JP2805564B2

JP2805564B2 - 新規物質ｐｆ１１０１ｂ物質及びその製造法

Info

Publication number: JP2805564B2
Application number: JP21589292A
Authority: JP
Inventors: 誠之高木; 茂美吉田; 貴志矢口; 圭一今村; 忠昭岡田
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1992-08-13
Filing date: 1992-08-13
Publication date: 1998-09-30
Anticipated expiration: 2013-09-30
Also published as: JPH0665246A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規なＰＦ１１０１Ｂ物
質及びその製造法に関するものである。本発明のＰＦ１
１０１Ｂ物質は、医薬、動物薬、環境衛生薬及び農園芸
用薬剤等の分野への応用が期待される。

【０００２】

【従来の技術】従来、微生物の生産する生理活性物質は
数多く知られているが、本発明によるＰＦ１１０１Ｂ物
質はＪａｎｔｈｉｔｒｅｍ系の化合物で類似する化合物
としては、ＪａｎｔｈｉｔｒｅｍＡ、Ｂ、及びＣ［Ａ
ｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，３９
（１），２７２−３（１９８０）］、Ｊａｎｔｈｉｔｒ
ｅｍＤ［Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，２４８
（１），１５０−４（１９８２）］、Ｊａｎｔｈｉｔｒ
ｅｍＥ、Ｆ及びＧ［Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋ
ｉｎＴｒａｎｓ．１，（４），６９７−７０１（１９
８４）］が報告されているに過ぎない。また微生物の生
産物で駆虫活性を有する物質としては、デストマイシン
Ａ、ハイグロマイシンＢ、アベルメクチン、ＰＦ１０２
２物質等が、又、殺虫活性を有する物質としてはアトラ
ナクチン、アンチマイシンＡ、ピエリシジン等が知られ
ているが、その数は極めて少ない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】一般に、寄生虫病と呼
ばれる病気は動物宿主に寄生虫が寄生することによって
起こる。又、現在種々の害虫が存在している。これらが
原因となって人間及び動物の健康並びに農業に甚大な被
害を及ぼしている。従って、新規な駆虫活性や殺虫活性
物質の出現は常に求められている。本発明者らは、駆虫
作用及び殺虫作用を有する新規な化合物を提供すると共
に、その有利な製造法を確立しようとするものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述の期
待にこたえるべく駆虫活性あるいは殺虫活性を有する物
質の探索を続けていたところ、不完全菌ペニシリウム属
に属する１菌株の培養物中に駆虫、殺虫剤としての開発
が期待できる物質が生産されることを見出し、新規な有
効物質ＰＦ１１０１Ｂ物質をＰＦ１１０１Ａ物質と共に
単離し、本発明を完成させた。

【０００５】本発明の第１の要旨とするところは、下記
の式：

【化２】で表されるＰＦ１１０１Ｂ物質を提供することにある。

【０００６】なお、本発明においてＰＦ１１０１Ｂ物質
と共に培養液中に生産され、既知の物質と認定されてい
るＰＦ１１０１Ａ物質は下記の式：

【化３】で表される。

【０００７】本発明の第２の要旨は、糸状菌に属するＰ
Ｆ１１０１Ｂ物質生産菌を培養し、その培養物から駆虫
活性及び殺虫活性物質として開発が期待されるＰＦ１１
０１Ｂ物質を採取することによるＰＦ１１０１Ｂ物質の
製造法にある。本発明で使用されるＰＦ１１０１Ｂ物質
生産菌の一例としては、１９８９年、トルコ国イスタン
ブール市の土壌から分離されたＰＦ１１０１株がある。
なお、以下の説明においてＰＦ１１０１物質はＰＦ１１
０１Ｂ物質とＰＦ１１０１Ａ物質とを併せた意味であ
る。

【０００８】１．ＰＦ１１０１株の菌学的性状（１）培養の特徴ツアペック寒天培地上で、２５℃で７日間培養したとこ
ろ、コロニーの大きさは１０〜１２ｍｍ程度となり、白
色綿毛状のコロニーを形成し、まだらに鈍緑色の分生子
を形成した。裏面は白色である。ツアペック酵母エキス
寒天培地（ＣＹＡ）では１３〜１４ｍｍ（２５℃、７
日）、表面は白色綿毛状の部分と鈍緑色ベルベット状の
部分（分生子形成）とに分かれるコロニーとなった。裏
面は灰緑色である。

【０００９】麦芽エキス寒天培地上では直径１２〜１５
ｍｍ（２５℃、７日）、表面はＣＹＡと同様の性状を示
した。裏面は淡黄色である。どの培地上でも可溶性色素
は生成せず、３７℃の培養では生育しなかった。（２）形態学的特徴顕微鏡下で観察したところ、分生子柄、分枝、メトレ、
フィアライドからなる複輪生−対称体のペニシリウムで
ある。分生子柄は基底菌糸層から生じ、柄は４００〜６
００×３．５〜５μｍ、滑面である。分枝は２〜３本の
輪生、８〜１０×３〜４．５μｍ、滑面である。メトレ
は３〜６本の輪生、８〜１０×３〜４．５μｍ、滑面で
ある。フィアランドはとっくり型４〜８本の輪生、７〜
９×２．５〜３．５μｍ，滑面である。分生子は楕円形
〜亜球形、その大きさは２．５〜３．５μｍ，滑面であ
る。

【００１０】以上の菌学的性状により、ＰＦ１１０１株
は不完全菌ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｓｐ．）ペニシリウム亜属（ＳｕｂｇｅｎｕｓＰｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕｍ）に属すると考えられる。従って、本
菌株をペニシリウム属ＰＦ１１０１株と呼称することと
した。尚、本菌株は工業技術院生命工学工業技術研究所
にＦＥＲＭＰ−１２９７８として寄託されている。

【００１１】ＰＦ１１０１株は、他のカビに見られるよ
うにその性状が変化し易い。例えば、ＰＦ１１０１株
の、又はこの株に由来する突然変異株（自然発生又は誘
発性）、形質接合体又は遺伝子組換え体であっても、Ｐ
Ｆ１１０１物質を生産するものは全て本発明に使用でき
る。

【００１２】２．ＰＦ１１０１Ｂ物質生産菌の培養法不完全菌類に属するＰＦ１１０１Ｂ物質生産菌（ＰＦ１
１０１株）を通常の微生物が利用しうる栄養物を含有す
る培地で培養する。栄養源としては、従来カビの培養に
利用されている公知のものが使用できる。例えば、炭素
源としては、グルコース、シュクロース、水飴、デキス
トリン、澱粉、グリセロール、糖蜜、動・植物油等を使
用しうる。また窒素源として、大豆粉、小麦胚芽、コー
ンスティープリカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵
母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素等
を使用しうる。その他、必要に応じ、ナトリウム、カリ
ウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐
酸、硫酸、及びその他のイオンを生成することができる
無機塩類を添加することは有効である。また菌の発育を
助け、ＰＦ１１０１Ｂ物質の生産を促進するような有機
及び無機物を適当に添加することができる。

【００１３】培養法としては、好気的条件での培養法、
特に深部培養法が最も適している。培養に適当な温度は
１５〜３０℃であるが、多くの場合２６℃付近で培養す
る。ＰＦ１１０１Ｂ物質の生産は培地や培養条件により
異なるが、振盪培養、タンク培養のいずれにおいても通
常２〜１０日間でその蓄積が最高に達する。培養中のＰ
Ｆ１１０１Ｂ物質の蓄積量が最高になった時に培養を停
止し、培養液から目的物質を単離精製する。

【００１４】３．Ｐ１１０１Ｂ物質の精製法本発明によって得られるＰＦ１１０１Ｂ物質の培養物か
らの採取に当たっては、その性状を利用した通常の分離
手段、例えば溶剤抽出法、イオン交換樹脂法、吸着又は
分配カラムクロマト法、ゲルろ過法、透析法、沈澱法等
を単独で又は適宜組み合わせて抽出精製することができ
る。例えば、ＰＦ１１０１Ｂ物質は、培養菌体中から
は、アセトン−水、メタノール−水又は酢酸エチル等で
抽出される。又、培養液中に蓄積されたＰＦ１１０１Ｂ
物質は、水と混ざらない有機溶剤、例えば、ブタノー
ル、酢酸エチル等で抽出すればＰＦ１１０１Ｂ物質は有
機溶剤層に抽出される。ＰＦ１１０１Ｂ物質を更に精製
するには、シリカゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光純
薬工業株式会社製）、アルミナ等の吸着剤やセファデッ
クスＬＨ−２０（ファルマシア社製）、トヨパールＨＷ
−４０（株式会社東ソー社製）等を用いるクロマトグラ
フィーを行うとよい。

【００１５】以上のような方法により、あるいはこれら
を適宜組み合わせることにより、高純度のＰＦ１１０１
Ｂ物質が得られる。得られたＰＦ１１０１Ｂ物質の理化
学的性状は次の通りである。

【００１６】１．ＰＦ１１０１Ｂ物質の理化学的性状（１）色および形状：無色粉末（２）分子式：Ｃ_３７Ｈ_４７ＮＯ_６（３）マススペクトル（ＥＩ−ＭＳ）：ｍ／ｚ６０１
（Ｍ^＋）（４）比旋光度：［α］_Ｄ ^２４＝−１６８．５７°（ｃ
１．０，ＣＨＣｌ_３）（５）紫外部吸収スペクトル： λ_ＭＡＸ ^ＭＥＯＨｎｍ（ε）：２２５（１６５００），
２５５（１６５００），２５８（１６５００），２９５
（１０１００），３１４（８６００）（６）赤外部吸収スペクトル： ν_ＭＥＯＨ ^ＫＢｒｃｍ^−１：３４００，２９５０，２９
００，２８５０，１６５０，１６１０，１５６０，１４
５０，１３８０，１２５０，１１１０，１０５０，８８
０，８４０（７）^１ＨＮＭＲスペクトル：第３図に示す。（８）^１３ＣＮＭＲスペクトル：第４図に示す。（９）溶解性：クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、
メタノールに可溶で、ヘキサン、水に不溶である。（１０）塩基性，酸性，中性の区別：中性物質

【００１７】更に、構造研究の結果、ＰＦ１１０１Ｂ物
質の化学構造を、前記式（Ｉ）のごとく決定した。

【００１８】

【参考試験例】ＰＦ１１０１Ｂ物質と共に生産されるＰ
Ｆ１１０１Ａ物質の薬効を示す試験について以下に述べ
る。１．ＰＦ１１０１Ａ物質投与による鶏回虫駆虫試験既に鶏回虫（Ａｓｃａｒｉｄｉａｇａｌｌｉ）感染症
にかかっているのが確認されている鶏にＰＦ１１０１Ａ
物質を１回投与してその鶏回虫感染症を治療した試験例
を次に示す。体重６０ｇ前後の雛４羽に対し、回虫の感
染卵を各羽約２００個ずつ経口投与させた。回虫卵の投
与５週後、鶏の糞便１ｇ中の虫卵数（Ｅ．Ｐ．Ｇ）を検
査して感染を確認した。その４羽にＰＦ１１０１Ａ物質
を体重１ｋｇ当たり４０ｍｇ，３０ｍｇ，２０ｍｇ、残
りの１羽は全くＰＦ１１０１Ａ物質を投与しない無投与
対照とした。ＰＦ１１０１Ａ物質は各鶏毎の体重から正
確に計算した投与量だけを計量し、ゼラチンカプセルに
充填し、これを、胃ゾンデで強制的に経口投与した。こ
れらの鶏は１羽毎に金網製の鳥籠に入れ、金網敷きの床
から落下する排泄物をステンレス製の受け皿に受け、投
薬開始の当日から７日間毎日排泄された子虫を丹念に数
えると同時に体重と一般状態を観察し、その観察の終了
日に全ての鶏を解剖して消化管内の内部寄生虫を全て計
測して残存虫体数とし、７日間に排泄された子虫数と合
わせて排虫率を求めた。その結果は第１表に示す通りで
ある。

【００１９】即ち、排虫率は投与した薬物の駆虫効果をそのまま表現
する指数と見なされているので、まずその排虫率を見る
と、無投与対照は排虫がなく、残存虫体数のみであった
のでその排虫率は０％であったのに対し、２０ｍｇ／ｋ
ｇ投与で５７．４％、３０ｍｇ／ｋｇ投与で８８．０
％、４０ｍｇ／ｋｇ投与では１００％と完全に駆除され
ており、投与群の殆どでは投薬後２日間以内に殆どの子
虫が排泄されていた。即ち、ＰＦ１１０１物質Ａ２０ｍ
ｇ／ｋｇ以上の投与量で顕著な効果が得られた。

【００２０】２．マツノザイセンチュウに対するＰＦ１１０１Ａ物質
の有効性試験ＰＦ１１０１Ａ物質のマツノザイセンチュウ増殖抑制効
果を試験するために、既に知られている綿球試験法を用
いた。まず脱脂綿（１．４ｃｍ角）を手で丸めて綿球
（径：５ｍｍ）を作り、乾熱滅菌し、昆虫針で固定し、
マイクロピペットで所定量のＰＦ１１０１Ａ物質を注入
した。ＰＦ１１０１Ａ物質を溶かすのに用いた溶媒を注
入した対照品も用意した。デシケーター中で約３０分間
減圧にし、溶媒を蒸発除去し、供試綿球とした。

【００２１】検定菌のハイイロカビはＣｚａｐｅｋ培地
（３ｍｌ）を含むシャーレで２２℃で４日間培養した。
このシャーレの中央に供試綿球を置き、それにマツノザ
イセンチュウ（１５０００匹／ｍｌ）０．１ｍｌを注入
した。このシャーレを裏返しにして２６℃の暗黒下で５
日間培養した。培養後の生存するマツノザイセンチュウ
の計数にはベールマンロート法を用いた。２４時間後、
濾液を取り出し、遠心分離（２０００回転、３分間）し
てマツノザイセンチュウを１０ｍｌメスフラスコに移
し、蒸留水を加えて定容した。この溶液１ｍｌをとり、
煮沸湯浴中で３分間加熱し、生存するマツノザイセンチ
ュウの数を求めた。

【００２２】このようにして求めたＰＦ１１０１Ａ物質
のマツノザイセンチュウに対する増殖阻止活性を第２表
に示した。第２表に示すようにＰＦ１１０１Ａ物質はマ
ツノザイセンチュウ増殖阻止効果を有することが判明し
た。３．ヒメトビウンカ幼虫に対するＰＦ１１０１Ａ物質の
有効性試験ＰＦ１１０１Ａ物質を少量のアセトンに溶解し、展着剤
（Ｔｗｅｅｎ２０）を０．０５％含む水で希釈して５０
０ｐｐｍ懸濁液を調製した。この懸濁液を散布塔でイネ
苗に十分量散布し、風乾後アクリル製パイプを苗にかぶ
せてヒメトビウンカ幼虫を約２０頭放虫し、１０日後に
生虫数を計測した。第３表に示すようにＰＦ１１０１物
質はヒメトビウンカ幼虫に対し殺虫活性を示した。以下に本発明の実施例を示すが、ＰＦ１１０１Ｂ物質の
性状が本発明によって明らかにされたので、それらの性
状に基づきＰＦ１１０１Ｂ物質の製造法を種々考案する
ことができる。従って、本発明は実施例によって限定さ
れるものではなく、実施例の修飾手段は勿論、本発明に
よって明らかにされたＰＦ１１０１Ｂ物質の性状に基づ
いて公知の手段を施してＰＦ１１０１Ｂ物質を生産、濃
縮、抽出、精製する方法をすべて包含する。

【００２３】

【実施例】種培地として、可溶性澱粉２．０％，グルコ
ース１．０％、ポリペプトン０．５％、小麦胚芽０．６
％、酵母エキス０．３％、大豆粕０．２％および炭酸カ
ルシウム０．２％の組成からなる培地を用いた。なお、
殺菌前のｐＨは７．０に調整した。また生産培地とし
て、グルコース５．０％、、大豆粕１．０％、肉エキス
０．４％、ペプトン０．４％、酵母エキス０．１％、塩
化ナトリウム０．２５％、炭酸カルシウム０．５％、Ｋ
Ｍ−７２０．１％、アデカノール０．０１％の組成か
らなる培地を用いた。なお、殺菌前ｐＨはｐＨ６．５に
調整して使用した。前記の種培地（２５ｍｌ）を分注
した１００ｍｌ容三角フラスコを１２０℃で１５分間殺
菌し、これにＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．ＰＦ１１
０１株（ＦＥＲＭＰ−１２９７８）の斜面寒天培養の
１白金耳を接種し、２６℃で２４時間振盪培養して第１
種培養とした。次いで、種培地（７０ｍｌ）を分注した
５００ｍｌ容三角フラスコを１２０℃で１５分間殺菌
し、これに第１種培養１．４ｍｌを接種し、２６℃で２
４時間振盪培養して第２種培養とした。次いで、種培地
（７００ｍｌ）を分注した３Ｌ容フラスコを１２０℃で
１５分間殺菌し、これに、第２種培養１４ｍｌを接種
し、２６℃で２４時間振盪培養して第３種培養とした。
さらに、前記の生産培地（３５Ｌ）を分注した５０Ｌ容
のジャーファメンターを１２０℃で１５分間殺菌し、こ
れに前記第３種培養７００ｍｌを接種して、２６℃で９
６時間振盪培養した。なお回転数は０〜２４時間後は毎
分２００回転で、２４〜９６時間後は毎分２５０回転で
行った。培養終了後、濾過助剤として珪藻土を加えて濾
過し、濾液と菌体を得た。この菌体に７０％アセトン水
（３３Ｌ）を加え、１時間撹拌後菌体を濾別して菌体抽
出液を得た。菌体抽出液は減圧下でアセトンを留去して
１０Ｌの濃縮液とした。この濃縮液のｐＨを９．０に合
わせブタノール（１８Ｌ）で活性成分を抽出し、ブタノ
ール層を濃縮した後、シリカゲル（３００ｇ）をその濃
縮液に加え、更に濃縮乾固することにより活性成分をシ
リカゲルに吸着させた。これをグラスフィルター上に載
せ、ヘキサン及びクロロホルムーメタノール（１：１）
で溶出することにより、ＰＦ１１０１物質を含むフラク
ションを得た。活性画分を濃縮乾固後、更にヘキサンで
充填したシリカゲルカラム（１００ｇ）に載せヘキサン
で洗浄後、クロロホルム−メタノール（１００：１、５
０：１、２５：１、１０：１、７：１、５：１、３：
１、１：１）を展開溶媒とするクロマトグラフィーを行
い、ＰＦ１１０１Ａ物質を含む画分（１０：１、７：１
で溶出される画分）、ＰＦ１１０１Ｂ物質を含む画分
（５：１、３：１で溶出される画分）を濃縮乾固し、淡
黄色粉末をそれぞれ５５４ｍｇ、２５２ｍｇ得た。次い
でＰＦ１１０１Ａ物質を含む粉末をメタノールを展開溶
媒とするセファデックスＬＨ−２０（２００ｍｌ）カラ
ムクロマトグラフィーで精製した後、メタノールより結
晶化を行い、ＰＦ１１０１Ａ物質の無色針状結晶１０
４．１ｍｇを得た。同様にＰＦ１１０１Ｂ物質を含む粉
末をクロロホルムーメタノール（３：７）を展開溶媒と
するセファデックスＬＨ−２０（５００ｍｌ）カラムク
ロマトグラフィーで精製し、ＰＦ１１０１Ｂ物質の無色
粉末４２．５ｍｇを得た。

【００２４】

【発明の効果】本発明のＰＦ１１０１Ｂ物質は駆虫剤、
殺虫剤としての用途が期待される。さらに各種駆虫剤、
殺虫剤への変換素材として用いることができる。

【００２５】

【図面の簡単な説明】

【図１】ＰＦ１１０１Ａ物質の重クロロホルム溶液中で
の４００ＭＨ_ｚ ^１ＨＮＭＲスペクトル

【図２】ＰＦ１１０１Ａ物質の重クロロホルム溶液中で
の１００ＭＨ_ｚ ^１３ＣＮＭＲスペクトル

【図３】ＰＦ１１０１Ｂ物質の重クロロホルム溶液中で
の４００ＭＨ_ｚ ^１ＨＮＭＲスペクトル

【図４】ＰＦ１１０１Ｂ物質の重クロロホルム溶液中で
の１００ＭＨ_ｚ ^１３ＣＮＭＲスペクトル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:80） (72)発明者今村圭一神奈川県横浜市港北区師岡町760番地明治製菓株式会社薬品総合研究所内 (72)発明者岡田忠昭神奈川県横浜市港北区師岡町760番地明治製菓株式会社薬品総合研究所内 (56)参考文献ＡＰＰＬＩＥＤＡＮＤＥＮＶＩＲＯＮＭＥＮＴＡＬＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ（1980）ＶＯＬ．39，ＮＯ. １ (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の式【化１】で表されるＰＦ１１０１Ｂ物質又はその薬学的に許容さ
れる塩。
【請求項２】ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
属）に属するＰＦ１１０１Ｂ物質生産菌を培養し、その
培養物から請求項１に記載の構造式で表されるＰＦ１１
０１Ｂ物質を採取することを特徴とするＰＦ１１０１Ｂ
物質の製造法。