RU2019113504A

RU2019113504A - Химерные антигенные рецепторы для лечения рака

Info

Publication number: RU2019113504A
Application number: RU2019113504A
Authority: RU
Inventors: Барбара Браннетти; Дженнифер Брогдон; Борис Энгельс; Брайан ГРАНДА; Лу ХУАН; Мин Лэй; На Ли; Цзиминь ЧЖАН; Карла Гимарэс
Original assignee: Новартис Аг; Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания
Priority date: 2016-10-07
Filing date: 2017-10-06
Publication date: 2020-11-09
Also published as: TW201827597A; EP3523331A1; CA3039646A1; JP2019537433A; SG10201913823VA; US10525083B2; IL265755A; USRE49847E1; RU2019113504A3; CN110225927A; AU2017341047A1; AR110676A1; US11872249B2; PH12019500750A1; KR20240153612A; JP2023011604A; AU2025200204A1; AR126242A2; JP2025134767A; SA519401494B1

Claims

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный антигенный рецептор (CAR), где CAR содержит CD20-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, где указанный CD20-связывающий домен содержит одну или несколько из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (LCDR1), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (LCDR2) и определяющей комплементарность области 3 легкой цепи (LCDR3) любого CD20-связывающего домена из таблицы 1 или таблицы 3 и одну или несколько из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (HCDR1), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (HCDR2) и определяющей комплементарность области 3 тяжелой цепи (HCDR3) любого CD20-связывающего домена из таблицы 1 или таблицы 2.

2. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, где: (i) CAR содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3 согласно таблице 1 или таблице 3;

(ii) CAR содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 согласно таблице 1 или таблице 2;

(iii) CAR содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3 согласно таблице 1 или таблице 3 и HCDR1, HCDR2 и HCDR3 согласно таблице 1 или таблице 2;

(iv) LCDR1, LCDR2 и LCDR3 выбраны из нижеследующих последовательностей a) - p):

(a) SEQ ID NOs: 147, 148, и 149;

(b) SEQ ID NOs: 228, 229, и 230;

(c) SEQ ID NOs: 66, 67, и 68;

(d) SEQ ID NOs: 93, 94, и 95;

(e) SEQ ID NOs: 120, 121, и 122;

(f) SEQ ID NOs: 12, 13, и 14;

(g) SEQ ID NOs: 174, 175, и 176;

(h) SEQ ID NOs: 201, 202, и 203;

(i) SEQ ID NOs: 39, 40, и 41;

(j) SEQ ID NOs: 255, 256, и 257;

(k) SEQ ID NOs: 282, 283, и 284;

(l) SEQ ID NOs: 309, 310, и 311;

(m) SEQ ID NOs: 336, 337, и 338;

(n) SEQ ID NOs: 363, 364, и 365;

(o) SEQ ID NOs: 390, 391, и 392; и

(p) SEQ ID NOs: 417, 418, и 419.

(v) HCDR1, HCDR2 и HCDR3 выбраны из нижеследующих последовательностей a) - p):

(a) SEQ ID NOs: 136, 137, и 138;

(b) SEQ ID NOs: 217, 218, и 219;

(c) SEQ ID NOs: 55, 56, и 57;

(d) SEQ ID NOs: 82, 83, и 84;

(e) SEQ ID NOs: 109, 110, и 111;

(f) SEQ ID NOs: 1, 2, и 3;

(g) SEQ ID NOs: 163, 164, и 165;

(h) SEQ ID NOs: 190, 191, и 192;

(i)SEQ ID NOs: 28, 29, и 30;

(j) SEQ ID NOs: 244, 245, и 246;

(k) SEQ ID NOs: 271, 272, и 273;

(l) SEQ ID NOs: 298, 299, и 300;

(m) SEQ ID NOs: 325, 326, и 327;

(n) SEQ ID NOs: 352, 353, и 354;

(o) SEQ ID NOs: 379, 380, и 381; и

(p) SEQ ID NOs: 406, 407, и 408; или

(vi) LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 и HCDR3 выбрана из нижеследующих последовательностей a) - p):

(a) SEQ ID NOs: 147, 148, 149, 136, 137, и 138;

(b) SEQ ID NOs: 228, 229, 230, 217, 218, и 219;

(c) SEQ ID NOs: 66, 67, 68, 55, 56, и 57;

(d) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 82, 83, и 84;

(e) SEQ ID NOs: 120, 121, 122, 109, 110, и 111;

(f) SEQ ID NOs: 12, 13, 14, 1, 2, и 3;

(g) SEQ ID NOs: 174, 175, 176, 163, 164, и 165;

(h) SEQ ID NOs: 201, 202, 203, 190, 191, и 192;

(i) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 28, 29, и 30;

(j) SEQ ID NOs: 255, 256, 257, 244, 245, и 246;

(k) SEQ ID NOs: 282, 283, 284, 271, 272, и 273;

(l) SEQ ID NOs: 309, 310, 311, 298, 299, и 300;

(m) SEQ ID NOs: 336, 337, 338, 325, 326, и 327;

(n) SEQ ID NOs: 363, 364, 365, 352, 353, и 354;

(o) SEQ ID NOs: 390, 391, 392, 379, 380, и 381; и

(p) SEQ ID NOs: 417, 418, 419, 406, 407, и 408.

3. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2, где:

(i) CAR содержит любую вариабельную область легкой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 5;

(ii) CAR содержит любую вариабельную область тяжелой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 4 (iii) CAR содержит любую вариабельную область легкой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 5, и любую вариабельную область тяжелой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 4;

(iv) CAR содержит вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, соответственно, выбранные из нижеследующих последовательностей a)-p):

(a) SEQ ID NOs: 156 и 145;

(b) SEQ ID NOs: 237 и 226;

(c) SEQ ID NOs: 21 и 10

(d) SEQ ID NOs: 75 и 64;

(e) SEQ ID NOs: 102 и 91;

(f) SEQ ID NOs: 129 и 118;

(g) SEQ ID NOs: 183 и 172;

(h) SEQ ID NOs: 210 и 199;

(i) SEQ ID NOs: 48 и 37;

(j) SEQ ID NOs: 264 и 253;

(k) SEQ ID NOs: 291 и 280;

(l) SEQ ID NOs: 318 и 307;

(m) SEQ ID NOs: 345 и 334;

(n) SEQ ID NOs: 372 и 361;

(o) SEQ ID NOs: 399 и 388; и

(p) SEQ ID NOs: 426 и 415;

(v) CD20-связывающий домен представляет собой scFv;

(vi) CAR содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 1 или таблице 5, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 1 или таблице 5;

(vii) CAR содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 1 или таблице 4, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 1 или таблице 4;

(viii) CD20-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 321, SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 375, SEQ ID NO: 402, и SEQ ID NO: 429, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней, или имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций относительно любой из вышеупомянутых аминокислотных последовательностей;

(ix) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CD20-связывающий домен, содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 241, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 268, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 322, SEQ ID NO: 349, SEQ ID NO: 376, SEQ ID NO: 403, и SEQ ID NO: 430, или нуклеотидную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней;

(x) молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, включенную в таблицу 1;

(xi) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 241, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 268, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 322, SEQ ID NO: 349, SEQ ID NO: 376, SEQ ID NO: 403 и SEQ ID NO: 430, или нуклеотидной последовательности с по меньшей мере 95% идентичностью с ней; или

(xii) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 241, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 268, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 322, SEQ ID NO: 349, SEQ ID NO: 376, SEQ ID NO: 403 и SEQ ID NO: 430.

4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, где:

(i) трансмембранный домен содержит трансмембранный домен белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 и CD154;

(ii) трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 801, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 801;

(iii) трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 801;

(iv) CD20-связывающий домен соединен с трансмембранным доменом шарнирной областью;

(v) CD20-связывающий домен соединен с трансмембранным доменом шарнирной областью, где шарнирная область содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 799 или SEQ ID NO: 814 или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней; или

(vi) CD20-связывающий домен соединен с трансмембранным доменом шарнирной областью, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая шарнирную область, содержит нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 800 или SEQ ID NO: 815 или нуклеотидную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней.

5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-4, где:

(i) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен

(ii) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен, где костимулирующий домен представляет собой функциональный сигнальный домен, полученный из белка, выбранного из группы, состоящей из OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278) и 4-1BB (CD137);

(iii) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен, где костимулирующий домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 803, или аминокислотная последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 803;

(iv) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен, где костимулирующий домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 803;

(v) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен, где последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая костимулирующий домен, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 804 или нуклеотидную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней;

(vi) внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен;

(vii) внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен, где первичный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен из CD3-дзета;

(viii) внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен, где первичный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807;

(ix) внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен из 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен из CD3-дзета;

(x) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 803, и/или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 803 и/или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807;

(xi) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 803 и/или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807;

(xii) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 803 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807;

(xiii) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 803 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO:807,где необязательно последовательности, образующие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде одной полипептидной цепи; или

(xiv) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая внутриклеточный сигнальный домен, содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 804 или нуклеотидную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней, и/или нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 893, 808, 806 или 1074 или нуклеотидную последовательность с по меньщей мере 95% идентичностью с ней.

6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-5, дополнительно содержащая лидерную последовательность, где необязательно лидерная последовательность кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 797.

7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-6, где:

(i) молекула нуклеиновой кислоты кодирует CAR, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 323, SEQ ID NO: 350, SEQ ID NO: 377, SEQ ID NO: 404 и SEQ ID NO: 431, или аминокислотную последовательность с по меньшей 95% идентичностью с ней, или аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 323, SEQ ID NO: 350, SEQ ID NO: 377, SEQ ID NO: 404 или SEQ ID NO: 431, где необязательно CAR не содержит сигнальный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 797;

(ii) молекула нуклеиновой кислоты кодирует CAR, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 323, SEQ ID NO: 350, SEQ ID NO: 377, SEQ ID NO: 404 и SEQ ID NO: 431, где CAR содержит или не содержит сигнальный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 797;

(iii) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 270, SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 324, SEQ ID NO: 351, SEQ ID NO: 378, SEQ ID NO: 405, и SEQ ID NO: 432, или нуклеотидную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней, где молекула нуклеиновой кислоты содержит или не содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 798; или

(iv) молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 270, SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 324, SEQ ID NO: 351, SEQ ID NO: 378, SEQ ID NO: 405, и SEQ ID NO: 432, где молекула нуклеиновой кислоты содержит или не содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 798.

8. Выделенная полипептидная молекула, кодируемая молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7.

9. Выделенная молекула CAR, содержащая CD20-связывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный сигнальный домен, где CD20-связывающий домен содержит одну или несколько из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (LCDR1), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (LCDR2) и определяющей комплементарность области 3 легкой цепи (LCDR3), включенных в таблицу 1 или таблицу 3, и одну или несколько из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (HCDR1), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (HCDR2) и определяющей комплементарность области 3 тяжелой цепи (HCDR3), включенных в таблицу 1 или таблицу 2.

10. Выделенная молекула CAR по п. 9, где:

(i) молекула CAR содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3 любой последовательности, включенной в таблицу 1 или таблицу 3;

(ii) молекула CAR содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3 любой последовательности, включенной в таблицу 1 или таблицу 2;

(iii) молекула CAR содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3 любой последовательности, включенной в таблицу 1 или таблицу 3, и HCDR1, HCDR2 и HCDR3 любой последовательности, включенной в таблицу 1 или таблицу 2;

(iv) LCDR1, LCDR2 или LCDR3 содержит аминокислотную последовательность, включенную в таблицу 1; или

(v) HCDR1, HCDR2 или HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, включенную в таблицу 1;

11. Выделенная молекула CAR по п. 9 или10, где:

(i) молекула CAR содержит любую вариабельную область легкой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 5;

(ii) молекула CAR содержит любую вариабельную область тяжелой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 4;

(iii) молекула CAR содержит любую вариабельную область легкой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 5, и любую вариабельную область тяжелой цепи, включенную в таблицу 1 или таблицу 4;

(iv) CD20-связывающий домен представляет собой scFv;

(v) CD20-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи аминокислотной последовательности, включенной в таблицу 1;

(vi) CD20-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 1 или таблице 5, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 1 или таблице 5;

(vii) CD20-связывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 1 или таблице 4, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью, представленной в таблице 1 или таблице 4; или

(viii) CD20-связывающий домен содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 321, SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 375, SEQ ID NO: 402, и SEQ ID NO: 429, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней.

12. Выделенная молекула CAR по любому из пп. 9-11, где:

(i) молекула CAR содержит трансмембранный домен белка, выбранного из группы, состоящей из альфа-, бета- или дзета-цепи T-клеточного рецептора, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, CD137 и CD154;

(ii) трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 801, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 801,

(iv) CD20-связывающий домен соединен с трансмембранным доменом шарнирной областью, где необязательно шарнирная область содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 799 или SEQ ID NO: 814 или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней.

13. Выделенная молекула CAR по любому из пп. 9-13, где:

(i) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен;

(ii) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен, где костимулирующий домен содержит функциональный сигнальный домен белка, выбранного из группы, состоящей из OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278) и 4-1BB (CD137);

(iii) внутриклеточный сигнальный домен содержит костимулирующий домен, где костимулирующий домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 803, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 803;

(v) внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен;

(vi) внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен, где первичный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен из CD3-дзета;

(vii) внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен,

где первичный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807;

(viii) внутриклеточный сигнальный домен содержит функциональный сигнальный домен из 4-1BB и/или функциональный сигнальный домен из CD3-дзета;

(ix) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 803 и/или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 805;

(x) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:803 и/или аминокислотную последовательность под SEQ ID NO:807;

(xi) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности под SEQ ID NO:803 и/или аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 803, и/или аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807;

(xii) внутриклеточный сигнальный домен содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 803 и аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 805 или SEQ ID NO: 807, где последовательности, образующие внутриклеточный сигнальный домен, экспрессируются в одной и той же рамке считывания и в виде одной полипептидной цепи.

14. Выделенная молекула CAR по любому из пп. 9-13, дополнительно содержащая лидерную последовательность, где необязательно лидерная последовательность содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 797, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 797.

15. Выделенная молекула CAR по любому из пп. 9-14, содержащая:

(i) аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 323, SEQ ID NO: 350, SEQ ID NO: 377, SEQ ID NO: 404, и SEQ ID NO: 431, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с ней, или аминокислотную последовательность, содержащую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20, 10 или 5 модификаций аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 323, SEQ ID NO: 350, SEQ ID NO: 377, SEQ ID NO: 404, и SEQ ID NO: 431, где молекула CAR содержит или не содержит сигнальный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 797; или

(ii) аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 242, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 296, SEQ ID NO: 323, SEQ ID NO: 350, SEQ ID NO: 377, SEQ ID NO: 404 и SEQ ID NO: 431, где молекула CAR содержит или не всодержит сигнальный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 797.

16. CD20-связывающий домен, содержащий одну или несколько из определяющей комплементарность области 1 легкой цепи (LCDR1), определяющей комплементарность области 2 легкой цепи (LCDR2) и определяющей комплементарность области 3 легкой цепи (LCDR3) любого CD20-связывающего домена, выбранного из группы, состоящей из SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 321, SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 375, SEQ ID NO: 402, и SEQ ID NO: 429, и одну или несколько из определяющей комплементарность области 1 тяжелой цепи (HCDR1), определяющей комплементарность области 2 тяжелой цепи (HCDR2) и определяющей комплементарность области 3 тяжелой цепи (HCDR3) любого CD20-связывающего домена, выбранного из группы, состоящей из SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 240, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 267, SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 321, SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 375, SEQ ID NO: 402, и SEQ ID NO: 429.

17. CD20-связывающий домен по п. 16, где:

(i) LCDR1, LCDR2 и/или LCDR3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из таблицы 1 или таблицы 3;

(ii) аминокислотная последовательность LCDR1, LCDR2 и LCDR3, соответственно, выбрана из нижеследующих последовательностей a) - p):

(a) SEQ ID NOs: 147, 148, и 149;

(b) SEQ ID NOs: 228, 229, и 230;

(c) SEQ ID NOs: 66, 67, и 68;

(d) SEQ ID NOs: 93, 94, и 95;

(e) SEQ ID NOs: 120, 121, и 122;

(f) SEQ ID NOs: 12, 13, и 14;

(g) SEQ ID NOs: 174, 175, и 176;

(h) SEQ ID NOs: 201, 202, и 203;

(i) SEQ ID NOs: 39, 40, и 41;

(j) SEQ ID NOs: 255, 256, и 257;

(k) SEQ ID NOs: 282, 283, и 284;

(l) SEQ ID NOs: 309, 310, и 311;

(m) SEQ ID NOs: 336, 337, и 338;

(n) SEQ ID NOs: 363, 364, и 365;

(o) SEQ ID NOs: 390, 391, и 392; и

(p) SEQ ID NOs: 417, 418, и 419;

(iii) HCDR1, HCDR2 и/или HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из таблицы 1 или таблицы 2;

(iv) аминокислотная последовательность HCDR1, HCDR2 и HCDR3, соответственно, выбрана из нижеследующих последовательностей a) - p):

(a) SEQ ID NOs: 136, 137, и 138;

(b) SEQ ID NOs: 217, 218, и 219;

(c) SEQ ID NOs: 55, 56, и 57;

(d) SEQ ID NOs: 82, 83, и 84;

(e) SEQ ID NOs: 109, 110, и 111;

(f) SEQ ID NOs: 1, 2, и 3;

(g) SEQ ID NOs: 163, 164, и 165;

(h) SEQ ID NOs: 190, 191, и 192;

(i)SEQ ID NOs: 28, 29, и 30;

(j) SEQ ID NOs: 244, 245, и 246;

(k) SEQ ID NOs: 271, 272, и 273;

(l) SEQ ID NOs: 298, 299, и 300;

(m) SEQ ID NOs: 325, 326, и 327;

(n) SEQ ID NOs: 352, 353, и 354;

(o) SEQ ID NOs: 379, 380, и 381; и

(p) SEQ ID NOs: 406, 407, и 408; или

(v) аминокислотная последовательность LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 и HCDR3, соответственно, выбрана из нижеследующих последовательностей a) - p):

(a) SEQ ID NOs: 147, 148, 149, 136, 137, и 138;

(b) SEQ ID NOs: 228, 229, 230, 217, 218, и 219;

(c) SEQ ID NOs: 66, 67, 68, 55, 56, и 57;

(d) SEQ ID NOs: 93, 94, 95, 82, 83, и 84;

(e) SEQ ID NOs: 120, 121, 122, 109, 110, и 111;

(f) SEQ ID NOs: 12, 13, 14, 1, 2, и 3;

(g) SEQ ID NOs: 174, 175, 176, 163, 164, и 165;

(h) SEQ ID NOs: 201, 202, 203, 190, 191, и 192;

(i) SEQ ID NOs: 39, 40, 41, 28, 29, и 30;

(j) SEQ ID NOs: 255, 256, 257, 244, 245, и 246;

(k) SEQ ID NOs: 282, 283, 284, 271, 272, и 273;

(l) SEQ ID NOs: 309, 310, 311, 298, 299, и 300;

(m) SEQ ID NOs: 336, 337, 338, 325, 326, и 327;

(n) SEQ ID NOs: 363, 364, 365, 352, 353, и 354;

(o) SEQ ID NOs: 390, 391, 392, 379, 380, и 381; и

(p) SEQ ID NOs: 417, 418, 419, 406, 407, и 408.

18. CD20-связывающий домен по п. 16 или 17, где:

(i) CD20-связывающий домен представляет собой scFv, содержащий вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью, выбранной из таблицы 1 или таблицы 5, и вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью, выбранной из таблицы 1 или таблицы 4;

(ii) CD20-связывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, где аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи, соответственно, выбрана из нижеследующих последовательностей a) - p):

(a) SEQ ID NOs: 156 и 145;

(b) SEQ ID NOs: 237 и 226;

(c) SEQ ID NOs: 21 и 10

(d) SEQ ID NOs: 75 и 64;

(e) SEQ ID NOs: 102 и 91;

(f) SEQ ID NOs: 129 и 118;

(g) SEQ ID NOs: 183 и 172;

(h) SEQ ID NOs: 210 и 199;

(i) SEQ ID NOs: 48 и 37;

(j) SEQ ID NOs: 264 и 253;

(k) SEQ ID NOs: 291 и 280;

(l) SEQ ID NOs: 318 и 307;

(m) SEQ ID NOs: 345 и 334;

(n) SEQ ID NOs: 372 и 361;

(o) SEQ ID NOs: 399 и 388; и

(p) SEQ ID NOs: 426 и 415; или

(iii) CD20-связывающий домен содержит: вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи, представленной в таблице 1 или таблице 5, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью в таблице 1 или таблице 5; и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более 30, 20 или 10 модификаций аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи, представленной в таблице 1 или таблице 4, или аминокислотную последовательность с по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью в таблице 1 или таблице 4.

19. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая:

(i) первую молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу CAR по любому из пп. 9-15, и

(ii) вторую молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу CAR, которая связывает B-клеточный антиген, например, CD19, CD22, CD10, CD34, CD123, FLT-3, ROR-1, CD79b, CD79a или CD179b,

например, где первая и вторая молекулы нуклеиновой кислоты расположены на одной молекуле нуклеиновой кислоты, или

первая и вторая молекулы нуклеиновой кислоты расположены на отдельных молекулах нуклеиновой кислоты.

20. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 19, где:

(i) B-клеточный антиген представляет собой CD19 или CD22;

(ii) молекула CAR, которая связывается с B-клеточным антигеном, связывается с CD19 и содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую CAR для CD19 согласно таблице 11, например, CTL-019 или гуманизированный CAR2; или

(iii) молекула CAR, которая связывается с B-клеточным антигеном, связывается с CD22 и содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую CAR для CD22 согласно таблице 6, например, CAR для CD22-65, CAR для CD22-65KD, CAR для CD22-65s или CAR для CD22-65ss.

21. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 19 или 20, где:

(i) нуклеотидная последовательность, кодирующая расщепляемый пептид, например, P2A или F2A, или нуклеотидная последовательность, кодирующая IRES, располагается между первой молекулой нуклеиновой кислоты и второй молекулой нуклеиновой кислоты;

(ii) первая молекула нуклеиновой кислоты и вторая молекула нуклеиновой кислоты содержат единый промотор, например, в виде продукта бицистронной транскрипции;

(iii) первая молекула нуклеиновой кислоты и вторая молекула нуклеиновой кислоты содержат единый промотор, где единым промотором является промотор EF-1α, где необязательно промотор EF-1α содержит нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 833;

(iv) первая молекула нуклеиновой кислоты содержит первый промотор, и вторая молекула нуклеиновой кислоты содержит второй промотор; или

(v) молекула нуклеиновой кислоты содержит РНК или ДНК.

22. Выделенная полипептидная молекула, кодируемая молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 19-21.

23. CD22-связывающий домен или молекула CAR, содержащие:

(i) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 839 и/или

(ii) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 840.

24. CD22-связывающий домен или молекула CAR по п. 23, где:

(i) последовательности VH и VL соединены непосредственно, например без линкера;

(ii) последовательности VH и VL соединены через линкер, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1089, где необязательно линкер содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1083; или

(iii) CD22-связывающий домен или молекула CAR содержат аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 837.

25. CD22-связывающий домен или молекула CAR, содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 835 или SEQ ID NO: 836.

26. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая CD22-связывающий домен или молекулу CAR по любому из пп. 23-25.

27. Полиспецифическая, например биспецифическая, молекула антитела или молекула CAR, предусматривающая первую специфичность связывания с CD20 и вторую специфичность связывания с одним или несколькими из CD19, CD22, CD10, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a, где первая специфичность связывания предусматривает CD20-связывающий домен по любому из пп. 16-18.

28. Полиспецифическая, например биспецифическая, молекула антитела или молекула CAR, предусматривающая первую специфичность связывания с CD22 и вторую специфичность связывания с одним или несколькими из CD19, CD20, CD10, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a, где первая специфичность связывания предусматривает CD22-связывающий домен по любому из пп. 23-25.

29. Полиспецифическая, например биспецифическая, молекула антитела или молекула CAR, имеющая первую специфичность связывания с CD19 и вторую специфичность связывания с одним или обоими из CD20 или CD22, где:

(i) молекула мультиспецифического, например, биспецифического антитела характеризуется организацией VH₁-VL₁-VL₂-VH₂ от N- до C-концевой ориентации;

(ii) молекула мультиспецифического, например, биспецифического антитела характеризуется организацией VL₁-VH₁-VH₂-VL₂ от N- до C-концевой ориентации;

(iii) молекула мультиспецифического, например, биспецифического антитела характеризуется организацией VL₁-VH₁-VL₂-VH₂ от N- до C-концевой ориентации; или

(iv) молекула мультиспецифического, например, биспецифического антитела характеризуется организацией VH₁-VL₁-VH₂-VL₂ от N- до C-концевой ориентации, и

где линкер располагается между двумя антителами или фрагментами антител (например, scFv), например, между VL₁ и VL₂, если конструкция организована как VH₁-VL₁-VL₂-VH₂; между VH₁ и VH₂, если конструкция организована как VL₁-VH₁-VH₂-VL₂; между VH₁ и VL₂, если конструкция организована как VL₁-VH₁-VL₂-VH₂; или между VL₁ и VH₂, если конструкция организована как VH₁-VL₁-VH₂-VL₂.

30. Полиспецифическая молекула антитела или молекула CAR по п. 29, где:

(i) вторая специфичность связывания представляет собой специфичность связывания с CD20, где специфичность связывания CD20 предусматривает VH и VL, как показано в таблице 1, например, VH и VL из CD20-C3H2 или CD20-C5H1;

(ii) вторая специфичность связывания представляет собой специфичность связывания с CD22, где специфичность связывания с CD22 предусматривает VH и VL, как показано в таблице 6, например, VH и VL из CD22-65, например, CD22-65ss scFv, CD22-65s scFv или CD22-65KD scFv;

(iii) линкер содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1089, или линкер содержит аминокислотную последовательность или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1091;

(iv) специфичность связывания с CD19 предусматривает VH и VL, как показано в таблице 11, например, CTL019 scFv (SEQ ID NO: 765), например гуманизированный CD19 scFv, например гуманизированный CAR2;

(v) полиспецифическая молекула антитела или молекула CAR предусматривает специфичность связывания VL1-VH1 с CD19 и специфичность связывания VL2-VH2 или VH2-VL2 с CD22;

(vi) полиспецифическая молекула антитела или молекула CAR кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей или состоящей из нуклеотидной последовательности любой из SEQ ID NO: 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 860, 895, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871 или 873, или нуклеотидной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной любой из вышеперечисленных последовательностей; или

(vii) полиспецифическая молекула антитела или молекула CAR содержить или состоит из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 845, 847, 849, 851, 853, 855, 857, 858, 860, 862, 864, 866, 868, 870, 872 или 874, или аминокислотной последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной любой из вышеуказанных последовательностей или имеющий по меньшей мере одну, две или три модификации, но не более чем 30, 20 или 10 модификаций.

31. Полиспецифическая молекула антитела или молекула CAR по любому из пп. 27-30, где полиспецифическая молекула антитела присутствуют в молекуле CAR, где:

(i) молекула CAR предусматривает проксимальную или дистальную специфичность связывания с CD19;

(ii) молекула CAR предусматривает проксимальную или дистальную специфичность связывания с CD22; или

(iii) молекула CAR предусматривает проксимальную или дистальную специфичность связывания с CD20.

32. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полиспецифическую молекулу антитела или молекулу CAR по любому из пп. 27-31.

33. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полиспецифическую молекулу антитела или молекулу CAR, содержащая нуклеотидную последовательность под любым из SEQ ID NOs: 844, 846, 848, 850, 852, 854, 856, 860, 895, 859, 861, 863, 865, 867, 869, 871, или 873, или состоящая из нее, или нуклеотидную последовательность, на по меньшей мере 95% идентичную любой из вышеупомянутых последовательностей.

34. Вектор, например, один или оба из первого и второго векторов, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, 19-21, 26 или 33, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу полипептида по п. 8 или 22, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую молекулу CAR по любому из пп. 9-15, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CD20-связывающий домен по любому из пп. 16-18, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CD22-связывающий домен или молекулу CAR по любому из пп. 23-25, или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полиспецифическую молекулу антитела или молекулу CAR по любому из пп. 27-31, необязательно, где вектор выбран из группы, состоящей из ДНК, РНК, плазмиды, лентивирусного вектора, аденовирусного вектора или ретровирусного вектора.

35. Клетка, например, популяция иммунных эффекторных клеток (например, первая и/или вторая популяция иммунных эффекторных клеток), содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, 19-21, 26, 32 или 33, молекула полипептида по п. 8 или 22, молекулу CAR по любому из пп. 9-15, CD20-связывающий домен по любому из пп. 16-18, CD22-связывающий домен или молекулу CAR по любому из пп. 23-25, полиспецифическую молекулу антитела по любому из пп. 27-31 или вектор по п. 34.

36. Способ получения клетки, например, популяции иммунных эффекторных клеток, предусматривающий трансдуцирование T-клетки или NK-клетки нуклеиновой кислотой по любому из пп. 1-7, 19, 21, 26, 32 или 33 или вектором по п. 34.

37. Способ создания популяции РНК-сконструированных клеток, предусматривающий введение in vitro транскрибируемой РНК или синтетической РНК в клетку, где РНК содержит молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, 19-21, 26, 32 или 33.

38. Популяция иммунных эффекторных клеток, содержащая:

(i) первую популяцию клеток, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, 19-21, 26, 32 или 33, молекула полипептида по п. 8 или 22, молекулу CAR по любому из пп. 9-15, CD20-связывающий домен по любому из пп. 16-18 или вектор по п. 34;

и

(ii) вторую популяцию клеток, содержащих молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую CAR, который связывает B-клеточный антиген, например, CD19, CD22, CD10, CD34, CD123, FLT-3, ROR-1, CD79b, CD79a или CD179b.

39. Популяция по п. 38, где:

(ii) CAR, который связывает B-клеточный антиген, связывается с CD19 и содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую CAR для CD19 согласно таблице 11, например, CTL-019 или гуманизированный CAR2; или

(iii) CAR, который связывает B-клеточный антиген, связывается с CD22 и содержит нуклеотидную последовательность, кодирующую CAR для CD22 согласно таблице 6, например, CAR для CD22-65, CAR для CD22-65KD, CAR для CD22-65s или CAR для CD22-65ss.

40. Применение клетки, например, популяции иммунных эффекторных клеток, экспрессирующих молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, 19-21, 26, 32 или 33, молекулу полипептида по п. 8 или 22, молекулу CAR по любому из пп. 9-15, CD20-связывающий домен по любому из пп. 16-18, CD22-связывающий домен или молекулу CAR по любому из пп. 23-25, полиспецифическую молекулу антитела по любому из пп. 27-31 или вектор по любому из пп. 23-25, для изготовления лекарственного средства для лечения рака или заболевания, ассоциированного с экспрессией CD20, CD19 или CD22 у субъекта, где указанное применение предусматривает введение субъекту эффективного количества клетки.

41. Применение по п. 40, где:

(i) заболевание представляет собой острый миелоидный лейкоз (AML), B-клеточный острый лимфоидный лейкоз (BALL), мелкоклеточный лимфоцитарный лейкоз (SLL), острый лимфоидный лейкоз (ALL), хронический миелогенный лейкоз (CML), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), мантийноклеточную лимфому (MCL), B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, бластическое новообразование из плазмацитоидных дендритных клеток, лимфому Беркитта, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (DLBCL), фолликулярную лимфому, волосатоклеточный лейкоз, мелкоклеточную лимфому, крупноклеточную фолликулярную лимфому, злокачественное лимфопролиферативное состояние, лимфому MALT, лимфому из клеток маргинальной зоны, множественную миелому, миелодисплазию или миелодиспластический синдром, миелопролиферативное новообразование, неходжкинскую лимфому, лимфому Ходжкина, плазмобластную лимфому, новообразование из плазмацитоидных дендритных клеток, макроглобулинемию Вальденстрема, предлейкоз или их комбинацию;

(ii) заболевание представляет собой лимфому, например, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому (DLBCL); или

(iii) заболевание представляет собой B-клеточное злокачественное новообразование.

42. Применение по п. 40 или 41, дополнительно предусматривающие введение субъекту В-клеточного ингибитора, выбранного из одного или нескольких из ингибитора CD19, CD22, CD10, CD34, CD123, FLT-3, ROR-1, CD79b, CD79a или CD179b, необязательно, где:

(i) В-клеточный ингибитор представляет собой

низкомолекулярный ингибитор;

(ii) В-клеточный ингибитор представляет собой полипептид, необязательно растворимый лиганд, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с одним или несколькими из CD10, CD19, CD22, CD34, CD123, FLT-3, ROR1, CD79b, CD179b или CD79a;

(iii) В-клеточный ингибитор представляет собой ингибирующую нуклеиновую кислоту, необязательно dsRNA, siRNA или shRNA;

(iv) В-клеточный ингибитор представляет собой клетку, например, популяцию иммунных эффекторных клеток, экспрессирующую CAR, которую связывает B-клеточный антиген, например, CD19, CD22, CD10, CD34, CD123, FLT-3, ROR-1, CD79b, CD79a или CD179b;

(v) В-клеточный ингибитор вводится перед клеткой, например, популяцией иммунных эффекторных клеток, экспрессирующей молекулу CAR;

(vi) В-клеточный ингибитор вводится одновременно с клеткой, например, популяцией иммунных эффекторных клеток, экспрессирующей молекулу CAR; или

(vii) В-клеточный ингибитор вводится после клетки, например, популяции иммунных эффекторных клеток, экспрессирующей молекулу CAR.

43. Применение по любому из пп. 40-42, где клетка вводится в комбинации со:

(i) средством, которое повышает эффективность клетки;

(ii) средством, которое облегчает один или несколько из побочных эффектов, ассоциированных с введением клетки; или

(iii) средством, которым лечат заболевание, ассоциированное с CD20.

44. Клетка или популяция клеток по любому из пп. 35, 38 или 39, дополнительно экспрессирующая ингибирующую молекулу, которая содержит первый полипептид, содержащий по меньшей мере часть ингибирующей молекулы, ассоциированной со вторым полипептидом, который содержит положительный сигнал от внутриклеточного сигнального домена, где необязательно ингибирующая молекула содержит первый полипептид, который содержит по меньшей мере часть PD1, и второй полипептид, содержащий костимулирующий домен и первичный сигнальный домен.

45. Ингибитор CD20 для применения в способе лечения пациента, который не отвечает, отвечает частично или проявляет рецидив заболевания в ответ на ингибитор CD19, например, на CAR-терапию, направленную на CD19, предусматривающем введение пациенту ингибитора CD20, где ингибитор CD20 кодируется молекулой нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-7, 19-21, 26, 32 или 33.