JP2024547125A

JP2024547125A - 免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体の用途

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Publication number: JP2024547125A
Application number: JP2024538162A
Authority: JP
Inventors: 彦君劉; 征王; 震朱; 琳陸
Original assignee: 上海宝済薬業股▲ふん▼有限公司
Priority date: 2021-12-22
Filing date: 2022-12-22
Publication date: 2024-12-26
Also published as: CN118382454A; US20240336908A1; EP4450080A1; EP4450080A9; US20250257346A1; TW202334183A; WO2023116817A1; US12319942B2

Abstract

被験者におけるＩｇＧレベルを低下させるための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、組成物及びキットの用途を提供し、前記変異体は、配列番号２で示されるアミノ酸配列の位置８、１０、２４、５９、９７及び２８０の１つ又は複数にアミノ酸の置換、Ｎ末端の短縮化及び／又はＣ末端の短縮化があり、前記変異体は、免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの機能を備え、野生型ＩｄｅＥより高い活性及び熱安定性を有する。
【選択図】なし

Description

本発明は、バイオテクノロジーの分野に関し、具体的には、免疫グロブリン分解酵素の変異体及びそれを含む組成物のＩｇＧレベルを低下させるための使用に関する。

化膿レンサ球菌は、ヒト及び動物に一般的な病原菌の１つで、自然界及びヒト又は動物の口腔又は咽頭腔、気道及び腸管に幅広く存在している。レンサ球菌感染は関連の疾患を引き起こし、軽度の病状は膿皮症、咽頭炎などであり、重度の疾患は敗血症、壊死性筋膜炎、毒素性ショック症候群などである。化膿レンサ球菌からの免疫グロブリンＧ分解酵素（ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＧ－ｄｅｇｒａｄｉｎｇｅｎｚｙｍｅｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ、ＩｄｅＳ）は、一般的なＡ群レンサ球菌（ＧｒｏｕｐＡＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｙｏｇｅｎｅｓ、ＧＡＳ）システインプロテアーゼであり、ＩｇＧを加水分解させるペプチド鎖エンドペプチダーゼ活性を有する（ＡｇｎｉｓｗａｍｙＪ，ＬｅｉＢ，ＭｕｓｓｅｒＪＭｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００４，２７９：５２７８９－５２７９６、ＬｅｉＢ，ＤｅＬｅｏＦＲ，ＲｅｉｄＳＤｅｔａｌ．，ＩｎｆｅｃｔＩｍｍｕｎ，２００２，７０：６８８０－６８９０、ＶｏｎＰａｗｅｌ－ＲａｍｍｉｎｇｅｎＵ，ＪｏｈａｎｓｓｏｎＢＰ，ＢｊｏｒｃｋＬ．．ＥＭＢＯＪ，２００２，２１：１６０７－１６１５）。病原菌の病原性因子として、それは抗体のＣＨ１とＣＨ２ドメインの間のヒンジ領域を認識してＩｇＧを特異的に分解することができ、これによって同質のＦ（ａｂ）_２及びＦｃフラグメントが得られ、ＧＡＳが抗体媒介性食作用及び細胞傷害から逃れることに役立つことで、ＧＡＳに対する宿主免疫系の殺傷を弱める（ＶｏｎＰａｗｅｌ－ＲａｍｍｉｎｇｅｎＵ．ＪＩｎｎａｔｅＩｍｍｕｎｉｔｙ，２０１２，４：１３２－１４０、Ｓｕ，Ｙ．－Ｆ．ｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１１，４９：１３４－１４２）。

免疫グロブリンＧ（ＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＧ、ＩｇＧ）は、血清の主な抗体成分で、血清免疫グロブリンの約７５％を占めており、体内の免疫で主に保護的な役割を果たし、感染症を効果的に予防できる。保護的な役割を有するほかに、ＩｇＧは疾患にも関係している。一部の自己免疫疾患では、ＩｇＧ抗体は人体自身の分子と反応し、臓器移植でＩｇＧが急性移植拒絶反応を引き起こす。ＩｄｅＳはＩｇＧを特異的に分解させることで、ＩｇＧにその本来の機能を失わせて免疫抑制を実現する。

現在、臨床に使用しているＩｄｅＳには活性が不良で、人体の既存抗体が多いという問題点がある。ＩｄｅＳはヒト病原菌の病原性因子であり、臨床研究で健常者の場合、通常の生理学的条件でほぼ１００％の確率で抗ＩｄｅＳ抗体が検出されることが明らかになったため、ＩｄｅＳの使用は投与効率が低いだけでなく、安全性も問題になる。

そこで、関連の疾患の臨床薬物の製造に用いる、安全性がより高く活性が保持できる免疫グロブリン分解酵素が必要となる。

本発明の第１の態様は、免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体の用途、好ましくは、被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造における用途に関し、前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥは、配列表の配列番号２で示されるアミノ酸配列を含み又は前記アミノ酸配列からなり、前記変異は、
（１）前記アミノ酸配列の位置８、１０、２４、５９、９７及び２８０の１つ若しくは複数を置換して前記変異体を得ること、及び／又は、
（２）前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥを短縮化し、そのＮ末端の先頭からの１つ、先頭からの２つ、先頭からの３つ、先頭からの４つ、先頭からの５つ、先頭からの６つ、先頭からの７つ、先頭からの８つ、先頭からの９つ、先頭からの１０個、先頭からの１１個、先頭からの１２個、先頭からの１３個、先頭からの１４個、先頭からの１５個、先頭からの１６個、先頭からの１７個、先頭からの１８個若しくは先頭からの１９個のアミノ酸の配列を削除すること、及び／又は、
（３）前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥを短縮化し、そのＣ末端の末尾からの１つ、末尾からの２つ、末尾からの３つ、末尾からの４つ、末尾からの５つ、末尾からの６つ、末尾からの７つ、末尾からの８つ、末尾からの９つ若しくは末尾からの１０個のアミノ酸の配列を削除することからなる群から選ばれ、
ただし、前記変異体は、前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥより高い又は同じ活性及び／又は熱安定性を有する。

本発明の第１の態様は、また、被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造における本発明の変異体を含むタンパク質の用途に関する。好ましくは、前記タンパク質は、前記変異体のＮ末端に分泌シグナル配列及び／若しくはメチオニンが接続され、及び／又は前記タンパク質は、前記変異体のＣ末端にヒスチジンタグが接続される。本発明の第１の態様は、また、被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造における本発明の変異体若しくはタンパク質を含む組成物又は本発明の変異体若しくはタンパク質を含むキットの用途に関し、好ましくは、前記組成物は、任意の薬学的に許容される担体若しくは賦形剤及び／又は別の治療薬をさらに含み、前記別の治療薬は、（ａ）抗体、又はＦｃを含有するタンパク質であって、好ましくは、前記抗体の標的は、細胞表面タンパク質、サイトカイン、ホルモン、酵素、セカンドメッセンジャー、ファーストメッセンジャー、免疫チェックポイントからなる群から選ばれるもの、（ｂ）ウイルスベクター薬であって、好ましくは、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンからなる群から選ばれる前記ウイルスベクター薬、（ｃ）血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物であって、好ましくは、ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体からなる群から選ばれる前記血中ＩｇＧレベルを低下させる薬物からなる群から選ばれる。

本発明の第２の態様は、被験者におけるＩｇＧレベルを低下させるための薬物の製造における本発明の変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途に関する。

本発明の第３の態様は、被験者における実質臓器移植後の自己抗体媒介性臓器拒絶反応を予防及び／又は治療するための薬物の製造における本発明の変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途に関する。

本発明の第４の態様は、本発明の変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの、遺伝子治療用薬物の製造における用途、及び、ウイルスベクターを基盤とした遺伝子治療の前に体内既存の抗ウイルスベクターの中和抗体を除去するための薬物の製造における用途に関する。

本発明の第５の態様は、被験者における腫瘍を治療するための薬物の製造における本発明の変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途に関する。

本発明の第６の態様は、被験者における自己抗体を除去してＦｃ含有剤に治療効果をより良く発揮させるための薬物の製造における本発明の変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途に関する。

本発明の第７の態様は、Ｆｃ含有剤を投与されている被験者において前記Ｆｃ含有剤の血清レベルを低下させるための薬物の製造における本発明の変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途に関する。

図１は、７つの一点変異体及び野生型ＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）である。図２は、７つの一点変異体及び野生型ＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）である。図３は、５つのＮ末端短縮化変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）である。図４は、５０℃で１時間保温した後、５つのＮ末端短縮化変異体及び野生型ＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）である。図５は、２つのＣ末端短縮化変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）である。図６は、５つの組合せ変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）である。図７は、５０℃で１時間保温した後、５つの組合せ変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）である。図８は、異なる濃度のＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体及びＩｄｅＳでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターンである。図９は、異なる濃度のＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体及びＩｄｅＺでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターンである。図１０は、マウスの血清及び血漿においてＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体でヒトＩＶＩｇを切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターンである。図１１は、マウス及びヒトの血清においてＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体によって生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターンである。図１２Ａ～図１２Ｄは、ビーグル犬、ラット、マウス、ウサギ、サル及びブタの血清において異なる濃度のＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８でＩｇＧを切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターンである。図１３は、マウスの体内においてＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８でヒトＩＶＩｇを切断する場合に異なる時間で生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターンである。図１４Ａは、異なる変異の組み合わせを有する変異体及びＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）である。図１４Ｂは、異なる変異の組み合わせを有する変異体及びＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）である。図１５Ａは、ＩＤＥＥＶ２の活性検出パターンであり、レーン１～５が、それぞれ、酵素切断なしＩｇＧ１、ＩｄｅＺ、ＩｄｅＳ、ＩｄｅＥ、ＩＤＥＥＶ２による酵素切断後のＩｇＧ１（非還元電気泳動）である。図１５Ｂは、ＩＤＥＥＶ２変異体の熱安定性の生物学的活性検出パターンである。レーン１～３が、それぞれ、ＩＤＥＥＶ２、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８、ＩｄｅＥによる酵素切断後のＩｇＧ１（非還元電気泳動）である。図１６Ａは、ＩＤＥＥＶ２変異体及びＩｄｅＳでヒトＩｇＧ１～４を切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２００）である。レーン１～１２が、それぞれ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の酵素切断なし対照及びＩＤＥＥＶ２：基質が１：２００の酵素切断（非還元電気泳動）である。図１６Ｂは、ＩＤＥＥＶ２変異体及びＩｄｅＳで異なるヒト免疫グロブリンを切断して生成された切断産物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２００）である。レーン１～１２が、それぞれは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤの酵素切断なし対照及びＩＤＥＥＶ２：基質が１：２００の酵素切断（還元電気泳動）である。図１７は、ＩＤＥＥＶ２変異体の及び異なる動物種の精製ＩｇＧの酵素切断パターンである。レーン１～１２が、それぞれ、ウサギＩｇＧ、イヌＩｇＧ、ラットＩｇＧ、マウスＩｇＧ、サルＩｇＧ、ヒトＩｇＧ、ヒトＩｇＧ１の酵素切断なし及びＩＤＥＥＶ２に対応する酵素切断パターン（ＩＤＥＥＶ２：基質＝１：２００）である。図１８Ａは、静脈内注入でニュージーランドウサギにＩＤＥＥＶ２を投与し、週に１回投与し、２回投与する場合、２ｍｇ／ｋｇ用量群の動物体内のＩｇＧ含有量の経時的変化状況（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ検出結果）である。図１８Ｂは、静脈内注入でニュージーランドウサギにＩＤＥＥＶ２を投与し、週に１回投与し、２回投与する場合、２ｍｇ／ｋｇ用量群の動物体内のＩｇＧ含有量の経時的変化状況（ＥＬＩＳＡ検出結果）である。図１９Ａは、静脈内注入でビーグル犬（Ｂｅａｇｌｅ）にＩＤＥＥＶ２を投与し、週に１回投与し、２回投与する場合、各用量群の動物体内のＩｇＧ含有量の経時的変化状況（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ検出結果）である。ａは、０．２ｍｇ／ｋｇ用量群の動物であり、ｂは、２ｍｇ／ｋｇ用量群の動物であり、ｃは、２０ｍｇ／ｋｇ用量群の動物である。図１９Ｂは、静脈内注入でビーグル犬（Ｂｅａｇｌｅ）にＩＤＥＥＶ２を投与し、週に１回投与し、２回投与する場合、各用量群の動物体内のＩｇＧ含有量の経時的変化状況（ＥＬＩＳＡ検出結果）である。図２０Ａは、抗血小板抗体モデル化動物にＩＤＥＥＶ２を腹腔内注射し、試験中の各群動物の血小板数の変化である。図２０Ｂは、抗血小板抗体モデル化動物にＩＤＥＥＶ２を腹腔内注射し、試験中の各群動物の生存率結果である。図２１は、免疫グロブリン分解酵素の変異体は、モノクローナル抗体の抗腫瘍効果に対する免疫グロブリンのマイナス的な影響を解消できることである。図２２Ａは、ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃでマウスを感染させた後の全身の形質導入効果である。左側から、それぞれ、１）蛍光対照群（ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃ）、２）モデル群（ＩＶＩｇ＋ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃ）、３）供試品群（ＩＶＩｇ＋Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８＋ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃ）である。図２２Ｂは、ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃでマウスを感染させた後の全身の形質導入効果を示す。図２３は、ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃでマウスを感染させた後の心臓、肝臓の形質導入効果を示す。

「発明の詳細な説明」
１．免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体
ＩｄｅＳとの配列相同性が約７０％であるＩｄｅＥプロテアーゼは、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｉｓｓｐ．ｅｑｕｉ）に由来し、馬の病原菌の１種である
ＩｄｅＥとＩｄｅＳの２種の酵素は完全に同じ位置でＩｇＧを切断し、切断は、高い再現性及び特異性があり、且つ基質適用範囲が非常に似ている。ＩｄｅＥは馬の病原菌からのものであるため、ヒト体内のその既存抗体はＩｄｅＳをはるかに下回り、ＩｇＧ抗体媒介性疾患を治療及び予防するための免疫抑制剤の開発によりに適することが考えられる。ただし、野生型ＩｄｅＥはＩｄｅＳと同様に、活性が低い問題がある。

そこで、本発明は、免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体に関し、前記変異体は、免疫グロブリン分解酵素活性を有し、
（１）配列番号２の位置８、１０、２４、５９、９７及び２８０の１つ若しくは複数のアミノ酸を置換して得た変異体、及び／又は、
（２）配列番号２のＮ末端の短縮化変異体であって、そのＮ末端の先頭からの１つ、先頭からの２つ、先頭からの３つ、先頭からの４つ、先頭からの５つ、先頭からの６つ、先頭からの７つ、先頭からの８つ、先頭からの９つ、先頭からの１０個、先頭からの１１個、先頭からの１２個、先頭からの１３個、先頭からの１４個、先頭からの１５個、先頭からの１６個、先頭からの１７個、先頭からの１８個若しくは先頭からの１９個のアミノ酸の配列を削除したものから選ばれる変異体、及び／又は、
（３）配列番号２のＣ末端の短縮化変異体であって、そのＣ末端の末尾からの１つ、末尾からの２つ、末尾からの３つ、末尾からの４つ、末尾からの５つ、末尾からの６つ、末尾からの７つ、末尾からの８つ、末尾からの９つ若しくは末尾からの１０個のアミノ酸の配列を削除したものから選ばれる変異体からなる群から選ばれる。

本発明の変異体は、前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの機能を有し、好ましくは、向上しているＩｇＧ切断活性及び熱安定性も有する。

本発明で用語「免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥより高い又は同じ活性を有する」とは、前記変異体の免疫グロブリンを分解する能力は、野生型免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥより優れ又は同じであることを指す。

本発明で用語「ＩｄｅＥよりも高い熱安定性を有する」とは、前記変異体は、ある温度で一定の時間保持された後、免疫グロブリンを分解する能力が同等な条件では野生型免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥより優れることを指す。

本発明の変異体は、遺伝子工学の組換えにより作製されることが好ましい。

好ましくは、前記変異体は、配列番号２で示される配列と少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を有する。

より好ましくは、前記位置８、１０、２４、５９、９７若しくは２８０のアミノ酸を置換し、例えば、得られた変異体のアミノ酸配列が配列番号３～１７、配列番号３５のいずれかで示されるとおりであり、
又は、前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥのＮ末端の先頭からの１５個、先頭からの１６個、先頭からの１７個、先頭からの１８個若しくは先頭からの１９個のアミノ酸を削除し、得られた変異体のアミノ酸配列が配列番号１８～２２のいずれかで示されるとおりであり、
又は、前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥのＣ末端の末尾からの１つ、末尾からの５つ、末尾からの８つ若しくは末尾からの１０個のアミノ酸を削除し、例えば、得られた変異体のアミノ酸配列が配列番号２３～２４のいずれかで示されるとおりであり、
又は、前記位置８、１０、２４、５９、９７若しくは２８０を置換すると同時に前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥのＮ末端の先頭からの１５個、先頭からの１６個、先頭からの１７個、先頭からの１８個若しくは先頭からの１９個のアミノ酸を削除し、好ましくは、先頭からの１８個のアミノ酸を削除し、例えば、得られた変異体のアミノ酸配列が配列番号２５～２９のいずれかで示されるとおりである。
又は、前記位置８、１０、２４、５９、９７若しくは２８０を置換し且つ前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥのＮ末端の先頭からの１５個、先頭からの１６個、先頭からの１７個、先頭からの１８個若しくは先頭からの１９個のアミノ酸を削除すると同時に前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥのＣ末端の末尾からの１つ、末尾からの５つ、末尾からの８つ若しくは末尾からの１０個のアミノ酸を削除し、好ましくは、先頭からの１８個のアミノ酸を削除し、好ましくは、最後の５つのアミノ酸を削除し、例えば、得られた変異体のアミノ酸配列が配列番号３０～３４のいずれかで示されるとおりである。

本発明の一つの好ましい実施形態では、前記アミノ酸の置換は、
（１）配列番号２の位置８のトレオニンがシステイン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、セリン、バリン、アルギニン、リシンのいずれかに置換されること、
（２）配列番号２の位置１０のアラニンがシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、
（３）配列番号２の位置２４のトレオニンがアラニン、システイン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、
（４）配列番号２の位置５９のアラニンがシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、
（５）配列番号２の位置９７のグルタミン酸がアラニン、システイン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、
（６）配列番号２の位置２８０のアルギニンがアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、セリン、フェニルアラニン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されることからなる群から選ばれる。

本発明の一つのより好ましい実施形態では、前記アミノ酸の置換は、
（１）配列番号２の位置８のトレオニンがアスパラギン酸、グルタミン酸、トリプトファン若しくはチロシンに置換されること、
（２）配列番号２の位置１０のアラニンがリシン若しくはアルギニンに置換されること、
（３）配列番号２の位置２４のトレオニンがアラニン、グリシン若しくはセリンに置換されること、
（４）配列番号２の位置５９のアラニンがイソロイシン、ロイシン若しくはバリンに置換されること、
（５）配列番号２の位置９７のグルタミン酸がアスパラギンに置換されること、及び／又は
（６）配列番号２の位置２８０のアルギニンがヒスチジン若しくはリシンに置換されることからなる群から選ばれる。

別の好ましい実施形態では、配列番号９、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１、配列番号５及び配列番号１６であるアミノ酸を置換して得られた５つの配列からさらにそのＮ末端の先頭からの１８個のアミノ酸を削除し、得られた変異体のアミノ酸配列が配列表の配列番号２５～２９で示されるとおりである。

別の好ましい実施形態では、配列番号２６～２９であるアミノ酸を置換して得られた５つの配列からさらにそのＣ末端の５つ又は１０個のアミノ酸を削除し、得られた変異体のアミノ酸配列が配列表の配列番号３０～３４で示されるとおりである。

別の好ましい実施形態では、配列番号１４～１６の３つの変異体からさらに組合せ変異を行い、得られた変異体のアミノ酸配列が配列表の配列番号３５で示されるとおりである。別の好ましい実施形態では、配列番号９、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１、配列番号５及び配列番号１６であるアミノ酸を置換して得られた５つの配列からさらにそのＮ末端の先頭からの１８個のアミノ酸を削除し、得られた変異体のアミノ酸配列が配列表の配列番号２５～２９で示されるとおりである。

別の好ましい実施形態では、変異体のアミノ酸配列は配列表の配列番号３６で示されるとおりである。

好ましくは、本発明に記載の変異体をさらに変異させてもよく、さらに変異させて得られた変異体の配列は配列番号２の配列と少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を有するとともに、免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの機能を有する。

本発明で使用されるＩｄｅＥの全配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＢＦ５７９１０．１として一般に利用可能なもので、その配列は本明細書で配列番号１として提供される。当該配列は、Ｎ末端メチオニンを含み、それに３３個のアミノ酸の分泌シグナル配列が続き、それにＩｄｅＥコード配列が続く。Ｎ末端メチオニン及びシグナル配列が成熟ＩｄｅＥタンパク質を形成するためには一般的に除去され、その配列は本明細書で配列番号２として提供される。特に説明がない限り、本明細書に開示されている免疫グロブリン分解酵素配列のアミノ酸の位置番号への言及はいずれもＮ末端から始まる配列番号２の対応する位置の番号に基づく。

本発明は、また、本発明の変異体を含むタンパク質に関する。

一つの好ましい実施例では、前記タンパク質は、上記の変異体のＮ末端にシグナルペプチドを含み、好ましくは、前記タンパク質は、前記変異体のＮ末端に分泌シグナル配列が接続され且つ前記分泌配列のＮ末端にメチオニンが接続され及び／又は前記変異体のＣ末端にヒスチジンタグが接続され、より好ましくは、前記タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端まで、メチオニン、分泌シグナル配列、前記変異体を含み又はこれらからなる。

２．医薬組成物
本発明は、本発明の免疫グロブリン分解酵素の変異体又は前記変異体を含むタンパク質と、任意の薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む組成物に関する。

一つの具体的な実施形態では、本発明の組成物は、抗体、低分子標的薬及び／又はＦｃを含有するタンパク質をさらに含む。

一つの具体的な実施形態では、前記抗体の標的は、細胞表面タンパク質、サイトカイン、ホルモン、酵素、セカンドメッセンジャー、ファーストメッセンジャー、免疫チェックポイントからなる群から選ばれる。

一つの具体的な実施形態では、本発明の組成物は、ウイルスベクター薬又は遺伝子治療薬をさらに含み、好ましくは、前記ウイルスベクター薬は、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンからなる群から選ばれる。

一つの具体的な実施形態では、本発明の組成物は、血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物をさらに含み、好ましくは、前記血中ＩｇＧレベルを低下させる薬物は、ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体からなる群から選ばれる。

２．１抗体
好ましくは、上記の組成物において、前記抗体の標的は、細胞表面タンパク質であってもよく、ＡＦＰ、αｖインテグリン（ｉｎｔｅｇｒｉｎ）、α４β７インテグリン、ＢＣＭＡ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６４、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１０５、ＣＤ１２１、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７４、ＣＤ２０５、ＣＤ２２７、ＣＤ３２６、ＣＤ３４０、ＣＥＡ、ｃ－Ｍｅｔ、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＡ１Ｘ、クローディン６（Ｃｌａｕｄｉｎ６）、クローディン１８．２（Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２）、ＥＤ－Ｂ、ＥＧＦＲ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＢ２、ＦＡＰ、ＦＯＬＲ１、ＧＤ２、ＧｌｏｂｏＨ、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＨＥＲ－１、ＨＥＲ－２、ＨＥＲ－３、ＭＡＧＥ－Ａ３、メソテリン（Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ４、ＭＵＣ１６、ＰＳＭＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＴＡＧ－７２、５Ｔ４、ＲＯＲ－１、Ｓｃａ－１、ＳＰ、Ｔｒｏｐ－２、ＣＤ３８、ＣＧＲＰ、ＩＧＦ－１Ｒ、ネクチン－４（Ｎｅｃｔｉｎ－４）、Ｐ－セレクチン（Ｐ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ）、ｖＷＦ、ＫＬＫ、ＣＣＲ４、ＳＬＡＭＦ７、ＰＣＳＫ９、ＧＤ２、ＶＥＧＦＲ２、ＢＬｙＳ、ＲＡＮＫＬ、α４β１インテグリン、ＶＥＧＦＲ、血小板糖タンパク質ＩＩｂ若しくはＩＩＩａ、ＩＦＮＡＲ１、ＴＳＬＰ、ＶＥＧＦ又はＷＴ１を含み、ただしそれらに限定されない。

前記抗体の標的は、サイトカインのうちの１種又は複数種であってもよく、インターロイキンＩＬ－１～ＩＬ－１３、ＩＬ－１β、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ－２３ｐ１９、ＩＬ２Ｒ、ＩＬ－５Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－２Ｒ、腫瘍壊死因子α、β、インターフェロンα、β、γ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ－α、ＦＧＦ－２３、スクレロスチン（Ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ）、腫瘍増殖因子β（ＴＧＦ－β）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）又は顆粒球－単球コロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含み、ただしそれらに限定されない。ＨｕｍａｎＣｙｔｏｋｉｎｅｓ：ＨａｎｄｂｏｏｋｆｏｒＢａｓｉｃ＆ＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ（Ａｇｇｒａｗａｌｅｔａｌ．，ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ１９９１）を参照する。

前記抗体の標的は、ホルモン、酵素、セカンドメッセンジャー、ファーストメッセンジャーであってもよく、例えば、アデニル酸シクラーゼ、グアニル酸シクラーゼ又はホスホリパーゼＣである。

前記抗体の標的は、免疫チェックポイントのうちの１種又は複数種であってもよく、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ３、Ｓｉｇｌｅｃ７、Ｓｉｇｌｅｃ９、Ｓｉｇｌｅｃ１５、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２８、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡを含み、ただしそれらに限定されない。

前記抗体の標的は、ＩｇＥ、ＲＳＶＦ、新型コロナウイルス、ダビガトラン（Ｄａｂｉｇａｔｒａｎ）、ＦＩＸ若しくはＦＸ、クロストリジウム・ディフィシレ菌毒素Ｂ、Ｃ２、Ｃ５、炭疽菌のＰＡであってもよく。

前記抗体は、サトラリズマブ（Ｓａｔｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ベランタマブマホドチン（Ｂｅｌａｎｔａｍａｂｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、タファシタマブ（Ｔａｆａｓｉｔａｍａｂ）、イネビリズマブ（Ｉｎｅｂｉｌｉｚｕｍａｂ）、サシツズマブゴビテカン（Ｓａｃｉｔｕｚｕｍａｂｇｏｖｉｔｅｃａｎ）、イサツキシマブ（Ｉｓａｔｕｘｉｍａｂ）、エプチネズマブ（Ｅｐｔｉｎｅｚｕｍａｂ）、テプロツムマブ（Ｔｅｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）、トラスツズマブデルクステカン（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂｄｅｒｕｘｔｅｃａｎ）、エンホルツマブベドチン（ＥｎｆｏｒｔｕｍａｂＶｅｄｏｔｉｎ）、ロモソズマブ（Ｒｏｍｏｓｏｚｕｍａｂ）、クリザンリズマブ（Ｃｒｉｚａｎｌｉｚｕｍａｂ）、ブロルシズマブ（Ｂｒｏｌｕｃｉｚｕｍａｂ）、ポラツズマブ（Ｐｏｌａｔｕｚｕｍａｂ）、リサンキズマブ（Ｒｉｓａｎｋｉｚｕｍａｂ）、カプラシズマブ（Ｃａｐｌａｃｉｚｕｍａｂ）、エマパルマブ（Ｅｍａｐａｌｕｍａｂ）、ラブリズマブ（Ｒａｖｕｌｉｚｕｍａｂ）、セミプリマブ（Ｃｅｍｉｐｌｉｍａｂ）、ガルカネズマブ（ｇａｌｃａｎｅｚｕｍａｂ）、フレマネズマブ（Ｆｒｅｍａｎｅｚｕｍａｂ）、モキセツモマブパスードトクス（ＭｏｘｅｔｕｍｏｍａｂＰａｓｕｄｏｔｏｘ）、ラナデルマブ（Ｌａｎａｄｅｌｕｍａｂ）、モガムリズマブ（Ｍｏｇａｍｕｌｉｚｕｍａｂ）、エレヌマブ（Ｅｒｅｎｕｍａｂ）、ブロスマブ（Ｂｕｒｏｓｕｍａｂ）、チルドラキズマブ（Ｔｉｌｄｒａｋｉｚｕｍａｂ）、イバリズマブ（Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）、エミシズマブ（Ｅｍｉｃｉｚｕｍａｂ）、ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）、イノツズマブオゾガマイシン（ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、サリルマブ（Ｓａｒｉｌｕｍａｂ）、グセルクマブ（Ｇｕｓｅｌｋｕｍａｂ）、デュルバルマブ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、デュピルマブ（Ｄｕｐｉｌｕｍａｂ）、オクレリズマブ（Ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、アベルマブ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）、ブロダルマブ（Ｂｒｏｄａｌｕｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、ベズロトクスマブ（Ｂｅｚｌｏｔｏｘｕｍａｂ）、オララツマブ（Ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、アテゾリズマブ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、オビルトキサキシマブ（Ｏｂｉｌｔｏｘａｘｉｍａｂ）、イキセキズマブ（Ｉｘｅｋｉｚｕｍａｂ）、レスリズマブ（Ｒｅｓｌｉｚｕｍａｂ）、イダルシズマブ（Ｉｄａｒｕｃｉｚｕｍａｂ）、メポリズマブ（Ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ）、エロツズマブ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、ネシツムマブ（Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、エボロクマブ（Ｅｖｏｌｏｃｕｍａｂ）、アリロクマブ（Ａｌｉｒｏｃｕｍａｂ）、ダラツムマブ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ジヌツキシマブ（Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ）、セクキヌマブ（Ｓｅｃｕｋｉｎｕｍａｂ）、ブリナツモマブ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、ペンブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ベドリズマブ（Ｖｅｄｏｌｉｚｕｍａｂ）、シルツキシマブ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、ラムシルマブ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、オビヌツズマブ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、トラスツズマブエムタンシン（Ａｄｏ－Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、ラキシバクマブ（Ｒａｘｉｂａｃｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ブレンツキシマブベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂｖｅｄｏｔｉｎ）、ベリムマブ（Ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）、イピリムマブ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、トシリズマブ（Ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ）、デノスマブ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、デノスマブ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、カナキヌマブ（Ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ）、ゴリムマブ（Ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）、ウステキヌマブ（Ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル（Ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂｐｅｇｏｌ）、エクリズマブ（Ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）、パニツムマブ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラニビズマブ（Ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）、ナタリズマブ（Ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、セツキシマブ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、エファリズマブ（Ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、トシツモマブ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、オマリズマブ（Ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）、アダリムマブ（Ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、イブリツモマブチウキセタン（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂｔｉｕｘｅｔａｎ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＧｅｍｔｕｚｕｍａｂＯｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、パリビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、バシリキシマブ（Ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、ダクリズマブ（Ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）、アブシキシマブ（Ａｂｃｉｘｉｍａｂ）、カツマキソマブ（Ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）、ムロモナブ（Ｍｕｒｏｍｏｍａｂ）から選ばれてもよい。

２．２低分子標的薬
好ましくは、上記の組成物において、前記組成物は、標的薬又は化学療法薬又は免疫チェックポイント阻害剤をさらに含み、前記標的薬は、エピジェネティクス治療薬、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路を標的とする阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤から選ばれ、前記化学療法薬は、免疫抑制剤、プロテアソーム阻害剤、細胞傷害性薬物、細胞周期非特異性薬物から選ばれ、前記エピジェネティクス治療薬は、例えば、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤であり、前記ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路を標的とする阻害剤は、例えば、Ｔｒｉｃｉｂｉｎｅであり、前記チロシンキナーゼ阻害剤は、例えば、スニチニブであり、前記免疫抑制剤は、例えば、シクロホスファミドであり、前記プロテアソーム阻害剤は、例えば、ボルテゾミブであり、前記免疫抑制剤は、例えば、サリドマイド、ポマリドミドであり、前記細胞傷害性薬物は、例えば、ゲムシタビン、テモゾロミドであり、前記細胞周期非特異性薬物は、例えば、ミトキサントロンである。

２．３血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物
好ましくは、上記の組成物において、前記血中ＩｇＧレベルを低下させることができるポリペプチド薬物は、ＦｃＲｎタンパク質に対する血中ＩｇＧの結合を遮断できる。好ましくは、ヒトＦｃＲｎタンパク質に対する前記ポリペプチドの親和性は、ヒトＦｃＲｎタンパク質に対する血中ＩｇＧの親和性より高く、前記ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４から選ばれる。好ましくは、前記ポリペプチドは、抗体Ｆｃフラグメントの変異体を含み、前記変異体は、ＦｃＲｎに対するＦｃの親和性を向上できる変異を含み、前記変異は、ＹＴＥ、ＹＴＥＫＦ、ＬＳ、ＮＨＳであることが好ましく、前記抗体Ｆｃフラグメントは、例えば、エフガルチギモド（Ｅｆｇａｒｔｉｇｉｍｏｄ）である。前記変異体は、モノマー、ダイマー、ポリマーであってもよい。本発明で利用可能な前記ＹＴＥ、ＹＴＥＫＦ、ＬＳ、ＮＨＳなどの変異は、前記変異の位置が、それぞれ、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら（ＷＦ，Ｄ．Ａ．ｅｔａｌ．（２００２）．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０）１６９（９）：５１７１－５１８０．）、Ｌｅｅら（Ｌｅｅ，Ｃ．Ｈ．ｅｔａｌ．（２０１９）．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ１０（１）：５０３１．）によって記述されたとおりである。前記変異の対象はヒトＩｇＧから選ばれ、前記ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４から選ばれる。

本発明で利用可能なＦｃフラグメント変異体が他にもあり、前記変異体は、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａらによって記述された変異（ＷＦ，Ｄ．Ａ．ｅｔａｌ．（２００２）．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０）１６９（９）：５１７１－５１８０．）、Ｓｈａｎらによって記述された変異（Ｓｈａｎ，Ｌ．ｅｔａｌ．（２０１６）．ＰＬｏＳＯｎｅ１１（８）：ｅ０１６０３４５．）、Ｌｅｅらによって記述された変異（Ｌｅｅ，Ｃ．Ｈ．ｅｔａｌ．（２０１９）．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ１０（１）：５０３１．）、Ｍａｃｋｎｅｓｓらによって記述された変異（Ｍａｃｋｎｅｓｓ，Ｂ．Ｃ．ｅｔａｌ．（２０１９）．ＭＡｂｓ１１（７）：１２７６－１２８８．）、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅらによって記述された変異
を含み、ただしそれらに限定されない。

好ましくは、前記ポリペプチドは、抗体Ｆｃフラグメントの変異体を含み、前記変異体は、ＦｃγＲに対するＦｃの親和性を向上できる変異を含み、前記変異体は、変異Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３２２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３２２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ、Ｒ２１４Ｋであることが好ましく、前記変異体は、フコース修飾なしが好ましい。前記変異体は、モノマー、ダイマー、ポリマーであってもよい。本発明で利用可能なＦｃフラグメント変異体が他にもあり、前記変異体は、Ｗａｎｇらによって記述された変異（ＷａｎｇＸｉｎｈｕａ，ＭａｔｈｉｅｕＭａｒｙ，ＢｒｅｚｓｋｉＲａｎｄａｌｌＪ．（２０１８）．ＰｒｏｔｅｉｎＣｅｌｌ，９（１），６３－７３．ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ１３２３８－０１７－０４７３－８）を含み、ただしそれらに限定されない。

好ましくは、前記ＦｃＲｎに対するＦｃの親和性を向上できる変異を含む変異体は、ＦｃγＲに対するＦｃの親和性を向上できる変異を同時に含む。前記変異体は、モノマー、ダイマー、ポリマーであってもよい。

好ましくは、上記の薬物の組み合わせにおいて、前記ポリペプチドは、抗ＦｃＲｎ抗体から選ばれ、前記抗体は、例えば、ニポカリマブ（Ｎｉｐｏｃａｌｉｍａｂ）、ロザノリキシズマブ（Ｒｏｚａｎｏｌｉｘｉｚｕｍａｂ）、ＲＶＴ－１４０１、ＨＢＭ９１６１、ＡＬＸＮ１８３０、ＳＹＮＴ００１、ニルセビマブ（Ｎｉｒｓｅｖｉｍａｂ）である。

好ましくは、上記の薬物の組み合わせにおいて、前記ポリペプチドは、ＦｃＲｎと特異的に結合できるオリゴペプチドフラグメントから選ばれ、前記オリゴペプチドフラグメントの長さは、１０～７０個のアミノ酸であり、前記オリゴペプチドフラグメントは、例えば、ＡＢＹ－０３９である。

好ましくは、前記ポリペプチドは、ＦｃＲｎと特異的に結合できるＦｃポリマーから選ばれ、前記Ｆｃポリマーは、例えば、ＧＬ－２０４５、Ｍ２３０、ＰＲＩＭ、ＨｅｘａＧａｒｄ（商標）、ＣＳＬ７７７、ＵＣＢによる六価分子（ＨｅｘａｖａｌｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌｅｓｂｙＵＣＢ）である。

好ましくは、前記ポリペプチドは、Ｓｏｃｋｏｌｏｓｋｙらによって記述されたポリペプチドフラグメント（ＳｏｃｋｏｌｏｓｋｙＪｏｎａｔｈａｎＴ，ＳｚｏｋａＦｒａｎｃｉｓＣ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，２０１５，９１：１０９－２４）を含み、ただしそれらに限定されない。

２．４ウイルスベクター薬
好ましくは、上記の組成物において、前記ウイルスベクター薬では、前記ウイルスベクター薬で使用されるウイルスは、一本鎖ＤＮＡウイルス、二本鎖ＤＮＡウイルス、一本鎖ＲＮＡウイルス若しくは二本鎖ＲＮＡウイルスから選ばれ、及び／又は、前記ウイルスベクター薬で使用されるウイルスは、野生型ウイルス株若しくは自然弱毒株、遺伝子操作された選択的な弱毒株、遺伝子搭載ウイルス株、遺伝子転写による標的化ウイルス株から選ばれる。

好ましくは、前記野生型ウイルス株又は自然弱毒株は、ニューカッスル病ウイルス、レオウイルス、ムンプスウイルス、ウエストナイルウイルス、アデノウイルス、ワクチニアウイルスなどから選ばれる。

好ましくは、前記遺伝子操作された選択的な弱毒株は、重要な遺伝子を人工的に削除することによってウイルス複製の腫瘍選択性を実現し、例えば、チミジンキナーゼ（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ、ＴＫ）をノックアウトされた遺伝子操作ヒト単純ヘルペスウイルスＩ（ＨＳＶ－１）であり、前記遺伝子操作された選択的な弱毒株は、例えば、ＯＮＹＸ－０１５、Ｇ２０７である。ＯＮＹＸ－０１５では、Ｅ１ｂ領域に８２７ｂｐが削除され、且つＥ１Ｂ５５Ｋタンパク質に関連する遺伝子を点変異させることによって、その発現遺伝子を早めに停止させて、Ｅ１Ｂ５５Ｋタンパク質を発現できないようにする。Ｇ２０７では、ＨＳＶ－１の神経毒性決定因子であるγ３４．５遺伝子が削除されている。

好ましくは、前記遺伝子搭載ウイルス株には外因性遺伝子が搭載されており、前記外因性遺伝子は、例えば、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）であり、前記遺伝子搭載ウイルス株は、例えば、ＪＸ－５９４又はＴ－ＶＥＣである。

好ましくは、前記遺伝子転写による標的化ウイルス株は、ウイルス必須遺伝子の前に組織又は腫瘍特異的なプロモーターを挿入して腫瘍細胞内での腫瘍溶解性ウイルスの複製を制御するものであり、前記遺伝子転写による標的化ウイルス株は、例えば、Ｇ９２Ａである。

好ましくは、上記の薬物の組み合わせにおいて、前記一本鎖ＤＮＡウイルスは、パルボウイルス（ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ）から選ばれ、好ましくは、前記パルボウイルスは、Ｈ－１ＰＶウイルスである。

好ましくは、前記二本鎖ＤＮＡウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒｕｓ）から選ばれ、より好ましくは、前記単純ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ－１）であることが好ましく、例えば、Ｒ３６１６、Ｔ－ＶＥＣ、ＨＦ１０、Ｇ２０７、ＮＶ１０２０、ＯｒｉｅｎＸ０１０であり、前記ポックスウイルス（ｐｏｘｖｉｒｕｓ）は、Ｐｅｘａ－Ｖｅｃ（ワクチニアウイルス、ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓｅ）、ＪＸ－５９４（ワクチニアウイルス、ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓｅ）、ＧＬ－ＯＮＣ１、Ｍｙｘｏｍａから選ばれ、前記アデノウイルスは、Ｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖ、ＤＮＸ－２４０１、Ｃ－ＲＥＶ、ＮＧ－３４８、ＰｒｏｓＡｔａｋ、ＣＧ００７０、ＡＤＶ－ＴＫ、ＥＤＳ０１、ＫＨ９０１、Ｈ１０１、Ｈ１０３、ＶＣＮ－０１、テロメライシン（Ｔｅｌｏｍｅｌｙｓｉｎ、ＯＢＰ－３０１）から選ばれる。

好ましくは、前記一本鎖ＲＮＡウイルスは、ピコルナウイルス（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓ）、アルファウイルス（ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、レトロウイルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）、パラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ）、ラブドウイルス（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｕｓｅｓ）から選ばれ、好ましくは、前記ピコルナウイルス（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓ）は、ＣＡＶＡＴＡＫ、ＰＶＳ－ＲＩＰＯ、ＣＶＡ２１（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、ＲＩＧＶＩＲから選ばれ、前記アルファウイルス（ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）は、Ｍ１、シンドビスウイルスＡＲ３３９株（ＳｉｎｄｂｉｓＡＲ３３９）、セムリキ森林ウイルス（ＳｅｍｌｉｋｉＦｏｒｅｓｔｖｉｒｕｓ）から選ばれ、前記レトロウイルス（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）は、Ｔｏｃａ５１１から選ばれ、前記パラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ）は、ＭＶ－ＮＩＳ、ＰＶ７０１（ニューカッスル病ウイルス、Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ）から選ばれ、前記ラブドウイルス（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｕｓｅｓ）は、ＶＳＶ－ＩＦＮβ、ＭＧ１－ＭＡＧＥＡ３、ＶＳＶ－ＧＰから選ばれる。

好ましくは、前記二本鎖ＲＮＡウイルスは、レオウイルス（Ｒｅｏｖｉｒｕｓｅｓ）から選ばれ、好ましくは、前記レオウイルス（Ｒｅｏｖｉｒｕｓｅｓ）は、ペラレオレプ（Ｐｅｌａｒｅｏｒｅｐ）、レオウイルス（Ｒｅｏｌｙｓｉｎ）、ワクチニアウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａｖｉｒｕｓ）、ムンプスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ、ＨＩＶ）から選ばれ、好ましくは、前記ＲＮＡウイルスは、レオウイルス（ｒｅｏｖｉｒｕｓ）、コクサッキーウイルス（ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ）、ポリオウイルス（ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ）、セネカバレーウイルス（ｓｅｎｅｃａｖａｌｌｅｙｖｉｒｕｓ）、麻疹ウイルス（ｍｅａｓｌｅｓｖｉｒｕｓ）、ニューカッスル病ウイルス（ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ）、水疱性口内炎ウイルス（ｖｅｓｉｃｕｌａｒｓｔｏｍａｔｉｔｉｓｖｉｒｕｓ）、インフルエンザウイルスから選ばれる。

好ましくは、上記の薬物の組み合わせにおいて、前記腫瘍溶解性ウイルスは外因性遺伝子を発現し、前記外因性遺伝子は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃＴｃｅｌｌｅｎｇａｇｅｒｓ、ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖフラグメント、サイトカイン、ケモカインであることが好ましい。前記ＢｉＴＥは、ＣＤ３など、Ｔ細胞を活性化させる分子と結合でき、また、がん細胞の表面の抗原標的と結合でき、前記ｓｃＦｖは、免疫チェックポイントを標的とし、前記免疫チェックポイントは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ３、Ｓｉｇｌｅｃ１５、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２８、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡを含む。前記サイトカイン、ケモカインは、例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、インターフェロン（ＩＦＮ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、可溶性ＣＤ８０、ＣＣＬ３である。

いくつかの実施形態では、前記薬物のウイルスベクターは、ＡＡＶウイルスであることが好ましく、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４である。

いくつかの実施形態では、前記薬物のウイルスベクターは、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルスであることが好ましい。

前記ウイルスベクター薬及び／又は免疫グロブリン分解酵素の変異体は、リポソーム、ナノ粒子、脂質ナノ粒子、重合体、微粒子、マイクロカプセル、ミセル又はエキソソームで包み込んでもよいし又は融合させてもよい。

２．５遺伝子治療薬
好ましくは、上記の組成物において、前記遺伝子治療用ウイルスは、外因性遺伝子を発現し、前記外因性遺伝子は遺伝子欠失疾患に必要なタンパク質をコードし、前記タンパク質は、酸性α－グルコシダーゼ、銅輸送ＡＴＰａｓｅ２、α－ガラクトシダーゼ、アルギニノコハク酸合成酵素、β－グルコシダーゼ、β－ヘキソサミニダーゼＡ、Ｃ１プロテアーゼ阻害剤又はＣ１エステラーゼ阻害剤、グルコース－６－ホスファターゼ、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、成長ホルモン放出因子、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、血管内皮細胞増殖因子、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子、エリスロポエチン、結合組織細胞成長因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、酸性線維芽細胞増殖因子、上皮成長因子、トランスフォーミング増殖因子α、血小板由来成長因子、インスリン様成長因子Ｉ及びＩＩ、ＴＧＦ、骨形成タンパク質、神経成長因子、脳由来神経栄養因子、ニューロトロフィンＮＴ－３及びＮＴ４、５、毛様体神経栄養因子、グリア細胞由来神経栄養因子、神経栄養因子、凝集素、ネトリン－１（ｎｅｔｒｉｎ－１）及びネトリン－２（ｎｅｔｒｉｎ－２）、肝細胞増殖因子、エフリン（ｅｐｈｒｉｎｓ）、チロシン水酸化酵素、トロンボポエチン、インターロイキン（ＩＬ－１～ＩＬ－３６など）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子ａ及びｂ、インターフェロンａ、ｂ、ｇ、幹細胞因子、ｆｌｋ－２若しくはｆｌｔ３リガンド、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、一本鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、ＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ分子、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子、凝固（凝固）因子（第ＸＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、プロテインＣなど）、網膜色素性上皮特異的６５ｋＤａタンパク質、ＬＤＬ受容体、リポタンパク質リパーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、βグロブリン、αグロブリン、スペクトリン、α－アンチトリプシン、アデノシンデアミナーゼ、金属輸送タンパク質（ＡＴＰ７Ａ又はＡＴＰ７）、スルファミダーゼ、リソソーム蓄積症関連酵素ＡＲＳＡ、ヒポキサンチン・グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ｂ－２５グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、リソソーム・ヘキソサミニダーゼ、分岐鎖ケト酸脱水素酵素から選ばれる。

好ましくは、上記の組成物において、前記遺伝子治療用ウイルスは、外因性遺伝子を備え、前記外因性遺伝子は、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム、ｓｈＲＮＡから選ばれる阻害性核酸をコードする。前記阻害性核酸は、ポリヌクレオチドリピート疾患関連の遺伝子、当該遺伝子の転写物又は当該遺伝子の転写物のポリヌクレオチドリピートに結合する。前記疾患遺伝子は、関連タンパク質をコードし、前記タンパク質は、ハンチンチン（ＨＴＴ）、球脊髄性筋萎縮症のＸ染色体上のアンドロゲン受容体、ヒトアタキシン（Ａｔａｘｉｎ）－１、－２、－３、－７、Ｃａｖ２．１Ｐ／Ｑ電位依存性カルシウムチャネル（ＣＡＣＮＡ１Ａ）、ＴＡＴＡ結合タンパク質、アタキシン８（Ａｔａｘｉｎ８）の逆鎖（ＡＴＸＮ８０Ｓ）、脊髄小脳変性症（１型、２型、３型、６型、７型、８型、１２型、１７型）におけるセリン若しくはトレオニンプロテインホスファターゼ２Ａの５５ｋＤａ調節サブユニットＢのβアイソフォーム、脆弱Ｘ症候群関連ＦＭＲ１、脆弱Ｘ関連振戦若しくは運動失調症候群関連ＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質１）、脆弱Ｘ精神遅滞関連ＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質２）又はＡＦ４若しくはＦＭＲ２ファミリーメンバー２、筋強直性ジストロフィーにおけるミオトニンプロテインキナーゼ（ＭＴ－ＰＫ）、フラタキシン（Ｆｒａｔａｘｉｎ）から選ばれる。前記疾患遺伝子は、スーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子の変異体、パーキンソン病及び／又はアルツハイマー病の病因に関連する遺伝子、アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）、ＰＣＳＫ９、ＨＩＶ感染関連遺伝子（ＨＩＶＴａｔ、ＴＡＲ、ＨＩＶＴＡＲ、ＣＣＲ５）、インフルエンザウイルス感染におけるＡ型インフルエンザウイルスゲノム若しくは遺伝子配列、ＳＡＲＳ感染における重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスゲノム若しくは遺伝子配列、呼吸器合胞体ウイルス感染における呼吸器合胞体ウイルスゲノム若しくは遺伝子配列、エボラウイルス感染におけるエボラウイルスゲノム若しくは遺伝子配列、Ｂ型及びＣ型肝炎ウイルス感染におけるＢ型及びＣ型肝炎ウイルスゲノム若しくは遺伝子配列、ＨＳＶ感染における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ゲノム若しくは遺伝子配列、コクサッキーウイルスＢ３型感染におけるコクサッキーウイルスＢ３ゲノム若しくは遺伝子配列、原発性ジストニアにおける遺伝子をサイレンシングする病原性対立遺伝子（対立遺伝子の特異的サイレンシング）、例えばｔｏｒｓｉｎＡ、移植関係の特異的なクラスＩ及びＨＬＡの対立遺伝子、常染色体顕性網膜色素変性症における変異、ロドプシン遺伝子から選ばれる。

３．製品及びキット
本発明は、また、製品を提供し、前記製品は、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物と別の治療薬と含有し、前記別の治療薬は、ウイルスベクター薬、抗体、血中ＩｇＧレベルを低下させることができるポリペプチド薬物から選ばれる。

本発明は、また、キット又はボックスセットを提供し、前記キットは、１）本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を含む治療有効量の薬物と、２）治療有効量の別の治療薬とを含み、前記治療薬は、ウイルスベクター薬、抗体、血中ＩｇＧレベルを低下させることができるポリペプチド薬物から選ばれ、前記ウイルスベクター薬は、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルスであることが好ましい。前記キットは、３）標的薬又は化学療法薬又は免疫チェックポイント阻害剤をさらに含んでもよい。前記標的薬は、エピジェネティクス治療薬、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路を標的とする阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤から選ばれ、前記化学療法薬は、免疫抑制剤、プロテアソーム阻害剤、細胞傷害性薬物、細胞周期非特異性薬物から選ばれ、前記エピジェネティクス治療薬は、例えば、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤であり、前記ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路を標的とする阻害剤は、例えば、Ｔｒｉｃｉｂｉｎｅであり、前記チロシンキナーゼ阻害剤は、例えば、スニチニブであり、前記免疫抑制剤は、例えば、シクロホスファミドであり、前記プロテアソーム阻害剤は、例えば、ボルテゾミブであり、前記免疫抑制剤は、例えば、サリドマイド、ポマリドミドであり、前記細胞傷害性薬物は、例えば、ゲムシタビン、テモゾロミドであり、前記細胞周期非特異性薬物は、例えば、ミトキサントロンである。

前記キット又はボックスセットは、ボックスＡ及びボックスＢを含み、前記ボックスＡは、治療有効量の本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を含み、前記ボックスＢは、治療有効量の別の治療薬を含み、前記治療薬は、ウイルスベクター薬、抗体、血中ＩｇＧレベルを低下させることができるポリペプチド薬物から選ばれ、前記ウイルスベクター薬は、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルスであることが好ましい。前記ボックスセットは、ボックスＣをさらに含んでもよい。前記ボックスＣは、標的薬又は化学療法薬又は免疫チェックポイント阻害剤を含む。前記標的薬は、エピジェネティクス治療薬、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路を標的とする阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤から選ばれ、前記化学療法薬は、免疫抑制剤、プロテアソーム阻害剤、細胞傷害性薬物、細胞周期非特異性薬物から選ばれ、前記エピジェネティクス治療薬は、例えば、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤であり、前記ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路を標的とする阻害剤は、例えば、Ｔｒｉｃｉｂｉｎｅであり、前記チロシンキナーゼ阻害剤は、例えば、スニチニブであり、前記免疫抑制剤は、例えば、シクロホスファミドであり、前記プロテアソーム阻害剤は、例えば、ボルテゾミブであり、前記免疫抑制剤は、例えば、サリドマイド、ポマリドミドであり、前記細胞傷害性薬物は、例えば、ゲムシタビン、テモゾロミドであり、前記細胞周期非特異性薬物は、例えば、ミトキサントロンである。

当該キットは、治療有効量の本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物及び治療有効量の別の治療薬の投与（例えば、用量情報、投与時間間隔情報）に関する説明書を含んでもよい。前記別の治療薬は、ウイルスベクター薬、抗体、血中ＩｇＧレベルを低下させることができるポリペプチド薬物から選ばれ、前記ウイルスベクター薬は、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルスであることが好ましい。

十分に確立された発現系を利用してウイルスベクター薬を製造してもよい。いくつかの方法の例として、哺乳動物細胞発現系を利用してウイルス粒子を生成させることが挙げられ、例えば、ＨＥＫ２９３細胞を用いてアデノウイルス系ウイルスベクター薬を作製する（ＦｒｅｅｄｍａｎＪｏｓｈｕａＤ，ＤｕｆｆｙＭａｒｇａｒｅｔＲ，Ｌｅｉ－ＲｏｓｓｍａｎｎＪａｎｅｔｅｔａｌ．，ＡｎＯｎｃｏｌｙｔｉｃＶｉｒｕｓＥｘｐｒｅｓｓｉｎｇａＴ－ｃｅｌｌＥｎｇａｇｅｒＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙＴａｒｇｅｔｓＣａｎｃｅｒａｎｄＩｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅＳｔｒｏｍａｌＣｅｌｌｓ．［Ｊ］．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，２０１８，７８：６８５２－６８６５）。

医薬担体は、液体であってもよく、且つ、医薬組成物は、溶液の形態であってもよい。液体担体は、溶液、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エリキシル剤、加圧組成物を製造するために用いられる。有効成分は、薬学的に許容される液体担体、例えば、水、有機溶媒、二者の混合物又は薬学的に許容される油又は脂肪に溶解又は懸濁されてもよい。

非経口投与用の医薬組成物は、無菌で、実質的に等張性で、発熱物質がなく、しかもＦＤＡ又は同様の機関のＧＭＰに従って製造されるものである。ウイルスベクター薬は、当該物質の溶液又は懸濁液である注射可能な剤形として投与されてもよく、ただし、当該物質が生理学的に許容される希釈剤及び医薬担体（無菌の液体であってもよく、例えば、水、油、塩水、グリセリン又はエタノールである）の中にある。また、組成物には添加物、例えば、湿潤剤又は乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などが存在してもよい。医薬組成物の他の成分として石油、動物、植物由来又は合成の成分が挙げられ、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油である。一般的に、例えば、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなどのジオールが好ましい液体担体であり、注射用溶液の場合は特にそうである。ウイルスベクター薬はデポ剤又は埋め込み型製剤の形態で投与されてもよく、それらの形態は、有効成分が持続的に放出できるように製造されてもよい。一般的に、組成物を注射剤、即ち、液体の溶液又は懸濁液として製造してもよいし、注射前に液体溶媒に溶解又は懸濁させることに適する固体の形態として製造してもよい。

４．変異体、タンパク質、医薬組成物及びキットの用途
本発明は、また、薬物の製造における本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキットの用途に関する。いくつかの実施例では、前記薬物は、被験者における自己抗体媒介性病状を治療するために用いられる。いくつかの実施例では、前記薬物は、被験者におけるＩｇＧレベルを低下させるために用いられる。いくつかの実施例では、前記薬物は、被験者における実質臓器移植後の自己抗体媒介性臓器拒絶反応を予防及び／又は治療するために用いられる。いくつかの実施例では、前記薬物は、遺伝子治療に用いられる。いくつかの実施例では、前記薬物は、ウイルスベクターを基盤とした遺伝子治療の前に体内既存の抗ウイルスベクターの中和抗体を除去するために用いられる。いくつかの実施例では、前記薬物は、被験者における腫瘍を治療するために用いられる。いくつかの実施例では、前記薬物は、被験者における自己抗体を除去してＦｃ含有剤に治療効果をより良く発揮させるために用いられる。いくつかの実施例では、前記薬物は、Ｆｃ含有剤を投与されている被験者において前記Ｆｃ含有剤の血清レベルを低下させるために用いられる。

一つの好ましい実施例では、本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキットは、ＩｇＧを分析するために用いられてもよい。ただし、本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキットを使用してＩｇＧを切断することで得られたＦｃ及びＦ（ａｂ’）_２フラグメントを例えば、質量分析法による分子量推定、グリコフォーム分析、ＡＤＣ分子分析などに用いる。

別の好ましい実施例では、本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキットは、Ｆａｂ抗体フラグメントを製造するために用いられてもよい。ただし、本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキットを使用してＩｇＧを切断することで生成されたＦ（ａｂ’）_２フラグメントを還元させることによってＦａｂフラグメントを製造する。

４．１自己抗体媒介性病状
本発明は、被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造における本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキットの用途に関する。いくつかの実施例では、前記自己抗体媒介性病状は、自己免疫疾患及び／又は病原性抗体媒介性疾患又は病状である。

好ましくは、前記疾患は、病原性抗体媒介性疾患又は病状であり、前記病原性ＩｇＧ媒介性自己免疫疾患又は病状を含み、ただしそれらに限定されず、例えば、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、抗ＧＢＭ抗体型糸球体腎炎、抗ＮＭＤＡＲ受容体脳炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性胃炎、自己免疫性感音難聴、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性の副甲状腺機能低下、自己免疫性下垂体炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性の水疱性皮膚症、自己免疫性精巣炎、自己免疫性多内分泌腺症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、炎症性脱髄性多発根神経炎、急性運動性軸索型ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、腹部疾患、自己免疫性蕁麻疹、クローン病、クレスト（ＣＲＥＳＴ）症候群、セリアック病、デゴス病、抗好中球細胞質抗体関連血管炎、自己免疫性好中球減少症、後天性表皮水疱症、本態性混合性クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、川崎病、メニエール症候群、混合性結合組織病、モーレン潰瘍、関節リウマチ、多発性硬化症、重症筋無力症、スティフパーソン症候群、先天性完全房室ブロック、後天性表皮水疱症、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、自己免疫性多内分泌腺症候群、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性多内分泌腺症候群、自己免疫性多内分泌腺症候群、多発性筋炎と皮膚筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー症候群、ライター症候群、リウマチ性心疾患、血友病（後天性ＦＶＩＩＩ欠乏症）、ランバート・イートン（Ｌａｍｂｅｒｔ－Ｅａｔｏｎ）筋無力症候群、多発性骨髄腫、サルコイドーシス、コラーゲン沈着、乾燥症候群、亜急性甲状腺炎、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、シェーグレン
症候群、１型糖尿病、白斑、フォークト－小柳－原田病又はウェゲナー肉芽腫症、急性喘息又は慢性喘息、臓器移植拒絶反応、一次性進行型多発性硬化症、全身性硬化症、血清病、免疫複合体型アレルギーを含み、ただしそれらに限定されない。

臓器移植では、宿主ＩｇＧが急性移植拒絶反応を引き起こす。移植拒絶反応（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）には２つのケースがあり、一つは宿主対移植片反応（ｈｏｓｔｖｅｒｓｕｓｇｒａｆｔｒｅａｃｔｉｏｎ、ＨＶＧＲ）で、もう一つは移植片対宿主反応（ｇｒａｆｔｖｅｒｓｕｓｈｏｓｔｒｅａｃｔｉｏｎ、ＧＶＨＲ）である。実質臓器移植では、宿主対移植片反応が主で、移植片対宿主反応がまれである。骨髄移植では、移植片対宿主反応が一般的である。

移植片対宿主反応（ＧＶＨＲ）とは、レシピエントに同種の組織又は臓器を移植した後、外来の組織又は臓器などの移植片がレシピエントの免疫系によって自身にない成分として認識され、後者は移植片に対する攻撃、破壊及び除去を起こす免疫反応を指す。ヒトリンパ球抗原（ｈｕｍａｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅａｎｔｉｇｅｎ、ＨＬＡ）への感受性の高い患者には、移植拒絶反応がより起きやすい。拒絶反応の発生メカニズムは、主に細胞性免疫及び体液性免疫の２つを含み、そのうち、体液性免疫（ｈｕｍｏｒａｌｉｍｍｕｎｉｔｙ）は、エフェクターＢ細胞が抗体ＩｇＧを生成することによって保護の目的を実現する免疫メカニズムである。

本発明は、被験者における実質臓器移植後の自己抗体媒介性臓器拒絶反応を予防及び／又は治療するための薬物の製造における本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキットの用途に関する。いくつかの実施形態では、前記臓器拒絶反応は、臓器移植における同種移植片拒絶反応を含み、ただしそれらに限定されず、例えば、腎臓移植拒絶反応、同種膵島移植拒絶反応、膵臓移植拒絶反応、心臓移植拒絶反応、肝臓移植拒絶反応、肺移植拒絶反応又は小腸移植拒絶反応である。

病原性抗体媒介性疾患又は病状は、さらにグロブリン過剰血症を含む。ただし、前記過剰なグロブリンは白血球によって生成され、前記白血球は、Ｂ細胞、異常なＢ細胞から選ばれ、前記グロブリンは、ガンマグロブリンを含み、前記グロブリン過剰血症は、原発性単クローン性ガンマグロブリン血症、結合組織病、肝疾患、感染症、サルコイドーシス、重症筋無力症、ホジキン病、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）病、腎炎、アナフィラクトイド紫斑病、免疫性（あるいは自発性）血小板減少症、悪性単クローン性ガンマグロブリン血症（例えば、多発性骨髄腫、重鎖病、悪性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マクログロブリン血症など）、二次性単クローン性ガンマグロブリン血症（例えば、非リンパネットワーク性全身性腫瘍、単球性白血病、クリオグロブリン血症など）、良性Ｍ蛋白血症、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ＡＬアミロイドーシス、孤立性形質細胞腫（骨又は髄外）、ＰＯＭＥＳ症候群、反応性形質細胞増多症、がんの溶骨性骨転移、形質芽球性リンパ腫、単クローン性免疫グロブリン関連腎症（ＭＧＲＳ）などを含む。前記病状は、多発性骨髄腫であることが好ましい。

本発明は、また、疾患を治療又は予防するための薬物の製造における本発明の変異体、タンパク質、組成物及び／又はキット使用に関する。好ましくは、前記疾患は、腫瘍、がん、感染症、遺伝子欠失関連疾患、病原性ＩｇＧ抗体媒介性疾患又は病状を含み、ただしそれらに限定されない。前記感染症は、ウイルス感染症、細菌感染症又は真菌感染症を含む。

４．２腫瘍又はがん
前記腫瘍又はがんは、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、小児小脳腫瘍若しくは大脳腫瘍、基底細胞がん、肝外胆管がん、膀胱がん、骨腫瘍、骨肉腫若しくは悪性線維性組織球腫、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、小脳星状細胞腫（脳腫瘍）、大脳星状細胞腫若しくは悪性神経膠腫（脳腫瘍）、上衣腫（脳腫瘍）、髄芽腫（脳腫瘍）、テント上原始神経外胚葉性腫瘍（脳腫瘍）、視神経視床下部神経膠腫（脳腫瘍）、乳がん、気管支腺腫若しくはカルチノイド、バーキット（Ｂｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫、カルチノイド、原発不明がん、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫若しくは悪性神経膠腫、子宮頸がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、繊維形成性小円形細胞腫瘍、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍におけるユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、小児性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼内黒色腫（眼腫瘍）、網膜芽細胞腫（眼腫瘍）、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外、性腺外若しくは卵巣の胚細胞腫瘍、妊娠性トロホブラスト腫瘍、脳幹神経膠腫、小児大脳星状細胞腫神経膠腫、小児視神経視床下部神経膠腫、胃カルチノイド、有毛細胞白血病、頭頸部がん、心臓腫瘍、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、視神経視床下部神経膠腫、眼内黒色腫、膵島細胞がん（膵内分泌腫瘍）、カポジ肉腫、腎臓がん（腎細胞がん）、咽頭がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病（急性リンパ性白血病とも呼ばれる）、急性骨髄性白血病（急性骨髄芽球性白血病とも呼ばれる）、慢性リンパ性白血病（慢性リンパ性白血病とも呼ばれる）、慢性骨髄芽球性白血病（慢性骨髄性白血病とも呼ばれる）、有毛細胞白血病、口唇がん及び口腔がん、脂肪肉腫、肝臓がん（原発性）、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（旧分類法では、ホジキンリンパ腫を除く他のリンパ腫全体）、原発性中枢神経系リンパ腫、マクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫若しくは骨肉腫、髄芽腫、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル（Ｍｅｒｋｅｌ）細胞がん、中皮腫、成人悪性中皮腫、原発巣不明の頸部転移扁平上皮がん、口腔がん、多発性内分泌腺腫症候群、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成若しくは骨髄増殖性疾患、慢性骨髓性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性骨髄性白血病、骨髄増殖性疾患、鼻腔及び副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、中咽頭がん、骨肉腫若しくは骨の悪性線維性組織球腫、卵巣がん、上皮性卵巣がん（表層上皮性・間質性細胞腫瘍）、卵巣の胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓がん、膵島細胞による膵臓がん、副鼻腔及び鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、褐色細胞腫、松果体部の星状細胞腫、松果体部の胚細胞腫瘍、松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腫瘍、形質細胞腫若しくは多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎盂及び尿管の腎細胞がん（腎臓がん）、移行上皮がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、カポジ肉腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー
症候群、皮膚がん（非黒色腫）、皮膚がん（黒色腫）、メルケル（Ｍｅｒｋｅｌ）細胞がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、原発不明頸部転移扁平上皮がん、転移性胃がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉症及びセザリー症候群を参照）、精巣がん、咽喉頭がん、胸腺腫、胸腺腫及び胸腺がん、甲状腺がん、甲状腺がん、腎盂及び尿管の移行上皮がん、尿管及び腎盂のトロホブラスト腫瘍、尿道の移行上皮がん、子宮内膜がん（子宮がん）、子宮肉腫、膣がん、視神経視床下部神経膠腫、外陰がん、マクログロブリン血症、腎芽腫（腎臓がん）からなる群から選ばれる。

４．３がん又は感染症
前記がん又は感染症は、動物の疾患であってもよいし、ヒトの疾患であってもよく、例えば、次のとおりである。

４．４遺伝子欠失関連疾患
前記遺伝子欠失関連疾患は、タンパク質過剰発現、タンパク質発現欠乏、ウイルス感染症によって引き起こされる異種タンパク質発現を含み、ただしそれらに限定されず、好ましくは、前記遺伝子治療薬は、遺伝子過剰発現又は遺伝子低発現又は遺伝子欠失又は感染症を治療するために用いられ、前記疾患は、肺疾患（例えば、嚢胞性線維症）、出血性疾患（例えば、インヒビターを保有する若しくは保有しない血友病Ａ若しくは血友病Ｂ）、地中海貧血症、血液疾患（例えば、貧血）、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん、リソソーム蓄積症（例えば、アスパルチルグルコサミン尿症、バッテン病、後期幼児型神経セロイドリポフスチン症２型（ＣＬＮ２）、シスチン症、ファブリー病、ゴーシェ病Ｉ型、ＩＩ型及びＩＩＩ型、糖原病ＩＩ型（ポンペ病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩ型（テイ－サックス（ＴａｙＳａｃｈｓ）病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ（Ｓａｎｄｈｏｆｆ）病）、ムコリピドーシスＩ型（シアリドーシス１型及び２型）、ＩＩ型（アイセル病）、ＩＩＩ型（偽性ハーラー（Ｈｕｒｌｅｒ）・ポリジストロフィー）及びＩＶ型、ムコ多糖症（ハーラー（Ｈｕｒｌｅｒ）症候群及びその異型、ハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）症候群、サンフィリッポ（Ｓａｎｆｉｌｉｐｐｏ）症候群Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、モルキオ（Ｍｏｒｑｕｉｏ）症候群Ａ型、Ｂ型、マロトー・ラミー（Ｍａｒｏｔｅａｕｘ－Ｌａｍｙ）症候群、スライ（Ｓｌｙ）症候群）、ニーマン・ピック（Ｎｉｅｍａｎｎ－Ｐｉｃｋ）病Ａ型、Ｂ型、Ｃ１型、Ｃ２型並びにシンドラー（Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ）病Ｉ型及びＩＩ型、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、銅若しくは鉄蓄積性障害（例えば、ウィルソン病若しくはメンケス（Ｍｅｎｋｅｓ）病）、ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症、神経疾患若しくは神経変性疾患、がん、１型若しくは２型糖尿病、アデノシンデアミナーゼ欠損症、代謝異常（例えば、糖原病）、実質臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓、心臓）又はウイルス感染性（例えば、Ｂ型及びＣ型肝炎、ＨＩＶなど）、細菌性若しくは真菌性疾患、凝固障害から選ばれる。

好ましくは、前記被験者は、血友病Ａ、インヒビターを保有する血友病Ａ、血友病Ｂ、インヒビターを保有する血友病Ｂ、凝固因子ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、Ｖ、ＸＩＩ、ＩＩのいずれか、ヴォン・ヴィレブランド（ｖｏｎＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ）因子又はＦＶ及びＦＶＩＩＩ複合欠乏症、地中海貧血症、ビタミンＫエポキシドレダクターゼＣｌ欠損症又はγ－カルボキシラーゼ欠損症を有している。

好ましくは、前記遺伝子欠失によって引き起こされる疾患は、貧血；外傷、損傷、血栓形成、血小板減少症、脳卒中、凝固障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）に関連する出血；ヘパリン、低分子量ヘパリン、五炭糖、ワルファリン、低分子血栓形成抑制剤（即ち、ＦＸａ阻害剤）又は血小板疾患（例えば、ベルナール・スーリエ（ＢｅｒｎａｒｄＳｏｕｌｉｅｒ）症候群、グランツマン（Ｇｌａｎｚｍａｎｎ）血小板無力症又は貯蔵プール欠乏症）に関係する過剰な抗凝固状態である。

４．５薬物の投与及び治療方法
本発明は、また、本発明の変異体、タンパク質、医薬組成物及び／又はキットの投与方法、及び本発明の変異体、タンパク質、医薬組成物及び／又はキットを投与して疾患又は病状を治療する方法に関する。

好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物は、体内では抗薬物抗体がすでに生成している時又は抗薬物抗体を生成させやすい別の治療薬の投与前に投与されてもよい。

好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物は、体内では抗薬物抗体がすでに生成している時又は抗薬物抗体を生成させやすい別の治療薬の投与前に、同時に及び／又は投与後に投与されてもよい。

本発明に係る使用において、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物は、別の治療薬と同時に、別々に又は順次使用するための複合製剤として存在する。

いくつかの実施形態では、前記方法は、１）被験者に本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を投与するステップと、続いて、２）前記被験者に前記別の治療薬を投与するステップとを含む。好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物と前記別の治療薬の投与に時間間隔がある。

いくつかの実施形態では、前記方法は、１）前記被験者に前記別の治療薬を投与するステップと、続いて、２）被験者に本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を投与するステップとを含む。好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物と前記別の治療薬の投与に時間間隔がある。

好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物の投与量及び時間間隔は、被験者体内の免疫グロブリンレベルを初期レベルの６０％に低下させるように設定される。より好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物の投与量及び時間間隔は、被験者体内の免疫グロブリンレベルを当該患者体内の初期レベルの５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満又は１０％未満に低下させるように設定される。本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物は、ある時点に投与されてもよいし又は設定された期間以内に投与されてもよい。

好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物は、点滴静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、関節内注射、皮内注射又は皮下注射で投与され、好ましい注射方式は点滴静脈内注射である。且つ／又は投与される本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物の量は、０．０１～２ｍｇ／ｋｇ体重、０．０４～２ｍｇ／ｋｇ体重、０．１２～２ｍｇ／ｋｇ体重、０．２４～２ｍｇ／ｋｇ体重又は１～２ｍｇ／ｋｇ体重である。

好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物と前記別の治療薬の投与の時間間隔は、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間又は少なくとも６時間であり、しかも最大３５日、最大２８日、最大２１日、最大１８日、最大１４日、最大１３日、最大１２日、最大１１日、最大１０日、最大９日、最大８日、最大７日、最大６日、最大５日、最大４日、最大３日、最大２日、最大２４時間、最大１８時間、最大１２時間、最大１０時間、最大８時間、最大７時間又は最大６時間である。

好ましくは、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物と前記別の治療薬の時間間隔は、３０分～１時間、３０分～２時間、３０分～３時間、３０分～４時間、３０分～５時間、３０分～６時間、１～２時間、１～３時間、１～４時間、１～５時間、１～６時間、２～３時間、２～４時間、２～５時間、２～６時間、３～４時間、３～５時間、３～６時間、４～５時間、４～６時間又は５～６時間である。

別の実施形態では、前記方法は、１）本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物で前記被験者からの血液をインビトロで処理するステップと、２）血液を前記被験者に戻すステップと、３）前記被験者に前記別の治療薬を投与するステップとを含む。

別の実施形態では、前記方法は、１）前記被験者に前記別の治療薬を投与するステップと、２）本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物で前記被験者からの血液をインビトロで処理するステップと、３）血液を前記被験者に戻すステップとを含む。

好ましい実施形態では、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を別の治療薬と組み合わせてがんを予防及び／又は治療するために用いる。

好ましい実施形態では、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を別の治療薬と組み合わせてウイルス感染症を予防及び／又は治療するために用いる。

好ましい実施形態では、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を別の治療薬と組み合わせて細菌感染症を予防及び／又は治療するために用いる。

好ましい実施形態では、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を別の治療薬と組み合わせて真菌感染症を予防及び／又は治療するために用いる。

好ましい実施形態では、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を別の治療薬と組み合わせて遺伝子欠失関連疾患を予防及び／又は治療するために用いる。

好ましい実施形態では、本発明の変異体、タンパク質及び／又は組成物を別の治療薬と組み合わせて病原性ＩｇＧ抗体媒介性疾患又は病状を治療するために用いる。

本発明は、また、前記薬物の組み合わせを被験者に投与して遺伝子欠失関連疾患又はがん又は感染又は病原性ＩｇＧ抗体媒介性疾患又は病状を治療又は予防する方法を提供する。ただし、前記方法により、前記ウイルスベクターと結合抗体するは、２０～５０％、５０～７５％、７５～９０％、９０～９５％又は９５％又は９５％以上減少し、また、前記方法により、前記病原性ＩｇＧ抗体は、２０～５０％、５０～７５％、７５～９０％、９０～９５％又は９５％又は９５％以上減少する。好ましくは、前記薬物は、遺伝子欠失関連疾患の治療方法に用いられる。好ましくは、前記薬物は、がんを治療し、がんを予防し、感染を予防する方法に用いられる。前記感染は、ウイルス感染症、細菌感染症又は真菌感染症であることが好ましい。好ましくは、前記薬物は、がんの治療方法に用いられる。好ましくは、前記薬物は、病原性ＩｇＧ抗体媒介性疾患又は病状の治療方法に用いられる。

好ましくは、前記別の治療薬は、ウイルスベクター薬であり、好ましくは、前記ウイルスベクター薬は、腫瘍溶解性ウイルス、ウイルスベクターワクチン、遺伝子治療用ウイルスである。

好ましくは、前記別の治療薬は、抗体である。

好ましくは、前記別の治療薬は、血中ＩｇＧレベルを低下させることができるポリペプチド薬物であり、例えば、エフガルチギモド（Ｅｆｇａｒｔｉｇｉｍｏｄ）である。より好ましくは、前記血中ＩｇＧレベルを低下させることができるポリペプチド薬物は、上記の病原性ＩｇＧ抗体媒介性疾患の治療に用いられる。

好ましくは、前記薬物の組み合わせの成分が単独で投与され、又は前記薬物の組み合わせの成分が同時に投与される。

上記の複数の用途及び方法において、さらに別の治療薬、例えば、抗炎症薬と組み合わせてもよい。

いくつかの実施例では、前記別の治療薬は、白血球除去剤である。

いくつかの実施例では、前記別の治療薬は、Ｂ細胞枯渇剤である。

いくつかの実施例では、前記Ｂ細胞枯渇剤は、抗体であり、好ましくは、腫瘍の治療に用いられる抗体であり、より好ましくは、前記抗体は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１４、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ５６、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２、ＣＤ３、ＩＬ－１β、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、Ｃ５、ＢＡＦＦ、ＢＬｙＳ、ＢＣＭＡ、ＣＸＣＲ－４、ＩＣＡＭ－１、ＳＬＡＭＦ７（ＣＳ１）、ＴＮＦα、ＩｇＥ、ＣＤ８５又はＣＤ８６と特異的に結合する。

いくつかの実施例では、前記別の治療薬は、リツキシマブ、ダクリズマブ、ベバシズマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、インフリキシマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、エファリズマブ、ナタリズマブ、トシリズマブ、エクリズマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、ウステキヌマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、イサツキシマブ（Ｉｓａｔｕｘｉｍａｂ）又はそれらの組み合わせである。

いくつかの実施例では、前記Ｆｃ含有剤は、治療薬又は診断薬であり、好ましくは、前記Ｆｃ含有剤は、抗体、Ｆｃ融合タンパク質、抗体薬物複合体である。

５．用語の説明
他に定義しない限り、本明細書で使用される技術及び科学用語の全てが、当業者の知っている一般的な意味と同じものである。本発明の実施又は試験では本明細書の記載に似ている又は同等のいずれの方法、装置及び材料を使用してもよいが、以下、好ましい方法、装置及び材料を記述する。

用語「ヌクレオチド」又は「ポリヌクレオチド」とは、一本鎖又は二本鎖の形態のデオキシリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド又はリボヌクレオチド及びその重合体を意味する。特に限定しない限り、前記用語は、天然のヌクレオチドの既知の類似体を含有する核酸をカバーしており、前記類似体は、参照核酸に似ている結合特性を有し且つ天然に存在するヌクレオチドと同様の方式で代謝される。他に特に限定しない限り、前記用語とは、オリゴヌクレオチド類似体も意味し、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アンチセンス技術で使用するＤＮＡ類似体（ホスホロチオエート、ホスホロアミド酸など）を含む。他に限定しない限り、特定の核酸配列は、その保存的に修飾された変異体（縮重コドン置換を含み、ただしそれらに限定されない）、相補的配列、及び明確に説明した配列をも暗黙的にカバーしている。具体的には、１つ又は１つ以上の特定の（又は全て）のコドンの位置３が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基によって置換された配列を生成することによって縮重コドン置換を実現できる（Ｂａｔｚｅｒｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓ．１９：５０８１（１９９１）、Ｏｈｔｓｕｋａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）、Ｃａｓｓｏｌｅｔａｌ．（１９９２）、Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉｅｔａｌ．，ＭｏｌＣｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ８：９１－９８（１９９４））。

用語「ポリペプチド」と「タンパク質」は、本明細書では、アミノ酸残基の重合体を意味して入れ替えて使用される。即ち、ポリペプチドに関する記述は、ペプチドの記述及びタンパク質の記述にも適用され、逆もまたしかりである。前記用語は、天然に存在するアミノ酸重合体、及び１つ又は１つ以上のアミノ酸残基が非天然にコードされたアミノ酸であるアミノ酸重合体に適用される。本明細書で使用される前記用語は、全長タンパク質（即ち、抗原）など、あらゆる長さのアミノ酸鎖をカバーしており、ただしアミノ酸残基が共有のペプチド結合によって接続される。

用語「宿主細胞」とは、例えば、直接的な取り込み、形質導入、ペアリング又は当該分野で知られている他の方法など、組換え宿主細胞を生成させるための挿入の方法を問わず、本発明のヌクレオチドを含む細胞を意味する。外因性ポリヌクレオチドは、例えば、プラスミドの非組込み型ベクターとして保持されてもよいし又は宿主ゲノムに組み込まれてもよい。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であってもよい。

用語「形質転換」とは、異種ＤＮＡ配列を宿主細胞又は体内に導入する方法を意味する。用語「発現」とは、細胞における内因性遺伝子又は導入遺伝子の転写及び／又は翻訳を意味する。
（発明の効果）

本発明の有益な効果は次のとおりである。本発明は、免疫グロブリン分解酵素の変異体の使用を提供し、本発明の変異体を前記分野に用いる場合は、活性が高く、既存の抗体が少ないという特徴があり、安全性が高い利点がある。

以下、実施例で本発明をさらに説明し、ただし本発明を実施例の範囲に限定するわけではない。以下の実施例で具体的な条件が明記されていない試験方法は、通常の方法及び条件で行うか、又は商品の説明書に従って選択する。

実施例１：変異体ライブラリーの設計と発現
野生型ＩｄｅＥタンパク質配列変異ライブラリーを設計・構築し、それらから４０個の変異株をスクリーニングした。

コドン最適化を経て野生型ＩｄｅＥタンパク質配列（配列番号２）をコードするポリヌクレオチド配列を合成し、Ｎ末端シグナルペプチド配列及びＣ末端６×ヒスチジンタグを加え、配列合成後にｐＥＴ３２ａ発現ベクターに挿入し、正しい配列と確認した後、野生型ＩｄｅＥを発現するための組換えプラスミドを得た。野生型ＩｄｅＥの発現プラスミドに基づいて、変異ライブラリーに必要な縮重プライマーを設計し、元の野生型配列を増幅させ、増幅後に配列をベクターに挿入して変異ライブラリー組換えプラスミドを得た。野生型及び変異ライブラリー組換えプラスミドを電気形質転換により大腸菌ＢＬ２１Ｓｔａｒ（ＤＥ３）に導入し、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢアガロースプレートに接種した。コロニーが出るまで３７℃で一晩培養した。単一のコロニーをピッキングして、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地２００μＬに接種し、３７℃、２５０ｒｐｍで一晩培養した。１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地１ｍＬに一晩の培養物を接種し、３７℃で４時間培養した後に０．１ｍＭのＩＰＴＧを加えて、３０℃で引き続き一晩培養した。一晩の培養物を遠心分離して上清を収集した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを利用して変異体発現上清中の変異体タンパク質の濃度を評価した。

実施例２：ヒトＩｇＧ１に対する変異体の切断活性の評価
ヒトＩｇＧ１に対する各変異体の切断活性を評価するために、ＥＬＳＩＡに基づく活性測定方法を確立した。測定の方法は、ヒトＩｇＧ１特異的抗原でＥＬＩＳＡ用プレートをコーティングし、次に相当の濃度の変異体タンパク質を含有する上清サンプルとヒトＩｇＧ１をウェルに入れて共にインキュベートすることであった。抗体Ｆｃ部分に特異性を有するヒトＩｇＧ１検出抗体を使用してウェルと結合した完全な又は不完全に切断されたヒトＩｇＧ１の量を測定した。ウェル中の所定の上清中の変異体タンパク質の濃度が同じである場合、変異体タンパク質のヒトＩｇＧ１切断活性が高いほど、ウェルと結合する完全なヒトＩｇＧ１抗体はより少なく、これによってシグナルはより低い。異なる濃度のＩｇＧ１と対応の検出シグナルとの関係からＩｇＧ１標準曲線を作成でき、標準曲線から完全な又は不完全に切断されたＩｇＧ１の量を計算し、さらに完全に切断されたＩｇＧ１の量を計算した。完全に切断されたＩｇＧ１の最初のＩｇＧ１に占める比率で変異体の活性の高さを評価した。

実施例１で得た上清中の変異体タンパク質の濃度を相当のレベルにするために、同じローディング量でＳＤＳ－ＰＡＧＥ検出を行い、ＱｕａｎｔｉｔｙＯｎｅを使用して電気泳動パターン中の目的タンパク質バンドの光学濃度値を分析し、ローディング量が同じである場合、パターン中の目的タンパク質バンドの光学濃度値が高いほど、濃度はより高い。ＩｄｅＥ上清を対照とし、他の変異体上清を濃縮又は希釈することで、変異体タンパク質バンドの光学濃度値がいずれもＩｄｅＥ対照の光学濃度値とほぼ一致するようにする。

上清中のタンパク質濃度を相当のレベルに調整した後、次の方法でＥＬＩＳＡ検出を行った。２μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ１（トラスツズマブ）特異的抗原（カタログ番号ＱＲＥ－１０４、瑞安生物）でＥＬＩＳＡ用プレートを２～８℃で一晩コーティングし、次にＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％のポリソルベート２０）で洗浄し、洗浄後のＥＬＩＳＡ用プレートを２％のＢＳＡ（ＰＢＳ調製）で３７℃、２時間ブロッキングし、ブロッキング後にＰＢＳＴで洗浄した。

標準曲線の作成であった。２００ｎｇ／ｍＬのトラスツズマブを反応緩衝液（１０ｍＭのＰＢ、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．５）で３．１２５ｎｇ／ｍＬになるまで１：２の比率で勾配希釈し、基質（トラスツズマブ）標準曲線の作成に備え、１００μＬの異なる濃度のトラスツズマブをＥＬＩＳＡ用プレートのウェルに加えた。

切断反応であった。タンパク質濃度調整後の上清を反応緩衝液（１０ｍＭのＰＢ、１０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．５）で５倍希釈し、５０μＬの１００ｎｇ／ｍＬのトラスツズマブと５０μＬの希釈後の上清をＥＬＩＳＡ用プレートのウェルに加えた。

ＥＬＩＳＡ用プレートを３７℃で振盪しながら１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで洗浄した後に４０ｎｇ／ｍＬのＧｏａｔａｎｔｉ－ＨｕｍａｎＩｇＧＦｃＣｒｏｓｓ－ＡｄｓｏｒｂｅｄＳｅｃｏｎｄａｒｙＡｎｔｉｂｏｄｙ－ＨＲＰ（ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ交差吸着二次抗体－ＨＲＰ、カタログ番号３１４１３、Ｔｈｅｒｍｏ）をウェルプレートに加えて、３７℃で振盪しながら１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで洗浄した後にＨＲＰの発色基質としてＴＭＢを加えて１５分間インキュベートし、２ＮのＨ_２ＳＯ_４で停止させた。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍでの吸光度を検出した。基質標準曲線から異なるテストウェル中の完全な又は不完全に切断されたトラスツズマブの濃度を計算し、さらに完全に切断されたトラスツズマブの最初のトラスツズマブに占める比率を計算し、これで異なる変異体の活性を評価した。

野生型ＩｄｅＥの活性に対する各変異体の活性の倍率関係は表１で示されるとおりであった。実施例１でスクリーニングした４０個の変異体はいずれも野生型ＩｄｅＥより高い又は同じ活性を有し、そのうち１５個の変異体の活性が野生型ＩｄｅＥの２倍又は２倍以上であった。

実施例３：変異体の熱安定性の評価
表１で示される活性が野生型ＩｄｅＥの２倍又は２倍以上である１５個の変異体から１２個の変異体を選んでその熱安定性を検出した。活性検出方法は次のとおりであった。
野生型又は各変異体上清を２部に分けて、それぞれ４℃、５０℃で静置して１時間保温し、保温後に実施例２のＥＬＩＳＡ法に従って野生型又は各変異体の活性を検出し、５０℃保温の活性／４℃保温後の活性で野生型又は各変異体の５０℃で１時間保温した残存活性のパーセンテージ（％）を計算し、これで野生型と各変異体の熱安定性を比較した。

野生型ＩｄｅＥに対する変異体活性の熱安定性の倍率関係は表２で示されるとおりであった。表２で示される１２個の変異体はいずれも野生型より高い熱安定性を有し、そのうち７つの変異体の熱安定性が野生型の３倍以上であった。

実施例４：一点変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の比較
表１及び表２で示されるＴ８Ｄ、Ｔ８Ｗ、Ｔ２４Ａ、Ａ５９Ｌ、Ａ５９Ｖ、Ｅ９７Ｄ及びＲ２８０Ｈである「活性が野生型ＩｄｅＥの２倍以上で、熱安定性が野生型ＩｄｅＥの３倍以上である」７つの一点変異体のヒトＩｇＧ１切断活性を検出した。

１．変異体の発現と精製
実施例１の上記の５つの一点変異体の形質転換プレートから各単一のコロニーをピッキングして、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地３ｍＬに接種し、３７℃、２５０ｒｐｍで一晩培養した。一晩の培養物を１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含む５０ｍＬのＬＢ培地に接種し、ＯＤ_６００が０．４～０．６になるまで３７℃で培養し、０．１ｍＭのＩＰＴＧを加えて、３０℃で引き続き一晩培養した。一晩の培養物を遠心分離して上清を収集した。上清をＩＤＡ－Ｎｉ磁性アガロースビーズで精製し、精製で溶出したタンパク質を限外濾過遠心管でＰＢＳ緩衝液系に交換した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを利用して精製後の変異体タンパク質の純度を評価した。ＯＤ_２８０を検出し、吸光係数から精製後の変異体タンパク質の濃度を計算した。

２．変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の比較
ＳＤＳ－ＰＡＧＥに出現しているヒトＩｇＧ１に対して各種の変異体の異なる濃度によって生成された切断産物から野生型ＩｄｅＥに対する異なる変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の高さをさらに評価した。精製後の変異体又は野生型ＩｄｅＥをそれぞれ０．００２ｍｇ／ｍＬ、０．００１ｍｇ／ｍＬに希釈した。異なる濃度の変異体又は野生型ＩｄｅＥそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図１は、７つの一点変異体及び野生型ＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）を示す。図２は、７つの一点変異体及び野生型ＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）を示す。７つの一点変異体の濃度０．００１ｍｇ／ｍＬでＩｇＧ１を切断した効果がいずれも０．００２ｍｇ／ｍＬの野生型ＩｄｅＥに劣らないことから、７つの一点変異体のヒトＩｇＧ１切断活性は野生型ＩｄｅＥの２倍以上であることが分かった。

実施例５：Ｎ末端短縮化変異体のヒトＩｇＧ１切断活性及び熱安定性の比較
野生型ＩｄｅＥからそれぞれＮ末端の先頭からの１５個（Ｄ１～Ｖ１５）、先頭からの１６個（Ｄ１～Ｐ１６）、先頭からの１７個（Ｄ１～Ｈ１７）、先頭からの１８個（Ｄ１～Ｑ１８）、先頭からの１９個（Ｄ１～Ｉ１９）のアミノ酸を削除して、５つのＮ末端短縮化変異体を構築した（表３を参照）。

１．変異体の発現と精製
実施例１の方法に従って表３の変異体ポリヌクレオチド配列を合成して、変異体発現組換えプラスミドを構築し、大腸菌ＢＬ２１Ｓｔａｒ（ＤＥ３）の形質転換を行った。実施例４の方法に従って変異体精製タンパク質を作製した。

２．変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の比較
精製後の変異体又は野生型ＩｄｅＥをそれぞれ０．００２ｍｇ／ｍＬに希釈した。希釈後の変異体又は野生型ＩｄｅＥそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図３は、５つの短縮化変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）を示す。５つの短縮化変異体の切断活性はいずれも野生型ＩｄｅＥと明らかな違いがなかった。

３．変異体の熱安定性の比較
精製後の変異体又は野生型ＩｄｅＥをそれぞれ０．１ｍｇ／ｍＬに希釈して、５０℃で１時間保温し、保温後にさらに０．００２ｍｇ／ｍＬに希釈した。希釈後の変異体又は野生型ＩｄｅＥそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図４は、５０℃で１時間保温した後、５つの短縮化変異体及び野生型ＩｄｅＥでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）を示す。５０℃の熱処理後に５つの短縮化変異体の残存活性が野生型より明らかに高い又は同じであることから、５つの短縮化変異体の熱安定性はいずれも野生型に対して明らかに向上していることが分かった。

実施例６：Ｃ末端短縮化変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の比較
野生型ＩｄｅＥからそれぞれＣ末端の末尾からの５つ（Ｗ３１１～Ｓ３１５）、末尾からの１０個（Ｓ３０６～Ｓ３１５）のアミノ酸を削除して、２つのＣ末端短縮化変異体を構築した（表４を参照）。

１．変異体の発現と精製
実施例１の方法に従って表４の変異体ポリヌクレオチド配列を合成して、変異体発現組換えプラスミドを構築し、大腸菌ＢＬ２１Ｓｔａｒ（ＤＥ３）の形質転換を行った。実施例４の方法に従って変異体精製タンパク質を作製した。

図５は、２つのＣ末端短縮化変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：１０００）を示す。２つの短縮化変異体の切断活性がいずれも野生型ＩｄｅＥより２倍以上高かった。

実施例７：組合せ変異体のヒトＩｇＧ１切断活性及び熱安定性の比較
Ｔ２４Ａ、Ａ５９Ｌ、Ａ５９Ｖ、Ｅ９７Ｄ及びＲ２８０Ｈの５つの一点変異体からそれぞれ先頭からの１８個（Ｄ１～Ｑ１８）のアミノ酸を削除して、５つの組合せ変異体を構築した（表５を参照）。

１．変異体の発現と精製
実施例１の方法に従って表５の変異体ポリヌクレオチド配列を合成して、変異体発現組換えプラスミドを構築し、大腸菌ＢＬ２１Ｓｔａｒ（ＤＥ３）の形質転換を行った。実施例４の方法に従って変異体精製タンパク質を作製した。

２．変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の比較
精製後の変異体をそれぞれ０．００１ｍｇ／ｍＬに希釈した。希釈後の変異体又は野生型ＩｄｅＥそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図６は、５つの組合せ変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）を示す。図６と図２の切断効果を比較したところ、５つの短縮化変異体と一点組合せ変異体の切断活性に明らかな違いがないことから、組合せ変異体のヒトＩｇＧ１切断活性も野生型ＩｄｅＥの２倍以上であることが分かった。

３．変異体の熱安定性の比較
精製後の変異体をそれぞれ０．１ｍｇ／ｍＬに希釈して、５０℃で１時間保温し、保温後にさらに０．００１ｍｇ／ｍＬに希釈した。希釈後の変異体又は野生型ＩｄｅＥそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図７は、５０℃で１時間保温した後、５つの組合せ変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）を示す。図６と図７の切断効果を比較したところ、５つの組合せ変異体は５０℃の熱処理後に活性がわずかなだけ低減したことから、５つの組合せ変異体も野生型に対していずれも熱安定性が明らかに向上していることが分かった。

実施例８：Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体とＩｄｅＳ及びＩｄｅＺとの活性比較
実施例７で精製されたＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体を２０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、１．２５μｇ／ｍＬの順に希釈した。ＩｄｅＳ（ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ（登録商標）、カタログ番号Ａ０－ＦＲＩ－０２０、Ｇｅｎｏｖｉｓ）をその表示に従ってそれぞれ２Ｕ／μＬ、１Ｕ／μＬ、０．５Ｕ／μＬ、０．２５Ｕ／μＬ、０．１２５Ｕ／μＬに希釈した。ＩｄｅＺ（ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ－Ｚ（登録商標）、カタログ番号Ａ０－ＦＲＺ－０２０、Ｇｅｎｏｖｉｓ）をそれぞれ０．４Ｕ／μＬ、０．２Ｕ／μＬ、０．１Ｕ／μＬ、０．０５Ｕ／μＬ、０．０２５Ｕ／μＬに希釈した。異なる濃度の変異体、ＩｄｅＳ又はＩｄｅＺそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図８は、異なる濃度のＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体及びＩｄｅＳでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターンを示す。電気泳動パターン上の酵素タンパク質バンドからは１番レーンのＩｄｅＳの酵素濃度が７番と８番レーンのＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の酵素濃度の間にあると判断でき、そして３番レーンのＩｄｅＳの酵素濃度が９番と１０番レーンのＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の酵素濃度の間にあると推測でき、３番レーンのＩｇＧ１の酵素切断効果が１０番と１１番レーンの間にあることから、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体のヒトＩｇＧ１切断活性はＩｄｅＳの２倍に近いと推測できる。

図９は、異なる濃度のＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体及びＩｄｅＺでヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターンを示す。電気泳動パターン上の酵素タンパク質バンドからは１番レーンのＩｄｅＺの酵素濃度が７番レーンのＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の酵素濃度より高いと判断でき、そして３番レーンのＩｄｅＺの酵素濃度が９番レーンのＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の酵素濃度より高く、即ち、１１番レーンのＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の酵素濃度より４倍高いと推測でき、３番レーンのＩｇＧ１の酵素切断効果が１１番レーンに近いことから、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体のヒトＩｇＧ１切断活性はＩｄｅＺより４倍高いと推測できる。

実施例９：Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体のヒトＩｇＧ１切断活性のインビトロ検出
Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体を加えた及びヒトＩＶＩｇで処理したマウス血清又は血漿中の完全な又は単一切断ＩＶＩｇの量を検出することによりヒトＩｇＧ１に対するＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体のインビトロ切断活性を評価した。表６のとおり異なる群のマウス血清又は血漿酵素切断系を調製した。

ヨード酢酸処理群でヨード酢酸の役割はＩｇＧ分解酵素の活性を抑えることであった。

系を３７℃で静置して３０分間反応させた。２０μＬのサンプルと等量の２×ＳＤＳ非還元ローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図１０は、マウスの血清及び血漿においてＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体でヒトＩＶＩｇを切断して生成された切断産物の電気泳動パターンを示す。結果から分かるように、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８はマウスの血清と血漿のいずれでもヒトＩＶＩｇを効果的に切断できる。

Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体を加えて処理したマウス又はヒト血清を検出することでＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体はヒトＩｇＧ１に対するインビトロ切断活性を有するかどうかを評価した。表７のとおり異なる群のマウス又はヒト血清酵素切断系を調製した。

系を３７℃で静置して２４時間反応させた。２０μＬのサンプルと等量の２×ＳＤＳ還元ローディング緩衝液を混合し、さらに１×ＳＤＳ還元ローディング緩衝液で２０倍希釈して、７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

図１１は、マウス及びヒトの血清においてＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体によって生成された切断産物の電気泳動パターンを示す。結果から分かるように、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８はヒト血清では切断してはっきりと見られる２５ｋＤのＦｃフラグメントが生成され、マウス血清では当該フラグメントがなく、このことからＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８はヒト血清中のＩｇＧ１を効果的に特異的切断できるが、マウス血清中のＩｇＧ１に対する切断活性は非常に低いか切断活性がないことが分かった。

実施例１０：Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体による異なる種の免疫グロブリンの切断
Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体を加えられた異なる種動物の血清又は血漿中の完全な又は単一切断ＩｇＧの量を検出することによって異なる種の動物の血清免疫グロブリンに対するＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体のインビトロ切断活性を評価した。表８及び表９のとおり異なる種の血清又は抗体酵素切断系を調製した。

系を３７℃で静置して１時間反応させ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで酵素切断産物を検出した。

図１２Ａ～図１２Ｄは、異なる種の血清及び抗体におけるＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の効果を示す。結果から分かるように、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８はイヌＩｇＧ、ウサギＩｇＧ及びマウスＩｇＧ２ａを効果的に切断できるが、マウスＩｇＧ１を切断できず、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８はウサギ、イヌ及びサルの血清ＩｇＧを効果的に切断でき、そのうちウサギ血清ＩｇＧの切断効果が最良で、ブタ血清ＩｇＧの切断効果が悪く、ラット及びマウスの血清ＩｇＧはほぼ変わらなかった。

実施例１１：ヒトの体内ではＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体に対する既存抗体が少ない
当該測定は、抗Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８／ＩｄｅＳ抗体との結合におけるＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体とＩｄｅＳとの間の競合に基づく。被験酵素とヒト血清をプレインキュベートすることで抗Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８／ＩｄｅＳ抗体はＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体及びＩｄｅＳと結合できるようになる。

Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体とＩｄｅＳをウェルプレートにおいて一晩コーティングし、次にＰＢＳＴで洗浄して２％のＢＳＡブロッキング剤において１時間ブロッキングし、段階的に希釈された被験変異体とＩｄｅＳ及びヒト血清で混合プレートを作製し、混合プレートを室温で振盪しながら１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで洗浄した後にビオチンによって標識されたＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体及びＩｄｅＳを加え、さらにＳＡ－ＨＲＰを加えて、ＴＭＢで発色させて数値を読み取った。得られた約８０個のヒト血液サンプル中のＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８及びＩｄｅＳの既存抗体について並行比較した。

表１０の結果に示すように、健常者血清でのＩｄｅＳの既存抗体の比率が約９０％と高いが、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の方は約２０％だけであった。体内でのＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体の既存抗体がＩｄｅＳより明らかに少ないことは、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体は免疫原性がより低く、体内投与により適することを示唆した。

実施例１２：Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８変異体のヒトＩｇＧ１切断活性に関するインビボ検出
無菌の状態でヒトＩＶＩｇ（静注用ヒト免疫グロブリン）を２匹のマウスに腹腔内注射し（２匹のマウスの並行試験であり、マウス番号は１番、２番であった）、注射用量は１ｇ／ｋｇであった。ヒトＩＶＩｇの注射から２４時間後、ＩｇＧ分解酵素の変異体（Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８）を５ｍｇ／ｋｇの用量でマウスに静脈注射し、２匹のマウスはいずれもそれぞれＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８注射後０時間、１５分間、２時間、６時間、２４時間に採血して血清サンプルを収集した。２０μＬの血清サンプルと等量の２×ＳＤＳ非還元ローディング緩衝液を混合した後、１×ＳＤＳ非還元ローディング緩衝液で２０倍希釈し、７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで検出した。

図１３は、マウスの体内においてＥ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８でヒトＩＶＩｇを切断する場合に異なる時間で生成された切断産物の電気泳動パターンを示す。結果から分かるように、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８のマウスの体内でのＩＶＩｇ切断効果が顕著で、１５分間でほぼ完全な酵素切断状態となった。

実施例１３：組合せ変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の比較
上記の変異体から、さらに６種類の組合せ変異体を構築し、前記変異の配列は表１１で示されるとおりであった。

１．変異体の発現と精製
実施例１の方法に従って表１１の変異体ポリヌクレオチド配列を合成して、変異体発現組換えプラスミドを構築し、大腸菌ＢＬ２１Ｓｔａｒ（ＤＥ３）の形質転換を行った。実施例４の方法に従って変異体精製タンパク質を作製した。

図１４Ａ及び図１４Ｂは、６種類の組合せ変異体でヒトＩｇＧ１を切断して生成された切断産物の電気泳動パターン（酵素：基質＝１：２０００）を示す。

実施例１４：新しい変異体の設計と発現
変異データに対する更なる分析とスクリーニングにより、ＩｄｅＥ変異体配列番号３６を選択して評価し、記号はＩｄｅＥｖ２であった。コドン最適化を経て当該変異体をコードするポリヌクレオチド配列を合成し、Ｎ末端シグナルペプチド配列を加え、配列合成後にｐＥＴ３２ａ発現ベクターに挿入し、正しい配列と確認した後、発現用の組換えプラスミドを得た。電気形質転換により変異体組換えプラスミドを大腸菌ＢＬ２１Ｓｔａｒ（ＤＥ３）に導入し、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢアガロースプレートに接種した。コロニーが出るまで３７℃で一晩培養した。単一のコロニーをピッキングして、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地２００μＬに接種し、３７℃、２５０ｒｐｍで一晩培養した。１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地１ｍＬに一晩の培養物を接種し、３７℃で４時間培養した後に０．１ｍＭのＩＰＴＧを加えて、３０℃で引き続き一晩培養した。一晩の培養物を遠心分離して上清を収集した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを利用して変異体発現上清中の変異体タンパク質の発現を評価した。イオン交換クロマトグラフィー、次に疎水性クロマトグラフィーにより上清を精製して、純粋なタンパク質を得た。同じ手順でＩｄｅＳ、ＩｄｅＺタンパク質を作製した。ＳＥＣ－ＨＰＬＣ法を用いて当該タンパク質の純度を検出したところ、いずれも９５％を超えていた。

実施例１５：ＩＤＥＥＶ２変異体のヒトＩｇＧ１切断活性及び熱安定性の比較
１．変異体のヒトＩｇＧ１切断活性の比較
精製後の変異体及び野生型ＩｄｅＥ、ＩｄｅＳ、ＩｄｅＺをそれぞれ０．００２５ｍｇ／ｍＬに希釈した。異なる濃度の変異体、ＩｄｅＥ、ＩｄｅＳ又はＩｄｅＺそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。結果から、組合せ変異体のヒトＩｇＧ１切断活性が野生型ＩｄｅＥの活性に似ていることが分かった（図１５Ａ）。

２．変異体の熱安定性の比較
精製後の変異体をそれぞれ０．１ｍｇ／ｍＬに希釈して、５０℃で１時間保温し、保温後にさらに０．００２５ｍｇ／ｍＬに希釈した。希釈後の変異体又は野生型ＩｄｅＥそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブを含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。結果から分かるように、変異体ＩＤＥＥＶ２の５０℃の熱処理後の活性低減が最小であり、このことから変異体ＩＤＥＥＶ２は野生型及び他の変異型に対していずれも熱安定性が顕著に向上していることが分かった。

実施例１６：異なるヒト免疫グロブリンに対するＩＤＥＥＶ２変異体の切断特異性の評価
ＳＤＳ－ＰＡＧＥに出現している異なるヒトＩｇＧに対してＩＤＥＥＶ２変異体によって生成された切断産物から異なる基質に対する変異体の切断特異性をさらに評価した。精製後のＩＤＥＥＶ２変異体をそれぞれ０．０１ｍｇ／ｍＬに希釈した。異なる濃度の変異体又は野生型ＩｄｅＥそれぞれ５０μＬを２ｍｇ／ｍＬの異なる免疫グロブリン（ヒトＩｇＧ１～４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ）を含有する５０μＬの反応系に加えて切断反応を開始させ、反応系を３７℃で静置して３０分間反応させた。サンプルと等量の２×ＳＤＳローディング緩衝液を混合した後に７５℃のウォーターバスで５分間保持し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで切断産物を検出した。

結果から、ＩＤＥＥＶ２はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を効果的に酵素切断できるが（図１６Ａ）、ヒト免疫グロブリンＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭを酵素切断できなかった（図１６Ｂ）ことが分かった。当該変異体の基質特異性が高いことが分かった。

実施例１７：ＩＤＥＥＶ２変異体による異なる種の免疫グロブリンの切断
ＩＤＥＥＶ２変異体を加えられた異なる種動物の血清又は血漿中の完全な又は単一切断ＩｇＧの量を検出することによって異なる種免疫グロブリンに対するＩＤＥＥＶ２変異体のインビトロ切断活性を評価した。ＩＤＥＥＶ２：異なる動物種又はヒトの精製ＩｇＧ＝１：２００のタンパク質量の比率でウサギ、イヌ、ラット、マウス、サル及びヒトの精製ＩｇＧを酵素切断し、３７℃で１時間酵素切断して、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動により酵素切断産物を検出した。

結果から分かるように、種特異性に関しては、ＩＤＥＥＶ２はウサギ、イヌ、サル及びヒトのＩｇＧを効果的に切断できるが、ラット及びマウスの血清中のＩｇＧに対して顕著には切断していなかった（図１７）。

実施例１８：ＩＤＥＥＶ２変異体によるニュージーランドウサギの体内ＩｇＧ切断試験
ニュージーランドウサギを用いてＩＤＥＥＶ２の動物体内でのＩｇＧ切断活性を研究した。静脈内注入でニュージーランドウサギにＩＤＥＥＶ２を投与し、週に１回投与し、２回投与し、２ｍｇ／ｋｇの用量であった。血液サンプル検出ではＥＬＩＳＡ又はＳＤＳ－ＰＡＧＥ法を用いて動物血清中のＩｇＧ含有量を検出して、動物体内のＩｇＧに対するＩＤＥＥＶ２静脈内注入の酵素切断作用を評価した。

結果から分かるように、ＩＤＥＥＶ２はウサギ体内のＩｇＧを迅速に酵素切断できる。最初と最後の投与後の１つ目の血液サンプル採取時点（投与終了前１分）に、２ｍｇ／ｋｇ用量ではウサギ体内のＩｇＧ含有量が基本的に検出下限未満であった。最初と最後の投与後約１～２日で、ウサギ体内のＩｇＧレベルが徐々に回復していき、酵素切断産物の含有量が徐々に投与前のレベルに戻った。２回の投与後、ウサギ体内のＩｇＧ含有量は約１０日後に正常なレベルの範囲に戻ることができる（図１８Ａ）。

静脈内注入でニュージーランドウサギにＩＤＥＥＶ２を投与し、週に１回投与し、４回投与する場合、０．２、２及び２０ｍｇ／ｋｇ用量群の血液サンプル検出結果から分かるように、ＩＤＥＥＶ２はウサギ体内のＩｇＧを迅速に酵素切断できる。最小用量（０．２ｍｇ／ｋｇ）でも完全な薬理活性を有している（図１８Ｂ）。

以上のデータから分かるように、静脈内注入でニュージーランドウサギにＩＤＥＥＶ２を投与した後、０．２～２０ｍｇ／ｋｇの用量範囲ではいずれもウサギ体内のＩｇＧを迅速に酵素切断できる。大多数のウサギはＩＤＥＥＶ２投与後の１つ目の血液サンプル採取時点（投与終了前１分）以内に体内のＩｇＧが酵素切断された。投与後約１～２日で、酵素切断産物の含有量が徐々に投与前のレベルに戻った。投与後約１０日で、ウサギ体内のＩｇＧ含有量は正常なレベルの範囲に戻ることができる。

実施例１９：ＩＤＥＥＶ２変異体によるビーグル犬の体内ＩｇＧ切断試験
静脈内注入でビーグル犬（Ｂｅａｇｌｅ）にＩＤＥＥＶ２を投与し、週に１回投与し、２回投与する場合、０．２、２及び２０ｍｇ／ｋｇ用量群の血液サンプル検出結果から、ＩＤＥＥＶ２はイヌ体内のＩｇＧを迅速に酵素切断できることが分かった。最初と最後の投与の約３日後で、イヌ体内のＩｇＧレベルが徐々に回復していき、酵素切断産物の含有量が投与前のレベルに戻った。２回の投与後、回復期にはイヌ（２匹／性別／群）体内のＩｇＧの回復状況にある程度の個体差はあるが、０．２、２ｍｇ／ｋｇの用量では約１０日後で正常なレベルの範囲に戻ることができ、２０ｍｇ／ｋｇの用量では４週間でほぼ正常なレベルの範囲に戻ることができる。ＩｇＧ含有量の低減と回復の速さと投与用量は全体として用量反応関係を呈している。

以上のデータ（図１９Ａ、図１９Ｂ）から分かるように、静脈内注入でビーグル犬（Ｂｅａｇｌｅ）にＩＤＥＥＶ２を投与した後、０．２～２０ｍｇ／ｋｇの用量範囲ではいずれもイヌ体内のＩｇＧを迅速に酵素切断でき、大多数のイヌはＩＤＥＥＶ２投与後の１つ目の血液サンプル採取時点（投与終了前１分）以内に体内のＩｇＧが酵素切断された。投与後約３日で、酵素切断産物の含有量が徐々に投与前のレベルに戻った。ＩｇＧの回復状況にある程度の個体差はあるが、投与後約１０～２８日で、イヌ体内のＩｇＧ含有量は正常なレベルの範囲に戻ることができる。

上記のデータをまとめると、ニュージーランドウサギの体内であれビーグル犬の体内であれ、いずれもＩＤＥＥＶ２は迅速かつ効果的にＩｇＧを切断でき、抗体媒介性自己免疫疾患における、特に急性で重度の命を脅かす抗体媒介性自己免疫疾患におけるＩＤＥＥＶ２の利点が示された。

実施例２０：ＩＤＥＥＶ２は、抗血小板抗体によって引き起こされる血小板減少症を効果的に逆転できる
モデル化試薬（抗マウス血小板のウサギ抗血清を精製して作製されたウサギＩｇＧ）の１０ｍｇ／匹の腹腔内注射で、ＢＡＬＢ／ｃマウス血小板減少症モデルを確立することにより、ＢＡＬＢ／ｃマウスの血小板減少症モデルに対するＩＤＥＥＶ２静脈注射の薬力学的作用を評価した。

モデル化前にモデル対照群とＩＤＥＥＶ２低、高用量群の血小板数結果は似ている。モデル化後３０分間で各群の血小板数がいずれも明らかに低減した。ＩＤＥＥＶ２投与前（即ち、モデル化後約２時間）で各群の血小板数が持続的に低減した。モデル対照群の動物にモデル化試薬を投与した後に血小板数が持続的に低レベルにあり（図２０Ａ）、且つ当該群の動物は３日で全て死亡した（図２０Ｂ）。ＩＤＥＥＶ２低、高用量群の動物は投与後に血小板数が回復に転じ、２０日目にモデル化前のレベルに似ていることから、ＩＤＥＥＶ２はＢＡＬＢ／ｃマウスの血小板減少症に明らかな改善効果を有することが分かった。さらに自己抗体によって引き起こされる自己免疫疾患には、本発明の変異体が良い症状改善効果があることが分かった。

実施例２１：免疫グロブリン分解酵素の変異体は、モノクローナル抗体の抗腫瘍効果に対する高免疫グロブリンのマイナス的な影響を効果的に解消する
Ｄａｕｄｉマウスモデルを用いて抗ＣＤ３８モノクローナル抗体に対するＩＤＥＥＶ２の影響を評価した。試験設計では、１）溶媒対照群、２）抗ＣＤ３８モノクローナル抗体ダラツムマブ（ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、３）抗ＣＤ３８モノクローナル抗体ダラツムマブ（ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）＋ＩＶＩｇ、４）抗ＣＤ３８モノクローナル抗体ダラツムマブ（ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）＋ＩＤＥＥＶ２＋ＩＶＩｇの４群を設けた。具体的には、対数増殖期の細胞を採取してマウスに皮下接種し、各ＣＢ－１７ＳＣＩＤマウスには無菌の状態で右腋窩に５×１０^６個のＤａｕｄｉ細胞を皮下接種し、接種量がいずれも０．１ｍＬ／匹であった。細胞接種の当日に１ｇ／ｋｇの単回腹腔内注射でＩＶＩｇを投与した。２４時間後に５ｍｇ／ｋｇの単回静脈注射で免疫グロブリン分解酵素Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８を投与した。ＩＶＩｇ投与後１０日で２ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射で抗ＣＤ３８モノクローナル抗体を投与し、週に１回投与し、合計で４回の投与であった。ＣＤ３８の投与を開始した後、週に２回腫瘍体積を測定し、検出は４週間継続した。

試験結果（図２１）から、ＩｇＧ（ＩＶＩｇ）の存在で抗ＣＤ３８モノクローナル抗体の腫瘍治療効果が抑制されたことが分かった。ＩＤＥＥＶ２は抗体の治療効果に対する天然に存在するＩｇＧの抑制を低下させて、治療用抗体の治療効果を顕著に増強させることができる。

実施例２２：ＡＡＶの体内感染に対するＩｇＧ分解酵素の変異体の影響
Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスにＩＶＩｇを単回腹腔内投与し（用量１ｇ／ｋｇ）、ＩＶＩｇの投与後３０分間でＩＤＥＥＶ２を単回静脈投与した（用量５ｍｇ／ｋｇ）。ＩＶＩｇ投与後２４時間でＡＡＶ９－Ｆｌｕｃを投与した（用量２×１０^１１ｖｇ／匹）。８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、４３日目に蛍光イメージングを行った。４４日目には心臓及び肝臓の組織サンプルを採取してＦｌｕｃ遺伝子のコピー数を検出した。
１）蛍光対照群（ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃ）
２）モデル群（ＩＶＩｇ＋ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃ）
３）供試品群（ＩＶＩｇ＋ＩＤＥＥＶ２＋ＡＡＶ９－Ｆｌｕｃ）

結果から分かるように、ＩＶＩｇが存在する場合、ＡＡＶはマウスに感染効果がないが、Ｅ９７Ｄ＿ｄｅｌ１８はＡＡＶ感染に対するＩＶＩｇの影響を完全に解消できる（図２２Ａ、図２２Ｂ）。心臓及び肝臓組織には、いずれもウイルスが効果的に形質導入できた（図２３）。当該試験の結果からは、本発明の変異体は体内でヒト免疫グロブリンＧを効果的に分解し、ウイルスを治療ベクターとした薬物に対するそのウイルス中和抗体の干渉を解消できることが明らかになった。

出願人は、本発明の上記の実施例で本発明の方法を詳しく説明しているが、本発明は上記の詳細な方法に限定されず、つまり、本発明は必ずしも上記の詳細な方法で実施されるとは限らないことを意味すると明言する。本発明のいかなる改良も、本発明の製品の各原料の同等の置換及び副次的成分の添加、具体的な方式の選択などが、いずれも本発明の保護範囲及び開示の範囲に入るということは当業者に自明なはずである。

Claims

被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体の用途であって、
前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥは、配列番号２で示されるアミノ酸配列を含み又は前記アミノ酸配列からなり、前記変異は、
（１）前記アミノ酸配列の位置８、１０、２４、５９、９７及び２８０の１つ若しくは複数を置換すること、及び／又は、
（２）前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥを短縮化し、そのＮ末端の先頭からの１つ、先頭からの２つ、先頭からの３つ、先頭からの４つ、先頭からの５つ、先頭からの６つ、先頭からの７つ、先頭からの８つ、先頭からの９つ、先頭からの１０個、先頭からの１１個、先頭からの１２個、先頭からの１３個、先頭からの１４個、先頭からの１５個、先頭からの１６個、先頭からの１７個、先頭からの１８個若しくは先頭からの１９個のアミノ酸の配列を削除すること、及び／又は、
（３）前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥを短縮化し、そのＣ末端の末尾からの１つ、末尾からの２つ、末尾からの３つ、末尾からの４つ、末尾からの５つ、末尾からの６つ、末尾からの７つ、末尾からの８つ、末尾からの９つ若しくは末尾からの１０個のアミノ酸の配列を削除することからなる群から選ばれ、
ただし、前記変異体は、前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥより高い若しくは同じ活性を有し、及び／又は前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥより高い若しくは同じ熱安定性を有する、前記用途。
前記変異が、
（１）配列番号２で示されるアミノ酸配列の位置８、１０、２４、５９、９７若しくは２８０を置換すること、及び／又は
（２）前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥのＮ末端の先頭からの１５個、先頭からの１６個、先頭からの１７個、先頭からの１８個若しくは先頭からの１９個のアミノ酸を削除し、好ましくは、先頭からの１８個のアミノ酸を削除すること、及び／又は
（３）前記免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥのＣ末端の末尾からの５つ若しくは末尾からの１０個のアミノ酸を削除し、好ましくは、末尾からの５つのアミノ酸を削除することからなる群から選ばれる、請求項１に記載の用途。
前記変異が、
（１）前記位置８のトレオニンがシステイン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、セリン、バリン、アルギニン、リシンのいずれかに置換されること、
（２）前記位置１０のアラニンがシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、
（３）前記位置２４のトレオニンがアラニン、システイン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、
（４）前記位置５９のアラニンがシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、
（５）前記位置９７のグルタミン酸がアラニン、システイン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、チロシンのいずれかに置換されること、及び
（６）前記位置２８０のアルギニンがアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、セリン、フェニルアラニン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、トリプトファン、トレオニン、バリン、チロシンのいずれかに置換されることからなる群から選ばれる、請求項１又は２に記載の用途。
前記変異体が、配列番号３～３６のいずれかで示されるとおりである、請求項３に記載の用途。
被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造における請求項１～４のいずれか一項の変異体を含むタンパク質の用途。
前記タンパク質は、前記変異体のＮ末端にシグナルペプチドを含み、好ましくは、前記タンパク質は、前記変異体のＮ末端に分泌シグナル配列が接続され且つ前記分泌配列のＮ末端にメチオニンが接続され及び／又は前記変異体のＣ末端にヒスチジンタグが接続され、より好ましくは、前記タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端まで、メチオニン、分泌シグナル配列、前記変異体からなる、請求項５に記載の用途。
被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造における組成物の用途であって、前記組成物は、
請求項１～４のいずれか一項の変異体又は前記変異体を含むタンパク質と、
任意の薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む、前記用途。
前記組成物が、別の治療薬をさらに含み、前記別の治療薬は、
（ａ）抗体、又はＦｃを含有するタンパク質であって、好ましくは、前記抗体の標的は、細胞表面タンパク質、サイトカイン、ホルモン、酵素、セカンドメッセンジャー、ファーストメッセンジャー、免疫チェックポイントからなる群から選ばれるもの、
（ｂ）ウイルスベクター薬であって、好ましくは、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンからなる群から選ばれる前記ウイルスベクター薬、
（ｃ）血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物であって、好ましくは、ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体からなる群から選ばれる前記血中ＩｇＧレベルを低下させる薬物からなる群から選ばれる、請求項７に記載の用途。
被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造におけるキットの用途であって、前記キットは、
（１）請求項１～４のいずれか一項の変異体又は前記変異体を含むタンパク質と、
（２）（ａ）薬学的に許容される担体又は賦形剤、（ｂ）抗体、又はＦｃを含むタンパク質、（ｃ）ウイルスベクター薬であって、好ましくは、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンから選ばれる前記ウイルスベクター薬、（ｄ）血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物であって、好ましくは、前記血中ＩｇＧレベルを低下させる薬物は、ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体から選ばれるもの、からなる群から選ばれる１種又は複数種とを含む、前記用途。
被験者における自己抗体媒介性病状を治療するための薬物の製造におけるキットの用途であって、前記キットは、ボックスＡ及びボックスＢを含み、ただし、
前記ボックスＡは、請求項１～４のいずれか一項の変異体又は前記変異体を含むタンパク質を含有し、
前記ボックスＢは、（１）薬学的に許容される担体又は賦形剤、（２）抗体、又はＦｃを含むタンパク質、（３）ウイルスベクター薬であって、好ましくは、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンから選ばれる前記ウイルスベクター薬、（４）血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物であって、好ましくは、ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体から選ばれる前記血中ＩｇＧレベルを低下させる薬物からなる群から選ばれる１種又は複数種を含有する、前記用途。
前記抗体媒介性病状が、自己免疫疾患又はグロブリン過剰血症である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の用途。
自己免疫疾患が、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、抗ＧＢＭ抗体型糸球体腎炎、抗ＮＭＤＡＲ受容体脳炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性胃炎、自己免疫性感音難聴、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性の副甲状腺機能低下、自己免疫性下垂体炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性心筋炎、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性の水疱性皮膚症、自己免疫性精巣炎、自己免疫性多内分泌腺症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、炎症性脱髄性多発根神経炎、急性運動性軸索型ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、腹部疾患、自己免疫性蕁麻疹、クローン病、クレスト（ＣＲＥＳＴ）症候群、セリアック病、デゴス病、抗好中球細胞質抗体関連血管炎、自己免疫性好中球減少症、後天性表皮水疱症、本態性混合性クリオグロブリン血症、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患、川崎病、メニエール症候群、混合性結合組織病、モーレン潰瘍、関節リウマチ、多発性硬化症、重症筋無力症、スティフパーソン症候群、先天性完全房室ブロック、後天性表皮水疱症、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、自己免疫性多内分泌腺症候群、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性多内分泌腺症候群、自己免疫性多内分泌腺症候群、多発性筋炎と皮膚筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー症候群、ライター症候群、リウマチ性心疾患、血友病（後天性ＦＶＩＩＩ欠乏症）、ランバート・イートン（Ｌａｍｂｅｒｔ－Ｅａｔｏｎ）筋無力症候群、多発性骨髄腫、サルコイドーシス、コラーゲン沈着、乾燥症候群、亜急性甲状腺炎、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、シェーグレン症候群、１型糖尿病、白斑、フォークト－小柳－原田病又はウェゲナー肉芽腫症、急性喘息又は慢性喘息、臓器移植拒絶反応、一次性進行型多発性硬化症、全身性硬化症、血清病、免疫複合体型アレルギーから選ばれ、ただし、前記免疫複合体は、例えば、抗薬物抗体と薬物によって形成された免疫複合体であり、
好ましくは、前記自己免疫疾患が、抗糸球体基底膜抗体病（抗ＧＢＭ抗体病）、病原性ＩｇＧ抗体媒介性血栓性血小板減少症、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、自己免疫性脳炎（ＡＥ）、視神経脊髄炎スペクトラム障害（ＮＭＯＳＤ）、非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、臓器移植術後の抗体媒介性拒絶反応（ＡＭＲ）、重症筋無力症（ＭＧ）から選ばれ、ただし、前記病原性ＩｇＧ抗体媒介性血栓性血小板減少症は、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、ヘパリン誘発性血小板減少症（ＨＩＴ）、ワクチン誘発性免疫性血栓性血小板減少症（ＶＩＴＴ）であることが好ましい、請求項１１に記載の用途。
前記抗体媒介性病状は、静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）、皮下注射用免疫グロブリン（ＳＣＩＧ）、血漿交換療法及び／又は免疫吸着を利用して治療できる、請求項１～１２のいずれか一項に記載の用途。
前記過剰なグロブリンは白血球によって生成され、前記白血球は、Ｂ細胞、異常なＢ細胞から選ばれ、前記グロブリンは、ガンマグロブリンを含み、前記グロブリン過剰血症は、原発性単クローン性ガンマグロブリン血症、結合組織病、肝疾患、感染症、サルコイドーシス、重症筋無力症、ホジキン病、ベーチェット（Ｂｅｈｃｅｔ）病、腎炎、アナフィラクトイド紫斑病、免疫性（あるいは自発性）血小板減少症、悪性単クローン性ガンマグロブリン血症（例えば、多発性骨髄腫、重鎖病、悪性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、マクログロブリン血症など）、二次性単クローン性ガンマグロブリン血症（例えば、非リンパネットワーク性全身性腫瘍、単球性白血病、クリオグロブリン血症など）、良性Ｍ蛋白血症、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ＡＬアミロイドーシス、孤立性形質細胞腫（骨又は髄外）、ＰＯＭＥＳ症候群、反応性形質細胞増多症、がんの溶骨性骨転移、形質芽球性リンパ腫、単クローン性免疫グロブリン関連腎症（ＭＧＲＳ）などを含み、前記病状は、多発性骨髄腫であることが好ましい、請求項１１に記載の用途。
被験者におけるＩｇＧレベルを低下させるための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途であって、前記変異体は、請求項１～４のいずれか一項の変異体であり、前記タンパク質は、請求項６のタンパク質であり、前記組成物は、請求項７若しくは８の組成物であり、又は前記キットは請求項９若しくは１０のキットである、前記用途。
被験者における実質臓器移植後の自己抗体媒介性臓器拒絶反応を予防及び／又は治療するための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途であって、前記変異体は、請求項１～４のいずれか一項の変異体であり、前記タンパク質は、請求項６のタンパク質であり、前記組成物は、請求項７若しくは８の組成物であり、又は前記キットは請求項９若しくは１０のキットである、前記用途。
同種移植片は、腎臓、膵島、膵臓、心臓、肝臓、肺又は小腸からなる群から選ばれる、請求項１６に記載の用途。
遺伝子治療用薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途であって、前記変異体は、請求項１～４のいずれか一項の変異体であり、前記タンパク質は、請求項６のタンパク質であり、前記組成物は、請求項７若しくは８の組成物であり、又は前記キットは請求項９若しくは１０のキットである、前記用途。
ウイルスベクターを基盤とした遺伝子治療の前に体内既存の抗ウイルスベクターの中和抗体を除去するための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途であって、前記変異体は、請求項１～４のいずれか一項の変異体であり、前記タンパク質は、請求項６のタンパク質であり、前記組成物は、請求項７若しくは８の組成物であり、又は前記キットは請求項９若しくは１０のキットである、前記用途。
被験者における腫瘍を治療するための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途であって、前記変異体は、請求項１～４のいずれか一項の変異体であり、前記タンパク質は、請求項６のタンパク質であり、前記組成物は、請求項７若しくは８の組成物であり、又は前記キットは請求項９若しくは１０のキットである、前記用途。
被験者における自己抗体を除去してＦｃ含有剤に治療効果をより良く発揮させるための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途であって、前記変異体は、請求項１～４のいずれか一項の変異体であり、前記タンパク質は、請求項６のタンパク質であり、前記組成物は、請求項７若しくは８の組成物であり、又は前記キットは請求項９若しくは１０のキットである、前記用途。
Ｆｃ含有剤を投与されている被験者において前記Ｆｃ含有剤の血清レベルを低下させるための薬物の製造における免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体、前記変異体を含むタンパク質、又は前記変異体若しくは前記タンパク質を含む組成物若しくはキットの用途であって、前記変異体は、請求項１～４のいずれか一項の変異体であり、前記タンパク質は、請求項６のタンパク質であり、前記組成物は、請求項７若しくは８の組成物であり、又は前記キットは請求項９若しくは１０のキットである、前記用途。
前記ＩｄｅＥ変異体と別の治療薬を前記被験者に同時に又は順次投与する、請求項８、１５～２２のいずれか一項に記載の用途。
前記別の治療薬が、抗炎症薬である、請求項２３に記載の用途。
前記別の治療薬が、ＦｃＲｎ拮抗剤であり、前記ＦｃＲｎ拮抗剤は、ＦｃＲｎを標的とする抗体又はＦｃフラグメントであることが好ましく、エフガルチギモド（Ｅｆｇａｒｔｉｇｉｍｏｄ）、ニポカリマブ（Ｎｉｐｏｃａｌｉｍａｂ）、ロザノリキシズマブ（Ｒｏｚａｎｏｌｉｘｉｚｕｍａｂ）、ＲＶＴ－１４０１、ＨＢＭ９１６１、ＡＬＸＮ１８３０、ＳＹＮＴ００１、ニルセビマブ（Ｎｉｒｓｅｖｉｍａｂ）であることが最も好ましい、請求項２３に記載の用途。
前記別の治療薬が、ウイルスベクター薬であり、好ましくは、遺伝子治療用ウイルスベクター薬、腫瘍溶解性ウイルスベクター薬であり、より好ましくは、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、アデノウイルスをベクターとした遺伝子治療用ウイルスベクター薬である、請求項２３に記載の用途。
前記別の治療薬が、白血球除去剤である、請求項２３に記載の用途。
前記別の治療薬が、Ｂ細胞枯渇剤である、請求項２３に記載の用途。
前記Ｂ細胞枯渇剤が、抗体であり、好ましくは、腫瘍の治療に用いられる抗体であり、より好ましくは、前記抗体は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７７、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１４、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ５６、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２、ＣＤ３、ＩＬ－１β、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、Ｃ５、ＢＡＦＦ、ＢＬｙＳ、ＢＣＭＡ、ＣＸＣＲ－４、ＩＣＡＭ－１、ＳＬＡＭＦ７（ＣＳ１）、ＴＮＦα、ＩｇＥ、ＣＤ８５又はＣＤ８６と特異的に結合する、請求項２８に記載の用途。
前記別の治療薬が、リツキシマブ、ダクリズマブ、ベバシズマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、インフリキシマブ、アダリムマブ、オマリズマブ、エファリズマブ、ナタリズマブ、トシリズマブ、エクリズマブ、ゴリムマブ、カナキヌマブ、ウステキヌマブ、ベリムマブ、ダラツムマブ、イサツキシマブ（Ｉｓａｔｕｘｉｍａｂ）又はそれらの組み合わせである、請求項２３に記載の用途。
前記Ｆｃ含有剤が、治療薬又は診断薬であり、好ましくは、前記Ｆｃ含有剤は、抗体、Ｆｃ融合タンパク質、抗体薬物複合体である、請求項２１又は２２に記載の用途。
配列番号３６で示されるとおりであることを特徴とする免疫グロブリン分解酵素ＩｄｅＥの変異体。
請求項３２に記載の変異体を含む、タンパク質。
前記タンパク質は、前記変異体のＮ末端にシグナルペプチドを含み、好ましくは、前記タンパク質は、前記変異体のＮ末端に分泌シグナル配列が接続され且つ前記分泌配列のＮ末端にメチオニンが接続され及び／又は前記変異体のＣ末端にヒスチジンタグが接続され、より好ましくは、前記タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端まで、メチオニン、分泌シグナル配列、前記変異体からなることを特徴とする、請求項３３に記載のタンパク質。
請求項３２に記載の変異体又は請求項３３若しくは３４に記載のタンパク質をコードする、ヌクレオチド。
請求項３５に記載のヌクレオチドを含む、発現ベクター。
請求項３６に記載の発現ベクターを含み又は請求項３２に記載の変異体又は請求項３３若しくは３４に記載のタンパク質を発現する宿主細胞であって、大腸菌細胞又は酵母細胞であることが好ましい、前記宿主細胞。
請求項３２に記載の変異体又は請求項３３若しくは３４に記載のタンパク質と、
任意の薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む、組成物。
抗体、又はＦｃを含有するタンパク質をさらに含む、請求項３８に記載の組成物。
前記抗体の標的は、細胞表面タンパク質、サイトカイン、ホルモン、酵素、セカンドメッセンジャー、ファーストメッセンジャー、免疫チェックポイントからなる群から選ばれる、請求項３９に記載の組成物。
腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンからなる群から選ばれることが好ましいウイルスベクター薬をさらに含む、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の組成物。
ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体からなる群から選ばれることが好ましい血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物をさらに含む、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の組成物。
（１）請求項３２に記載の変異体又は請求項３３若しくは３４に記載のタンパク質、
（２）（ａ）薬学的に許容される担体若しくは賦形剤、（ｂ）抗体、若しくはＦｃを含むタンパク質からなる群から選ばれる１種若しくは複数種、及び／又は
（３）ウイルスベクター薬であって、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンから選ばれる前記ウイルスベクター薬、及び／又は
（４）血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物であって、ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体から選ばれる前記血中ＩｇＧレベルを低下させる薬物を含む、キット。
ボックスＡ及びボックスＢを含むキットであって、
前記ボックスＡは、請求項３２に記載の変異体又は請求項３３若しくは３４に記載のタンパク質を含有し、
前記ボックスＢは、
（１）薬学的に許容される担体若しくは賦形剤、（２）抗体、若しくはＦｃを含むタンパク質、及び／又は（３）ウイルスベクター薬、及び／又は（４）血中ＩｇＧレベルを低下させることができる薬物からなる群から選ばれる１種若しくは複数種を含有し、
ただし、前記ウイルスベクター薬は、腫瘍溶解性ウイルス、遺伝子治療用ウイルス、ウイルスベクターワクチンから選ばれ、前記血中ＩｇＧレベルを低下させる薬物は、ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎと高い親和性を有するＦｃフラグメント変異体から選ばれることを特徴とする、前記キット。