moyen d'un traitement topique ou systémique ou local ; elle peut prendre la forme d'un liquide pour une injection, liposome, formulation à libération prolongée ou sous forme de gel, d'onguent pour une application locale ou sous toute autre forme acceptable selon le mode d'administration choisi.
Enfin, l'invention concerne l'utilisation d'oligonucléotides selon l'invention, pour la préparation de médicaments pour inhiber le rôle de l'Helicobacter pylori. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation d'oligonucléotides selon l'invention, pour la préparation de médicaments pour le traitement de gastrique atrophique, d'ulcère peptique ou duodenal, d'atrophie gastrique ou de carcinome gastrique.
Le rôle inhibiteur des oligonucleotides est déterminée par l'étude du pouvoir antibactérien sur des souches ά' Helicobacter pylori.
Ainsi cette étude comprend d'une pan l'étude du pouvoir bactériostatique en milieu gélose contenant les oligonucleotides. La bactériostase est définie par la concentration d'oligonucléotide ne laissant subsister aucune ou moins de 5 colonies ά'Helicobacter pylori après 3 jours d'incubation à 37° C en atmosphère microaérophile.
Elle comprend d'autre pan l'étude du pouvoir bactéricide éventuel par implication en utilisant la "technique du velours". Les souches testées sont les suivantes : une souche type ύ'Helicobacter pylori de référence (CIP 10 3995) sensible au Métronidazole, et une souche C résistante au Métronidazole.
Le milieu de culture utilisé est le Gélose Columbia additionnée de 10 % de sang de cheval, fraîchement préparée.
Etude du pouvoir hactériostatique :
On incorpore chaque oligonucléotide dans le milieu maintenu en surfusion à 45° C, de façon à obtenir des concentrations finales dans les géloses de 1, 10 et 20 μM. Les géloses sont coulées dans des boîtes de Pétri stériles de 45 mm de diamètre sous un volume de 10 ml.
Après solidification, les géloses sont séchées 18 heures à la température du laboratoire.
Les souches ά'Helicobacter pylori sont mises en suspension en bouillon Brucella et la concentration ajustée au niveau 3 de l'échelle de Mac Farland.
Les boîtes sont immédiatement placées dans une étuve à 37° C en atmosphère microaérophile (Système Generbag-BioMérieux).
La lecture est réalisée après 3 jours d'incubation.
Etude du pouvoir bactéricide :
Chaque boîte montrant une bactériostase est répliquée avec un disque de velours stérile sur une boîte de gélose sans oligonucléotide.
Après 3 jours d'incubation à 37° C en atmosphère microaérophile, la bactéricide est jugée sur l'absence de subculture.
Ainsi, avec les oligonucleotides SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 20. SEQ ID No. 21 et SEQ ID No. 22, à la concentration de 20 μM. on observe une nette diminution de la pousse bactérienne des deux souches testées.

Claims

REVENDICATIONS
1. Un oligonucléotide antisens qui hybride sélectivement avec un ou plusieurs gènes nécessaires à l'action de l'Helicobacter pylori.
2. Un oligonucléotide selon la revendication 1, comprenant au moins un fragment de l'une des séquences sélectionnées parmi les séquences SEQ ID No. 1 à SEQ ID No. 24.
3. Un oligonucléotide selon la revendication 1, qui hybride sélectivement avec le codage des gènes pour l'antigène immuno-dominant associé à la cytotoxicité CagA et/ou la flagelline (flaA et flaB) et/ou la cytotoxine vacuolante (vacA).
4. Un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications précédentes, qui comprend de 2 à 50 unités.
5. Un oligonucléotide selon la revendication 4, qui comprend de 8 à 35 unités.
6. Un oligonucléotide selon la revendication 5, qui comprend de 10 à 25 unités.
7. Un oligonucléotide selon la revendication 5, dont la séquence est sélectionnée parmi les séquences SEQ ID No. 1 à SEQ ID No. 12.
8. Un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications précédentes, dont le squelette est modifié.
9. Un oligonucléotide selon la revendication 8. dans lequel la base nucléotidique est modifiée.
10. Un oligonucléotide selon la revendication 9. dans lequel la base nucléotidique modifiée présente la conformation α-anomer.
11. Un oligonucléotide selon la revendication 8, dans lequel au moins un des groupes de liaison est modifié.
12. Un oligonucléotide selon la revendication 1 1. dans lequel au moins un des groupes de liaison est modifié en phosphorothioate. 13. Un oligonucléotide selon la revendication 12, dont la séquence est sélectionnée parmi les séquences SEQ ID No.
13 à SEQ ID No. 24.
14. Un oligonucléotide selon la revendication 8, dans lequel soit la position 5' ou la position 3', soit les positions 5' et 3' est modifiée.
15. Un oligonucléotide selon la revendication 14, dans lequel soit la position 5' ou la position 3', soit les positions 5' et 3' est modifiée par la substitution d'un groupe hydrophobe.
16. Un oligonucléotide selon la revendication 14, dans lequel soit la position 5' ou la position 3', soit les positions 5' et 3' est modifiée par la substitution d'un groupe protecteur.
17. Compositions thérapeutiques contenant, à titre de principe actif, au moins un oligonucléotide selon l'une quelconque des revendications précédentes, mélangé avec un excipient et/ou support pharmaceutiquement acceptable, selon le mode d'administration choisi.
18. Utilisation d'un oligonucléotide tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 16, pour la préparation de médicaments pour le traitement de gastrique atrophique.
19. Utilisation d'un oligonucléotide tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 16, pour la préparation de médicaments pour le traitement d'ulcère peptique et duodenal.
20. Utilisation d'un oligonucléotide tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 16, pour la préparation de médicaments pour le traitement d'atrophie gastrique.
21. Utilisation d'un oligonucléotide tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 16, pour la préparation de médicaments pour le traitement de carcinome gastrique.
PCT/FR1996/000407 1995-03-17 1996-03-18 Oligonucleotides antisens pour inhiber le role de l'helicobacter pylori WO1996029399A1 (fr)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU51497/96A AU5149796A (en) 1995-03-17 1996-03-18 Antisense oligonucleotides for inhibiting helicobacter pylori activity
US08/930,371 US5977340A (en) 1995-03-17 1996-03-18 Antisense oligonucleotides for inhibiting helicobacter pylori activity
EP96908152A EP0815217A1 (fr) 1995-03-17 1996-03-18 Oligonucleotides antisens pour inhiber le role de l'helicobacter pylori

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9505438.3A GB9505438D0 (en) 1995-03-17 1995-03-17 Antisense oligonucleotides
GB9505438.3 1995-03-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1996029399A1 true WO1996029399A1 (fr) 1996-09-26

Family

ID=10771394

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR1996/000407 WO1996029399A1 (fr) 1995-03-17 1996-03-18 Oligonucleotides antisens pour inhiber le role de l'helicobacter pylori

Country Status (6)

Country Link
US (1) US5977340A (fr)
EP (1) EP0815217A1 (fr)
AU (1) AU5149796A (fr)
CA (1) CA2215449A1 (fr)
GB (1) GB9505438D0 (fr)
WO (1) WO1996029399A1 (fr)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998003533A1 (fr) * 1996-07-24 1998-01-29 Oligos Etc. And Oligos Therapeutics, Inc. Oligonucleotides anti-sens utilises comme agents antibacteriens
WO1998016658A3 (fr) * 1996-10-16 1998-08-20 Innogenetics Nv Sondes, procedes et kits destines a la detection et au typage d'acides nucleiques d'helicobacter pylori dans des echantillons biologiques
WO1998032467A3 (fr) * 1997-01-24 1998-09-17 Antivirals Inc METHODE ET CONJUGUE DE TRAITEMENT D'INFECTIONS A $i(H. PYLORI)
US6211162B1 (en) 1998-12-30 2001-04-03 Oligos Etc. Inc. Pulmonary delivery of protonated/acidified nucleic acids
US6211349B1 (en) 1998-12-30 2001-04-03 Oligos Etc., Inc. Protonated/acidified nucleic acids and methods of use
CN1105185C (zh) * 1998-11-30 2003-04-09 上海晶莹生物技术有限公司 基因表达幽门螺杆菌细胞毒素相关基因a蛋白抗原制备工艺
US6627215B1 (en) 1998-12-30 2003-09-30 Oligos Etc. Inc. Devices for improved wound management
US7868162B2 (en) 1998-12-30 2011-01-11 Lakewood-Amedex, Inc. Antimicrobial and antiviral compounds and methods for their use

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
ATE393221T1 (de) 1999-11-29 2008-05-15 Avi Biopharma Inc Gegen bakterielle 16s und 23s rrnas gerichtete ungeladene antisense oligonukleotide und deren verwendungen
AU781676B2 (en) * 2000-01-04 2005-06-02 Avi Biopharma, Inc. Antisense antibacterial cell division composition and method
SG177000A1 (en) 2001-08-17 2012-01-30 Coley Pharm Gmbh Combination motif immune stimulatory oligonucleotides with improved activity
CA2502015A1 (fr) 2002-12-11 2004-06-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Acides nucleiques 5'cpg et leurs methodes d'utilisation
WO2006085973A2 (fr) 2004-07-02 2006-08-17 Avi Biopharma, Inc. Technique et compose antibacterien antisens
WO2008064304A2 (fr) * 2006-11-22 2008-05-29 Trana Discovery, Inc. Compositions et procédés pour l'identification d'inhibiteurs de la synthèse des protéines
EP2201118B1 (fr) * 2007-09-14 2012-04-18 Trana Discovery Compositions et procédés pour l'identification d'inhibiteurs d'une infection rétrovirale
CA2776044A1 (fr) * 2008-09-29 2010-04-01 Trana Discovery, Inc. Procedes de criblage pour identifier des inhibiteurs specifiques de staphylococcus aureus
US11020417B2 (en) 2015-06-04 2021-06-01 Sarepta Therapeutics, Inc Methods and compounds for treatment of lymphocyte-related diseases and conditions

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993018150A1 (fr) * 1992-03-02 1993-09-16 Biocine S.P.A. Proteines d'helicobacter pylori utiles pour des vaccins et des diagnostics

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5527678A (en) * 1994-10-21 1996-06-18 Vanderbilt University CagB and CagC genes of helicobacter pylori and related compositions

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993018150A1 (fr) * 1992-03-02 1993-09-16 Biocine S.P.A. Proteines d'helicobacter pylori utiles pour des vaccins et des diagnostics

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PHADNIS, S. ET AL.: "Pathological significance and molecular characterization of the vacuolating toxin gene of Helicobacter pylori.", INFECTION AND IMMUNITY 62 (5). 1994. 1557-1565, XP002008916 *
TELFORD, J. ET AL.: "UNRAVELLING THE PATHOGENIC ROLE OF HELICOBACTER PYLORI IN PEPTIC ULCER: POTENTIAL NEW THERAPIES AND VACCINES", TRENDS IN BIOTECHNOLOGY, vol. 12, no. 10, 1 October 1994 (1994-10-01), pages 420 - 426, XP000483385 *
TUMMURU, M. ET AL.: "Cloning and expression of a high-molecular mass major antigen of Helicobacter pylori: evidence of linkage to cytotoxin production", INFECTION AND IMMUNITY, vol. 61, no. 5, WASHINGTON US, pages 1799 - 1809, XP002008917 *
ZON, G.: "Oligonucleotide analogues as potential chemotherapeutic agents", PHARMACEUTICAL RESEARCH 5 (1988);539-549, XP002008915 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998003533A1 (fr) * 1996-07-24 1998-01-29 Oligos Etc. And Oligos Therapeutics, Inc. Oligonucleotides anti-sens utilises comme agents antibacteriens
WO1998016658A3 (fr) * 1996-10-16 1998-08-20 Innogenetics Nv Sondes, procedes et kits destines a la detection et au typage d'acides nucleiques d'helicobacter pylori dans des echantillons biologiques
WO1998032467A3 (fr) * 1997-01-24 1998-09-17 Antivirals Inc METHODE ET CONJUGUE DE TRAITEMENT D'INFECTIONS A $i(H. PYLORI)
US6124271A (en) * 1997-01-24 2000-09-26 Avi Biopharma, Inc. Method and conjugate for treating H. pylori infection
CN1105185C (zh) * 1998-11-30 2003-04-09 上海晶莹生物技术有限公司 基因表达幽门螺杆菌细胞毒素相关基因a蛋白抗原制备工艺
US6211162B1 (en) 1998-12-30 2001-04-03 Oligos Etc. Inc. Pulmonary delivery of protonated/acidified nucleic acids
US6211349B1 (en) 1998-12-30 2001-04-03 Oligos Etc., Inc. Protonated/acidified nucleic acids and methods of use
US6627215B1 (en) 1998-12-30 2003-09-30 Oligos Etc. Inc. Devices for improved wound management
US7868162B2 (en) 1998-12-30 2011-01-11 Lakewood-Amedex, Inc. Antimicrobial and antiviral compounds and methods for their use
US8435960B2 (en) 1998-12-30 2013-05-07 Lakewood-Amedex, Inc. Devices for improved wound management

Also Published As

Publication number Publication date
EP0815217A1 (fr) 1998-01-07
US5977340A (en) 1999-11-02
CA2215449A1 (fr) 1996-09-26
GB9505438D0 (en) 1995-05-03
AU5149796A (en) 1996-10-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO1996029399A1 (fr) Oligonucleotides antisens pour inhiber le role de l'helicobacter pylori
EP0698034B1 (fr) Oligonucleotides phosphorothioates triesters et procede de preparation
JP3600831B2 (ja) トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ‐β）の免疫抑制効果の治療用アンチセンス−オリゴヌクレオチド類
EP1124835B1 (fr) Application de fuco-oligosaccharides sulfates a la protection des plantes
EP0828827A2 (fr) OLIGONUCLEOTIDES ANTISENS POUR BLOQUER LA SYNTHESE DU RECEPTEUR DE L'IgE
JPH08502040A (ja) ハイブリッド オリゴヌクレオチド ホスホロチオエート
JPH11501509A (ja) ｔ（１４：１８）転座を有する腫瘍細胞に関連するアンチセンス転写産物とこの腫瘍細胞の診断及び治療に有用なオリゴデオキシヌクレオチド
JPH09506770A (ja) ｃ−ｅｒｂＢの発現が関与する疾患を予防及び治療するためのアンチセンス核酸
JPH08512300A (ja) ニューロン損傷、変性及び細胞壊死の予防及び／又は治療、並びに腫瘍の治療を目的とするアンチセンス核酸を含む医薬用組成物
EP2250267B1 (fr) siRNA CATIONIQUES, SYNTHÈSE ET UTILISATION POUR L'ARN INTERFÉRENCE
EP0695354B1 (fr) Oligonucleotides antisens destines au traitement des effets immuno-suppresseurs du facteur transformant de croissance-beta1 (tgf-beta1)
US20180002692A1 (en) Sequence Specific and Organism Specific Antimicrobials and Related Materials and Methods
EP0692535A1 (fr) Oligonucléotides pour inhiber le rÔle des isoprényl protéine transférases
CA3173776A1 (fr) Petits arn derives d'arn de transfert chimiquement modifies (arnts) pour cibler des bacteries pathogenes
EP0953649A1 (fr) Silicone azotée utile pour compacter les séquences d'acides nucléiques et utilisation pour la transfection de cellules
EP1254253B1 (fr) Oligonucleotides monocatenaires, sondes, amorces et procede de detection des spirochetes
AU2003236659B2 (en) Cooperative oligonucleotides
WO1997038097A1 (fr) Oligonucleotides cooperatifs
WO2024172148A1 (fr) Agent d'acide nucléique à liaison multivalente
CA3237033A1 (fr) Methodes de traitement de maux de tete et de migraines avec des inhibiteurs de sous-unite 11 de canal sodique voltage-dependant (scn11a)
CA2306445A1 (fr) Moyens de documentation de repertoires en immunorecepteurs nkr et/ou en immunorecepteurs contreparties activatrices ou non inhibitrices d'immunorecepteurs nkr
AU2003236659A1 (en) Cooperative oligonucleotides
JP2005245314A (ja) テロメレース抑制能を有する微生物とテロメレース抑制剤

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AM AT AU AZ BB BG BR BY CA CH CN CZ DE DK EE ES FI GB GE HU IS JP KE KG KP KR KZ LK LR LS LT LU LV MD MG MK MN MW MX NO NZ PL PT RO RU SD SE SG SI SK TJ TM TR TT UA UG US UZ VN AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): KE LS MW SD SZ UG AT BE CH DE DK ES FI FR GB GR IE IT LU MC NL PT SE BF BJ CF CG CI CM GA GN

DFPE Request for preliminary examination filed prior to expiration of 19th month from priority date (pct application filed before 20040101)
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2215449

Country of ref document: CA

Ref country code: CA

Ref document number: 2215449

Kind code of ref document: A

Format of ref document f/p: F

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 08930371

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1996908152

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 1996908152

Country of ref document: EP

REG Reference to national code

Ref country code: DE

Ref legal event code: 8642

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Ref document number: 1996908152

Country of ref document: EP