KR102678263B1

KR102678263B1 - 디히드로오로테이트 옥시게나제 억제제로서의 삼치환 벤조트리아졸 유도체의 사용 방법

Info

Publication number: KR102678263B1
Application number: KR1020197034384A
Authority: KR
Inventors: 카비싸 넬로르; 서브라만야 호사할리
Original assignee: 오리진 온콜로지 리미티드
Priority date: 2017-04-24
Filing date: 2018-04-19
Publication date: 2024-06-24
Anticipated expiration: 2038-04-19
Also published as: CN110662539A; AU2018260390B2; TW201902880A; ES2889100T3; EP3915557A1; HUE056485T2; JP2023022252A; LT3615027T; IL270066B2; EA201992528A1; KR20240105481A; EP3615027B1; MX2019012640A; MD3615027T2; IL270066A; US20220241246A1; JP2020517654A; HRP20211462T1; PH12019502402A1; SI3615027T1

Abstract

본 발명은 대상체에서 암을 치료하는 방법 및 종양 성장, 전이 또는 종양 또는 암 세포의 디히드로오로테이트 옥시게나제 효소 활성을 억제하는 방법을 제공한다. 화학식 (I)을 가진 적어도 1종의 삼치환 벤조트리아졸 유도체

가 대상체에게 투여되거나 암 세포와 접촉된다. 화학식 (I)의 화합물, 및 그의 제약상 허용되는 염은 본 명세서에 제공된 의미를 갖는 치환기 R₁, R₂및 R₃을 갖는다.

Description

디히드로오로테이트 옥시게나제 억제제로서의 삼치환 벤조트리아졸 유도체의 사용 방법

발명의 배경

관련 기술분야의 설명

DHODH는 드노보(denovo) 피리미딘 뉴클레오티드 생합성 경로의 단계 중 하나를 촉매하는 단백질이다. (Greene et al. Biochem Pharmacol 1995, 50:861-7; Davis J.P et al. FASEB J 1996, 10(6): Abst C23). 이는 플라빈 보조인자 및 전자 수용자의 도움으로 DHO (디히드로오로테이트)를 오로테이트로 전환시키는 단계인, 그 경로에서 유일한 산화/환원 반응을 촉매한다. 디히드로오로테이트 데히드로게나제의 억제제가 화학요법제로서 보다 광범위한 적용을 보유하는 것으로 밝혀졌다. (Kensler et al. 1989 in: Design of Enzyme Inhibitors as Drugs; Sandler, M., and Smith, H. J. Eds., pp 379-401 Oxford Univ Press, Oxford England; Cody et al. Am. J. Clin. Oncol. 16, 526-528 (1993)).

DHODH 억제제의 예로서, 퀴놀린 유도체 브레퀴나르(Brequinar) (6-플루오로-2-(2'-플루오로[1,1'-비페닐]-4-일)-3-메틸-4-퀴놀린카르복실산)는 L1210 뮤린 백혈병에 대한 항암 활성을 나타낸다 (Andreson LW. Et al. Cancer Commun. 1989; 1(6), 381-7; Chen SF. et al. Cancer Res. 1986 Oct; 46(10): 5014-9). 브레퀴나르가 우리딘 뉴클레오티드 풀의 조직-특이적 조정에 의해 뮤린 모델 결장 38 종양에서 5-플루오로우라실 항암 활성을 강화시키는 것으로 또한 나타났다. (G Pizzorno et al. Cancer Res. 1992 Apr 1; 52:1660-5).

DHODH 억제제는 바이러스 매개 질환의 치료에서 또한 유용할 수 있다 (US 6,841,561 참조). 더욱이, DHODH의 억제는 이식 거부반응, 류마티스 관절염, 건선뿐만 아니라 자가면역 질환의 치료를 위한 유망한 목표로 공지되어 있다 (Kovarik, J. M. et al. Expert Opin. Emerg. Drugs 2003, 8, 47; Allison, A.C. Transplantation Proc. (1993) 25(3) Suppl. 2, 8-18); Makowka, L., Immunolog Rev. (1993) 136, 51-70; Davis J.P et al. Biochemistry 1996, 35: 1270-3).

널리 공지된 DHODH 억제제인 레플루노미드(Leflunomide)는 현재 시판되고 있는 합성 약물이며, 이속사졸 부류의 저분자량 약물이며 (EP0527736, JP1993506425, JP1999322700, JP1999343285, US5494911, US5532259, WO19991017748 참조) 류마티스 관절염의 치료에서 사용되고 염증성 장 질환 및 만성 동종이식 거부반응의 치료에서 사용하기 위해 또한 평가 중이다.

생체내에서, 레플루노미드는 완전히 이해되는 것은 아닌 메커니즘을 통해 그의 항염증, 항증식 및 면역억제 효과를 발휘하는 그의 활성 대사산물인 테리플루노미드(Teriflunomide)로 신속하게 형질전환된다. 테리플루노미드는 생체내 단백질 티로신 키나제의 잠재적 억제제일뿐만 아니라 DHODH의 100-1,000 배 더 큰 억제제이다 (Davis J.P et al. FASEB J 1996, 10(6): Abst C23; Davis J.P et al. Biochemistry 1996, 35:1270-3).

자가면역 및 관련 질환에 의해 영향을 받은 환자의 수가 증가함에 따라, 이러한 질환을 더 효과적으로 치료할 수 있는 신규 약물에 대한 충족되지 않은 필요성이 있다. 전신 홍반 루푸스, 만성 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 염증성 장 질환, 담즙성 간경변증, 포도막염 및 기타 장애 예컨대 크론병, 궤양성 결장염, 수포성 유사천포창, 사르코이드증, 건선, 자가면역 근염, 베게너 육아종증, 어린선, 그레이브즈 안병증, 아토피 피부염 및 천식을 포함한, 다종다양한 자가면역 및 만성 염증성 질환에서 추가로 유용한 면역억제제에 대한 중대한 필요성이 여전히 있다. 이들은 암, 림프종 및 백혈병의 치료를 위한 화학치료 요법의 일부로서, 단독으로 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 항종양 화합물과 함께 또한 유용할 수 있다.

본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, B-전림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 여포성 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 역형성 대세포 림프종, 외투 세포 림프종, 폐암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 흑색종, 교모세포종, 전립선암, 결장암, 췌장암, 골암, 두경부암, 피부암, 피부 또는 안내 악성 자궁내막, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아기의 고형 종양, 방광의 림프구성 림프종 암, 신장 또는 요관의 암, 신우의 암종, 중추신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양(spinal axis tumor), 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피모양 암, 편평 세포 암, T-세포 림프종, 환경 유발 암, 및 PTEN 돌연변이 암으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, B-전림프구성 백혈병, 비호지킨 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 역형성 대세포 림프종, 외투 세포 림프종, 삼중 음성 유방암, 흑색종, 전립선암, 및 식도암으로부터 선택된다. 상기 방법은 상기 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)에 따른 적어도 1종의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1회 이상 투여하는 단계를 포함한다:

상기 구조에서 고리 내의 점선 [....]은 임의의 안정한 조합으로 존재할 수 있는 임의적 결합을 나타낼 수 있다. R₁은 수소 및 알킬일 수 있다. R₂는 -A-R₄일 수 있다. A는 아릴렌 또는 사치환 아릴렌일 수 있고 여기서 치환기는 할로겐이다. R₃은 히드록시 및 아미노일 수 있다. R₄는 임의 치환된 아릴 및 임의 치환된 헤테로아릴일 수 있다. 임의적 치환기는 1개 이상의 R₅일 수 있다. R₅는 알킬 및 -(CH₂)_nN(R_a)R_b일 수 있다. R_a 및 R_b는독립적으로 수소, 알킬 및 -C(O)알킬이거나, 대안적으로, R_a 및 R_b는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 O 및 N으로부터 독립적으로 선택된 0-2 개의 추가 헤테로원자를 함유하는 임의 치환된 4-6 원 헤테로시클릴을 형성할 수 있고 여기서 임의적 치환기는 알킬이고 'n'은 0 및 1의 정수일 수 있다.

본 발명은 또한 대상체에서 종양 세포의 성장 및/또는 전이를 억제하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 상기 대상체에게 치료 유효량의 화학식 (I)에 따른 적어도 1종의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1회 이상 투여하는 단계를 포함한다:

본 발명은 추가로 종양 세포에서 디히드로오로테이트 옥시게나제 효소 활성을 억제하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 종양 세포를 치료 유효량의 화학식 (I)에 따른 적어도 1종의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 1회 이상 접촉시키는 단계를 포함한다:

도 1은 본 발명의 화합물 1에 의한 성장 억제에 대한 조혈 및 비조혈 기원의 ~400 종의 인간 암 세포주의 패널의 민감도를 나타낸다. 회색 원은 민감으로서 점수가 매겨진 세포주를 나타낸다 (≥75% 최대 성장 억제 및 GI50 값 <1.5 μM을 나타냄).
도 2는 본 발명의 화합물 1에 의한 성장 억제에 대한 헴 계통(heme lineage)의 인간 암 세포주의 추가 패널의 민감도를 나타낸다.
도 3은 명시된 암 세포주에 대한 10 μM의 화합물의 세포독성 효과를 구제하기 위한 외인성 우리딘의 생리적 농도 (5 μM) 및 생리적 농도를 상회하는 농도 (25 μM, 100 μM)의 능력을 나타낸다.
도 4a는 다양한 농도의 화합물 1에 대한 MV411, 카수미(Kasumi)-1, THP-1, DB, 톨레도(Toledo) 및 WSU-DLCL2 세포주의 상대 성장률 대 농도 민감도 프로파일을 나타낸다.
도 4b는 다양한 농도의 시타라빈에 대한 MV411, 카수미-1, THP-1, DB, 톨레도 및 WSU-DLCL2 세포주의 상대 성장률 대 농도 민감도 프로파일을 나타낸다.
도 4c는 다양한 농도의 독소루비신에 대한 MV411, 카수미-1, THP-1, DB, 톨레도 및 WSU-DLCL2 세포주의 상대 성장률 대 농도 민감도 프로파일을 나타낸다.
도 5a는 14일의 과정에 걸쳐 측정된, 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 MOLM-13 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 5b는 연구의 종료시 마지막 용량 후에 명시된 시점에서, CB17 SCID 마우스의 혈장 및 이식된 MOLM-13 종양에서의 화합물 1 (투여량 = 100 mg/kg, BID)의 약동학적 프로파일을 나타낸다.
도 5c는 연구의 종료시 마지막 용량 후에 12시간의 과정에 걸쳐 측정된, 미처리 (비히클) MOLM-13 종양 및 화합물 1로 처리된 종양에서의 DHO 수준을 나타낸다.
도 5d는 연구의 종료시 마지막 용량 후에 12시간의 과정에 걸쳐 측정된, 미처리 (비히클) MOLM-13 종양 및 화합물 1로 처리된 종양에서의 우리딘 수준을 나타낸다.
도 6a는 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 환자-유래 AML_1 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 6b는 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 환자-유래 AML_2 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 6c는 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 환자-유래 AML_3 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 6d는 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 환자-유래 AML_4 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 6e는 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 환자-유래 AML_5 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 7a는 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 환자-유래 DLBCL_1 (삼중 히트 모델(triple hit model) 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 7b는 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 100 mg/kg의 화합물 1, BID로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 환자-유래 DLBCL_2 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 8은 96시간 동안 다양한 농도의 화합물 1로 처리된 OCILY18, SC-1 및 CARNAVAL 이중 히트 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL) 세포주의 상대 성장률을 나타내는 곡선이다.
도 9a는 모두 14일의 과정에 걸쳐 측정된, 미처리 (비히클) 상태로 방치되거나 10 mg/kg의 화합물 1, BID; 30 mg/kg의 화합물 1, BID; 100 mg/kg의 화합물 1, BID; 및 200 mg/kg의 화합물 1, QD로 처리된 경우 CB17 SCID 마우스에서의 OCILY-19 이중 히트 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL) 종양 성장 곡선을 나타낸다.
도 9b는 연구의 종료시 마지막 용량 후에 명시된 시점에서, CB17 SCID 마우스의 혈장에서, 도 9a에 기재된 투여량으로 투여된 화합물 1의 약동학적 프로파일을 나타낸다.
도 9c는 연구의 종료시 마지막 용량 후에 12시간의 과정에 걸쳐 측정된, 미처리 (비히클) OCILY-19 종양 및 명시된 용량으로 화합물 1로 처리된 종양에서의 DHO 수준을 나타낸다.
도 9d는 연구의 종료시 마지막 용량 후에 12시간의 과정에 걸쳐 측정된, 미처리 (비히클) OCILY-19 종양 및 명시된 용량으로 화합물 1로 처리된 종양에서의 우리딘 수준을 나타낸다.
도 10은 96시간 동안 다양한 농도의 화합물 1로 처리된 DU4475 삼중 음성 유방암 세포주의 상대 성장률을 나타내는 곡선이다.

한 실시양태에서, 본 발명은 디히드로오로테이트 옥시게나제 억제제로서 삼치환 벤조트리아졸 유도체를 제공한다.

이들 유도체는 자가면역 및 염증성 장애 예컨대 다발성 경화증, 류마티스 관절염 및 암과 같은 질환의 치료에서 의약으로서 유용하다.

특정한 실시양태에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물,

또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약상 허용되는 위치이성질체를 제공하며,

상기 식에서,

고리 내의 점선 [....]은 임의의 안정한 조합으로 존재할 수 있는 임의적 결합을 나타내고;

R₁은 수소 및 알킬로부터 선택되고;

R₂는 -A-R₄이고;

A는 아릴렌 또는 사치환 아릴렌이고; 여기서 치환기는 할로겐이고;

R₃은 히드록시 및 아미노로부터 선택되고;

R₄는 임의 치환된 아릴 및 임의 치환된 헤테로아릴로부터 선택되고; 여기서 임의적 치환기는 1개 이상의 R₅로부터 선택되고;

R₅는 알킬 및-(CH₂)_nN(R_a)R_b로부터 선택되고;

R_a 및 R_b는 수소, 알킬 및 -C(O)알킬로부터 독립적으로 선택되고;

대안적으로 R_a 및 R_b는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 O 및 N으로부터 독립적으로 선택된 0-2 개의 추가 헤테로원자를 함유하는 임의 치환된 4-6 원 헤테로시클릴을 형성할 수 있고; 여기서 임의적 치환기는 알킬이고;

'n'은 0 및 1로부터 선택된 정수이다.

이하의 실시양태는 본 발명의 예시이며, 청구범위를 예시된 구체적 실시양태로 제한하려는 것은 아니다.

한 실시양태에 따르면, 구체적으로, R₁이 알킬이고; 특히 알킬이 메틸인, 화학식 (I)의 화합물이 제공된다.

또 다른 실시양태에 따르면, 구체적으로, R₂가 -A-R₄이고; 여기서 -A-는 아릴렌 및 사치환 아릴렌으로부터 선택된 것인, 화학식 (I)의 화합물이 제공된다.

선행 실시양태에 따르면, 구체적으로, R₂가

로부터 선택된 것인, 화학식 (I)의 화합물이 제공된다.

선행 실시양태 중 하나에 따르면, 구체적으로, R₄가 임의 치환된 페닐로부터 선택되고; 여기서 임의적 치환기는 메틸, 아세틸아미노, 이소프로필아미노메틸, 메틸아미노메틸, 디메틸아미노메틸,

로부터 선택된 것인, 화학식 (I)의 화합물이 제공된다.

선행 실시양태 중 하나에 따르면, 구체적으로, R₄가 2,5-디메틸-1H-피롤로부터 선택된 것인, 화학식 (I)의 화합물이 제공된다

또 다른 실시양태에 따르면, 구체적으로, R₃이 -OH 및 -NH₂인, 화학식 (I)의 화합물이 제공된다 .

또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ia)의 화합물이다

상기 식에서, 점선 [---], R₁, R₃ 및 R₄는 화학식 (I)에 기재된 바와 동일하다.

또 다른 특정한 실시양태에 따르면, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (Ib)의 화합물이다

본 발명의 또 다른 실시양태에서, 이는 화학식 (I)의 삼치환 벤조트리아졸 유도체의 제조 방법을 제공한다.

화학식 (I)의 화합물의 절차는 본 발명에 따른 화합물의 제조 공정에 관여하는 다양한 중간체의 일반적인 합성을 포함하여 단계적으로 본 명세서에서 하기에 본원에 상세히 설명된다.

더 특히, 본 발명은 장애 예컨대 다발성 경화증 및 기타 질환 예컨대 염증성 장애, 류마티스 관절염 및 암을 치료하는데 있어서 디히드로오로테이트 옥시게나제 효소 활성을 억제함으로써, 의약으로서, 화학식 (I)의 화합물 또는 모든 비율로 그의 혼합물을 포함한, 그의 제약상 허용되는 염 또는 위치이성질체의 용도를 제공한다.

본 발명의 화학식 (I)의 삼치환 벤조트리아졸 유도체는 디히드로오로테이트 데히드로게나제 (DHODH 또는 DHOD) 효소를 억제하는 치료적 역할을 보유한다. 화학식 (I)의 화합물은 전신 홍반 루푸스, 만성 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 1형 당뇨병, 염증성 장 질환, 담즙성 간경변증, 포도막염 및 기타 장애 예컨대 크론병, 궤양성 결장염, 수포성 유사천포창, 사르코이드증, 건선, 자가면역 근염, 베게너 육아종증, 어린선, 그레이브즈 안병증, 아토피 피부염 및 천식을 포함한, 자가면역 및 만성 염증성 질환을 치료 및/또는 예방하는데 유용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 화학식 (I)의 화합물 및 관련 화학식은 암, 림프종 및 백혈병의 치료를 위한 화학치료 요법의 일부로서, 단독으로 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상적인 항종양 화합물과 함께 또한 유용할 수 있다.

본 발명의 범위를 제한하지 않으면서, 본 발명의 상세한 설명을 이해하는데 있어서, 관련 기술분야의 통상의 기술자를 돕기 위해 하기 정의가 제공된다.

"알킬"은 명시된 수의 탄소 원자를 함유하는, 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는 탄화수소 쇄를 지칭하고, 예를 들어, C₁-C₆ 알킬 기는 1 내지 6 (포함)의 탄소 원자를 그 안에 가질 수 있다. C₁-C₄및 C₁-C₆알킬 기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 및 이소헥실을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 알킬 기는 비치환되거나 1개 이상의 적합한 기로 치환될 수 있다.

"아미노"는 -N- 기를 지칭하고, 상기 기의 질소 원자는 수소, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로시클릴 또는 임의의 적합한 기에 부착되어 있다. 아미노 기의 대표적인 예는 -NH₂, -NHCH₃ 및 -NH-시클로프로필을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 아미노 기는 비치환되거나 적합한 기 중 1개 이상으로 치환될 수 있다.

"아릴"은 약 6 내지 14개의 탄소 원자의 임의 치환된 모노시클릭, 비시클릭 또는 폴리시클릭 방향족 카르보시클릭 고리 시스템을 지칭한다. C₆-C₁₄아릴 기의 예는 페닐, 나프틸, 비페닐, 안트릴, 테트라히드로나프틸, 플루오레닐, 인다닐, 비페닐레닐, 및 아세나프틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 아릴 기는 비치환되거나 1개 이상의 적합한 기로 치환될 수 있다.

"아릴렌"은 비치환되거나 1개 이상의 적합한 기로 치환될 수 있는 6 내지 14 개의 탄소 원자를 갖는 2가 모노시클릭 또는 비시클릭, 포화, 불포화 또는 방향족 카르보시클릭 고리를 나타낸다.

"할로겐" 또는 "할로"는 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘을 포함한다.

"히드록시"는 -OH 기를 지칭한다.

용어 "헤테로시클릴"은 "헤테로시클로알킬" 및 "헤테로아릴"의 정의를 포함한다. 용어 "헤테로시클로알킬"은 O, N, S, S(O), S(O)₂, NH 및 C(O)로부터 선택된 적어도 1개의 헤테로원자 또는 헤테로 기를 갖는 3 내지 10 원의 비방향족, 포화 또는 부분 포화, 모노시클릭 또는 폴리시클릭 고리 시스템을 지칭한다. 예시적인 헤테로시클로알킬 기는 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 1,3-디옥솔라닐, 1,4-디옥사닐 등을 포함한다. 헤테로시클로알킬 기는 비치환되거나 1개 이상의 적합한 기로 치환될 수 있다.

"헤테로아릴"은 산소, 황 및 질소로부터 선택된 적어도 1개의 헤테로원자를 함유하는 불포화, 모노시클릭, 비시클릭, 또는 폴리시클릭 방향족 고리 시스템을 지칭한다. C₅-C₁₀헤테로아릴 기의 예는 푸란, 티오펜, 인돌, 아자인돌, 옥사졸, 티아졸, 티아디아졸, 이속사졸, 이소티아졸, 이미다졸, N-메틸이미다졸, 피리딘, 피리미딘, 피라진, 피롤, N-메틸피롤, 피라졸, N-메틸피라졸, 1,3,4-옥사디아졸, 1,2,4-트리아졸, 1-메틸-1,2,4-트리아졸, 1H-테트라졸, 1-메틸테트라졸, 벤족사졸, 벤조티아졸, 벤조푸란, 벤즈이속사졸, 벤즈이미다졸, N-메틸벤즈이미다졸, 아자벤즈이미다졸, 인다졸, 퀴나졸린, 퀴놀린, 및 이소퀴놀린을 포함한다. 비시클릭 헤테로아릴 기는 페닐, 피리딘, 피리미딘 또는 피리다진 고리가 고리 내의 1개 또는 2개의 질소 원자, 고리 내의 1개의 산소 또는 1개의 황 원자와 함께 1개의 질소 원자, 또는 1개의 O 또는 S 고리 원자를 갖는 5 또는 6-원 모노시클릭 헤테로시클릴 고리에 융합되어 있는 것들을 포함한다. 헤테로아릴 기는 비치환되거나 1개 이상의 적합한 기로 치환될 수 있다.

"헤테로 원자"는 황, 질소 또는 산소 원자를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은 "임의 치환된 또는 치환된"은 임의 치환된 기 중 적어도 1개의 수소 원자가 예시된 바와 같으나 할로겐, 니트로, 시아노, 히드록시, 옥소 (=O), 티오 (=S), -N(C₁-C₃알킬)C(O)(C₁-C₆알킬), -NHC(O)(C₁-C₆알킬), -NHC(O)(시클로알킬), -NHC(O)(아릴), -NHC(O)(헤테로시클릴), -NHC(O)(헤테로아릴), -NHC(O)H, -C(O)NH₂, -C(O)NH(C₁-C₆알킬), -C(O)NH(시클로알킬), -C(O)NH(헤테로시클릴), -C(O)NH(헤테로아릴), -C(O)N(C₁-C₆알킬)(C₁-C₆알킬), -S(O)NH(C₁-C₆알킬), -S(O)₂NH(C₁-C₆알킬), -S(O)NH(시클로알킬), -S(O)₂NH(시클로알킬), 카르복시, -C(O)O(C₁-C₆알킬), -C(O)(C₁-C₆알킬), =N-OH, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 할로알킬, 치환 또는 비치환 알콕시, 치환 또는 비치환 할로알콕시, 치환 또는 비치환 알케닐, 치환 또는 비치환 알키닐, 치환 또는 비치환 아릴, 치환 또는 비치환 아릴알킬, 치환 또는 비치환 시클로알킬, 치환 또는 비치환 시클로알케닐알킬, 치환 또는 비치환 시클로알케닐, 치환 또는 비치환 아미노, 치환 또는 비치환 헤테로아릴, 치환 또는 비치환 헤테로시클릴, 치환 또는 비치환 헤테로아릴알킬, 치환 또는 비치환 헤테로시클릭 고리로 제한되지는 않는 적합한 치환으로 치환되었음을 의미한다.

화학식 (I)의 화합물 및 화학식 (I)로부터 유래되는 특정한 화합물 하에 주어진 정의의 범위를 벗어나지 않는 본 발명의 특정한 화합물은 화학식 (I)의 화합물 내에 화합물의 범위 전체를 포함하여 하기 표에 본원에 요약되어 있다.

또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 그의 제약상 허용되는 위치이성질체.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 염증성 장애 및 자가면역 질환 또는 과활동성 면역 반응의 치료에서 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물에 관한 것이다. 더 바람직하게는, 본 발명은 다발성 경화증, 류마티스 관절염 및 이식 거부반응의 치료를 위한 화학식 (I)의 화합물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 추가 실시양태는 의약으로서, 화학식 (I)의 화합물 또는 모든 비율로 그의 혼합물을 포함한, 그의 제약상 허용되는 유도체, 염 및 위치이성질체의 용도를 포함한다.

디히드로오로테이트 데히드로게나제 연관 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한, 상기와 같은 화합물 및 모든 비율로 그의 혼합물을 포함한, 그의 제약상 사용가능한 유도체, 염 및 위치이성질체의 용도.

디히드로오로테이트 데히드로게나제 연관 장애가 과활동성 면역 반응과 연관이 있는 자가면역 장애 또는 병태인, 상기와 바와 같은 화합물의 용도.

면역조절 이상의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한, 상기와 같은 화합물 및 모든 비율로 그의 혼합물을 포함한, 그의 제약상 사용가능한 유도체, 염 및 위치이성질체의 용도.

면역조절 이상이 다발성 경화증 또는 류마티스 관절염인 상기와 같은 화합물의 용도.

암 질환, 염증성 장 질환 또는 류마티스 관절염의 치료 및 예방을 위한 의약의 제조를 위한 상기와 같은 화합물의 용도.

추가 실시양태에서, 본 발명은 화학식 (I)에 따른 적어도 1종의 화합물 및/또는 모든 비율로 그의 혼합물을 포함한, 그의 제약상 사용가능한 유도체, 염 및 위치이성질체, 및 적어도 1종의 추가 활성 성분을 포함하는 제약 제제에 관한 것이다.

본 발명은 화학식 (I)에 따른 적어도 1종의 화합물 및/또는 모든 비율로 그의 혼합물을 포함한, 그의 제약상 사용가능한 유도체, 염 및 위치이성질체, 결국 1종의 추가 활성 성분, 및 부형제를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다.

용어 "제약상 허용되는 염" 또는 "제약상 허용되는 유도체"는 활성 성분을 의미하는 것으로 여겨지며, 이는, 특히, 상기 염 형태가 활성 성분의 유리 형태 또는 이전에 사용된 임의의 다른 염 형태의 활성 성분과 비교하여 활성 성분에 대해 개선된 약동학적 특성을 부여하는 경우, 화학식 (I)의 화합물을 그의 염 중 하나의 형태로 포함한다. 활성 성분의 제약상 허용되는 염 형태는 그것이 초기에 갖지 않았으며 체내 그의 치료 효능과 관련하여 이 활성 성분의 약력학에 긍정적인 영향을 심지어 미칠 수 있는 원하는 약동학적 특성을 처음으로 이 활성 성분에 또한 제공할 수 있다.

용어 "위치이성질체" 또는 "위치이성질체들"은 구조 이성질체의 범주인 위치 이성질체를 지칭하며, 여기서 위치 또는 치환기는 모 구조상의 위치를 변화시킨다. 본원에서 화학식 (I)의 화합물의 범위를 벗어나지 않는 용어 위치이성질체는 순수한 위치이성질체 또는 그의 둘 이상의 위치이성질체의 혼합물로서 모든 위치이성질체를 본질적으로 포함한다. 본 발명의 화합물의 위치이성질체의 제약 활성은 상이할 수 있으므로, 위치이성질체를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 이들 경우에 위치이성질체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 공정에 의해 중간체로서 또는 최종 생성물로서 가능한 단계 중 어느 하나에서 분리될 수 있거나 합성에서 그대로 심지어 이용될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 위치이성질체는 하기 구조를 지칭한다.

제약 제제는 임의의 원하는 적합한 방법을 통해, 예를 들어 경구 (협측 또는 설하 포함), 직장, 비강, 국소 (협측, 설하 또는 경피 포함), 질 또는 비경구 (피하, 근육내, 정맥내 또는 피내 포함) 방법에 의해 투여에 적합화할 수 있다. 이러한 제제는, 예를 들어, 활성 성분을 부형제(들) 또는 아주반트(들)와 조합함으로써 제약 분야에 공지된 모든 공정을 사용하여 제조할 수 있다.

제약 제제는 별도의 단위, 예컨대, 예를 들어, 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 식용 발포체 또는 발포체 식품; 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼으로서 투여될 수 있다.

예를 들어, 정제 또는 캡슐로서의 경구 투여의 경우에, 활성-성분의 구성요소는 경구, 비독성 및 제약상 허용되는 불활성 부형제, 예컨대, 예를 들어, 에탄올, 글리세롤, 물 등과 조합될 수 있다. 분말은 화합물을 적합한 미세한 크기로 분쇄하고 이를 유사한 방식으로 분쇄된 제약 부형제, 예컨대, 예를 들어, 식용 탄수화물, 예컨대, 예를 들어, 전분 또는 만니톨과 혼합함으로써 제조한다. 향미제, 방부제, 분산제 및 염료가 마찬가지로 존재할 수 있다.

캡슐은 상기 기재된 바와 같은 분말 혼합물을 제조하고 그로 성형된 젤라틴 셀을 충전함으로써 제조한다. 고체 형태의 활택제 및 윤활제, 예컨대, 예를 들어, 고 분산 규산, 탈크, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘 또는 폴리에틸렌 글리콜을 충전 작업 전에 분말 혼합물에 첨가할 수 있다. 캡슐이 취해진 후에 의약의 이용 가능성을 개선시키기 위해, 붕해제 또는 가용화제, 예컨대, 예를 들어, 한천, 탄산칼슘 또는 탄산나트륨을 마찬가지로 첨가할 수 있다.

게다가, 원하는 경우 또는 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제 및 붕해제뿐만 아니라 염료를 마찬가지로 혼합물에 혼입할 수 있다. 적합한 결합제는 전분, 젤라틴, 천연 당, 예컨대, 예를 들어, 글루코스 또는 베타-락토스, 옥수수로 제조된 감미료, 천연 및 합성 고무, 예컨대, 예를 들어, 아카시아, 트라가칸트 또는 알긴산나트륨, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 포함한다. 이들 투여 형태에서 사용되는 윤활제는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨 등을 포함한다. 붕해제는 전분, 메틸셀룰로스, 한천, 벤토나이트, 크산탄 검 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 정제는, 예를 들어, 분말 혼합물을 제조하고, 혼합물을 과립화 또는 건식-압축시키고, 윤활제 및 붕해제를 첨가하고, 전체 혼합물을 압축시켜 정제를 제공함으로써 제제화한다. 분말 혼합물은 적합한 방식으로 분쇄된 화합물을 상기 기재된 바와 같이 희석제 또는 염기와, 그리고 임의로 결합제, 예컨대, 예를 들어, 카르복시메틸 셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴 또는 폴리비닐피롤리돈, 용해 지연제, 예컨대, 예를 들어, 파라핀, 흡수 촉진제, 예컨대, 예를 들어, 4급 염, 및/또는 흡수제, 예컨대, 예를 들어, 벤토나이트, 카올린 또는 인산이칼슘과 혼합함으로써 제조한다. 분말 혼합물은 결합제, 예컨대, 예를 들어, 시럽, 전분 페이스트, 아카디아 점질물(mucilage) 또는 셀룰로스 또는 중합체 물질의 용액으로 이를 습윤화하고 체를 통해 이를 압축시킴으로써 과립화할 수 있다. 과립화의 대안으로서, 분말 혼합물은 타정기를 통해 통과시켜, 분해되는 불균일한 형상의 덩어리를 제공하여 과립을 형성할 수 있다. 과립은 정제 주조 몰드에 달라붙는 것을 방지하기 위해 스테아르산, 스테아레이트 염, 활석 또는 미네랄 오일을 첨가함으로써 윤활될 수 있다. 이어서 윤활된 혼합물은 압축시켜 정제를 제공한다. 활성 성분은 또한 자유-유동 불활성 부형제와 조합시킨 다음에 압축시켜 과립화 또는 건식-압축 단계를 수행하지 않고 정제를 직접 제공할 수 있다. 셸락 밀봉 층, 당 또는 중합체 물질의층 및 왁스의 광택 층으로 이루어진 투명 또는 불투명 보호 층이 존재할 수 있다. 상이한 투여 단위를 구별할 수 있도록 염료를 이들 코팅에 첨가할 수 있다.

경구 액체, 예컨대, 예를 들어, 용액, 시럽 및 엘릭시르는 주어진 양이 미리 특정된 양의 화합물을 포함하도록 투여 단위의 형태로 제조할 수 있다. 시럽은 적합한 향미제를 가진 수용액에 화합물을 용해시킴으로써 제조할 수 있고, 한편 엘릭시르는 비독성 알콜 비히클을 사용하여 제조한다. 현탁액은 비독성 비히클에 화합물의 분산에 의해 제제화할 수 있다. 가용화제 및 유화제, 예컨대, 예를 들어, 에톡실화 이소스테아릴 알콜 및 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에테르, 방부제, 향미 첨가제, 예컨대, 예를 들어 페퍼민트 오일 또는 천연 감미료 또는 사카린, 또는 기타 인공 감미료 등을 마찬가지로 첨가할 수 있다.

경구 투여용 투여 단위 제제는, 원하는 경우, 마이크로캡슐로 캡슐화시킬 수 있다. 제제는 또한, 예컨대, 예를 들어, 중합체, 왁스 등에 미립자 물질의 코팅 또는 매립에 의해 방출이 연장되거나 지연되는 방식으로 제조할 수 있다.

화학식 (I)의 신규 삼치환 벤조트리아졸 유도체 및 그의 제약상 허용되는 염 및 그의 생리학상 기능적 유도체 및 기타 활성 성분은 또한 리포좀 전달 시스템, 예컨대, 예를 들어, 작은 단층 소포, 큰 단층 소포 및 다층 소포의 형태로 투여될 수 있다. 리포좀은 적합한 지질 또는 인지질 또는 둘 다, 예컨대, 예를 들어, 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린 등으로부터 형성될 수 있다.

경피 투여에 적합화된 제약 제제는 수령자의 표피와의 연장되고, 밀접한 접촉을 위해 독립적인 플라스터로서 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 활성 성분은 문헌 [Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)]에 일반적으로 기재된 바와 같이, 이온영동에 의해 플라스터로부터 전달될 수 있다.

국소 투여에 적합화된 제약 화합물은 연고, 크림, 현탁액, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 스프레이, 에어로졸 또는 오일로서 제제화될 수 있다.

눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 입 및 피부의 치료를 위해, 제제는 바람직하게는 국소 연고 또는 크림으로서 적용된다. 연고를 제공하기 위한 제제화의 경우에, 활성 성분은 파라핀계 또는 수혼화성 크림 베이스와 함께 이용될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 수중유 크림 베이스 또는 유중수 베이스를 가진 크림을 제공하도록 제제화될 수 있다.

눈에 국소 적용하기에 적합화된 제약 제제는 점안제를 포함하며, 여기서 활성 성분은 적합한 담체, 특히 수성 용매에 용해되거나 현탁된다.

구강내 국소 적용에 적합화된 제약 제제는 로젠지, 향정 및 구강 세정제를 포함한다.

직장 투여에 적합화된 제약 제제는 좌제 또는 관장제의 형태로 투여될 수 있다.

담체 물질이 고체인 비강 투여에 적합화된 제약 제제는, 예를 들어, 20-500 마이크로미터 범위의 입자 크기를 갖는 조악한 분말을 포함하며, 이는 스너프(snuff)가 취해지는 방식으로, 즉 코 가까이에 대는 분말이 들어 있는 용기로부터 비강을 통해 신속한 흡입에 의해 투여된다. 담체 물질로서 액체를 사용하여 비강 스프레이 또는 점비제로 투여에 적합한 제제는 물 또는 오일 중의 활성 성분 용액을 포함한다.

흡입에 의한 투여에 적합화된 제약 제제는 미세한 미립자 분진 또는 미스트를 포함하며, 이는 에어로졸, 분무기 또는 취분기를 갖춘 다양한 유형의 가압 분배기에 의해 생성될 수 있다.

질 투여에 적합화된 제약 제제는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제제로서 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합화된 제약 제제는 항산화제, 완충제, 정균제 및 용질을 포함하며, 이를 통해 제제가 치료될 수령자의 혈액과 등장성이 되는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁액 매질 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 제제는 단일 용량 또는 다중 용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰풀 및 바이알 중에서 투여되고, 동결 건조된(freeze-dried (lyophilised)) 상태로 보관될 수 있어, 사용 직전에, 멸균 담체 액체, 예를 들어 주사용수의 단지 첨가만이 필요하도록 한다.

레시피에 따라 제조된 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.

상기 특히 언급된 구성성분 이외에, 제제는 특정한 유형의 제제와 관련하여 관련 기술분야에 통상적인 다른 작용제를 또한 포함할 수 있다는 것은 말할 필요도 없으며; 따라서, 예를 들어, 경구 투여에 적합한 제제는 향미제를 포함할 수 있다.

치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 및 기타 활성 성분은, 예를 들어, 동물의 연령 및 체중, 치료를 필요로 하는 정확한 질환 상태, 및 그의 심각성, 제제의 성질 및 투여 방법을 포함하는 다수의 요인에 의존하며, 궁극적으로 치료 의사 또는 수의사에 의해 결정된다. 그러나, 화합물의 유효량은 일반적으로 일일 0.1 내지 100 mg/kg의 수령자 (포유류)의 체중 범위, 특히 전형적으로 일일 1 내지 10 mg/kg의 체중의 범위이다. 따라서, 체중이 70 kg인 성인 포유동물의 일일 실제 양은 통상 70 내지 700 mg이며, 여기서 이 양은 일일 개별 용량으로서 또는 통상 일일 일련의 부분-용량 (예컨대, 예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6)으로 투여될 수 있어, 총 일일 복용량은 동일하도록 한다. 그의 염 또는 용매화물 또는 생리학상 기능적 유도체의 유효량은 화합물 그 자체의 유효량의 분율로서 결정될 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 본원에 개시된 적어도 1종의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1회 이상 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 본원에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1회 이상 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양 세포의 성장 및/또는 전이를 억제하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 종양 세포를 치료 유효량의 본원에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 1회 이상 접촉시키는 단계를 포함하는, 종양 세포에서 디히드로오로테이트 옥시게나제 효소 활성을 억제하는 방법에 관한 것이다. 이 실시양태에서 종양 세포는 생체내, 생체외 또는 시험관내에서 접촉된다.

본원에 개시된 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 및 제약 제제 및 조성물은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는데 유용하다. 수반하여, 본원에서 종양 세포 성장 및/또는 전이 또는 디히드로오로테이트 옥시게나제 효소 활성이 억제될 수 있다. 화합물 및 제약 조성물은 치료 효과를 달성하기 위해 1회 이상 투여될 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 통상의 기술자는 치료될 병태 및 치료를 필요로 하는 대상체에 따라 용량, 투여 요법 및 투여 경로를 잘 결정할 수 있다. 암의 대표적인 예는 혈액암 예컨대, 그러나 이에 제한되지는 않는, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, B-전림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 및 만성 림프구성 백혈병을 포함한다. 암의 대표적인 예는 림프종 예컨대, 그러나 이에 제한되지는 않는, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 여포성 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 역형성 대세포 림프종, 및 외투 세포 림프종을 포함한다. 암의 대표적인 예는 고형암 예컨대, 그러나 이에 제한되지는 않는, 폐암, 유방암, 삼중 음성 유방암, 흑색종, 교모세포종, 전립선암, 결장암, 췌장암, 골암, 두경부암, 피부암, 피부 또는 안내 악성 자궁내막, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아기의 고형 종양, 방광의 림프구성 림프종 암, 신장 또는 요관의 암, 신우의 암종, 중추신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피모양 암, 편평 세포 암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 환경 유발 암, 및 PTEN 돌연변이 암을 포함한다.

추가 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)의 삼치환 벤조트리아졸 유도체를 제조하는 방법에 관한 것이다.

화학식 (I)에 따른 디히드로오로테이트 데히드로게나제 억제제는 다음의 일반적인 방법 및 절차를 사용하여 용이하게 이용 가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 전형적인 또는 바람직한 실험 조건 (즉, 반응 온도, 시간, 시약의 몰, 용매 등)이 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, 다른 실험 조건이 또한 사용될 수 있음을 인식할 것이다. 최적의 반응 조건은 사용된 특정 반응물 또는 용매에 따라 달라질 수 있으나, 이러한 조건은 통상의 최적화 절차를 사용하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 게다가, 상세하게 기재된 절차를 이용함으로써, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 청구된 본 발명의 추가 화합물을 제조할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 온도는 섭씨 온도 (℃)이다.

추가 측면에서, 본 발명의 화합물은 이러한 화합물을 구성하는 원자의 하나 이상에 비천연 비율의 원자 동위원소를 또한 함유할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 본원에 언급된 것들과 동일한 본 발명의 동위원소-표지된 변이체를 또한 포함하나, 화합물의 하나 이상의 원자가, 원자에 대해 통상 자연에서 발견되는 우세한 원자 질량 또는 질량 수와 상이한 원자 질량 또는 질량 수를 갖는 원자에 의해 대체된다는 사실을 제외하고이다. 특정된 바와 같은 임의의 특정한 원자 또는 원소의 모든 동위원소가 본 발명의 화합물의 범위, 및 그의 용도 내에서 고려된다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 예시적인 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 플루오린, 염소 및 아이오딘의 동위원소, 예컨대 ²H ("D"), ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³²P, ³³P, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ¹²³I 및 ¹²⁵I를 포함한다. 본 발명의 동위원소 표지된 화합물은 일반적으로, 비동위원소 표지된 시약 대신에 동위원소 표지된 시약을 사용함으로써, 하기 본원에 반응식 및/또는 실시예에 개시된 것들과 유사한 절차에 따라 제조될 수 있다.

다음 약어는 하기 정의를 각각 지칭한다:

AcOH (아세트산), ACN (아세토니트릴), ATP (아데노시드 트리포스페이트), BSA (소 혈청 알부민), CHCl₃(클로로포름), Cs₂CO₃ (탄산세슘), DCM (디클로로메탄), DIPEA (디-이소프로필 에틸아민), DMSO (디메틸 술폭시드), DMF (N,N-디메틸포름아미드), EDCI.HCl (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드), Et₃N (트리에틸아민), EtOAc (에틸 아세테이트), EtOH (에탄올), HOBT (히드록시벤조트리아졸), HCl (염화수소), K₂CO₃ (탄산칼륨), KOAc (아세트산칼륨), min (분), MeOH (메탄올), MeI (메틸 아이오다이드), MgSO₄ (황산마그네슘), NH₄Cl (염화암모늄), NH₄(CO₃)₂ (탄산암모늄), Pd(dppf)₂Cl₂ ([1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐 (II)), NaH (수소화나트륨), NaNO₂ (아질산나트륨), NaHCO₃ (중탄산나트륨), PetEther (석유 에테르), PBS (인산염 완충 식염수), RT-실온 (25℃-35℃), TEA (트리에틸 아민), TFA (트리플루오로아세트산), THF (테트라히드로푸란), t-BuOK (포타슘 tert-부톡시드), TMSI (트리메틸실릴 아이오다이드), TLC (박층 크로마토그래피), H₂O - 물; mL - 밀리리터; hr/h - 시간; N - 노르말농도; M - 몰농도; s - 단일선; d - 이중선; t - 삼중선; m - 다중선; ¹HNMR - 양성자 핵 자기 공명; MS - 질량 분광학; LC - 액체 크로마토그래피; HPLC - 고성능 액체 크로마토그래피, J - 결합 상수;¹H - 양성자; MHz - 메가 헤르츠 (주파수); Hz - 헤르츠; ppm - 백만분율; bs - 넓은 단일선; ES - 전기 분무; Conc.- 농축된; g - 그램; mmol 또는 mM - 밀리몰; μM - 마이크로몰; nM - 나노몰; UV - 자외선; ℃ - 섭씨 온도, M⁺- 분자 이온, % - 백분율; μ - 마이크로미터; δ - 델타; anh. - 무수; pH - 수소이온지수;

본 발명의 또 다른 실시양태는 하기 실시예에 제시되고 반응식-I로 일반화되는 화학식 (I)의 화합물의 제조에 유용한 방법을 제공한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 반응식 I이 본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물 및 화학식 (I)의 화합물의 제약상 허용되는 염을 생성하도록 적합화될 수 있음을 인식할 것이다. 달리 언급되지 않는 한, 모든 기호/변수는 앞서 정의된 바와 같다. 공정은 반응식-I로 나타내어진다:

본 발명의 화합물은 반응식-I에 예시된 합성 변환을 사용하여 제조될 수 있다. 출발 물질은 상업적으로 이용 가능하며, 본원에 기재된 절차, 문헌 절차, 또는 유기 화학의 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있을 절차에 의해 제조될 수 있다. 출발 물질 5-치환 메틸 2,3-디아미노-벤조에이트는 WO 2010115736A2에 기재된 절차에 의해 제조된다.

단계-a: 화합물-i를 일반 절차-A를 사용하여 산성 매질 중에서 아질산나트륨과 반응시켜 화합물 -ii를 수득한다.

단계-b: 화합물-ii를 일반 절차-B에 기재된 것들과 같은 염기성 조건에서 메틸 아이오다이드를 사용하여 추가로 N-알킬화하여 화학식-iii의 화합물을 수득한다.

단계-c: 화학식-iii의 화합물을 일반 절차-C를 사용하여 적합한 팔라듐 촉매의 존재하에 염기성 매질 중에서 비스피나콜레이트 디보란과 반응시켜 화학식-iv의 화합물을 수득한다.

단계-d: 화학식-iv의 화합물을 일반 절차-D에 기재된 것들과 같은 조건을 사용하여 적합한 팔라듐 촉매의 존재하에 치환된 아릴 할라이드로 처리하여 화학식-v의 화합물을 수득한다.

단계-e: 대안적으로, 화학식-v의 화합물은 일반 절차-D에 기재된 것들과 같은 적합한 조건에서, 적절한 보론산을 사용함으로써 화학식-iii의 화합물로부터 제조할 수 있다.

단계-f: 생성된 화학식-v의 화합물을 일반 절차-F에 기재된 것들과 같은 염기성 조건하에 에스테르 가수분해시켜 화학식 (I)의 화합물 (여기서, R₃=OH)을 수득한다.

단계-g: 화학식 (I)의 카르복실산을 일반 절차-G에 기재된 조건을 사용하여 염화암모늄으로 처리하여 화학식 (I)의 각각의 화합물 (여기서, R₃=NH₂)을 수득하였다.

상기 일련의 일반적인 합성 방법이 화학식 (I)에 따른 화합물 및/또는 화학식 (I)의 화합물의 합성에 필요한 중간체를 수득하기에 적합하지 않은 경우, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 적합한 제조 방법을 사용하여야 한다. 일반적으로, 화학식 (I)의 임의의 개별 화합물에 대한 합성 경로는 각각의 분자의 특정 치환기 및 필요한 중간체의 즉시 이용 가능성에 따라 달라질 것이고; 다시 이러한 요인은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 인식된다.

본 발명의 화합물은 적절한 용매의 증발로부터의 결정화에 의해 용매 분자와 회합하여 단리될 수 있다. 염기성 중심을 함유하는 화학식 (I)의 화합물의 제약상 허용되는 산 부가 염은 통상적인 방식으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 유리 염기의 용액은 적합한 산으로, 순수한 상태로 또는 적합한 용액 중에서 처리될 수 있고, 생성된 염은 여과에 의해 또는 반응 용매의 진공하 증발에 의해 단리될 수 있다. 제약상 허용되는 염기 부가 염은 화학식 (I)의 화합물의 용액을 적합한 염기로 처리함으로써 유사한 방식으로 수득될 수 있다. 두 유형의 염 모두는 이온 교환 수지 기술을 사용하여 형성되거나 상호전환될 수 있다.

비록 본 발명이 특정의 하기 실시예에 의해 예시되긴 하지만, 이에 의해 제한되는 것으로 해석되어서는 안되며; 오히려, 본 발명은 앞에 개시된 바와 같은 일반적인 영역을 포함한다. 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 다양한 수정 및 실시양태가 이루어질 수 있다.

실시예

일반:

하기에 기재된 실시예에서 제공된 MS 데이터는 다음과 같이 수득되었다: 질량 스펙트럼: LC/MS 워터스(Waters) ZMD (ESI) 또는 워터스 액쿼티(Waters Acquity) SQD (ESI).

하기에 기재된 실시예에서 제공된 NMR 데이터는 다음과 같이 수득되었다: ¹H-NMR: 브루커(Bruker) DPX-300MHz 또는 브루커 DPX 400 MHz.

하기에 기재된 실시예에서 제공된 HPLC 데이터는 다음과 같이 수득되었다.

조건 A: 2 mL/분의 유량에서, 칼럼 워터스 엑스브릿지(Xbridge)™ C₈ 50 mm x 4.6 mm; H₂O 중 0.1% TFA에서 CH₃CN 중 0.07% TFA로 8분 구배.

조건 B: 0.7 mL/분의 유량에서 C18 BDS (4.6X250) mm, SC＼244; H₂O 중 0.1% TFA에서 CH₃CN으로 10분 구배.

분취용 HPLC 조건: 칼럼- 조르박스 이클립스(Zorbax Eclipse) XDB C18 PrepHT (150 X 21.2 mm, 5 μ); 이동상: (A) 0.01% TFA 또는 0.1% TFA; (B) ACN 또는 ACN: MeOH (1:1); 유량: 20 ml/분.

달리 보고되지 않는 한, 선파이어(Sunfire) Prep C18 OBD 칼럼 19x100 mm 5 μm이 장착된 워터스로부터의 질량 지향 자동정제(mass directed autopurification) 프랙션링크스(Fractionlynx)를 사용하여 분취용 HPLC 정제를 수행하였다. 모든 HPLC 정제는 ACN/H₂O 또는 ACN/H₂O/HCOOH (0.1%)의 구배로 수행하였다.

본 발명의 화합물은 "어브밴스트 케미스트리 디벨롭프먼트 인크.(Advanced Chemistry Development Inc.), ACD/랩스(Labs) (7.00 배포(Release))"로부터의 프로그램 ACD/네임(Name) 배치(Batch)에서 사용된 표준에 따라 명명되었다. 제품 버전: 7.10 빌드(build): 2003년 9월 15일

화학식 (I)의 화합물의 절차는 본 발명에 따른 화합물의 제조 공정에 관여하는 다양한 중간체의 일반적인 합성을 포함한 일반 절차 아래에 본원에 상세히 설명된다.

일반 절차-A: 치환 [1,2,3]벤조트리아졸의 제조

아세트산 중 6-치환 또는 치환된 디아미노 에스테르 (1-3 당량)를 함유하는 플라스크에 10-20 분 바람직하게는 10분 동안 교반한 후 물 중 (아질산나트륨, 아질산칼륨 바람직하게는 아질산나트륨) (2.5-3.5 바람직하게는 2.5 당량)을 첨가한다. 반응 혼합물을 1-2 시간 동안, 바람직하게는 실온에서 1시간 동안 교반한다. 분리된 고체를 여과에 의해 수집하고 진공하에 건조시켜 목표 생성물을 수득한다.

일반 절차-A의 예시적 실시예:

제법 # A.1: 메틸 6-브로모-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-4-카르복실레이트의 합성:

아세트산 (15 mL) 중 메틸 2,3-디아미노-5-브로모벤조에이트 (1.0 g, 4.08 mmol) (Ref:WO2010/115736 A2)의 용액을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 물 (2 mL) 중 아질산나트륨 (0.309 g, 4.48 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 약 30분 동안 교반하였다. 침전된 고체를 여과하고, 물로 세척하고 진공하에 건조시켜 원하는 생성물 (0.8 g, 77%)을 수득하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 16.19 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 3.99 (s, 3H) 및 LC-MS m/z: 258 (M+H)⁺.

일반 절차-B: 치환된 벤조트리아졸의 N-알킬화

유기 용매 (예컨대 DMF, THF, 디옥산 바람직하게는 DMF) 중 치환된 벤조트리아졸-카르복실레이트 유도체 (1 당량)의 교반된 용액에, 적합한 염기 (예컨대 K₂CO₃, CS₂CO₃, NaH 등 바람직하게는 K₂CO₃2 내지 5 당량 바람직하게는 2. 당량)에 이어서 알킬 할라이드 (2 내지 5 당량, 바람직하게는 3 당량)를 첨가한다. 반응 혼합물을 약 1 내지 10 h (바람직하게는 3 h) 동안 실온에서 교반한다. 반응 혼합물을 빙냉수에 붓고 분리된 고체를 여과에 의해 수집하고 진공하에 건조시킨다. 위치이성질체를 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리하여 원하는 생성물을 수득한다.

일반 절차-B의 예시적 실시예:

제법 # B.1: 메틸 5-브로모-1-메틸-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트, 메틸 6-브로모-2-메틸-2H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-4-카르복실레이트 및 메틸 6-브로모-1-메틸-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-4-카르복실레이트의 합성

DMF (25 mL) 중 메틸 6-브로모-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-4-카르복실레이트 (4.5 g, 17.5 mmol, 제법 # A.1)의 교반된 용액에 탄산칼륨 (4.85 g, 35.15 mmol)에 이어서 메틸 아이오다이드 (7.48 g, 52.73 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉수 (100 mL)로 켄칭하고 분리된 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공하에 건조시켰다. 수득된 조 화합물을 헥산 중 10% 에틸 아세테이트를 사용하는 실리카겔 (100-200 메시) 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 이성질체-I (B.1.a) (1.9 g)을 수득하였다;¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.40 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 4.57 (s, 3H), 4.01 (s, 3H) 및 LC-MS m/z: 272 (M+2)⁺; 헥산 중 15-20% 에틸 아세테이트를 사용하여 이성질체-II (B.1.b) (1.4 g)를 수득하였다; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.26 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 4.58 (s, 3H), 4.04 (s, 3H) 및 LC-MS m/z: 272.0 (M+2)⁺; 헥산 중 20-25% 에틸 아세테이트를 사용하여 이성질체-III (B.1.c) (1.0 g)을 수득하였다;¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.67 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 4.45 (s, 3H), 3.96 (s, 3H) 및 LC-MS m/z: 272.0 (M+2)⁺.

일반 절차-C: 보론산 에스테르의 제조

디옥산 중 아릴 할로 유도체 (1.0 내지 3.0 당량, 바람직하게는 1.0 당량), 적합한 무기 염기 (예컨대 KOAC 또는 Na₂CO₃ 또는 K₂CO₃ 또는 Cs₂CO₃ 바람직하게는 KOAC), 비스피나콜레이트 디보란 (1.0 내지 3.0 당량, 바람직하게는 1.1 당량)의 혼합물을 약 10 내지 15분 동안 질소로 탈기하고 [1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐 (II) (0.001 내지 0.010 당량, 바람직하게는 0.05 당량)을 첨가한다. 반응 혼합물을 환류 온도에서 질소하에 약 3 h 내지 12 h (바람직하게는 약 6 h) 동안 교반한다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 증발건조시킨다. 수득된 잔류물을 EtOAc에 재-용해시키고, 물 및 염수 용액으로 연속적으로 세척한다. 유기 용액을 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축시킨다. 생성물은 적절한 용매 또는 용매들로부터의 결정화 또는 연화처리에 의해, 또는 분취용 HPLC 또는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제한다.

일반 절차-C의 예시적 실시예:

제법 # C.1: 메틸 1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트의 합성

디옥산 (60 mL) 중 메틸 5-브로모-1-메틸-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트 (1.0 g, 3.7 mmol, 제법 # B.1.a), 아세트산칼륨 (0.627 g, 5.92 mmol), 비스피나콜레이트 디보란 (0.93 g, 3.7 mmol)의 혼합물을 약 15분 동안 질소로 탈기하고 [1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐(II) (0.151 g, 0.018 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 온도에서 6시간 동안 질소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 증발건조시켰다. 수득된 잔류물을 EtOAc에 재-용해시키고, 물 및 염수 용액으로 연속적으로 세척하고 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 헥산 중 30% 에틸 아세테이트를 사용하는 실리카겔 (60-120 메시) 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 원하는 생성물 (0.9 g, 77%)을 수득하였다; ¹H NMR　(400 MHz, DMSO-d6): δ 8.46 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 4.59 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 1.35 (s, 12H) 및 LC-MS m/z = 318.2 (M+H)⁺.

일반 절차 C를 사용하여 합성된 다른 화합물은 표 C.1에 기재되어 있다.

일반 절차-D: 스즈키(Suzuki) 반응

아세토니트릴과 물 (8:2)의 혼합물을 약 10 내지 15분 동안 질소로 탈기한 다음에 적합한 염기 (예컨대 Na₂CO₃ 또는 K₂CO₃ 또는 Cs₂CO₃ 바람직하게는 Na₂CO₃)에 이어서 아릴 브로모 유도체 (1.0 내지 3.0 당량, 바람직하게는 1.0 당량) 및 적절한 보론산 (1.0 내지 3.0 당량, 바람직하게는 1.5 당량)을 첨가한다. 반응 혼합물을 15분 동안 다시 탈기하고 마지막으로 [1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐(II) (0.001 내지 0.010 당량, 바람직하게는 0.05 당량)을 첨가한다. 반응 혼합물을 환류 온도에서 질소하에 약 3 h 내지 12 h (바람직하게는 약 4 h) 동안 교반한다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 증발건조시킨다. 수득된 잔류물을 EtOAc에 재-용해시키고, 물 및 염수 용액으로 연속적으로 세척한다. 유기 용액을 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 여과하고 감압하에 농축시킨다. 생성물은 적절한 용매 또는 용매들로부터의 결정화 또는 연화처리에 의해, 또는 분취용 HPLC 또는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제한다.

일반 절차-D의 예시적 실시예:

제법 # D.1: 메틸 1-메틸-5-(2'-메틸-[1,1'-비페닐]-4-일)-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트의 합성

아세토니트릴 (80 mL)과 물 (15 mL)의 혼합물을 10분 동안 질소로 탈기하였다. 탄산나트륨 (2.74 g, 25.9 mmol)에 이어서 메틸 5-브로모-1-메틸-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트 (3.5 g, 12.9 mmol) 및 4,4,5,5-테트라메틸-2-(2'-메틸-[1,1'-비페닐]-4-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (3.81 g, 12.0 mmol) (C.1.5)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 다시 탈기하였다. 마지막으로 [1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐(II) (0.526 g, 0.64 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 온도에서 5시간 동안 질소하에 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 감압하에 증발건조시켰다. 수득된 잔류물을 EtOAc에 재-용해시키고, 물 및 염수 용액으로 연속적으로 세척하고 농축시켰다. 수득된 조 화합물을 헥산 중 30% 에틸 아세테이트를 사용하는 실리카겔 (60-120 메시) 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 원하는 생성물 (3.6 g, 77%)을 수득하였다; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.52 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.76-7.74 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.48-7.46 (d, J=7.6, 2H), 7.31-7.28 (m, 4H), 4.63 (s, 3H), 4.08 (s, 3H), 2.34 (s, 3H) 및 LC-MS m/z = 358.2 (M+H)⁺.

일반 절차 D를 사용하여 합성된 다른 화합물은 표 D.1에 기재되어 있다.

일반 절차-E: 환원성 아미노화

유기 용매 (예컨대 DCM, THF, ACN, DMF, DCE, 또는 디옥산) 중 적절한 알데히드와 아민의 혼합물을 실온에서 30분 내지 4시간 동안 교반한다. 생성된 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고 환원제 예컨대 적은 분량의 소듐 트리아세톡시보로히드라이드에 이어서 촉매량의 아세트산을 첨가한다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 2-4 시간 동안 교반한다. 반응의 진행을 TLC에 의해 모니터링하고, 반응 혼합물을 중탄산나트륨의 수용액으로 켄칭한다. 추가로 이를 에틸 아세테이트로 추출하고, 합해진 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 진공하에 농축시켜 목표 화합물을 수득한다. 임의로, 목표 화합물은 적절한 용매 또는 용매들로부터의 결정화 또는 연화처리에 의해, 또는 분취용 HPLC 또는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

일반 절차-E의 예시적 실시예:

제법 #E.1: 메틸 1-메틸-5-(2'-(모르폴리노메틸)-[1,1'-비페닐]-4-일)-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트의 합성

DCE (15 mL) 중 메틸 5-(2'-포르밀-[1,1'-비페닐]-4-일)-1-메틸-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트 (0.300 g, 0.8 mmol, D.1.8) 및 모르폴린 (0.070 g, 0.8 mmol)의 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소듐 트리아세톡시 보로히드라이드 (0.342 g, 1.6 mmol)에 이어서 아세트산 (0.2 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 중탄산나트륨의 수용액 (50 mL)로 켄칭하였다. 이를 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출하고, 합해진 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 수득된 조 물질을 정제 없이 다음 단계로 넘겼다 (0.200 g);¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.69 (s, 1H), 8.696 (s, 1H), 8.424-8.422 (d, J=8 Hz, 2H), 7.912-7.891 (d, J=8 Hz, 2H), 7.607 (m, 1H), 7.531-7.324 (m, 3H), 4.50 (s, 3H), 4.0 (s, 3H), 3.560 (m, 4H), 3.55 (s, 2H), 3.308 (m, 4H) 및 LC-MS m/z = 443.3 (M+H)⁺.

일반 절차-F: 에스테르 가수분해

수성 유기 용매 (예컨대 THF 또는 메탄올, 1,4 디옥산 바람직하게는 1,4 디옥산) 중 적절한 알킬 에스테르를 함유하는 플라스크에 1.5 당량의 수산화나트륨 수용액을 첨가하고 반응 혼합물을 1-8 h (바람직하게는 4 h) 동안 환류시킨다. 반응의 완료는 TLC에 의해 모니터링한다. 과량의 용매를 진공하에 제거하고 용액을 10% HCl 용액으로 산성화한다. 분리된 고체를 여과에 의해 수집하고 진공하에 건조시켜 목표 카르복실산 유도체를 수득한다. 임의로, 목표 화합물은 적절한 용매 또는 용매들로부터의 결정화 또는 연화처리에 의해, 또는 분취용 HPLC 또는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

일반 절차-F의 예시적 실시예:

실시예 # 1: 1-메틸-5-(2'-메틸-[1,1'-비페닐]-4-일)-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실산 (화합물-1)의 합성

1,4 디옥산 (15 mL) 중 메틸 1-메틸-5-(2'-메틸-[1,1'-비페닐]-4-일)-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실레이트 (1.2 g, 3.361 mmol, D.1)의 교반된 용액에 수성 2N NaOH (15 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 환류시켰다. 반응의 완료 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 과량의 용매를 감압하에 제거하고 용액을 10% HCl 용액으로 산성화하였다 (pH~2). 분리된 고체를 여과에 의해 수집하고 진공하에 건조시켜 표제 화합물을 회백색 고체 (1.1 g, 95%)로서 수득하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.35 (bs, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.89-7.87 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.51-7.49 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.32-7.25 (m, 4H), 4.58 (s, 3H) 2.30 (s, 3H) 및 LC-MS m/z = 344.1 (M+H)⁺.

일반 절차-G: 아미드 형성

유기 용매 (예컨대 DMF, THF 또는 CH_-2Cl₂) 중 적절한 카르복실산 유도체 (1.0 당량)를 함유하는 플라스크에 EDCI.HCl (1.5 당량), HOBT (1.5 당량) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (3 당량)을 첨가한다. 대략 25℃에서 약 10분 동안 교반한 후, 적절한 아민 (1.5 당량)을 첨가하고 반응물을 추가의 8-12 시간 (바람직하게는 12시간) 동안 교반한다. 물 첨가 직후 분리된 고체를 여과에 의해 수집하고 진공하에 건조시켜 아미드 유도체를 수득한다. 임의로, 수득된 화합물은 적절한 용매 또는 용매들로부터의 결정화 또는 연화처리에 의해, 또는 분취용 HPLC 또는 플래시 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

일반 절차-G의 예시적 실시예:

실시예 # 2: 1-메틸-5-(2'-메틸-[1,1'-비페닐]-4-일)-1H-벤조[d] [1,2,3]트리아졸-7-카르복스아미드 (화합물-2)의 합성

DMF (3 mL) 중 1-메틸-5-(2'-메틸-[1,1'-비페닐]-4-일)-1H-벤조[d][1,2,3]트리아졸-7-카르복실산 (0.150 g, 0.43 mmol, 화합물-1)을 함유하는 플라스크에 EDCI.HCl (0.100 g, 0.52 mmol), HOBT (0.070 g, 0.52 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (0.168 g, 1.31 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 대략 10분 동안 약 25℃에서 교반하고 염화암모늄 (0.070 g, 1.31 mmol)을 첨가하였다. 그 다음에 반응물을 약 추가의 12시간 동안 교반하고 물 (50 mL)로 켄칭하였다. 분리된 고체를 여과에 의해 수집하고 진공하에 건조시켜 원하는 화합물을 회백색 고체 (0.08 g, 53%)로서 수득하였다; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.47 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.90-7.88 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.51-7.49 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.35-7.27 (m, 4H), 4.61 (s, 3H), 2.30 (s, 3H) 및 LC-MS m/z = 343.2 (M+H)⁺.

하기 중간체를 반응물, 시약의 양 및 반응 조건을 적절히 변화시켜 일반 절차-C에 기재된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다. 화합물의 물리화학적 특성은 하기 표 C.1에 본원에 요약되어 있다.

<표 C.1.>

하기 중간체를 반응물, 시약의 양 및 반응 조건을 적절히 변화시켜 일반 절차-D에 기재된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다. 화합물의 물리화학적 특성은 하기 표 D.1에 본원에 요약되어 있다.

<표 D.1.>

하기 화합물을 반응물, 시약의 양 및 반응 조건을 적절히 변화시켜 일반 절차-E, F 및 G에 기재된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다. 화합물의 물리화학적 특성은 하기 표에 본원에 요약되어 있다.

약리학적 활성

DHODH 억제 효소 활성의 측정 (시험관내 검정)

DHODH 활성 검정은 DHO의 산화 및 유비퀴논의 후속 환원이 DCIP (2,6-디클로로페놀)의 환원과 화학량론적으로 동등한 결합된 효소 검정이다. DCIP의 감소는 610 nm에서 흡광도의 손실을 동반한다.

용액/시약의 제조:

완충제 제조: 50 mM 트리스 HCl, 150 mM KCl, 및 pH 8.0, 0.8% 트리톤.

완충제 중 20 mM의 L-디히드로오로트산 스톡 용액.

완충제 중 20 mM의 2,6-디클로로인도페놀 소듐 염 수화물 스톡 용액.

완충제 중 20 mM의 데실유비퀴논 스톡 용액.

DMSO를 비히클로서 사용.

절차

DMSO 용액 중 5 μL의 디메틸 술폭시드 또는 화학식 (I)의 화합물을 96 웰 플레이트의 웰에 첨가하였다. 화학식 (I)의 화합물은 10 μM으로 측정되었다.

완충제와 함께 단백질을 첨가하여, DMSO를 포함한 총 부피가 87 μL가 되도록 하였다. 혼합 후 화합물 및 단백질을 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. L-디히드로오로트산의 20 mM 용액 5 μL, 데실유비퀴논의 2 mM 용액 5 μL 및 2,6-디클로로인도페놀 소듐 염 수화물의 2 mM 용액 3 μL를 상기 용액에 첨가하였다 (총 검정 부피 100 μL). 혼합물을 2분 동안 교반하고, 흡광도를 610 나노미터에서 10분마다 기록하였다.

퍼센트 억제는 다음과 같이 계산하였다:

100*{(화합물을 함유하는 반응물의 Abs ₆₁₀ ) - (양성 대조군의 Abs ₆₁₀ )

(무효소 반응물의 Abs₆₁₀) - (양성 대조군의 Abs₆₁₀)

화합물을 함유하는 반응물은 화합물, 완충제, 효소 및 기질을 갖는다

양성 대조군은 DMSO, 완충제, 효소 및 기질을 함유한다

무효소 반응물은 DMSO, 완충제 및 기질을 함유한다

IC ₅₀ 결정

조사될 본 발명의 화학식 (I)의 선택된 삼치환 벤조이미다졸 및 벤조트리아졸 유도체의 2 mM DMSO 스톡 용액을 제조하였다. 후속적으로 1/3 희석물을 제조하였다.

화학식 (I)의 화합물의 각각의 스톡 5 μL를 각각의 100 μL 검정에 사용하였다. 따라서, 2 mM 스톡의 5 μL는 완충제, 단백질 및 기질로 구성된 경우 화학식 (I)의 화합물의 100 μM 용액 100 μL를 제공하였다. 또한 문헌 [Ulrich et al. (2001) Eur. J. Biochem.268, 1861-1868] 참조.

본 발명의 선택된 화합물의 IC₅₀ 값을 하기 표에 제공하였고, IC₅₀ 값 ≤ 0.1 μM을 나타내는 화합물을 'a'로서 그룹화하고, 0.101 μM 내지 1.0 μM 범위의 IC₅₀ 값을 나타내는 화합물을 'b'로서 그룹화하고 IC₅₀값 >1.0 μM을 나타내는 화합물을 'c'로서 그룹화하였다.

표: 선택된 화합물의 DHODH 억제 활성.

세포 기반 활성

라모스(Ramos) 증식 검정 (시험관내 검정)

세포 증식 검정은 세포독성 또는 증식 검정에서 생존 세포의 정량화를 위한 민감한 방법이다. XTT (2,3-비스[2-메톡시-4-니트로-5-술포페닐]-2 H-테트라졸륨-5-카르복시아닐리드 내부 염) 시스템은 미토콘드리아 데히드로게나제를 통한 살아있는 세포의 활성을 측정하는 수단이다. 생존 세포의 미토콘드리아 데히드로게나제는 XTT의 테트라졸륨 고리를 절단하여, 수용액에 용해되는 오렌지색 포르마존 결정을 산출하였다. XTT 용액은 전자 결합제, 페나진 메토술페이트 (PMS)를 반응에 첨가함으로써 강화하였다. 생성된 오렌지 색은 450 nm에서 분광 광도법으로 측정하였다. 세포 수의 증가 또는 감소는 형성된 포르마존 양의 수반되는 변화를 결과하며, 이는 시험 물질에 기인한 세포독성의 정도를 나타내는 것이다.

용액/시약의 제조

배지 제조

17.7 g IMDM (이스코브 변형 둘베코 배지(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)) 분말, 1.5 g 중탄산나트륨 pH 7.2-7.4을 1L 밀리큐(MiliQ) 수에 용해시키고, 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 10% FBS를 첨가하였다.

10.6 g 햄 F12 (Ham's F12) 분말, 1.5 g 중탄산나트륨 pH 7.2-7.4를 1L 밀리큐 수에 용해시키고, 1% 페니실린/스트렙토마이신을 첨가하였다.

DMSO를 비히클로서 사용하였다.

1X PBS (인산염 완충 식염수): 5개 정제의 PBS (시그마(Sigma): Cat#P4417)를 1L 밀리큐 수에 용해시켰다.

절차 (IC ₅₀ 결정)

라모스 세포를 완전한 IMDM 배지에 1 x10⁵개 세포/ml의 밀도로 재-현탁시켰다. 95 μL의 이 세포 현탁액을 96-웰 플레이트에 첨가하여 웰당 ~ 10,000개 세포를 시딩하였다. 플레이트를 화합물 첨가 전에 ~ 1시간 동안 5% CO₂의 가습 분위기하에 37℃에서 인큐베이션하였다.

시험 화합물 (표 1 참조)을 100% DMSO에 용해시켜 2/6/10/20 mM 스톡 용액을 생성시켰다. 필요한 최종 농도의 200X 농도를 DMSO 중에서 제조하였다. 그 다음에 10 μL의 각각의 농도 (200X)를 90 μL의 무혈청 햄 F12 배지에 희석하여 배지 중 20X의 중간 농도를 얻었다. 이 단계에서 DMSO 농도는 10% (중간 희석)이었다. 이어서, 5 μL의 각각의 중간 희석액을 이전에 시딩된 96-웰 플레이트에 삼중으로 첨가하였다. 최종 DMSO 농도는 실험용 웰에서 0.5%였다. 0.5% DMSO로 처리된 세포는 양성 대조군으로의 역할을 하였다. 100 μL의 완전한 IMDM 배지는 데이터 분석을 위한 배지 블랭크로서의 역할을 하였다. 검정 플레이트의 모든 코너 웰에 200 μL의 1X PBS를 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 37℃에서 5% CO₂를 가진 인큐베이터에서 72시간 동안 인큐베이션하였다.

종료일에, 100 μl의 XTT 용액 (햄 F12 배지에 25 μM PMS가 보충된 1 mg/ml XTT)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 2시간 동안 인큐베이션하였다. 생성된 포르마존의 양은 450 nm의 파장에서 빅터(VICTOR) X5 멀티라벨 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트의 흡광도를 판독함으로써 결정하였다. IC₅₀ 값은 세포 생존율을 50% 감소시킨 농도로서 결정하고 곡선은 그래프패드(GraphPad) 프리즘 6.0으로 플롯팅하였다.

퍼센트 억제는 다음과 같이 계산하였다:

DMSO 대조군 값을 하기 수학식을 사용하여 100%로 정규화함으로써 퍼센트 (%) 억제를 계산하였다:

% 억제 = 100% - (Abs450_{시험 화합물 - 블랭크})/(Abs450_{양성 대조군 - 블랭크})*100

시험 화합물은 세포, 시험 화합물, IMDM 배지 및 0.5% DMSO를 함유한다

양성 대조군은 세포, IMDM 배지 및 0.5% DMSO를 함유한다

블랭크는 IMDM 배지를 함유한다

화합물 1에 의한 다수의 인간 암 세포주의 시험관내 성장 억제

화합물 1을 사용한 DHODH의 억제에 특히 민감한 종양 세포 서브세트를 확인하는 것을 목표로 하는 종양 세포주 패널 선별을 수행하였다. 화합물 1은 하기 구조의 화학식으로 나타내어진다:

이들 세포주를 화합물 1로 총 72시간 동안 처리하였다.

72-시간 처리 후 종양 성장률의 평가는, 도 1 및 표 1에 나타낸 바와 같이, (도 1에서 회색 점으로 도시된) 세포주의 구별되는 서브세트가 화합물 1에 민감한 것으로 밝혀졌다. 화합물 1에 높은 민감도를 나타내는 대부분의 세포주는 조혈 기원이나, 일부 고형 종양은 또한 높은 민감도를 나타냈다 (표 1). 도 1을 생성시키기 위해, 민감 세포주는 ≥75% 최대 성장 억제 및 <1.5 μM의 GI₅₀ 값을 나타내는 것으로서 정의되었다. 표 1은 GI₅₀ 값 및 최대 성장 반응과 함께 화합물 1에 대한 민감 세포주의 일부의 목록이다. 100의 최대 억제는 완전한 성장 억제를 나타내고; >100의 최대 억제 값은 세포 사멸을 나타낸다.

4-일 성장 검정에서 헴 계통의 세포주의 확장된 패널에서 추적 선별을 수행하였다. 0일 및 4일째에 셀-티터 글로(Cell-Titer Glo) 측정에 의해 성장을 평가 하였다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 선별된 헴 세포주의 25% (20/80)는 화합물 1에 민감도를 나타냈고, 이 중 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL) 세포주가 특히 민감하였다 (8/11 또는 73%). 이 추적 선별에서 화합물 1에 중간 민감 (>50% 및 <75% 성장률 억제로서 정의됨) 또는 둔감 (<50% 성장률 억제로서 정의됨)인 헴 세포주의 서브세트를 연장된 성장 검정에 적용시켜 증가된 처리 시간이 그의 민감도 프로파일을 조정하였는지를 평가하였다. 구체적으로, 이들 헴 세포주를 명시된 농도에서 3일 동안 화합물 1로 미리 처리한 다음에, 신선한 배지/약물에서 표준 4-일 성장 검정을 위해 재-플레이팅하였다. 재시험된 헴 세포주의 압도적인 대부분은 화합물 1을 사용한 처리 7일 후 화합물 1에 강한 민감도를 나타냈다 (표 2).

<표 1>

화합물 1로 처리된 다양한 세포주의 GI₅₀ 및 최대 성장 억제

<표 2>

화합물 1로 처리된 다양한 헴 세포주의 4-일 및 7-일 민감도

화합물 1에 의한 암 세포 성장 억제는 DHODH의 억제에 기인한다

DHODH는 드노보 피리미딘 생합성의 제4 단계를 촉매하여, 내부 미토콘드리아 막에서 디히드로오로테이트를 오로테이트로 산화시킨다. 이어서, 오로테이트는 포스포리보실 피로포스페이트 (PRPP)와 조합하여 오로티딘-5'-모노포스페이트 (OMP)를 형성한다. 우리딘 모노포스페이트 (UMP)는 궁극적으로 시토졸에서 OMP로부터 생산되며 여기서 그것이 RNA/DNA 생합성을 위해 뿐만 아니라 다른 중요한 생합성 기능 예컨대 막 생합성을 위한 인지질 생성 및 단백질/지질 글리코실화를 위해 피리미딘을 제조하는데 이용된다.

손상 세포 성장/생존력에 있어서 화합물 1의 효과가 DHODH의 특이적 억제에 기인한 것을 확인하기 위해, 배지에 보충된 다양한 양의 우리딘을 사용하여 세포 성장 검정을 수행하였다. 생리적 농도 (5 μM)에 가까운 우리딘 농도로 배지를 보충하는 것이 화합물 1의 효과를 부분적으로 구제하였으며, 한편 생리적 농도를 상회하는 농도 (25 μM 및 100 μM)는 화합물 1의 최대 10 μM의 성장에 대한 효과를 완전히 구제하였다. 이들 결과는 성장에 대한 화합물 1의 효과가 적중함(on-target)을 나타내는 것이다 (도 3).

시타라빈 및 독소루비신 민감도 프로파일에 대한 화합물 1 민감도 프로파일의 비교

헴 세포주의 서브세트에 대한 화합물 1의 민감도 프로파일을 헴 악성종양에서 표준 치료 (SOC)로서 사용되는 다른 작용제의 민감도 프로파일과 비교하였다. 그의 상이한 작용 메커니즘과 일치하여, 화합물 1은 시타라빈 (도 4b) 및 독소루비신 (도 4c) 민감도 프로파일과 구별되는 민감도 프로파일 (도 4a)을 나타냈다.

화합물 1은 생체내에서 DHODH를 효과적으로 억제하고 AML 이종이식편 모델에서 종양 성장을 차단한다

화합물 1을 사용한 생체내 효능 연구를 수행하여 DHODH의 차단 및 종양 세포 성장 억제에 대한 효과의 시험관내 내지 생체내 번역을 평가하였다. 1 × 10⁶개 MOLM-13 세포를 CB17 SCID 마우스에 피하 이식하였다. 마우스 (n = 15/군)를 일단 종양이 평균 ~150 mm³에 도달하면 100 mg/kg BID PO에서 비히클 또는 화합물 1로 처리하였다. 연구의 종료시, 약동학 (PK) 및 경로 바이오마커 분석을 위해 마지막 용량 후에 명시된 시점에서 조직을 수집하였다.

100 mg/kg BID로 투여된 화합물 1은 내약성이 양호하고 MOLM-13 급성 골수성 백혈병 (AML) 이종이식편 모델의 거의 완전한 종양 성장 억제 (TGI)를 결과하였다 (도 5a). 혈장 및 종양에서 측정된 약동학 프로파일은 약물 농도의 12시간까지의 감소를 나타내며, 이는 BID 투여 요법을 뒷받침한다 (도 5b). 표적 진입기전(target engagement)의 분명한 증거는 DHODH 기질인 디히드로오로테이트 (DHO)의 종양 수준의 급격한 증가에 의해 관찰되었다 (도 5c). 기준선 DHO 수준은 정량화 한계 미만이었다 (BQL < 120 ng/g). 종양 우리딘 풀은 평가된 시점에 따라 수반하여 ~60% 감소되었다 (도 5d).

화합물 1은 생체내에서 DHODH를 효과적으로 억제하고 환자-유래 AML 및 DLBCL 이종이식편 모델에서 종양 성장을 차단한다

다음으로, 적은 수의 마우스/군을 사용하여 선별을 수행하여 AML 및 DLBCL 환자-유래 이종이식편 모델에서 화합물 1의 효능을 평가하였다. 종양-보유 마우스 (n = 3/군)를 100 mg/kg BID PO에서 비히클 또는 화합물 1로 처리하였다.

도 6a-6e 및 7a-7b에 나타낸 바와 같이, 화합물 1의 항종양 활성이 시험된 모든 모델에서 관찰되었으며, 여기서 다섯 AML 모델 중 둘 (즉, AML_2 및 AML_5) 및 두 DLBCL 모델 중 하나 (DLBCL_1)에서 >60% TGI이었다. DLBCL_1 모델은 삼중-히트 DLBCL 모델로서 특성화되었다.

화합물 1에 의한 이중 히트 미만성 대 B 세포 림프종 인간 암 세포주의 시험관내 성장 억제

이중-히트 DLBCL로서 분류된 3 가지 환자-유래 DBLCL 림프종 세포주, 즉 OCILY18, SC-1 및 CARNAVAL은 96-시간 성장 검정에서 화합물 1에 의한 억제에 매우 민감한 것으로 밝혀졌다 (도 8).

화합물 1은 환자-유래 DLBCL 이종이식편 모델에서 종양 성장을 효과적으로 차단한다

OCILY-19 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL) 이종이식편 모델에서 화합물 1을 사용하여 생체내 종양 성장에서의 강한 차단이 관찰되었다. 7 × 10⁶개 OCILY-19 세포를 CB17 SCID 마우스에 피하 이식하였다. 마우스 (n = 15-18/군)를 일단 종양이 평균 ~150 mm³에 도달하면 명시된 용량/빈도로 비히클 또는 화합물 1로 처리하였다. PK 및 바이오마커 분석을 위해 마지막 용량 후에 명시된 시점에서 조직을 수집하였다.

경로 조정 및 종양 성장 억제의 정도가 용량 및 일정 의존성인 것으로 입증되었다 (도 9a). 100 mg/kg BID 투여 요법은 10 및 30 mg/kg BID 용량 아암과 비교하여 우수한 효능을 결과하였고, 이는 종양 DHO의 더 큰 증가 (도 9c)뿐만 아니라 총 종양 우리딘 풀의 감소 (도 9d)와 상관관계가 있었다. 200 mg/kg QD 요법은 마우스에서 화합물 1의 짧은 반감기로 인해 100 mg/kg BID 투여 요법보다 덜 효과적이며, 이는 QD 투여로 더 낮은 최저 약물 농도를 결과하였다 (도 9b 참조).

화합물 1에 의한 다수의 인간 삼중 음성 유방암 세포주의 시험관내 성장 억제

삼중 음성 암 세포주 (TNBC)의 패널을 선별하여 TNBC의 서브세트가 단일 작용제로서 화합물 1을 사용한 처리로부터 잠재적으로 이익을 얻을 수 있는지를 평가하였다. 96시간 동안 화합물 1을 사용한 처리는 헴 기원의 세포주에서 관찰된 바와 비슷한 정도로 DU4475에서 세포 생존력/성장을 강건하게 손상시켰으며 (도 10 참조), 한편 4 가지 다른 TNBC 세포주 (HCC1143, HCC38, BTS49 및 HCC1806)는 시험된 조건하에 둔감하였다.

Claims

치료 유효량의 하기 구조식으로 표시되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, B-전림프구성 백혈병, 비호지킨 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 역형성 대세포 림프종, 외투 세포 림프종, 삼중 음성 유방암, 흑색종, 전립선암 및 식도암으로부터 선택된 암을 가지는 대상체를 치료하기 위한 제약 조성물:
.
제1항에 있어서, 암이 급성 골수성 백혈병인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 다발성 골수종인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 B-전림프구성 백혈병인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 비호지킨 림프종인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 미만성 대 B 세포 림프종인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 역형성 대세포 림프종인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 외투 세포 림프종인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 삼중 음성 유방암인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 흑색종인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 전립선암인 제약 조성물.
제1항에 있어서, 암이 식도암인 제약 조성물.
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