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KR20180088756A - 폴리펩티드 - Google Patents

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KR20180088756A
KR20180088756A KR1020187021899A KR20187021899A KR20180088756A KR 20180088756 A KR20180088756 A KR 20180088756A KR 1020187021899 A KR1020187021899 A KR 1020187021899A KR 20187021899 A KR20187021899 A KR 20187021899A KR 20180088756 A KR20180088756 A KR 20180088756A
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Abstract

서열번호: 2, 3, 4, 7 또는 8의 서열을 포함하는 폴리펩티드. 폴리펩티드는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 면역성 단편의 서열을 가질 수 있으며, 상기의 면역성 단편은 서열번호: 6 또는 11 내지 16 중의 하나는 아니다. 폴리펩티드는 앞선 언급한 폴리펩티드 또는 면역성 단편과 적어도 80% 서열 상동성을 가지는 서열을 가질 수 있다. 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이고, 서열번호: 10, 46, 56, 57 또는 59 내지 62의 어떤 서열을 포함하고 있지 않고 서열번호: 58의 서열로 구성되어 있지 않다. 폴리펩티드는 암의 예방 및 치료에 유용하다.

Description

폴리펩티드{POLYPEPTIDES}
본 발명은 폴리펩티드와 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 구성된 핵산 분자에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 폴리펩티드의 칵테일(cocktail) 및 핵산 분자의 칵테일에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 폴리펩티드, 핵산 분자 또는 이의 칵테일로 구성된 약학적 조성물에 관한 것이다. 아울러, 본 발명은 상기 폴리펩티드, 핵산 분자 또는 칵테일을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 환자의 암 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.
암은 세포 개체 내에 새로운 비정상적인 성장을 특징으로 하는 질병이다. 암은 암세포가 나타나도록 다단계 과정이 포함하는 다양한 변이를 통해 발생한다. 즉, 침윤과 전이의 특성을 나타내는 세포이다. 일반적으로, 두 가지 종류의 유전자 변이가 발생하여 암이 유발된다; 종양유전자 및 종양 억제 유전자. 종양유전자의 활성은 과도한 성장 및 분화, 프로그램된 세포 사멸에 대한 보호, 정상 조직 경계면의 손실 및 다양한 조직 환경에서 자리를 잡게 하는 능력과 같은 새로 특성을 유발하게 된다. 종양 억제 유전자는 부정확한 DNA복제, 세포주기 조절, 방향 및 조직 안에서의 부착 및 면역계에서 보호 세포와 조직의 상호작용처럼 정상 기능의 상실로 인해 불활성화될 수 있다.
암의 예방 및 치료에 관한 수많은 접근 방법들이 제안되어 왔다. 한가지 접근 방법이 종양특이적 항원의 단편으로 구성된 항원 펩티드의 이용이다. 이러한 항원 펩티드를 개인에게 투여했을 때, 종양이 특정 항원을 표현하는 세포에 대해 주조직복합체 클래스 I 또는 클래스 II는 제한된 T 세포 반응을 유도를 이끌어낸다.
이런 T 세포 반응이 일어나기 위해서 항원 폴리펩티드는 주조직 적합성 복합체 분자에 제시되어져야 하는 것을 감사해야 한다. 인간 개체군에서 주조직 적합성 복합체 분자는 변이성의 범위가 넓다. 특히, 다른 개체는 폴리펩티드의 아미 노사 서열에 따라 다양하게 결합 친화력의 다른 조직적합 항원 대립유전자를 가진다. 따라서 어느 특정 조직적합 항원 대립유전자를 가진 개체는 특정 서열의 폴리펩티드와 결합하는 주조직 적합성 복합체 분자를 가지게 되지만 조직적합 항원 대립유전자가 결핍된 다른 개체는 결합 및 제시할 수 없는 주조직 적합성 복합체 분자를 가진다. (또는, 적어도, 그것의 주조직 적합성 복합체 분자는 매우 낮은 친화력의 폴리펩티드를 가지고 상대적으로 낮은 단계에서 주조직 적합성 복합체를 제시 한다.)
그런 항원 펩티드를 암호화하는 핵산 분자로 구성된 백신을 제공하기 위해 제안됐다. 그런 백신은 개인 치료의 필요에 의해 백신 투여 후, 핵산 분자가 전사(DNA분자인 경우)퇴고 펩티드로 합성하기 위해서 번역하고 나서 결합하고 위에 언급한 것처럼 주조직 적합성 복합체 분자에 의해 제시되는 것을 제외하고 비슷한 원리의 방법으로 작용한다.
텔로머라아제(telomerase) 정상적인 방법으로 DNA 폴리머라아제(polymerase) 효소에 의해 길어지지 않은 부분의 진핵 세포에 선형 DNA가닥의 3' 말단 텔로미어 부분을 복제하는 기능을 가진 효소이다. 효소는 역 전사 효소 소단위 체(인간에서 "" 또는 "") 및 고 구성되어 있다. 늘 사용해서, 역 전사 효소 소단위 체가 DNA 가닥의 3' 말단을 연장하기 위해 진핵세포에서 반복되는 서열을 염색체의 3' 말단에 붙이는 것이다.
효소는 대다수의 모든 인체 암에서 활성화되어 있다고 연구되었다. 이러한 일이 일어난다 왜냐하면, 효소의 발현이 없으면 세포의 텔로미어가 점차 없어지고 염색체의 보존성이 세포 분열의 각 회의 감소하게 되어 결국 세포의 사멸을 초래한다. 따라서, 효소의 발현은 일반적으로 암세포가 발생하기 위해서 필요하다 왜냐하면 그런 발현 없이 프로그램된 세포사멸이 대개 실패로 일어나기 때문이다. 암 활성 역할의 관점에서, 종양 특이적 항원으로 여겨지고 따라서 암치료를 위한 잠재적인 표적으로 여겨지고 있다.
WO03/038047는 건강한 기증자의 세포로부터 분열하는 T세포 반응을 유도하는 것으로 보고된 T672로 지칭되는 펩티드로 공개한다. hTERT의 다양한 다른 펩티드는 또한 공개되지만 모든 실험 테스트의 대상이 아니었다.
WOOO/02581는 주조직 적합성 복합체 클래스 I 내지/또는 클래스 ll를 제한된 T세포 반응을 유도하는 텔로머라아제의 폴리펩티드로 공개한다. 폴리펩티드 중에 하나는(아미노산 서열 EARPALLTSRLRFIPK을 가지는, 또한 GV1001로 알려진) 백신 치료제로서 췌장암 환자를 대상으로 영국에서 3상 임상 시험(Telo Vac)이 진행중이다.
WO02/094312는 hTERT로부터 유래된 특정 폴리펩티드로 공개한다.
Liu JP 등(2009 Telomerase in caner immunotherapy Biochim Biophys Acta. Sep 12)은 hTERT 양성 종양 세포에 효율적인 반응을 유도함을 보여준 26 hTERT 펩티드를 검토하였다.
hTERT mRNA로 감염시킨 수지상세포는 또한 전이선 전립선암 환자를 치료하기 위해 이전에 사용되어졌다 (Su 등, 2005, Telomerase mRNA-transfected dendritic cells stimulate antigen-specific CD8+ and CD4+ T cell responses in patients with metastatic prostate cancer. J Immunol. 174(6):3798-807). Su 등은 IFNγ를 분비하는 CD8+ T세포로 측정하는 hTERT 특이 T 세포 반응 및 CTL가 매개하는 hTERT 표적을 없애는 것을 성공적인 발생을 증명하였다. 네 환자 또한 부분적인 임상 반응을 경험하였다. 하지만, 이러한 연구에서 hTERT 에피토프(epitopes)를 특성화하는 것은 없다.
언제나 암의 치료를 위한 개인에서 더 효과적인 면역 반응이 일어날 수 있는 폴리펩티드와 같은 더 나은 항원성 폴리펩티드(및 그런 폴리펩티드를 암호화하는 핵산분자)가 필요하며 및/또는 폴리펩티트는 인구의 큰 비율 안에 존재하는 조직항원 대립유전자에 의해 제시된다.
현재 위의 문제점 중 하나 이상을 완화하고자 한다.
발명의 요약
본 발명의 첫번째 측면에 있어서, 하기로부터 선택된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다:
i) 서열번호: 2, 3, 4, 7 또는 8;
ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열로서, 여기서 상기 면역성 단편은 서열번호: 6 또는 10 내지 16 중 하나는 제외함; 또는
iii) i) 또는 ii)와 적어도 80% 서열 상동성을 가지는 서열로서,
상기 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이고, 여기서 상기 폴리펩티드는 서열번호: 10, 46, 56, 57 또는 59 내지 62 중의 어느 하나의 서열을 포함하지 않으며 서열번호: 58로 구성되지 않음.
상기 폴리펩티드는 서열번호: 46, 57 또는 59 내지 62의 어떤 서열을 포함하지 않고 서열번호: 58의 서열로 구성되지 않는 것이 바람직하다.
상기 폴리펩티드는 자연적으로 발생하는 단백질(hTERT) 부분으로부터가 아니라고 말할 수 있는 것으로 동정하였다.
상기 폴리펩티드는 그 역할을 나타내는데 적합한 조직항원적합 대립유전자가 건강한 환자에서 T세포 반응을 유발할 수 있다.
바람직하게, 본 발명의 첫번째 측면에 있어서 폴리펩티드 서열은 하기로부터 선택된 서열로 정의된다:
i) 서열번호: 1;
ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열로서, 여기서 면역성 단편은 서열번호: 6, 11 내지 16, 또는 56은 제외함; 및
iii) i)또는 ii)와 적어도 80% 서열 상동성을 가지는 서열로서, 여기서 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이다. 즉, 서열번호: 2 내지 3의 서열을 포함하는 서열번호: 1의 서열로 구성될 수 있는 폴리펩티드는 서열번호: 2 내지 3의 서열이 포함될 필요가 없다.
상기 폴리펩티드는 서열번호: 58의 서열로 구성되지 않은 것이 바람직하다.
바람직하게도, 상기 면역성 단편은 서열번호 17 내지 40 중의 어느 하나의 서열을 가지지 않는다.
바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 80, 50, 30, 20 또는 11개의 아미노산 길이 이하 또는 같다.
본 발명의 두번째 측면에 있어서, 발명의 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공한다.
상기 핵산 분자는 자연적으로 발생하는 유전자(텔로머라아제 유전자) 부분으로부터가 아니라고 말할 수 있는 것으로 동정하였다.
본 발명의 세번째 측면에 있어서, 하기의 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 적어도 2개의 다른 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 칵테일(cocktail)을 제공한다:
i) 서열번호: 2 내지 7;
ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역 단편의 서열; 및
iii) i) 또는 ii)와 적어도 80% 상동성을 가지는 서열로서,
여기서 각각의 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이다. 적어도 2개의 폴리펩티드 의미가 다른 서열은 i)의 각각 다른 폴리펩티드로 정의되는 것이 바람직하다.
바람직하게는, 적어도 1개의 폴리펩티드의 서열은 하기로부터 선택된 서열로 구성된 것으로 정의된다:
i) 서열번호: 1, 7, 8, 9 또는 10;
ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열; 및
iii) i)또는 ii)와 적어도 80% 상동성을 가지는 서열로서,
여기서 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이다. 예를 들면, 서열번호: 2 내지 3의 서열을 포함하는 서열번호: 1의 서열로 구성될 수 있는 폴리펩티드 중의 하나는 서열번호: 2 내지 3의 서열이 포함될 필요가 없다.
바람직하게는, 하기 군으로부터 선택된 폴리펩티드 칵테일은 적어도 2개의 다른 폴리펩티드로 구성된다:
i) 서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편의 칵테일; 서열번호: 7의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편; 서열번호: 9의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편;
ii) 서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편의 칵테일; 서열번호: 8의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편; 서열번호: 9의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편; 및
iii) 서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편의 칵테일; 서열번호: 8의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편; 서열번호: 10의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 이와 80% 상동성을 가지는 서열 또는 적어도 8개의 아미노산 서열을 포함하는 이의 면역성 단편,
여기서 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하.
바람직하게도, 전부 혹은 각각의 면역성 단편은 서열번호: 17 내지 40 중의 어느 하나의 서열을 가진다.
본 발명의 네번째 측면에 있어서, 하기의 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성된 적어도 2개의 다른 폴리펩티드를 포함하는 핵산 칵테일(cocktail)을 제공한다:
i) 서열번호: 2 내지 7;
ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열;및
iii) i)또는 ii)와 적어도 80% 상동성을 가지는 서열로서,
여기서 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이다. 적어도 2개의 핵산 분자 의미가 다른 서열은 i)의 각각 다른 핵산 분자로 정의되는 것이 바람직하다.
바람직하게는, 하기의 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 분자로 구성된 것으로 정의된 적어도 하나의 핵산 분자:
i) 서열번호: 1, 7, 8, 9 또는 10;
ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열; 및
iii) i)또는 ii)와 적어도 80% 상동성을 가지는 서열로서,
여기서 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이다. 예를 들면, 서열번호: 2 내지 3의 서열을 포함하는 서열번호: 1의 서열로 구성되는 폴리펩티드로 암호화할 수 있는 핵산 분자 서열은 핵산 분자로 구성되고 폴리펩티드는 서열번호: 2 내지 3의 서열이 추가적으로 포함될 필요가 없다.
바람직하게도, 하기의 구성된 군으로부터 선택된 핵산 분자를 포함하는 적어도 다른 2개의 핵산 분자:
i) 서열번호: 1의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역성 단편 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 2차 서열; 서열번호: 7의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역성 단편 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 2차 서열; 및 서열번호:9의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역 단편 또는 적어도 8개의 아미노산으로 구성된 2차 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 핵산 분자 칵테일;
ii) 서열번호: 1의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역성 단편 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 2차 서열; 서열번호: 8의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역성 단편 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 2차 서열; 및 서열번호: 9의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역 단편 또는 적어도 8개의 아미노산으로 구성된 2차 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 핵산 분자 칵테일;
iii) 서열번호: 1의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역성 단편 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 2차 서열; 서열번호: 8의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역성 단편 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 2차 서열; 및 서열번호: 10의 1차 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 구성되는 핵산 분자 또는 1차 서열과 적어도 80% 상동성을 가지는 2차 서열 또는 1차 서열의 면역 단편 또는 적어도 8개의 아미노산으로 구성된 2차 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 핵산 분자 칵테일;
여기서 각각의 폴리펩티드는 길이가 100개의 아미노산 이하이다.
바람직하게는, 전부 또는 각각의 면역성 단편은 서열번호 17 내지 40 중의 어느 하나의 서열을 가진다.
본 발명의 다섯번째 측면에 있어서, 본 발명의 폴리펩티드, 본 발명의 핵산 분자, 본 발명의 폴리펩티드 칵테일 발명 또는 본 발명의 핵산 분자 및 약학적으로 허용가능한 아쥬반트(adjuvant), 희석제, 첨가제 및 추가적으로 다른 치료적인 성분을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
바람직하게도, 상기 폴리펩티드, 상기 핵산 분자, 상기 폴리펩티드 칵테일 또는 상기 핵산 분자 칵테일은 50 내지 200 ㎍사이의 양으로 존재한다.
본 발명의 여섯번째 측면에 있어서, 본 발명의 폴리펩티드, 본 발명의 핵산 분자, 본 발명의 폴리펩티드 칵테일, 본 발명의 핵산 분자 칵테일 또는 약학적 조성물 발명을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 발명의 일곱번째 측면에 있어서, 본 발명의 폴리펩티드, 본 발명의 핵산, 본 발명의 폴리펩티드 칵테일, 본 발명의 핵산 분자 또는 약학적 조성물의 약제로의 용도를 제공한다.
바람직하게는, 상기 폴리펩티드, 상기 핵산 분자, 상기 폴리펩티드 칵테일, 상기 핵산 분자 칵테일 또는 약학적 조성물의 암 예방 또는 치료를 위한 용도이다.
본 발명의 여덟번째 측면에 있어서, 상기 폴리펩티드, 상기 핵산 분자, 상기 폴리펩티드 칵테일, 상기 핵산 분자 칵테일 또는 약학적 조성물 발명을 암 예방 또는 치료를 위한 약물의 제조를 위한 용도를 제공한다.
여기에서 사용된 "폴리펩티드", "펩티드" 내지 "단백질" 용어는 아미노산 잔기의 중합체를 나타내며 교환할 수 있게 사용된다. 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기가 변형된 잔기 아미노산 중합체 또는 자연적으로 발생하는 아미노산의 인위적인 화학적 모방체와 마찬가지로 자연적으로 발생하는 아미노산 중합체와 같은 비자연적으로 발생하는 잔기를 적용한다.
여기서 사용된 "아미노산" 용어는 자연적으로 발생하고 합성 아미노산 또한 자연적으로 발생하는 아미노산과 비슷한 기능을 가지는 아미노산 유사체과 아미노산 모방체를 나타낸다. 자연적으로 발생하는 아미노산은 세포에서 그것들의 유전적 코드(code)에 의해 암호화되고, 마찬가지로 번역 후에 그것들이 변형된다{예.히드록시프롤린(hydroxyproline), 감마-카르복시글루탐산(gamma-carboxyglutamate) 및 O-포스포세린(O-phosphoserine)}. "아미노산 유사체" 구절은 자연적으로 발생하지만 변형된 R군 또는 변형된 백본(backbone){예. 호모세린(homeserine), 노르로이신(norleucine), 술폭시화물(sulfoxide), 메티오닌메틸 술포니움(methionine methyl sulphonium)}으로서 같은 기본적인 화학적 구조(알파 탄소는 수소와 결합, 카르복시(carboxy)군, 아미노산 군, 및 R군)를 가지는 화합물을 나타낸다. "아미노산 모방체" 구절은 비슷한 기능이 아닌 것부터 자연적으로 발생하는 아미노산까지 다른 구조를 가지는 화학적 화합물을 나타낸다.
여기서 사용된 "단편" 용어는 폴리펩티드의 부분을 만드는 아미노산의 연속적인 시리즈를 의미하는 폴리펩티드와 관련이 있다. 폴리펩티드의 "면역성 단편" 앞서 정의한 개인에게 투여했을 때, T세포 반응과 같은 면역반응을 유발할 수 있는 단편이다.
여기에서 교환할 수 있게 사용된 "유전자", "폴리펩티드" 용어는 다수의 뉴클레오티드 중합체를 나타낸다. 핵산 분자는 자연적으로 발생하는 핵산으로 구성될 수 있으며 펩티드 핵산, 모르폴린(morpholin) 및, 잠긴 핵산 글리콜(glycol) 핵산 및 트레오즈(threose) 핵산과 마찬가지로 잠긴 핵산으로 구성될 수 있다.
여기에서 사용된 "뉴클레오티드" 용어는 자연적으로 발생하는 뉴클레오티드 및 세포 효소에 의해 인식되는 합성한 뉴클레오티드를 나타낸다.
어느 부분적인 또는 완전한 치료 및 포함으로 나타낸 여기서 사용된 "치료" 용어는: 병 또는 증상을 억제하는, 즉, 그것의 발생을 막는; 및 병 또는 증상을 완화하는, 즉, 병 또는 증상의 감소를 유발하는 것을 포함한다.
이 설명에서, 두 서열간의 "상동성" 백분율은 실수 매개변수를 사용한 BLASTP 알고리즘(algorithm) 버전 2.2.2(Altschul, Stephen F., Thomas L Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997), "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)으로 결정했다. 특히, BLAST 알고리즘은 URL http://www. ncbi. nlm. nih.gov/blast/ 이용해 인터넷으로 접근할 수 있다.
도 1은 hTERT mRNA로 감염된 수지상세포(DC)를 췌장암 환자에 백신접종 후 탐지된 hTERT T세포 반응을 요약한 막대 그래프이다. 백신 일정표를 통해 여러 시점으로부터의 샘플에서, T세포 반응에 대한 24개가 겹치는 hTERT 15 길이 펩타이드가 탐지되었다. 펩타이드로 된 말초혈액단핵세포(PBMC)에 반응하는 분열은 3H-티민 결합으로 측정되었다. 자극 지수의 >2는 면역반응으로 여긴다.
도 2는 백신한 암 환자에서 유동 세포 분석법(flow cymetry)로 hTERT-특이적 조직항원복합체-A2 제한된 CD8+ T세포의 탐지를 보여주는 도표의 연속이다. 말초혈액단핵세포는 이전 항원 자극없이 동정 후 직접적으로 염색된다. 오량체 염색은 CD8+ CD3+ 세포에 대하여 열린 세포에서 보여진다. 배경 염색은 무관한 오량체(HIV-펩티드)로 된 도표를 보여주고, hTER 오량체 도표는 췌장암 환자에서 두 개의 새로운 hTERT 펩티드 염색(A)(서열번호: 3과 대응하는 720GLL로 나타낸 펩티드; 서열번호: 6과 대응하는 728RLT로 나타낸 펩티드) 및 폐암 환자에서 탐지된 세번째 hTERT 펩티드 염색(B)(서열번호: 5와 대응하는 613RPA로 나타낸 펩티드), 5년 차이에서 두 다른 시점의 후자를 보여준다. 45 000 CD8+ T세포가 분석되었다.
도 3은 GV1001 펩티드(서열번호: 10), 663-677 (15길이) (서열번호: 2) 및 660-689 (30길이) (서열번호: 1)에 반응하는 T세포 분열을 보여주는 그래프이다. 자극 지수는 펩티드 특이적 분열이 배경에 몇 배 이상의 측정이다.
도 4는 감소하는 펩티드 농도에 반응하는 펩티드 특이적 분열을 증명하는 CD4+ T세포 복제물(clone)의 결과를 보여준다. 2 이상의 값은 확실한 반응으로 간주된다.
도 5는 환자 혈액 샘플로부터 말초혈액단핵세포(PBMC)에서 직접적으로 서열번호: 3, 4 및 6의 9- 또는 10- 길이 펩티트의 특이적 CD8+ T림프구 탐지의 결과를 보여주는 그래프이다.
도 6은 GV1001백신(서열번호: 10) 후 몇년동안 완치된 폐암 환자에서 9 길이 펩티드 613-621 (서열번호: 5)의 특이적 CD8+ T림프구 탐지의 결과를 보여주는 그래프이다. 환자는 HLA-B7+이다. 환자는 나중에 매 6주마다 백신접종하였고 hTERT 펩티드 613-62에 대해 특이한 안정한 CD8+ T세포 집단이 완치를 경험한 후 6년간 여전히 탐지될 수 있다. 다른 CTL 에피토프(epitope), 672-681(서열번호: 25)에 특이한 두번째 소수 CTL 집단은 몇몇 시점에서 탐지되었다.
도 7은 GV1001(서열번호: 10)으로 백신 접종한 다음 흑색종 환자에서 hTERT이 중복된 펩티드 라이브러리(library)에 대한 T세포반응을 보여준 그래프이다.
도 8은 GV1001(서열번호: 10)으로 백신 접종한 다음 폐암 환자에서 hTERT이 중복된 펩티드 라이브러리(library)에 대한 T세포반응을 보여준 그래프이다.
도 9는 GV1001(서열번호: 10)으로 백신 접종한 다음 대장암 환자에서 hTERT이 중복된 펩티드 라이브러리(library)에 대한 T세포반응을 보여준 그래프이다.
도 10은 GV1001(서열번호: 10)으로 백신 접종한 다음 두 번째 흑색종 환자에서 hTERT이 중복된 펩티드 라이브러리(library)에 대한 T세포반응을 보여준 그래프이다.
도 11은 hTERT mRNA로 감염된 수지상세포으로 백신접종 한 췌장암 환자에서 hTERT이 중복된 펩티드 라이브러리에 대한 T세포를 보여주는 그래프이다.
도 12는 hTERT mRNA로 감염된 수지상세포으로 백신접종 한 췌장암 환자에서 hTERT이 중복된 펩티드 라이브러리에 대한 T세포를 보여주는 그래프이다.
도 13은 백신접종을 하지 않은 3번째 흑색종 환자에서 hTERT가 중복된 펩티드 라이브러리애 대한 자연발생적인 T세포의 반응을 보여주는 그래프이다.
도 14는 도 7 내지 13의 선택된 hTERT 펩티드로부터 결과의 요약을 보여주는 그래프이다.
도 15는 4명의 폐암 환자에서 선택된 hTERT 펩티드에 대한 T세포반응을 보여주는 그래프이다.
도16은 6명의 흑색종 환자에서 선택된 hTERT 펩티드에 대한 T세포반응을 보여주는 그래프이다.
도 17은 면역반응을 포함하는 펩티드의 수에 대한 각 환자의 월 생존자 수를 보여주는 산점도이다.
도 18은 선택된 hTERT 펩티드에 대한 펩티드 서열의 면역반응에 따라서 두 군으로 나누고 시험한 다른 환자의 생존을 보여주는 그래프이다. GV1001와 더불어 또한 0-1에 대한 이런 반응은 한 군에 배치되고 2 또는 이상 펩티드에 대한 이런 반응은 다른 군에 배치된다. 생존은 비독립적인 군 t-시험을 이용하여 두 군을 분석하였다. 생존의 동등성을 위한 예비 시험은 두 군의 생존은 현저하게 다른 것을 나타낸다. 그러므로 두-샘플 t-시험이 같은 생존을 추정하지 않아 시행되었다. 비동등 다양성 t-시험 이용으로서, t(6,1) = -3.22, p = 0,018. 통계는 WINKS SDA Software (Texasoft, Cedar Hii, TX.)을 이용하여 시행하였다. 통계적인 결정은 p=0.05로 만들어졌다. 이러한 자료에서, 군 0-1 펩티드의 평균(SD) 생존은 10,7(3,9455)이다, N=10, 및 그룹 2 펩티드 이상의 평균은 51,5714(33,3909), N=7이다.
일반적으로 본 발명은, 하기로부터 선택된 서열번호: 2, 3, 4, 7, 8 및 9를 포함하는 텔로머라아제 단백질의 폴리펩티드에 관한 것으로, 상기 폴리펩티드 길이는 100개의 아미노산 이하이고 GV1001(예. 서열번호: 10) 폴리펩티드의 서열, 서열번호: 56 (Schroers 등. 2002에 의해 보고됨) 서열번호: 46, 57 또는 59 내지 61 중의 어떤 것도 아닌 또는 서열번호: 62 (WO00/02581에서 보고됨)의 서열을 포함하지 않는다. 또한, 상기 폴리펩티드는 서열번호: 58(WO03/038047)의 서열로 구성되지 않는다.
특히 서열번호: 1(서열번호: 2 내지 3을 포함하는) 서열번호: 6(서열번호: 8 내지 9를 포함하는) 내지 서열번호: 7의 서열을 포함하는 폴리펩티드가 바람직하다.
몇몇 실시예에서, 상기 폴리펩티드는 서열번호 1 내지 9 중의 하나로 시작하는 서열로 구성되어 있다. 다른 실시예에서는, 상기 폴리펩티드는 서열변호 1 내지 9 중의 하나로 시작하는 서열로 구성되어 있고, N 내지/혹은 말단에 어떤 추가적인 아미노산은 자연적으로 발생하는 텔로머라아제 효소에서 그런 존재하는 것이 다르다.
다른 실시예에서, 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 단편 및 상기 단편은 서열번호: 6 또는 11 또는 16의 폴리펩티드 어느 것도 아니고 서열번호: 56의 서열을 가지는 폴리펩티드 단편도 아닌, 앞서 언급한 폴리펩티드의 면역성 단편을 제공한다. 모범적인 면역성 단편은 특정 조직항원복합체 클래스 I 대립유전자의 주조직적합복합체 분자의 결합 친화도를 가지는 것으로 예측되는 서열번호: 17 내지 40으로 시작하는 것을 포함한다. 서열번호: 17 내지 40의 폴리펩티드는 서열번호: 1의 폴리펩티드 전체의 면역성 단편인 것을 고마워해야한다.
인간 텔로머라아제 효소(hTERT)의 서열은 유전자은행(GenBank) 접근 번호. AF015950으로 시작한다. 서열번호: 1 내지 9의 각각은 텔로머라아제의 660 내지 705 위치에 아미노산 안에 존재하는 것을 주목해야 한다. 이것은 인간 텔로머라아제 역전사 효소 부단위체의 활성부위와 일치한다. 일단 면역 반응이 역전사 효소 부단위체의 부위 에피토프와 유발되면, 종양에 있어 어떤 세포도 이 부위가 암호화되는 텔로머라아제 부분은 변이가 되며, 그래서 면역반응을 거부하고 또한 암호화된 텔로머라아제 단백질의 효소학적 활성을 포함하게 된다. 따라서 텔로머라아제 효소의 이 부위를 표적함으로서, 텔로머라아제 유전자의 변이에 의해 암세포의 군체가 덜 생존할 수 있을 것이다.
몇몇 실시예에서, 위에서 정의한 폴리펩티드의 다수는 각각 큰 폴라펩티드를 형성하거나 고리형 폴리펩티드를 동일하게 공유결합적으로 연결되어 있다.
위에서 기술한 발명의 실시예에서, 단일 서열의 폴리펩티드를 제공한다. 하지만, 다른 실시예에서, 폴리펩티드 칵테일(즉. 혼합물)은 서열번호: 2 내지 7로부터 서열을 포함하는 적어도 두 개의 다른 폴리펩티드로 구성된 칵테일을 제공한다.
서열번호: 1, 7, 8 또는 9의 서열을 포함하는 칵테일의 폴리펩티드가 특히 바람직하다. 서열번호: 1, 7 내지 9; 서열번호: 1, 8 내지 9; 또는 서열번호: 1, 8 내지 10의 서열을 포함하는 칵테일의 폴리펩티드가 특별히 바람직하다. 그러므로 서열번호: 10(즉. GV1001로 나타낸 펩티드의 서열)의 서열을 포함하는 칵테일의 폴리펩티드 중의 하나는 발명의 범위안에 있다. 면역성 단편은 서열번호 17 내지 40의 것들이 바람직하다.
서열번호: 1 내지 10으로부터 선택된 다른 서열을 기반의 의미에서 적어도 2개의 폴리펩티드는 다르다는 것이 바람직하다.
폴리펩티드 칵테일에서, 칵테일에서 폴리펩티드는 하나 이상의 항원복합체 대립유전자의 주조직적합복합체 분자에 의해 결합할 수 있다는 것이 특별히 바람직하다. 예를 들면, 어떤 실시예에서, 칵테일은 대립유전자 HLA-A*0201의 주조직적합복합체에 의해 결합할 수 있는 첫번째 폴리펩티드 및 대립유전자 HLA-A-A*03의 주조직적합복합체 분자에 의해 결합할 수 있는 두번째 폴리펩티드를 포함한다. 또한 몇몇 실시예에서 칵테일은 다른 서열(예. 3, 4 또는 5개의 폴리펩티드)을 가지는 2개 이상의 다른 폴리펩티드를 포함하는 것을 이해할 수 있다.
다른 실시예에서, 전부 혹은 각각의 폴리펩티드는 앞서 언급한 폴리펩티드 중에 하나와 정확한 서열 상동성을 가지지 않는 것을 제공한다. 대신에, 폴리펩티드는 위의 폴리펩티드로 시작하는 적어도 80% 서열 상동성을 가진다. 서열은 위의 서열로 시작하는 적어도 90%, 95% 또한 99% 서열 상동성을 가지는 것이 특히 바람직하다. 또한 아미노산 서열의 어떤 추가 또한 치환은 원래 아미노산 곁사슬의 보존 특성이 된다. 다시 말해 치환 또는 변형은 "보전적"이다.
기능적으로 비슷한 아미노산을 제공하는 보전적인 치환표는 기술로 알려져 있다. 아미노산 곁사슬 특징의 예는 소수성 아미노산 (A, I, L, M, F, P, W, Y, V), 친수성 아미노산 (R, D, N, C, E, Q, G, H, K, S, T), 및 다음의 기능적인 잔기 또는 공통적인 특징을 가지는 곁사슬: 지방족 곁사슬 (G, A, V, L, I, P); 수산기를 포함하는 곁사슬 (S, T, Y); 황 원자를 포함하는 곁사슬 (C, M); 카르복실산 및 아미드를 포함하는 곁사슬 (D, N, E, Q); 염기를 포함하는 곁사슬 (R, K, H); 및 방향족을 포함하는 곁사슬 (H, F, Y, W). 덧붙여, 다음 8개의 잔기는 각각 서로의 보전적인 치환물인 아미노산을 포함한다.
1) 알라닌 (A), 글리신 (G);
2) 아스파르트산 (D), 글루탐산 (E);
3) 아스파라긴 (N), 글루타민 (Q);
4) 아르기닌 (R), 리신 (K);
5) 이소로이신 (I), 로이신 (L), 메티오닌 (M), 발린 (V);
6) 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y), 트립토판 (W);
7) 세린 (S), 트레오닌 (T); 및
8) 시스테인 (C), 메티오닌 (M).
몇몇 실시예에서, 전부 또는 각각의 폴리펩티드의 서열은 특정 인간 백혈구 항원 대립유전자의 주조직적합복합체에 폴리펩티드의 결합 친화도를 변화(예.증가)시키기 위해서 바뀐다. 다른 실시예에서는, 폴리펩티드는 N- 및/또는 C- 말단에 위에서 언급한 것들로 덧붙여 시작한 더 이상의 아미노산을 가진다. 이런 추가적인 아미노산은 주조직적합복합체에 폴리펩티드의 결합 친화도를 바꾸는데(예. 증가) 또한 사용되어질 수 있다.
전부 또는 각각의 폴리펩티드(특히 위에 언급한 것으로 시작한 바뀐 서열의 폴리펩티드)는 독성 T 림프구 ("CTL") 반응을 유도할 수 있는 것이 필요하다. 즉 폴리펩티드가 항원제시세포(예. 수지상세포)에 의해 제시될 때 폴리펩티드가 독성 T 림프구를 유도할 수 있어야 한다.
독성 T 림프구 유도가능성의 확인은 인체 주조직적합항원(예를 들면, B-림프구, 대식세포 또는 수지상세포)을 수행하는 항원제시 세포를 유도하거나 인체 말초 혈액단핵 림프구에서 유래한 더 세분화되는 수지상세포 및 폴리펩티드를 CD8+ 세포와 혼합하여 자극한 후에, 독성 T 림프구에 대한 표적세포에 의해 생산되고 분화되는 인터페론-감마를 측정하여 수행될 수 있다. 반응계에 의하면, 인간 HLA 항원(예를 들면, 이런 것들이 기술된 BenMohamed L, Krishnan R, Longmate J, Auge C, Low L, Primus J, Diamond DJ, Hum Immunol 61(8): 764-79, 2000 Aug, Related Articles, Books, Linkout Induction of CTL response by a minimal epitope vaccine in HLA A*0201/DR1 transgenic mice: dependence on HLA class II restricted T(H) response)을 발현하는 형질 전환 동물을 생산하여 사용할 수 있다. 예를 들면, 표적 세포는 51Cr으로 방사선표지될 수 있으며, 독성 활성은 표적세포로부터 분비되는 방사능으로부터 계산될 수 있다. 다른 방법으로, 독성 T림프구 유도가능성은 유동성의 펩티드를 운반하는 항원제시세포의 존재에서 독성 T 림프구에 의해 생산되고 분비되는 인터페론-감마를 측정 및 항-인터페론-감사 단클론 항체를 사용하여 배제에서 억제 구역을 보여줌으로서 확인할 수 있다.
본 발명에 몇몇 더 이상의 실시예에서, 전부 또는 각각의 폴리펩티드는 다른 물질과 결합되어 있지만 독성 T세포 림프구 반응을 유도하는 능력은 유지한다. 이러한 물질은 지질, 당 및 당 사슬, 아세틸기, 자연적 내지 화학적 중합체와 같은 것이다. 특정 실시예에서, 폴리펩티드는 당화, 곁사슬 산화 또는 인산화 같은 변형을 포함한다.
몇몇 실시예에서, 전부 혹은 각각의 폴리펩티드는 기술에서 알려진 전통적인 과정에 의해 생산된다. 다른 방법으로, 폴리펩티드는 예를 들면, 브롬화시안, 및 추가적인 정제를 사용한 절단에 의해 생산된 텔로머라아제 단백질의 단편이다. 효소학적 절단 또한 사용되어질 수 있다. 더 이상의 실시예에서, 폴리펩티드는 발현된 폴리펩티드의 재조합 형태이다. 예를 들면, 발현가능한 형태(프로모터 서열에 해당하는 조절 서열의 아랫부분)에서 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 적합한 벡터가 준비되며 적합한 주 세포로 형질전환이 된다.
본 발명의 다른 실시예에서, 위에서 언급해 시작한 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클로오티드 서열로 구성된 핵산 분자를 제공한다.
본 발명의 더 이상의 실시예에서, 핵산 분자의 칵테일(즉, 혼합물)을 제공하는데 상기 칵테일은 서열번호: 2 내지 7 서열의 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 2개의 다른 핵산 분자로 구성된다. 다른 실시예에서, 폴리펩티드는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 서열번호: 2 내지 7 중의 하나의 단편이다. 다른 형태에서, 폴리펩티드의 서열은 앞서 언급한 것과 같지 않지만 대신 그것과 적어도 80% 서열 상동성을 가진다. 어떤 경우에 있어, 폴리펩티드 길이는 100개의 아미노산 이하이다. 암호화된 폴리펩티드는 서열번호: 1, 7, 8 또는 9의 서열을 포함하는 것이 바람직하다. 칵테일에서 암호화된 폴리펩티드는 서열번호: 1, 7 내지 9; 서열번호: 1, 8 내지 9 또는 서열번호: 1, 8 내지 10의 서열을 포함하는 것이 특히 바람직하다. 몇몇 실시예에서, 따라서 어떤 암호화된 폴리펩티드는 서열번호: 10 (즉 GV1001 펩티드의 서열)의 서열을 포함한다. 서열번호 17 내지 40의 서열을 암호화하는 면역성 단편은 또한 바람직하다. 서열번호: 1 내지 10으로부터 선택된 다른 서열에 바탕을 둔 의미에서 적어도 2개의 핵산 분자는 다르다는 것이 바람직하다.
유전자 암호의 퇴화 때문에, 핵산 분자는 폴리뉴클레티드 서열의 범위를 가지고 있는 특정 폴리펩티드를 암호화한다. 예를 들면, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCT 모두는 아미노산 알라닌을 암호화한다.
핵산 분자는 DNA 또는 RNA 또는 그것의 유도체 중에 하나이다.
본 발명 더 이상의 실시예에서, 위에서 기술한 폴리펩티드, 핵산 분자 또는 폴리펩티드 또는 핵산 칵테일을 포함하는 약학적 조성물이다. 덧붙여, 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 아쥬반트, 희석제 또는 첨가제로 구성되어 있다. 특정 실시예에서 약학적 조성물은 발명의 폴리펩티드 혼합물 및 발명의 핵산 분자를 포함한다.
바람직한 아쥬반트는 프로인트의 완전한 또는 불완전한 아쥬반트, 인산 알루미늄, 수산화 알루미늄, 명반, 콜레라 독소 및 살모넬라 독소를 포함한다. 특히 바람직한 아쥬반트는 GM-CSF (과립구 대식세포 집락 자극인자), 모범적인 희석제 및 첨가제는 멸균된 물, 생리식염수, 배양액 및 인산 완충액을 포함한다.
특정, 실시예에서 폴리펩티드 또는 핵산 분자는 면역성 운반체에 짝지어져 있다. 모범적인 면역성 운반체는 키홀 림펫 해모시아닌(keyhole limpet haemocyanin, 소혈청알부민, 난백알부민 및 닭 면역글로불린을 포함한다.
몇몇 실시예에서, 약학적 조성물은 또한 더 이상의 치료적인 성분을 포함한다. 모범적 더 이상의 치료적인 성분은 인터루킨-2 (IL2), 인터루킨-12 (IL12), 더 이상의 텔로머라아제 폴리펩티드(즉 위에서 논의한 것을 제외한 텔로머라아제 폴리펩티드) 화학요법제, 진통제, 항염증제 및 다른 항암제를 포함한다.
몇몇 실시예에서 폴리펩티드를 포함하는 약학적 조성물은 고친화도 독성 T세포 반응을 유도하는 것으로 알려진 리포펩티드 부착물(lipopeptide conjugate)의 형태를 제공한다 (Deres, 1989, Nature 342).
더 이상의 상세한 추가적인 약학적 조성물의 성분은 Remington's Pharmaceutical Sciences and US Pharmacopoeia, 1984, Mack Publishing Company, Easton, PA, USA.에서 찾을 수 있다.
용도에서, 위에 설명된(이하, 약물) 폴리펩티드, 핵산 분자, 펩티드 칵테일, 핵산 분자 칵테일 또는 약학적 조성물은 치료의 필요에 의해 환자에 투여된다. 다르게는, 약물은 암에 대해 방어적인 면역을 제공하기 위해서 암의 어떤 징후 전에 개인에서 투여된다.
약물이 폴리펩티드로 구성되어 있는 실시예에서, 폴리펩티드는 항원 제시에 항원 과정과 그리고 세포 표면에 주조직적합복합체 클래스 I 또는 클래스 II 분자와 복합체로 제시되어 세포내섭취된다. T세포의 표면에 T세포 수용체와 상호작용을 통해서 CD4+ 또는 CD8+ T세포 반응이 유발된다. 핵산 분자를 포함하는 약물의 실시예에서, 핵산은 또한 세포내섭취되고 그리고 나서 전사(핵산 분자는 DNA이다)되며, 암호화 된 폴리펩티드 내재적인 세포의 경로를 통해 합성되어진다. 다음으로, 암호화된 폴리펩티드는 처리되고 이전에 기술한 T세포 반응을 유발하기 위해 주조직적합 분자를 제시한다. 따라서 약물은 둘 중 CD4+ 또는 CD8+중에 하나를 유발하기 위해 백신으로 사용될 수 있다.
원리에서, 약물의 투여는 어떤 방법으로도 사용될 수 있지만 주사가 특히 바람직하다. 예를 들면 약물은 종양 환자에 직접적으로 주사될 수도 있다. 하지만, 만약 치료될 암이 환자의 코 또는 입이면 몇몇 실시예에서 약물은 분사 내지 흡입에 의한 투여될 수 있다.
약물의 적합한 용량은 50 부터 200㎍이지만 이 범위 밖의 용량은 가끔 필요되어진다(예. 1 부터 500㎍). 100 과 150㎍ 사이의 용량은 특히 바람직하다. 몇몇 실시예에서 약물은 매주 내지 매달 환자에게 투여된다. 특정 실시예에서, "공격적인" 치료 전력은 치료의 첫째주에 약물의 세 번 투여하고, 한 달 동안 매주 투여하고, 6개월 동안 매달 투여하고 뒤이어 매 6개월마다 단일 투여를 포함하는 것을 따른다.
원리에서, 약물은 텔로머라아제 유전자가 활성화된 어떤 유형의 암으로부터 고통받는 환자에게 허용할 수 있다. 이런 암은 유방암, 전립선암, 췌장암, 결장암, 폐암, 악성 흑색종, 백혈병, 림프종, 난소암, 자궁경부암 및 담관 암종에 제한되지 않는 것을 포함한다. 앞서 언급한, 텔로머라아제 효소는 다수의 암에 발현되어 있어서 본 발명의 약물 효능은 어느 특정 유형의 암에 제한을 두지 않는다.
유발되는 T 림프구 반응의 클래스에 따라서, 폴리펩티드의 다른 길이가 바람직하다는 것을 감사해야한다. 좀 더 특별히, CD8+ T세포 반응을 유발하기 위해서, 폴리펩티드는 길이가 전형적으로 8 내지 10개 사이의 아미노산 잔기의 폴리펩티드에만 결합할 것인 주조직적합복합체 클래스 I분자에 제시되어야 한다. 반면에, CD4+ T세포반응를 유발하기 위해서, 일반적으로 더 긴, 전형적으로 길이가 15 내지 24개 사이의 아미노산 잔기의 폴리펩티드가 주조직적합복합체 클래스 II분자에 제시되어야 한다. 서열번호: 1)의 폴리펩티드에서 본 발명의 폴리펩티드의 몇몇은 주조직적합복합체 클래스 I 또는 클래스 II분자 둘 중 하나에 정상적으로 수용할 수 있는 것 보다 더 길다. 이 길이의 펩티드는 예. 인간 유두종 바이러스(HPV) 및 자궁경부암 백신접종(Welters et al, 2008)에 대해 군 효과에 의한 좀 더 강력한 면역반응을 유발하는 것을 보여준다. 이론에 따라서 바라는 것이 없이, 이런 펩티드는, 환자에 투여 다음에, 세포에 의해 세포내 섭취가 되고, 단백질분해효소복합체에서 단백질 가수분해가 되며 주조직적합복합체 클래스 I 또는 II분자에 제시된다. 따라서 이런 폴리펩티드는 주조직적합복합체 클래스 I 내지/또는 주조직적합복합체 클래식 II 제한된 T세포 반응을 유발하게 된다. 더 긴 폴리펩티드는 더 짧은 폴리펩티드보다 더 많은 시간동안 환자에 잔존하여 남는 것을 고마워해야 하고 그러므로 이것은 면역반응을 유발하는 동안의 더 긴 시간이다. 이것은 상대적으로 낮은 주조직적합복합체 결합 친화도를 갖는 이런 폴리펩티드로 여겨지는 특히 중요한 것이다.
텔로머라아제 효소는 "자가 단백질"인 것에 감사해야한다. 즉, 효소는 인체내에서 자연적으로 발생하는 단백질이다. 그래서, 개인은 일반적으로 처리를 통해 텔로머라아제 효소의 폴리펩티드에 대한 면역학적인 관용의 어느 정도 발생하였지만 이런 폴리펩티드와 T세포 반응은 T세포 발생동안 개인의 흉선에서 파괴되어진다. 따라서 본 발명의 몇몇 실시예에서 상대적으로 낮은 주조직적합복합체 결합 친화도를 가진 본 발명의 폴리펩티드를 원하는 것이다. 이것은 왜냐하면 더 낮은 주조직적합복합체 친화도의 폴리펩티드는 더 낮은 비율에서 성숙한 T세포에 노출될 것이고 그래서 개인의 T세포의 모든 것이 폴리펩티드와 반응해 개인의 T세포 다양성으로부터 삭제될 것이 덜 일어난다. 그러므로 몇몇 실시예에서 상대적으로 낮은 주조직적합복합체 결합 친화도를 가진 폴리펩티드는 좀 더 쉽게 면역학적 관용을 극복할 수 있게 된다.
발명의 몇몇 실시예에서, 발명의 폴리펩티드 중에 하나의 투여는 "에피토프 퍼짐"을 초래하지만 면역반응은 텔로머라아제 단백질에서 투여된 폴리펩티드에 인접한 텔로머라아제 단백질의 다른 폴리펩티드에 대해 유발하게 된다.
실시예
실시예 1
hTERT 에피토프는 hTERT로 감염시킨 수지상세포가 특성화된 백신접종 후 환자의 T세포에 의해 인식되어진다. 백신접종은 CD4+ Th세포와 CD8+ T세포 둘 다를 포함하는 다양하고 넓은 면역 반응을 초래한다. 이런 반응은 환자에서 관찰되는 종양 감소와 장기간 생존의 원인으로 믿어진다.
재료 및 방법
환자
재발성 췌장관 선종암의 62세 나이든 여성에 동정적 사용 기초에 hTERT mRNA를 채워진 수지상세포로 백신접종하였다. 치료는 노르웨이 의학기관 및 의학 연구 윤리 지역 위원회에 승인을 받았다. 헬싱키의 세계의학협회 선언을 준수하여 실행하였다. 서면 정보 동의는 환자로부터 받았다.
mRNA가 감염된 수지상세포(DCs)의 생산
수지상세포는 이전에 기술로 만들었다 (Kyte et al, 2006 and Mu LJ et al 2003). 간단하게, 백혈구분리반출법 생성물로부터 얻은 단핵구를 과립대식세포집락자극인자(GM-CSF) 및 인터루킨-4 (IL-4)와 함께 5일동안 배양한다. 결과로 초래된 미성숙 수지상세포는 직각 파장 전기천공법(Kyte et al, 2006, Saeboe-Larssen S et al 2002)에 의해 hTERT-mRNA로 감염시킨 다음 사이토카인(cytokine)이 용이하게 한 성숙 (인터루킨-1베타 ((IL-1β)), 인터루킨-6 (IL-6), 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및 프로스타글란딘 E2 (PGE2))와 함께 2일동안 배양한다. 적절한 대조 수지상세포를 얻기 위해서 수지상세포의 분획은 거짓 감염(mock-transfected) 즉 mRNA 없이 전기천공한 것이다. 수지상세포 표현형은 앞서 기술한(Kyte et al, 2006) 유동세포분석법로 평가된다. 수지상세포는 인간 백혈구 항원 클래스 II, CD86 및 CD83을 발현하는 성숙한 수지상 표현형을 가진다, 하지만 CD1은 아니다. 수지상세포 생존율은 트리판 블루 염색에 의해 평가된 85% 이상이다. 2번째 및 3번째 백신 배치(batch)는 빠른 수지상세포이다(Alldawi et al 2005, Tanaka et al 2006, Ho et al 2006). 단핵구는 과립대식세포집락자극인자 및 인터루킨-4와 함께 2일동안 배양하고 전기천공 전에 전통적인 수지상세포를 위해 같은 방법으로 1일동안 성숙시킨다. 그런 다음 수지상세포을 얼리기 전에 철야(overnight)로 둔다.
백신
백신은 hTERT mRNA로 채워진 5x 106의 자가 단핵구로 유래한 수지상 세포로 구성된다. 환자는 매달 추가접종에 이어 4주간 접종을 받게 된다.
임상 관찰
이상반응은 이전에 보고된 (Kyte et al, 2006 Gene therapy) NCI-공통 독성 특징에 따라 녹음되고 등급화된다. 등급 lll-IV 독성과 연관된 치료 없이 소수의 부작용만 관찰된다. 객관적인 종양 반응은 임상 시험과 백신 접종 시작전 컴퓨터 단층 정밀 촬영 및 백신접종 매3개월 동안에 의해 평가된다. 종양 반응은 고형암에서 반응 평가(RECIST)에 의해 분류되어진다(Therasse P et al, 2000).
지연형 과민증(delayed type hypersensitivity; DTH)
면역 관찰
말초혈액단핵세포를 5주 후 및 12주 후의 4번의 일반적인 백신접종 전에 얻는다. 또한 말초혈액단핵세포를 각각 매달 추가 백신 접종 전에 얻는다. 말초혈액단핵세포는 이전(Kyte et al, 2005)에 기술한 방법으로 동정하고 냉동한다. 해동된 말초혈액세포는 전체 수지상세포(tDC)(가장 수지상세포로가 아닌)로 생체 외(in vitro)에서 한 번 자극하고 배양하고 나서 이전(Kyte 등, 2006)에 기술한 방법으로 T세포분열측정(3H 티민)으로 시험한다. T세포는 세 번 반복 시험한다. 방사선 처리한 전체 수지상세포와 가장으로 감염된 수지상세포 대조군(가장 수지상세포)으로 사용되거나 항원제시세포(APC)로서 hTERT를 포함하는 또는 포함하지 않는 말초혈액단핵세포로 사용된다. T세포의 음성 대조군만 포함된다.
다양한 시점으로부터 말초혈액단핵세포를 겹치는 hTERT 15길이 펩티드 라이브러브 또는 30길이 hTERT 펩티드, 프롤문(prolmmune)으로터 모든 것과 (Bernhardt et al 2006)에 기술된 항원제시세포로서 세포분열 측정 시험 위에서 사용한 방사선 처리한 말초혈액단핵세포를 자극한다.
유동세포계수법(Flow cytometry)
오량체 염색은 새로운 또는 냉동된 환자 말초혈액단핵구에서 시행하였다. 피코에리크린(Phycoerythrin)이 결합된 오량체는 프롤문에 의해 제조되어졌고 맥락수막염바이러스(CMV) 펩티드 NLVPMTATV이 특이한 HLA-A2 양성 T세포주에 대한 비특이적 염색을 시험하였다. 제조사의 추천 실시 농도가 사용되었다. 음성 대조군으로서 HIV 펩티드 SLYNTVATL-A*0201의 오량체가 사용되었다. 상온에서 10분동안 오량체로 세포를 염색하고, 0.1% 인간 혈청 알부민(HSA)과 0.1% 아지드화 나트륨이 포함된 인산 완충 식염수(PBS)으로 구성된 염색 완충액으로 씻는다. 그리고 나서 세포를 항-CD4- 플루오레세인이소티오시안산염, 항-CD19- 플루오레세인이소티오시안산염 (eBioscience), 항-CD8-PerCP와 항-CD3-퍼시픽 블루(PB) (eBioscience)를 상온에서 15분 동안 염색하고 염색 완충액으로 한 번 씻고 전에 수취한 것을 같은 완충액으로 재부유한다. 세포내 염색을 위해, 자극된 T세포의12일 펩티드를 철야로10 ug/ml 브레페딘 A(Brefeldin A)가 있고 5:1 표적 비율의 T세포로 채워진 자가 엡스테인-바 바이러스가 변형된 B 림프아구성 세포주(EBV-LCL)로 1/1000으로 희석한 BD 골지스톱(BD Golgistop) (BD Biosciences)으로 자극한다. 표적 세포로 채워진 비펩티드와 T세포 단독은 음성 대조군으로 사용되어진다. 그런 다음 세포를 CD3 (eBioscience), CD4, CD8, IFN- (eBioscience), 인터루킨-2 그리고 종양괴사인자-알파는 제조사의 지시에 따라 BD Cytofix/Cytoperm 키트를 사용했다. 마지막으로, 세포는 1% 파라포름알데히드가 포함된 염색 완충액으로 재부유했다. 세포내 사이토카인을 위한 모든 항체와 모든 시약은 언급한 것을 제외하고 BD Pharmingen으로부터 구매하였다. 250,000 림프구는 BD LSR II 유동세포계수법을 사용하여 샘플당 얻었고 자료는 FlowJo 소프트웨어(Treestar Inc., Ashland, OR, USA)를 사용하여 분석하였다.
결과
환자는 젬시타빈 치료에 대한 질병 안정을 경험하였지만, 5개월 치료후에 부작용 때문에 중단되었다. 그리고 나서 그녀는 대안법으로서 수지상세포 백신접종을 제안받았다. 백신접종 18개월 후 그녀는 백신접종 30개월(44개월 진단후)을 유지한 후 완치하였다. 환자는 재진단을 받았고 관 선종암의 진단을 확인한 비독립적인 병리학자에 의해 진찰되었다.
수술할 수 없는 췌장암 환자의 중간값 생존은 이 경우에 있어서 더 초과한 8-10개월이다. 첫번째 백신 배치는 5 x 106 의 전통적인 수지상세포 (Kyte et al 2006)로 구성되어 있고 환자는 15개의 백신이 투여되었다. 백신과 안정한 질병에 대한 면역반응의 증명 때문에 새로운 백신 배치가 만들어졌고 배치 2와 3일 빠른 수지상 세포이고 10 및 17 백신, 각각, hTERT mRNA로 채워진5 x 106 의 수지상세포가 투여되었다.
수지상세포 백신에 분열하는 T세포는 생체 외에서 백신접종 3개월 후에 측정될 수 있고 6개월부터 안정화된다. hTERT로 감염된 수지상세포에 면역반응 존재의 기록을 가지는 것은, hTERT 에피토프가 면역반응을 유도하는데 책임이 있다는 것을 연구하는데 희망이 있다.
분열하는 T세포반응은 겹치는 펩티드 라이브러리 및 30길이 hTERT펩티드로부터 15길이 hTERT의 6에서 탐지된다. hTERT-오량체 양성 CD8+ T세포의 존재는 비자극된 말초혈액단핵세포에서 퍼센트 범위 0.15%에서 1.25%까지의 전과 후 백신접종 둘 다에서 탐지된다. CD8+ T세포의 1.25% 집단은 새로운 말초혈액단핵세포 24개월 백신접종 후(도 2A)에서 오량체-양성이 되고 생체외 펩티드 자극(자료는 보여지지 않음) 후 약 3% 증가되는 것이 보여진다.
720GLL-오량체에서 CTL 에피토프와 마찬가지 적어도 2개의 T 도움 에피토드를 포함하는 30길이 hTERT 펩티드롤 생체 외 자극의 한 회 후, 우리는 같은 펩티드로 채워진 자가 EBV가 변형된 B세포에 반응하는 다기능의 CD4+ T세포, 분비하는 인터페론-감마, 인터루킨-4 및 종양괴사인자-알파의 소집단을 탐지했다. 펩티드가 채워진 표적 세포의 자극 후 CD8+ T세포집단과 비펩티드가 채워진 표적의 그러한 자극의 비교는 차이점이 없다. 인터루킨-2의 높은 배경 수준은 변형된 B세포주가 hTERT를 발현할 수 있어서 주어진 어떤 자극 때문에 일것으로 보여진다. 불행히도, 각 실험의 추가적 기능 측정은 제한된 양 때문에 실시할 수 없었다.
논의
이 실시예에서, 화학요법제의 치료후에 드문 질병 과정과 hTERT mRNA로 감염된 자가 수지상세포의 백신접종한 췌장암 환자를 보고했다.
여기 기술된 환자는 근본적인 수술 후 재발되는 췌장 선종암으로 4년 이상 생존하고 있다. 원래의 진단은 정확했고 첫번째 종양을 확인하기 위해서 비독립적인 병리학자에 의해 재진단되었다.
2006년 1월에 근본적인 수술 후 환자는 컴퓨터 단층에 의한 측정으로 간 문, 체간, 장골근 및 복막후강에 확대된 림프절이 2006년 12월에 재발하였다.
환자는 화학요법제에 잘 반응하였고 컴퓨터 단층 촬영은 종양 수축을 보여줬다. 하지만, 화학요법제 5개월 후 환자는 심각한 부작용이 발생하여 치료가 중간되었다.
이 임상 준비에서, 환자는 화학요법제의 유익한 효과를 통합하기 위해서 동정적인 사용 근거의 hTERT mRNA로 채워진 자가 수지상세포 치료를 제안받았다.
흥미롭게, 화학요법제가 끝난 후 진행성 질병이 발생하기보다, 장기간 질병 안정화와 잠정적으로 완치가 되었다. 6개월 떨어져 2번 연속적인 양전자 방사 단층 촬영은, 췌장성 및 전이성 병소 부위에 종양 조직이 대사적으로 잠잠한 것으로 보여졌다. 이러한 흥미로운 발견은 면역요법의 전략 이용은 이 환자에 있어서 임상적으로 적절한 면역반응을 유도하는 것을 나타낸다. 그러므로 환자에서 hTERT에 대한 깊이 있는 면역반응의 설명 및 연구가 중요하다. 게다가, 백신 접종의 전체 길이 hTERT mRNA를 사용한 연구로부터 hTERT에 상세한 면역반응으로 여겨지는 정보는 완전히 부족하기 때문에, hTERT 백신의 다음 세대의 발전을 위해 임상적으로 적절한 hTERT 에피토프를 확인하는 것이 중요하다.
새로운 CTL 에피토피와 오량체가 결합한 CD8+ T세포의 높은 빈도가 발견되었다. 이러한 두 에피토프는 HLA-A*0201가 제한되었고 이전에 기술되어 있지 않았다. 흥미롭게, 9길이 에피토프(720GLL, 서열번호: 3)은 Schroers 등 2002에 의해 기술된 R672(서열번호: 56)로서 같은 길이의 15길이 펩티드 (720, PGLLGASVLGLDDIH - 서열번호: 55) 내장되어 있지만, hTERT의 C-말단 앞으로 1개의 아미노산이 옮겨졌다. 그러므로, 양쪽 15길이 펩티트 안에 같은 아미노산 잔기는 T세포 반응에 책임이 있는 것이 가능하다. 중요하게, 같은 15길이 펩티드(720)는 또한 이 환자에서 CD4+와 CD8+ T세포 반응 둘 다가 유발될 수 있는 hTERT의 이 펩티드 단편을 나타낸 환자로부터 보고된 여기 분열 측정으로부터의 T세포에 의해 인식되어진다. 더욱이, 5개의 다른 15길이 펩티드는 이 환자로부터 T세포에 의해 인식되어 진다. 이런 펩티드 중의 3개는 이전에 보고되지 않았다. 종합하면, 이러한 결과는 이 백신이 이 환자에서 적어도 10개의 다른 hTERT 에피토프에 T세포 반응을 유발하는 것을 설명한다. 펩티드의 단지 제한된 수 보다 더 클 수도 있는 에피토프의 수는 약간 많은 오량체가 HLA-A*0201를 제한해 펩티드를 제한하는것처럼 전체 서열을 포함하지 않는 겹치는 펩티드 라이브러리로부터 사용된다.
이것은 hTERT 펩티드에 대한 널리 퍼진 관용이 없다는 것과 hTERT mRNA로 감염된 수지상세포를 사용하는 백신접종 전략은 매우 강력하다는 것을 나타낸다.
위 결과는 또한 이 환자로부터의 T세포는 15길이의 두 개 및 하나의 9 길이 펩티드를 포함하는30 길이 hTERT 펩티드를 인식할 수 있고, 자연적으로 3개의 Th1와 연관된 사이토카인을 생산하는 것을 설명한다. 다기능성의 이런 종류는 이전에 감염에 대해 더 나은 방어를 주는 것이라고 설명되었다. Darrah 등, 2007은 백신접종된 쥐에서 레슈마니아 다수 감염 (Leishmania major infection)에 대한 방어 정도를 자연적으로 발생하는 인터페론 감마(인터페론-, 인터루킨-2 및 종양괴사인자-알파)에 CD4+ T 세포의 빈도에 의해 예측되는 것을 보여준다.
이 환자의 아주 특이한 임상적 과정은 백신접종 및 결과를 낳은 면역반응은 종양 및 전이에 영향을 주는 것을 나타낸다. 이것은 hTERT mRNA 수지상세포 백신에 의해 유발된 hTERT에 대한 넓고 합성의 면역반응을 설명하는데 크게 믿을 수 있다. 남은 종양세포에 면역반응의 결과로서 hTERT특이적 CTL, T도움 세포 사이토카인 생산(인터페론-감마, 종양괴사인자-알파)은 암세포 및 종양연관 기질 및 종양 신생혈관 및 선종암에서 다른 종양 항원 제시에 대해 진행중인 자연발생적인 면역반응의 확대에 영향을 미친다.
실시예 2
한 4단계 폐암 환자를 새로운 I/II 임상 시험의 시작 전에 안정성, 관용성 및 면역학적 반응을 조사하기 위해서 hTERT가 암호화된 mRNA로 감염된 자가 단핵구유래 수지상세포로 백신접종하였다. 환자는 첫번째 백신접종을 4주간 받고난 후 5 x 106 수지상세포를 피내로 주사하여 추가접종하였다. 말초 혈액 단핵세포(PBMC)는 4번의 정기적인 백신접종 전, 5주, 12주후 및 그 후 매달 얻었다. 해동된 말초 혈액 단핵세포는 감염된 수지상세포를 생체 외에서 자극되었다. T세포 분열 측정은 방사선 처리한 감염된 수지상세포 및 가장 감염된 수지상세포 대조군으로서 시행하였다. 추가적으로, hTERT특이적 CD8+ T세포는 오량체 염색에 의해 관찰되었다. 치료는 소수의 부작용으로 잘 관용되었고 환자는 예상한 것(12주)과 비교해 더 연장된 생존(72주)하였다. 환자는 백신접종후 생체 외에서 mRNA로 채워진 수지상세포에 반응하는 특이적 T세포분열을 보였다. hTERT특이적 CD8+ T세포의 안정한 집단은 백신접종 후 샘플에서 오량체에 의해 탐지되었다. 다른 시점에서 백신접종 후 샘플은 24개의 겹치는 hTERT 펩티드의 판(panel)에 대해 더 이상의 실험을 하였고 다양한 펩티드에 대한 T세포반응을 탐지하였다(도12). 이러한 에프토프의 T세포반응은 백신접종을 하지 않은 암 환자와 GV1001 텔로머라아제 펩티드(서열번호: 10)으로 전에 백신접종한 암 환자 모두에서 확인하였는데 면역원성 및 HLA난잡의 높은 정도를 나타낸다. 예시1 및 2에서 이러한 임상적 경험은 hTERT-mRNA로 감염된 수지상세포의 백신접종은 안전하고 CD4+ 및 CD8+ T세포 모두에서 다양한 텔로머라아제 T세포 에피토프에 강력한 면역반응을 유발할 수 있음을 보여준다.
실시예 3
T세포 반응을 유발하기 위해 적합한 텔로머라아제 효소의 펩티드는 확인되었고 많은 백신접종한 환자(GV1001 펩티드 또는 hTERT를 암호화라는 mRNA로 감염된 수지상세포의 백신접종)와 유용한 항암 면역반응을 유발할 수 있는 펩티드를 확인하기 위해서 백신접종을 하지 않은 암 환자로부터 자료를 조사하여 순위가 매겨졌다. 선택된 환자를 요약하면, 그들의 백신접종 상태 및 임상적 반응은 도 9에 제공되었다. GV1001(서열번호: 10)로 백신접종한 한 명의 환자에서 펩티드 660-689 (30길이) (서열번호: 1)에 반응하는 T세포는 특정 시점(도 3을 보라)에서 그 자체의 백신 펩티드보다 훨씬 강력하지만, 또한 다른 환자에서 이 펩티드는 강력한 면역 반응을 보여준다. 확인된 펩티드는 표 1에서 시작되고, 이런 펩티드에 대한 T세포 반응은 반응성을 위한 시험에서 6명의 정상 혈액 기증자에서 발견되지 않았다.
서열번호 펩티드 이름 펩티드 서열 이전 펩티드 이름 펩티드에서 아미노산 번호
1 660-689 ALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRA 791-20 30
2 663-677 SVLNYERARRGLLG 719 15
3 674-683 GLLGASVLGL 720GLL 10
4 615-624 ALLTSRLRFI 615ALL 10
5 613-621 RPALLTSRL 613RPA 9
6 653-661 RLTSTVKAL 728RLT 9
7 691-705 RTFVLRVRAQDPPPE 725 15
8 653-667 RLTSRVKALFSVLNY 718 15
9 651-665 AERLTSRVKALFSVL 728 15
T 세포 복제물 특이적 15- 또는 30- 아미노산의 펩티드의 모두 또한 환자로부터 얻었으며 표 1에 보여진다. 이런 복제물은 자연적으로 처리된 펩티드(자료는 보여지지 않음) 및 10 ng/ml (도 4를 보라) 이하의 매우 낮은 펩티드 농도에 반응은 그것의 표적에 대해 높은 친화도가 있는 것을 인식한다. 이것은 펩티드 농도가 더 낮은 생체 내에서 강한 면역 반응을 유발할 수 있기 위해서 중요하다.
서열번호: 1의 30길이 폴리펩티드는 거의 모든 암 환자에서 시험된 반응성을 보여주고 그러므로 아주 면역원성이 있다는 것처럼 보인다. 이런 펩티드는 GV1001 백신(서열번호: 10)과 같은 CD4+ T 도움 세포에 의해 인식될 수 있는 모티프(motif)와 또한 CD8+ 독성 T림프구(CTL)에 의해 인식될 수 있는 모티프 모두를 포함한다. 이러한 반응 유형 모두는 펩티드로 자극된 환자로부터 생체 외의 T 림프구에서 탐지되었다.
형광색소가 표지된 시약(오량체)을 사용하여 위에 언급된 9- 또는10- 길이 펩티드에 특이적인 CD8+ T림프구에 결합할 수 있으며, 이런 세포에 있어서 주로 GV1001(서열번호: 10)로 백신접종된 많은 암 환자에서 탐지되었다. 이런 9- 또는 10- 길이 펩티드는 HLA-2 분자에 제시되고 약 백인 인구의 50% 및 같은 인구의 20%에 존재하는 HLA-B7 분자에 제시될 때 인식되어지는데, 이는 그것을 백인 대다수를 포함하는 것을 의미한다.
아울러, 표 1에 실린 15- 내지 30- 길이 펩티드는 거의 모든 환자에서 시험된 반응성을 보여주는데, 이는 그것이 제시한 HLA 클래스 II 대립유전자에 대하여 잡다한 것 및 그것은 HLA검진 어떤 필요없이 거의 모든 집단에서 적용가능하다는 것을 의미한다(표 2를 보라).
HLA 클래스 II 대립유전자 백인에서 빈도 특이한 복제물 펩티드 특이성 환자 암
DR*01 22.6% T세포주 663-677 2 악성 흑색종
DR*04 33.9% 3 653-667, 663-677 3 악성 흑색종
DR*07 30.1% 3 660-689의 부분 1 결장암, Schroers 등, 2003
DR*08 4.3% >85 663-677 2 악성 흑색종 및 폐암
DR*14 2.9% 6 복제물 660-689 2 결장암, 폐암
GV1001(서열번호: 10)으로 백신접종한 환자에서 반응성을 포함하는 것에 더하여, 이런 펩티드는 또한 한 폐암으로부터의 세포에서 T세포 반응 및 hTERT mRNA가 감염된 수지상세포로 백신접종한 한 췌장암 환자를 포함한다. 사용된 mRNA는 전체 길이의 hTERT 단백질의 번역으로 주어지지 않지만, 그것의 대부분을 포함하고 표 1에 실린 펩티드는 이런 환자에서 가장 강력한 반응의 어떤 것을 유도한다.
실시예 4
hTERT 펩티드 라이브러리(표 1로부터 폴리펩티드를 포함하는)에 반응하는 T세포는 실시예 1 및 2에서 보고된 환자에 덧붙여 5명의 환자로부터의 T세포로 결정된다. 실시예 1 또는 Bernhardt 등 2006에서 전에 기술된 같은 방법이다. 간단히, 백신 접종 동안 다양한 시점으로부터의 말초혈액단핵세포는 분열 측정에서 특이한 T세포 반응 시험 전의 겹치는 hTERT 펩티드로 자극한다. 결과는 도 7 내지 13에서 보여준다. 펩티드의 완전한 목록은 표 3에서 보여준다.
Figure pat00001
도 7 내지 13에서 막대 그래프는 7명(췌장암 환자는 실시예 1에서 보고된 하나이다)의 환자의 hTERT 겹치는 펩티드 라이브러리에 대한 반응을 보여준다.
펩티드 613-627은 GV1001(서열번호: 10)과 매우 유사한 서열을 가지고 GV1001을 인식하는 같은 세포에 의해 인식되는 것으로 추정되지만, 펩티드 613-627은 백신 펩티드와 상동하지 않다.
마지막 두 환자는 시험 후에 합성된 이 펩티트로서 30길이 660-689 (서열번호: 1)에 대한 반응의 시험을 하지 않았다. 서열번호: 1의 펩티드는 GV1001로 백신접종한 폐암 환자에서 매우 강한 반응을 주었다. 이 펩티드의 배양으로부터 유래한 T세포 복제물의 75%는 높은 빈도에 환자에서 존재하는 복제물을 나타내는데 특이적이다. 이것은 도 6의 막대 그래프에서 보여진 hTERT특이적 CD8+ 세포의 같은 폐암 환자이다.
그들의 특별한 임상 과정 때문에 선택된 시험한 환자(보여진 백신접종을 하지 않은 환자 제외) 때문에, 표 1에 실린 펩티드에 대해 가장 강한 반응이 탐지되는 것은 이런 펩티드의 임상적으로 적절한 에피토프를 나타낸다.
실시예 5
서열번호: 1(30길이 660-689)의 폴리펩티드 서열은 다른 HLA 클래스 I 대립유전자(추측은 주조직적합복합체 리간드(ligand) 및 펩티드 모티프의 SYFPEITHI 데이터베이스를 사용하여 시행하였다.)와 결합할 것으로 추측되는 면역성 단편을 위해 분석되었다. 결과는 표 4에 보여진다.
Figure pat00002
실시예 6
실시예 4에서 연구된 환자의 비교는 수행되었다. 간단히, 7명의 환자는 임상적인 응답에 따라서 암 진단 및 hTERT 백신으로 백신접종으로서 확인되었다. 이런 환자는 장기적인 생존 및 임상적 반응의 결합을 기반으로 확인되었다. 임상적 반응은 안정한 질병(SD), 부분적 반응(PR) 또는 완전한 반응(CR) 중에 하나일 수 있다. 백신접종을 한 흑색종 환자는 임상 시험에서 단계 IV에 포함된 시간으로 진단받았지만, 뇌 전이는 없었다. 폐암 환자 P5는 수술이 불가능한 폐암 단계 IV로 진단받았고 결장암 환자 P1는 수술이 불가능한 결장암 말기로 진단받았다. 폐암 환자 P6은 12주 생명 연장의 단계 IV 폐암이었다. 췌장암 환자 P1은 재발되었고, 수술이 불가능한 췌장암이었고 8-10개월의 생명 연장이었다. 4명의 환자(흑색종 P7 -P8, 폐암 P5 및 결장암 P1로 지정된)는 각각 펩티드 GV 1001(서열번호: 10)로 백신접종하였다. 5번째 환자(폐암 환자 P6로 지정된) 및 여섯번째 환자(췌장암 1)는 hTERT를 암호화하는 mRNA로 감염된 수지상세포로 백신접종하였다. 흑색종 환자 P9인 7번째 환자는 연구하는 시간에 백신접종하였고 대신에 암 발생후에 자연발생적인 반응이 일어났다(8번째 및 마지막 환자 또한 임상적 응답자가 확인되었지만 환자로부터의 샘플은 연구를 위해서 이용가능하지 않았다).
펩티드의 연속물에 각 환자의 분열하는 T세포반응은 실시예 1에 설명되어져 있다. 결과는 표 5에 표로 만들어졌고 표 6(펩티드 726 및 GV1001의 결과는 비교로만 보여진다)에 참고된 펩티드 명칭은 도 14에서 도표로 보여진다.
환자 hTERT 펩티드
718 725 726 728 719-20 GV1001
흑색종 P7 4.8 4.9 5.8 3.2 44.5 76.5
흑색종 P8 6.3 2.8 0.9 1 5.7 13.2
흑색종 P9 4.2 5.7 3.7 5.9 6.9 1.7
폐암 P5 0.8 1.1 31 1.2 44.5 20.1
폐암 P6 2.1 0.8 0.6 0.7 2.5 7.1
결장암 P1 2.6 20.6 4 13.9 27.2 105.1
췌장암 P1 1.3 2.5 2.5 1 17.1 2.2
이전 펩티드 이름 서열번호
719-720 1
725 7
718 8
728 9
GV1001 10
GV1001(즉 그것은 SI>2 가진다)에 반응하는 모든 환자가 관찰된다. 수지상세포로 백신접종한 환자(폐암 P7 및 췌장암 P1)에서 자가-MLC에 의해 유발된 높은 배경 때문에 SI값이 다른 환자에서 발견되는 그것과 비교했을 때 낮다.
실시예 7
임상적으로 비응답자후에 폐암 진단 및 GV1001(서열번호: 10) 펩티드 백신접종을 한 4명의 환자를 연구하였다. 이 환자는 GV1001로 백신접종한 모두 4기 폐암 환자였다. 이 환자는 GV 1001에 대한 면역반응 가진 환자 가운데 무작위로 선택되었지만 여전히 진행성 질병 및 백신에 대해서 면역반응을 가지는 다른 환자와 비교했을 때 단기간 생존을 겪고 있다. 펩티드의 연속물에 각 환자의 분열성 T세포 반응은 어느 한 시점에 실시예 1에서와 같은 방식으로 결정되어진다. 펩티드 GV1001에 연구 기간 동안 각 환자의 최고 반응은 GV1001 백신접종에 면역학적으로 반응하는 각 환자를 확인하는 것으로 또한 보여진다.
결과는 표 7에 표로 만들어졌고 표 6에 참고된 펩티드 명칭은 도 15에서 도표로 보여진다.
환자 hTERT 펩티드
718 725 726 728 719-20 GV1001 GV1001 최고반응
폐암 P1 1.2 1.3 1.2 0.8 1 0.9 60.95
폐암 P2 0.9 1 0.8 0.6 1.1 122.8 122.8
폐암 P3 1.1 1.2 1.1 0.8 0.9 1.4 161.6
폐암 P4 1.1 0.4 1.1 0.7 1.5 1.2 13.3
환자 4명 모두는 서열번호: 1, 7, 8 및 9의 펩티드에 매우 낮거나 또는 반응이 없는 것으로 보여진다.
실시예 8
임상적으로 비응답자 후에 흑색종 암 진단 및 GV1001(서열번호: 10) 펩티드 백신접종을 한 6명의 환자를 연구하였다. 이 환자는 GV1001로 백신접종한 모두 4기 흑색종 환자였고 장기간 생존자(실시예 6을 보라)인 흑색종 환자 P7 및 P8로 같은 GV1001 백신접종에 포함되었다. 이 환자는 GV 1001에 대한 면역반응 가진 환자 가운데 무작위로 선택되었지만 여전히 단기간 생존만을 겪고 있다. 환자중 5명이 또한 진행성 질병을 겪고 흑색종 P3로 지칭된 한 환자만 질병의 몇몇 안정화를 겪고 있지만 여전히 짧은 생존이다. 펩티드의 연속물에 각 환자의 분열성 T세포 반응은 어느 한 시점에 예시 1에서와 같은 방식으로 결정되어진다. 펩티드 GV1001에 연구 기간 동안 각 환자의 최고 반응은 GV1001 백신접종에 면역학적으로 반응하는 각 환자를 확인하는 것으로 또한 보여진다.
결과는 표 8에 표로 만들어졌고 표 6에 참고된 펩티드 명칭은 도 16에서 도표로 보여진다.
환자 hTERT 펩티드
718 725 726 728 719-20 GV1001 GV1001 최고반응
흑색종 P1 0.9 0.9 0.9 0.8 1.6 1.4 26.0
흑색종 P2 0.8 1 1 0.6 5.3 0.9 38.7
흑색종 P3 0.6 0.7 0.5 0.5 0.3 1.8 3.7
흑색종 P4 1.1 1 1.2 0.8 1 1.2 10.7
흑색종 P5 7.1 1.2 1.9 0.9 1.9 25.2 35.4
흑색종 P6 0.8 4.8 n.t. 1.3 1.8 21.4 122.0
환자 6명 모두는 서열번호: 1, 7, 8 및 9의 펩티드에 매우 낮거나 또는 반응이 없는 것으로 보여진다.
실시예 1 내지 8의 결론
환자의 요약은 실시예 1 내지 8에서 연구된 것으로 표 9에 제공된다. 모든 환자는 GV1001 펩티드에 면역학적으로 반응한다. 환자는 안정한 질병(SD), 종양 감소(PR 또는 CR) 및 예상치 못하게 긴 생존시간을 포함하는 임상적 반응에 기초해 임상적 응답자 또는 임상적 비응답자 둘 중에 하나로 분류되어진다. 임상적 응답자 및 임상적 비응답자는 동일한 또는 상동한 백신접종 시험으로부터 선택되었다.
환자 암 백신 시험한 시점에 백신 특이적 T세포반응 생존(개월) 임상적 반응 임상적 반응자
폐암 P4 폐암 GV1001 예 10 PD 아니오
폐암 P3 폐암 GV1001 예 20 PD 아니오
폐암 P1 폐암 GV1001 예 14 PD 아니오
폐암 P2 폐암 GV1001 예 6 PD 아니오
흑색종 P4 흑색종 GV1001 예 8 PD 아니오
흑색종 P6 흑색종 GV1001 예 8 PD 아니오
흑색종 P5 흑색종 GV1001 예 12 PD 아니오
흑색종 P1 흑색종 GV1001 예 10 PD 아니오
흑색종 P3 흑색종 GV1001 예 10 SD 아니오
흑색종 P2 흑색종 GV1001 예 9 PD 아니오
흑색종 P7 흑색종 GV1001 예 65+ 생존한, PR 예
흑색종 P8 흑색종 GV1001 예 21 증가한 TTP, PR 예
흑색종 P9 흑색종 자연적인 반응, 백신접종을 하지 않은 예 30+ 생존한, SD 예
폐암 P5 폐암 GV1001 예 106+ 생존한, CR 예
폐암 P6 폐암 수지상 세포/ hTERT mRNA 예 16 PR 예
결장암 P1 결장암 GV1001 예 80+ 생존한, CR 예
췌장암 P1 췌장암 수지상 세포/ hTERT mRNA 예 43+ 생존한, CR 예
+ 환자가 아직 생존하고 있음을 나타낸다.PD= 진행성 질병
SD= 안정한 질병
PR= 부분적인 반응
CR= 완전한 반응
TTP= 진행할 시간
여기에 제시된 자료는 개인에게 서열번호: 1 내지 9의 펩티드 중 어느 것의 투여는 적어도 몇몇 개인에서 펩티드 투여에서 T세포 반응을 유발할 것이라는 것을 강하게 나타낸다. 다른 hTERT 펩티드 백신 또는 감염된 수지상세포를 투여한 환자에 서열번호 1 내지 9 펩티드의 T세포 반응이 있는 것은 서열번호: 1 내지 9의 펩티드가 결합할 수 있고 환자의 주조직적합복합체 분자에 의해서 제시될 수 있으며 환자는 제시될 때 펩티드가 결합할 수 있는 그것의 반복되는 것 안에서 T세포를 가진다. 그러므로 개인에게 서열번호: 1 내지 9의 펩티드가 투여되면, 펩티드에 T세포 반응이 예상될 수 있다.
게다가, 실시예 6 내지 8에서 제공된 자료는 서열번호: 1, 7, 8, 내지 9의 hTERT 펩티드에 대한 T세포 반응은 여기서 암의 다른 형태에 환자에서 호의적인 임상적 반응과 연관되어 있다는 것을 설명한다. hTERT 백신에 의한 같은 방법으로 치료 및 이 백신에 반응하는 많은 단기간 생존자에서 서열번호: 1, 7, 8 및 9의 펩티드에 반응은 단지 산발적으로 관찰된다. 이런 단기간 생존자에서 GV1001 펩티드에 반응은 강하다라는 것이 또한 중요하다. 우리는 이런 의미의 결과를 단일 펩티드 (즉 GV1001) 단독에 반응은 임상적 반응/장기간 생존을 제공하는데 충분하지 않다라는 것을 설명한다, 왜냐하면 이 펩티드에 면역반응을 가지는 다수의 환자 생존이 짧기 때문이다.
이것은 환자 생존 기간을 가지는 면역반응을 설명하는 환자에 hTERT 펩티드 수와 비교한 표 17에 보여진 산포도 분석에 의해 확인된다. 표 17에서 보다시피, 연장된 생존 기간과 hTERT 펩티드의 많은 수에 면역반응 사이에 명확한 관련성이 있다.
아울러, 표 18에서 보여진 분석은 2 또는 그 이상 GV1001을 더한 hTERT 펩티드에 대한 이런 환자 반응은 생존기간이 증가하는데 0 또는 1 GV1001을 더한 hTERT 펩티드에 면역 반응을 보이는 이런 환자와 비교했을 때 통계학적으로 유의하다.
게다가, 여기에서 밝힌 자료는 유익한 면역반응에서 서열번호: 1, 7, 8 및 9의 hTERT 펩티드의 중요한 역할을 암시하는 강한 증거를 제공한다. 그러므로, 이런 새로운 펩티드의 능동면역은 더 많은 환자에서 임상적으로 적절한 면역 반응을 유발해야 하며, 따라서 GV1001 펩티드 단독의 백신접종에 의해 달성될 수 있는 것보다 더 높은 비율에서 장기간 생존을 유발한다.
우리는 서열번호: 1, 7, 8 및 9의 펩티드에 대한 반응이 환자에서 임상적으로 잘 반응하지 않은 것과 반대로 임상적 반응자에서 상관없는 펩티드로 백신접종한 후 자연적으로 일어나는 것을 설명한다. 이러한 자연적인 면역 뒤의 기작은 hTERT를 운반하는 죽은 종양 세포를 둘러싸는 항원 제시 세포에 의해 이러한 펩티드가 제시된다는 것이 믿어지고 여기에 기술된 서열변호: 1, 7, 8 및 9의 펩티드와 연관된 자연적으로 처리된 hTERT 펩티드의 배열을 생산한 단백질 가수분해 기관에 의해 hTERT가 처리된다. 많은 같은 펩티드의 설명은 hTERT mRNA로 감염된 항원 제시 세포(수지상세포)에 의해 면역되어진 환자로부터 취한 T세포로 인식되며, 이러한 환자는 백신접종 후 예외적으로 잘 실행되었고, 이런 개념은 더욱 확고하다. 추가 접종 또는 본 발명의 펩티드로 백신접종을 한 이러한 반응을 유발 또는 이런 펩티드의 칵테일은 이미 임상적으로 인증받았다. 임상적 반응 및 휠씬 더 많은 환자 비율의 장기간 생존을 유발하는 것이 가능하게 될 것이다.
실시예 9
실시예 1 내지 8로부터의 결과는 또한 펩티드 칵테일을 만들어 조합할 수 있게 적합한 펩티드의 가장 효과적인 조합을 위해 연구되었다. 서열번호: 1, 7 및 9의 펩티드는 다음의 이유로 보완 효과를 가진다.
서열번호: 1, 7 및 9 각각의 주조직적합복합체 결합 모티프 및 서열의 면역성 단편은 표 10에서 보여준다.
펩티드 서열 주조직적합복합체 결합 모티프
서열번호: 1 ALFSVLNYERARRPGLLGASVLGLDDIHRA Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
SVLNYERARRPGLLG Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
FSVLNYERARRPGLL Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
ARRPGLLGASVLGLD Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
RARRPGLLGASVLGL Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
VLNYERARRPGLLGA Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
RPGLLGASVLGLDDI Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
VLNYERARRPGLLGA Th (HLA-DR*01, 04, 07, 15)
GLLGASVLGL CTL (HLA-A2, -B7)
GLLGASVLG CTL (HLA-A2, -B7)
LLGASVLGL CTL (HLA-A2, -B7)
ALFSVLNYE CTL (HLA-A2, -B7)
RPGLLGASVL CTL (HLA-A2, -B7)
RPGLLGASV CTL (HLA-A2, -B7)
서열번호: 7 RTFVLRVRAQDPPPE Th (HLA-DR*01, 11, 15)
RVRAQDPPPE CTL (HLA-A3)
FVLRVRAQD CTL (HLA-A3)
서열번호: 9 AERLTSRVKALFSVL Th (HLA-DR*03, 11)
RLTSRVKAL CTL (HLA-A2, -A3, -B44)
RVKALFSVL CTL (HLA-A2, -A3, -B44)
AERLTSRVK CTL (HLA-A2, -A3, -B44)
ERLTSRVKAL CTL (HLA-A2, -A3, -B44)
표 10으로부터 보여지는 서열번호: 1, 7 및 9의 펩티드 및 그것의 면역성 단편은 Th 또는 CTL 에피토프 중에 하나로 HLA 분자가 제시하는 넓은 범위와 결합할 수 있다. 그러므로, 이러한 펩티드는 매우 넓은 환자 집단을 통해 면역반응을 발생할 수 있다.
아울러, 서열번호: 1, 7 및 9의 펩티드는 예시 6에서 보고된 임상적 응답자 환자쪽에서 면역성 및 상대적으로 임상적 비응답자에서 보다 임상적 응답자에서 면역학적 반응이 증명되었다.
좀 더 명확하게, 서열번호: 1의 펩티드에서, 1/10 임상적 비응답자에서 면역학적 반응과 비교해서 7/7 임상적 응답자에서 면역학적 반응이 있다. 또한 반응하는 장기간 생존자의 몇몇은 오량체 분석에 의해 CTL 반응을 보였다.
서열번호: 7의 펩티드에서 1/10 임상적 비응답자에서 면역학적 반응과 비교해서 5/7 임상적 응답자에서 면역학적 반응이 있었다.
서열번호: 9의 펩티드에서 환자 중에 3명, 그 중에 한 명은 3명에 더해져 분열성 반응이 보여지고 오량체 측정에 의해 보여진 CTL반응에 더해진 0/10 임상적 비응답자에서 면역학적 반응과 비교해서 3/7 임상적 응답자에서 면역학적 반응이 있었다.
따라서, 결과의 분석은 서열번호: 1, 7 및 9의 펩티드 칵테일은 인구의 넓은 범위을 넘어 높은 수준의 효능을 있다고 예상되는 것으로 설명된다.

Claims (20)

  1. 하기로부터 선택된 서열을 포함하는 폴리펩티드:
    i) 서열번호: 2 또는 7;
    ii) 서열번호: 8; 또는
    iii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열로서, 여기서 상기 면역성 단편은 서열번호: 11는 제외함;
    여기서, 상기 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하이고, 상기 폴리펩티드는 서열번호: 10, 46, 57 또는 59 내지 62 중의 어느 하나의 서열을 포함하지 않으며; 상기 폴리펩티드가 서열번호: 1을 포함하는 경우를 제외하고 상기 폴리펩티드는 서열번호: 56 의 서열을 포함하지 않고; 상기 폴리펩티드는 서열번호: 58의 서열로 구성되지 않음.
  2. 제1항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 하기로부터 선택된 서열을 포함하는 폴리펩티드:
    i) 서열번호: 1; 및
    ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열로서, 여기서 상기 면역성 단편은 서열번호: 11, 12, 16, 또는 56 중 하나는는 제외함;
    여기서, 상기 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하임.
  3. 제1항에 있어서, 상기 면역성 단편은 서열번호 20, 22 내지 24, 26, 28 내지 30, 36, 37, 또는 39 중 어느 하나의 서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 길이가 30, 20, 또는 11개의 아미노산 이하인 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 이루어지는 핵산 분자.
  6. 적어도 제 1 및 제 2의 다른 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드의 칵테일(cocktail)로서, 여기서 제 1 폴리펩티드는 제1항의 폴리펩티드이고, 제2 폴리펩티드는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드의 칵테일:
    i) 서열번호: 1 내지 10; 및
    ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열,
    여기서 각각의 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하임.
  7. 제6항에 있어서, 상기 적어도 제 1 및 제 2의 다른 폴리펩티드는 하기의 군으로부터 선택된 폴리펩티드의 칵테일을 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드의 칵테일:
    i) 서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편; 서열번호: 8의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편; 및 서열번호: 9의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편;의 칵테일 및
    ii) 서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편; 서열번호: 8의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편; 및 서열번호: 10의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편;의 칵테일,
    여기서 각각의 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하임.
  8. 적어도 2개의 다른 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드의 칵테일로서, 여기서 적어도 2개의 다른 폴리펩티드는
    서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편; 서열번호: 7의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편; 및 서열번호: 9의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편;의 칵테일을 포함하고,
    여기서 각각의 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하인 폴리펩티드의 칵테일.
  9. 제6항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 전부 또는 각각의 면역성 단편은 서열번호: 17 내지 40의 어느 하나의 서열로 이루어지는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드의 칵테일.
  10. 적어도 제 1 및 제 2의 다른 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자의 칵테일로서, 여기서 제 1 핵산 분자는 제 1항의 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 이루어지고, 제 2 핵산 분자는 하기로 이루어지는 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 것인 핵산 분자의 칵테일:
    i) 서열번호: 1 내지 10; 및
    ii) 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 i)의 면역성 단편의 서열,
    여기서 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하임.
  11. 제10항에 있어서, 상기 적어도 제 1 및 제 2의 다른 핵산 분자는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 분자의 칵테일을 포함하는 것을 특징으로 하는 핵산 분자의 칵테일:
    i) 서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자; 서열번호: 8의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자; 및 서열번호: 9의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자;의 칵테일 및
    ii) 서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자; 서열번호: 8의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자; 및 서열번호: 10의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자;의 칵테일,
    여기서 각각의 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하임.
  12. 적어도 2개의 다른 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자의 칵테일로서, 여기서 적어도 2개의 다른 핵산 분자는
    서열번호: 1의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자; 서열번호: 7의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자; 및 서열번호: 9의 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 적어도 8개의 아미노산을 포함하는 이의 면역성 단편을 암호화하는 핵산 서열로 이루어지는 핵산 분자;의 칵테일을 포함하고,
    여기서 각각의 폴리펩티드는 길이가 50개의 아미노산 이하인 핵산 분자의 칵테일.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 전부 또는 각각의 면역성 단편은 서열번호: 17 내지 40의 어느 하나의 서열로 이루어지는 핵산 분자의 칵테일.
  14. 제1항의 폴리펩티드, 제1항의 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열로 이루어지는 핵산 분자, 제6항 또는 제8항의 폴리펩티드의 칵테일, 또는 제 10항 또는 제12항의 핵산 분자의 칵테일을 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 보조제(adjuvant), 희석제 또는 첨가제 및 선택적으로 다른 치료적인 성분을 추가적으로 포함하는 약학적 조성물.
  16. 제14항에 있어서, 상기 폴리펩티드, 핵산 분자, 폴리펩티드 칵테일 또는 핵산 분자 칵테일은 1 내지 500 ㎍ 사이의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  17. 제14항에 있어서, 상기 폴리펩티드, 핵산 분자, 폴리펩티드 칵테일 또는 핵산 분자 칵테일은 면역성 운반체에 짝지어지는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  18. 제14항에 있어서, 상기 폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 칵테일 내의 폴리 펩타이드는 다른 물질과 결합되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 다른 물질은 지질, 당, 당 사슬, 아세틸기, 자연적 중합체 및 화학적 중합체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  20. 제14항에 있어서, 상기 폴리펩티드 또는 폴리펩티드의 칵테일은 리포 펩티드 부착물(lipopeptide conjugate) 형태인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.

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