WO1999011266A1 - Remedes contre la sclerose en plaques - Google Patents

Description

明 細 書

多発性硬化症治療剂 技 術 分 野

本発明は、 特定のカルボスチ リ ル誘導体又はその塩を 有効成分とする多発性硬化症治療剤に関する。 背 景 技 術

多発性硬化症は、 原因不明の中枢神経系の脱髄疾患で ある。 主に若年成人を侵し、 脳、 脊髄、 視神経などの中 枢神経組織に多巣性に脱髄病変が多相性に生じるため、 多彩な神経症状が再発と寛解を繰り返して起こる、 即ち 時間的 · 空間的多発性を特徴とする進行性神経難病疾患 i>る。

臨床症状と しては、 中枢神経のどこの障害でも来し得 るが、 視神経と脊髄の障害に基づく 視力障害、 運動麻痺 歩行障害、 しびれ感、 異常感覚、 感覚麻痺、 眼痛等が見 られる。 その他、 脳幹部の障害では複視、 小脳病変では 失調を来すこ とがある。 好発年齢は、 2 0 — 4 0歳であ る。 該多発性硬化症の病因は、 現在まで不明であ り、 自 己免疫説とウィルス説があるが、 いずれの説も確定的に なるまでに至っていない。 該多発性硬化症の診断は、 上記のよう に病因が不明で あ り、 また特異的な検査異常がないため、 主に臨床的特 徴に頼っているのが現状である。 現在よ く 用いられてい る診断基準と しては、 厚生省特定疾患 「多発性硬化症」 調査研究班による多発性硬化症 （ M S ) 診断基準と、 ポ —ザ （Poser, C. M. , ( 1983 ) ) らの M S診断基準が知られ ている。 また、 最近では M R I による診断が有用とされ ている。 該診断による本症の所見と しては、 T ₂強調画像 で楕円形で辺縁が比較的明瞭な高信号域の病変（ブラ一 ク）が大脳白質や脳幹に見られる という ものである。

多発性硬化症の治療法は、 病因に対する治療法と多彩 な中枢神経症状に対する対症療法に分けられる。 前者は 病因が現在のところ不明であるため、 その治療には免疫 抑制薬ゃ抗炎症薬などが使用されているが、 効果の判定 が困難な状況にある。 急性期には、 副腎皮質ステロイ ド 剤が使用され、 よ り症状が急性で重篤な場合には、 ステ ロイ ド剤のパルス療法が施行されている。 慢性期の治療 には、 神経障害の対症療法と リ ハ ビ リ テー シ ョ ンが主体 となっている。

最近、 再発の予防療法 · 難治例に対する治療法と して、 イ ンタ一フ ヱ ロ ン一 ^ ( I F N - /3 ) による治療が、 多 発性硬化症の再発回数を減少させる と報告され、 米国に おいて該 I F N — ； Sが認可されている。 しかしなカ ら、 依然と して多発性硬化症に対する治療法は確立されたわ けではな く 、 該多発性硬化症の再発予防及び各種臨床症 状に対する治療効果を有する薬剤の開発が斯界で望まれ ている。

従って、 本発明の目的は斯界で望まれている多発性硬 化症の再発予防及び各種臨床症状に対する治療効果を有 する薬剤を開発する こ とにある。

本発明者は、 上記目的によ り銳意研究を重ねた結果、 以前に強心剤有効成分と して開発した下記一般式（ 1 )で表 わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩が、 多発性硬 化症治療剤と して有効である という事実を見出 し、 こ こ に本発明を完成するに至った。 発 明 の 開 示

即ち、 本発明は下記一般式（ 1 ) ：

N― R [式中、 Rはフ エニル環上に置換基と して低級アルコキ シ基を有する こ とのあるベンゾィル基を示す。 カルボス チ リ ル骨格の 3位と 4位との炭素間結合は一重結合又は 二重結合を示す。 ]

で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩から選ば れる少な く と も 1 種の有効量と、 薬学的に許容される担 体とを含有する こ とを特徴とする多発性硬化症治療剤に 係わる ものである。

本発明は、 また、 上記一般式（ 1 )で表わされるカルボス チ リ ル誘導体及びその塩から選ばれる少な く と も 1 種の 有効量を、 患者に投与するこ とを特徴とする多発性硬化 症の処置方法に係わる ものである。

更に、 本発明は、 多発性硬化症治療剤の製造のための、 上記一般式（1 )で表されるカルボスチ リ ル誘導体及びその 塩から選ばれる少な く と も 1 種の使用に係わる ものであ る。 図面の簡単な説明

図 1 は、 薬理試験例 1 に従って行われた試験の結果を 示すグラフであり、 ラ ッ ト実験的アレルギー性脳脊髄炎 モデルにおける本発明化合物の効果を示すものである。

図 2 は、 薬理試験例 1 に従って行われた試験の結果を 示すグラ フであり、 ラ ッ ト実験的ア レルギー性脳脊髄炎 モデルにおける本発明化合物の平均積算臨床スコアに対 する効果を示すものである。

図 3 は、 薬理試験例 1 に従って行われた試験の結果を 示すグラフであり、 ラ ッ ト実験的ア レルギー性脳脊髄炎 モデルでの体重変化に対する本発明化合物の作用を示す ものである。 発明を実施するための最良の形態

本発明によれば、 上記一般式（1 )中、 Rがフ ヱニル環上 に置換基と して炭素数 1 〜 6 の直鎖又は分枝鎖状アルコ キシ基を 1 〜 3個有する こ とのあるベンゾィル基である 上記多発性硬化症治療剤も提供される。

また、 本発明によれば、 上記カルボスチ リ ル誘導体が、 6 — [ 4 — ( 3 ， 4 ー ジメ トキシベンゾィノレ） 一 1 ー ピぺ ラ ジニル] 一 3 ， 4 — ジ ヒ ドロ力ノレボスチ リル又はその 塩である上記多発性硬化症治療剤も提供される。

本発明において、 多発性硬化症を治療するための有効 成分と して用いられる上記一般式（1 )で表されるカルボス チ リ ル誘導体及びその塩は、 例えば特公平 1 一 4 3 7 4 7号公報及び米国特許番号 U S 4 , 4 1 5 , 5 7 2号公 報に記載される通り、 公知物質であ り、 その製法につい て も例えば上記公報に記載されている。 更に、 これ ら文 献には、 上記一般式（ 1 )で表される カルボスチ リ ル誘導体 及びその塩が、 強心剤と して有用である こ と も記載され ている。

ま た、 該カルボスチ リ ル誘導体及びその塩の中の一つ は、 ま た、 う つ血性心不全の患者において、 血行力学的 指標と運動耐用量の改善が証明されている 〔 Inoue et a 1. , Heart Vessels, 2, 166-171(1986); Sasayama et a 1.， Heart Vessels, 2, 23-28(1986) ; Feldman et al. , Am. Heart J. , Π6, 771 -777( 1988)] 。 上記カルボスチ リ ル誘導体の変力作用に関連 したメ カニズムは、 力 リ ウ ム電流の低下 C I i j ima et al. , J . Pharmacol. Exp. Th er,， 240, 657- 662( 1987)] 、 フ ォ ス フ オ ジェステラ 一ゼ の軽度の抑制と カルシウ ム電流の内向きの流れの上昇 ( Yatani et al. , J. Cardiovasc. Pharmacol. , 13， 81 2-819(1989)； Taira et al. , Arzneimi ttelf orshung, 3 4, 347-355( 1984)] を含んでいる。

上記カルボスチ リ ル誘導体は、 更に リ ポポ リ サ ッ カ ラ ィ ド （LPS) 刺激 した末梢血単核球の細胞 （PBMC) によ る T N F — a、 I L — 6 、 I L 一 1 ;8、 I L — 2や I F N 一 y を含む種々 のサイ ト カイ ンの産生を抑制する こ とが 報告されている C Busch, F. et al. , Eur. J. Clin. Ph armacol. , 42, 629^634( 1992); Maruyama et al. , Bioc hem. Biophys. Res. Commu. , 195, 1264 - 1271 ( 1993 ) ; S hioi, T. et al. , Life Sciences, 54(1), PL11-16C199 4) ; Matsumori, A. et al. , Circulation, 89(3), 955 - 958(1994)]

更に上記カルボスチ リ ル誘導体は、 ウィルス誘導され た心筋傷害の改善と該心筋傷害の改善時におけるナチュ ラル . キラ —細胞（NK Cell)の抑制作用を有する こ と も報 告されている C Matsui S. , et al. , J. Clin. Invest. , 94. 1212- 1217 ( 1994)] 。 上記作用に加えて、 該カルボ スチ リ ル誘導体は、 アポ ト ー シス調整作用を有する こ と も報告され、 該作用に基づ く 、 癌の治療及び癌転移の抑 制、 自己免疫疾患、 ウィルス疾患等への有用性も報告さ れている 〔 ョ 一 ロ ッパ特許公開 EP0552373 ; Nakai et a 1. , Jpn. J. Cancer Res. , abstruct, and Proc. Jpn. Cancer Assoc. , 581 ( 1993) Maruyama et al. , Biochem. Biophys. Res. Com j_95, 1264- 1271 ( 1993)] ₀ しか しながら、 上記一般式 （ 1 ) で表わされる カルボ スチ リ ル誘導体又はその塩が、 前述 したよ う な多発性硬 化症の臨床症状を抑制する作用を有する という 報告は、 未だない。

本発明薬剤の有効成分であるカルボスチ リ ル誘導体を 表わす上記一般式（1 )において示される各基と しては、 よ り具体的には、 それぞれ次の各基を例示でき る。

即ち、 低級アルコキシ基と しては、 炭素数 1 〜 6 の直 鎖又は分枝鎖状アルコキシ基が好ま し く 、 例えばメ トキ シ、 エ トキシ、 プロボキシ、 イ ソプロ ボキシ、 ブ トキシ、 t e r t一ブ ト キシ、 ペンチルォキシ、 へキシルォキシ基等 を例示する こ とができ る。

フ ェニル環上に置換基と して低級アルコキシ基を有す る こ とのあるベンゾィル基と しては、 例えばべンゾィル、 2 —メ トキシベンゾイソレ、 3 — メ トキシベンゾィル、 4 ー メ ト キ シベ ン ゾィ ノレ、 2 — エ ト キ シベ ン ゾィ ノレ、 3 — エ ト キ シベ ン ゾィ ノレ、 4 一 エ ト キ シベ ン ゾィ ノレ、 3 — ィ ソプロ ポキシベンゾィ ル、 4 一ブ トキシベンゾィノレ、 2 一 ペ ン チノレォキ シベ ン ゾィ ノレ、 3 — へキ シノレォキ シベ ン ゾィル、 3 ， 4 — ジメ トキシベンゾィノレ、 2 ， 5 — ジメ トキシベンゾィノレ、 3 ， 4 , 5 — ト リ メ トキシベンゾィ ル基等のフ ヱニル環上に置換基と して炭素数 1 〜 6 の直 鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を 1 〜 3個有する こ とのあ るベンゾィル基を例示する こ とができ る。

本発明において、 上記多発性硬化症治療剤の有効成分 であ る上記カルボスチ リ ル誘導体中、 特に好ま しいもの と しては、 例えば 6 — [ 4 — ( 3 , 4 — ジメ トキシベンゾ ィル） 一 1 ー ピペラ ジニル] 一 3 , 4 — ジ ヒ ドロカルボ スチ リ ル又はその塩を例示でき る。

ま た、 上記一般式 （ 1 ) で表される カルボスチ リ ル誘 導体の塩には、 薬理学的に許容される酸付加塩が包含さ れる。 該塩を形成する酸性化合物と しては、 具体的には 例えば硫酸、 リ ン酸、 硝酸、 塩酸、 臭化水素酸等の無機 酸、 酢酸、 蓚酸、 マ レイ ン酸、 フマル酸、 リ ンゴ酸、 酒 石酸、 クェン酸、 コハク酸、 エタ ンスルホ ン酸、 p — ト ルエ ンスルホ ン酸、 安息香酸等の有機酸を例示する こ と ができ る。

本発明薬剤の有効成分であ る一般式 （ 1 ) で表わされ る カルボスチ リ ル誘導体又はその塩は、 通常、 一般的な 医薬製剤の形態で用い られる。 かかる製剂は、 通常使用 される充填剤、 増量剤、 結合剂、 付湿剤、 崩壊剤、 表面 活性剤、 潤沢剤等の希釈剤乃至賦形剤を用いて調製され る。 この医薬製剤と しては各種の形態が治療目的に応 じ て選択でき、 その代表的な もの と しては錠剤、 丸剤、 散 剤、 液剤、 懸濁剤、 乳剤、 顆粒剤、 カプセル剤、 坐剤、 注射剤 （液剤、 懸濁剤等） 、 点眼剤等を例示でき る。 こ れ ら投与剤は、 こ の分野で通常知 られた慣用的な製剤方 法によ り製剤化される。

錠剤の形態に形成するに際 しては、 担体と して この分 野で従来公知の ものを広 く 使用でき る。 例えば ¾糖、 白 糖、 塩化ナ ト リ ウ ム、 ブ ドウ糖、 尿素、 デンプン、 炭酸 カルシウ ム、 カオ リ ン、 結晶セルロー ス、 ゲイ酸等の賦 形剤 ； 水、 エタ ノ ール、 プロパノ ール、 単シロ ッ プ、 ブ ドウ糖液、 デンプン液、 ゼラ チ ン溶液、 カルボキシメ チ ノレセノレ ロ ー ス、 セ ラ ッ ク 、 メ チノレセノレ ロ ー ス、 リ ン酸力 リ ウ ム、 ポ リ ビニルピロ リ ド ン等の結合剤 ； 乾燥デンプ ン、 アルギン酸ナ ト リ ウム、 カ ンテ ン末、 ラ ミ ナラ ン末- 炭酸水素ナ ト リ ウム、 炭酸カルシウム、 ポ リ オキシェチ レ ンソルビタ ン脂肪酸エステル類、 ラ ウ リ ル硫酸ナ ト リ ゥ ム、 ステア リ ン酸モノ グ リ セ リ ド、 デンプン、 乳糖等 の崩壊剤 ； 白糖、 ステア リ ン、 カカオバタ 一、 水素添加 油等の崩壊抑制剤 ； 第 4 級ア ンモニゥ ム塩基、 ラ ウ リ ル 硫酸ナ ト リ ゥム等の吸収促進剤 ； グ リ セ リ ン、 デンプン 等の保湿剤 ； デンプン、 乳糖、 カオ リ ン、 ベン ト ナイ ト コ ロイ ド状ゲイ酸等の吸着剤 ； 精製タルク 、 ステア リ ン 酸塩、 ホウ酸末、 ポ リ エチ レ ング リ コール等の滑沢剤等 を例示でき る。 更に錠剤は、 必要に応 じて通常の剤皮を 施 した錠剤、 例えば糖衣錠、 ゼラチ ン被包錠、 腸溶被錠 フ ィ ルム コーテ ィ ング錠あるいは二重錠、 多層錠とする こ と もでき る。

丸剤の形態に成形するに際 しては、 担体と してこの分 野で従来公知の ものを広 く 使用でき、 例えばブ ドウ糖、 乳糖、 デンプン、 カ カオ脂、 硬化植物油、 カオ リ ン、 夕 ルク等の賦形剤 ； アラ ビアゴム末、 ト ラ ガン ト末、 ゼラ チ ン、 エタ ノ ール等の結合剤 ； ラ ミ ナラ ンカ ンテ ン等の 崩壊剤等を使用でき る。

坐剤の形態に成形する に際 しては、 担体と して従来公 知の ものを広 く 使用でき、 例えばポ リ エチ レ ング リ コ一 ル、 カカオ脂、 高級アルコ ール、 高級アルコールのエス テル類、 ゼラ チ ン、 半合成グ リ セライ ド等を使用でき る（ 注射剤と して調製される場合には、 液剤、 乳剤、 懸濁 剤な どは殺菌され且つ血液と等張であるのが好ま し く 、 これらの液剤、 乳剤、 懸濁剤な どの形態に成形するに際 しては、 希釈剤と して この分野において慣用 されている ものを使用でき る。 その例と しては例えば水、 ェチルァ ノレコ 一ノレ、 プ ロ ピ レ ン グ リ コ 一ノレ、 エ ト キ シ化イ ソ ステ ァ リ ノレアノレコ ール、 ポ リ オキシ化イ ソ ス テア リ ノレアソレ コ —ル、 ポ リ オキシエチ レ ン ソルビタ ン脂肪酸エステル類 等を挙げる こ とができ る。 尚、 こ の場合等張性の溶液を 調製する に充分な量の食塩、 ブ ドウ糖、 グ リ セ リ ン等を 医薬製剤中に含有させて もよ く 、 ま た通常の溶解補助剤 緩衝剤、 無痛化剤等を添加 して もよい。 緩衝剤と しては ク ェン酸ナ ト リ ウム、 酢酸ナ ト リ ウ ム、 リ ン酸ナ ト リ ウ ム等が、 無痛化剤と しては、 塩酸プロ力イ ン、 塩酸リ ド カイ ン等が例示できる。

更に、 本発明の製剤中に必要に応じて、 着色剤、 保存 剤、 香料、 風味剤、 甘味剤等や他の医薬品を医薬製剤中 に含有させてもよい。

本発明薬剤中に有効成分と して含まれる一般式 （ 1 ) で表される化合物の量は、 特に限定されず広範囲よ り適 宜選択される。 通常全組成物中約 1 〜 7 0重量％、 好ま し く は約 1 〜 3 0重量％程度の範囲とするのが適当であ る。

かく して得られる本発明多発性硬化症治療剤の投与方 法は、 特に制限はな く 、 各種製剤形態、 患者の年齢、 性 別、 その他の条件、 疾患の程度等に応じて適宜決定され る。 例えば、 注射剤形態の医薬製剤は、 静脈内、 筋肉内 皮下、 皮内、 腹腔内投与などによ り投与され得る。 これ は必要に応じてブ ドウ糖、 ァ ミ ノ酸等の通常の補液と混 合して静脈内投与する こ と もできる。 錠剤、 丸剤、 顆粒 剤、 カプセル剤などの固剤形態や経口投与用液剤形態の 本発明医薬製剤は、 経口投与又は経腸投与され得る。 坐 剤は直腸內投与できる。 また点眼剤は目に適用できる。

前記各投与単位形態中に配合されるべき本発明の有効 成分の量は、 これを適用すべき患者の症状により あるい はその剤形等によ り一定ではないが、 一般に投与単位形 態あた り約 1 〜 1 0 0 O m g含有される のが適当である（ また、 上記投与形態を有する本発明薬剤の 1 日あた り の投与量は、 患者の症状、 体重、 年齢、 性別、 その他の 条件などに応じて適宜選択でき、 特に限定される もので はないが、 通常の臨床利用に際しては、 一般式 （ 1 ) の カルボスチ リ ル誘導体 （又はその塩） が、 通常成人 1 日 当 り約 0 . 5 〜 3 0 m g Z k g程度となる量の範囲から 選択されるのがよい。 また本発明薬剤は、 1 日 1 回又は 1 日 3 〜 4 回に分けて投与する こ と もできる。

本発明製剤は、 多発性硬化症の各種臨床症状の改善や 多発性硬化症の再発予防及び治療に有効である。 実 施 例

以下、 本発明を更に詳し く 説明するため製剤例及び薬 理試験例を挙げる。

製剤例 1 錠剤

6 — 〔 4 — ( 3 ， 4 ー ジメ トキシ

ベ ンゾィ ル） 一 1 — ピペラ ジニル〕

— 3 ， 4 ー ジ ヒ ド ロ 力ノレボスチ リ ル 5 m g デンプン 1 3 2 m g マグネシウムステア レー ト 1 8 m g 乳糖 4 5 m g

1 錠剤あた り 2 0 0 m g 上記配合割合で、 常法に従い錠剤を製造 した。

製剤例 2 フ ィ ルムコーティ ング錠

6 — 〔 4 — ( 3 ， 4 — ジメ トキシ

ベ ン ゾィ ノレ） 一 1 — ピペラ ジニノレ〕

— 3 , 4 — ジ ヒ ド ロ カ ゾレボス チ リ ノレ 1 5 0 g ア ビセル （商標名、 旭化成株式会社製） 4 0 g コー ンスタ ーチ 3 0 g ステア リ ン酸マグネ シウム 2 g ヒ ド ロ キ シ プロ ピゾレメ チノレセ ノレ ロ ー ス 1 0 g ポ リ エチ レ ング リ コ一ノレ 一 6 0 0 0 3 g ヒマシ油 4 0 g メ タ ノ ール 4 0 g

上記有効成分化合物、 ア ビセル、 コ ー ン ス タ ー チ及び ステア リ ン酸マグネ シウムを混合研磨後、 糖衣 R 1 0 m mのキネで打錠する。 得られた錠剤を、 ヒ ドロキシプロ ピルメ チルセソレロース、 ポ リ エチ レ ング リ コーノレ一 6 0 0 0 、 ヒマ シ油及びメ タ ノ ールからなる フ イ ノレムコ一テ イ ング剤で被覆を行ない、 フ ィ ルムコ 一ティ ング錠を製 し 7こ 。

製剤例 3 錠剤 6 - C 4 - ( 3 , 4 — ジメ トキシ

ベンゾィノレ ） 一 1 — ピペラ ジニノレ 〕

— 3， 4 — ジ ヒ ドロカルボスチ リ ノレ 1 5 0 . 0 g ク ェ ン酸 1 . 0 g ラ ク ト 一ス 3 3. 5 g リ ン酸二カルシウム 7 0. 0 g プル口ニ ッ ク F — 6 8 3 0. 0 g ラ ウ リ ル硫酸ナ ト リ ウム 1 5 , 0 g ポ リ ビニルピロ リ ド ン 1 5 , 0 g ポ リ エチ レ ング リ コ一ル

(カノレポワ ッ ク ス 1 5 0 0 ) 4 5 g ポ リ エチ レ ング リ コール '

(カノレポワ ッ ク ス 6 0 0 0 ) 4 5 0 g コー ンスタ ーチ 3 0 0 g 乾燥ラ ウ リ ル硫酸ナ ト リ ウ ム 3 0 g 乾燥ステア リ ン酸マグネ シウム 3 0 g エタ ノ ール 適

上記有効成分化合物、 ク ェン酸、 ラ ク ト 一ス リ ン酸 二カルシウム、 プル口ニ ッ ク F — 6 8及びラ ウ リ ル硫酸 ナ ト リ ウ ムを混合 した。

上記混合物を、 N o . 6 0 スク リ ー ンにて篩別 し、 ポ リ ビニルピロ リ ドン、 カノレボワ ッ ク ス 1 5 0 0及びカル ボワ ッ クス 6 0 0 0 を含むアルコール性溶液で湿式粒状 ィ匕した。 必要に応じて、 それらにアルコールを添加し、 粉末をペース ト状塊にした。 そ こ に、 コ ー ンスタ ーチを 添加し、 均一な粒子が形成されるまで混合を続けた。 次 に、 該粒子を N o . 1 0 スク リ ーンを通過させ、 ト レイ に入れ、 1 0 0 °Cのオーブンで 1 2 〜 1 4 時間乾燥させ た。 得られた乾燥粒子を N o . 1 6 スク リ ーンで篩別 し、 乾燥ラウ リ ル硫酸ナ ト リ ゥム及び乾燥ステア リ ン酸マグ ネシゥムを加え、 混合し、 打錠機で所望の形状に圧縮成 形した。

上記芯部をワニスで処理し、 タルクを散布して湿気の 吸収を防止した。 芯部の周囲に下塗り層を被覆した。 内 服用のために充分な回数のワニス被覆を行なった。 錠剤 を完全に丸く 且つ滑らかにするために、 更に下塗り層及 び平滑被覆を適用 した。 所望の色合いが得られるまで着 色被覆を行ない、 乾燥後、 得られた被覆錠剤を磨いて均 一な光沢の錠剤を調製した。

薬理試験例 1

供試化合物と して 6 — [ 4 — ( 3 ， 4 ー ジメ トキシべ ンゾィ ノレ） 一 1 — ピペラ ジニル ] — 3 ， 4 — ジ ヒ ドロ 力 ルボスチ リ ル （以下 「化合物 1 」 という ） を用いて、 以 下の通り、 多発性硬化症の動物モデルとされている実験 的ァ レノレギ一'性月 ¾脊髓炎 ( experimental allergic ence phalomyelitis； E A E : Paterson, P. Y.， Fed. Proc.， 4 1, 2569-2576(1982) ; Paterson, P. Y. , Immunological D i seases, 3rd edn.， Little, Brown & Co. , Boston, MA. pp.1400 - 1435 ( 1978) ; Alvord, E. C. Jr. , Progress in C 1 inical and Biological Research, 148. Alan R. し iss， New York, NY, pp.523-537 ( 1984 )) 動物モデルを用いて 臨床ス コアに対する供試化合物の抑制効果を、 コ ォ一ら ( Koh, C. S. , et al. , Cell Immunology, 107, 52-63(19 87)) の方法に準じて評価した。

上記 E A E動物モデルは、 動物に中枢神経組織 （例え ば、 モルモ ッ ト脊髄） とアジュバン トで感作 （免疫） す る こ と によ り E A Eを誘導する ものであ り 、 免疫後 9 — 1 0 日 目に尾及び下肢の麻痺などを伴った症状が発現す る。 モノレモ ッ ト脊髄 （Guinea - Pig Spinal Cord; GPSC) ホ モジネ一 卜 と高濃度の結核死菌 ( Mycobacterium Tube rculosis; T) を含むアジュノくン トを用いた場合には、 免疫後約 4 0 日間にわたり 2 - 3 回の発症、 回復を繰り 返す慢性進行型の多発性硬化症に対するモデルとなる と されている (Chabannes, D. , et al. , J. Autoimmunity, 5, 199-211(1992)) 。

( 1 ) 動物及び実験材料の調製 1 ) コ ン ト ロールと して 0 . 5 % C M C溶液 （カルボキ シ · メ チル · セルロース溶液） を用いた。 該溶液の調製 は、 C M C (セロゲン F — S B (ロ ッ ト番号 1 5 4 4 5 5 )、 第一工業製薬社製） を電子天秤 （ E R - 1 8 2 A ； ザル ト リ ウス社製） で 5 . 0 g秤量後、 メ スシ リ ンダ一 に移 し、 注射用蒸留水 （大塚製薬工場社製） にて 4 °Cで 一昼夜攙袢溶解し、 最終濃度 0 . 5 %になるよう に調製 した後、 ォ一 ト ク レーブで滅菌後、 使用まで 4 °Cにて保 存した。

2 ) 化合物 1 の原末を秤量後、 メ ノ ウ鉢に移し、 少量の 0 . 5 % C M C溶液で均一に懸濁した後、 0. 5 % C M C溶液にて希釈し、 化合物 1 の最終濃度が 6 0 m g Zm 1 の濃度になるよう調製した。 それを滅菌遠心チューブ に分注し、 使用まで 4 °Cにて遮光保存した。

3 ) 免疫原と して用いるモルモッ ト脊髄 （ G P S C ) ホ モジネー ト は、 9 — 1 0週齢 （ 5 0 0 — 6 0 0 g ) の雄 性ハ— ト レ—系モソレモッ ト （日本チャールズリバ一社よ り購入） 2 0 匹全匹を使用 して、 調製した。 モルモ ッ ト を軽エーテル麻酔下に頸椎脱臼によ り安楽死させ、 脊髄 から髄膜と血管を剥離し、 氷冷したシ ャ ー レに摘出 した 脊髄を移 した。 摘出 した脊髄 1 0 匹分位の量をま とめて 秤量し、 ポッ ター型ホモジナイザ一中に G P S C 1 g に 対 して 1 m 1 の冷生理食塩水 （大塚製薬工場社製） を加 え、 ホモジネー ト調製用 ロータ ー （池本理科工業社製） を用いて、 氷冷下でホモジネー トを作製 した （ G P S C 濃度と して 5 0 0 m g / m l ) 。 3 〜 4 m l f P P P チューブに分注し、 一 2 0 °Cにて凍結保存した。

4 ) 結核死菌 （ M T ) 含有ア ジュバン ト溶液の調製は、 市販の結核死菌含有完全ア ジュバ ン ト溶液 （結核死菌 H 3 7 R a濃度 l m g Zm l ； カタ ロ グ番号 3 1 1 3 — 6 0 - 5 ： ディ フ コ社製） l O m l Z瓶に、 更に結核死菌 H 3 7 R a (カタ ロ グ番号 3 1 1 4 — 3 3 — 8 :ディ フ コ 社製）を 1 5 m g添加 し、 ハ。ラ フ イ ノレムでシ一 リ ング後よ く 転倒混和 した後、 均一に懸濁させ、 最終 M T濃度 2.

5 ra g / m 1 に調製 した。

5 ) 上記 3 ) で調製 した G P S C ホモジネー ト と上記 4 ) で調製 した結核死菌含有ア ジュバ ン ト溶液を、 三方 活栓に接続 した 2本のガラ ス シ リ ン ジに 1 ： 1 の割合で 移 し、 均一なェマルジ ヨ ンが形成されるまで繰り 返し混 和 して調製 し、 得 られたェマルジ ヨ ン溶液を免疫エマル ジ ョ ン と して使用 した。

6 ) 実験のための動物と して、 1 0週齢の雌性ルイ ス

( Lewis) 系ラ ッ ト （ S P F ： 日本チ ャールズ リ ノく一社よ り購入） を使用 した。 9週齢で 1 0 0匹購入 し、 1 週間 飼育馴化後、 体重を指標に層別無作為抽出によ り 、 各群 2 0 匹 4 ケー ジ X 3群の全 6 0 匹を本試験のために抽 tLi した。

( 2 ) 多発性硬化症の動物モデル

体重 1 8 0 — 2 0 0 gで 1 0週齢の雌性ルイ ス系ラ ッ トを試験に供した。 ラ ッ ト には水及び普通飼料を経口に て 自 由摂取させた。

多発性硬化症の動物モデルと しての実験的ァ レルギ一 性脳脊髄炎 （ E A E ) の誘導は、 次の通り 行な っ た。 即 ち、 上記 （ 1 ) — 5 ) で調製 した免疫ェマルジ ヨ ンを軽 エーテル麻酔下のラ ッ ト両足フ ッ トパ ッ ドに 2 3 ゲー ジ の注射針と 1 . 0 m 1 のガラ ス シ リ ン ジを用いて 0. 1 m l ずつ合計 0 . 2 m l { ( G P S C と して 5 0 m g + M T と して 2 5 0 ) 体 } 、 皮内注射 した。 免疫後 飼育は 5 匹ノケー ジで行な っ た。 該ラ ッ ト は免疫後、 1 0 日前後にてア レルギー性脳脊髄炎症状を発症 し、 ヒ ト 臨床症状と同 じ く 、 症状の再発と寛解を繰 り返すので、 従っ て多発性硬化症の動物モデルとな る。

( 3 ) 本発明化合物 1 の多発性硬化症治療効果及び再発 予防効果の検討

1 ) ラ ッ 卜への本発明化合物の投与

( 1 ) 一 2 )'で調製した本発明化合物 1 の懸濁液を、 ラ ッ トへ投与する直前にチューブをよ く 転倒混和した後、 1 m 1 又は 2 . 5 m 1 のシ リ ン ジ （テルモ社製） に取り 、 ラ ッ ト用経口ゾンデを用いて、 ラ ッ 卜の体重 1 0 0 g当 た り 0. 5 m 1 を強制経口投与した。 尚、 投与量は、 コ ン ピュ一ターに 自動入力 した当日の体重によって 1 匹毎 に決定した。 コ ン ト ロール群と しての 0 . 5 % C M C溶 液投与群も同様な方法で投与した。

多発性硬化症の動物モデルに対する実験は、

• 免疫後連日 C M C溶液を投与したコ ン ト ロール群、 ' 免疫後 1 — 9 日 目までは C M C溶液を投与し、 E A E 発症日の 1 0 日 目 よ りィ匕合物 1 を 3 0 O m g Z k g /日 の割合で投与した群 （第 1 の症状発症直後よ り化合物 1 を投与した群） 及び

' 免疫後 1 — 1 6 日 目までは C M C溶液を投与し、 症状 が一旦回復後、 再び悪化し始める頃の 1 7 日 目 よ り化合 物 1 を 3 0 O m g Z k g Z日の割合で投与した群 （第 2 の症状発症直前よ り化合物 1 を投与した群）

の 3群にて、 1 群それぞれ 2 0 匹を用いて、 免疫後 3 7 日 まで、 1 日 1 回連日経口投与を行なった。

2 ) ラ ッ トの体重、 血球測定、 胸腺重量、 脾臓重量測 定及び症状観察（ス コア判定）

試験開始日 （免疫日） から試験終了 日 （解剖日） まで 1 日 1 回体重と症状の観察（スコア判定）を行なった。 体 重は、 電子天秤 （Sartorius; LC- 4200:ザル ト リ ウス社 製） にて測定し、 接続したパーソナル · コ ンピュータ

(TOSHIBA J3100:東芝製） に自動入力 し、 同時に個体毎 の投与量も決定表示させた。

症状のス コア判定は、 コ ォ 一 （Koh) らの評価基準 （K oh, C. S. , et al. , Cell Immunology, 107, 52 - 63 (19 87)) に従った。 即ち、 毎日各群のラ ッ 卜の症状を観察し ラ ッ ト尾部と両後肢のそれぞれに対してスコア判定し、 その合計をスコア記録シー ト に記載した。 ス コア判定は、 尾部については、 無症状を 0 、 途中まで弛緩を 0 . 2 5、 尾部全体の完全な弛緩を 0 . 5 と し、 また後肢について は、 無症状を 0 、 歩行障害を 1 . 0、 両後肢の不完全麻 痺及び片側後肢の完全麻痺を 2 . 0及び両後肢の完全麻 痺を 3 . 0 と して評価した。 尚、 試験中の死亡例はスコ ァ判定の統計処理から除外した。

3 ) 統計処理法

全ての統計学的分析は、 S A S システム（SAS Institu te Japan, Ver.6.11 )によ り行なった。

体重は、 コ ン ト ロール群を対照と して、 第 1 の症状発 症直後よ り化合物 1 を投与した群及び第 2 の症状発症直 前よ り化合物 1 を投与した群について、 実測値を用い、 繰り返し測定に基づく 分散分析 (Repeated esurements) によ り経時的な反応の違いを検定し、 有意水準を 5 %及 び 1 %で実施した。

症状観察（症状のスコア判定）

試験期間全体をコ ン ト ロール群の臨床ス コアの推移に よって、 前半と後半の 2つに分割した。 即ち、 スコアの 上で 2 回の ピー ク （Chabannes, D. , et al. , J. Autoim raunity, 5, 199-211 ( 1992)) の間の一番回復した時点で, 前半と後半に分け、 全期間、 前半、 後半の 3つの期間で 解析を行なった。 よ り具体的には、 それぞれの期間にお ける各個体の症状のスコア判定結果を積算し、 各群にお いて平均積算臨床スコア（Integrated Clinical Score)を 求め ( Branisteanu, D. D. , et al. , J . Neuroimmunolog y, 61， 151 - 160 ( 1995)； Martin, D. , et al. , J. Neur oimmunology, 61- 241-245 (1995)) 、 一元配置分散分析 後、 コ ン ト ロール群を対照と して両側ダネ ッ ト ーテス ト (Dunnett- test)にて検定し、 有意水準を 5 %及び 1 %で 実施した。 尚、 スコアは、 平均スコアと標準誤差で表わ 血球測定、 胸腺重量及び脾臓重量については、 一元配 置分散分析後、 コ ン ト ロール群を対照と して両側ダネ ッ ト -テス ト にて検定し、 有意水準を 5 %及び 1 %で実施 し / ο

症状のスコア判定結果と体重の推移を図 1 、 図 2及び 図 3 にそれぞれ示す。

図 1 において、 縦軸は、 平均臨床スコアを、 横軸は免 疫後の投与期間 （日） を示す。

「―〇一」 はコ ン ト ロ ール（C M C溶液のみ）群の結果、 「一國—」 は化合物 1 を免疫後 1 7 日 目 よ り投与開始し た群の結果及び

「一△一」 は化合物 1 を免疫後 1 0 日 目 よ り投与開始し た群の結果

をそれぞれ示す。

図 2 において、 縦軸は平均積算臨床スコア （ 0 — 3 8 曰 までの臨床スコアの積算の平均） を、 横軸は、

( A ) ： コ ン ト ロール（C M C溶液のみ）群、

( B ) ： 化合物 1 を免疫後 1 7 日 目よ り投与開始した群 及び

( C ) ： 化合物 1 を免疫後 1 0 日 目よ り投与開始した群 をそれぞれ示す。

図 3 において、 縦軸は毎日の体重の推移を、 横軸は免 疫後の投与期間 （日） を示す。

「―〇一」 はコ ン ト ロール（C M C溶液のみ）群の結果、 「一國ー」 は化合物 1 を免疫後 1 7 日 目よ り投与開始し た群の結果及び

「一△一」 は化合物 1 を免疫後 1 0 日 目よ り投与開始し た群の結果

をそれぞれ示す。

上記の結果から、 次のこ とが明 らかである。 即ち、 図

2 から確認されるよう に、 化合物 1 投与群は、 コ ン ト 口 —ル群と比較して、 いずれも平均積算臨床ス コ アの有意 な低下（Pく 0. 0 1 )、 即ち症状の改善効果が観察された。 ま た、 体重の推移は、 図 3 に示されるよう に、 図 1 におけ る症状のスコア判定の推移とよ く 対応して、 化合物 1 投 与群では、 コ ン ト ロ ール群と比較して、 改善傾向が認め られた。 更に、 図 1 に示されるよう に、 化合物 1 は、 第 1 の症状発症直後の投与によ り その症状を改善し、 第 2 の症状の発症を抑制している こ とが分かる。 また、 第 2 の症状発症直前よ り化合物 1 を投与した群は、 その症状 の再発を抑制 した。 これまで症状発症後の投与によ り 明 確な効果を奏する薬剤は知られておらず、 化合物 1 は、 臨床において治療困難な再発 · 回復型及び慢性進行性多 発性硬化症の再発予防及び各種臨床症状に対する治療効 果が期待できる こ とが判る。 産業上の利用可能性 本発明によれば、 一般式（1 )で表わされるカルボスチ リ ル誘導体及びその塩から選ばれる少な く と も 1 種を有効 成分とする多発性硬化症治療剤が提供され、 これは医薬 分野で治療困難な多発性硬化症の各種臨床症状を改善し、 更に多発性硬化症の再発予防及び治療に有用である。

Claims

請求の範囲

1 . 下記一般式（ 1 ) ：

[式中、 Rはフ エニル環上に置換基と して低級アルコキ シ基を有する こ とのあるベンゾィル基を示す。 カルボス チ リ ル骨格の 3位と 4位との炭素間結合は一重結合又は 二重結合を示す。 ]

で表わされる カルボスチ リ ル誘導体及びその塩から選ば れる少な く と も 1 種の有効量と、 薬学的に許容される担 体とを含有する こ とを特徴とする多発性硬化症治療剤。

2. が、 フ ヱニル環上に置換基と して炭素数 1 ~ 6の 直鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を 1 ~ 3個有する こ との あ るベンゾィル基である、 請求項 1 に記載の多発性硬化 症治療剤。

3. カルボスチ リ ル誘導体が、 6 — [ 4 — ( 3 , 4 — ジメ ト キ シベ ン ゾィ ゾレ） 一 1 ー ピペラ ジニノレ ] 一 3， 4 — ジ ヒ ドロ カルボスチ リ ル又はその塩である請求項 1 に記載 の多発性硬化症治療剤。

4 . 請求項 1 に記載のカルボスチ リ ル誘導体及びその塩 から選ばれる少な く と も 1 種の有効量を、 患者に投与す る こ とを特徴とする多発性硬化症の処置方法。

5 . Rが、 フ ヱニル環上に置換基と して炭素数 1 〜 6 の 直鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を 1 〜 3 個有する こ との あるベンゾィル基である、 請求項 4 に記載の多発性硬化 症の処置方法。

6 . カルボスチ リ ル誘導体が、 6 — [ 4 — ( 3 ， 4 ー ジメ ト キシベンゾィノレ） 一 1 — ピペラ ジニノレ] — 3 ， 4 — ジ ヒ ドロカルボスチ リ ル又はその塩である請求項 4 に記載 の多発性硬化症の処置方法。

7 . 多発性硬化症治療剤の製造のための、 請求項 1 に記 載のカルボスチ リ ル誘導体及びその塩から選ばれる少な く と も 1 種の使用。

8 - が、 フ ヱニル環上に置換基と して炭素数 1 〜 6 の 直鎖又は分枝鎖状アルコキシ基を 1 〜 3個有する こ との あ るベンゾィル基である、 請求項 7 に記載の多発性硬化 症治療剤の製造のための使用。

9 . カルボスチ リ ル誘導体が、 6 — [ 4 —（ 3 , 4 — ジメ ト キシベンゾィ ル） 一 1 ー ピペラ ジニル] 一 3 ， 4 — ジ ヒ ドロカルボスチ リ ル又はその塩である請求項 7 に記載 多発性硬化症治療剤の製造のための使用。