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WO1998048015A1 - Regulateur de transcription - Google Patents

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WO1998048015A1
WO1998048015A1 PCT/JP1998/001782 JP9801782W WO9848015A1 WO 1998048015 A1 WO1998048015 A1 WO 1998048015A1 JP 9801782 W JP9801782 W JP 9801782W WO 9848015 A1 WO9848015 A1 WO 9848015A1
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WO
WIPO (PCT)
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lys
ser
glu
leu
transcriptional regulator
Prior art date
Application number
PCT/JP1998/001782
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Michael H. Jones
Original Assignee
Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc. filed Critical Chugai Research Institute For Molecular Medicine, Inc.
Priority to AU68539/98A priority Critical patent/AU6853998A/en
Priority to EP98914082A priority patent/EP0976825A4/en
Publication of WO1998048015A1 publication Critical patent/WO1998048015A1/ja
Priority to US09/418,780 priority patent/US6504009B1/en
Priority to US10/293,822 priority patent/US20030083470A1/en

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/689—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to pregnancy or the gonads
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • G—PHYSICS
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    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4712—Muscle proteins, e.g. myosin, actin, protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Definitions

  • the present invention relates to a novel transcriptional regulator having a bromodomain and its gene.
  • the bromodomain is a characteristic amino acid motif found in transcriptional regulators, and is thought to be involved in interactions with other transcriptional regulators. Usually, one or two proteins having a promoter domain (Tamkun JW et al. (1992). Nuc. Acids. Res., 20, 2603, Haynes SR et al. (1992). Nuc. Acids. Res. , 20, 2603) or 5 (Nicolas RH and Goodwin GH. (1996). Gene, 175 (12), 233-240). This motif can be found in a wide range of animals, including yeast (Winston F et al. (1987). Genetics, 115, 649-656; Laurent BC et al. (1991). Proc. Nat. Acad. Sci.
  • Drosophila homeo gene (Digan ME et a 1. (1986). Dev. Biol., 114, 161-169, Tamkun JW et al. (1992). Cell, 68, 56 1-572) and mammals (Denis GV, and Green MR. (1996). Genes and Devel., 10, 261-271, Yang XJ et al. (1996). Nature, 382, 319-324) It has been identified as a transcription regulatory gene.
  • the RING3 gene was identified during extensive analysis of the sequence of the class II human major histocompatibility complex (Beck et al., (1992) DNA Seq., 2: 203-210).
  • the protein encoded by O3 is the human gene ⁇ D26362 '' (Nomura et al., (1994) DNA Res., 1: 223-229) and the Drosophila gene ⁇ fsh '' (Digan et al., (1986) 114: 161-169). All three genes encode proteins with two conserved motifs. That is, two copies of the promo domain and the PEST sequence.
  • the promodomain is a 59-63 amino acid motif that is thought to be involved in protein-protein interactions and regulates transcription (Tamkun JW et al. (1992). Nuc. Acids. Res., 20, 2603, Haynes SR et al. (199 2). Nuc. Acids. Res., 20, 2603).
  • the PEST sequence is characteristic of proteins undergoing rapid intracellular degradation (Rodgers et al., (1986) Science, 234: 364), proline (P), glutamate (E), serine (S), and threonine. This is the (T) cluster.
  • the protein encoded by “RING3” has a molecular weight of 90 kD and has a serine-resonin kinase activity (Denis and Green, (1996) Genes and Devel., 10:26 1-271). Comparing the sequences of “RING3” and “fsh” to the kinase domain of known serine-threonine kinases, the subdomains of the kinase motif are conserved, but the order is not fixed (mostly the c-mos of the proto-oncogene c-mos). (Similar to the corresponding subdomain).
  • RING3 The kinase activity of “RING3” is stimulated by intermouthin-1 (IL-1) and forskolin, but not by certain other cytokines (Denis and Green, (1996) Genes and Devel. , 10: 261-271) o
  • IL-1 intermouthin-1
  • cytokines Denis and Green, (1996) Genes and Devel. , 10: 261-271) o
  • the role of "RING3” in pathways regulating leukemia induction due to the close relationship between kinase activity and proliferative phase in chronic lymphocytic leukemia and acute lymphoblastic leukemia Probably suggested (Denis and Green, (1996) Genes and Devel., 10: 261-271) o
  • Genetic analysis of Drosophila "fsh” indicates putative "fsh” phosphorylation activity Interaction with a possible "trithorax” transcription factor is shown (Digan et al., (1986) Dev.
  • P300 / CBP” and “PCAF” have been linked to tumorigenesis.
  • the “p300” protein and the “CBP” protein are encoded by two different genes, but are closely related and are therefore often referred to as “p300 / CBP”.
  • Mutations in “CBP” have been found in familial and sporadic cancers. Mutations in “CBP” cause Rubinstein-Taybi syndrome, which forms various malignancies in patients (Petrij et al., (1995) Nature, 376: 348-51).
  • CBP chronic myeloid leukemia
  • MOZj t (8; 16) (pll; pl3) translocation
  • This fusion protein may be responsible for the induction of leukemia due to abnormal acetyltransferase activity (Brovmwell and Allis, (1996) Curr. Opin. Genet. De. vel., 6: 176-184)
  • Mutations in “p300” have also been identified in sporadic colorectal and gastric cancers (Muraoka et al., (1996) Oncogene, 12, 1565-1569).
  • PCAF has histone acetyltransferase activity.
  • PCAF can reduce E1A-related proliferation in cultured cells when expressed exogenously (Yang et al., (1996) Nature, 382: 319-324).
  • one of the primary mechanisms of E1A oncogene activity may be inhibition of the "PCAF"-"p300" interaction.
  • the transcriptional regulatory factor having the promoter domain has its dysregulation closely related to various diseases, for example, cancer. For this reason, transcriptional regulators having a promoter domain have attracted attention in recent years as new targets for cancer therapy. Disclosure of the invention
  • the present inventors first searched the database using the sequence of the transcription regulatory factor "RING3" having a promoter domain sequence, and showed high homology with "RING3". Multiple EST sequences were found. Next, primers were prepared based on one sequence of these ESTs, and a polymerase chain reaction was performed on the human testis cDNA library using the primers. As a result, they succeeded in isolating a gene encoding a novel transcription factor having a promo domain. In addition, the present inventors have performed expression analysis of the isolated gene, and as a result, have found that the gene is strongly expressed in testis cells having high proliferative ability.
  • the transcriptional regulator It has been found that, by utilizing the gene and its gene, it is possible to screen for a factor that interacts with the transcriptional regulator, ie, a drug candidate compound that controls the activity of the transcriptional regulator.
  • the present invention relates to a novel transcription regulatory factor having a promo domain and a gene thereof, and a method for screening related factors and drug candidate compounds using the same, more specifically,
  • (II) specifically hybridizes with a DNA consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 And having a chain length of at least 15 nucleotides.
  • transcriptional regulator refers to a protein that regulates gene expression.
  • promo domain refers to a motif of amino acids involved in protein-protein interactions conserved in transcriptional regulators involved in signal-dependent transcription.
  • the present invention relates to a novel transcription factor having a promoter domain.
  • the amino acid sequence of a protein named “TSB” included in the transcriptional regulator of the present invention is shown in SEQ ID NO: 1, and the nucleotide sequence of cMA encoding the protein is shown in SEQ ID NO: 2.
  • the TS Bj protein is generally known as a region involved in the interaction with other transcription factors, and is a motif characteristic of transcription factors involved in cancer. It has the amino acids 49 to 109 and 292 to 352 of the amino acid sequence described in No. 1 (FIG. 1) and shows strong expression in testis cells (Example 4).
  • TLB transcriptional regulators with other promodomains
  • the transcriptional regulator of the present invention can be prepared as a recombinant protein using a gene recombination technique, or can be prepared as a natural protein.
  • the transcriptional regulator of the present invention includes both of these proteins.
  • the transcriptional regulatory factor of the present invention is a recombinant protein, for example, a DNA encoding the transcriptional regulatory factor of the present invention described later (for example, a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2) may be used as a suitable expression vector. It can be prepared by a method such as incorporation into a host cell, and purification from a transformant obtained by introducing this into a host cell.
  • the protein is a natural protein, for example, immunizing a small animal with the recombinant protein or a partial peptide thereof
  • a column using the antibody obtained by the above is prepared, and affinity chromatography using an extract of a tissue or a cell (eg, testis) having high expression of the transcription regulatory factor of the present invention is performed using the column.
  • the present invention also relates to a protein functionally equivalent to the “TSB” protein.
  • a method for isolating such a protein a method for introducing a mutation into an amino acid in a protein is well known to those skilled in the art. That is, for those skilled in the art, for example, a site-directed mutagenesis system using PCR (GIBC0-BRL, Gaithersburg, Maryland), a site-directed mutagenesis method using oligonucleotides (Kramer, W.
  • the transcription regulatory factor of the present invention has an amino acid sequence in which one or more amino acids have been substituted, deleted or added in the amino acid sequence of the “TSB” protein (SEQ ID NO: 1), and has a function similar to that of the “TSB” protein. It includes transcriptional regulators that are equivalent to each other.
  • the number of amino acids to be mutated is not particularly limited as long as it maintains the function equivalent to that of the “TSB” protein. Usually, it is within 50 amino acids, preferably within 30 amino acids, more preferably within 10 amino acids, and further preferably within 5 amino acids.
  • the mutation site may be any site as long as it retains a function equivalent to that of the “TSB” protein.
  • a transcription factor that is a DNA encoded by a DNA that hybridizes with a DNA encoding the “TSB” protein and that is functionally equivalent to the “TSB” protein is also included in the transcription factor of the present invention.
  • Organisms for isolating functionally equivalent proteins include, besides humans, for example, mouse, rat, mouse, monkey, bush, and the like.
  • the stringency of the hybridization for isolating DNA encoding a functionally equivalent protein can be appropriately selected by those skilled in the art, but is usually ⁇ 42 ° (, 2xSSC, 0.1 SDSj level, preferably
  • TLB generally means a homology of 40% or more, preferably 60% or more, more preferably 80% or more, more preferably 95% or more in the amino acid sequence with the protein. It is preferable that the transcription regulatory factor isolated by such a hybridization technique has a promoter domain. Serine threonine kinase domain, which phosphorylates other proteins, PEST sequence, which is a characteristic sequence of proteins undergoing rapid intracellular degradation, and nuclear translocation, which transports proteins to the nucleus It may have a signal sequence. The presence or absence of the promo domain in the protein can be determined by searching the bromo domain motif PR0SITE database on MASIS (manufactured by Hitachi Software Engineering).
  • the present invention also relates to a DNA encoding the protein of the present invention.
  • the DNA of the present invention is not particularly limited as long as it can encode the protein of the present invention, and includes cDNA, genomic DNA, chemically synthesized MA, and the like. If the DNA of the present invention is a cDNA, it can be prepared, for example, by preparing a primer based on the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 and performing plaque PCR (for example, see “Affara NA et al (1994) Genomics, 22, 205-210 ”). In the case of genomic DNA, for example, “Qiagen genomic DNA kitsj (Qiagen, Hilden, Germany)” It can be prepared by a method.
  • the nucleotide sequence of the obtained DNA can be determined by a conventional method using a commercially available "dye terminator sequencing kit" (manufactured by Applied Biosystems). As described later, the DNA of the present invention can be used for production of recombinant proteins, gene therapy, and the like.
  • the present invention also relates to a vector into which the DNA of the present invention has been inserted.
  • the vector of the present invention includes various vectors depending on the purpose, such as a vector for expressing the protein of the present invention in vivo, a vector for preparing recombinant protein, and the like.
  • Vectors used for expressing the protein of the present invention in vivo include, for example, adenovirus vector “pAdexLcw” and retrovirus vector “pZIPneo”.
  • pAdexLcw adenovirus vector
  • pZIPneo retrovirus vector
  • the expression vector is not particularly limited. For example, “pREP4” (manufactured by Qiagen, Hilden, Germany) is used when E.
  • coli is used, and rsp- is used when yeast is used.
  • insect cells such as QOlj (Stratagene, La Jolla, California), and the like, "BAC-to-BAC baculovirus expression systemj (GIBCO-BRL, Gaithersburg, Maryland) is preferable.
  • BAC-to-BAC baculovirus expression systemj GEBCO-BRL, Gaithersburg, Maryland
  • CH0 cells, COS cells, NIH3T3 cells, etc. are used, for example, “LacSwitch II expression system (Stratagene, La Jolla, California)” is suitable. Insertion of the DNA of the invention can be performed by a conventional method.
  • the present invention relates to a transformant carrying the DNA of the present invention in an expressible manner.
  • the transformants of the present invention include those having the above-described vector into which the DNA of the present invention has been inserted, those having the DNA of the present invention integrated in the host genome, and the like. ) As long as the NA is maintained so that it can be expressed, all forms of NA are included.
  • the cell into which the vector of the present invention is introduced is not particularly limited. When used to express the protein of the present invention for the purpose of gene therapy by an ex vivo method, various cells can be used as target cells depending on the type of disease.
  • the protein of the present invention For the purpose of producing quality, for example, Escherichia coli, yeast, animal cells, insect cells, and the like can be used in combination with the vector used.
  • the introduction of the vector into the cell can be performed by, for example, an electroporation method, a calcium phosphate method, or the like. Separation and purification of the recombinant protein from the transformant prepared for producing the recombinant protein can be performed by a conventional method.
  • the present invention also relates to an antibody that binds to the transcription regulatory factor of the present invention.
  • the form of the antibody of the present invention is not particularly limited, and includes a monoclonal antibody as well as a polyclonal antibody. Also included are antisera obtained by immunizing rabbits and the like with the protein of the present invention, polyclonal antibodies and monoclonal antibodies of all classes, and humanized antibodies and human antibodies obtained by genetic recombination.
  • the antibody of the present invention can be prepared by the following method.
  • a polyclonal antibody for example, a small animal such as a heron is immunized with the transcription regulator of the present invention or a partial peptide thereof to obtain serum, which is then purified by an affinity column to which the transcription regulator of the present invention is coupled.
  • the fraction can be prepared by obtaining a fraction that recognizes only the transcriptional regulator of the present invention, and further purifying immunoglobulin G or M from this fraction using a protein A or protein G column.
  • a monoclonal antibody In the case of a monoclonal antibody, a small animal such as a mouse is immunized with the transcriptional regulator of the present invention, the spleen is excised from the mouse, and the spleen is crushed into cells, and mouse myeloma cells and reagents such as polyethylene glycol are used. And a clone that produces an antibody that binds to the transcriptional regulator of the present invention is selected from the resulting fused cells (hybridomas).
  • the protein can be prepared by purifying the protein of the present invention using a coupled affinity column or the like.
  • the antibody of the present invention is useful for purification and detection of the transcription regulatory factor of the present invention. In addition to being used, it can be used as an agent for suppressing the function of the transcription regulatory factor of the present invention.
  • human or humanized antibodies are effective in terms of immunogenicity.
  • Human antibodies or humanized antibodies can be prepared by methods known to those skilled in the art.
  • a human antibody can be prepared by immunizing a mouse in which the immune system has been replaced with a human with the transcriptional regulator of the present invention.
  • humanized antibodies are obtained by cloning antibody genes from monoclonal antibody-producing cells.
  • the antibody can be prepared by the CDR grafting method in which the antigen determination site is transplanted to an existing human antibody.
  • the present invention also relates to a method for screening a compound that binds to the transcriptional regulator of the present invention.
  • the screening method of the present invention comprises (a) a step of bringing the transcription regulator of the present invention into contact with a test sample, and (b) a step of selecting a compound having an activity of binding to the transcription regulator of the present invention.
  • the test sample used for screening is not particularly limited, and examples thereof include a synthetic low-molecular compound library, a purified protein, a gene library expression product, a synthetic peptide library, a cell extract, and a cell culture supernatant. No.
  • a method for selecting a compound having an activity of binding to the transcriptional regulator of the present invention many methods known to those skilled in the art can be used.
  • Screening for a protein that binds to the transcriptional regulator of the present invention may be performed, for example, by using a phage vector (such as a testis) from a tissue or a cell (eg, testis) that is expected to express the protein that binds to the transcriptional regulator of the present invention. Gtll, ⁇ , etc.), immobilize the protein expressed on LB-agarose and expressed on a filter, and immobilize the transcriptional regulator of the present invention on a biotin-labeled or GST protein. "Western blotting method" (Skolnik EY), in which a plaque expressing the protein to be bound is detected using streptavidin or an anti-GST antibody.
  • the transcription regulatory factor of the present invention is fused with an SRF binding region or GAL4 binding region and expressed in yeast cells, and a cell that is expected to express a protein that binds to the transcription regulatory factor of the present invention.
  • a cMA library that is expressed in a form fused with the VP16 or GAL4 transcriptional activation region is prepared, introduced into the yeast cells, and the cDNA derived from the library is isolated from the detected positive clone to obtain E. coli.
  • a culture supernatant or a cell extract of a cell expected to express a protein that binds to the transcription regulatory factor of the present invention is placed on an affinity column on which the transcription regulatory factor of the present invention is immobilized, It can also be achieved by purifying proteins that specifically bind to the column.
  • a method of allowing a synthetic compound, a natural product bank, or a random phage peptide display library to act on the immobilized transcription regulator of the present invention to screen binding molecules, and a combinatorial chemistry technique Screening using high throughput (Wrighton NC; Farrell FX; Chang R; Kashyap AK; Barbone FP; Mulcahy LS; Johnson DL; Barrett RW; Jolli ffe LK; Dower WJ., Small peptides as potent mimetics of the protein horm one erythropoietin, Science (UNITED STATES) Jul 26 1996, 273 p458-64, Ve rdine GL., The combinatorial chemistry of nature.Nature (ENGLAND) Nov 7 1996, 384 pll-13 Hogan JC Jr., Directed combinatorial chemistry.Nature (ENGLAND) Nov 7 1996, 384 pl7-9) Methods for isolating low molecular weight compounds, proteins (or their genes
  • the compound isolated by the screening method of the present invention is a candidate for a drug for promoting or inhibiting the activity of the transcriptional regulator of the present invention.
  • a compound isolated by the screening method of the present invention can be formulated into a drug by a known pharmaceutical production method and used.
  • it is administered to a patient along with a pharmacologically acceptable carrier or vehicle (such as saline, vegetable oils, suspending agents, surfactants, stabilizers, etc.).
  • Administration can be transdermal, intranasal, transbronchial, intramuscular, intravenous, or oral, depending on the nature of the compound.
  • the present invention also relates to a DNA that specifically hybridizes with a DNA encoding a “TSB” protein and has a chain length of at least 15 nucleotides.
  • “specifically hybridize” means that under normal hybridization conditions, preferably under stringent hybridization conditions, cross-hybridization significantly occurs with DNA encoding other proteins. Point out that there is no Such DNA can be used as a probe for detecting and isolating the DNA encoding the “TSB” protein and as a primer for amplifying it.
  • Specific primers include, for example, the primer described in SEQ ID NO: 3 or 4.
  • FIG. 1 is a diagram showing a nucleic acid sequence of “TSB” aligned with amino acid translation of an open reading frame.
  • the three motifs identified by the PR0SITE database search are underlined. There are two bromodomains (amino acids 49-109 and 292-352) and a PEST sequence (amino acids 636-672).
  • FIG. 2 shows a comparison of the amino acid sequences of the putative kinase domains of “TSB”, “RING3”, and “fsh”.
  • the kinase subdomain is disclosed in "Denis and Green (1996) Genes and Devel., 10: 261-271", and excludes subdomains I to II. The number corresponds to the position of the translation of "TSB”. conserveed residues are shaded.
  • Figure 3 shows the location of the “TSB”. Relative positions on the chromosome lp relative to adjacent markers determined by radiation hybrid analysis are shown.
  • Fig. 4 shows the result of Northern analysis of "TSB" in normal tissue.
  • 1 is heart, 2 is brain, 3 is placenta, 4 is lung, 5 is liver, 6 is skeletal muscle, 7 is kidney, 8 is spleen, 9 is spleen, 10 is thymus, 11 is prostate, 12 is testis, 13 is the ovary, 14 is the small intestine, 15 is the colon (mucosal lining), and 16 is the peripheral blood leukocytes.
  • B shows Northern analysis of ⁇ TSB '' in cancer cell lines, 1 is promyelocytic leukemia HL-60, 2 is HeLaS3 cell, 3 is chronic myeloid leukemia K-56 2, 4 is lymphoblastic leukemia M0LT Reference numerals -4 and 5 indicate bakit's lymphoma Raji, 6 indicates colon adenocarcinoma SW480, 7 indicates lung cancer A549, and 8 indicates melanoma G361. The position of the molecular weight marker is shown on the side. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
  • a 175 bp PCR product was obtained.
  • a testis cDNA library (HL3024a manufactured by Clontech) was screened. Note that all probes, more [Non - 3 2 P] randomly primed labeled with dCTP, Kuromasupin 10 column (Chromaspin 10 columns)
  • 0RF is followed by a short 3 'untranslated region of 60 bp, terminated by a polyA tail with a polyadenylation signal (ATTAAA) 20 bp upstream.
  • TAB testis specific bromodomain
  • the nucleotide sequence including the deduced amino acid sequence of “TSB” is shown in SEQ ID NO: 2.
  • the deduced amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 1.
  • the base sequence was determined by ABI377 automatic sequencer (Perkin Elmer) using ABI dye-mixer chemistry.
  • kinase subdomain I which encodes a putative ATP-binding domain
  • kinase subdomain II which encodes a catalytic lysine
  • the probe also cross-hybridized with two ubiquitously expressed mRNAs (about 2.0 and 4.5 kb). These transcripts may be identical to other promodomain genes because the probe contains a sequence encoding the bromodomain.
  • MAGE famili et al. Van der Bruggen et al., (1991) Science,
  • the transcription factor of the present invention is thought to form a family with the transcription factor "RING3", which is thought to be involved in cancer, and has strong expression in testis. Accordingly, the transcriptional regulator of the present invention and DNA encoding the transcriptional regulator may be used as a therapeutic agent for cell proliferative diseases and cancers, particularly testicular cancer, or as a therapeutic or contraceptive agent based on spermatogenesis or dysfunction. It can also be used for wings. In addition, antibodies and other compounds that bind to the transcriptional regulator of the present invention can be used as the therapeutic agent.
  • J9S usy usy usy ⁇ 3 ⁇ 4 ⁇ sAq n ⁇ g s ⁇ tq s ⁇ tq s nyg sA s ⁇ JG ⁇ s ⁇ i n ⁇ g
  • Lys Pro Pro Ala Lys Lys lie Met Met Ser Lys Gin Glu Leu His Ser
  • Sequence type nucleic acid
  • AAT ACT AAG AAA AAT GGG CGA TTG ACA AAT CAA CTT CAG TAT CTA CAA 213 Asn Thr Lys Lys Asn Gly Arg Leu Thr Asn Gin Leu Gin Tyr Leu Gin AAA GTT GTC CTA AAG GAT TTA TGG AAG CAT AGT TTT TCA TGG CCC TTT 261 Lys Val Val Leu Lys Asp Leu Trp Lys His Ser Phe Ser Trp Pro Phe
  • AAG CGT CTT GCA AAG CTT CAG GAG CAG CTT AAA GCT GTA CAT CAA CAG 1413 Lys Arg Leu Ala Lys Leu Gin Glu Gin Leu Lys Ala Val His Gin Gin
  • J3s J9S J8S J9 S J9S nif) J9s ri9i Say JGS ⁇ 3 ⁇ 4 ⁇ usy 3 ⁇ 41V ACOZ 30V 39V 09V OOV 33V 9V3 I3V 913 V93 331 113 IW W9 113 100 VW
  • Sequence type nucleic acid

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Description

転写調節因子 技術分野
本発明は、 ブロモドメインを有する新規な転写調節因子およびその遺伝子に関 する。 背景技術
ブロモドメインは、 転写調節因子に見られる特徴的なアミノ酸のモチーフであ り、 他の転写調節因子などとの相互作用に関与すると考えられている。 プロモド メインを有するタンパク質は、 通常、 1個または 2個 （Tamkun JW et al.(1992). Nuc. Acids. Res., 20, 2603、 Haynes SR et al. (1992). Nuc. Acids. Res., 20, 2603) 、 あるいは 5個 （Nicolas RH and Goodwin GH. (1996). Gene, 175 (1 2)， 233-240) のブロモドメインモチーフを含んでいる。 このモチーフの見られる 動物は広範囲にわたっており、 例えば、 酵母 (Winston F et al. (1987). Geneti cs, 115, 649-656、 Laurent BC et al.(1991). Proc. Nat. Acad. Sci.， USA 88， 2687-2691) 、 ショウジヨウバエ （drosophila) ホメォ遺伝子 （Digan ME et a 1.(1986). Dev. Biol., 114， 161-169、 Tamkun JW et al.(1992). Cell, 68， 56 1-572) や哺乳動物 (Denis GV， and Green MR. (1996). Genes and Devel., 10, 261-271、 Yang X J et al.(1996). Nature, 382， 319-324) の転写調節遺伝子な どで同定されている。
ブロモドメインを有する転写調節因子を比較すると、 これらのすべては活発に 増殖している細胞でシグナル依存性の転写を調節している （Tamkun JW et al.(l 992). Cell, 68， 561-572、 Haynes SR et al. (1992). Nuc. Acids. Res., 20, 2603) 。 この特徴は、 プロモドメインを有するタンパク質をコードする遺伝子の 正常な制御が行われない場合に発癌する可能性があることを示唆している。 現に、 実験によって、 プロモドメインを有するヒトの転写調節因子、 「RING3」 、 「p30 0/CBPj 、 及び 「PCAF」 が癌に影響していることが示されている。
このうち 「RING3」 遺伝子は、 クラス IIヒト主要組織適合抗原系 （Beck et al., (1992) DNA Seq.， 2: 203-210)の配列を広く解析する間に同定された。 應 3によ りコードされるタンパク質は、 ヒト遺伝子 「D26362」 (Nomura et al.,(1994) DN A Res., 1:223- 229)およびショウジヨウバエ遺伝子 「fsh」 (Digan et al.,(1986) 114: 161- 169)と相同性を有する。 3つの遺伝子は全て、 二つの保存されたモチー フを有するタンパク質をコードする。 即ち、 2コピーのプロモドメインおよび PES T配列である。 プロモドメインは、 タンパク質一タンパク質相互作用に関与すると 考えられている、 59〜63アミノ酸のモチーフであり転写を調節するタンパク質（T amkun JW et al.(1992). Nuc. Acids. Res., 20, 2603、 Haynes SR et al. (199 2). Nuc. Acids. Res., 20, 2603)に見出される。 PEST配列は、 急速な細胞内分 解 (Rodgers et al., (1986) Science, 234:364)を受けるタンパク質の特徴である、 プロリン （P) 、 グルタミン酸 （E) 、 セリン （S) 、 およびスレオニン （T) のク ラスターである。
「RING3」 によりコードされるタンパク質は 90kDの分子量を有し、 セリン一スレ ォニンキナーゼ活性を有する（Denis and Green, (1996) Genes and Devel., 10:26 1-271)。 「RING3」 および 「fsh」 の配列を既知のセリン一スレオニンキナーゼの キナーゼドメインと比較すると、 キナーゼモチーフのサブドメインが保存されて いるが、 その順序は一定でない （ほとんどが癌原遺伝子 c-mosの相当するサブドメ インと類似している） ことが示された。 「RING3」 のキナーゼ活性は、 インター口 ィキン- 1 (IL-1) およびフォルスコリンにより刺激されるが、 他の一定の領域の サイ トカインでは刺激されない（Denis and Green, (1996) Genes and Devel.，10 :261-271 )o 慢性リンパ性白血病および急性リンパ性白血病におけるキナーゼ活性 と増殖期との密接な関係より、 白血病誘発を調節する経路における 「RING3」 の役 割が、 示唆される（Denis and Green, (1996) Genes and Devel.,10:261-271)o シ ョウジヨウバエの 「fsh」 の遺伝子解析により、 推定の 「fsh」 リン酸化活性の標 的である可能性がある 「trithorax」 転写因子との相互作用が示される（Digan et al.，（1986) Dev. Biol. , 114: 16 169、 Mozer and Dawid, (1989) Pro Natl, Ac ad. Sci.86 :3738-3742) 。 「trithorax」 遺伝子とそのヒト相同 「ALL-1」 は、 白血 病休止点に見られる多くの遺伝子に共通の C4HC3ジンクフィンガ一を有する （Aas land et al.,(1995) Trends Biochem. Sci. 20: 56-59、 Saha et al.,(1995) Pr oc. Nat. Acad. Sci.92: 9737-9741 )0
一方、 「RING3」 に加えて、 少なくとも 2つの他のプロモドメインタンパク質、
「p300/CBP」 および 「PCAF」 が、 腫瘍形成と関連づけられている。 「p300」 タン パク質と 「CBP」 タンパク質は 2つの異なる遺伝子によりコードされるが、 極めて 密接に関連しており、 したがって 「p300/CBP」 と呼ばれることが多い。 「CBP」 の 変異は、 家族性癌および散発性癌に見出されている。 「CBP」 の変異は、 患者に様 々な悪性腫瘍を形成するルビンスタイン—テイビ （Rubinstein-Taybi) 症候群の 原因となる（Petrij et al.,(1995) Nature, 376: 348-51)。 さらに、 いくつかの 急性骨髄性白血病において、 「CBP」 は、 「t(8;16)(pll;pl3)転座」 において 「M OZj と融合している（Borrow et al.,(1996) Nature Genet.， 14:33-41 )。 この融合 タンパク質は、 異常なァセチルトランスフェラーゼ活性により、 白血病誘発の原 因となっている可能性がある（Brovmwell and Allis,(1996) Curr.Opin. Genet. De vel.，6:176-184)。 「p300」 の変異は、 散発性の大腸癌および胃癌においても同定 されており（Muraoka et al., (1996) Oncogene, 12， 1565-1569)、 「p300」 が染色 体 22qにおける腫瘍抑制因子遺伝子であることが示唆されている。 癌における 「p 300/CBPj の役割を示すもう一つの事実は、 それが既知の癌遺伝子と相互作用する ということである。 例えば、 それは、 「c-Myb」 （Dai et al.，（1996) Genes and Devel., 10:528-540)および「c- Fos」 転写因子（Bannister and Kouzarides, (199 6) Nature 384:641-643) の共同活性化因子 (coactivator) であり、 ルス 「E1A」 タンパク質が結合する (Yang et al . , ( 1996 ) Nature, 382 :319- 324)。 「E1A」 の 「p300/CBP」 との相互作用は、 プロモドメインタンパク質 「PCAF」 に より阻害される。
また、 「p300/CBP」 と同様、 「PCAF」 はヒス トンァセチルトランスフェラ一ゼ 活性を有する。 「PCAF」 は、 外因的に発現させたときに、 培養細胞における E1Aに 関連する増殖を減少させることができる（Yang et al. , ( 1996) Nature, 382:319-3 24)。 従って、 E1A癌遺伝子活性の第一の機構の一つは、 「PCAF」 - 「p300」 相互作 用の阻害であるのかもしれない。
このようにプロモドメインを有する転写調節因子は、 その調節異常が種々の疾 患、 例えば、 癌と密接に関与していると考えられる。 このためプロモドメインを 有する転写調節因子は、 癌治療のための新しい標的として近年注目されている。 発明の開示
本発明は、 ブロモドメインを有する新規な転写調節因子および該転写調節因子 をコードする DNAを提供することを課題とする。 また、 本発明は該 DNAが挿入され たべクタ—、 該 MAを保持する形質転換体、 該形質転換体を利用した組み換えタン パク質の生産方法を提供することを課題とする。 さらに、 本発明は、 該転写調節 因子に結合する化合物のスクリーニング方法を提供することを課題とする。
本発明者らは上記課題を解決するために、 まず、 プロモドメイン配列を有する 転写調節因子 「RING3」 の配列を用いてデ一夕一ベースを検索し、 「RING3」 と高 い相同性を示す複数の EST配列を見出した。 次いで、 これら ESTの一つの配列を基 にプライマーを調製し、 ヒト精巣 cDNAライブラリ一に対して該プライマーを利用 したポリメラ一ゼ連鎖反応を行った。 その結果、 プロモドメインを有する新規な 転写調節因子をコードする遺伝子を単離することに成功した。 また、 本発明者ら は単離した遺伝子の発現解析を行った結果、 該遺伝子が増殖能の高い精巣細胞に おいて強く発現していることを見出した。 さらに、 本発明者らは、 該転写調節因 子およびその遺伝子を利用することにより、 該転写調節因子に相互作用する因子 ゃ該転写調節因子の活性を制御する医薬品候補化合物のスクリーニングを行うこ とが可能であることを見出した。
即ち、 本発明は、 プロモドメインを有する新規な転写調節因子およびその遺伝 子、 並びにこれらを利用した関連因子および医薬品候補化合物のスクリ一ニング 方法に関し、 より具体的には、
( I ) 配列番号： 1に記載のアミノ酸配列、 または該アミノ酸配列において 1 若しくは複数のアミノ酸が置換、 欠失、 若しくは付加したアミノ酸配列を有し、 ブロモドメインを有する転写調節因子、
( 2 ) 配列番号： 2に記載の塩基配列からなる DNAとハイプリダイズする DNAが コードし、 プロモドメインを有する転写調節因子、
(3) ( 1) または （2) に記載の転写調節因子をコードする DNA、
(4) (3) に記載の DNAを含むベクタ一、
(5) (3) に記載の DNAを発現可能に保持する形質転換体、
(6) (5) に記載の形質転換体を培養する工程を含む、 （ 1) または （2) に記載の転写調節因子の製造方法、
(7) ( 1) または （2) に記載の転写調節因子に結合する抗体、
(8) ( 1) または （2) に記載の転写調節因子に結合する活性を有する化合 物のスクリーニング方法であって、
(a) ( 1) または （2) に記載の転写調節因子と被験試料とを接触させる工程、
(b) ( 1) または （2) に記載の転写調節因子と結合する活性を有する化合物 を選択する工程、 を含む方法、
(9) (8) に記載の方法により単離しうる、 （ 1) または （2) に記載の転 写調節因子に結合する活性を有する化合物、
( 10) 天然由来である、 （9) に記載の化合物、
( I I) 配列番号： 2に記載の塩基配列からなる DNAと特異的にハイブリダイズ し、 少なくとも 15ヌクレオチドの鎖長を有する DNA、 に関する。
なお、 本発明において 「転写調節因子」 とは、 遺伝子の発現を調節している夕 ンパク質を指す。 また、 「プロモドメイン」 とは、 シグナル依存的な転写に関連 している転写調節因子中で保存されているタンパク質 -タンパク質相互作用に関与 するアミノ酸のモチーフを指す。
本発明は、 プロモドメインを有する新規な転写調節因子に関する。 本発明の転 写調節因子に含まれる 「TSB」 と命名されたタンパク質のアミノ酸配列を配列番号 ： 1に、 該タンパク質をコードする cMAの塩基配列を配列番号： 2に示す。 「TS Bj タンパク質は、 一般に他の転写調節因子などとの相互作用に関与する領域とし て知られており、 癌などに関与している転写調節因子に特徴的なモチーフである、 プロモドメイン （配列番号： 1に記載のアミノ酸配列の 49〜； 109番目および 292〜 352番目） を有する （図 1 ) 。 また、 精巣細胞において強い発現を示す （実施例 4 ) 。 これら事実は、 「TSB」 タンパク質が、 他のプロモドメインを有する転写調 節因子と同様に、 細胞増殖性疾患および癌に関連している可能性、 特に精巣癌に 関連している可能性を示唆するものであり、 この機能において特にプロモドメイ ンが重要な役割を果たしていると考えられる。 このため 「TSB」 タンパク質や後述 するこれと機能的に同等な転写調節因子には、 細胞増殖性疾患や癌の予防や治療 への利用が考えられる。
本発明の転写調節因子は、 遺伝子組み換え技術を用いて組み換えタンパク質と して調製する他、 天然のタンパク質として調製することも可能である。 本発明の 転写調節因子には、 これら双方のタンパク質が含まれる。 本発明の転写調節因子 は組み換えタンパク質であれば、 例えば、 後述する本発明の転写調節因子をコー ドする DNA (例えば、 配列番号： 2に記載の塩基配列からなる DNA) を適当な発現 ベクタ一に組み込み、 これを宿主細胞に導入して得た形質転換体から精製するな どの方法により調製することが可能である。 また、 天然のタンパク質であれば、 例えば、 組み換えタンパク質若しくはその部分ぺプチドを小動物に免疫すること により得た抗体を用いたカラムを調製し、 本発明の転写調節因子の発現の高い組 織もしくは細胞 （例えば、 精巣） の抽出物に対し該カラムを用いたァフィ二ティ 一クロマトグラフィーを行うなどの方法により調製することが可能である。
また、 本発明は、 「TSB」 タンパク質と機能的に同等なタンパク質に関する。 こ のようなタンパク質を単離するための方法としては、 タンパク質中のアミノ酸に 変異を導入する方法が当業者によく知られている。 即ち、 当業者にとっては、 例 えば、 PCRによる部位特異的変異誘発システム （GIBC0-BRL社、 Gaithersburg，Mar yland) 、 オリゴヌクレオチドによる部位特異的変異誘発法 （Kramer, W. and Frit z,HJ ( 1987) Methods in Enzymol . , 154: 350-367) など種々の方法を利用して、 配 列番号： 1に示された 「TSB」 タンパク質において、 その機能に影響を与えないァ ミノ酸を適宜置換などして、 「TSB」 タンパク質と機能的に同等なタンパク質を単 離することは通常行いうることである。 また、 アミノ酸の変異は自然界において も生じることがある。 本発明の転写調節因子には、 「TSB」 タンパク質 （配列番号 ： 1 ) 中のアミノ酸配列において 1もしくは複数のアミノ酸が置換、 欠失もしくは 付加されたアミノ酸配列を有し、 「TSB」 タンパク質と機能的に同等な転写調節因 子も含まれる。 変異するアミノ酸の数は、 「TSB」 タンパク質と同等の機能を保持 する限り特に制限はない。 通常、 50アミノ酸以内であり、 好ましくは 30アミノ酸 以内であり、 さらに好ましくは 10アミノ酸以内であり、 さらに好ましくは 5ァミノ 酸以内である。 変異部位は、 「TSB」 タンパク質と同等の機能を保持する限り、 い かなる部位であってもよい。
また、 機能的に同等なタンパク質を単離するための他の方法としては、 ハイブ リダィゼーシヨン技術 (Sambrook,J et al. , Molecular Cloning 2nd ed.9.47-9. 58,Cold Spring Harbor Lab. press, 1989) を利用する方法が当業者によく知られ ている。 即ち、 当業者であれば、 「TSB」 タンパク質をコードする DNA (配列番号
： 2 ) 若しくはその一部を基に、 これと相同性の高い DNAを単離して、 該 DNAから
「TSB」 夕ンパク質と機能的に同等な夕ンパク質を得ることも通常行いうることで ある。 このように 「TSB」 タンパク質をコードする DNAとハイブリダィズする DNAが コードするタンパク質であって、 「TSB」 タンパク質と機能的に同等な転写調節因 子もまた本発明の転写調節因子に含まれる。 機能的に同等なタンパク質を単離す るための生物としては、 ヒト以外に、 例えば、 マウス、 ラット、 ゥシ、 サル、 ブ 夕などが挙げられる。 機能的に同等なタンパク質をコードする DNAを単離するため のハイブリダィゼーシヨンのストリンジエンシーは、 当業者であれば適宜選択す ることができるが、 通常、 「42° (、 2xSSC、 0. 1% SDSj 程度であり、 好ましくは
「50°C、 2xSSC、 0. 1% SDSj 程度、 あるいは 「65°C、 2xSSC、 0. 1% SDSj 程度と、 温度を上げる程に高い相同性を有する DNAを得ることができる。 高い相同性とは、
「TSB」 タンパク質とアミノ酸配列において、 通常、 40%以上の相同性、 好ましく は 60%以上の相同性、 さらに好ましくは 80%以上の相同性、 さらに好ましくは 95 %以上の相同性を指す。 このようなハイプリダイゼーシヨン技術により単離され る転写調節因子は、 プロモドメインを保持していることが好ましい。 また、 他の タンパク質のリン酸化を行う機能を有するセリンスレオニンキナーゼドメイン、 急速な細胞内分解を受けるタンパク質に特徴的な配列である PEST配列や、 タンパ ク質を核へ移行させる機能を担う核移行シグナル配列を有しうる。 なお、 タンパ ク質中にプロモドメインが存在するか否かは、 MASIS (日立ソフトウェアェンジ ニァリング社製） 上のブロモドメインモチーフ PR0SITEデーターベースを検索する ことにより決定することが可能である。
また、 本発明は、 上記本発明のタンパク質をコードする DNAに関する。 本発明の DNAとしては、 上記本発明のタンパク質をコードしうるものであれば特に制限 は なく、 cDNA、 ゲノム DNA、 化学合成 MAなどが含まれる。 本発明の DNAは、 cDNA で あれば、 例えば、 配列番号： 2に記載の塩基配列を基にプライマーを調製し、 プ ラーク PCRを行うことにより調製することが可能である （例えば、 文献 「Affara NA et al ( 1994) Genomics, 22, 205-210」 参照） 。 また、 ゲノム DNAであれば、 例 えば、 「Qiagen genomic DNA kitsj (Qiagen社製， Hi lden, Germany) を用いた常 法により調製することが可能である。 得られた DNAの塩基配列は、 市販の 「dye t erminator sequencing kit」 (Applied Biosystems社製) などを用いて常法によ り決定することが可能である。 本発明の DNAは、 後述するように、 組み換えタンパ ク質の生産や遺伝子治療などに利用することが可能である。
また、 本発明は、 本発明の DNAが挿入されたベクターに関する。 本発明のベクタ 一には、 本発明のタンパク質を生体内で発現させるためのベクタ一、 組み換え夕 ンパク質を調製するためのベクタ一などが目的に応じて種々のべクタ一が含まれ る。 本発明のタンパク質を生体内で発現させるため （特に遺伝子治療のため） に 用いられるベクターとしては、 例えば、 アデノウイルスベクタ一 「pAdexLcw」 や レ卜ロウィルスべクタ一 「pZIPneo」 などが挙げられる。 本発明のタンパク質を生 産する目的においてべクタ一を使用する場合には、 特に、 発現ベクターが有用で ある。 発現べクタ一としては特に制限はないが、 例えば、 大腸菌 （E. coli) を用 いる場合には 「pREP4」 (Qiagen社製， Hilden, Germany) などが、 酵母を用いる場 合には rsp-QOlj (Stratagene社製， La Jolla, California) などが、 昆虫細胞を 用いる場合には 「BAC-to- BAC baculovirus expression systemj (GIBCO- BRL社製， Gaithersburg, Maryland) などが好ましい。 また、 哺乳動物細胞、 例えば、 CH0細 胞、 COS細胞、 NIH3T3細胞などを用いる場合には、 例えば、 「LacSwitch I I expr ess ion systeny (Stratagene社製， La Jolla, California) などが好適である。 ベ クタ一への本発明の DNAの挿入は、 常法により行うことができる。
また、 本発明は、 本発明の DNAを発現可能に保持する形質転換体に関する。 本発 明の形質転換体には、 本発明の DNAが挿入された上記ベクターを保持するもの、 本 発明の DNAが宿主ゲノム内に組み込まれているものなどが含まれるが、 本発明の！） NAを発現可能に保持している限り、 あらゆる存在形態のものが含まれる。 本発明 のベクターが導入される細胞としては特に制限はない。 ex vivo法による遺伝子治 療目的で本発明のタンパク質を発現させるために用いる場合には、 疾患の種類に 応じて種々の細胞を標的細胞とすることが可能である。 また、 本発明のタンパク 質を製造する目的の場合には、 用いるベクタ一との組み合わせにおいて、 例えば、 大腸菌、 酵母、 動物細胞、 昆虫細胞などを用いることが可能である。 細胞へのぺ クタ一の導入は、 例えば、 電気的穿孔法、 リン酸カルシウム法などの方法で行う ことが可能である。 なお、 組み換えタンパク質を製造するために作製した形質転 換体からの組み換えタンパク質の分離、 精製は、 常法により行うことが可能であ る。
また、 本発明は、 本発明の転写調節因子と結合する抗体に関する。 本発明の抗 体の形態には、 特に制限はなく、 ポリクローナル抗体の他、 モノクローナル抗体 も含まれる。 また、 ゥサギなどに本発明のタンパク質を免疫して得た抗血清、 す ベてのクラスのポリクローナル抗体およびモノク口一ナル抗体、 さらに遺伝子組 み換えによるヒト型化抗体、 ヒト抗体も含まれる。 本発明の抗体は、 以下の方法 により調製することが可能である。 ポリクローナル抗体であれば、 例えば、 本発 明の転写調節因子若しくはその部分べプチドをゥサギなどの小動物に免疫し血清 を得て、 これを本発明の転写調節因子をカツプリングさせたァフィ二ティーカラ ムにより、 本発明の転写調節因子のみを認識する画分を得て、 さらにこの画分か ら免疫グロブリン Gあるいは Mを、 プロテイン A、 あるいはプロテイン Gカラムによ り精製することにより調製することができる。 また、 モノクローナル抗体であれ ば、 本発明の転写調節因子をマウスなどの小動物に免疫を行い、 同マウスより脾 臓を摘出し、 これをすりつぶして細胞にし、 マウスミエローマ細胞とポリエチレ ングリコールなどの試薬により融合させ、 これによりできた融合細胞 （ハイプリ ドーマ） の中から、 本発明の転写調節因子に結合する抗体を産生するクローンを 選択する。 次いで、 得られたハイプリ ドーマをマウス腹腔内に移植し、 同マウス より腹水を回収し、 得られたモノクローナル抗体を、 例えば、 硫安沈殿、 プロテ イン A、 プロテイン Gカラム、 DEAEイオン交換クロマトグラフィー、 本発明のタン パク 質をカヅプリングしたァフィ二ティ一カラムなどにより精製することで調製 することが可能である。 本発明の抗体は、 本発明の転写調節因子の精製や検出に 用いられる他、 本発明の転写調節因子の機能を抑制するための薬剤として用いる ことも可能である。 抗体を薬剤として用いる場合には、 免疫原性の点で、 ヒト抗 体またはヒト化抗体が有効である。 ヒト抗体またはヒト化抗体は当業者に公知の 方法により調製することができる。 例えば、 ヒト抗体は、 免疫系をヒトと入れ換 えたマウスに本発明の転写調節因子を免疫することにより調製することが可能で ある。 また、 ヒト化抗体は、 モノクローナル抗体産生細胞から抗体遺伝子をクロ
—ニングし、 その抗原決定部位を既存のヒト抗体に移植する CDRグラフト法により 調製することが可能である。
また、 本発明は、 本発明の転写調節因子に結合する化合物のスクリーニング方 法に関する。 本発明のスクリーニング法は、 （a ) 本発明の転写調節因子と被験 試料とを接触させる工程、 および （b ) 本発明の転写調節因子に結合する活性を 有する化合物を選択する工程を含む。 スクリーニングに用いる被検試料としては 特に制限はなく、 例えば、 合成低分子化合物のライブラリ一、 精製タンパク質、 遺伝子ライブラリーの発現産物、 合成ペプチドのライブラリ一、 細胞抽出液、 細 胞培養上清などが挙げられる。 本発明の転写調節因子に結合する活性を有する化 合物を選択する方法としては、 当業者に公知の多くの方法を用いることができる。 本発明の転写調節因子と結合するタンパク質のスクリーニングは、 例えば、 本 発明の転写調節因子と結合するタンパク質を発現してることが予想される組織若 しくは細胞 （例えば、 精巣） よりファージベクタ一 （え gtll , ΖΑΡΠなど） を用い た cDNAライブラリーを作製し、 これを LB-ァガロース上で発現させフィルターに発 現させたタンパク質を固定し、 本発明の転写調節因子をピオチンラベル、 あるい は GSTタンパク質との融合タンパク質として精製し、 これを上記フィルターと反応 させ、 結合するタンパク質を発現しているプラークを、 ストレプトアビジン、 あ るいは抗 GST抗体により検出する 「ウェストウエスタンブロッテイング法」 （Sko lnik EY, Margolis B, Mohammad 1 M, Lowenstem E, Fischer R, Drepps A, Ull rich A, and Schlessinger J ( 1991 )Cloning of PI3 kinase - associated p85 ut i lizing a novel method for expression/cloning of target proteins for rec eptor tyrosine kinases. Cel l 65, 83-90) により実施することが可能である。 また、 本発明の転写調節因子を SRF結合領域または GAL4結合領域と融合させて酵母 細胞の中で発現させ、 本発明の転写調節因子と結合するタンパク質を発現してい ることが予想される細胞より、 VP16または GAL4転写活性化領域と融合する形で発 現するような cMAライブラリ一を作製し、 これを上記酵母細胞に導入し、 検出さ れた陽性クローンからライブラリ一由来 cDNAを単離して大腸菌に導入して発現さ せる （酵母細胞内で本発明の転写調節因子と結合するタンパク質が発現すると、 両者の結合によりレポーター遺伝子が活性化され、 陽性のクローンが確認でき る） 「twoハイブリツ ドシステム」 （ 「MATCHMARKER Two-Hybrid System」 ， 「Mam malian MATCHMAKER Two-Hybrid Assay Kitj , 「MATCHMAKER One-Hybrid Systemj (いずれも clontech社製）、 「HybriZAP Two-Hybrid Vector Systemj ( stratagene 社製）、 文献 「Dalton S, and Treisman R ( 1992)Characterization of SAP-1, a protein recruited by serum response factor to the c-fos serum response element. Cell 68, 597-612」 ） に従い実施することも可能である。 さらに、 本 発明の転写調節因子を固定したァフィ二ティ一カラムに本発明の転写調節因子と 結合するタンパク質を発現していることが予想される細胞の培養上清もしくは細 胞抽出物をのせ、 カラムに特異的に結合するタンパク質を精製することにより実 施することも可能である。
また、 固定した本発明の転写調節因子に、 合成化合物、 または天然物バンク、 もしくはランダムファージぺプチドディスプレイライブラリーを作用させ、 結合 する分子をスクリ一ニングする方法や、 コンビナトリアルケミストリ一技術によ るハイスル一プットを用いたスクリーニング （Wrighton NC; Farrell FX; C hang R; Kashyap AK; Barbone FP; Mulcahy LS; Johnson DL ; Barrett RW; Jolli ffe LK; Dower WJ. , Small peptides as potent mimetics of the protein horm one erythropoietin, Science (UNITED STATES) Jul 26 1996, 273 p458- 64、 Ve rdine GL. , The combinatorial chemistry of nature . Nature (ENGLAND) Nov 7 1996， 384 pll-13 Hogan JC Jr. , Directed combinatorial chemistry. Nature (ENGLAND) Nov 7 1996, 384 pl7-9) により本発明の転写調節因子に結合する、 低分子化合物、 タンパク質 （またはその遺伝子） 、 ペプチドなどを単離する方法 も当業者に周知の技術である。 本発明のスクリ一ニング法により単離される化合 物は、 本発明の転写調節因子の活性を促進または阻害するための薬剤の候補とな る。 本発明のスクリーニング方法により単離される化合物を薬剤として用いる場 合には、 公知の製剤学的製造法により製剤化して用いることが可能である。 例え ば、 薬理学上許容される担体または媒体 （生理食塩水、 植物油、 懸濁剤、 界面活 性剤、 安定剤など） とともに患者に投与される。 投与は、 化合物の性質に応じて、 絰皮的、 鼻腔内的、 経気管支的、 筋内的、 静脈内、 または経口的に行うことが可 能である。
また、 本発明は、 「TSB」 タンパク質をコードする DNAと特異的にハイブリダィ ズし、 少なくとも 15ヌクレオチドの鎖長を有する DNAに関する。 ここで 「特異的に ハイブリダィズする」 とは、 通常のハイブリダィゼ一シヨン条件下、 好ましくは ストリンジヱン卜なハイブリダィゼ一シヨン条件下で、 他のタンパク質をコード する DNAとクロスハイプリダイゼ一シヨンが有意に生じないことを指す。 このよう な DNAは、 「TSB」 タンパク質をコードする DNAを検出、 単離するためのプローブと して、 また増幅するためのプライマーとして利用可能である。 具体的なプライマ 一としては、 例えば、 配列番号： 3または 4に記載のプライマ一が挙げられる。 図面の簡単な説明
図 1は、 オープンリーディングフレームのアミノ酸翻訳と整列させた 「TSB」 の 核酸配 列を示す図である。 また、 PR0SITEデータベース検索により同定された 3つ のモチーフを下線で示す。 2つのブロモドメイン（アミノ酸 49- 109および 292- 352 ) および PEST配列 （アミノ酸 636- 672)が存在する。 図 2は、 「TSB」 、 「RING3」 、 および 「fsh」 の推定キナーゼドメインのァミノ 酸配列 の比較を示す。 なお、 キナーゼサブドメインは、 「Denis and Green ( 19 96 ) Genes and Devel . , 10 : 261-271」 に開示されたものであり、 サブドメイン I 〜I Iを 除外している。 数は、 「TSB」 の翻訳の位置に対応する。 保存された残基 には影をつけた。
図 3は、 「TSB」 の存在位置を示す。 放射線ハイブリツド解析により決定された 染色体 lp上の隣接マ一力一に対する相対的な位置が示してある。
図 4は、 Aは正常組織における 「TSB」 のノーザン解析を示したものである。 1 は心臓、 2は脳、 3は胎盤、 4は肺、 5は肝臓、 6は骨格筋、 7は腎臓、 8は臈臓、 9は 脾臓、 10は胸腺、 11は前立腺、 12は精巣、 13は卵巣、 14は小腸、 15は結腸 （粘膜 内層） 、 16は末梢血白血球を示す。 Bは癌細胞株における 「TSB」 のノーザン解析 を示し、 1は前骨髄球性白血病 HL- 60、 2は HeLaS3細胞、 3は慢性骨髄性白血病 K-56 2、 4はリンパ芽球性白血病 M0LT-4、 5はバ一キットリンパ腫 Raji、 6は大腸腺癌 SW 480、 7は肺癌 A549、 8は黒色腫 G361を示す。 分子量マーカ一の位置を横に示した。 発明を実施するための最良の形態
以下、 本発明を実施例により具体的に説明するが、 本発明はこれら実施例に制 限されるものではない。
[実施例 1 ] 「MNG3」 と相同性を有する ESTの同定および全長配列の単離
ESTデ一夕ベースの BLAST検索に、 「RING3」 遺伝子の DNA配列（Beck et al .，（19 92) DNA Seq. , 2:203- 210)を使用し、 プローブ配列と相同性のある多数の ESTを同 定した。 これらの ESTのうち一つ、 精巣特異的 cDNAライブラリー由来の 「H64204」 (Diatchenko et al . , ( 1996) Proc. Nat. Acad. Sci .93 :6025- 6030)は、 「讓 3」 と 285bpにわたつて 65%の配列相同性を有していた。
EST「H64204」 全長のクローニングを行うために EST配列から PCRプライマー U 「配列番号： 3： MTGTCTCTGCCMGTCGACM」 および L 「配列番号： 4： AGCATCCACAGGA CGTTGAAAGj を設計し、 精巣 cDNAを銪型として PCRを行った。 PCRは、 94°Cで 8分、 続いて 「94°Cで 30秒 （熱変性） 、 60°Cで 1分 （アニーリング） 、 72°Cで 1分 （伸 長） 」 を 35サイクル行った。 なお、 PCRには酵素として 「Ampl iTaq gold 」 （Per kin Elmerm社製） を用いた。 この結果、 175bpの PCR産物が得られた。 次いで、 こ の PCR産物をプロ一ブとして用い、 精巣 cDNAライブラリ一 （Clontech社製 HL3024 a) をスクリーニングした。 なお、 プローブはすべて、 ランダムプライミングに より [ひ-3 2 P]dCTPで標識し、 クロマスピン 10カラム （Chromaspin 10 columns)
(Clontech社製） で精製した。 また、 ハイブリダィゼーシヨンは、 「ExpressHyb hybridization solutionj (Clontech社製）中で 65°Cで 1時間行った。 フィルター を 「lx SSC、 0.1¾ SDS、 65°C」 という最終ストリンジエンシーで洗浄した。 cDNA クローンの配列を ESTと整列させたものを用いて、 さらにライブラリーを再スクリ —ニングした。 遺伝子の完全なコード領域の全長配列を与える一連のオーバーラ ヅプクローンが得られるまで、 この過程を反復した。 この結果、 塩基 106〜塩基 2 946のオープンリーディングフレーム （0RF) に 947アミノ酸をコードする 3104bpの 連続配列が得られた。 0RFには、 60bpの短い 3'非翻訳領域が続いており、 それは 20bp上流でポリアデニル化シグナル （ATTAAA) をもつポリ Aテールで終結した。 本 発明者らは単離クロ一ンを 「TSB (testis specific bromodomain) 」 と銘々した。
「TSB」 の推定アミノ酸配列を併記した塩基配列を配列番号： 2に示す。 また、 推 定アミノ酸配列を配列番号： 1に示す。 なお、 塩基配列は、 ABI色素夕ーミ ネ一 ター化学を用いて、 ABI377自動配列決定機 （Perkin Elmer社製） で決定した。
[実施例 2 ] 相同性およびモチーフ
アミノ酸配列でのタンパク質データベース検索より、 「RING3」 （66%相同、 649 アミノ酸にわたり 59%同一）、 「D26362」 （62%相同、 649アミノ酸にわたり 56%同 一）および 「fsh」 （62%相同、 565アミノ酸にわたり 56%同一）と、 もっとも相同性の 高いものを同定した。
PR0SITEを用いたアミノ酸配列のモチーフ検索により、 2つのブロモドメイン（ァ ミノ酸 49-109および 292- 352)が同定された。 さらに、 アミノ酸 636-672に PEST 配 列 （Rodgers et al . , ( 1986 ) Science, 234: 364) が存在した。 これらのモチーフ の位置を図 1に示す。
また、 「RING3」 はセリンースレオニンキナーゼ活性を有することが知られて いるため（Denis and Green, ( 1996) Genes and Devel .， 10 :261- 271 )、 「TSB」 の アミノ酸配列を推定 「RING3」 キナーゼドメインと比較した。 アミノ酸配列の比較 は、 GCGにおける Bestfitを用いて実施した。 この結果、 「TSB」 において推定 「RING3」 キナ一ゼドメイン配列が極めてよく保存されていることが判明した （図 2 ) 。 しかし、 推定 ATP結合ドメインをコードするキナーゼサブドメイン I、 およ び触媒性リジンをコ一ドするキナーゼサブドメイン I Iが欠失してたため、 「TSB」 においてはキナーゼ活性が失われている可能性があることが示された。
また、 「RING3」 タンパク質は核に局在することが知られているため、 PS0RTプ ログラムを用いて、 TSBについて推定核移行シグナルを同定した。 この結果、 4残 基の核移行シグナルが、 4コビ一 （488位、 489位、 575位、 および 919位）、 ロビン ス ·アンド .ディングウォール ·コンセンサス （Robbins and Dingwall consens us) (Bobbins and Dingwall , ( 1991 ) Cel l, 64: 615- 23)が 2コピー（445位および 6 03位）見出された。 このことから 「RING3」 と同様に、 「TSB」 も核に局在すること が示された。
[実施例 3 ] 「 TSB」 のマッピング
厂 TSB」 の染色体上の位置を同定するため、 プライマ一 U (配列番号：3) および L (配列番号： 4) を用いて、 厂 Coriell Cell Repositories, New Jerseyj (Duboi s and Naylor, ( 1993) Genomics, 16 : 315-319)から得られた 24単染色体ヒ卜/ げつ歯動物体細胞系から DNAを増幅した。
TSBの局在する領域は、 同様にプライマー U (配列番号： 3) および L (配列番号： 4) を用いて、 1パネルの単染色体ハイブリッド細胞系をスクリーニングした。 こ の結果、 予想される 175bp産物は、 ヒト第 1染色体について単染色体性である細胞 系 「GM13139」 からのみ増幅された。 rGeneBridge4 radiation hybrid panelj (Walter et al .，（蘭) Nature Genetics 7: 22-28) に対しても同じプライマ一 を PCRに用 ヽた。 「http: //www— genome.wi .mit. edu/cgi— bin/contig/rhmapper.p
1.」 に位置するサーバ一を用いて、 各ハイブリッドが増幅陽性か陰性かをスコ ァ 化することにより得られたバイナリーコードを、 フレームワークマップを形成す るマーカーについての同様なコードと比較した。 この過程を繰り返し、 独立にス コア化した。 両実験で同一のバイナリーコードが得られ、 「TSB」 がマ一力一 「W 1-7719」 と 「WI-3099」 （D1S2154)の間の染色体 lpであることが示された （図 3) 。
[実施例 4 ] 「TSB」 発現の解析
1パネルの 16正常組織のノーザン解析を、 精巣 cDNAをプライマー U (配列番号： 3) および L (配列番号: 4) で PCR増幅することにより調製したプローブを用いて行 つた。 この結果、 精巣において、 プローブは約 3.5kbの mRNAと強力にハイブリダィ ズし、 4.0kbの mRNAとも程度は低いがハイブリダィズした （図 4A) 。 この事実は、
「TSB」 を同定するために用いた ESTの精巣特異的ライブラリー起源と一致した（D iatchenko et al . , ( 1996 ) Proc. Nat. Acad. Sci. 93 : 6025-6030)。 さらに、 プ ローブは、 普遍的に発現する 2つの mRNA (約 2.0および 4.5kb)とも交差ハイブリダィ ズした。 プローブはブロモドメインをコードする配列を含むため、 これらの転写 物は他のプロモドメイン遺伝子と一致する可能性がある。 なお、 いくつかの精巣 特異的遺伝子と同様、 MAGEフアミリ一（van der Bruggen et al. , ( 1991 ) Science,
254: 1643- 1647)の顕著なメンバーが他の癌組織で発現し、 他の癌におけるブロモ ドメイン遺伝子の役割を与えている可能性があるため、 正常組織のパネルと同時 に、 8つの癌細胞系由来の mRNAの 1パネルもスクリーニングした。 この結果、 「TS B」 の発現は、 試験した細胞系においてはいずれも検出されなかった （図 4B) 。 同 様に、 10の肺癌試料のパネルは、 TSB発現について陰性であった （データは示して いない） 。 なお、 ハイブリダィゼ一シヨンの条件は、 実施例 1と同様にした。 産業上の利用可能性 本発明によりブロモドメインを有する新規な転写調節因子、 該転写調節因子を コードする DNA、 該 DNAを含むベクター、 該 DNAを発現可能に保持する形質転換体、 該転写調節因子に結合する抗体、 該転写調節因子に結合する化合物のスクリー二 ング方法が提供された。 本発明の転写調節因子は、 癌に関与していると考えられ ている転写調節因子 「RING3」 とファミリ一を形成していると考えられ、 また精巣 において強い発現が見られる。 従って、 本発明の転写調節因子および該転写調節 因子をコードする DNAは、 細胞増殖性疾患および癌、 特に精巣癌、 あるいは精子形 成不全または精子 機能不全に基づく上記疾患治療薬あるいは避妊薬のスクリー二 ングに用いることも可能である。 また、 本発明の転写調節因子に結合する抗体や その他の化合物は、 該治療薬としての使用が考えられる。
配列表
( 1 ) 出願人の氏名又は名称： 株式会社中外分子医学研究所
(2) 発明の名称： 転写調節因子
( 3 ) 整理番号： C 2— 902 PCT
( 4 ) 出願番号：
(5) 出願曰 ：
( 6 ) 配列の数： 4 配列番号 ： 1
配列の長さ ： 947
配列の型 ： アミノ酸
トポロジー ： 直鎖状
配列の種類 ：タンパク質
配 列
Met Ser Leu Pro 1
Ser Arg Gin Thr Ala lie lie Val Asn Pro Pro Pro Pro Glu Tyr He 5 10 15 20
Asn Thr Lys Lys Asn Gly Arg Leu Thr Asn Gin Leu Gin Tyr Leu Gin
25 30 35
Lys Val Val Leu Lys Asp Leu Trp Lys His Ser Phe Ser Trp Pro Phe
40 45 50
Gin Arg Pro Val Asp Ala Val Lys Leu Lys Leu Pro Asp Tyr Tyr Thr
55 60 65
lie lie Lys Asn Pro Met Asp Leu Asn Thr He Lys Lys Arg Leu Glu 70 75 80 Asn Lys Tyr Tyr Ala Lys Ala Ser Glu Cys l ie Glu Asp Phe Asn Thr 85 90 95 100
Met Phe Ser Asn Cys Tyr Leu Tyr Asn Lys Pro Gly Asp Asp l ie Val
105 110 115
Leu Met Ala Gin Ala Leu Glu Lys Leu Phe Met Gin Lys Leu Ser Gin
120 125 130
Met Pro Gin Glu Glu Gin Val Val Gly Val Lys Glu Arg l ie Lys Lys
135 140 145
Gly Thr Gin Gin Asn lie Ala Val Ser Ser Ala Lys Glu Lys Ser Ser
150 155 160
Pro Ser Ala Thr Glu Lys Val Phe Lys Gin Gin Glu lie Pro Ser Val 165 170 175 180
Phe Pro Lys Thr Ser lie Ser Pro Leu Asn Val Val Gin Gly Ala Ser
185 190 195
Val Asn Ser Ser Ser Gin Thr Ala Ala Gin Val Thr Lys Gly Val Lys
200 205 210
Arg Lys Ala Asp Thr Thr Thr Pro Ala Thr Ser Ala Val Lys Ala Ser
215 220 225
Ser Glu Phe Ser Pro Thr Phe Thr Glu Lys Ser Val Ala Leu Pro Pro
230 235 240
l ie Lys Glu Asn Met Pro Lys Asn Val Leu Pro Asp Ser Gin Gin Gin 245 250 255 260
Tyr Asn Val Val Glu Thr Val Lys Val Thr Glu Gin Leu Arg His Cys
265 270 275
Ser Glu l ie Leu Lys Glu Met Leu Ala Lys Lys His Phe Ser Tyr Ala
280 285 290 009 96^ 06 98 sXq ΠΘΊ j9 ΘΠ 9¾ u-[g
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08 9 0
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Z8Z,T0/86df/XDd ST08 86 OAV Ser Glu Asp Glu Asp Asn Ala Lys Pro Met Asn Tyr Asp Glu Lys Arg
505 510 515
Gin Leu Ser Leu Asn lie Asn Lys Leu Pro Gly Asp Lys Leu Gly Arg
520 525 530
Val Val His He lie Gin Ser Arg Glu Pro Ser Leu Ser Asn Ser Asn
535 540 545
Pro Asp Glu l ie Glu lie Asp Phe Glu Thr Leu Lys Ala Ser Thr Leu
550 555 560
Arg Glu Leu Glu Lys Tyr Val Ser Ala Cys Leu Arg Lys Arg Pro Leu 565 570 575 580
Lys Pro Pro Ala Lys Lys l ie Met Met Ser Lys Gin Glu Leu His Ser
585 590 595
Gin Lys Lys Gin Glu Leu Glu Lys Arg Leu Leu Asp Val Asn Asn Gin
600 605 610
Leu Asn Ser Arg Lys Arg Gin Thr Lys Ser Asp Lys Thr Gin Pro Ser
615 620 625
Lys Ala Val Glu Asn Val Ser Arg Leu Ser Glu Ser Ser Ser Ser Ser
630 635 640
Ser Ser Ser Ser Glu Ser Glu Ser Ser Ser Ser Asp Leu Ser Ser Ser 645 650 655 660
Asp Ser Ser Asp Ser Glu Ser Glu Met Phe Pro Lys Phe Thr Glu Val
665 670 675
Lys Pro Asn Asp Ser Pro Ser Lys Glu His Val Lys Lys Met Lys Asn
680 685 690
Glu Cys lie Leu Pro Glu Gly Arg Thr Gly Val Thr Gin l ie Gly Tyr
695 700 705 Cys Val Gin Asp Thr Thr Ser Ala Asn Thr Thr Leu Val His Gin Thr
710 715 720
Thr Pro Ser His Val Met Pro Pro Asn His His Gin Leu Ala Phe Asn 725 730 735 740
Tyr Gin Glu Leu Glu His Leu Gin Thr Val Lys Asn l ie Ser Pro Leu
745 750 755
Gin lie Leu Pro Pro Ser Gly Asp Ser Glu Gin Leu Ser Asn Gly lie
760 765 770
Thr Val Met His Pro Ser Gly Asp Ser Asp Thr Thr Met Leu Glu Ser
775 780 785
Glu Cys Gin Ala Pro Val Gin Lys Asp lie Lys lie Lys Asn Ala Asp
790 795 800
Ser Trp Lys Ser Leu Gly Lys Pro Val Lys Pro Ser Gly Val Met Lys 805 810 815 820
Ser Ser Asp Glu Leu Phe Asn Gin Phe Arg Lys Ala Ala l ie Glu Lys
825 830 835
Glu Val Lys Ala Arg Thr Gin Glu Leu lie Arg Lys His Leu Glu Gin
840 845 850
Asn Thr Lys Glu Leu Lys Ala Ser Gin Glu Asn Gin Arg Asp Leu Gly
855 860 865
Asn Gly Leu Thr Val Glu Ser Phe Ser Asn Lys l ie Gin Asn Lys Cys
870 875 880
Ser Gly Glu Glu Gin Lys Glu His Pro Gin Ser Ser Glu Ala Gin Asp 885 890 895 900
Lys Ser Lys Leu Trp Leu Leu Lys Asp Arg Asp Leu Ala Arg Pro Lys
905 910 915 Glu Gin Glu Arg Arg Arg Arg Glu Ala Met Val Gly Thr l ie Asp Met
920 925 930
Thr Leu Gin Ser Asp He Met Thr Met Phe Glu Asn Asn Phe Asp
935 940 945 配列番号 ： 2
配列の長さ ： 3104
配列の型 ： 核酸
鎖の数 ： 二本鎖
トポロジー ： 直鎖状
配列の種類 ： cDNA to mRNA
配列の特徴
特徴を表す記号 ： CDS
存在位置 ： 106 . . 2946
特徴を決定した方法 ： E
配 列
GGCAAGATGT TCCTGGGAGG TCAAGTTAAG AGTCAAAAAT AATTCATTAG ATTTAACAAT 60 TTAGCATGGA CATGTACTTG TAGACAGGAT TCAAAGCAGT TAAGA ATG TCT CTG CCA 117
Met Ser Leu Pro 1
AGT CGA CAA ACA GCT ATT ATT GTT AAC CCT CCT CCA CCA GAA TAT ATA 165 Ser Arg Gin Thr Ala lie l ie Val Asn Pro Pro Pro Pro Glu Tyr lie
5 10 15 20
AAT ACT AAG AAA AAT GGG CGA TTG ACA AAT CAA CTT CAG TAT CTA CAA 213 Asn Thr Lys Lys Asn Gly Arg Leu Thr Asn Gin Leu Gin Tyr Leu Gin AAA GTT GTC CTA AAG GAT TTA TGG AAG CAT AGT TTT TCA TGG CCC TTT 261 Lys Val Val Leu Lys Asp Leu Trp Lys His Ser Phe Ser Trp Pro Phe
40 45 50
CAA CGT CCT GTG GAT GCT GTG AAA CTA AAG TTG CCT GAT TAT TAT ACC 309 Gin Arg Pro Val Asp Ala Val Lys Leu Lys Leu Pro Asp Tyr Tyr Thr
55 60 65
ATT ATA AAA AAC CCA ATG GAT TTA AAT ACA ATT AAG AAG CGC TTG GAG 357 l ie l ie Lys Asn Pro Met Asp Leu Asn Thr l ie Lys Lys Arg Leu Glu
70 75 80
AAT AAA TAT TAT GCG AAG GCT TCA GAA TGT ATA GAA GAC TTC AAT ACA 405 Asn Lys Tyr Tyr Ala Lys Ala Ser Glu Cys l ie Glu Asp Phe Asn Thr
85 90 95 100
ATG TTC TCA AAT TGT TAT TTA TAT AAC AAG CCT GGA GAT GAC ATT GTT 453 Met Phe Ser Asn Cys Tyr Leu Tyr Asn Lys Pro Gly Asp Asp l ie Val
105 110 115
CTT ATG GCA CAA GCT CTA GAG AAG CTG TTT ATG CAG AAA TTA TCT CAG 501 Leu Met Ala Gin Ala Leu Glu Lys Leu Phe Met Gin Lys Leu Ser Gin
120 125 130
ATG CCA CAA GAA GAG CAA GTT GTG GGT GTT AAG GAA AGA ATC AAG AAA 549 Met Pro Gin Glu Glu Gin Val Val Gly Val Lys Glu Arg l ie Lys Lys
135 140 145
GGC ACT CAA CAG AAT ATA GCT GTT TCT TCT GCT AAA GAA AAA TCA TCA 597 Gly Thr Gin Gin Asn l ie Ala Val Ser Ser Ala Lys Glu Lys Ser Ser
150 155 160
CCC AGC GCA ACA GAA AAA GTA TTT AAG CAG CAA GAA ATT CCT TCT GTA 645 Pro Ser Ala Thr Glu Lys Val Phe Lys Gin Gin Glu l ie Pro Ser Val L Ol DV9 9W XIV XDV V93 IXO XV9 9XV 930 VW 3X9 1X9 DV9 XVX OVI
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360 365 370
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375 380 385
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405 410 415 420
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425 430 435
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455 460 465
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470 475 480
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485 490 495 500
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520 525 530
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535 540 545
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550 555 560
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565 570 575 580
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ZSLlOIS6d£/lDd ST08 86 OAV AATGTCTCTG CCAAGTCGAC AA 22 配列番号： 4
配列の長さ ： 22
配列の型：核酸
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：他の核酸 合成 MA
配列
AGCATCCACA GGACGTTGAA AG 22

Claims

請求の範囲
I . 配列番号： 1に記載のアミノ酸配列、 または該アミノ酸配列において 1若 しくは複数のアミノ酸が置換、 欠失、 若しくは付加したアミノ酸配列を有し、 ブ ロモドメインを有する転写調節因子。
2 . 配列番号： 2に記載の塩基配列からなる DNAとハイプリダイズする DNAがコ —ドし、 プロモドメインを有する転写調節因子。
3 . 請求項 1または 2に記載の転写調節因子をコ一ドする DNA。
4 . 請求項 3に記載の DNAを含むベクタ一。
5 . 請求項 3に記載の DNAを発現可能に保持する形質転換体。
6 . 請求項 5に記載の形質転換体を培養する工程を含む、 請求項 1または 2に 記載の転写調節因子の製造方法。
7 . 請求項 1または 2に記載の転写調節因子に結合する抗体。
8 . 請求項 1または 2に記載の転写調節因子に結合する活性を有する化合物の スクリ一ニング方法であって、
( a ) 請求項 1または 2に記載の転写調節因子と被験試料とを接触させる工程、
( b ) 請求項 1または 2に記載の転写調節因子と結合する活性を有する化合物を 選択する工程、 を含む方法。
9 . 請求項 8に記載の方法により単離しうる、 請求項 1または 2に記載の転写 調節因子に結合する活性を有する化合物。
1 0 . 天然由来である、 請求項 9に記載の化合物。
I I . 配列番号： 2に記載の塩基配列からなる MAと特異的にハイブリダィズし、 少なくとも 15ヌクレオチドの鎖長を有する DNA。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999004265A3 (en) * 1997-07-17 1999-08-26 Ludwig Inst Cancer Res Cancer associated nucleic acids and polypeptides
US6686147B1 (en) 1998-07-15 2004-02-03 Ludwig Institute For Cancer Research Cancer associated antigens and uses therefor

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7205103B2 (en) 2000-02-11 2007-04-17 The Salk Institute For Biological Studies Method of regulating transcription in a cell
WO2011009010A1 (en) * 2009-07-15 2011-01-20 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Novel compounds for inhibiting eef2 kinase activity

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BECK S, ET AL.: "A HOMOLOGUE OF THE DROSOPHILA FEMALE STERILE HOMEOTIC (FSH) GENE INTHE CLASS II REGION OF THE HUMAN MHC", DNA SEQUENCE, NEW YORK, NY, US, vol. 02, 1 January 1992 (1992-01-01), US, pages 203 - 210, XP002910982, ISSN: 1042-5179 *
HAYNES S. R., ET AL.: "THE DROSOPHILA FSH LOCUS, A MATERNAL EFFECT HOMEOTIC GENE, ENCODES APPARENT MEMBRANE PROTEINS.", DEVELOPMENTAL BIOLOGY, ACADEMIC PRESS, AMSTERDAM, NL, vol. 134., 1 January 1989 (1989-01-01), AMSTERDAM, NL, pages 246 - 257., XP002910983, ISSN: 0012-1606, DOI: 10.1016/0012-1606(89)90094-8 *
JONES M. H., NUMATA M., SHIMANE M.: "IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION OF BRDT: A TESTIS-SPECIFIC GENERELATED TO THE BROMODOMAIN GENES RING3 AND DROSOPHILA FSH.", GENOMICS, ACADEMIC PRESS, SAN DIEGO., US, vol. 45., 1 November 1997 (1997-11-01), US, pages 529 - 534., XP002910981, ISSN: 0888-7543, DOI: 10.1006/geno.1997.5000 *
NOMURA N, ET AL.: "PREDICTION OF THE CODING SEQUENCES OF UNIDENTIFIED HUMAN GENES. II.THE CODING SEQUENCES OF 40 NEW GENES (KIAA0041-KIAA0080) DEDUCED BYANALYSIS OF CDNA CLONES FROM HUMAN CELL LINE KG-1", DNA RESEARCH., UNIVERSAL ACADEMY PRESS., JP, 1 January 1994 (1994-01-01), JP, pages 223 - 229, XP002910984, ISSN: 1340-2838, DOI: 10.1093/dnares/1.5.223 *
See also references of EP0976825A4 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999004265A3 (en) * 1997-07-17 1999-08-26 Ludwig Inst Cancer Res Cancer associated nucleic acids and polypeptides
US6686147B1 (en) 1998-07-15 2004-02-03 Ludwig Institute For Cancer Research Cancer associated antigens and uses therefor

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