CN114846128A - 包含分散蛋白viii的清洁组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及包含酶的混合物的特定清洁组合物,所述酶包括分散蛋白和特定的蛋白酶。本发明还涉及所述组合物在清洁方法和/或深度清洁有机污渍中的用途,以及使用所述组合物除去或减少有机物质组分的方法。
Description
发明领域
本发明涉及包含如本文所定义的酶混合物的组合物,例如清洁组合物。本发明还涉及包含这种酶的所述组合物在清洁方法和/或深度清洁有机污渍中的用途,以及使用所述组合物除去或减少有机物质组分的方法。
背景技术
酶已经在洗涤剂中使用了数十年。通常将各种酶的混合物添加到洗涤剂组合物中,其中每种酶靶向特定底物,例如淀粉酶对淀粉污渍有活性,蛋白酶对蛋白质污渍有活性等。这些商用的酶的有效性提供了去除大部分污垢的洗涤剂。然而,由于这种有机物质的复杂性质,有机物质的组分如生物膜和EPS(细胞外聚合物)构成了具有挑战性的污渍类型,并且可商购获得的清洁组合物不能有效地除去或减少EPS和/或生物膜相关的污渍。纺织品表面和硬表面,如盘子或经受若干洗涤循环的洗衣机的内部空间,被许多不同类型的污垢弄脏,这些污垢可能由蛋白质、油脂、淀粉等组成。一种类型的污渍可能与有机物质如生物膜、EPS(细胞外聚合物)等有关。有机物质可能由不同的分子如多糖、细胞外DNA(eDNA)和蛋白质组成。一些有机物质包含细胞外聚合物基质,其可以是粘性的或胶粘的,当存在于纺织品上时,其吸引污垢并且可能引起污垢的再沉积或回染,导致纺织品变灰。另外,有机物质如生物膜通常引起恶臭问题,因为各种恶臭分子可以被复杂的细胞外基质中的多糖、细胞外DNA(eDNA)和蛋白质粘附并缓慢释放以引起明显的恶臭。
因此,仍然需要有效地防止、减少或除去例如与生物膜相关的污渍的清洁组合物,所述污渍例如是蛋白质和多糖,例如PNAG(聚-β(1-6)-N-乙酰葡萄糖胺)。本发明提供了满足这种需要的新组合物。
发明内容
本发明的第一方面涉及一种清洁组合物,其包含分散蛋白(dispersin)和蛋白酶以及任选存在的至少一种清洁组分,其中所述蛋白酶选自
(1)包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ IDNO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99E与选自S3T、V4I和V199I组成的组的至少两个、优选所有三个其它氨基酸取代的组合,其中位置编号根据SEQ ID NO:24;或
(2)包含与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,优选至少95%序列同一性,优选至少96%序列同一性,优选至少97%序列同一性,优选与SEQ ID NO:27至少98%序列同一性的氨基酸序列的蛋白酶,其中蛋白酶变体在位置101处具有谷氨酸残基(E),并且其中蛋白酶变体进一步包含选自以下的一个或多个取代:S156D;L262E;Q137H;S3T;R45E,D;P55N;T58W,Y,L;Q59D,M,N,T;G61D,R;S87E;G97S;A98D,E,R;S106A,W;N117E;H120V,D,K,N;S124M;P129D;E136Q;S143W;S161T;S163A,G;Y171L;A172S;N185Q;V199M;Y209W;M222Q;N238H;V244T;N261T;和L262N,Q,D;或
(3)包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ IDNO:30所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且在对应于SEQ IDNO:30的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置中包含氨基酸取代:或
(4)包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ IDNO:39所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、98.8%、99.0%、99.2%、99.4%或99.5%的序列同一性,并且包含(i)在对应于SEQ ID NO:39的位置3、4、99和199的位置处的氨基酸取代3T、4I、99E和199I中的至少两个,和(ii)在对应于SEQ ID NO:39的位置74、136、143、154、161、163、171、200、203、209、212或256的至少一个位置中的至少一个氨基酸取代,优选至少一个选自74D、74E、74Q、136Q、143L、143W、143Y、154D、154Q、161T、163G、171L、200A、200L、200S、200T、203K、203V、203W、209W、212N、212S、212T、256D、256E或256Q的氨基酸取代。
在各种实施方式中,包含分散蛋白和蛋白酶的本发明的清洁组合物,
(a)是固体、优选颗粒状衣物洗涤剂组合物,并且还包含
(a1)至少一种沸石助洗剂,优选其量为10-50重量%,更优选20-30重量%;
(a2)至少一种膦酸盐助洗剂,其量优选为0.1-5重量%,更优选0.4重-1.5重量%;
(a3)至少一种其它酶,优选纤维素酶,优选活性酶的量为100至5000ppb,更优选1000至2000ppb;和
(a4)至少一种聚合物,优选聚乙烯吡咯烷酮聚合物,优选其量为0.01-1重量%,更优选0.1-0.3重量%;或
(b)是固体衣物洗涤剂组合物,并且还包含
(b1)至少一种硅酸盐助洗剂,优选其量为2-20重量%,更优选5-10重量%;
(b2)任选存在的羧甲基纤维素,其量优选为0.1-10重量%,更优选0.1-4重量%;
(b3)至少一种其它酶,优选纤维素酶,优选活性酶的量为0.1至100ppm,更优选0.1至10ppm;
(b4)任选存在的至少一种去污聚合物,优选聚乙烯吡咯烷酮聚合物,其量为0.1-3重量%,更优选0.1-1.0重量%;和
(b5)至少一种漂白体系,其包含漂白剂、漂白活化剂和漂白催化剂,其量优选为0.1-50重量%,更优选0.1-30重量%;或
(c)是液体衣物洗涤剂组合物,并且还包含
(c1)至少一种表面活性剂,优选非离子表面活性剂,优选其量为1-20重量%,优选3-15重量%;
(c2)任选存在的至少一种膦酸盐助洗剂,其量优选为0.1-3重量%,更优选0.25-1.5重量%;
(c3)任选存在的至少一种其它酶,优选纤维素酶,优选酶组合物的量为0.001-1重量%,更优选0.001-0.6重量%;和
(c4)任选存在的至少一种有机溶剂,优选甘油,其量优选为0.1-10重量%,更优选0.1-5重量%;或
(d)是单位剂量形式的液体衣物洗涤剂,优选包含水溶性膜的小袋,并且还包含
(d1)至多20重量%、优选5-15重量%的量的水;
(d2)任选存在的至少一种苦味剂,优选苄基二乙基(2,6-二甲苯基氨基甲酰基)-甲基苯甲酸铵,优选量为0.00001-0.04重量%;
(d3)任选存在的至少一种光学增白剂,其量优选为0.01-2重量%,更优选0.01-1重量%;和
(d4)任选存在的至少一种聚合物,其量优选为0.01-7重量%,更优选0.1-5重量%;或
(e)是织物整理剂,并且还包含
(e1)至少一种软化聚硅氧烷,优选氨基官能化聚硅氧烷,其量优选为0.1-10重量%,更优选0.1-2重量%;
(e2)至少一种香料,优选至少部分包封在微胶囊中,更优选至少部分包封在三聚氰胺-甲醛微胶囊中,优选量为0.01-3重量%,更优选0.1-1重量%;
(e3)任选存在的聚季铵盐10,其量为0.1-20重量%,优选0.1-13重量%;
(e4)任选存在的聚季铵盐37,其量为0.1-20重量%,优选0.1-13重量%;
(e5)任选存在的基于植物的酯季铵盐,优选基于低芥酸菜子油(canola-based)或棕榈(palm-based)的酯季铵盐,其量为0.1-20重量%,优选0.1-13重量%;和
(e6)任选存在的己二酸,其量为0.1-20重量%,更优选0.1-13重量%;或
(f)是酸性清洁剂,优选具有小于6的pH,并且还包含
(f1)植物基或生物基表面活性剂,优选各自的量为0.1-5重量%,更优选各自的量为0.1-2重量%;
(f2)至少一种酸性杀生物剂,优选选自酸,更优选HCl和甲酸;和
(f3)至少一种去污、防水或水扩散聚合物,优选其量为0.01-3重量%,更优选0.01-0.5重量%;或
(g)是中性清洁剂,优选具有6.0至7.5的pH,并且还包含
(g1)植物基或生物基表面活性剂,优选各自的量为0.1-5重量%,更优选各自的量为0.1-2重量%;
(g2)至少一种杀生物剂,优选选自季铵化合物和醇;和
(g3)至少一种去污、防水或水扩散聚合物,优选其量为0.01-3重量%,更优选0.01-0.5重量%;或
(h)是碱性清洗剂,优选具有大于7.5的pH,并且还包含
(h1)植物基或生物基表面活性剂,优选各自的量为0.1-5重量%,更优选各自的量为0.1-2重量%;或
(i)是手洗餐具洗涤剂,优选液体手洗餐具洗涤剂,并且还包含
(i1)至少一种阴离子表面活性剂,其量优选为0.1-40重量%,更优选5-30重量%;
(i2)至少一种两性表面活性剂,优选甜菜碱,优选其量为0.1-25重量%,更优选1-15重量%;
(i3)至少一种非离子表面活性剂,其量优选为0.1-25重量%,更优选2-10重量%;
(i4)至少一种其它酶,优选选自淀粉酶,优选酶组合物的量为至多1重量%,更优选至多0.6重量%;或
(j)是自动餐具洗涤组合物,并且进一步包含
(j1)选自柠檬酸盐、氨基羧酸盐及其组合的至少一种助洗剂,优选其量为5-30重量%,更优选10-20重量%;
(j2)至少一种膦酸盐助洗剂,其量优选为0.1-5重量%,更优选0.4重-1.5重量%;
(j3)至少一种非离子表面活性剂,其量优选为0.1-10重量%,更优选1-5重量%;
(j4)至少一种漂白体系,其包含漂白剂、漂白活化剂和漂白催化剂,其量优选为0.1-50重量%,更优选0.1-30重量%;和
(j5)至少一种选自磺基聚合物、阳离子聚合物和聚丙烯酸酯的聚合物,优选其量为0.01-15重量%,更优选2-10重量%;或
(k)进一步包含
(k1)至少一种磺基聚合物,其量优选为1-15重量%,更优选2-10重量%,并且优选为餐具洗涤组合物,更优选为自动餐具洗涤组合物;或
(l)进一步包含至少一种选自益生菌,优选微生物、孢子或其组合的辅助成分;或
(m)为单位剂量形式,并且包含至少2个,优选2、3、4或5个单独的隔室;或
(n)是不含磷酸盐的组合物。
当在下文中提及"本发明的(清洁)组合物"或"如本文所述的(清洁)组合物"或"如本文所定义的(清洁)组合物"时,在各种实施方式中是指上述组合物(a)-(n)。然而,本发明不限于那些组合物,并且旨在涵盖包含本文定义的酶混合物的其它适合的清洁组合物。当在下文中提及分散蛋白和蛋白酶的要求保护的组合中的"蛋白酶"时,该蛋白酶是本文定义的蛋白酶之一。此外,如果没有另外说明,则所有提及的与所公开的组合物相关的百分比均涉及相对于相应组合物的总重量的重量%。应当理解,当提及含有如本文所定义的酶的组合物时,相应的组合物含有至少一种每种指定的酶,但也可以包含两种或更多种每种酶类型,如两种或更多种分散蛋白和/或两种或更多种蛋白酶。
本发明进一步涉及组合物用于深度清洁物品的用途,其中所述物品是纺织品或表面。本发明进一步涉及清洁组合物用于深度清洁物品的用途,所述清洁组合物包含分散蛋白和蛋白酶以及任选存在的至少一种清洁组分,其中所述物品是纺织品或表面,并且其中所述蛋白酶如本文所定义。
本发明还涉及一种配制清洁组合物的方法,其包含将分散蛋白、蛋白酶和至少一种清洁组分组合。本发明还涉及用于深度清洁的试剂盒,其中所述试剂盒包含酶混合物的溶液,所述酶混合物包含分散蛋白和蛋白酶。
本发明还涉及一种深度清洁物品的方法,包含以下步骤:a)使所述物品与包含酶混合物的溶液接触,所述酶混合物包含分散蛋白、蛋白酶和清洁组分,其中所述清洁组分选自1-40重量%的至少一种表面活性剂、1-30重量%的至少一种助洗剂和1-20重量%的至少一种漂白组分;和b)任选地漂洗所述物品,其中所述物品优选为纺织品。
本发明还涉及一种深度清洁物品的方法,包含以下步骤:
a)使所述物品与清洁组合物接触,所述清洁组合物包含分散蛋白和蛋白酶以及任选存在的至少一种清洁组分;和
b)任选地漂洗所述物品,
其中所述物品优选为纺织品。
发明的详细说明
由于有机物质的复杂性质,这种有机物质的组分如生物膜和EPS(细胞外聚合物)构成了具有挑战性的污渍类型,并且可商购获得的清洁组合物不能有效地除去或减少EPS和/或生物膜相关的污渍。当一组微生物的细胞彼此粘附或粘附到表面如纺织品、餐具或硬表面时,可以产生生物膜。这些贴壁细胞通常包埋在细胞外聚合物(EPS)的自身产生的基质内,EPS构成生物膜的总有机物质的50%至90%。EPS主要由多糖(胞外多糖)和蛋白质组成,但包括其它大分子如eDNA、脂质和其它有机物质。这些蛋白质和多糖如PNAG难以用传统的清洁组合物除去。此外,有机物质如EPS或生物膜可能是粘性的或胶粘的,当存在于纺织品上时,其可能引起污垢的再沉积或回染,导致纺织品变灰。当脏的衣物物品与不太脏的衣物物品一起洗涤时,存在于洗涤液中的污垢倾向于粘附到有机物质如生物膜或生物膜组分上,因此衣物物品在洗涤后可能比洗涤前更"污染",这被称为再沉积。存在有机物质例如生物膜的另一个缺点是恶臭。
本发明的组合物包含分散蛋白和蛋白酶的共混物,并有效地从表面如纺织品和硬表面例如餐盘中减少或除去有机组分,如蛋白质和PNAG。
本发明的组合物包含分散蛋白和蛋白酶的共混物,并且当应用于例如洗衣过程中时有效地减少或限制再沉积。
本发明的组合物包含分散蛋白和蛋白酶的共混物,并且有效地减少或限制例如纺织品或硬表面如餐盘的恶臭。
本发明的组合物包含分散蛋白和蛋白酶的共混物并改善纺织品的白度。
本发明的组合物是包含至少一种分散蛋白和至少一种蛋白酶的清洁组合物,如本文所定义。有用的分散蛋白的实例在下文"具有氨基己糖苷酶活性的多肽"部分中提及。"具有蛋白酶活性的多肽"部分定义了与分散蛋白组合使用的蛋白酶。
如本文实施例所示,已经发现,与单独的酶相比,分散蛋白和蛋白酶的组合能够提供改善的纺织品的深度清洁。认为这可能是这些酶靶向的不同EPS组分位于复杂的大分子结构中的结果,所述大分子结构彼此屏蔽酶促水解,并且使用两种不同的酶允许这些复杂结构降解,从而促进EPS生物膜的除去。
具有氨基己糖苷酶活性的多肽(氨基己糖苷酶)
术语氨基己糖苷酶包括"分散蛋白"和缩写"Dsp",并且表示具有氨基己糖苷酶活性的多肽,EC3.2.1.-,其催化例如在生物膜中发现的N-乙酰基-葡萄糖胺聚合物的β-1,6-糖苷键的水解。术语氨基己糖苷酶包括具有N-乙酰氨基葡糖苷酶活性和β-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性的多肽。术语"具有氨基己糖苷酶活性的多肽"可以与术语氨基己糖苷酶互换使用,并且类似地,术语"具有β-N-乙酰氨基葡糖苷酶活性的多肽"可以与术语β-N-乙酰氨基葡糖苷酶互换使用。出于本发明的目的,根据试验II中描述的程序测定氨基己糖苷酶活性。在一个优选的实施方式中,具有氨基己糖苷酶活性的多肽是分散蛋白。在一个优选的实施方式中,具有氨基己糖苷酶活性的多肽是靶向聚-β-1,6-N-乙酰葡萄糖胺的β-N-乙酰氨基葡糖苷酶。
在一个实施方式中,本发明涉及包含如本文所定义的蛋白酶、氨基己糖苷酶(优选β-N-乙酰氨基葡糖苷酶,例如分散蛋白)和清洁组分的组合物。
本发明的一个实施方式涉及包含氨基己糖苷酶多肽,优选β-N-乙酰氨基葡糖苷酶,例如分散蛋白的组合物,其中所述多肽选自以下组:
a)与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
b)与SEQ ID NO:2中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
c)与SEQ ID NO:3中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
d)与SEQ ID NO:4中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
e)与SEQ ID NO:5中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
f)与SEQ ID NO:6中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
g)与SEQ ID NO:7中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
h)与SEQ ID NO:8中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
i)与SEQ ID NO:9中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
j)与SEQ ID NO:10中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
k)与SEQ ID NO:11中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
l)与SEQ ID NO:12中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
m)与SEQ ID NO:13中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
n)与SEQ ID NO:14中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
o)与SEQ ID NO:15中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
p)与SEQ ID NO:16中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
q)与SEQ ID NO:17中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,
r)与SEQ ID NO:18中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中所述多肽切割β-取代的N-乙酰基氨基葡糖苷,
s)与SEQ ID NO:19中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中所述多肽切割β-取代的N-乙酰基氨基葡糖苷,
t)与SEQ ID NO:20中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中所述多肽切割β-取代的N-乙酰基氨基葡糖苷,
u)与SEQ ID NO:21中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中所述多肽切割β-取代的N-乙酰基氨基葡糖苷,
v)与SEQ ID NO:22中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中所述多肽切割β-取代的N-乙酰基氨基葡糖苷,和
w)与SEQ ID NO:23中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中所述多肽切割β-取代的N-乙酰基氨基葡糖苷。
具有氨基己糖苷酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。优选靶向聚-β-1,6-N-乙酰葡萄糖胺例如分散蛋白的氨基己糖苷酶或β-N-乙酰氨基葡糖苷酶从土地芽孢杆菌属(Terribacillus)、短小杆菌属(Curtobacterium)、凝聚杆菌属(Aggregatibacter)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、放线杆菌属(Actinobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)或葡萄球菌属(Staphylococcus)获得,优选土地芽孢杆菌属或乳杆菌属。或者,其可以从例如奈瑟氏菌属(Neisseria)、海象狮科杆菌属(Otariodibacter)、乳球菌属(Lactococcus)、寒冷杆菌属(Frigoribacterium)、巴斯夫氏菌属(Basfia)、魏斯氏菌属(Weissella)、巨球菌属(Macrococcus)或明串珠菌属(Leuconostoc)获得。
在另一个实施方式中,多肽是凝聚杆菌属多肽,例如从伴放线凝聚杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:1具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从凝聚杆菌属,优选从伴放线凝聚杆菌获得。
在另一个实施方式中,多肽是嗜血杆菌属多肽,例如从痰嗜血杆菌(Haemophilussputorum)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:2具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从嗜血杆菌属,优选从痰嗜血杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是放线杆菌属多肽,例如从猪放线杆菌(Actinobacillus suis)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:3具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从放线杆菌属,优选从猪放线杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是放线杆菌属多肽,例如从荚膜放线杆菌(Actinobacillus capsulatus)DSM 19761获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:4具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从放线杆菌属,优选从荚膜放线杆菌DSM19761获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是放线杆菌属多肽,例如从马放线杆菌马亚种(Actinobacillus equuli subsp.equuli)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:5具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从放线杆菌属,优选从马放线杆菌马亚种获得。
在另一个实施方式中,多肽是凝聚杆菌属多肽,例如从伴放线凝聚杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:6具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从凝聚杆菌属,优选从伴放线凝聚杆菌获得。
在另一个实施方式中,多肽是凝聚杆菌属多肽,例如从伴放线凝聚杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:7具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从凝聚杆菌属,优选从伴放线凝聚杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是放线杆菌属多肽,例如从胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:8具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从放线杆菌属,优选从胸膜肺炎放线杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是短小杆菌属多肽,例如从海洋沉降短小杆菌(Curtobacterium oceanosedimentum)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:9具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从短小杆菌属,优选从海洋沉降短小杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是短小杆菌属多肽,例如从萎蔫短小杆菌(Curtobacterium flaccumfaciens)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:10具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从短小杆菌属,优选从萎蔫短小杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是短小杆菌属多肽,例如从藤黄短小杆菌(Curtobacterium luteum)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ IDNO:11具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从短小杆菌属,优选从藤黄短小杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是短小杆菌属多肽,例如从海洋沉降短小杆菌(Curtobacterium oceanosedimentum)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:12具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从短小杆菌属,优选从海洋沉降短小杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是短小杆菌属多肽,例如从短小杆菌属leaf154获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:13具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从短小杆菌属,优选从短小杆菌属leaf154获得。
在另一个实施方式中,具有氨基己糖苷酶活性的多肽是土地芽孢杆菌属多肽,例如从嗜糖土地芽孢杆菌(Terribacillus saccharophilus)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:14具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从土地芽孢杆菌属,优选从嗜糖土地芽孢杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是土地芽孢杆菌属多肽,例如从哥里土地芽孢杆菌(Terribacillus goriensis)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQID NO:15具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从土地芽孢杆菌属,优选从哥里土地芽孢杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是土地芽孢杆菌属多肽,例如从嗜糖土地芽孢杆菌获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:16具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从土地芽孢杆菌属,优选从嗜糖土地芽孢杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是土地芽孢杆菌属多肽,例如从嗜糖土地芽孢杆菌获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:17具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从土地芽孢杆菌属,优选从嗜糖土地芽孢杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是土地芽孢杆菌属多肽,例如从嗜糖土地芽孢杆菌获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:18具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从土地芽孢杆菌属,优选从嗜糖土地芽孢杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是乳杆菌属多肽,例如从类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:19具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从乳杆菌属,优选从类植物乳杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是乳杆菌属多肽,例如从瑞典北部蜜蜂乳杆菌(Lactobacillus apinorum)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ IDNO:20具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从乳杆菌属,优选从瑞典北部蜜蜂乳杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是乳杆菌属多肽,例如从类植物乳杆菌获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ ID NO:21具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从乳杆菌属,优选从类植物乳杆菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是葡萄球菌属多肽,例如从科氏葡萄球菌(Staphylococcus cohnii)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQ IDNO:22具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从葡萄球菌属,优选从科氏葡萄球菌获得。
在另一个实施方式中,所述多肽是葡萄球菌属多肽,例如从福氏葡萄球菌(Staphylococcus fleurettii)获得的多肽。在一个优选的实施方式中,所述多肽是与SEQID NO:23具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且从葡萄球菌属,优选从福氏葡萄球菌获得。
可用于本发明的多肽属于糖苷水解酶家族20(GH20,www.cazy.org)。该家族包括分散蛋白如分散蛋白B(DspB),其是属于糖苷水解酶20家族的β-N-乙酰氨基葡糖苷酶。
氨基己糖苷酶可以以0.01至1000ppm、1ppm至1000ppm、10ppm至1000ppm、50ppm至1000ppm、100ppm至1000ppm、150ppm至1000ppm、200ppm至1000ppm、250ppm至1000ppm、250ppm至750ppm、250ppm至500ppm的水平包括在本发明的清洁组合物中。
氨基己糖苷酶可以以0.00001ppm至10ppm、0.00002ppm至10ppm、0.0001ppm至10ppm、0.0002ppm至10ppm、0.001ppm至10ppm、0.002ppm至10ppm、0.01ppm至10ppm、0.02ppm至10ppm、0.1ppm至10ppm、0.2ppm至10ppm、0.5ppm至5ppm的水平包括在洗涤液溶液中。
以上的分散蛋白可以与以下任何蛋白酶组合以形成要添加到根据本发明的组合物中的共混物。在各种实施方式中,分散蛋白是与SEQ ID NO:17中所示的多肽具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
具有蛋白酶活性的多肽
通常,适合的蛋白酶可以是任何来源的,但优选是细菌或真菌来源的,任选以蛋白质工程化或化学修饰的突变体的形式。蛋白酶可以是碱性蛋白酶,如丝氨酸蛋白酶。
根据本发明,可用于本发明的蛋白酶选自以下组:
在本发明的一个实施方式中,所述蛋白酶包含如下氨基酸序列,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99E与选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代的组合,其中位置编号根据SEQ ID NO:24。
在本发明的另一个实施方式中,所述蛋白酶包含如下氨基酸序列,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99D与选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代的组合,其中位置编号根据SEQ ID NO:24。
特别优选的是下述蛋白酶:
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99E与氨基酸取代S3T和V4I的组合,优选具有氨基酸取代S3T、V4I和R99E的根据SEQ ID NO:24的蛋白酶。
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99E与氨基酸取代S3T和V199I的组合,优选具有氨基酸取代S3T、V199I和R99E的根据SEQ ID NO:24的蛋白酶。
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99E与氨基酸取代V4I和V199I的组合,优选具有氨基酸取代V4I、R99E和V199I的根据SEQ ID NO:24的蛋白酶。
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99D与氨基酸取代S3T和V4I的组合,优选具有氨基酸取代S3T、V4I和R99D的根据SEQ ID NO:24的蛋白酶。
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99D与氨基酸取代S3T和V199I的组合,优选具有氨基酸取代S3T、V199I和R99D的根据SEQ ID NO:24的蛋白酶。
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99D与氨基酸取代V4I和V199I的组合,优选具有氨基酸取代V4I、R99D和V199I的根据SEQ ID NO:24的蛋白酶。
进一步特别优选的蛋白酶的特征在于它们包含与所有三个氨基酸取代S3T、V4I和V199I组合的氨基酸取代R99E或R99D。因此,下述蛋白酶是最优选的:
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99E与氨基酸取代S3T、V4I和V199I的组合,优选具有氨基酸取代S3T、V4I、R99E和V199I的根据SEQID NO:24的蛋白酶。这种蛋白酶列出在SEQ ID NO:25中。
包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99D与氨基酸取代S3T、V4I和V199I的组合,优选具有氨基酸取代S3T、V4I、R99D和V199I的根据SEQID NO:24的蛋白酶。这种蛋白酶列出在SEQ ID NO:26中。
进一步优选的蛋白酶是如上所述的那些,其另外包含在根据SEQ ID NO:24的位置编号中的位置211处的氨基酸亮氨酸(L)。
可替代地或另外地,蛋白酶的特征可以在于,其可通过片段化、缺失、插入或取代诱变从根据本发明的蛋白酶获得,并且包含这样的氨基酸序列,该氨基酸序列在至少50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、265或266个连续氨基酸的氨基酸序列的长度上与起始分子的氨基酸序列相同,其中根据本发明的氨基酸取代,即R99E或R99D与S3T、V4I和V199I的至少两个的组合,是不变的,并且仍然是蛋白酶的一部分。
可替代地或另外地,蛋白酶的特征可以在于,其可通过根据比对在对应于SEQ IDNO:24中的位置36、42、47、56、61、69、87、96、101、102、104、114、118、120、130、139、141、142、154、157、188、193、205、211、224、229、236、237、242、243、255和268的位置处的一个或多个氨基酸取代而从根据本发明的蛋白酶获得,其中根据本发明的氨基酸取代,即R99E或R99D与S3T、V4I和V199I的至少两个的组合,是不变的,并且仍然是蛋白酶的一部分。
比对通常基于成熟蛋白酶,并且如果本发明的蛋白酶的氨基酸编号高于SEQ IDNO:24的蛋白酶的氨基酸编号,则也适用。
因此,衍生自迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)的蛋白酶的序列改变(特别是取代)的优选位置(因为这些位置可以赋予蛋白酶有利的性质,它们在本发明的蛋白酶的相应同源位置中是相关的)是对应于SEQ ID NO:24的位置36、42、47、56、61、69、87、96、101、102、104、114、118、120、130、139、141、142、154、157、188、193、205、211、224、229、236、237、242、243、255和268的那些位置,如在适当的比对中所鉴定的。野生型分子在那些位置包含下述氨基酸残基:S36、N42、A47、T56、G61、T69、E87、A96、A101、I102、S104、N114、H118、A120、S130、S139、T141、S142、S154、S157、A188、V193、G205、L211、A224、K229、S236、N237、N242、H243、N255和T268。
优选的是例如取代61A、154D、154E、A188P或V193M,只要相应的位置不天然地被这些优选的氨基酸中的任一个占据。
在本发明的各种实施方式中,以上描述的所有蛋白酶,即具有各种氨基酸取代或其它突变或是它们的片段,在其整个长度上相对于SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列仍然保留至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性。
在一个实施方式中,蛋白酶为与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,优选至少95%序列同一性,优选至少96%序列同一性,优选至少97%序列同一性,优选与SEQ IDNO:27具有至少98%序列同一性的蛋白酶,其中蛋白酶变体在位置101处具有谷氨酸残基(E),并且其中蛋白酶变体进一步包含选自以下的一个或多个取代:S156D;L262E;Q137H;S3T;R45E,D;P55N;T58W,Y,L;Q59D,M,N,T;G61D,R;S87E;G97S;A98D,E,R;S106A,W;N117E;H120V,D,K,N;S124M;P129D;E136Q;S143W;S161T;S163A,G;Y171L;A172S;N185Q;V199M;Y209W;M222Q;N238H;V244T;N261T;和L262N,Q,D。与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的蛋白酶相比,所述蛋白酶在液体洗涤剂组合物中具有增大的稳定性,并且其中所述位置对应于SEQ ID NO:28的位置。
在各种实施方式中,蛋白酶包含选自以下组的一个或多个取代:R45E,D,Q;T58L;G61D;S87E;G97S;A98E;S160A;N117E;H120D,K,V;P129D;E136Q;Q137H;S156D;S161T;S163A,G;V199M;M222Q;N261T和L262E,Q,N。该实施方式的优选蛋白酶的实例包括与SEQ IDNO:27具有至少90%序列同一性并且包含以下取代中的一个或多个的蛋白酶变体:R45E,D,Q;Q59D;T58L;G61D;S87E;G97S;A98E;S106A;N117E;H120D,K,V;P129D;E136Q;Q137H;S156D;S161T;S163A,G;V199M;M222Q;N261T;L262E,Q,N。
所述变体可以具有其他取代,例如本领域已知的取代,以赋予枯草杆菌酶变体特别有益的性质。在本领域已知的枯草杆菌酶中存在大量的取代,并且认为此类已知的取代可以用于本发明中,以便赋予包含在本发明的洗涤剂组合物中的变体此类已知的有益效果。本发明的枯草杆菌酶变体可以包含一个或多个可以在本发明中使用的其它取代,以便赋予另外的有益效果和/或改善现有效果如稳定性和洗涤性能。
优选的另外的突变包括下述取代中的一个或多个:V4I、N76D、V104T、N128Q、S141H、R145H、A194P、G195E、V205I、N218Q、A228V、N238E或S265H。
根据本发明的清洁组合物的特别优选的实例包含与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的枯草杆菌酶相比在液体洗涤剂中具有改善的稳定性和/或改善的洗涤性能的枯草杆菌酶变体,并且包括包含以下氨基酸序列的变体:
SEQ ID NO:27+S3T,
SEQ ID NO:27+R45E,D
SEQ ID NO:27+P55N,
SEQ ID NO:27+T58W,Y,L,
SEQ ID NO:27+Q59D,M,N,T,
SEQ ID NO:27+G61D,R,
SEQ ID NO:27+S87E,
SEQ ID NO:27+G97S,
SEQ ID NO:27+A98D,E,R,
SEQ ID NO:27+S106A,W,
SEQ ID NO:27+N117E,
SEQ ID NO:27+H120V,D,K,N,
SEQ ID NO:27+S124M,
SEQ ID NO:27+P129D
SEQ ID NO:27+E136Q,
SEQ ID NO:3+S143W,
SEQ ID NO:3+S161T,
SEQ ID NO:3+S163A,G,
SEQ ID NO.3+Y171L,
SEQ ID NO:27+A172S,
SEQ ID NO:27+N185Q,
SEQ ID NO:27+V199M,
SEQ ID NO:27+Y209W,
SEQ ID NO:27+M222Q,
SEQ ID NO:27+N238H,
SEQ ID NO:27+V244T,
SEQ ID NO:27+N261T,
SEQ ID NO:27+L262N,Q,D,E
SEQ ID NO:27+N76D+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S163G+N128Q+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+K27Q+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+V104T+H120D+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+G195E+V199M
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I
SEQ ID NO:27+H120D+A228V
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+A228V
SEQ ID NO:27+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+L262E
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Q137H+S141H+R145H+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+H120D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N62D+H120D
SEQ ID NO:27+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V205I+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+Q59D+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+A194P+G195E+V199M+V205I
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+H120D+Y209W
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N76D+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+H120D+P131F+A194P+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+E136H+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N218S+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N218Q+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N218A+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+K27Q+R45E
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+L262E
SEQ ID NO:27+R45E+A88S
SEQ ID NO:27+S87E+K237E
SEQ ID NO:27+N261D+L262E
SEQ ID NO:27+S87E+L262E
SEQ ID NO:27+S87E+N238E
SEQ ID NO:27+K27Q+S87E
SEQ ID NO:27+N76D+N117E
SEQ ID NO:27+H120D+N238E
SEQ ID NO:27+Q59D+L262E
SEQ ID NO:27+K27Q+L262E
SEQ ID NO:27+H120D+L262E
SEQ ID NO:27+K27Q+Q59D
SEQ ID NO:27+K27Q+S156D
SEQ ID NO:27+K27Q+G61D
SEQ ID NO:27+Q59D+N261D
SEQ ID NO:27+Q59D+N117E
SEQ ID NO:27+K237E+N261D
SEQ ID NO:27+Q59D+N238E
SEQ ID NO:27+A15T+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+L262E
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+Q59D+H120D
SEQ ID NO:27+G61D+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+H120D
SEQ ID NO:27+G61D+H120D
SEQ ID NO:27+P55S+H120D
SEQ ID NO:27+S163G+A228V
SEQ ID NO:27+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+S163G
SEQ ID NO:27+G61D+S163G
SEQ ID NO:27+S156D+S163G
SEQ ID NO:27+Q59D+S163G
SEQ ID NO:27+N76D+S163G
SEQ ID NO:27+P55S+S163G
SEQ ID NO:27+H120D+S163G
SEQ ID NO:27+T58L+Q59D
SEQ ID NO:27+P55S+T58L
SEQ ID NO:27+T58L+G97D
SEQ ID NO:27+T58L+S106A
SEQ ID NO:27+T58L+A228V
SEQ ID NO:27+S3T+T58L
SEQ ID NO:27+T58L+S156D
SEQ ID NO:27+T58L+Y91H
SEQ ID NO:27+T58L+H120D
SEQ ID NO:27+T58L+S163G
SEQ ID NO:27+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+T58L+N261D
SEQ ID NO:27+T58L+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+A228V
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W+V244T
SEQ ID NO:27+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+N76D+S156D
SEQ ID NO:27+H120D S156D
SEQ ID NO:27+R45E+L262E
SEQ ID NO:27+Q59D+G61D
SEQ ID NO:27+S87E+L262E
SEQ ID NO:27+G61D+L262E
SEQ ID NO:27+Q59D+L262E
SEQ ID NO:27+R45E+Q59D
SEQ ID NO:27+Q59D+S156D
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+S163G+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+Y91H+N117H+N238H
SEQ ID NO:27+T58L+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S87E+S163G+L262E
SEQ ID NO:27+S156D+S163G+L262E
SEQ ID NO:27+T58LS163G+N261D
SEQ ID NO:27+S156DS163G+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W+N261D+L262E
作为与亲本酶相比在液体洗涤剂中具有改善的稳定性和改善的洗涤性能的优选变体的实例,可以提及:
SEQ ID NO:27+R45E,D,Q
SEQ ID NO:27+Q58L
SEQ ID NO:27+Q59D,
SEQ ID NO:27+G61D,
SEQ ID NO:27+S87E,
SEQ ID NO:27+G97S,
SEQ ID NO:27+A98E,
SEQ ID NO:27+N117E,
SEQ ID NO:27+H120D,K,V
SEQ ID NO:27+P129D,
SEQ ID NO:27+E136Q,
SEQ ID NO:27+Q137H,
SEQ ID NO:27+S156D,
SEQ ID NO:27+S160A,
SEQ ID NO:27+S163A,G,
SEQ ID NO:27+V199M
SEQ ID NO:27+M222Q
SEQ ID NO:27+N261T
SEQ ID NO:27+L262E,Q,N。
与亲本枯草杆菌酶相比,这些优选的变体具有改善的稳定性,如洗涤剂稳定性和/或改善的或同等的洗涤性能。在这方面,改善的洗涤性能旨在表示变体的洗涤性能在至少一种污渍上比亲本枯草杆菌酶的洗涤性能更高,其中洗涤性能是在合适的条件下在给定的洗涤剂组合物中使用合适的洗涤性能试验来确定的。
枯草杆菌酶变体可以进一步在一个或多个(例如若干个)其它位置处包含一个或多个另外的改变,所述其它位置选自以下位置:位置3、4、9、12、14、15、40、43、68、72、79、86、88、92、98、99、101、120、146、183、184、188、194、216、218、224、228、236、245、255、261、267和270,优选位置9、15、68和/或120(根据SEQ ID NO:29编号)。本领域技术人员将清楚,如果位置已经被改变一次,则它将不会被第二次改变。在一个优选的实施方式中,在选自3、4、9、12、14、15、40、43、68、72、79、86、88、92、98、99、101、120、146、183、184、188、194、216、218、224、228、236、245、255、261、267和270的任何位置处的改变是取代。在一个更优选的实施方式中,枯草杆菌酶变体进一步包含一个或多个选自以下组的取代:3{D,E,L}、4I、9{H,K,R,G}、12{D,E}、14T、15{G,M,S,T}、40{A,G,M,S,T}、43{D,E}、63G、68{A,G,I,L,M,S,T}、72{V,L}、N76{D,E}、79T、86H、88V、92S、98T、99{E,T,A,G,M,D}、101L、120{I,N}、146S、183{E,D}、184{E,D}、188G、194P、216{D,E}、218{E,D}、224{S,A,T,G,M}、228T、236D、245{H,K,R}、255{D,E}、261{D,E}、267{I,L,V}和/或270{G,M,S,T}(根据SEQ ID NO:29编号)。在一个甚至更优选的实施方式中,在SEQ ID NO:27的成熟多肽中或与其具有至少60%、优选至少70%、优选至少80%、优选至少90%、优选至少95%序列同一性的多肽中,枯草杆菌酶变体进一步包含一个或多个选自以下组的取代:S3{D,E,L}、V4I、S9{H,K,R,G}、Q12{D,E}、P14T、A15{G,M,S,T}、P40{A,G,M,S,T}、N43{D,E}、V68{A,G,I,L,M,S,T}、I72{V,L}、N76{D,E}、I79T、P86H、A88V、A92S、A98T、S99{E,T,A,G,M,D}、S101L、H120{I,N}、G146S、N183{E,D}、N184{E,D}、S188G、A194P、S216{D,E}、N218{E,D}、T224{S,A,T,G,M}、A228T、S236D、Q245{H,K,R}、T255{D,E}、N261{D,E}、L267{I,L,V}和/或A270{G,M,S,T},其中每个位置对应于SEQ ID NO:28的成熟多肽的相应位置。
氨基酸改变可以是次要性质的,即不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;通常为1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基或羧基末端延伸,如氨基末端甲硫氨酸残基;最多20-25个残基的小连接肽;或通过改变净电荷或另一功能促进纯化的小延伸,如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域。
保守取代的实例在以下组内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。通常不改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的,并且描述于例如H.Neurath和R.L.Hill,1979,In,The Proteins,Academic Press,New York。常见的取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
或者,氨基酸改变具有改变多肽的物理化学性质的特性。例如,氨基酸改变可以改善多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最佳的pH等。
多肽中的必需氨基酸可以根据本领域已知的程序鉴定,例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变。在后一种技术中,在分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变,并测试所得到的突变分子的蛋白酶活性以鉴定对分子活性至关重要的氨基酸残基。酶的活性位点或其他生物相互作用也可以通过结构的物理分析来确定,如通过诸如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记的技术结合推定的接触位点氨基酸的突变来确定。对于BPN'(SEQ ID NO:28),包含氨基酸S221、H64和D32的催化三联体对于酶的蛋白酶活性是必需的。
枯草杆菌酶变体可以由150至350,例如175至330、200至310、220至300、240至290、260至280或269、270、271、272、273、274或275个氨基酸组成。
根据一个实施方式和/或根据上述实施方式中的任一项,本发明涉及包含枯草杆菌酶变体的洗涤剂组合物,所述枯草杆菌酶变体与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,其中所述变体在对应于SEQ ID NO:28的位置101的位置处具有谷氨酸残基(E),并且其中所述变体与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的枯草杆菌酶相比具有降低的纤维素结合。一个实施方式涉及包含与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性的枯草杆菌酶变体的洗涤剂组合物,其中所述变体在对应于SEQ ID NO:28的位置101的位置处具有谷氨酸残基(E),并且其中所述变体与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的枯草杆菌酶相比具有降低的纤维素结合,并且其中所述变体包含蛋白酶表面上的带正电的氨基酸残基被中性或带负电的残基取代;或蛋白酶表面上的中性残基被带负电的残基取代。根据一个实施方式和/或上述实施方式中的任一项,本发明涉及包含枯草杆菌酶变体的洗涤剂组合物,所述枯草杆菌酶变体与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,其中所述变体在对应于SEQ ID NO:28的位置101的位置处具有谷氨酸残基(E),并且其中所述变体与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的枯草杆菌酶相比具有降低的纤维素结合,和/或其中所述变体包含蛋白酶表面上的带正电的氨基酸残基被中性或带负电的残基取代;或所述蛋白酶表面上的中性残基被带负电的残基取代,其中所述枯草杆菌酶变体包含选自以下组的取代:V4D,E,I、R10N,Q,D,E,S、H17D、K27S,N,Q,E,D、N43E、I44V、R45E,D,Q,N、G46D、S49N,D、P52E、G53D,E、Q59D、G61D、N62D、L75D、N76D、I79D、S87E、G97D、A98E、*103aE、I104T、N117E、H120D、E136K,Q、S156D、R170E,Q,N,D,S、N185D、G195E、N218A、K235L,W,N,Q,E,S、K237N,Q,D,E,S、N238D,E、V244D、R246Q,E,D、R247S,E、Q、D、K251S,D,Q,E,N、N261D、L262D,E和S265H,优选所述取代选自N117E、S156D、N238E、N261D和L262E,并且优选所述变体进一步包含选自以下的取代:S3T、N128Q、Q137H、S141H、R145H、S163G、A194P、V199M、V205I、N218Q或A228V。
根据一个实施方式和/或根据上述实施方式中的任一项,本发明涉及包含枯草杆菌酶变体的洗涤剂组合物,所述枯草杆菌酶变体与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,其中所述变体在对应于SEQ ID NO:28的位置101的位置处具有谷氨酸残基(E),其中所述变体与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的枯草杆菌酶相比具有降低的纤维素结合,并且其中所述枯草杆菌酶变体进一步包含选自以下的取代:N117E+S3T、S156D+S3T、N238E+S3T、N261D+S3T、L262E+S3T、N117E+N128Q、S156D+N128Q、N238E+N128Q、N261D+N128Q、L262E+N128Q、N117E+Q137H、S156D+Q137H、N238E+Q137H、N261D+Q137H、L262E+Q137H、N117E+S141H、S156D+S141H、N238E+S141H、N261D+S141H、L262E+S141H、N117E+R145H、S156D+R145H、N238E+R145H、N261D+R145H、L262E+R145H、N117E+S163G、S156D+S163G、N238E+S163G、N261D+S163G、L262E+S163G、N117E+A194P、S156D+A194P、N238E+A194P、N261D+A194P、L262E+A194P、N117E+V199M、S156D+V199M、N238E+V199M、N261D+V199M、L262E+V199M、N117E+V205I、S156D+V205I、N238E+V205I、N261D+V205I、L262E+V205I、N117E+N218Q、S156D+N218Q、N238E+N218Q、N261D+N218Q、L262E+N218Q、N117E+A228V、S156D+A228V、N238E+A228V、N261D+A228V、L262E+A228V。
根据一个实施方式和/或根据上述实施方式中的任一项,本发明涉及包含枯草杆菌酶变体的洗涤剂组合物,所述枯草杆菌酶变体与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,其中所述变体在对应于SEQ ID NO:28的位置101的位置处具有谷氨酸残基(E),其中所述变体与具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的枯草杆菌酶相比具有降低的纤维素结合,并且其中所述枯草杆菌酶变体进一步包含选自以下的取代:
SEQ ID NO:27+V4D,E,I
SEQ ID NO:27+R10N,Q,D,E,S,
SEQ ID NO:27+H17D,
SEQ ID NO:27+K27S,N,Q,E,D,
SEQ ID NO:27+R45E,D,Q,N,
SEQ ID NO:27+G53D,
SEQ ID NO:27+Q59D,
SEQ ID NO:27+G61D,
SEQ ID NO:27+L75D,
SEQ ID NO:27+N76D,
SEQ ID NO:27+I79D,
SEQ ID NO:27+S87E,
SEQ ID NO:27+G97D,
SEQ ID NO:27+A98E,
SEQ ID NO:27+*103aE,
SEQ ID NO:27+N117E,
SEQ ID NO:27+H120D,
SEQ ID NO:27+E136K,Q,
SEQ ID NO:27+S156D,
SEQ ID NO:27+R170E,Q,N,D,
SEQ ID NO:27+N185D,
SEQ ID NO:27+G195E,
SEQ ID NO:27+K235L,W,N,Q,E,S,
SEQ ID NO:27+K237N,Q,D,E,S,
SEQ ID NO:27+N238D,E,
SEQ ID NO:27+V244D
SEQ ID NO:27+R246Q,E,D,
SEQ ID NO:27+R247S,E,
SEQ ID NO:27+K251S,D,Q,E,N,
SEQ ID NO:27+N261D,
SEQ ID NO:27+L262D,E
SEQ ID NO:27+S265H
SEQ ID NO:27+A194P+G195E
SEQ ID NO:27+G195E+V199M
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+N76D+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+K27Q+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+V104T+H120D+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+V104T+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+A228V;
SEQ ID NO:27+H120D S163G N261D
SEQ ID NO:27+N76D+S101E+A228V+L262E;
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Q137H+S141H+R145H+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+H120D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I;
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+A194P+G195E+V199M+V205I;
SEQ ID NO:27+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+N76D+A228V;
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N261D;
SEQ ID NO:27+H120D+A228V;
SEQ ID NO:27+N76D+N261D;
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V205I+A228V;或
SEQ ID NO:27+H120D+N261D。
优选所述变体选自由以下组:
SEQ ID NO:27+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+A228V;
SEQ ID NO:27+G195E+V199M
SEQ ID NO:27+H120D S163G N261D
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+H120D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Q137H+S141H+R145H+S156D+Y209W,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:28中的位置,并且其中所述枯草杆菌酶变体与SEQ ID NO:27具有至少60%,如至少70%、如至少80%、如至少90%、如至少95%、如至少98%或如至少99%序列同一性。
在另一个实施方式中,所述蛋白酶是包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:30所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且在对应于SEQ ID NO:30的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置中包含氨基酸取代。
在各种实施方式中,氨基酸取代选自以下组:I2L、43V、122L、127P、154S、156A、16OS、211N、211L、212D、212H和222S,特别是Q12L、I43V、M122L、D127P、N154S、T156A、G160S、M211N、M211L、P212D、P212H和A222S。
在各种实施方式中,蛋白酶包含以下组的氨基酸取代中的至少一个:(1)I43V;(2)M122L、N154S和T156A;(3)M211N和P212D;(4)M211L和P212D;(5)G160S;(6)D127P、M211L和P212D;(7)P212H;或(8)Q12L、M122L和A222S,其中编号是根据SEQ ID NO:30。
此类示例性的蛋白酶的氨基酸序列列出在SEQ ID NO:31-38中。
在另一个实施方式中,所述蛋白酶是包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:39所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、98.8%、99.0%、99.2%、99.4%或99.5%的序列同一性,并且包含(i)在对应于SEQ ID NO:39的位置3、4、99和199的位置处的氨基酸取代3T、4I、99E和199I中的至少两个,和(ii)在对应于SEQ ID NO:39的位置74、136、143、154、161、163、171、200、203、209、212或256的至少一个位置中的至少一个氨基酸取代,优选至少一个选自74D、74E、74Q、136Q、143L、143W、143Y、154D、154Q、161T、163G、171L、200A、200L、200S、200T、203K、203V、203W、209W、212N、212S、212T、256D、256E或256Q的氨基酸取代。此类蛋白酶相对于野生型(SEQ ID NO:39)或其他变体具有改善的稳定性和/或性能,因此特别适合用于清洁组合物。
在各种实施方式中,所述蛋白酶是包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:39所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、98.8%、99.0%、99.2%、99.4%或99.5%的序列同一性,并且包含(i)在对应于SEQ ID NO:39的位置3、4、99和199的位置处的氨基酸取代3T、4I、99E和199I中的至少三个,和(ii)在对应于SEQ ID NO:39的位置74、136、143、154、161、163、171、200、203、209、212或256的至少一个位置中的至少一个氨基酸取代,优选至少一个选自74D、74E、74Q、136Q、143L、143W、143Y、154D、154Q、161T、163G、171L、200A、200L、200S、200T、203K、203V、203W、209W、212N、212S、212T、256D、256E或256Q的氨基酸取代。
在各种实施方式中,所述蛋白酶是包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:39所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、98.8%、99.0%、99.2%、99.4%或99.5%的序列同一性,并且包含(i)在对应于SEQ ID NO:39的位置3、4、99和199的位置处的氨基酸取代3T、4I、99E和199I,和(ii)在对应于SEQ ID NO:39的位置74、136、143、154、161、163、171、200、203、209、212或256的至少一个位置中的至少一个氨基酸取代,优选至少一个选自74D、74E、74Q、136Q、143L、143W、143Y、154D、154Q、161T、163G、171L、200A、200L、200S、200T、203K、203V、203W、209W、212N、212S、212T、256D、256E或256Q的氨基酸取代。
在所描述的位置中,野生型蛋白酶(SEQ ID NO:39)包含氨基酸残基:N74、A136、R143、S154、Y161、A163、V171、Q200、Y203、A209、N212、L256。
示例性变体包含以下取代组:(i)S3T+V4I+R99E+V199I+Q200L+Y203W;(ii)S3T+V4I+R99E+V199I+N212S;(iii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D;(iv)S3T+V4I+R99E+V199I+S154D+L256E;(v)S3T+V4I+R99E+V199I+Q200L+Y203W+S154D+L256E;(vi)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+Q200L+Y203W;(vii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+S154D+Q200L+Y203W+L256E;(viii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+N212S;(ix)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+S154D+Y203W+L256E;(x)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+Y203W;(xi)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+S154D+Q200L+L256E;(xii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+Q200L;(xiii)S3T+V4I+R99E+V199I+S154D+Q200L+Y203W;(xiv)S3T+V4I+R99E+V199I+Q200L+Y203W+L256E;(xv)S3T+V4I+R99E+V199I+A136Q+R143W+Y161T+Q200L;(xvi)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+R143Y+A209W+N212S+L256E;(xvii)S3T+V4I+R99E+V199I+A136Q+S154D+V171L+Q200L,其中编号根据SEQ ID NO:39。
组合物
本发明涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含根据所附权利要求的分散蛋白和蛋白酶。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白、蛋白酶和任选存在的至少一种清洁组分。蛋白酶是在标题"具有蛋白酶活性的多肽"下提及的任何蛋白酶。
认为本文所述的蛋白酶可以与分散蛋白协同作用于减少和除去生物膜或其组分。生物膜是包含例如蛋白质和PNAG的复杂结构,其中靶向底物例如PNAG可以包埋在生物膜结构中,并且相信当分散蛋白和蛋白酶一起作用于生物膜结构的相应部分时,可以更有效地除去PNAG和蛋白质组分。因此,有利的是将分散蛋白与蛋白酶一起配制在清洁组合物中,例如用于深度清洁。
因此,本发明的一个方面涉及一种配制清洁组合物的方法,所述方法包含将如本文所定义的分散蛋白、蛋白酶和至少一种清洁组分组合。本发明还涉及用于深度清洁的试剂盒,其中所述试剂盒包含酶混合物的溶液,所述酶混合物包含如本文所定义的分散蛋白和蛋白酶。
因此,如上所述,蛋白酶应与清洁组分相容,同样地,与蛋白酶一起配制或与蛋白酶一起使用的分散蛋白也应与清洁组分相容。分散蛋白目前不是清洁组合物中的标准成分。然而,申请人已经确定了适合用于清洁组合物的分散蛋白,例如在WO 2017/186936、WO2017/186937和WO 2017/186943中确定。酶如分散蛋白不仅应与清洁组分相容,而且分散蛋白还应与可存在于典型清洁组合物中的其它酶相容。众所周知,蛋白酶可能对其他酶的性能产生负面影响,因为蛋白酶可能降解这些酶(本身是蛋白质)。令人惊讶的是,已经发现蛋白酶和分散蛋白不仅是相容的,而且甚至可以在生物膜污渍减少和除去方面(例如在深度清洁中)协同作用。
特别有用的分散蛋白可以是微生物来源的那些。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中分散蛋白是微生物的,优选从细菌或真菌获得。在一个实施方式中,如本文所定义的清洁组合物包含来自细菌的分散蛋白。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白从土地芽孢杆菌属、短小杆菌属、凝聚杆菌属、嗜血杆菌属、放线杆菌属、乳杆菌属或葡萄球菌属,优选土地芽孢杆菌属或乳杆菌属获得。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含土地芽孢杆菌属分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含短小杆菌属分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含凝聚杆菌属分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含嗜血杆菌属分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含放线杆菌属分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含乳杆菌属分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含葡萄球菌属分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含含有SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的多肽或由其组成,并且其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含如上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的蛋白酶和具有分散蛋白活性的多肽,其中所述多肽选自以下组:
a)与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
b)与SEQ ID NO:2中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
c)与SEQ ID NO:3中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
d)与SEQ ID NO:4中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
e)与SEQ ID NO:5中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
f)与SEQ ID NO:6中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
g)与SEQ ID NO:7中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
h)与SEQ ID NO:8中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
i)与SEQ ID NO:9中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
j)与SEQ ID NO:10中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
k)与SEQ ID NO:11中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
l)与SEQ ID NO:12中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
m)与SEQ ID NO:13中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
n)与SEQ ID NO:14中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
o)与SEQ ID NO:15中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
p)与SEQ ID NO:16中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
q)与SEQ ID NO:17中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
r)与SEQ ID NO:18中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
s)与SEQ ID NO:19中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
t)与SEQ ID NO:20中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
u)与SEQ ID NO:21中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
v)与SEQ ID NO:22中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,和
w)与SEQ ID NO:23中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽,
其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述组合物优选包含至少一种清洁组分。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中所述分散蛋白包含多肽或由多肽组成,所述多肽选自包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:21、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列的多肽,并且其中所述蛋白酶包含上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的氨基酸序列中的任一种或由其组成。
一个实施方式涉及如本文所定义的组合物,其包含
a)至少0.001ppm的至少一种具有分散蛋白活性的多肽,其中所述分散蛋白选自以下组:
i.从土地芽孢杆菌属获得的分散蛋白;
ii.从短小杆菌属获得的分散蛋白;
iii.从凝聚杆菌属获得的分散蛋白;
iv.从嗜血杆菌属获得的分散蛋白;
v.从放线杆菌属获得的分散蛋白;
vi.从乳杆菌属获得的分散蛋白;
vii.从葡萄球菌属获得的分散蛋白;
viii.具有氨基己糖苷酶活性的多肽,其选自:与SEQ ID NO:1中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:2中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:3中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQID NO:4中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:5中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:6中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:7中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:8中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:9中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:10中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:11中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:12中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ IDNO:13中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:92中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:15中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:16中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:17中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:18中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:19中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:20中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:21中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ IDNO:22中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,与SEQ ID NO:23中所示的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性的多肽,和
b)至少0.01ppm的至少一种蛋白酶,其中所述蛋白酶选自上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分中描述的那些中的任一种,以及任选地,
c)至少一种另外的组分,例如清洁组分,优选选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
蛋白酶和分散蛋白可以以0.01至1000ppm、1ppm至1000ppm、10ppm至1000ppm、50ppm至1000ppm、100ppm至1000ppm、150ppm至1000ppm、200ppm至1000ppm、250ppm至1000ppm、250ppm至750ppm、250ppm至500ppm的水平包括在本发明的清洁组合物中。
以上的分散蛋白可以与蛋白酶组合以形成要添加到洗涤液溶液的共混物。分散蛋白在洗涤液溶液中的浓度通常在洗涤液的0.00001ppm至10ppm、0.00002ppm至10ppm、0.0001ppm至10ppm、0.0002ppm至10ppm、0.001ppm至10ppm、0.002ppm至10ppm、0.01ppm至10ppm、0.02ppm至10ppm、0.1ppm至10ppm、0.2ppm至10ppm、0.5ppm至5ppm的范围内。蛋白酶在洗涤液溶液中的浓度通常在洗涤液的0.00001ppm至10ppm、0.00002ppm至10ppm、0.0001ppm至10ppm、0.0002ppm至10ppm、0.001ppm至10ppm、0.002ppm至10ppm、0.01ppm至10ppm、0.02ppm至10ppm、0.1ppm至10ppm、0.2ppm至10ppm、0.5ppm至5ppm的范围内。
分散蛋白可以与以上描述的任何蛋白酶组合以形成要添加到根据本发明的组合物中的共混物。
一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶,其中分散蛋白在所述组合物中的量为0.01至1000ppm,并且蛋白酶的量为0.01至1000ppm。
除蛋白酶和分散蛋白之外,所述清洁组合物可以进一步包含至少一种清洁组分。一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物,其包含分散蛋白、蛋白酶和至少一种清洁组分,其中所述清洁组分选自表面活性剂,优选阴离子和/或非离子表面活性剂,助洗剂和漂白组分。
对于纺织品护理,清洁组分的选择可包括考虑待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁的温度和洗涤剂产品的配方。尽管下面提到的组分根据特定功能通过通用标题分类,但这不应被解释为限制,因为组分可以包括如本领域技术人员将理解的另外的功能。
表面活性剂
清洁组合物可包含一种或多种表面活性剂,其可以是阴离子和/或阳离子和/或非离子和/或半极性和/或两性离子的,或其混合物。在一个特定实施方式中,洗涤剂组合物包括一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。一种或多种表面活性剂通常以按重量计约0.1%至60%,如约1%至约40%、或约3%至约20%、或约0.1%至约15%或约3%至约10%的水平存在。如本文关于数值所使用的"约"表示所述值±10%,优选±5%。因此,"约5重量%"表示4.5至5.5重量%,优选4.75至5.25重量%。一种或多种表面活性剂基于期望的清洁应用来选择,并且可以包括本领域已知的任何常规表面活性剂。
被包括在其中时,所述洗涤剂将通常含有按重量计约1%至约40%的阴离子表面活性剂,如约5%至约30%,包括约5%至约15%、或约15%至约20%、或约20%至约25%的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐,特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基烷烃磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃(olefin)磺酸盐、烯烃(alkene)磺酸盐、烷烃-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基烷烃磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷烃磺酸盐(SAS)、链烷烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化脂肪酸甘油酯、包括甲酯磺酸盐(MES)的α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)、烷基或烯基琥珀酸、十二碳烯基/十四碳烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)和它们的组合。
当被包括在其中时,所述洗涤剂将通常含有按重量计约1%至约40%的阳离子表面活性剂,例如约0.5%至约30%,特别是约1%至约20%、约3%至约10%,如约3%至约5%、约8%至约12%或约10%至约12%。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇胺季铵盐(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂基氯化铵(DSDMAC)和烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵盐以及它们的组合。
当被包括在其中时,所述洗涤剂将通常含有按重量计约0.2%至约40%的非离子表面活性剂,例如约0.5%至约30%,特别是约1%至约20%、约3%至约10%,如约3%至约5%、约8%至约12%或约10%至约12%。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯,如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺,GA,或脂肪酸葡糖酰胺,FAGA),以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品,和它们的组合。
当包括在其中时,所述洗涤剂将通常含有按重量计约0.01%至约10%的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括胺氧化物(AO),如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛脂-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺和它们的组合。
当包括在其中时,所述洗涤剂将通常含有按重量计约0.01%至约10%的两性离子表面活性剂。两性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱,如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、以及它们的组合。
优选的阴离子表面活性剂是硫酸盐表面活性剂,特别是烷基醚硫酸盐,尤其是C9-C15醇醚硫酸盐,优选乙氧基化物或混合的乙氧基化物/丙氧基化物,如具有1至30个EO的那些,C12-C15伯醇乙氧基化物,如具有1至30个EO的那些,C8-C16酯硫酸盐和C10-C14酯硫酸盐,如单十二烷基酯硫酸盐。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐,特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS),特别是C12-C13烷基苯磺酸盐、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基烷烃磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃(olefin)磺酸盐、烯烃(alkene)磺酸盐、烷烃-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基烷烃磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷烃磺酸盐(SAS)、链烷烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化脂肪酸甘油酯、包括甲酯磺酸盐(MES)的α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)、烷基或烯基琥珀酸、十二碳烯基/十四碳烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸的盐(皂)和它们的组合。阴离子表面活性剂优选以盐的形式添加到洗涤剂中。这些盐中适合的阳离子是碱金属离子,如钠、钾和锂,以及铵盐,例如(2-羟乙基)铵盐、双(2-羟乙基)铵盐和三(2-羟乙基)铵盐。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯,如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺,GA,或脂肪酸葡糖酰胺,FAGA),以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品,和它们的组合。可商购获得的非离子表面活性剂包括来自BASF的PlurafacTM、LutensolTM和PluronicTM系列,来自Cognis的DehyponTM系列和来自Clariant的GenapolTM系列。
在各种实施方式中,所述表面活性剂优选包含至少一种烷基醚硫酸盐。优选的烷基醚硫酸盐是式(I)的那些
R1-O-(AO)n-SO3 -X+ (I)。
在式(I)中,R1表示直链或支链、取代或未取代的烷基,优选直链、未取代的烷基,更优选脂肪醇部分。优选的R1部分选自癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基部分及它们的混合物,其中具有偶数个碳原子的那些基团是优选的。特别优选的R1部分衍生自C10-C18脂肪醇,如衍生自椰子油醇、牛油脂肪醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇或硬脂醇或衍生自C10-C20羰基合成醇的那些。
AO表示环氧乙烷(EO)或环氧丙烷(PO)基团,优选环氧乙烷基团。指数n表示1至50、优选1至20、更优选1至10的整数。特别优选n为1、2、3、4、5、6、7或8。X表示一价阳离子或n价阳离子的第n部分,优选碱金属阳离子,特别是Na+和K+,最优选Na+。另外的阳离子X+可以选自NH4 +、1/2Zn2+、1/2Mg2+、1/2Ca2+、1/2Mn2+和它们的组合。
在各种优选实施方式中,所述洗涤剂组合物包含选自式(II)的脂肪醇醚硫酸盐的烷基醚硫酸盐,
其中k=9至19,和n=1、2、3、4、5、6、7或8。优选具有1-7个EO的C10-16脂肪醇醚硫酸盐(k=9-15,n=1-7),如具有1-3个、特别是2个EO的C12-14脂肪醇醚硫酸盐(k=11-13,n=1-3或2),更特别是它们的钠盐。其一个具体实施方式是具有2个EO的月桂基醚硫酸钠盐。乙氧基化水平是平均值,并且对于特定化合物,可以是整数或分数。
在各种实施方式中,所述表面活性剂包含至少一种烷基苯磺酸盐。所述烷基苯磺酸盐可以替代上述烷基醚硫酸盐存在,或者优选地,除了上述烷基醚硫酸盐之外还存在。
示例性的烷基苯磺酸盐包括但不限于直链和支链烷基苯磺酸盐,优选直链烷基苯磺酸盐。示例性的化合物是式(III)的那些
其中R′和R″独立地为H或烷基,并且组合包含9至19个,优选9至15个,更优选9至13个碳原子。特别优选的是十二烷基和十三烷基苯磺酸盐,特别是其钠盐。
另外或可替代地,本发明的组合物可以进一步包含一种或多种非离子表面活性剂。优选的非离子表面活性剂是式(IV)的那些
R2-O-(AO)m-H (IV),
其中R2表示直链或支链的取代或未取代的烷基部分,AO表示环氧乙烷(EO)或环氧丙烷(PO)基团,并且m是1至50的整数。
在式(IV)中,R2优选表示直链或支链、取代或未取代的烷基,优选直链、未取代的烷基,特别优选脂肪醇基团。R2的优选基团选自癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基和它们的组合,其中具有偶数个碳原子的那些基团是优选的。特别优选的是衍生自C12-C18脂肪醇如椰子油醇、牛油醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇或硬脂醇的R2基团,或衍生自C10-C20羰基合成醇的R2基团。
AO表示环氧乙烷(EO)或环氧丙烷(PO)基团,优选环氧乙烷基团。指数m表示1至50、优选1至20、更优选1至6的整数。特别优选m为1、2、3、4或5,最优选3-5,因为更高的乙氧基化度可以不利地影响粘度和稳定性。
在各种优选实施方式中,所述洗涤剂组合物包含选自式(V)的脂肪醇醚的烷基醚,
其中k=11至19,m=1、2、3、4、5、6、7或8。优选具有1-6个EO的C12-18脂肪醇(在式(V)中,k=11-17,m=1-5)。更优选具有1-5个EO的C12-14醇,最优选具有3-5个EO的C12-14烷基醚,特别是具有5个EO的月桂基醚。
洗涤剂组合物可以进一步包括其它非离子表面活性剂,如通式RO(G)x的烷基葡糖苷,其中R是含有8至22个并且优选12至18个碳原子的伯直链或2-甲基-支链脂族基团,并且G表示葡萄糖单元。指示单葡糖苷和低聚葡糖苷的分布的低聚度x是1至10的数字,优选1.2至1.4的数字。
在各种实施方式中,所述组合物包含至少两种阴离子表面活性剂,例如至少一种烷基醚硫酸盐和优选至少一种烷基苯磺酸盐,以及任选存在的烷基醚。
适合的两性表面活性剂包含甜菜碱。优选的甜菜碱是烷基甜菜碱、烷基酰胺甜菜碱、咪唑啉鎓甜菜碱、磺基甜菜碱(INCI磺基甜菜碱)和磷酸酯甜菜碱。适合的甜菜碱和磺基甜菜碱的实例是指定为下述INCI的以下化合物:杏仁油酰胺丙基甜菜碱、野杏油酰胺基丙基甜菜碱、鳄梨酰胺基丙基甜菜碱、巴巴苏油酰胺基丙基甜菜碱、山萮酰胺基丙基甜菜碱、山萮基甜菜碱、甜菜碱、低芥酸菜子油酰胺基丙基甜菜碱、辛酰/癸酰胺基丙基甜菜碱、肉碱、鲸蜡基甜菜碱、椰油酰胺基乙基甜菜碱、椰油酰胺基丙基甜菜碱、椰油酰胺基丙基羟基磺基甜菜碱、椰油基甜菜碱、椰油基羟基磺基甜菜碱、椰油酰/油酰胺基丙基甜菜碱、椰油基磺基甜菜碱、癸基甜菜碱、二羟乙基油基甘氨酸盐、二羟乙基大豆甘氨酸盐、二羟乙基硬脂基甘氨酸盐、二羟乙基牛油甘氨酸盐、二甲基聚硅氧烷丙基PG甜菜碱、芥酸酰胺丙基羟基磺基甜菜碱、氢化牛油甜菜碱、异硬脂酰胺丙基甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱、月桂基甜菜碱、月桂基羟基磺基甜菜碱、月桂基磺基甜菜碱、乳酰胺丙基甜菜碱、貂油酰胺丙基甜菜碱、肉豆蔻酰胺丙基甜菜碱、肉豆蔻基甜菜碱、油酰胺基丙基甜菜碱、油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱、油基甜菜碱、橄榄油酰胺丙基甜菜碱、棕榈油酰胺基丙基甜菜碱、棕榈酰胺基丙基甜菜碱、棕榈酰肉碱、棕榈仁油酰胺丙基甜菜碱、聚四氟乙烯乙酰氧基丙基甜菜碱、蓖麻醇酸酰胺丙基甜菜碱、芝麻酰胺基丙基甜菜碱、大豆酰胺基丙基甜菜碱、硬脂酰胺基丙基甜菜碱、硬脂基甜菜碱、牛脂酰氨基丙基甜菜碱、牛脂酰胺基丙基羟基磺基甜菜碱、牛油甜菜碱、牛油二羟乙基甜菜碱、十一烯酰胺基丙基甜菜碱和小麦胚芽油酰胺丙基甜菜碱。优选的甜菜碱例如是椰油酰胺基丙基甜菜碱(椰油酰胺丙基甜菜碱)。甜菜碱特别优选用于餐具洗涤组合物,最优选手洗餐具洗涤洗涤剂组合物。
其他适合的表面活性剂包括胺氧化物。根据本发明适合的胺氧化物包括烷基胺氧化物,特别是烷基二甲基胺氧化物、烷基酰胺基胺氧化物和烷氧基烷基胺氧化物。适合的胺氧化物的实例是指定为下述INCI的以下化合物:杏仁油酰胺基丙胺氧化物、巴巴苏油酰胺基丙胺氧化物、山萮胺氧化物、椰油酰胺基丙胺氧化物、椰油酰胺基丙胺氧化物、椰油胺氧化物、椰油-吗啉氧化物、癸胺氧化物、癸基十四烷基胺氧化物、二氨基嘧啶氧化物、二羟乙基C8-10烷氧基丙胺氧化物、二羟乙基C9-11烷氧基丙胺氧化物、二羟乙基C12-15烷氧基丙胺氧化物、二羟乙基椰油胺氧化物、二羟乙基月桂胺氧化物、二羟乙基硬脂胺氧化物、二羟乙基牛油胺氧化物、氢化棕榈仁油胺氧化物、氢化牛油胺氧化物、羟乙基羟丙基C12-15烷氧基丙胺氧化物、异硬脂酰胺基丙胺氧化物、异硬脂酰胺基丙基吗啉氧化物、月桂酰胺基丙胺氧化物、月桂胺氧化物、甲基吗啉氧化物、乳酰胺基丙胺氧化物、貂油酰胺丙胺氧化物、肉豆蔻酰胺基丙胺氧化物、肉豆蔻胺氧化物、肉豆蔻胺/鲸蜡胺氧化物、油酰胺基丙胺氧化物、油胺氧化物、油酰胺基丙胺氧化物、棕榈酰胺基丙胺氧化物、棕榈基胺氧化物、PEG-3月桂胺氧化物、二羟乙基椰油胺氧化物磷酸酯钾、氮川三(亚甲基)三膦酸N-氧化物钾、芝麻油酰胺基丙胺氧化物、大豆酰胺基丙胺氧化物、硬脂酰胺基丙胺氧化物、硬脂胺氧化物、牛油酰胺基丙胺氧化物、牛油胺氧化物、十一碳烯酰胺基丙胺氧化物和小麦胚芽油酰胺基丙胺氧化物。优选的胺氧化物例如是椰油酰胺基丙胺氧化物(椰子酰胺基丙胺氧化物)。
对于自动餐具洗涤应用,优选使用低泡非离子表面活性剂,特别是烷氧基化、尤其是乙氧基化的低泡非离子表面活性剂。特别优选地,自动餐具洗涤剂含有选自烷氧基化醇的非离子表面活性剂。特别优选熔点高于室温的非离子表面活性剂。熔点高于20℃,优选高于25℃,更优选在25至60℃之间,尤其是在26.6至43.3℃之间的非离子表面活性剂是特别优选的。优选使用的表面活性剂是选自下述的组的那些:烷氧基化非离子表面活性剂,特别是乙氧基化伯醇,以及这些表面活性剂与结构上更复杂的表面活性剂如聚氧化丙烯/聚氧化乙烯/聚氧化丙烯((PO/EO/PO)表面活性剂)的混合物。此类(PO/EO/PO)非离子表面活性剂的特征还在于良好的泡沫控制。特别优选的非离子表面活性剂是含有交替的环氧乙烷和不同的环氧烷单元的那些。这些之中,具有EO-AO-EO-AO嵌段的表面活性剂又是优选的,在来自另一组的一个嵌段之前具有一至十个EO或AO基团。示例性的非离子表面活性剂是具有C9烷基的那些,其具有1至4个环氧乙烷单元,然后是1至4个环氧丙烷单元,然后是1至4个环氧乙烷单元,然后是1至4个环氧丙烷单元。特别优选封端的聚(烷氧基化)非离子表面活性剂,其中封端是具有1至30个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和、脂族或芳族烃基R。烷基还可以包含羟基。这些非离子表面活性剂的组包括例如C4-22脂肪醇(EO)10-50-2-羟烷基醚,特别是C8-12脂肪醇(EO)22-2-羟基癸基醚和C4-22脂肪醇(EO)40-80-2-羟烷基醚。
助洗剂和共助洗剂
所述清洁组合物可以含有按重量计约0-65%,如约5%至约50%、如约0.5%至约20%的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或它们的混合物。在餐具洗涤洗涤剂中,助洗剂的水平通常为40-65%,特别是50-65%。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性络合物的螯合剂。可以使用本领域已知的用于清洁洗涤剂的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如,来自Hoechst的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA,也称为2,2'-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA,也称为2,2',2"-次氮基三乙-1-醇)和(羧甲基)菊粉(CMI)和它们的组合。
所述洗涤剂组合物还可以含有按重量计0-50%、如约5%至约30%的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂,或与助洗剂例如沸石助洗剂的组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物,例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐,螯合剂如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐,以及烷基-或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2',2"-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)乙二胺-N,N',N"-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP),以及它们的组合和它们的盐。其它示例性助洗剂和/或共助洗剂描述在例如WO 09/102854、US 5977053中。
通常并且如果没有另外说明,助洗剂可以优选选自柠檬酸盐、碳酸盐、硅酸盐、铝硅酸盐(沸石)和它们的组合。适合的助洗剂还包括膦酸盐、聚膦酸盐、碳酸氢盐、硼酸盐和另外的多羧酸盐。柠檬酸盐助洗剂,例如柠檬酸及其可溶性盐(特别是钠盐)是特别适合的水溶性有机助洗剂。柠檬酸盐可与沸石、硅酸盐如BRITESIL型和/或层状硅酸盐助洗剂组合使用。助洗剂和/或共助洗剂可以是与Ca和Mg形成水溶性络合物的任何螯合剂。可以使用本领域已知的用于清洁洗涤剂的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石,特别是沸石A或P或X,碳酸盐如碳酸钠,可溶性硅酸盐如偏硅酸钠,层状硅酸盐(例如来自Hoechst的SKS-6),和(羧甲基)菊粉(CMI),和它们的组合。助洗剂的其他非限制性实例包括氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和烷基-或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2',2"-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-磺甲基谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和N-(2-羟乙基)乙二胺-N,N',N"-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG),以及它们的组合和盐。适合用于本文中的膦酸盐包括1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA或DTPMP)、次氮基三(亚甲基膦酸)(ATMP或NTMP)、2-膦酸丁烷-1,2,4-三羧酸(PBTC)、六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(HDTMP)。特别优选的是HEDP和DTPMP。
适合的硅酸盐是通式NaMSixO2+1*yH2O的结晶层状硅酸钠,其中M为钠或H,x为1.9至4的数,y为0至20的数,x优选为2、3或4。此类硅酸盐例如公开在EP 0 164 514中。其中M为钠并且是2或3的硅酸盐是优选的。特别优选的是β-和δ-二硅酸钠Na2Si2O5*yH2O。
尽管不是优选的,但是所述组合物还可以包含磷酸盐、二磷酸盐(焦磷酸盐)和/或三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)。然而,优选的是,本文公开的所有组合物都不含磷酸盐,即不含有有意添加的磷酸盐,特别是相对于组合物的总重量,磷酸盐含量低于1重量%,更优选小于0.5重量%,甚至更优选小于0.1重量%。在替代实施方式中,本发明还涉及通常含有本发明的多肽的不含磷酸盐的清洁组合物。因此,在一个实施方式中,本发明的特征在于,不含磷酸盐的清洁组合物包含本文公开的具有氨基己糖苷酶活性的多肽中的任何一种或多种。
如果没有另外说明,所述组合物还可以含有按重量计0-50%,如约5%至约30%的洗涤剂共助洗剂。所述组合物可以包括单独的共助洗剂,或与助洗剂例如沸石助洗剂的组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物,如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)或聚天冬氨酸。其它示例性助洗剂和/或共助洗剂描述在例如WO 09/102854、US 5977053中。
优选作为共助洗剂的是含丙烯酸酯的水溶性聚合物,如聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸的碱金属盐,例如分子量Mw在600至750,000g/mol范围内的那些,如通过凝胶渗透色谱法(GPC)根据DIN 55672-1:2007-08用THF作为洗脱剂测定的。
优选的聚合物是分子量Mw为1,000至15,000g/mol的聚丙烯酸酯,由于其溶解度,更优选分子量Mw为1,000至10,000g/mol,最优选1,000至5,000g/mol的短链聚丙烯酸酯。
用于本发明的优选丙烯酸酯是丙烯酸聚合物的碱金属盐,优选钠盐,特别是分子量在1,000至10,000g/mol或1,000至5,000g/mol范围内的那些。适合的丙烯酸酯可例如以商品名从Dow Chemical商购获得。适合的还有丙烯酸酯的共聚物,特别是丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物,以及丙烯酸或甲基丙烯酸和马来酸的共聚物。
在优选实施方式中,本发明的组合物包含磺基聚合物,优选包含烯属不饱和的磺酸盐/磺酸作为共聚单体的共聚物。特别适合的是烯丙基磺酸的单体,例如烯丙氧基苯磺酸和甲代烯丙基磺酸。特别优选的含磺酸基的单体是1-丙烯酰胺基丙烷磺酸-1、2-丙烯酰胺基-2-丙磺酸、2-丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸、2-甲基丙烯酰胺基-2-甲基-1-丙磺酸、3-甲基丙烯酰胺基-2-羟基-丙磺酸、烯丙基磺酸、甲基烯丙基磺酸、烯丙氧基苯磺酸、甲基烯丙氧基苯磺酸、2-羟基-3-(2-丙烯氧基)丙磺酸、2-甲基-2-丙烯基-磺酸、苯乙烯磺酸、乙烯基磺酸、3-磺丙基、磺基甲基丙烯酰胺、磺基甲基甲基丙烯酰胺和所述酸的混合物或它们的水溶性盐。
磺基聚合物优选是上述单体与不饱和羧酸的共聚物,特别优选的不饱和羧酸是丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、氯代丙烯酸、α-氰基丙烯酸、巴豆酸、α-苯基-丙烯酸、马来酸、马来酸酐、富马酸、衣康酸、柠康酸、亚甲基丙二酸、山梨酸、肉桂酸或它们的混合物。当然也可使用不饱和二羧酸。优选的是与丙烯酸酯的共聚物,特别是与丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物,以及与丙烯酸或甲基丙烯酸和马来酸的共聚物。
在本发明的一个实施方式中,本发明的清洁组合物包含如本文所定义的多肽和至少一种如上所定义的磺基聚合物。这种组合物优选为餐具洗涤组合物。
在一个优选实施方式中,助洗剂是非磷基助洗剂,如柠檬酸和/或甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)和/或它们的盐。
漂白体系
如本文所定义的清洁组合物可以包含按重量计0-30%,如约1%至约20%、如约0.01%至约10%的漂白体系。可以使用包含本领域已知的用于清洁洗涤剂的组分的任何漂白体系。适合的漂白体系组分包括过氧化氢的源;过酸的源;和漂白催化剂或增效剂。
过氧化氢的源:
适合的过氧化氢的源是无机过酸盐,包括碱金属盐如过碳酸钠和过硼酸钠(通常为一水合物或四水合物),和过氧化氢-尿素(1/1)。
过酸的源:
过酸可以(a)作为预形成的过酸直接引入,或(b)由过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液中原位形成,或(c)由过氧化氢和过水解酶和后者的适合底物例如酯在洗涤液中原位形成。
a)适合的预形成的过酸包括,但不限于,过氧羧酸如过氧苯甲酸及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚胺过氧己酸[邻苯二甲酰亚胺基过氧己酸(PAP)]和O-羧基苯甲酰胺过氧己酸;脂族和芳族二过氧二羧酸如二过氧十二烷二酸、二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧十三烷二酸、2-癸基二过氧丁二酸和二过氧邻苯二甲酸、二过氧间苯二甲酸和二过氧对苯二甲酸;过亚胺酸;过氧单硫酸;过氧二硫酸;过氧磷酸;过氧硅酸;以及所述化合物的混合物。应当理解,在一些情况下,所提及的过酸可以最好作为适合的盐添加,例如碱金属盐(例如,)或碱土金属盐。
b)适合的漂白活化剂包括属于以下类别的那些:酯、酰胺、酰亚胺、腈或酸酐以及(如果适用的话)它们的盐。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二烷酰氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)和/或WO98/17767中公开的那些。感兴趣的漂白活化剂的特定家族公开在EP624154中,并且在该家族中特别优选的是乙酰基柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酯如三乙酸甘油酯具有环境友好的优点。此外,乙酰柠檬酸三乙酯和三乙酸甘油酯在储存时在产品中具有良好的水解稳定性,并且是有效的漂白活化剂。最后,ATC是多功能的,因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以用作助洗剂。
漂白催化剂和增效剂
漂白体系还可以包括漂白催化剂或增效剂。
可用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰-胶原、钴-胺催化剂和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂;特别优选的是锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物,特别是与Me3-TACN的络合物,例如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2和[2,2',2"-次氮基三(乙烷-1,2-二氮杂亚甲基(diylazanylylidene)-κN-亚甲基(methanylylidene))三酚基-κ3O]锰(III)。漂白催化剂也可以是其他金属化合物,例如铁或钴络合物。
在一些实施方式中,在包括过酸的源的情况下,可以使用具有下式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂:
(iii)和它们的混合物;其中每个R1独立地是含有9至24个碳的支链烷基基团或含有11至24个碳的直链烷基基团,优选每个R1独立地是含有9至18个碳的支链烷基基团或含有11至18个碳的直链烷基基团,更优选每个R1独立地选自以下组:2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基和异十五烷基。
其他示例性的漂白体系描述在例如WO2007/087258、WO2007/087244、WO2007/087259、EP1867708(Vitamin K)和WO2007/087242中。适合的光漂白剂可以是例如磺化的酞菁锌或酞菁铝。
金属护理剂
金属护理剂可以防止或减少金属(包括铝、不锈钢和有色金属如银和铜)的失去光泽、腐蚀或氧化。适合的实例包括以下的一个或多个:
(a)苯并三唑类,包括苯并三唑或双苯并三唑和它们的取代衍生物。苯并三唑衍生物是其中芳环上的可用取代位点被部分或完全取代的那些化合物。适合的取代基包括直链或支链Ci-C20-烷基(例如C1-C20-烷基)和羟基、硫基、苯基或卤素如氟、氯、溴和碘。
(b)选自锌、锰、钛、锆、铪、钒、钴、镓和铈盐和/或络合物的金属盐和络合物,所述金属处于氧化态II、III、IV、V或VI之一。在一个实施方式中,适合的金属盐和/或金属络合物可以选自以下组:硫酸Mn(II)、柠檬酸Mn(II)、硬脂酸Mn(II)、乙酰丙酮酸Mn(II)、K^TiF6(例如,K2TiF6)、K^ZrF6(例如,K2ZrF6)、CoSO4、Co(NOs)2和Ce(NOs)3、锌盐,例如硫酸锌、水锌矿或乙酸锌。
(c)硅酸盐,包括硅酸钠或硅酸钾、二硅酸钠、偏硅酸钠、结晶层状硅酸盐和它们的混合物。
在WO 94/26860和WO 94/26859中公开了充当银/铜腐蚀抑制剂的其他适合的有机和无机氧化还原活性物质。优选本发明的组合物包含按组合物的重量计0.1%至5%的金属护理剂,优选金属护理剂是锌盐。
助水溶物
如本文所定义的清洁组合物可以含有按重量计0-10%,例如按重量计0-5%,如约0.5%至约5%,或约3%至约5%的助水溶物。可以使用本领域已知的用于洗涤剂的任何助水溶物。助水溶物的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、胺氧化物、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠和它们的组合。
聚合物
如本文所定义的清洁组合物可以含有按重量计0-10%、如0.5-5%、2-5%、0.5-2%或0.2-1%的聚合物。可以使用本领域已知的用于洗涤剂的任何聚合物。聚合物可以用作如上所述的共助洗剂,或可以提供抗再沉积、纤维保护、去污、染料转移抑制、油脂清洁和/或消泡性质。一些聚合物可以具有多于一种的上述性质和/或多于一种的以下提及的模式(motifs)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化聚(乙烯亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)和聚羧酸盐如PAA、PAA/PMA、聚天冬氨酸和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水改性的CMC(HM-CMC)和聚硅氧烷、对苯二甲酸和低聚二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(对苯二甲酸氧乙烯酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)和聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。适合的实例包括来自Ashland Aqualon的PVP-K15、PVP-K30、ChromaBond S-400、ChromaBond S-403E和Chromabond S-100,以及来自BASF的HP 165、HP 50(分散剂)、HP53(分散剂)、HP 59(分散剂)、HP 56(染料转移抑制剂)、HP 66K(染料转移抑制剂)。另外的示例性聚合物包括磺化聚羧酸盐、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)和乙氧基硫酸二季铵盐。其它示例性聚合物公开在例如WO 2006/130575中。还考虑了上述聚合物的盐。特别优选的聚合物是来自BASF的乙氧基化均聚物HP 20,其有助于防止污垢在洗涤液中再沉积。
织物调色剂(fabric hueing agents)
本发明的清洁组合物还可以包括织物调色剂如染料或颜料,当配制在洗涤剂组合物中时,当所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时,所述织物调色剂可以沉积到织物上,因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色泽。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下,织物调色剂改变表面的色泽,因为它们吸收至少一部分可见光谱。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土共轭物,并且还可以包括颜料。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自由落入下述颜色指数(C.I.)分类的染料的小分子染料:直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红,或它们的混合物,例如如WO2005/03274、WO2005/03275、WO2005/03276和EP1876226(通过引用并入本文)中所述。所述洗涤剂组合物优选包含约0.00003wt%至约0.2wt%、约0.00008wt%至约0.05wt%、或甚至约0.0001wt%至约0.04wt%的织物调色剂。所述组合物可以包含0.0001wt%至0.2wt%的织物调色剂,当组合物呈单位剂量袋的形式时,这可能是特别优选的。适合的调色剂也公开在例如WO2007/087257和WO2007/087243中。
酶
如本文所定义的清洁组合物可以包含一种或多种另外的酶,如一种或多种选自以下的酶:脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶,例如漆酶和/或过氧化物酶。通常,所选择的一种或多种酶的性质应与所选择的洗涤剂相容,(即最佳的pH、与其它酶和非酶成分的相容性等),并且所述酶应以有效量存在。
纤维素酶
适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、腐质霉属(Humicola)、镰孢属(Fusarium)、梭孢壳属(Thielavia)、支顶孢属(Acremonium)的纤维素酶,例如公开在US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757和WO89/09259中的由特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。特别适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述在EP 0 495257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体,如描述在WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307和WO99/001544中的那些。其他纤维素酶是具有与WO2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97%同一性的序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶或家族44木葡聚糖酶,该木葡聚糖酶是具有与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60%同一性的序列的木葡聚糖酶。
可商购获得的纤维素酶包括CelluzymeTM、和CarezymeTM(Novozymes A/S)、Carezyme PremiumTM(Novozymes A/S)、CellucleanTM(Novozymes A/S)、CellucleanClassicTM(Novozymes A/S)、CellusoftTM(Novozymes A/S)、WhitezymeTM(Novozymes A/S)、ClazinaseTM、和Puradax HATM(Genencor International Inc.)、和KAC-500(B)TM(KaoCorporation)。
甘露聚糖酶
适合的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自牙胞杆菌属或腐质霉属的野生型,特别是粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、耐盐芽孢杆菌(B.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)或特异腐质霉(H.insolens)。适合的甘露聚糖酶描述在WO 1999/064619中。可商购获得的甘露聚糖酶是Mannaway(Novozymes A/S)。
脂肪酶和角质酶
适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属(Thermomyces)的脂肪酶,例如来自如EP258068和EP305216中所描述的疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(以前命名为疏棉状腐质霉(Humicola lanuginosa));来自腐质霉属的角质酶,例如特异腐质霉(H.insolens)(WO 96/13580);来自假单胞菌属菌株的脂肪酶(其中一些现在命名为伯克霍尔德菌(Burkholderia)),例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacian)(EP 331376)、P.sp.菌株SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)、P.wisconsinensis(WO 96/12012)、GDSL型链霉菌属(Streptonyces)脂肪酶(WO10/065455)、来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的角质酶(WO10/107560)、来自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶(US5,389,536)、来自褐色喜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO11/084412)、嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)脂肪酶(WO11/084417)、来自枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的脂肪酶(WO11/084599),以及来自灰色链霉菌(Streptomycesgriseus)(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO12/137147)的脂肪酶。其他实例是脂肪酶变体,例如描述在EP407225、WO92/05249、WO94/01541、WO94/25578、WO95/14783、WO95/30744、WO95/35381、WO95/22615、WO96/00292、WO97/04079、WO97/07202、WO00/34450、WO00/60063、WO01/92502、WO07/87508和WO09/109500中的那些。
优选的商业脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM、LipolexTM和LipocleanTM(Novozymes A/S)、Lumafast(最初来自Genencor)和Lipomax(最初来自Gist-Brocades)。其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶,例如与南极假丝酵母(Candidaantarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO09/67279)、以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体,特别是来自Huntsman TextileEffects Pte Ltd的商业产品Gentle Power Bleach中使用的S54V变体(WO10/100028)。
淀粉酶
适合的淀粉酶包括α-淀粉酶和/或葡糖淀粉酶,可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从牙胞杆菌属,例如在GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的特定菌株获得的α-淀粉酶。
适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90%序列同一性的变体。优选的变体描述在WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中,例如在以下位置的一个或多个中具有取代的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90%序列同一性的变体。SEQ IDNO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的衍生自解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1-33和WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中所示的地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90%序列同一性的变体。该杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的衍生自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些:
M197T;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476,使用WO 96/023873的SEQ ID 2进行编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置中具有缺失的那些,例如181和182、182和183、或位置183和184。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90%序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90%序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:176、177、178、179、190、201、207、211和264。另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ ID NO:2具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些:Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些:Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K,和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K,其中所述变体是C-末端截短的并且任选进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO13184577的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些:K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K和G477K,和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ IDNO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
其中所述变体任选进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO10104675的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代:N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K和G478K,和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N21D+D97N+V128I
其中所述变体任选进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他适合的淀粉酶是具有WO01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90%序列一致性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R28、R118、N174;R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314;R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K及R458K的变体,以及另外在选自下组的一个或多个位置处具有取代的变体:M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339,最优选另外在所有这些位置处具有取代的变体。
其他实例是淀粉酶变体,例如描述在WO2011/098531、WO2013/001078和WO2013/001087中的那些。
可商购获得的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、Stainzyme PlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自Novozymes A/S),以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100和Preferenz S110(来自Genencor International Inc./DuPont)。
过氧化物酶/氧化酶
通常,如本文所定义的过氧化物酶是由国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会(IUBMB)列出的酶分类EC 1.11.1.7包含的过氧化物酶,或由其衍生的表现出过氧化物酶活性的任何片段。
适合的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属(Coprinopsis)的过氧化物酶,例如来自灰盖鬼伞(C.cinerea)(EP 179,486)及其变体,如WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中所述的那些。可商购获得的过氧化物酶包括GuardzymeTM(Novozymes A/S)。
适合的过氧化物酶包括卤代过氧化物酶,如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶和表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。卤代过氧化物酶根据其对卤离子的特异性进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化由氯离子形成次氯酸盐。优选卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶,即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。已经从许多不同的真菌中分离出卤代过氧化物酶,特别是从暗色丝孢真菌(dematiaceous hyphomycetes)中分离出,如卡尔黑霉属(Caldariomyces)例如煤卡尔黑霉属(C.fumago)、链格孢属(Alternaria)、弯孢属(Curvularia)例如疣状弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis)、内脐蠕孢属(Drechslera)、细基格孢属(Ulocladium)和葡萄孢属(Botrytis)。
还已经从细菌如假单胞菌属例如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia)和链霉菌属例如金色链霉菌(S.aureofaciens)中分离出卤代过氧化物酶。
适合的氧化酶特别包括由酶分类EC 1.10.3.2包含的任何漆酶,或由其衍生的表现出漆酶活性的任何片段,或表现出类似活性的化合物,例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。优选的漆酶是微生物来源的酶。酶可以衍生自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。来自真菌的适合的实例包括可衍生自以下菌株的漆酶:曲霉属(Aspergillus)、脉孢菌属(Neurospora)(例如粗糙脉孢菌(N.crassa))、柄孢壳菌属(Podospora)、葡萄孢属(Botrytis)、金钱菌属(Collybia)、层孔菌属(Fomes)、香菇属(Lentinus)、侧耳属(Pleurotus)、栓菌属(Trametes)(例如簇毛栓菌(T.villosa)和杂色栓菌(T.versicolor))、丝核菌属(Rhizoctonia)(例如立枯丝核菌(R.solani))、拟鬼伞属(Coprinopsis)(例如灰盖拟鬼伞(C.cinerea)、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗氏拟鬼伞(C.friesii)和褶皱拟鬼伞(C.plicatilis))、小脆柄菇属(Psathyrella)(例如白黄小脆柄菇(P.condelleana))、花褶伞属(Panaeolus)(例如大孢花褶伞(P.papilionaceus))、毁丝霉属(Myceliophthora)(例如嗜热毁丝霉(M.thermophila))、Schytalidium(例如S.thermophilum)、多孔菌属(Polyporus)(例如,P.pinsitus)、射脉菌属(Phlebia)(例如,射脉侧菌(P.radiata))(WO92/01046)、或革盖菌属(Coriolus)(例如毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。来自细菌的适合的实例包括可衍生自芽孢杆菌属菌株的漆酶。优选衍生自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶;特别地,如WO 97/08325中公开的衍生自灰盖鬼伞的漆酶;或如WO 95/33836中所公开的衍生自嗜热毁丝霉的漆酶。
分散剂
本发明的清洁组合物还可以含有分散剂。特别是,粉状洗涤剂可以包含分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚或共聚酸或其盐,其中聚羧酸包含至少两个彼此被不超过两个碳原子隔开的羧基。适合的分散剂例如描述在Powdered Detergents,SurfactantScience Series,第71卷,Marcel Dekker,Inc.中。
染料转移抑制剂
本发明的清洁组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于,聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯咪唑或它们的混合物。当存在于主题组合物中时,染料转移抑制剂可以按组合物的重量计以约0.0001%至约10%、约0.01%至约5%或甚至约0.1%至约3%的含量存在。
荧光增白剂
本发明的清洁组合物还将优选含有可以给正在清洁的制品调色的另外的组分,例如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时,增亮剂的含量优选为约0.01%至约0.5%。适用于衣物洗涤剂组合物中的任何荧光增白剂可用于本发明的组合物中。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些:二氨基二苯乙烯-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-二苯乙烯衍生物。二氨基二苯乙烯-磺酸衍生物类型的荧光增白剂的实例包括以下的钠盐:4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)二苯乙烯-2,2'-二磺酸盐和5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从Ciba-Geigy AG,Basel,Switzerland获得的Tinopal DMS和Tinopal CBS。Tinopal DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。Tinopal CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的荧光增白剂是可商购获得的Parawhite KX,由Paramount Minerals and Chemicals,Mumbai,India供应。适用于本发明的其它荧光增白剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷基氨基香豆素。适合的荧光增白剂水平包括从约0.01重量%、0.05重量%、约0.1重量%或甚至约0.2重量%的较低水平至0.5重量%或甚至0.75重量%的较高水平。
去污聚合物(soil release polymer)
本发明的清洁组合物还可包括一种或多种去污聚合物,其有助于从织物如棉和聚酯基织物除去污垢,特别是从聚酯基织物上除去疏水性污垢。去污聚合物可以例如是非离子或阴离子对苯二甲酸酯基聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺,参见例如Powdered Detergents,Surfactant Science Series第71卷第7章,Marcel Dekker,Inc.。另一种类型的去污聚合物是包含核心结构和连接到该核心结构上的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物。核心结构可包含聚亚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构,如WO 2009/087523(通过引用并入本文)中详细描述的。此外,无规接枝共聚物是适合的去污聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述在WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO 2006/113314(通过引用并入本文)中。适合的聚乙二醇聚合物包括无规接枝共聚物,该共聚物包含:(i)包含聚乙二醇的亲水性主链;和(ii)一个或多个选自以下组的侧链:C4-C25烷基、聚亚丙基、聚亚丁基、饱和C1-C6单羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯、以及它们的混合物。适合的聚乙二醇聚合物具有带有无规接枝的聚醋酸乙烯酯侧链的聚乙二醇主链。聚乙二醇主链的平均分子量可以在2,000Da至20,000Da,或4,000Da至8,000Da的范围内。聚乙二醇主链与聚醋酸乙烯酯侧链的分子量比可在1:1至1:5,或1:1.2至1:2的范围内。每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数可以小于1,或小于0.8,每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数可以在0.5至0.9的范围内,或每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数可以在0.1至0.5,或0.2至0.4的范围内。适合的聚乙二醇聚合物是SokalanHP22。其他去污聚合物是取代的多糖结构,尤其是取代的纤维素结构,如改性纤维素衍生物,例如EP 1867808或WO 2003/040279(两者均通过引用并入本文)中描述的那些。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺和它们的混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、两性离子改性的纤维素、以及它们的混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素、和它们的混合物。
抗再沉积剂
本发明的清洁组合物还可包括一种或多种抗再沉积剂,如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧化乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物和乙氧基化聚乙烯亚胺。在以上去污聚合物下描述的纤维素基聚合物也可以用作抗再沉积剂。
流变改性剂
本发明的清洁组合物还可包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂,不同于降粘剂。流变改性剂选自非聚合物的结晶性、羟基官能材料,赋予液体洗涤剂组合物的含水液体基质剪切稀化特性的聚合物流变改性剂。洗涤剂的流变性和粘度可以通过本领域已知的方法改性和调节,例如如EP 2169040中所示。
其它适合的清洁组合物组分包括,但不限于防缩剂、抗皱剂、杀菌剂、粘结剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填料、泡沫调节剂、水溶助长剂、香料、颜料、抑泡剂(sodsuppressor)、溶剂和用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
洗涤剂产品的配制物
本发明的清洁组合物可以配制为例如手洗或机洗衣物洗涤剂组合物,其包括适合于预处理有污渍的织物的衣物添加剂组合物和漂洗添加的织物柔软剂组合物,或配制为用于一般家庭硬表面清洁操作的洗涤剂组合物,或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。在一个具体实施方式中,本发明提供包含一种或多种如本文所述的酶的洗涤剂添加剂。本发明的清洁组合物可以是任何方便的形式,例如条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个隔室的小袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、糊剂、凝胶或常规的、压缩的或浓缩的液体。
小袋可以被配置为单隔室或多隔室。它可以是适合于容纳组合物的任何形式、形状和材料,例如,在水接触之前不允许组合物释放以从小袋中释放组合物。小袋由包围内体积的水溶性膜制成。所述内体积可以分成小袋的隔室。优选的膜是聚合物材料,优选形成膜或片材的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物是经选择的聚丙烯酸酯和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯,最优选聚乙烯醇共聚物和羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选膜中聚合物例如PVA的含量为至少约60%。优选的平均分子量通常为约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物,其包含可水解降解且水溶性的聚合物共混物,例如聚丙交酯和聚乙烯醇(已知根据贸易参考M8630如由MonoSol LLC,Indiana,USA出售)加增塑剂,如甘油、乙二醇、丙二醇、山梨糖醇和它们的混合物。小袋可包含固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的隔室在组成上可以与包含固体的隔室不同:US2009/0011970A1。
洗涤剂成分可以通过可水溶解的小袋中的隔室或片剂的不同层彼此物理分离。因此,可以避免组分之间的负面储存相互作用。每个隔室的不同溶解曲线也可以引起所选组分在洗涤溶液中的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是含水的,通常含有按重量计至少20%且至多95%的水,如至多约70%的水、至多约65%的水、至多约55%的水、至多约45%的水、至多约35%的水。其他类型的液体,包括但不限于,烷醇、胺、二醇、醚和多元醇,可以包括在含水液体或凝胶中。含水液体或凝胶洗涤剂可含有0-30%的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是无水的。
颗粒状清洁制剂
无粉尘的颗粒可以例如如US 4,106,991和4,661,452中所公开的来生产,并且可以任选通过本领域已知的方法进行包裹。蜡状包衣材料的实例是平均摩尔重量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚;其中醇含有12至20个碳原子且其中存在15至80个环氧乙烷单元的乙氧基化脂肪醇;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。适合于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例给出在GB 1483591中。液体酶制剂可以例如通过根据已建立的方法添加多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定。可以根据EP 238,216中公开的方法制备受保护的酶。
分散蛋白可以配制成颗粒,例如组合一种或多种酶的共颗粒。然后,每种酶将以更多的颗粒存在,确保酶在洗涤剂中更均匀的分布。这也减少了由于不同的颗粒尺寸而导致的不同酶的物理分离。用于生产洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法公开在IP.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒配制酶的另一个实例公开在WO 2013/188331中,其涉及一种包含以下的洗涤剂组合物:(a)多酶共颗粒;(b)小于10wt%的沸石(无水基);和(c)小于10wt%的磷酸盐(无水基),其中所述酶共颗粒包含10wt%至98wt%的吸湿(moisture sink)组分,并且该组合物另外包含20wt%至80wt%的洗涤剂吸湿组分。该多酶共颗粒可以包含本发明的酶和一种或多种选自以下组的酶:蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、木葡聚糖酶(xyloglucanases)、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、甘露聚糖酶和淀粉酶、和它们的混合物。WO 2013/188331还涉及一种处理和/或清洁表面,优选织物表面的方法,其包含以下步骤:(i)使所述表面与如本文所要求保护和描述的洗涤剂组合物在水性洗涤液体中接触,(ii)漂洗和/或干燥所述表面。
本发明的一个实施方式涉及包含分散蛋白和蛋白酶的酶颗粒/粒子。该颗粒由核和任选的围绕核的一个或多个包衣(外层)组成。通常,颗粒的作为等效球径(基于体积的平均粒度)测量的颗粒/粒子尺寸为20-2000μm,特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。核可以包括另外的材料,例如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻质球、增塑剂、盐、润滑剂和香料。核可以包括粘结剂,例如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。核可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲剂组分,通常作为均匀共混物。核可以由惰性颗粒组成,其中酶被吸收到所述惰性颗粒中,或例如通过流化床包衣施加到表面上。核的直径可以是20-2000μm、特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。核可以通过将成分的共混物造粒来制备,例如通过包含造粒技术的方法,如结晶、沉淀、锅包衣、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤出、造粒、滚圆、尺寸减小方法、鼓式造粒和/或高剪切造粒。
制备核的方法可以在Handbook of PowderTechnology;Particle sizeenlargement,C.E.Capes;第1卷;1980;Elsevier中找到。
酶颗粒/粒子的核可以被至少一个包衣包围,例如以改善储存稳定性,以减少处理期间的粉尘形成,或用于使颗粒着色。任选的包衣可以包括盐包衣或其他适合的包衣材料,例如聚乙二醇(PEG)、甲基羟丙基纤维素(MHPC)和聚乙烯醇(PVA)。具有多个包衣的酶颗粒的实例示出在WO 93/07263和WO 97/23606中。包衣可以以按核的重量计至少0.1%,例如至少0.5%、1%或5%的量施加。所述量可以是至多100%、70%、50%、40%或30%。包衣优选是至少0.1μm的厚度,特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一个实施方式中,包衣的厚度小于100μm。在另一个实施方式中,包衣的厚度小于60μm。在甚至更特别的实施方式中,包衣的总厚度小于40μm。包衣应通过形成基本上连续的层来包封核单元。基本上连续的层应理解为具有很少或没有孔的包衣,使得其包封/包裹的核单元具有很少或没有未包衣的区域。所述层或包衣的厚度应该是均匀的。包衣可以进一步含有本领域已知的其他材料,例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘结剂,如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。盐包衣可包含按重量计至少60%w/w的盐,例如按重量计至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%w/w。盐可以从盐完全溶解的盐溶液添加,或者从盐悬浮液添加,其中细颗粒小于50μm,例如小于10μm或小于5μm。盐包衣可以包含单一盐或两种或更多种盐的混合物。盐可以是水溶性的,并且在20℃下在100g水中可具有至少0.1克的溶解度,优选至少0.5g/100g水,例如至少1g/100g水,例如至少5g/100g水。盐可以是无机盐,例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯化物或碳酸盐的盐,或简单有机酸(少于10个碳原子,例如6个或更少的碳原子)的盐,例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。这些盐中的阳离子的实例是碱金属或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系列的金属离子,如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、磷酸氢根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、偏硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。特别地,可以使用硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯化物或碳酸盐的碱金属盐或碱土金属盐,或者简单有机酸的盐,例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。包衣中的盐可以在20℃下具有高于60%的恒定湿度,特别是高于70%、高于80%或高于85%,或者它可以是这种盐的另一种水合物形式(例如,无水物)。盐包衣可以如WO00/01793或WO 2006/034710中所述。适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃=76%)、Na2CO3(CH20℃=92%)、NaNO3(CH20℃=73%)、Na2HPO4(CH20℃=95%)、Na3PO4(CH25℃=92%)、NH4Cl(CH20℃=79.5%)、(NH4)2HPO4(CH20℃=93.0%)、NH4H2PO4(CH20℃=93.1%)、(NH4)2SO4(CH20℃=81.1%)、KCl(CH20℃=85%)、K2HPO4(CH20℃=92%)、KH2PO4(CH20℃=96.5%)、KNO3(CH20℃=93.5%)、Na2SO4(CH20℃=93%)、K2SO4(CH20℃=98%)、KHSO4(CH20℃=86%)、MgSO4(CH20℃=90%)、ZnSO4(CH20℃=90%)和柠檬酸钠(CH25℃=86%)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2和乙酸镁。盐可以是无水形式,或者它可以是水合盐,即具有结晶结合水的结晶盐水合物,如WO 99/32595中所述。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、硫酸镁七水合物(MgSO4.7H2O)、硫酸锌七水合物(ZnSO4.7H2O)、磷酸氢二钠七水合物(Na2HPO4.7H2O)、硝酸镁六水合物(Mg(NO3)2(6H2O))、柠檬酸钠二水合物和乙酸镁四水合物。优选地,例如使用流化床将盐作为盐的溶液施加。
本发明的一个实施方式提供一种颗粒,其包含:
(a)包含根据本发明的分散蛋白和蛋白酶的核,和
(b)任选存在的由围绕所述核的一个或多个层组成的包衣。
本发明的一个实施方式涉及一种颗粒,其包含:
(a)包含分散蛋白和蛋白酶的核,其中所述蛋白酶是上文"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21或22或23所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性,和
(b)任选存在的由围绕所述核的一个或多个层组成的包衣。
用途
本发明还涉及在例如衣物/纺织品/织物(家用衣物洗涤、工业衣物洗涤)和硬表面清洁(ADW、汽车洗涤、工业表面)中使用本发明的组合物的方法。本发明的清洁例如洗涤剂组合物可以配制为例如手洗或机洗衣物洗涤剂组合物,其包括适合于预处理有污渍的织物的衣物添加剂组合物和漂洗添加的织物柔软剂组合物,或配制为用于一般家庭硬表面清洁操作的洗涤剂组合物,或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。在一个具体实施方式中,本发明提供包含一种或多种如本文所述的酶的洗涤剂添加剂。
本发明的组合物包含分散蛋白和蛋白酶的共混物,并有效地从表面如纺织品和硬表面例如餐盘中减少或除去有机组分,如蛋白质和PNAG。
本发明的一个实施方式涉及包含分散蛋白和蛋白酶的组合物用于减少再沉积的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少再沉积的用途。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物在清洁组合物应用于例如洗衣过程中时用于减少再沉积的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少物品例如纺织品上的再沉积的用途。在一个实施方式中,所述组合物是抗再沉积组合物。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少再沉积的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少再沉积的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白从土地芽孢杆菌属或短小杆菌属或凝聚杆菌属或嗜血杆菌属或放线杆菌属或乳杆菌属或葡萄球菌属获得。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少再沉积的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21或22或23中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的组合物可以包含分散蛋白和蛋白酶的共混物,并且有效地减少或限制例如纺织品或硬表面如餐盘的恶臭。
本发明的一个实施方式涉及包含分散蛋白和蛋白酶的组合物用于减少恶臭的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少恶臭的用途。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物在清洁组合物应用于例如洗衣过程中时用于减少恶臭的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少物品例如纺织品上的恶臭的用途。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少恶臭的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少恶臭的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白从土地芽孢杆菌属或短小杆菌属或凝聚杆菌属或嗜血杆菌属或放线杆菌属或乳杆菌属或葡萄球菌属获得。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少恶臭的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21或22或23中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的组合物包含分散蛋白和蛋白酶的共混物并改善纺织品的白度。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的组合物用于改善物品例如纺织品的白度的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于改善白度的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物在清洁组合物应用于例如洗衣过程中时用于改善白度的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于改善物品例如纺织品上的白度的用途。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于改善白度的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于改善白度的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白从土地芽孢杆菌属或短小杆菌属或凝聚杆菌属或嗜血杆菌属或放线杆菌属或乳杆菌属或葡萄球菌属获得。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于改善白度的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21或22或23中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明的组合物包含分散蛋白和蛋白酶的共混物,并有效地从表面如纺织品和硬表面例如餐盘中减少或除去有机组分,如蛋白质和PNAG。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少或除去物品的生物膜和生物膜组分如PNAG和蛋白酶的用途,其中所述物品是纺织品或硬表面。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的清洁组合物用于深度清洁物品的用途,所述清洁组合物包含分散蛋白、蛋白酶和至少一种清洁组分,其中所述物品是纺织品或表面。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的组合物用于减少或除去物品的生物膜化合物如PNAG和蛋白酶的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于减少或除去物品如纺织品的生物膜化合物如PNAG和蛋白酶的用途。本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物在清洁组合物应用于例如洗衣过程中时用于深度清洁例如减少或除去生物膜化合物如PNAG和蛋白酶的用途。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于深度清洁物品的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些中的任一种。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于深度清洁物品的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白从土地芽孢杆菌属或短小杆菌属或凝聚杆菌属或嗜血杆菌属或放线杆菌属或乳杆菌属或葡萄球菌属获得。
本发明的一个实施方式涉及如本文所定义的包含分散蛋白和蛋白酶的清洁组合物用于深度清洁物品的用途,其中所述蛋白酶是上文在"具有蛋白酶活性的多肽"部分下描述的那些的任一种,并且其中所述分散蛋白与SEQ ID NO:1或2或3或4或5或6或7或8或9或10或11或12或13或14或15或16或17或18或19或20或21或22或23中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性。
本发明还涉及一种深度清洁物品的方法,其中所述物品可以是纺织品或硬表面,优选纺织品。
本发明还涉及一种深度清洁物品的方法,包含以下步骤:
a)使所述物品与根据本发明的清洁组合物接触;和
b)任选漂洗所述物品,其中所述物品优选为纺织品。
本发明的一个实施方式涉及一种深度清洁物品的方法,包含以下步骤:
a)使所述物品与本发明的包含酶混合物的组合物接触,所述酶混合物包含如本文所定义的分散蛋白和蛋白酶;和
b)任选漂洗所述物品,其中所述物品优选为纺织品。
定义
"生物膜"由任何微生物组产生,其中细胞彼此粘附或粘附到表面,如纺织品、餐具或硬表面或另一种表面。这些贴壁细胞通常包埋在细胞外聚合物(EPS)的自身产生的基质内。生物膜EPS是通常由细胞外DNA、蛋白质和多糖组成的聚合物聚集体。生物膜可以在活表面或非活表面上形成。在生物膜中生长的微生物细胞在生理学上不同于相同生物体的浮游细胞,相比之下,浮游细胞是可以在液体培养基中漂浮或游动的单细胞。
生活在生物膜中的细菌通常具有与相同物种的浮游细菌显著不同的性质,因为膜的致密和受保护的环境允许它们以各种方式协作和相互作用。这种环境对微生物的一个益处是增加对洗涤剂和抗生素的抗性,因为致密的细胞外基质和细胞外层保护群落的内部。
在衣物和纺织品上,产生生物膜的细菌的实例可以在以下物种中找到:不动杆菌属(Acinetobacter sp.)、气微菌属(Aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属(Brevundimonassp.)、微杆菌属(Microbacterium sp.)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas sp.)。在硬表面上,产生生物膜的细菌的实例可以在以下物种中找到:不动杆菌属、气微菌属、短波单胞菌属、微杆菌属、藤黄微球菌、假单胞菌属、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和寡养单胞菌属。在一个实施方式中,产生生物膜的菌株是短波单胞菌属。在一个实施方式中,产生生物膜的菌株是嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)或荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)。在一个实施方式中,产生生物膜的菌株是金黄色葡萄球菌。
术语"深度清洁"是指减少、破坏或除去可能包含在有机物质中的组分,例如生物膜,如多糖、蛋白质、DNA、污垢或存在于有机物质中的其他组分。
清洁组合物:术语"清洁组合物"是指可用于从待清洁的物品如纺织品除去不希望的化合物的组合物。清洁组合物可用于例如清洁纺织品,用于家用清洁和工业清洁。所述术语包括为所需的特定类型的清洁组合物和产品形式(例如,液体、凝胶、粉末、颗粒、糊剂或喷雾组合物)选择的任何材料/化合物,并且包括但不限于,洗涤剂组合物(例如,液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂、织物清新剂、织物柔软剂以及纺织品和衣物预洗剂(prespotter)/预处理剂)。除含有酶之外,清洁组合物可以含有一种或多种另外的酶(如淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶、或它们的任何混合物),和/或清洁组分,例如洗涤剂辅助成分,如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白体系或漂白组分、聚合物、织物调理剂、泡沫促进剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂(tannishinhibitor)、光学增亮剂、杀菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、抗腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧剂和增溶剂,所有这些均如本文所定义。
术语"酶洗涤益处"在本文中定义为与不含酶的相同洗涤剂相比,酶可添加至洗涤剂的有利效果。可由酶提供的重要去污益处是在洗涤和/或清洁后去污而没有或几乎没有可见污垢,防止或减少在洗涤过程中释放的污垢的再沉积(也称为抗再沉积的效果),完全或部分恢复纺织品的白度,所述纺织品最初是白色的,但在重复使用和洗涤后已获得浅灰色或浅黄色外观(也称为增白的效果)。与催化去污或防止污垢再沉积不直接相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一种织物转移到另一种织物或同一织物的另一部分(也称为染料转移抑制或抗回染的效果)、从织物表面除去突出或断裂的纤维以减少起球倾向或除去已经存在的起球或绒毛(也称为抗起球的效果)、改善织物柔软性、织物的颜色澄清和除去捕获在织物或服装的纤维中的颗粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处,其中催化活性通常用于催化形成漂白组分如过氧化氢或其它过氧化物。与催化去污或防止污垢再沉积不直接相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一种纺织品转移到另一种纺织品或同一纺织品的另一部分(也称为染料转移抑制或抗回染的效果),从纺织品表面除去突出或断裂的纤维以减少起球倾向或除去已经存在的起球或绒毛(也称为抗起球的效果),改善纺织品柔软性,纺织品的颜色澄清和除去捕获在纺织品纤维中的颗粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处,其中催化活性通常用于催化形成漂白组分如过氧化氢或其它过氧化物或其它漂白物质。
术语"硬表面清洁"在本文中定义为清洁硬表面,其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等,以及硬物体如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)的表面。餐具洗涤包括但不限于清洁盘子、杯子、玻璃制品、碗、餐具如勺子、刀、叉、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃和丙烯酸类树脂。
术语"洗涤性能"用作酶在例如洗涤或硬表面清洁期间除去存在于待清洁物体上的污渍的能力。
术语"白度"在本文中定义为纺织品变灰或变黄的量度。白度的损失可能是由于光学增亮剂/调色剂的除去。变灰和变黄可能是由于污垢再沉积、身体污垢、来自例如铁和铜离子的着色或染料转移。白度损失可能与以下列表中的一个或几个问题有关:着色剂或染料效应;不完全污渍去除(例如身体污垢、皮脂等);再沉积(物体变灰、变黄或其他变色)(除去的污垢与纺织品的其他部分重新缔合,污染或未污染);纺织品在应用过程中的化学变化;以及颜色的澄清或增亮。
术语"衣物洗涤"涉及家用洗衣物涤和工业衣物洗涤两者,并且表示用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行,或者可以手动进行。
术语"恶臭"是指在清洁物品上不期望的气味。经清洁的物品应闻起来清新干净,而没有附着在物品上的恶臭。恶臭的一个实例是由于具有令人不快的气味的化合物,其可由微生物产生。令人不快的气味的另一个实例可以是粘附到已经与人或动物接触的物品上的汗液或体臭。恶臭的另一个实例可以是粘附到物品上的来自调味品的气味,其例如咖喱或气味强烈的其他外来调味品。
术语"成熟多肽"表示翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化、磷酸化等之后处于其最终形式的多肽。
术语"纺织品"是指任何纺织材料,包括纱线、纱线中间体、纤维、非织造材料、天然材料、合成材料和任何其他纺织材料,由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如,服装和其他制品)。纺织品或织物可以是针织物、织造物、牛仔布、非织造物、毛毡、纱线和毛巾布的形式。纺织品可以是基于纤维素的,例如天然纤维素,包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰皮纤维,或人造纤维素(例如来源于木浆),包括粘胶/人造丝、醋酸纤维素纤维(Tricell)、莱赛尔纤维或它们的共混物。纺织品或织物也可以是非纤维素基的,例如天然聚酰胺,包括羊毛、骆驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和丝,或合成聚合物,如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸类、聚丙烯和氨纶/弹性纤维,或它们的共混物,以及纤维素基和非纤维素基纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶与一种或多种伴随材料的共混物,所述伴随材料例如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸类纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物,例如污染的家庭衣物。当使用术语织物或服装时,其旨在也包括更宽泛的术语纺织品。
术语"变体"表示具有亲本或前体多肽的活性并且与前体或亲本多肽相比在一个或多个位置处包含改变即取代、插入和/或缺失的多肽。取代表示用不同的氨基酸替换占据位置的氨基酸;缺失表示去除占据位置的氨基酸;和插入表示在占据位置的氨基酸附近和紧随其后添加氨基酸。
序列同一性:两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数"序列同一性"描述。出于本发明的目的,两个氨基酸序列之间的序列同一性可以使用如在EMBOSS包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等人,2000,Trends Genet.16:276-277)(优选6.6.0版或更新版本)的Needle程序中所实施的Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)来确定。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。Needle标记的"最长同一性"的输出(使用-nobrief选项获得)用作同一性百分比,并如下计算:
(相同残基×100)/(比对长度-比对中的空位总数)
命名法:出于本发明的目的,命名法[E/Q]表示该位置处的氨基酸可以是谷氨酸(Glu,E)或谷氨酰胺(Gln,Q)。同样地,命名[V/G/A/L]表示该位置处的氨基酸可以是缬氨酸(Val,V)、甘氨酸(Gly,G)、丙氨酸(Ala,A)或异亮氨酸(Ile,I),对于如本文所述的其他组合,等等。除非另外进一步限制,否则氨基酸X被定义为使得其可以是20种天然氨基酸中的任一种。
对于氨基酸取代,使用以下命名法:原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。例如,位置220处的苏氨酸被丙氨酸取代被指定为"T220A"。多个取代可由加号("+")分开,例如"T220A+G229V",其分别表示在位置220和229处苏氨酸(T)被丙氨酸(A)取代以及甘氨酸(G)被缬氨酸(V)取代。或者,可以列出多个取代,其中各个突变由空格或逗号分隔。在特定位置的替代取代可以用斜线("/")表示。例如,用丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸取代位置220处的苏氨酸可以称为"T220A/V/L"。
序列表
<110> 汉高股份有限及两合公司
<120> 包含分散蛋白VIII的清洁组合物
<130> P79702_2019P00544WO
<160> 39
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 359
<212> PRT
<213> 伴放线凝聚杆菌
<400> 1
Cys Val Lys Gly Asn Ser Ile His Pro Gln Lys Thr Ser Thr Lys Gln
1 5 10 15
Thr Gly Leu Met Leu Asp Ile Ala Arg His Phe Tyr Ser Pro Glu Val
20 25 30
Ile Lys Ser Phe Ile Asp Thr Ile Ser Leu Ser Gly Gly Asn Phe Leu
35 40 45
His Leu His Phe Ser Asp His Glu Asn Tyr Ala Ile Glu Ser His Leu
50 55 60
Leu Asn Gln Arg Ala Glu Asn Ala Val Gln Gly Lys Asp Gly Ile Tyr
65 70 75 80
Ile Asn Pro Tyr Thr Gly Lys Pro Phe Leu Ser Tyr Arg Gln Leu Asp
85 90 95
Asp Ile Lys Ala Tyr Ala Lys Ala Lys Gly Ile Glu Leu Ile Pro Glu
100 105 110
Leu Asp Ser Pro Asn His Met Thr Ala Ile Phe Lys Leu Val Gln Lys
115 120 125
Asp Arg Gly Ile Lys Tyr Leu Gln Gly Leu Lys Ser Arg Gln Val Asp
130 135 140
Asp Glu Ile Asp Ile Thr Asn Ala Asp Ser Ile Ala Phe Met Gln Ser
145 150 155 160
Leu Met Ser Glu Val Ile Asp Ile Phe Gly Asp Thr Ser Gln His Phe
165 170 175
His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Gly Tyr Ser Val Glu Ser Asn His Glu
180 185 190
Phe Ile Thr Tyr Ala Asn Lys Leu Ser Tyr Phe Leu Glu Lys Lys Gly
195 200 205
Leu Lys Thr Arg Met Trp Asn Asp Gly Leu Ile Lys Ser Thr Phe Glu
210 215 220
Gln Ile Asn Pro Asn Ile Glu Ile Thr Tyr Trp Ser Tyr Asp Gly Asp
225 230 235 240
Thr Gln Asp Lys Asn Glu Ala Ala Glu Arg Arg Asp Met Arg Val Ser
245 250 255
Leu Pro Glu Leu Leu Ala Lys Gly Phe Thr Val Leu Asn Tyr Asn Ser
260 265 270
Tyr Tyr Leu Tyr Ile Val Pro Lys Ala Ser Pro Thr Phe Ser Gln Asp
275 280 285
Ala Ala Phe Ala Ala Lys Asp Val Ile Lys Asn Trp Asp Leu Gly Val
290 295 300
Trp Asp Gly Arg Asn Thr Lys Asn Arg Val Gln Asn Thr His Glu Ile
305 310 315 320
Ala Gly Ala Ala Leu Ser Ile Trp Gly Glu Asp Ala Lys Ala Leu Lys
325 330 335
Asp Glu Thr Ile Gln Lys Asn Thr Lys Ser Leu Leu Glu Ala Val Ile
340 345 350
His Lys Ala Asn Gly Asp Glu
355
<210> 2
<211> 346
<212> PRT
<213> 痰嗜血杆菌
<400> 2
Gln Asn Ser Thr Lys Gln Ser Gly Leu Met Leu Asp Ile Ser Arg Arg
1 5 10 15
Phe Tyr Ser Val Glu Thr Ile Lys Gln Phe Ile Asp Asp Ile Ala Gln
20 25 30
Ala Asn Gly Thr Phe Leu His Leu His Phe Ala Asp His Glu Asn Tyr
35 40 45
Ala Leu Glu Ser Thr Phe Leu Asn Gln Arg Ala Glu Asn Ala Ile Val
50 55 60
Gln Asn Gly Ile Tyr Ile Asn Pro Lys Thr Asn Lys Pro Phe Leu Thr
65 70 75 80
Tyr Glu Gln Ile Asp Gln Ile Ile Arg Tyr Ala Gln Glu Lys Gln Ile
85 90 95
Glu Leu Ile Pro Glu Val Asp Ser Pro Ala His Ile Lys Gly Ile Leu
100 105 110
Thr Leu Leu Arg Leu Glu Lys Gly Glu Asp Tyr Val Asn Gln Ile Ala
115 120 125
Leu Asn Gln Asp Glu Leu Asn Leu Asp Ser Pro Glu Ser Leu Thr Met
130 135 140
Met Lys Thr Leu Val Asp Glu Val Cys Tyr Ile Phe Gly Tyr Ser Ala
145 150 155 160
Gln His Phe His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Asn Tyr Ala Ser Asn Phe
165 170 175
Ile Arg Tyr Val Asn Ala Leu Asn Gln His Ile Asn Gln Lys Gly Leu
180 185 190
Ile Thr Arg Met Trp Asn Asp Gly Leu Leu Gln Gln Asn Ile Asp Glu
195 200 205
Leu Asp Lys Asn Ile Glu Ile Thr Tyr Trp Ser Phe Asp Gly Asp Ala
210 215 220
Gln Glu Lys Asn Asp Ile Val Glu Arg Arg Ala Thr Arg Ile Ser Leu
225 230 235 240
Pro Thr Leu Leu Asp Lys Gly Phe Lys Ala Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr
245 250 255
Tyr Leu Tyr Phe Ile Pro Lys Asp Asn Gly Asn Ile Ala Thr Asp Ala
260 265 270
Lys Phe Ala Leu Asn Asp Leu Lys Gln Asn Trp Gln Leu Leu Arg Trp
275 280 285
Asp Gly Asn Tyr Glu Thr Gln Pro Ile Gln Gln Ala Glu Asn Leu Ile
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Gly Ala Ala Phe Ser Ile Trp Gly Glu His Ala Gly Lys Leu Ser Asp
305 310 315 320
Asp Val Ile His Gln Ala Thr Ser Pro Leu Ile Gln Ala Thr Ile Ile
325 330 335
Gln Thr Asn Ala Lys Thr Thr Gly Pro Asn
340 345
<210> 3
<211> 352
<212> PRT
<213> 猪放线杆菌
<400> 3
Met Asn His Ser Gln Ile Lys Glu Ala Gly Leu Thr Leu Asp Ile Ala
1 5 10 15
Arg Arg Phe Tyr Pro Val Glu Thr Ile Lys Gln Phe Ile Asp Thr Ile
20 25 30
His His Ala Gly Gly Thr Phe Leu His Leu His Phe Ser Asp His Glu
35 40 45
Asn Tyr Ala Leu Glu Ser Thr Tyr Leu Asp Gln Ser Glu Ala Asn Ala
50 55 60
Ile Val Lys Asp Gly Thr Tyr Tyr Asn Pro Lys Thr Asn Lys Pro Phe
65 70 75 80
Leu Thr Tyr Lys Gln Ile His Asp Ile Ile Tyr Tyr Ala Lys Ser Lys
85 90 95
Asn Ile Glu Leu Val Pro Glu Val Asp Thr Pro Asn His Met Thr Ala
100 105 110
Ile Phe Arg Leu Leu Glu Ala Lys His Gly Lys Asp Tyr Val Lys Lys
115 120 125
Leu Lys Ser Lys Met Asn Asp Glu Glu Ile Asp Ile Thr Asn Pro Glu
130 135 140
Ser Ile Glu Val Ile Lys Thr Leu Ile Ala Glu Val Ile Tyr Ile Phe
145 150 155 160
Gly His Ala Ser Glu His Phe His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Gly Tyr
165 170 175
Ser Val Glu Thr Asn His Glu Phe Ile Ser Tyr Val Asn Thr Leu Asn
180 185 190
Gln Phe Ile Asn Glu Lys Gly Lys Ile Thr Arg Ile Trp Asn Asp Gly
195 200 205
Leu Ile Lys Asn Asn Leu Asn Gln Leu Asn Lys Asn Val Glu Ile Thr
210 215 220
Tyr Trp Ser Tyr Asp Gly Asp Ala Gln Glu Ser Gln Asp Ile Ala Glu
225 230 235 240
Arg Arg Lys Ile Arg Ala Asn Leu Pro Glu Leu Leu Glu Asn Gly Phe
245 250 255
Lys Val Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu Tyr Phe Val Pro Lys Gly
260 265 270
Asn Ala Asn Ile Thr His Asp Ser Lys Tyr Ala Thr Glu Asp Val Leu
275 280 285
Asn Asn Trp Lys Leu Gly Leu Trp Asp Gly Gln Asn Lys Glu Asn Met
290 295 300
Val Glu Asn Thr Lys Asn Ile Ile Gly Ser Ser Leu Ser Ile Trp Gly
305 310 315 320
Glu Arg Ser Gly Ser Leu Ser Ser Glu Val Ile Glu Glu Ser Thr Gln
325 330 335
Asp Leu Leu Lys Ala Val Ile Gln Lys Thr Asn Asp Pro Lys Ser His
340 345 350
<210> 4
<211> 352
<212> PRT
<213> 荚膜放线杆菌 DSM 19761
<400> 4
Met Asn His Ser Gln Ile Lys Glu Ala Gly Leu Thr Leu Asp Ile Ala
1 5 10 15
Arg Arg Phe Tyr Pro Val Glu Thr Ile Lys Gln Phe Ile Asp Thr Ile
20 25 30
His His Ala Gly Gly Thr Phe Leu His Leu His Phe Ser Asp His Glu
35 40 45
Asn Tyr Ala Leu Glu Ser Thr Tyr Leu Asp Gln Leu Glu Ala Asn Ala
50 55 60
Ile Val Lys Asp Gly Thr Tyr Tyr Asn Pro Thr Thr Asn Lys Pro Phe
65 70 75 80
Leu Thr Tyr Lys Gln Ile Asn Asp Ile Ile Tyr Tyr Ala Lys Ser Lys
85 90 95
Asn Ile Glu Leu Val Pro Glu Val Asp Thr Pro Asn His Met Thr Ala
100 105 110
Ile Phe Arg Leu Leu Glu Ala Lys His Ser Lys Asp Tyr Val Lys Arg
115 120 125
Leu Lys Ser Lys Met Asn Asp Glu Glu Ile Asp Ile Thr Asn Leu Glu
130 135 140
Ser Ile Glu Val Ile Lys Thr Leu Ile Ala Glu Val Ile Tyr Ile Phe
145 150 155 160
Gly His Ala Ser Glu His Phe His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Gly Tyr
165 170 175
Ser Val Glu Thr Asn His Glu Phe Ile Thr Tyr Val Asn Thr Leu Asn
180 185 190
Gln Phe Ile Asn Asn Lys Gly Lys Ile Thr Arg Ile Trp Asn Asp Gly
195 200 205
Leu Ile Lys Asn Asn Leu Asn Gln Leu Asn Lys Asn Val Glu Ile Thr
210 215 220
Tyr Trp Ser Tyr Asp Gly Asp Ala Gln Glu Ser Gln Asp Ile Ala Glu
225 230 235 240
Arg Arg Lys Ile Arg Val Asn Leu Pro Glu Leu Leu Glu Asn Gly Phe
245 250 255
Lys Val Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu Tyr Phe Val Pro Lys Gly
260 265 270
Asn Ala Asn Ile Thr His Asp Ser Lys His Ala Thr Glu Asp Val Leu
275 280 285
Lys Asn Trp Lys Leu Gly Leu Trp Asp Gly Gln Asn Lys Glu Asn Ile
290 295 300
Val Glu Asn Thr Lys Asn Ile Ile Gly Ser Ser Leu Ser Ile Trp Gly
305 310 315 320
Glu His Ser Gly Ser Leu Ser Ser Ala Val Ile Glu Glu Ser Thr Gln
325 330 335
Glu Leu Leu Lys Ala Val Ile Gln Lys Thr Asn Asp Pro Lys Ser His
340 345 350
<210> 5
<211> 352
<212> PRT
<213> 马放线杆菌马亚种
<400> 5
Met Asn His Ser Gln Ile Lys Glu Ala Gly Leu Thr Leu Asp Ile Ala
1 5 10 15
Arg Arg Phe Tyr Pro Val Glu Thr Ile Lys Gln Phe Ile Asp Thr Ile
20 25 30
His His Ala Gly Gly Thr Phe Leu His Leu His Phe Ser Asp His Glu
35 40 45
Asn Tyr Ala Leu Glu Ser Ser Tyr Leu Asp Gln Ser Glu Glu Asn Ala
50 55 60
Ile Val Lys Asp Gly Thr Tyr Tyr Asn Pro Lys Thr Asn Lys Pro Phe
65 70 75 80
Leu Thr Tyr Lys Gln Ile Asp Asp Ile Ile Tyr Tyr Ala Lys Ser Lys
85 90 95
Asn Ile Glu Leu Val Pro Glu Val Asp Thr Pro Asn His Met Thr Ala
100 105 110
Ile Phe Asn Leu Leu Glu Ile Lys His Gly Glu Ala Tyr Val Lys Asn
115 120 125
Leu Lys Ser Lys Met Asn Asp Glu Glu Ile Asp Ile Thr Asn Pro Glu
130 135 140
Ser Ile Glu Val Ile Lys Thr Leu Ile Ala Glu Val Ile Tyr Ile Phe
145 150 155 160
Gly His Ala Ser Glu His Phe His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Gly Tyr
165 170 175
Ser Val Glu Thr Asn His Glu Phe Ile Ser Tyr Val Asn Thr Leu Asn
180 185 190
Gln Phe Ile Asn Glu Lys Gly Lys Ile Thr Arg Ile Trp Asn Asp Gly
195 200 205
Leu Ile Lys Asn Asn Leu Asn Gln Leu Asn Lys Asn Val Glu Ile Thr
210 215 220
Tyr Trp Ser Tyr Asp Gly Asp Ala Gln Lys Ser Gln Asp Ile Ala Glu
225 230 235 240
Arg Arg Lys Ile Arg Ala Asp Leu Pro Glu Leu Leu Glu Asn Gly Phe
245 250 255
Lys Val Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu Tyr Phe Val Pro Lys Gly
260 265 270
Asn Ala Asn Ile Thr His Asp Ser Lys Tyr Ala Thr Glu Asp Val Leu
275 280 285
Asn Asn Trp Lys Leu Gly Leu Trp Asp Gly Lys Asn Lys Glu Asn Glu
290 295 300
Val Lys Asn Thr Lys Asn Ile Ile Gly Ser Ser Leu Ser Ile Trp Gly
305 310 315 320
Glu Arg Ser Gly Ser Leu Ser Ser Glu Val Ile Glu Glu Ser Thr Gln
325 330 335
Asp Leu Leu Lys Ala Val Ile Gln Lys Thr Asn Asp Pro Lys Ser His
340 345 350
<210> 6
<211> 359
<212> PRT
<213> 伴放线凝聚杆菌
<400> 6
Cys Val Lys Gly Asn Ser Ile Tyr Pro Gln Lys Ile Ser Thr Lys Gln
1 5 10 15
Thr Gly Leu Met Leu Asp Ile Ala Arg His Phe Tyr Ser Pro Glu Val
20 25 30
Ile Lys Ser Phe Ile Asp Thr Ile Ser Leu Ser Gly Gly Asn Phe Leu
35 40 45
His Leu His Phe Ser Asp His Glu Asn Tyr Ala Ile Glu Ser His Leu
50 55 60
Leu Asn Gln Arg Ala Glu Asn Ala Val Gln Gly Lys Asp Gly Ile Tyr
65 70 75 80
Ile Asn Pro Tyr Thr Gly Lys Pro Phe Leu Ser Tyr Arg Gln Leu Asp
85 90 95
Asp Ile Lys Ala Tyr Ala Lys Ala Lys Gly Ile Glu Leu Ile Pro Glu
100 105 110
Leu Asp Ser Pro Asn His Met Thr Ala Ile Phe Lys Leu Val Gln Lys
115 120 125
Asp Arg Gly Val Lys Tyr Leu Gln Gly Leu Lys Ser Arg Gln Val Asp
130 135 140
Asp Glu Ile Asp Ile Thr Asn Ala Asp Ser Ile Ala Phe Met Gln Ser
145 150 155 160
Leu Met Asn Glu Val Ile Asp Ile Phe Gly Asp Thr Ser Gln His Phe
165 170 175
His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Gly Tyr Ser Val Glu Ser Asn His Glu
180 185 190
Phe Ile Thr Tyr Ala Asn Lys Leu Ser Tyr Phe Leu Glu Lys Lys Gly
195 200 205
Leu Lys Thr Arg Met Trp Asn Asp Gly Leu Ile Lys Ser Thr Phe Glu
210 215 220
Gln Ile Asn Pro Asn Ile Glu Ile Thr Tyr Trp Ser Tyr Asp Gly Asp
225 230 235 240
Thr Gln Asp Lys Asn Glu Ala Ala Glu Arg Arg Asp Met Arg Val Ser
245 250 255
Leu Pro Glu Leu Leu Ala Lys Gly Phe Thr Val Leu Asn Tyr Asn Ser
260 265 270
Tyr Tyr Leu Tyr Ile Val Pro Lys Ala Ser Pro Thr Phe Ser Gln Asp
275 280 285
Ala Ala Phe Ala Ala Lys Asp Val Ile Lys Asn Trp Asp Leu Gly Val
290 295 300
Trp Asp Gly Arg Asn Thr Lys Asn Arg Val Gln Asn Thr His Glu Ile
305 310 315 320
Ala Gly Ala Ala Leu Ser Ile Trp Gly Glu Asp Ala Lys Ala Leu Lys
325 330 335
Asp Glu Thr Ile Gln Lys Asn Thr Lys Ser Leu Leu Glu Ala Val Ile
340 345 350
His Lys Thr Asn Gly Asp Glu
355
<210> 7
<211> 359
<212> PRT
<213> 伴放线凝聚杆菌
<400> 7
Cys Val Lys Gly Asn Ser Ile Tyr Pro Gln Lys Thr Ser Thr Lys Gln
1 5 10 15
Thr Gly Leu Met Leu Asp Ile Ala Arg His Phe Tyr Ser Pro Glu Val
20 25 30
Ile Lys Ser Phe Ile Asp Thr Ile Ser Leu Ser Gly Gly Asn Phe Leu
35 40 45
His Leu His Phe Ser Asp His Glu Asn Tyr Ala Ile Glu Ser His Leu
50 55 60
Leu Asn Gln Arg Ala Glu Asn Ala Val Gln Gly Lys Asp Gly Ile Tyr
65 70 75 80
Ile Asn Pro Tyr Thr Gly Lys Pro Phe Leu Ser Tyr Arg Gln Leu Asp
85 90 95
Asp Ile Lys Ala Tyr Ala Lys Ala Lys Gly Ile Glu Leu Ile Pro Glu
100 105 110
Leu Asp Ser Pro Asn His Met Thr Ala Ile Phe Lys Leu Val Gln Lys
115 120 125
Asp Arg Gly Val Lys Tyr Leu Gln Gly Leu Lys Ser Arg Gln Val Asp
130 135 140
Asp Glu Ile Asp Ile Thr Asn Ala Asp Ser Ile Thr Phe Met Gln Ser
145 150 155 160
Leu Met Ser Glu Val Ile Asp Ile Phe Gly Asp Thr Ser Gln His Phe
165 170 175
His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Gly Tyr Ser Val Glu Ser Asn His Glu
180 185 190
Phe Ile Thr Tyr Ala Asn Lys Leu Ser Tyr Phe Leu Glu Lys Lys Gly
195 200 205
Leu Lys Thr Arg Met Trp Asn Asp Gly Leu Ile Lys Asn Thr Phe Glu
210 215 220
Gln Ile Asn Pro Asn Ile Glu Ile Thr Tyr Trp Ser Tyr Asp Gly Asp
225 230 235 240
Thr Gln Asp Lys Asn Glu Ala Ala Glu Arg Arg Asp Met Arg Val Ser
245 250 255
Leu Pro Glu Leu Leu Ala Lys Gly Phe Thr Val Leu Asn Tyr Asn Ser
260 265 270
Tyr Tyr Leu Tyr Ile Val Pro Lys Ala Ser Pro Thr Phe Ser Gln Asp
275 280 285
Ala Ala Phe Ala Ala Lys Asp Val Ile Lys Asn Trp Asp Leu Gly Val
290 295 300
Trp Asp Gly Arg Asn Thr Lys Asn Arg Val Gln Asn Thr His Glu Ile
305 310 315 320
Ala Gly Ala Ala Leu Ser Ile Trp Gly Glu Asp Ala Lys Ala Leu Lys
325 330 335
Asp Glu Thr Ile Gln Lys Asn Thr Lys Ser Leu Leu Glu Ala Val Ile
340 345 350
His Lys Thr Asn Gly Asp Glu
355
<210> 8
<211> 351
<212> PRT
<213> 胸膜肺炎放线杆菌
<400> 8
Met Asp Leu Pro Lys Lys Glu Ser Gly Leu Thr Leu Asp Ile Ala Arg
1 5 10 15
Arg Phe Tyr Thr Val Asp Thr Ile Lys Gln Phe Ile Asp Thr Ile His
20 25 30
Gln Ala Gly Gly Thr Phe Leu His Leu His Phe Ser Asp His Glu Asn
35 40 45
Tyr Ala Leu Glu Ser Ser Tyr Leu Glu Gln Arg Glu Glu Asn Ala Thr
50 55 60
Glu Lys Asn Gly Thr Tyr Phe Asn Pro Lys Thr Asn Lys Pro Phe Leu
65 70 75 80
Thr Tyr Lys Gln Leu Asn Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Lys Glu Arg Asn
85 90 95
Ile Glu Ile Val Pro Glu Val Asp Ser Pro Asn His Met Thr Ala Ile
100 105 110
Phe Asp Leu Leu Thr Leu Lys His Gly Lys Glu Tyr Val Lys Gly Leu
115 120 125
Lys Ser Pro Tyr Ile Ala Glu Glu Ile Asp Ile Asn Asn Pro Glu Ala
130 135 140
Val Glu Val Ile Lys Thr Leu Ile Gly Glu Val Ile Tyr Ile Phe Gly
145 150 155 160
His Ser Ser Arg His Phe His Ile Gly Gly Asp Glu Phe Ser Tyr Ala
165 170 175
Val Glu Asn Asn His Glu Phe Ile Arg Tyr Val Asn Thr Leu Asn Asp
180 185 190
Phe Ile Asn Ser Lys Gly Leu Ile Thr Arg Val Trp Asn Asp Gly Leu
195 200 205
Ile Lys Asn Asn Leu Ser Glu Leu Asn Lys Asn Ile Glu Ile Thr Tyr
210 215 220
Trp Ser Tyr Asp Gly Asp Ala Gln Ala Lys Glu Asp Ile Gln Tyr Arg
225 230 235 240
Arg Glu Ile Arg Ala Asp Leu Pro Glu Leu Leu Ala Asn Gly Phe Lys
245 250 255
Val Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu Tyr Phe Val Pro Lys Ser Gly
260 265 270
Ser Asn Ile His Asn Asp Gly Lys Tyr Ala Ala Glu Asp Val Leu Asn
275 280 285
Asn Trp Thr Leu Gly Lys Trp Asp Gly Lys Asn Ser Ser Asn His Val
290 295 300
Gln Asn Thr Gln Asn Ile Ile Gly Ser Ser Leu Ser Ile Trp Gly Glu
305 310 315 320
Arg Ser Ser Ala Leu Asn Glu Gln Thr Ile Gln Gln Ala Ser Lys Asn
325 330 335
Leu Leu Lys Ala Val Ile Gln Lys Thr Asn Asp Pro Lys Ser His
340 345 350
<210> 9
<211> 461
<212> PRT
<213> 海洋沉降短小杆菌
<400> 9
Ala Asp Arg Asn Thr Ser Ala Ala Glu Ala Ala Val Thr Ser Ile Ala
1 5 10 15
Pro Arg Ala Thr Ile Thr Gly Val Ala Ala Ile Ser Ala Ala Thr Ser
20 25 30
Ser Arg Thr Thr Val Arg Thr Thr Leu Thr Leu Glu Asn Arg Ser Gly
35 40 45
Glu Arg Glu Ser Ala Ala Asp Ala Trp Leu Tyr Leu Ala Gly Gly Gly
50 55 60
Ala Arg Tyr Ala Leu Gly His Ala Pro Val Arg Ala Leu Ala Ala Gly
65 70 75 80
Ala Arg Ala Thr Val Arg Thr Thr Leu Arg Val Pro Ser Arg Ala Pro
85 90 95
Ala Gly Lys Tyr Ala Val Leu Ala Cys Ala Gly Pro Tyr Ser Lys Gln
100 105 110
Ala Cys Arg Thr Ser Gly Thr Thr Val Thr Val Gly Thr Ala Ala Arg
115 120 125
Ala Arg Pro Glu Thr Gly Val Met Leu Asp Val Ala Arg Ala Tyr Tyr
130 135 140
Pro Val Ser Leu Ile Glu Gln Tyr Val Asp Leu Leu Ala Glu His Gly
145 150 155 160
Gly Gly Phe Leu His Leu His Leu Thr Asp Asp Gln Asn Val Gly Ile
165 170 175
Glu Ser Ala Val Leu Gly Gln Thr Pro Ala Asn Ala Val Leu Arg Asn
180 185 190
Gly Val Tyr Thr Ser Arg Val Thr Gly Arg Pro Phe Leu Ser Ala Ala
195 200 205
Gln Ala Arg Ala Ile Ser Ala Tyr Ala Ala Lys Arg Gly Ile Ala Ile
210 215 220
Val Pro Glu Val Asp Ser Pro Gly His Met Ala Ala Ala Phe Ala Leu
225 230 235 240
Leu Glu Ala Arg His Gly Ala Thr Trp Val Asp Arg Ile Arg Ser Gly
245 250 255
Glu Ser Glu Leu Asp Thr Ser Val Pro Glu Ser Ala Thr Leu Ala Ala
260 265 270
Glu Leu Leu Arg Glu Val Thr Gln Thr Phe Pro Ser Ser Arg Thr Val
275 280 285
His Ile Gly Gly Asp Glu Trp Gly Ala Asp Val Ser Ala Asp Glu Arg
290 295 300
Val Gly Trp Met Asn Ala Met Ala Ala Ala Ile Gly Asp Arg Glu Val
305 310 315 320
Trp Ala Trp Asn Asp Gly Ile Asp Arg Ala Ser Val Gly Arg Leu Asp
325 330 335
Pro Arg Ile His Val Thr Tyr Trp Ser Phe Asp Gly Asp Thr Glu Asp
340 345 350
Ala Ala Glu Arg Arg Glu Arg Arg Ala Arg Arg Ala Ser Ala Thr Asp
355 360 365
Leu Gln Arg Ala Gly Ile Asp Leu Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu
370 375 380
Tyr Glu Val Pro Thr Asp Leu Asp Pro Ala Asp Ser Glu Tyr Thr Val
385 390 395 400
Ala Asp Leu Arg Glu His Trp Ser Leu Arg Ala Trp Asp Gly Asp Ser
405 410 415
Gly Ala Arg Leu Ala Ala Pro Met Ser Gly Ala Ala Val Ala Ile Trp
420 425 430
Gly Glu Asp Leu Asp Gly Ala Pro Ser Glu Ala Leu Leu Arg Trp Ser
435 440 445
Ala Pro His Val Thr Ala Met Ile Glu Thr Ala Ala Ser
450 455 460
<210> 10
<211> 445
<212> PRT
<213> 萎蔫短小杆菌
<400> 10
Asp Thr Ala Val Ser Ala Val Thr Val Thr Lys Val Thr Ala Ser Thr
1 5 10 15
Thr Gly Thr Val Val Arg Thr Thr Leu Lys Val Glu Asn Thr Ala Pro
20 25 30
Val Arg Lys Pro Ala Ser Ser Val Trp Leu Tyr Leu Ser Ala Gly Thr
35 40 45
Glu Lys Tyr Thr Leu Gly Arg Val Ala Val Lys Ala Leu Ala Ala Gly
50 55 60
Ser Ser Thr Ser Val Thr Ala Val Arg Gly Thr Pro Ser Arg Ala Ala
65 70 75 80
Ala Gly Lys Tyr Ser Val Leu Ala Cys Ala Gly Ala Tyr Ser Ala Lys
85 90 95
Gln Cys Arg Thr Ser Thr Ala Thr Val Thr Thr Lys Pro Thr Lys Arg
100 105 110
Ala Arg Pro Glu Thr Gly Val Met Leu Asp Val Ala Arg Ala Tyr Tyr
115 120 125
Pro Val Ala Leu Ile Lys Arg Tyr Ile Asp Leu Leu Ala Asp Asp Gly
130 135 140
Gly Arg Phe Leu His Leu His Leu Thr Asp Asp Gln Asn Val Gly Ile
145 150 155 160
Glu Ser Thr Val Leu Gly Gln Thr Pro Ala Asn Ala Asp Leu Asp His
165 170 175
Gly Val Tyr Thr Ser Arg Val Thr His Arg Pro Phe Leu Ser Ala Ala
180 185 190
Gln Ala Arg Thr Ile Ser Ala Tyr Gly Ala Glu Arg Gly Val Ala Ile
195 200 205
Val Pro Glu Ile Asp Thr Pro Gly His Met Ala Ala Ala Phe Ala Leu
210 215 220
Leu Glu Ala Gln His Gly Thr Lys Trp Val Asp Arg Ile Arg Ser Gly
225 230 235 240
Glu Asn Glu Leu Asp Thr Ser Ala Pro Glu Ser Leu Ala Leu Ala Lys
245 250 255
Lys Leu Tyr Ala Glu Val Gln Arg Thr Phe Pro Ser Ser Arg Thr Val
260 265 270
His Ile Gly Gly Asp Glu Trp Gly Asp Asp Val Thr Ala Ala Gln Arg
275 280 285
Val Thr Trp Met Asn Ala Met Ala Ala Ala Leu Asp Asp Arg Glu Val
290 295 300
Trp Ala Trp Asn Asp Gly Ile Asp Arg Val Ala Val Gly Arg Leu Asp
305 310 315 320
Pro Arg Ile His Val Thr Tyr Trp Ser Phe Asp Gly Asp Thr Glu Asp
325 330 335
Ala Ala Glu Arg Arg Glu Arg Arg Ala Arg Arg Ala Ser Ala Val Asp
340 345 350
Leu Gln Gln Ala Gly Ile Asp Gln Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu
355 360 365
Tyr Glu Val Pro Thr Asp Leu Asp Pro Ala Asp Ser Asp Tyr Thr Val
370 375 380
Ala Asp Leu Arg Glu Asn Trp Ser Leu Arg Ala Trp Asp Gly Asp Ser
385 390 395 400
Gly Ser Leu Leu Ala Ala Pro Met Ser Gly Ala Ala Val Ala Ile Trp
405 410 415
Gly Glu Asp Leu Glu Asp Pro Pro Ser Asp Ala Leu Leu Arg Trp Ser
420 425 430
Ala Pro His Val Thr Ala Met Ile Glu Thr Ala Ala Ser
435 440 445
<210> 11
<211> 445
<212> PRT
<213> 藤黄短小杆菌
<400> 11
Asp Thr Ala Val Ser Ala Val Thr Val Thr Lys Val Thr Ala Ser Thr
1 5 10 15
Thr Gly Thr Ala Val Arg Thr Thr Leu Lys Val Glu Asn Thr Ala Pro
20 25 30
Val Arg Lys Pro Ala Ser Ser Val Trp Leu Tyr Leu Ser Ala Gly Thr
35 40 45
Glu Lys Tyr Thr Leu Gly Arg Val Ala Val Lys Ala Leu Ser Ala Gly
50 55 60
Ser Ser Thr Ser Val Thr Ala Val Arg Gly Thr Pro Ser Arg Ala Ala
65 70 75 80
Ala Gly Lys Tyr Trp Val Leu Ala Cys Ala Gly Ala Tyr Ser Ala Lys
85 90 95
Gln Cys Arg Thr Ser Thr Ala Thr Val Thr Thr Lys Pro Thr Lys Arg
100 105 110
Ala Arg Pro Glu Thr Gly Val Met Leu Asp Val Ala Arg Ala Tyr Tyr
115 120 125
Pro Val Ala Leu Ile Lys Arg Tyr Ile Asp Leu Leu Ala Asp Asp Gly
130 135 140
Gly Arg Phe Leu His Leu His Leu Thr Asp Asp Gln Asn Val Gly Ile
145 150 155 160
Glu Ser Thr Val Leu Gly Gln Thr Pro Ala Asn Ala Asp Leu Asp His
165 170 175
Gly Val Tyr Thr Ser Arg Val Thr His Arg Pro Phe Leu Ser Ala Ala
180 185 190
Gln Ala Arg Thr Ile Ser Glu Tyr Gly Ala Glu Arg Gly Val Thr Ile
195 200 205
Val Pro Glu Ile Asp Thr Pro Gly His Met Ala Ala Ala Phe Ala Leu
210 215 220
Leu Glu Ala Gln His Gly Thr Lys Trp Val Asp Arg Ile Arg Ser Gly
225 230 235 240
Glu Asn Glu Leu Asp Thr Ser Ala Pro Glu Ser Leu Val Leu Ala Lys
245 250 255
Lys Leu Tyr Ala Glu Val Gln Arg Thr Phe Pro Ser Ser Arg Thr Val
260 265 270
His Ile Gly Gly Asp Glu Trp Gly Asp Asp Val Thr Ala Ala His Arg
275 280 285
Val Ala Trp Met Asn Glu Met Ala Ala Thr Leu Gly Asn Arg Glu Val
290 295 300
Trp Ala Trp Asn Asp Gly Ile Asp Arg Val Ala Val Gly Arg Leu Asp
305 310 315 320
Pro Arg Ile His Val Thr Tyr Trp Ser Phe Asp Gly Asp Thr Glu Asp
325 330 335
Ala Ala Glu Arg Arg Glu Arg Arg Ala Arg Arg Ala Ser Ala Val Asp
340 345 350
Leu Gln Gln Ala Gly Ile Asp Gln Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu
355 360 365
Tyr Glu Val Pro Thr Asp Leu Asp Pro Ala Asp Ser Asp Tyr Thr Val
370 375 380
Ala Asp Leu Arg Glu Asn Trp Ser Leu Arg Ala Trp Asp Gly Asp Ser
385 390 395 400
Gly Ser Leu Leu Ala Ala Pro Met Ser Gly Ala Ala Val Ala Ile Trp
405 410 415
Gly Glu Asp Leu Glu Asp Pro Pro Ser Asp Ala Leu Leu Arg Trp Ser
420 425 430
Ala Pro His Val Thr Ala Met Ile Glu Thr Ala Ala Ser
435 440 445
<210> 12
<211> 458
<212> PRT
<213> 海洋沉降短小杆菌
<400> 12
Ile Gly Gly Ser Ala Gly Thr Ala Asp Ala Ser Gly Ala Pro Arg Leu
1 5 10 15
Val Val Thr Lys Val Thr Ala Ser Ser Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr
20 25 30
Thr Val Arg Thr Thr Leu Thr Val Lys Asn Thr Ser Val Ala Arg Lys
35 40 45
Pro Ala Ala Asp Ala Trp Leu Ser Leu Thr Ala Gly Ser Lys Arg Tyr
50 55 60
Thr Leu Gly His Val Ser Val Gln Ser Leu Ala Ala Gly Ala Ser Ala
65 70 75 80
Thr Ile His Ala Thr His Thr Ala Pro Pro Arg Ala Pro Ala Gly Lys
85 90 95
Tyr Ala Val Leu Ala Cys Thr Gly Ala Phe Ser Leu Ser Lys Cys Gly
100 105 110
Thr Ser Ala Thr Thr Val Thr Thr Ala Arg Ala Thr Arg Ala Arg Pro
115 120 125
Asp Thr Gly Val Met Leu Asp Val Ala Arg Ala Tyr Tyr Pro Val Ala
130 135 140
Leu Ile Glu Gln Tyr Ile Ala Leu Leu Ala Asp His Gly Gly Arg Phe
145 150 155 160
Leu His Leu His Leu Thr Asp Asp Gln Asn Val Gly Ile Glu Ser Glu
165 170 175
Val Leu Gly Gln Thr Leu Ala Asn Ala Asp Leu Arg Asp Gly Val Tyr
180 185 190
Thr Ser Arg Ile Thr Gly Arg Pro Phe Leu Ser Ala Ala Gln Ala Arg
195 200 205
Glu Ile Ser Arg Tyr Ala Ala Gln Arg Gly Ile Ala Ile Ile Pro Glu
210 215 220
Ile Asp Thr Pro Gly His Met Ala Ala Ala Phe Ala Leu Leu Glu Ala
225 230 235 240
Gly His Gly Lys Gln Trp Val Asp Arg Ile Arg Ser Gly Glu Ser Glu
245 250 255
Leu Asp Thr Ser Ala Pro Gly Ser Ser Ala Leu Ala Ala Arg Leu Leu
260 265 270
Gln Glu Val Thr Arg Thr Phe Pro Ser Ser Arg Thr Val His Ile Gly
275 280 285
Gly Asp Glu Trp Gly Asp Asp Val Thr Ala Asp Glu Arg Val Gln Trp
290 295 300
Leu Asn Thr Met Ala Ala Ala Val Gly Asn Arg Ala Val Trp Ala Trp
305 310 315 320
Asn Asp Gly Ile Asp Arg Ala Ala Ile Gly Arg Leu Asp Pro Arg Ile
325 330 335
His Val Thr Tyr Trp Ser Phe Asp Gly Asp Thr Glu Asp Ala Thr Glu
340 345 350
Arg Arg Glu Arg Arg Glu Arg Arg Ala Gly Ala Asn Asp Leu Tyr Ala
355 360 365
Ala Gly Ile Asp Leu Leu Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu Tyr Glu Val
370 375 380
Pro Thr Asp Leu Asp Ala Ala Asp Ser Glu Tyr Thr Val Ala Asp Leu
385 390 395 400
Arg Glu Asn Trp Ser Leu Arg Thr Trp Asp Gly Asp Ser Gly Ala Arg
405 410 415
Leu Ala Gly Pro Thr Ser Gly Ala Ala Val Ala Ile Trp Gly Glu Asp
420 425 430
Leu Glu Ala Pro Pro Ser Asp Ala Leu Leu Arg Trp Ser Ala Pro His
435 440 445
Val Leu Ala Met Ile Glu Thr Ala Gly Ser
450 455
<210> 13
<211> 450
<212> PRT
<213> 短小杆菌属leaf154
<400> 13
Ala Gly Ser Thr Thr Ser Thr Val Thr Val Thr Gln Val Thr Ala Thr
1 5 10 15
Thr Thr Ala Ser Ser Thr Gly Thr Ala Val Arg Thr Thr Leu Lys Ile
20 25 30
Lys Asn Thr Ala Ala Val Arg Lys Pro Ala Ser Ser Ala Trp Leu Tyr
35 40 45
Leu Ser Ala Gly Thr Lys Lys Tyr Thr Leu Gly Arg Val Ala Val Lys
50 55 60
Ala Leu Ala Ala Gly Ser Ser Thr Ser Val Thr Ala Val Arg Gly Thr
65 70 75 80
Pro Ser Arg Ala Thr Ala Gly Glu Tyr Ser Val Leu Ala Cys Ala Gly
85 90 95
Ala Tyr Ser Ala Lys Gln Cys Arg Thr Ser Thr Ala Thr Val Thr Thr
100 105 110
Lys Pro Thr Lys Arg Ala Arg Pro Glu Thr Gly Val Met Leu Asp Val
115 120 125
Ala Arg Ala Tyr Tyr Pro Val Ala Leu Ile Lys Arg Tyr Ile Asp Leu
130 135 140
Leu Ala Asp Asp Gly Gly Arg Phe Leu His Leu His Leu Thr Asp Asp
145 150 155 160
Gln Asn Val Gly Ile Glu Ser Thr Val Leu Gly Gln Thr Leu Ala Asn
165 170 175
Ala Asp Leu Asp Glu Gly Val Tyr Thr Ser Arg Val Thr Arg Arg Pro
180 185 190
Phe Leu Ser Ala Ala Gln Ala Arg Thr Ile Ser Asp Tyr Ala Ala Arg
195 200 205
Arg Gly Val Ala Ile Val Pro Glu Ile Asp Thr Pro Gly His Met Thr
210 215 220
Ala Ala Phe Asp Leu Leu Glu Ala Gln His Gly Thr Lys Trp Val Asp
225 230 235 240
Arg Ile Arg Ser Gly Glu Asn Glu Leu Asp Thr Ser Thr Pro Gly Ser
245 250 255
Leu Ala Leu Ala Lys Lys Leu Tyr Ala Glu Val Gln Arg Thr Phe Pro
260 265 270
Ala Ser Arg Thr Val His Ile Gly Gly Asp Glu Trp Gly Asp Asp Val
275 280 285
Ser Ala Ala Glu Arg Val Ala Trp Met Asn Ala Met Ala Ala Ala Leu
290 295 300
Gly Asn Arg Glu Val Trp Ala Trp Asn Asp Gly Ile Asp Arg Val Ala
305 310 315 320
Val Gly Arg Leu Asp Pro Arg Ile His Val Thr Tyr Trp Ser Phe Asp
325 330 335
Gly Asp Thr Glu Asp Ala Ala Glu Arg Arg Glu Arg Arg Ala Arg Arg
340 345 350
Ala Ser Ala Val Asp Leu Gln Gln Ala Gly Ile Asp Met Leu Asn Tyr
355 360 365
Asn Ser Tyr Tyr Leu Tyr Glu Val Pro Thr Asp Leu Asp Pro Ala Asp
370 375 380
Ser Glu Tyr Thr Val Ala Asp Leu Arg Glu Asn Trp Ser Leu Arg Thr
385 390 395 400
Trp Asp Gly Asp Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Pro Met Ser Gly Ala
405 410 415
Ala Val Ala Ile Trp Gly Glu Asp Leu Glu Asp Pro Pro Ser Asp Ala
420 425 430
Leu Leu Arg Trp Ser Ala Pro His Val Thr Ala Met Ile Glu Thr Ala
435 440 445
Ala Ser
450
<210> 14
<211> 324
<212> PRT
<213> 嗜糖土地芽孢杆菌
<400> 14
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Lys Thr Leu Lys Ala Ile Val Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Ala Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asn Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val
115 120 125
Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Lys Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln
210 215 220
Ser Leu Asp Val Gln Asp Phe Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Pro
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn
305 310 315 320
Phe Leu Gly Leu
<210> 15
<211> 324
<212> PRT
<213> 哥里土地芽孢杆菌
<400> 15
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Glu Thr Leu Lys Ser Ile Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Arg Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Gly Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asp Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly
85 90 95
Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val
115 120 125
Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Gly Val His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Glu Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Lys Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln
210 215 220
Gly Leu Asp Val Gln Asp Phe Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ala Thr Arg Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn
305 310 315 320
Phe Leu Gly Leu
<210> 16
<211> 324
<212> PRT
<213> 嗜糖土地芽孢杆菌
<400> 16
Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala Ile Val Asp Glu Ile Asn Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asn Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Asn Val Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Ala
115 120 125
Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Asp Glu Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Ala Gln
210 215 220
Gly Leu Asp Val Gln Asn Phe Glu Glu Lys Gly Phe Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Glu Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn
305 310 315 320
Phe Leu Ser Leu
<210> 17
<211> 324
<212> PRT
<213> 嗜糖土地芽孢杆菌
<400> 17
Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys His Tyr
1 5 10 15
Thr Val Glu Thr Leu Lys Ser Leu Val Asp Glu Ile Ser Tyr Asn Gly
20 25 30
Gly Asn Tyr Val Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Asn Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Tyr Leu Gly Gln Ser Ser Glu Asn Thr Asn Asn Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Lys
65 70 75 80
Asp Ile Leu Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly
85 90 95
Trp Leu Glu Leu Ile Lys Lys Lys Asp Val Lys Leu Tyr Asn Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Glu Glu Thr Leu Asp Tyr Tyr Asp Asn Arg Val
115 120 125
Ala Leu Asp Thr Val Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Glu Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Ser Gly Ser Glu Val His Gln Leu Asp Phe Ile Asp Phe Met
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Ser Thr Val Lys Glu Ser Lys Tyr Glu Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ser Glu Gly Ile Ala Asn Leu Asp Asp Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Gln Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Glu Glu
210 215 220
Ser Leu Asn Val Glu Asp Phe Glu Asn Trp Gly Phe Ser Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Asn Gly Phe Thr Gln
245 250 255
Glu Asp Ile Asn Glu Gln Met Asp Tyr Met Asn Trp Ala Tyr Ala His
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr His Ala Val Glu Thr Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Lys Lys Leu Leu Lys Gln Glu Leu Pro Leu Ile Arg His
305 310 315 320
Tyr Leu Asn Leu
<210> 18
<211> 324
<212> PRT
<213> 嗜糖土地芽孢杆菌
<400> 18
Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile Ser Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr
1 5 10 15
Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala Ile Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile
35 40 45
Ala Ser Asp Tyr Leu Gly Gln Ile Ser Asp Thr Pro Asn Asn Thr Tyr
50 55 60
Leu Thr Lys Asn Asp Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg
65 70 75 80
Asn Ile Leu Ile Ile Pro Asp Met Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly
85 90 95
Trp Leu Glu Leu Met Lys Val Lys Asp Arg Glu Leu Tyr Thr Asp Ile
100 105 110
Val Thr Asp Tyr Ser Asn Glu Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Thr Asp
115 120 125
Ala Leu Asn Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asn Glu Ile Leu Glu Leu Phe
130 135 140
Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp
145 150 155 160
Glu Val Pro Gly Ser Glu Ile His Gln Leu Asp Phe Ile Arg Phe Ile
165 170 175
Asn Gln Ile Ala Ser Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Ala Pro Gln Met
180 185 190
Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ala Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Lys Ser
195 200 205
Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln
210 215 220
Ser Leu Glu Val Gln Asp Phe Glu Asp Trp Asp Phe Pro Val Tyr Asn
225 230 235 240
Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Ile Arg Phe Thr Asp
245 250 255
Glu Asp Ile Thr Glu Gln Met Asn Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr
260 265 270
Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Ser Val Asp Ala Ser
275 280 285
Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp
290 295 300
Leu Ser Gln Glu Glu Leu Leu Glu Gln Glu Leu Pro Leu Ile Lys Lys
305 310 315 320
Phe Leu Ser Leu
<210> 19
<211> 331
<212> PRT
<213> 类植物乳杆菌
<400> 19
Asn Ser Ser Thr Leu Asn Thr Ser Gln Gly Val Met Leu Asp Leu Gly
1 5 10 15
Arg His Pro Leu Asp Glu Thr Ala Ile Lys Ala Val Ile Ser Ala Ala
20 25 30
Ala Glu Gln His Met Gln Tyr Val Glu Leu His Leu Ser Asp Asn Glu
35 40 45
His Leu Cys Phe Gln Ser Ala Tyr Leu Gly Asn Ala Ala Ser Ala Thr
50 55 60
Val Leu Ser Ala Thr Thr Leu Glu Gln Leu Val Ala Tyr Ala Asn Gln
65 70 75 80
Leu Asn Ile Glu Leu Val Pro Asp Val Asp Leu Pro Ser His Ala Gly
85 90 95
Ala Ile Leu Arg Gln Leu Gln Gln Thr His Pro Asp Ile Tyr Asn Thr
100 105 110
Val Lys Leu Asp Asp Glu Thr Ile Asp Tyr Thr Lys Pro Ala Ala Ile
115 120 125
Ser Leu Ala Thr Thr Leu Tyr Gly Glu Leu Asp Ala Ser Phe Asn Asn
130 135 140
Gln Ser Gln His Asp Leu Met Leu Gly Ala Asp Glu Val Pro Gly Ser
145 150 155 160
Ala Ser Ala Tyr Ile Glu Leu Thr Thr Phe Ile Asn Gln Val Ser Arg
165 170 175
Phe Gln Asn Gln His Gly Phe Asn Thr Ser Ile Trp Asn Asp Ser Leu
180 185 190
Leu Lys Asn Glu Leu Thr Arg Leu Asp Ser Asn Ile Thr Ile Asn Tyr
195 200 205
Trp Ser Gln Ser Gly Asn Asn Thr Asp Val Ala Ile Ile Ala Asp Arg
210 215 220
Tyr Ala Asn Arg Val Ser Val Pro Asp Ile Leu Ala Ser Gly His Pro
225 230 235 240
Ile Val Asn Cys Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Gln Ile Lys Asn Ile
245 250 255
Gly Asn Val Asn Asp Asp Asp Tyr Phe Ile Asn Tyr Leu Asn His Thr
260 265 270
Phe Arg Pro Asn Ile Phe Asn Glu Ile Asp Thr Asn Gly His Asn Gln
275 280 285
Asp Trp Thr Ile Glu Asp Gly Val Thr Thr Asn Gly Ile Leu Val Ser
290 295 300
Leu Trp Gly Ala Asp Ser Glu His Val Thr Pro Thr Ala Ile Val Asn
305 310 315 320
Phe Ile Lys Arg Met Thr Ile Pro Arg Ser Phe
325 330
<210> 20
<211> 353
<212> PRT
<213> 瑞典北部蜜蜂乳杆菌
<400> 20
Thr Leu Ala Asp Thr Ser Asn Asp Thr Lys Arg Ile Gly Leu Ser Leu
1 5 10 15
Asp Cys Ser Arg Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Thr Ile Lys Lys Tyr Ile
20 25 30
Asp Leu Leu Lys Lys Asp His Gly Thr Tyr Leu Gln Leu His Leu Asn
35 40 45
Asp Asn Glu Arg Tyr Gly Val Glu Ser Ser Thr Leu Gly Gln Thr Thr
50 55 60
Gln Asn Ala Thr Leu Lys Asp Gly Val Tyr Tyr Asn Asn Lys Thr His
65 70 75 80
Leu Ala Phe Leu Ser Lys Asn Gln Leu Leu Asp Val Ile Gln Tyr Gly
85 90 95
Tyr Thr His Gly Ile Glu Val Ile Pro Glu Ile Asp Leu Pro Gly His
100 105 110
Ala Gln Ser Ile Phe Lys Leu Leu Ser Tyr Thr Ser Glu Gly Lys Lys
115 120 125
Leu Val Lys Glu Leu Glu Asn Lys Asp Gly Tyr Asn Glu Met Tyr Tyr
130 135 140
Asn Lys Gln Ala Thr Ile Asp Phe Ser Lys Lys Leu Leu Ser Glu Tyr
145 150 155 160
Val Gly Met Leu Pro Ser Gly Tyr His Ile Ile Val Gly Ala Asp Glu
165 170 175
Ile Thr Ile Ser Asp Lys Ser Asp Gln Glu Ala Val Val Lys Tyr Ile
180 185 190
Asn Ala Ile Asp Asp Tyr Val Asn Ala Asn His Leu Lys Leu Glu Met
195 200 205
Trp Asn Asp Ser Phe His Lys Ala Val Leu Ser Lys Tyr His Lys Asp
210 215 220
Ile Leu Ile Asn Tyr Trp Ser Leu Thr Gly Glu Val Ser Ser Ser Lys
225 230 235 240
Asp Arg Lys Asp Asn Ile Arg Met Arg Ala Thr Leu Pro Glu Leu Asn
245 250 255
Lys Ala Gly Phe Lys Thr Ile Asn Tyr Asn Ser Tyr Tyr Leu Tyr Met
260 265 270
Ile Thr Asp Pro Thr Ser Phe Thr Asn Glu Ser Lys Lys Ile Trp Thr
275 280 285
Ser Glu Phe Lys Lys Trp Lys Met Asn Met Trp Asn Asp Glu Ser Thr
290 295 300
Lys Asp Ile Thr Lys Ser Ala Asn Asn Ile Gly Ala Ala Ile Ser Ile
305 310 315 320
Trp Gly Glu Tyr Pro Asn Gln Tyr Thr Gly Asp Gln Thr Tyr Asn Lys
325 330 335
Thr Tyr Tyr Tyr Val Asp Thr Phe Leu Lys Ala Gln Asp Lys Phe Thr
340 345 350
Lys
<210> 21
<211> 331
<212> PRT
<213> 类植物乳杆菌
<400> 21
Asn Ser Ser Thr Leu Asn Thr Ser Gln Gly Val Met Leu Asp Leu Gly
1 5 10 15
Arg His Pro Leu Asp Glu Thr Ala Ile Lys Ala Val Ile Ser Ala Ala
20 25 30
Ala Glu Gln His Met Gln Tyr Val Glu Leu His Leu Ser Asp Asn Glu
35 40 45
His Leu Cys Phe Gln Ser Ala Tyr Leu Gly Asn Ala Ala Ser Ala Thr
50 55 60
Val Leu Ser Ala Thr Thr Leu Glu Gln Leu Val Ala Tyr Ala Asn Gln
65 70 75 80
Leu Asn Ile Glu Leu Val Pro Asp Val Asp Leu Pro Ser His Ala Gly
85 90 95
Ala Ile Leu Arg Gln Leu Gln Gln Thr His Pro Asp Ile Tyr Asn Thr
100 105 110
Val Lys Leu Asp Asp Glu Thr Ile Asp Tyr Thr Lys Pro Ala Ala Val
115 120 125
Ser Leu Ala Thr Thr Leu Tyr Gly Glu Leu Asp Ala Ser Phe Asn Asn
130 135 140
Gln Ser Gln His Asp Leu Met Leu Gly Ala Asp Glu Val Ser Gly Ser
145 150 155 160
Ala Ser Ala Tyr Ile Glu Leu Thr Thr Phe Ile Asn Gln Val Ser Arg
165 170 175
Phe Gln Asn Gln Asn Gly Phe Asn Thr Ser Ile Trp Asn Asp Ser Leu
180 185 190
Leu Lys Asn Glu Leu Asn Arg Leu Asp Ser Asn Ile Thr Ile Asn Tyr
195 200 205
Trp Ser Gln Ser Gly Asn Asn Thr Asp Ala Ala Ile Ile Ala Asp Arg
210 215 220
Tyr Ala Asn Arg Ala Ser Val Pro Asp Ile Leu Ala Ser Gly His Pro
225 230 235 240
Ile Val Asn Cys Asn Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Gln Phe Lys Asn Ile
245 250 255
Gly Asn Val Asn Asp Asp Asn Tyr Phe Ile Asn Tyr Leu Asn His Thr
260 265 270
Phe Arg Pro Asn Ile Phe Asn Glu Ile Asp Thr Asn Gly His Asn Gln
275 280 285
Asp Trp Thr Ile Glu Asp Gly Val Thr Thr Asn Gly Ile Leu Val Ser
290 295 300
Leu Trp Gly Ala Asp Ser Glu His Val Thr Pro Thr Ala Ile Val Asn
305 310 315 320
Phe Ile Lys Arg Met Ala Ile Pro Arg Ser Phe
325 330
<210> 22
<211> 323
<212> PRT
<213> 科氏葡萄球菌
<400> 22
Gln Asp Phe Gln Lys Gly Ile Asn Val Asp Ile Ala Arg Lys Asp Tyr
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ser Leu Lys Lys Ile Val Asp Thr Ile His Glu Asn Asn
20 25 30
Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Asn Tyr Ala Ile
35 40 45
Glu Ser Gln Phe Phe Lys His Glu Asn Ile Ala Ser Gln Asn Tyr Leu
50 55 60
Ser Gln Gln Glu Leu Lys Asn Leu Ile His Tyr Ser Asn Lys Leu Asn
65 70 75 80
Ile Met Val Val Pro Glu Phe Asp Leu Pro Ser His Ser Lys Ala Trp
85 90 95
Leu Leu Leu Leu Lys Asn Glu Asn Ser Asn Leu His Glu Asn Ile Val
100 105 110
Ser Asp Tyr Ser Asp Glu Thr Ile Asp Phe Phe Ser Asn Gln Lys Ala
115 120 125
Leu Glu Ile Ser Lys Arg Gln Ile Lys Glu Ile Leu Asn Leu Phe His
130 135 140
Gln Pro Asn Phe Gln Lys Glu Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu
145 150 155 160
Val Pro Gly Gly Lys Ser Tyr Gln Asn Asp Phe Ile Asn Phe Met Asn
165 170 175
Glu Ile Gly Glu Tyr Ala Tyr Gln Asn Gly Tyr Glu Pro Gln Ile Trp
180 185 190
Asn Asp Ser Ile Thr Lys Asn Gly Leu Lys Leu Leu Lys Asn Tyr Phe
195 200 205
Ser Val Ile Phe Trp Lys Gln Ser Asn Asn Glu Asn Asn Glu Pro Gly
210 215 220
Ile Thr Val Glu Asp Phe Leu Asp Tyr Asn Phe Lys Val Tyr Asn Tyr
225 230 235 240
Asn Phe Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Lys Asn Tyr Ser Pro Thr
245 250 255
Asp Ile Glu Glu Gln Thr Ser Tyr Ile Ser Trp Ala Tyr Asn His Asn
260 265 270
Ser Phe Tyr Tyr Leu Lys Asn Pro Tyr Tyr Glu Val Asp Ser Leu Asn
275 280 285
Ile Gln Gly Ser Ala Leu Ser Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Gly Met
290 295 300
Arg Glu Glu Glu Val Leu Asn Gln Glu Leu Pro Leu Ile Arg Thr Tyr
305 310 315 320
Leu Asn Lys
<210> 23
<211> 321
<212> PRT
<213> 福氏葡萄球菌
<400> 23
Glu Ser Ile Gln Glu Gly Val Ser Val Asp Ile Ala Arg Lys Glu Tyr
1 5 10 15
Ser Leu Glu Ser Leu Lys Gln Ile Val Asp Thr Ile His Glu Asn Asn
20 25 30
Gly Gln Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asp Glu Asn Tyr Ala Ile
35 40 45
Glu Ser Asp Tyr Phe Ser His Gln Gly Ile Pro Asn Glu Asn Tyr Leu
50 55 60
Thr Lys Ala Glu Ile Lys Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Glu Leu Asn
65 70 75 80
Val Met Val Val Pro Asp Ile Asp Phe Pro Ser His Ser Lys Ala Leu
85 90 95
Leu Ser Leu Ile Lys Asn Glu Asp Lys Asp Leu Tyr Asn Gln Ile Ile
100 105 110
Ser Asp Tyr Ser Asp Asn Thr Phe Asp Phe Phe Ser Asn Asp Lys Ala
115 120 125
Leu Ala Ile Ser Lys Arg His Ile Gly Glu Ile Thr Thr Leu Phe Asn
130 135 140
Gln Pro Lys Tyr Asn Gly Gln Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu
145 150 155 160
Val Pro Gly Gly Gly Ala Tyr Gln Ser Asp Phe Ile Ser Tyr Met Asn
165 170 175
Asn Ile Gly Ser Tyr Ala Ala Gly Gln Gly Tyr Glu Pro Gln Met Trp
180 185 190
Asn Asp Met Ile Ser His Glu Gly Ile Lys Ser Leu Asn Asp Thr Phe
195 200 205
Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Asn Glu Asn Ser Lys Ser Asp Leu Thr
210 215 220
Val Glu Asp Phe Ala Glu Tyr Asp Phe Lys Ile Tyr Asn Tyr Asn Phe
225 230 235 240
Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Asn Gln Phe Thr Asn Ala Asp Ile
245 250 255
Glu Glu Gln Ala Asp Tyr Ile Ser Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe
260 265 270
Phe Tyr Thr Asn Glu Pro Tyr Gln Glu Val Asp Ser Asp Asn Val Lys
275 280 285
Gly Ser Ala Leu Ser Phe Trp Gly Glu Asp Ala Leu Asn Met Ser Gln
290 295 300
Thr Glu Leu Ile Asn Gln Glu Ile Pro Leu Ile Lys Ala Tyr Phe Ser
305 310 315 320
Ser
<210> 24
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 24
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asp Gly Arg Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 25
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 迟缓芽孢杆菌蛋白酶变体
<400> 25
Ala Gln Thr Ile Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asp Gly Glu Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 26
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 迟缓芽孢杆菌蛋白酶变体
<400> 26
Ala Gln Thr Ile Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asp Gly Asp Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 27
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 27
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asp Gly Glu Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 28
<211> 275
<212> PRT
<213> 解淀粉芽孢杆菌
<400> 28
Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu
1 5 10 15
His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp
20 25 30
Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His
50 55 60
Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly
65 70 75 80
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
85 90 95
Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu
100 105 110
Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly
115 120 125
Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala
130 135 140
Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly
145 150 155 160
Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala
165 170 175
Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val
180 185 190
Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr
195 200 205
Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser
210 215 220
Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn
225 230 235 240
Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys
245 250 255
Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
260 265 270
Ala Ala Gln
275
<210> 29
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 29
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asp Gly Arg Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 30
<211> 269
<212> PRT
<213> 吉氏芽孢杆菌
<400> 30
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
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65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
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115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
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145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
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180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Met Pro Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 31
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 31
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
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35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Ser Asp Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Met Pro Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 32
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 32
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Asp Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Met Pro Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 33
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 33
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Ser Asp Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Asn Asp Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 34
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 34
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Ser Asp Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asp Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 35
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 35
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Ser Asp Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Met Pro Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 36
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 36
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Ser Pro Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asp Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 37
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 37
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Gln Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Met Ser Leu Gly Ser Asp Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Met His Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 38
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 蛋白酶变体
<400> 38
Gln Gln Thr Val Pro Trp Gly Ile Thr Arg Val Leu Ala Pro Thr Val
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Ile Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Ile Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ala Gln His Ser Asp Leu Thr Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Ser Thr Thr Ala Asp Leu Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Ile
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Asp Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asn Gly Arg Gly Ser Val Ser Gly Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Ala Thr Asn Asn Met His Ile Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Asp Ala
115 120 125
Pro Ser Thr Thr Leu Glu Arg Ala Val Asn Tyr Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Ile Ala Ala Thr Gly Asn Asn Gly Thr Gly Ser Ile Gly
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Arg Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Thr Gly Ile Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Gly Ile Gln Ser Thr Tyr Leu Asn Asn Ser Tyr
195 200 205
Ala Ser Met Pro Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ser Gly Val
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Asn Ala Thr Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Asn Leu Gly Asn Ser Ser Gln
245 250 255
Phe Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Asp Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 39
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 39
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Asp Gly Arg Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
Claims (14)
1.一种清洁组合物,其包含分散蛋白和蛋白酶以及任选存在的至少一种清洁组分,其中所述蛋白酶选自:
(5)包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:24所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且包含氨基酸取代R99E与选自S3T、V4I和V199I的至少两个、优选所有三个其它氨基酸取代的组合,其中位置编号根据SEQ ID NO:24;或
(6)包含与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,优选与SEQ ID NO:27具有至少95%序列同一性,优选至少96%序列同一性,优选至少97%序列同一性,优选至少98%序列同一性的氨基酸序列的蛋白酶,其中蛋白酶变体在位置101处具有谷氨酸残基(E),并且其中蛋白酶变体进一步包含选自以下的一个或多个取代:S156D;L262E;Q137H;S3T;R45E,D;P55N;T58W,Y,L;Q59D,M,N,T;G61D,R;S87E;G97S;A98D,E,R;S106A,W;N117E;H120V,D,K,N;S124M;P129D;E136Q;S143W;S161T;S163A,G;Y171L;A172S;N185Q;V199M;Y209W;M222Q;N238H;V244T;N261T;和L262N,Q,D;或
(7)包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:30所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且在对应于SEQ ID NO:30的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置中包含氨基酸取代;或
(8)包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:39所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、98.8%、99.0%、99.2%、99.4%或99.5%的序列同一性,并且包含(i)在对应于SEQ ID NO:39的位置3、4、99和199的位置处的氨基酸取代3T、4I、99E和199I中的至少两个,和(ii)在对应于SEQ ID NO:39的位置74、136、143、154、161、163、171、200、203、209、212或256的至少一个位置中的至少一个氨基酸取代,优选选自74D、74E、74Q、136Q、143L、143W、143Y、154D、154Q、161T、163G、171L、200A、200L、200S、200T、203K、203V、203W、209W、212N、212S、212T、256D、256E或256Q的至少一个氨基酸取代。
2.权利要求1所述的清洁组合物,其中所述蛋白酶选自:
(1)包含与SEQ ID NO:27具有至少90%序列同一性,优选与SEQ ID NO:27具有至少95%序列同一性,优选至少96%序列同一性,优选至少97%序列同一性,优选至少98%序列同一性的氨基酸序列的蛋白酶,其中蛋白酶变体在位置101处具有谷氨酸残基(E),并且其中蛋白酶变体进一步包含选自以下的一个或多个取代:R45E,D,Q;Q59D;T58L;G61D;S87E;G97S;A98E;S160A;N117E;H120D,K,V;P129D;E136Q;Q137H;S156D;S161T;S163A,G;V199M;M222Q;N261T和L262E,Q,N;
(2)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列且具有以下氨基酸取代或氨基酸取代组之一的蛋白酶:
SEQ ID NO:27+S3T
SEQ ID NO:27+R45E/D
SEQ ID NO:27+P55N
SEQ ID NO:27+T58W/Y/L
SEQ ID NO:27+Q59D/M/N/T
SEQ ID NO:27+G61D/R
SEQ ID NO:27+S87E
SEQ ID NO:27+G97S
SEQ ID NO:27+A98D/E/R
SEQ ID NO:27+S106A/W
SEQ ID NO:27+N117E
SEQ ID NO:27+H120V/D/K/N
SEQ ID NO:27+S124M
SEQ ID NO:27+P129D
SEQ ID NO:27+E136Q
SEQ ID NO:3+S143W
SEQ ID NO:3+S161T
SEQ ID NO:3+S163A/G
SEQ ID NO.3+Y171L
SEQ ID NO:27+A172S
SEQ ID NO:27+N185Q
SEQ ID NO:27+V199M
SEQ ID NO:27+Y209W
SEQ ID NO:27+M222Q
SEQ ID NO:27+N238H
SEQ ID NO:27+V244T
SEQ ID NO:27+N261T
SEQ ID NO:27+L262N/Q/D/E
SEQ ID NO:27+N76D+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S163G+N128Q+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+K27Q+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+V104T+H120D+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+G195E+V199M
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I
SEQ ID NO:27+H120D+A228V
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+A228V
SEQ ID NO:27+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+L262E
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Q137H+S141H+R145H+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+H120D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N62D+H120D
SEQ ID NO:27+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V205I+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+Q59D+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+A194P+G195E+V199M+V205I
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+H120D+Y209W
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N76D+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+H120D+P131F+A194P+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+E136H+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N218S+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N218Q+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+N218A+A228V+N261D
SEQ ID NO:27+K27Q+R45E
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+L262E
SEQ ID NO:27+R45E+A88S
SEQ ID NO:27+S87E+K237E
SEQ ID NO:27+N261D+L262E
SEQ ID NO:27+S87E+L262E
SEQ ID NO:27+S87E+N238E
SEQ ID NO:27+K27Q+S87E
SEQ ID NO:27+N76D+N117E
SEQ ID NO:27+H120D+N238E
SEQ ID NO:27+Q59D+L262E
SEQ ID NO:27+K27Q+L262E
SEQ ID NO:27+H120D+L262E
SEQ ID NO:27+K27Q+Q59D
SEQ ID NO:27+K27Q+S156D
SEQ ID NO:27+K27Q+G61D
SEQ ID NO:27+Q59D+N261D
SEQ ID NO:27+Q59D+N117E
SEQ ID NO:27+K237E+N261D
SEQ ID NO:27+Q59D+N238E
SEQ ID NO:27+A15T+H120D+N261D
SEQ ID NO:27+N76D+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+L262E
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+Q59D+H120D
SEQ ID NO:27+G61D+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+H120D
SEQ ID NO:27+G61D+H120D
SEQ ID NO:27+P55S+H120D
SEQ ID NO:27+S163G+A228V
SEQ ID NO:27+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+S163G
SEQ ID NO:27+G61D+S163G
SEQ ID NO:27+S156D+S163G
SEQ ID NO:27+Q59D+S163G
SEQ ID NO:27+N76D+S163G
SEQ ID NO:27+P55S+S163G
SEQ ID NO:27+H120D+S163G
SEQ ID NO:27+T58L+Q59D
SEQ ID NO:27+P55S+T58L
SEQ ID NO:27+T58L+G97D
SEQ ID NO:27+T58L+S106A
SEQ ID NO:27+T58L+A228V
SEQ ID NO:27+S3T+T58L
SEQ ID NO:27+T58L+S156D
SEQ ID NO:27+T58L+Y91H
SEQ ID NO:27+T58L+H120D
SEQ ID NO:27+T58L+S163G
SEQ ID NO:27+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+T58L+N261D
SEQ ID NO:27+T58L+N76D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+A228V
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W+V244T
SEQ ID NO:27+N76D+H120D
SEQ ID NO:27+N76D+S156D
SEQ ID NO:27+H120D S156D
SEQ ID NO:27+R45E+L262E
SEQ ID NO:27+Q59D+G61D
SEQ ID NO:27+S87E+L262E
SEQ ID NO:27+G61D+L262E
SEQ ID NO:27+Q59D+L262E
SEQ ID NO:27+R45E+Q59D
SEQ ID NO:27+Q59D+S156D
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+S163G+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+Y91H+N117H+N238H
SEQ ID NO:27+T58L+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+S87E+S163G+L262E
SEQ ID NO:27+S156D+S163G+L262E
SEQ ID NO:27+T58LS163G+N261D
SEQ ID NO:27+S156DS163G+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Y209W+N261D+L262E
SEQ ID NO:27+R45E/D/Q
SEQ ID NO:27+Q58L
SEQ ID NO:27+Q59D,
SEQ ID NO:27+G61D,
SEQ ID NO:27+S87E,
SEQ ID NO:27+G97S,
SEQ ID NO:27+A98E,
SEQ ID NO:27+N117E,
SEQ ID NO:27+H120D/K/V
SEQ ID NO:27+P129D,
SEQ ID NO:27+E136Q,
SEQ ID NO:27+Q137H,
SEQ ID NO:27+S156D,
SEQ ID NO:27+S160A,
SEQ ID NO:27+S163A/G,
SEQ ID NO:27+V199M
SEQ ID NO:27+M222Q
SEQ ID NO:27+N261T
SEQ ID NO:27+L262E/Q/N
N117E+S3T,
S156D+S3T,
N238E+S3T,
N261D+S3T,
L262E+S3T,
N117E+N128Q,
S156D+N128Q,
N238E+N128Q,
N261D+N128Q,
L262E+N128Q,
N117E+Q137H,
S156D+Q137H,
N238E+Q137H,
N261D+Q137H,
L262E+Q137H,
N117E+S141H,
S156D+S141H,
N238E+S141H,
N261D+S141H,
L262E+S141H,
N117E+R145H,
S156D+R145H,
N238E+R145H,
N261D+R145H,
L262E+R145H,
N117E+S163G,
S156D+S163G,
N238E+S163G,
N261D+S163G,
L262E+S163G,
N117E+A194P,
S156D+A194P,
N238E+A194P,
N261D+A194P,
L262E+A194P,
N117E+V199M,
S156D+V199M,
N238E+V199M,
N261D+V199M,
L262E+V199M,
N117E+V205I,
S156D+V205I,
N238E+V205I,
N261D+V205I,
L262E+V205I,
N117E+N218Q,
S156D+N218Q,
N238E+N218Q,
N261D+N218Q,
L262E+N218Q,
N117E+A228V,
S156D+A228V,
N238E+A228V,
N261D+A228V,
L262E+A228V.
SEQ ID NO:27+V4D/E/I
SEQ ID NO:27+R10N/Q/D/E/S
SEQ ID NO:27+H17D
SEQ ID NO:27+K27S/N/Q/E/D
SEQ ID NO:27+R45E/D/Q/N
SEQ ID NO:27+G53D
SEQ ID NO:27+Q59D
SEQ ID NO:27+G61D
SEQ ID NO:27+L75D
SEQ ID NO:27+N76D
SEQ ID NO:27+I79D
SEQ ID NO:27+S87E
SEQ ID NO:27+G97D
SEQ ID NO:27+A98E
SEQ ID NO:27+*103aE
SEQ ID NO:27+N117E
SEQ ID NO:27+H120D
SEQ ID NO:27+E136K/Q
SEQ ID NO:27+S156D
SEQ ID NO:27+R170E/Q/N/D
SEQ ID NO:27+N185D
SEQ ID NO:27+G195E
SEQ ID NO:27+K235L/W/N/Q/E/S
SEQ ID NO:27+K237N/Q/D/E/S
SEQ ID NO:27+N238D/E
SEQ ID NO:27+V244D
SEQ ID NO:27+R246Q/E/D
SEQ ID NO:27+R247S/E
SEQ ID NO:27+K251S/D/Q/E/N
SEQ ID NO:27+N261D
SEQ ID NO:27+L262D/E
SEQ ID NO:27+S265H
SEQ ID NO:27+A194P+G195E
SEQ ID NO:27+G195E+V199M
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+N76D+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+K27Q+H120D+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+V104T+H120D+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+V104T+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+A228V;
SEQ ID NO:27+H120D S163G N261D
SEQ ID NO:27+N76D+S101E+A228V+L262E;
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Q137H+S141H+R145H+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+H120D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N261D
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I;
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+A194P+G195E+V199M+V205I;
SEQ ID NO:27+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+N76D+A228V;
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+N261D;
SEQ ID NO:27+H120D+A228V;
SEQ ID NO:27+N76D+N261D;
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V199M+V205I+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+A194P+G195E+V205I+A228V;或
SEQ ID NO:27+H120D+N261D;优选
SEQ ID NO:27+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+S3T+V4I+A228V;
SEQ ID NO:27+G195E+V199M
SEQ ID NO:27+H120D S163G N261D
SEQ ID NO:27+N76D+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+S156D+Y209W
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+N238E+L262E
SEQ ID NO:27+Q137H+S141H+R145H+S156D+L262E
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+A228V+N261D;
SEQ ID NO:27+N76D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N238E
SEQ ID NO:27+H120D+Q137H+S141H+R145H+S163G+N261D;或
SEQ ID NO:27+S3T+N76D+Q137H+S141H+R145H+S156D+Y209W。
3.权利要求1所述的清洁组合物,其中所述蛋白酶选自包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO.30所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%或98.8%的序列同一性,并且在对应于SEQ ID NO.30的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置中包含氨基酸取代,其中所述氨基酸取代选自由以下组成的组:12L、43V、122L、127P、154S、156A、16OS、211N、211L、212D、212H和222S,特别是Q12L、I43V、M122L、D127P、N154S、T156A、G160S、M211N、M211L、P212D、P212H和A222S,优选所述氨基酸取代选自(1)I43V;(2)M122L、N154S和T156A;(3)M211N和P212D;(4)M211L和P212D;(5)G160S;(6)D127P、M211L和P212D;(7)P212H;或(8)Q12L、M122L和A222S,其中编号根据SEQ ID NO:30。
4.权利要求1所述的清洁组合物,其中所述蛋白酶选自包含如下氨基酸序列的蛋白酶,所述氨基酸序列在其整个长度上与SEQ ID NO:39所列出的氨基酸序列具有至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%、98.8%、99.0%、99.2%、99.4%或99.5%的序列同一性,并且包含(i)在对应于SEQID NO:39的位置3、4、99和199的位置处的氨基酸取代3T、4I、99E和199I中的至少三个、优选所有4个,和(ii)在对应于SEQ ID NO:39的位置74、136、143、154、161、163、171、200、203、209、212或256的至少一个位置中的至少一个氨基酸取代,优选选自74D、74E、74Q、136Q、143L、143W、143Y、154D、154Q、161T、163G、171L、200A、200L、200S、200T、203K、203V、203W、209W、212N、212S、212T、256D、256E或256Q的至少一个氨基酸取代,优选包含以下取代组的任一个:(i)S3T+V4I+R99E+V199I+Q200L+Y203W;(ii)S3T+V4I+R99E+V199I+N212S;(iii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D;(iv)S3T+V4I+R99E+V199I+S154D+L256E;(v)S3T+V4I+R99E+V199I+Q200L+Y203W+S154D+L256E;(vi)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+Q200L+Y203W;(vii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+S154D+Q200L+Y203W+L256E;(viii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+N212S;(ix)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+S154D+Y203W+L256E;(x)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+Y203W;(xi)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+S154D+Q200L+L256E;(xii)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+Q200L;(xiii)S3T+V4I+R99E+V199I+S154D+Q200L+Y203W;(xiv)S3T+V4I+R99E+V199I+Q200L+Y203W+L256E;(xv)S3T+V4I+R99E+V199I+A136Q+R143W+Y161T+Q200L;(xvi)S3T+V4I+R99E+V199I+N74D+R143Y+A209W+N212S+L256E;(xvii)S3T+V4I+R99E+V199I+A136Q+S154D+V171L+Q200L,其中编号根据SEQ ID NO:39。
5.根据前述权利要求任一项的清洁组合物,其中所述分散蛋白是微生物源的,优选从细菌或真菌获得。
6.根据前述权利要求任一项的清洁组合物,其中所述分散蛋白是从土地芽孢杆菌属(Terribacillus)、短小杆菌属(Curtobacterium)、凝聚杆菌属(Aggregatibacter)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、放线杆菌属(Actinobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、海象狮科杆菌属(Otariodibacter)、乳球菌属(Lactococcus)、寒冷杆菌属(Frigoribacterium)、巴斯夫氏菌属(Basfia)、魏斯氏菌属(Weissella)、巨型球菌(Macrococcus)或明串珠菌属(Leuconostoc)获得。
7.根据前述权利要求任一项的清洁组合物,其中所述分散蛋白催化N-乙酰基-葡萄糖胺聚合物的β-1,6-糖苷键的水解。
8.根据权利要求5-7任一项的清洁组合物,其中所述分散蛋白包含选自由以下组成的组的多肽:
i)与SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
ii)与SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
iii)与SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
iv)与SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
v)与SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
vi)与SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
vii)与SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
viii)与SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
ix)与SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
x)与SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xi)与SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xii)与SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xiii)与SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xiv)与SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xv)与SEQ ID NO:15中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xvi)与SEQ ID NO:16中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xvii)与SEQ ID NO:17中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xviii)与SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xix)与SEQ ID NO:19中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xx)与SEQ ID NO:20中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xxi)与SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;
xxii)与SEQ ID NO:22中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽;和
xxiii)与SEQ ID NO:23中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽。
9.根据前述权利要求任一项的清洁组合物,其中所述分散蛋白包含与SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%的序列同一性的多肽。
10.根据前述权利要求任一项的清洁组合物,其中所述组合物中分散蛋白的量为0.01ppm至1000ppm,并且蛋白酶的量为0.01ppm至1000ppm。
11.根据前述权利要求任一项的清洁组合物,其中所述清洁组分选自表面活性剂、助洗剂和漂白组分,所述表面活性剂优选阴离子表面活性剂和/或非离子表面活性剂。
12.根据前述权利要求任一项的清洁组合物,其中所述组合物
(a)是固体、优选颗粒状衣物洗涤剂组合物,并且还包含
(a1)至少一种沸石助洗剂,优选其量为10-50重量%,更优选为20-30重量%;
(a2)至少一种膦酸盐助洗剂,优选其量为0.1-5重量%,更优选为0.4-1.5重量%;
(a3)至少一种其它酶,优选纤维素酶,优选活性酶的量为100至5000ppb,更优选为1000至2000ppb;和
(a4)至少一种聚合物,优选聚乙烯吡咯烷酮聚合物,优选其量为0.01-1重量%,更优选为0.1-0.3重量%;或
(b)是固体衣物洗涤剂组合物,并且还包含
(b1)至少一种硅酸盐助洗剂,优选其量为2-20重量%,更优选为5-10重量%;
(b2)任选存在的羧甲基纤维素,优选其量为0.1-10重量%,更优选为0.1-4重量%;
(b3)至少一种其它酶,优选纤维素酶,优选活性酶的量为0.1至100ppm,更优选为0.1至10ppm;
(b4)任选存在的至少一种去污聚合物,优选聚乙烯吡咯烷酮聚合物,其量为0.1-3重量%,更优选为0.1-1.0重量%;和
(b5)至少一种漂白体系,其包含漂白剂、漂白活化剂和漂白催化剂,优选其量为0.1-50重量%,更优选0.1-30重量%;或
(c)是液体衣物洗涤剂组合物,并且还包含
(c1)至少一种表面活性剂,优选非离子表面活性剂,优选其量为1-20重量%,优选为3-15重量%;
(c2)任选存在的至少一种膦酸盐助洗剂,优选其量为0.1-3重量%,更优选为0.25-1.5重量%;
(c3)任选存在的至少一种其它酶,优选纤维素酶,优选酶组合物的量为0.001-1重量%,更优选为0.001-0.6重量%;和
(c4)任选存在的至少一种有机溶剂,优选甘油,优选其量为0.1-10重量%,更优选为0.1-5重量%;或
(d)是单位剂量形式的液体衣物洗涤剂,优选包含水溶性膜的小袋,并且还包含
(d1)至多20重量%、优选5-15重量%的量的水;
(d2)任选存在的至少一种苦味剂,优选苄基二乙基(2,6-二甲苯基氨基甲酰基)-甲基苯甲酸铵,优选其量为0.00001-0.04重量%;
(d3)任选存在的至少一种光学增白剂,优选其量为0.01-2重量%,更优选为0.01-1重量%;和
(d4)任选存在的至少一种聚合物,优选其量为0.01-7重量%,更优选0.1-5重量%;或
(e)是织物整理剂,并且还包含
(e1)至少一种软化聚硅氧烷,优选氨基官能化聚硅氧烷,优选其量为0.1-10重量%,更优选为0.1-2重量%;
(e2)至少一种香料,优选至少部分包封在微胶囊中,更优选至少部分包封在三聚氰胺-甲醛微胶囊中,优选其量为0.01-3重量%,更优选为0.1-1重量%;
(e3)任选存在的聚季铵盐10,其量为0.1-20重量%,优选0.1-13重量%;
(e4)任选存在的聚季铵盐37,其量为0.1-20重量%,优选0.1-13重量%;
(e5)任选存在的基于植物的酯季铵盐,优选基于低芥酸菜子油或棕榈的酯季铵盐,其量为0.1-20重量%,优选0.1-13重量%;和
(e6)任选存在的己二酸,其量为0.1-20重量%,优选0.1-13重量%;或
(f)是酸性清洁剂,优选具有小于6的pH,并且还包含
(f1)植物基或生物基表面活性剂,优选各自的量为0.1-5重量%,更优选各自的量为0.1-2重量%;
(f2)至少一种酸性杀生物剂,优选选自酸,更优选选自HCl和甲酸;和
(f3)至少一种去污、防水或水扩散聚合物,优选其量为0.01-3重量%,更优选为0.01-0.5重量%;或
(g)是中性清洁剂,优选具有6.0至7.5的pH,并且还包含
(g1)植物基或生物基表面活性剂,优选各自的量为0.1-5重量%,更优选各自的量为0.1-2重量%;
(g2)至少一种杀生物剂,优选选自季铵化合物和醇;和
(g3)至少一种去污、防水或水扩散聚合物,优选其量为0.01-3重量%,更优选为0.01-0.5重量%;或
(h)是碱性清洗剂,优选具有大于7.5的pH,并且还包含
(h1)植物基或生物基表面活性剂,优选各自的量为0.1-5重量%,更优选各自的量为0.1-2重量%;或
(i)是手洗餐具洗涤剂,优选液体手洗餐具洗涤剂,并且还包含
(i1)至少一种阴离子表面活性剂,优选其量为0.1-40重量%,更优选为5-30重量%;
(i2)至少一种两性表面活性剂,优选甜菜碱,优选其量为0.1-25重量%,更优选为1-15重量%;
(i3)至少一种非离子表面活性剂,优选其量为0.1-25重量%,更优选为2-10重量%;
(i4)至少一种其它酶,优选选自淀粉酶,优选酶组合物的量为至多1重量%,更优选为至多0.6重量%;或
(j)是自动餐具洗涤组合物,并且进一步包含
(j1)选自柠檬酸盐、氨基羧酸盐及其组合的至少一种助洗剂,优选其量为5-30重量%,更优选为10-20重量%;
(j2)至少一种膦酸盐助洗剂,优选其量为0.1-5重量%,更优选为0.4重-1.5重量%;
(j3)至少一种非离子表面活性剂,优选其量为0.1-10重量%,更优选为1-5重量%;
(j4)至少一种漂白体系,其包含漂白剂、漂白活化剂和漂白催化剂,优选其量为0.1-50重量%,更优选为0.1-30重量%;和
(j5)至少一种选自磺基聚合物、阳离子聚合物和聚丙烯酸酯的聚合物,优选其量为0.01-15重量%,更优选为2-10重量%;或
(k)进一步包含
(k1)至少一种磺基聚合物,优选其量为1-15重量%,更优选为2-10重量%,并且优选为餐具洗涤组合物,更优选为自动餐具洗涤组合物;或
(l)进一步包含至少一种选自益生菌优选微生物、孢子或其组合的辅助成分;或
(m)为单位剂量形式,并且包含至少2个,优选2、3、4或5个单独的隔室;或
(n)是不含磷酸盐的组合物。
13.根据权利要求1至12任一项的清洁组合物用于深度清洁物品的用途,其中所述物品是纺织品或表面。
14.一种深度清洁物品的方法,包含以下步骤:
a)使所述物品与根据权利要求1至12任一项所述的清洁组合物接触;和任选地
b)漂洗所述物品,
其中所述物品优选为纺织品。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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